44 Оригинальные исследования ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ EGF И

Îðèãèíàëüíûå èññëåäîâàíèÿ
ÏÎËÈÌÎÐÔÈÇÌ ÃÅÍÎÂ EGF È VEGF Ó ÁÎËÜÍÛÕ
ÐÀÊÎÌ ËÅÃÊÎÃÎ È ßÈ×ÍÈÊÎÂ
Í.Í. ×àêîâà1, Å.Ï. Ìèõàëåíêî1, Å.Í. Øëîìà2, Ý.Â. Êðóïíîâà1, Þ.Å. Äåìèä÷èê2,
Í.Â. ×åáîòàðåâà1, À.À. Æèëêî3
1
Èíñòèòóò ãåíåòèêè è öèòîëîãèè ÍÀÍ Áåëàðóñè, ã. Ìèíñê
Áåëîðóññêèé ãîñóäàðñòâåííûé ìåäèöèíñêèé óíèâåðñèòåò, ã. Ìèíñê
3
Ìèíñêèé ãîðîäñêîé êëèíè÷åñêèé îíêîëîãè÷åñêèé äèñïàíñåð, ã. Ìèíñê
2
Êëþ÷åâûå ñëîâà: ðàê ëåãêîãî, ðàê ÿè÷íèêîâ, ãåíû EGF è VEGF.
Öåëüþ äàííîé ðàáîòû áûëî èçó÷åíèå ïîëèìîðôèçìà G+405Ñ â ãåíå VEGF è ïîëèìîðôèçìà À+61G â ãåíå
EGF ó áîëüíûõ ðàêîì ëåãêîãî è ÿè÷íèêîâ. Îáíàðóæåíà àññîöèàöèÿ èçó÷àåìûõ ïîëèìîðôèçìîâ è êëèíè÷åñêèõ
õàðàêòåðèñòèê îïóõîëåé.
EGF AND VEGF GENE POLYMORPHISMS IN LUNG AND OVARIAN
CARCINOMAS
N.N. Chakova, E.P. Mikhalenko, E.N. Shloma, E.V. Krupnova, Yu.E. Demidchik,
N.V. Chebotareva, A.A. Zhilko
Key words: lung cancer, ovarian carcinomas, EGF and VEGF genes.
The aim of the study was to investigate polymorphism G+405C in VEGF gene and polymorphism A+61G in
EGF gene for lung cancer and ovarian carcinomas patients. The impact of mentioned polymorphisms on clinical
characteristics of tumors was revealed.
ÂÂÅÄÅÍÈÅ
Å
æåãîäíî â ìèðå äèàãíîñòèðóåòñÿ áîëåå
10 ìèëëèîíîâ áîëüíûõ ïåðâè÷íûìè
çëîêà÷åñòâåííûìè íîâîîáðàçîâàíèÿìè [1]. Ðàê
ÿè÷íèêîâ è êàðöèíîìû ëåãêîãî ïðåäñòàâëÿþò
ñîáîé íàèáîëåå ÷àñòûå è â áîëüøèíñòâå ñëó÷àåâ
òðóäíîèçëå÷èìûå îïóõîëåâûå çàáîëåâàíèÿ [2–6].
Íåñìîòðÿ íà óñîâåðøåíñòâîâàíèå óæå èìåþùèõñÿ è âíåäðåíèå íîâûõ ìåòîäîâ äèàãíîñòèêè, â 60–80 % ñëó÷àåâ ýòè çàáîëåâàíèÿ âûÿâëÿþòñÿ â III–IV ñòàäèè [7, 8], ÷òî â ñâîþ î÷åðåäü,
íåãàòèâíî ñêàçûâàåòñÿ íà ïðîãíîçå.
 íàñòîÿùåå âðåìÿ îãðîìíîå ÷èñëî ôóíäàìåíòàëüíûõ èññëåäîâàíèé ñôîêóñèðîâàíî íà
ïîèñêå ãåíåòè÷åñêèõ ìàðêåðîâ ïðåäðàñïîëîæåííîñòè ê âîçíèêíîâåíèþ êàðöèíîì äëÿ îñóùåñòâëåíèÿ ðàííåé äèàãíîñòèêè, ñ îäíîé ñòîðîíû, è
âûÿâëåíèè ôàêòîðîâ, ïîçâîëÿþùèõ ïðîãíîçèðîâàòü ðàçâèòèå çàáîëåâàíèÿ è îïòèìèçèðîâàòü
ìåòîäû ëå÷åíèÿ [9–11].
44
Ê íàñòîÿùåìó ìîìåíòó íàêîïëåíî ìíîæåñòâî äàííûõ, ïîäòâåðæäàþùèõ ó÷àñòèå ôàêòîðîâ ðîñòà, â ÷àñòíîñòè VEGF (ôàêòîð ðîñòà
ýíäîòåëèÿ ñîñóäîâ) è EGF (ýïèäåðìàëüíûé ôàêòîð ðîñòà), îòâåòñòâåííûõ çà ìèòîãåííóþ àêòèâíîñòü êëåòîê, â ðàçâèòèè è ïðîãðåññèðîâàíèè çëîêà÷åñòâåííûõ íîâîîáðàçîâàíèé è, ñëåäîâàòåëüíî, ÿâëÿþùèõñÿ ïåðñïåêòèâíûìè ìèøåíÿìè ïðè èñïîëüçîâàíèè òàðãåòíîé òåðàïèè.
Çàðóáåæíûìè èññëåäîâàòåëÿìè îáíàðóæåíû
ôóíêöèîíàëüíî çíà÷èìûå ïîëèìîðôèçì G+405Ñ
â ãåíå VEGF [12] è ïîëèìîðôèçì À+61G â ãåíå
EGF [13].
EGF ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé îäèí èç ëèãàíäîâ ðåöåïòîðà ýïèäåðìàëüíîãî ôàêòîðà ðîñòà (EGFR),
ýêñïðåññèðóþùåãîñÿ íà ïîâåðõíîñòè êàê íîðìàëüíûõ, òàê è òðàíñôîðìèðîâàííûõ ýïèòåëèàëüíûõ êëåòîê è ÿâëÿþùåãîñÿ ðåøàþùèì òðàíñìåìáðàííûì òèðîçèí-êèíàçíûì ðåöåïòîðîì â
ðåãóëÿöèè êëåòî÷íîãî ðîñòà è äèôôåðåíöèðîâêè.
EGF/EGFR âçàèìîäåéñòâèå — ôóíêöèîíàëüíî
Îíêîëîãè÷åñêèé æóðíàë, Ò.3, ¹1 (9), 2009
âàæíûé àóòîêðèííûé ïóòü, êîòîðûé ÿâëÿåòñÿ
ïðîìîòîðîì ðàçâèòèÿ îïóõîëè. Ïîâûøåííàÿ
ýêñïðåññèÿ EGF óñèëèâàåò èíâàçèþ è ìåòàñòàçèðîâàíèå îïóõîëè, çàïóñêàÿ öåëûé êàñêàä
âíóòðèêëåòî÷íûõ ïðîöåññîâ, èíèöèèðóþùèõ
êëåòî÷íóþ ïðîëèôåðàöèþ è ðÿä äðóãèõ áèîëîãè÷åñêèõ ýôôåêòîâ, îòâåòñòâåííûõ çà îïóõîëåâóþ ïðîãðåññèþ: àäãåçèþ è èíâàçèþ òðàíñôîðìèðîâàííûõ êëåòîê, âêëþ÷åíèå àíòèàïîïòîòè÷åñêèõ ìåõàíèçìîâ [14, 15].
EGF ìîæåò òàêæå èíäóöèðîâàòü ïðîöåññû
îïóõîëåâîãî àíãèîãåíåçà çà ñ÷åò ãèïåðýêñïðåññèè VEGF [16, 17], êîòîðûé ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé
ãëèêîïðîòåèí è ÿâëÿåòñÿ îäíèì èç ñàìûõ âàæíûõ ñòèìóëÿòîðîâ àíãèîãåíåçà â ðàçíîîáðàçíûõ
ïî õàðàêòåðèñòèêàì çäîðîâûõ è ïîðàæåííûõ
ðàêîì òêàíÿõ [18]. Ñâîè ôóíêöèè VEGF âûïîëíÿåò ÷åðåç òèðîçèí-êèíàçíûå ðåöåïòîðû, ðàñïîëîæåííûå â ìåìáðàíå ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòîê.
Öåëüþ äàííîé ðàáîòû áûëî èçó÷åíèå âëèÿíèÿ ïîëèìîðôèçìà ãåíîâ EGF è VEGF íà ðèñê âîçíèêíîâåíèÿ è ðàçâèòèÿ ðàêà ëåãêîãî è ÿè÷íèêîâ.
ÌÀÒÅÐÈÀËÛ È ÌÅÒÎÄÛ
 èññëåäîâàíèå âêëþ÷åíî 79 áîëüíûõ ÐË è
36 áîëüíûõ Ðß, ïðîõîäèâøèõ ëå÷åíèå â Ìèíñêîì ãîðîäñêîì êëèíè÷åñêîì îíêîëîãè÷åñêîì
äèñïàíñåðå.
Ïî ðåçóëüòàòàì ãèñòîëîãè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ ó 49 (62,0 %) áîëüíûõ ÐË óñòàíîâëåí ïëîñêîêëåòî÷íûé ÐË, ó 23 (29,1 %) — àäåíîêàðöèíîìà,
â 7 (8,9 %) ñëó÷àÿõ — ìåëêîêëåòî÷íûé ÐË. Âñå
ñëó÷àè çàáîëåâàíèé ÐË áûëè êëàññèôèöèðîâàíû ïî ñèñòåìå TNM â ñîîòâåòñòâèè ñ òðåáîâàíèÿìè Ìåæäóíàðîäíîãî Ïðîòèâîðàêîâîãî Ñîþçà
(UICC, âåðñèÿ 2002 ãîäà). Ðàñïðåäåëåíèå áîëüíûõ ïî ñòàäèÿì áûëî ñëåäóþùèì: I ñòàäèÿ —
44 (55,6 %) ïàöèåíòà, II ñòàäèÿ — 6 (7,7 %), III
ñòàäèÿ — 20 (25,3 %) è IV ñòàäèÿ — 9 (11,4 %).
Ïðåîáëàäàþùèì ãèñòîëîãè÷åñêèì âàðèàíòîì Ðß áûë ñåðîçíûé òèï, óñòàíîâëåííûé â 23
(63,9 %) ñëó÷àÿõ, ìóöèíîçíàÿ àäåíîêàðöèíîìà âûÿâëåíà ó 3 (8,3 %) áîëüíûõ, ýíäîìåòðèîèäíàÿ — ó
6 (16,7 %), ñâåòëîêëåòî÷íûé ðàê — ó 2 (5,6 %),
äðóãèå âèäû — ó 2 (5,6 %) ïàöèåíòîê. Ïðè îöåíêå ñòåïåíè ðàñïðîñòðàíåíèÿ îïóõîëè ïî êëàññèôèêàöèè FIGO, â 28 (77,8 %) íàáëþäåíèÿõ âûÿâëåíà III è IV ñòàäèÿ çàáîëåâàíèÿ.
Ñîïóòñòâóþùèå çàáîëåâàíèÿ äèàãíîñòèðîâàíû ó áîëüøèíñòâà îíêîëîãè÷åñêèõ áîëüíûõ. Ó âñåõ áîëüíûõ ÷àùå âñåãî âñòðå÷àëèñü
áîëåçíè ñåðäå÷íî-ñîñóäèñòîé ñèñòåìû, íà âòîðîì ìåñòå ó ïàöèåíòîê ñ Ðß áûëè çàáîëåâàíèÿ
æåëóäî÷íî-êèøå÷íîãî òðàêòà, à ó áîëüíûõ ÐË —
çàáîëåâàíèÿ îðãàíîâ äûõàíèÿ.
Êîíòðîëüíàÿ ãðóïïà áûëà ïðåäñòàâëåíà âûáîðêîé èç 124 ÷åëîâåê áåç îíêîëîãè÷åñêèõ çàáîëåâàíèé (49 ìóæ÷èí è 75 æåíùèí), ïðîæèâàþùèõ â ã. Ìèíñêå. Äëÿ ýëèìèíàöèè âëèÿíèÿ
ôàêòîðîâ, çàâåäîìî èçìåíÿþùèõ âåðîÿòíîñòü
ðàçâèòèÿ çàáîëåâàíèÿ, ïðè ôîðìèðîâàíèè êîíòðîëüíûõ ãðóïï áûë èñïîëüçîâàí ìåòîä íàïðàâëåííîãî ïîäáîðà ñ ó÷åòîì âîçðàñòà, ïîëà, ñòàòóñà êóðåíèÿ, ïðîôåññèîíàëüíîé ïðèíàäëåæíîñòè.
Èññëåäîâàíèå ïîëèìîðôèçìà ãåíîâ EGF
(À+61G) è VEGF (G+405Ñ) ïðîâîäèëîñü ìåòîäîì ÏÖÐ-ÏÄÐÔ àíàëèçà. Âûäåëåíèå òîòàëüíîé
ÄÍÊ èç ëåéêîöèòîâ ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè âûïîëíÿëè ìåòîäîì Mathew [19].
Äëÿ àìïëèôèêàöèè ãåíà EGF èñïîëüçîâàëè
ïðàéìåðû è óñëîâèÿ ÏÖÐ, ïðåäëîæåííûå Shahbazi et al [13]. Ïîëó÷åííûå ôðàãìåíòû àìïëèôèêàöèè äëèíîé 242 ï.í. îáðàáàòûâàëè ýíäîíóêëåàçîé AluI. Ãåíîòèïû, âûÿâëÿåìûå â õîäå àíàëèçà ãåíà EGF, èäåíòèôèöèðîâàëè ïî äëèíå
ïîëó÷åííûõ â õîäå ðåñòðèêöèè ôðàãìåíòîâ: GG
(193 ï.í.), GA (193 ï.í.+102 ï.í.+ 91 ï.í.), AA
(102 ï.í.+ 91 ï.í.) (ðèñ. 1).
Ïðàéìåðû äëÿ àìïëèôèêàöèè VEGF âçÿòû
èç ðàáîòû Lee et al. [20], óñëîâèÿ ÏÖÐ ïîäáèðàëèñü
ýêñïåðèìåíòàëüíî. Äëÿ îïðåäåëåíèÿ G+405Ñ
ïîëèìîðôèçìà àìïëèôèöèðîâàííûå ôðàãìåíòû
Ðèñóíîê 1 – Ýëåêòðîôîðåãðàììà ôðàãìåíòîâ
àìïëèôèêàöèè ïîëèìîðôíûõ àëëåëåé ãåíà EGF:
1 — äî ðåñòðèêöèè; 2, 3, 4 — ïîñëå îáðàáîòêè
ðåñòðèêòàçîé AluI
45
Îðèãèíàëüíûå èññëåäîâàíèÿ
äëèíîé 273 ï.í. ïîäâåðãàëè ðåñòðèêöèîííîìó
ðàñùåïëåíèþ ýíäîíóêëåàçîé BsmFI. Ïðîäóêòû
ðåñòðèêöèè ôðàêöèîíèðîâàëè â 2,2 % àãàðîçíîì ãåëå ñ áðîìèñòûì ýòèäèåì è âèçóàëèðîâàëè
â ÓÔ-ñâåòå. Ãåíîòèïû VEGF èäåíòèôèöèðîâàëè ïî äëèíå ïîëó÷åííûõ â õîäå ðåñòðèêöèè ôðàãìåíòîâ: GG (166 ï.í. + 107 ï.í.), GC (273 ï.í. +
+166 ï.í.+ 107 ï.í.), CC (273 ï.í.) (ðèñ. 2).
Ðèñóíîê 2 – Ýëåêòðîôîðåãðàììà ôðàãìåíòîâ
àìïëèôèêàöèè ïîëèìîðôíûõ àëëåëåé ãåíà VEGF:
1 — äî ðåñòðèêöèè; 2, 3, 4 — ïîñëå îáðàáîòêè
ðåñòðèêòàçîé BsmFI
Ñòàòèñòè÷åñêàÿ îáðàáîòêà ìàòåðèàëà ïðîâîäèëàñü ñ èñïîëüçîâàíèåì ïàêåòà ïðèêëàäíûõ
ïðîãðàìì «Statistica for Windows 6.0».
ÐÅÇÓËÜÒÀÒÛ
Ðåçóëüòàòû ãåíîòèïèðîâàíèÿ EGF ó áîëüíûõ ñ ðàçëè÷íûìè ãèñòîëîãè÷åñêèìè âàðèàíòàìè ÐË ïðåäñòàâëåíû â òàáë. 1. Àíàëèç äàííûõ
ïîêàçàë îòñóòñòâèå äîñòîâåðíûõ ðàçëè÷èé ïî
÷àñòîòå âñòðå÷àåìîñòè ãåíîòèïîâ ìåæäó ãðóïïîé áîëüíûõ ÐË è êîíòðîëåì. Îäíàêî áûëî îáíàðóæåíî, ÷òî êîëè÷åñòâî íîñèòåëåé ãåíîòèïà
ÀÀ â ãðóïïå áîëüíûõ (17,7 %) â 1,7 ðàçà íèæå,
÷åì â êîíòðîëüíîé ãðóïïå (29,0 %), à ó áîëüíûõ
ïëîñêîêëåòî÷íûì ÐË ýòîò ãåíîòèï âñòðå÷àëñÿ
åùå ðåæå (12,2 %), ïðè ýòîì îòëè÷èå îò êîíòðîëÿ
áûëî äîñòîâåðíûì ( 2 = 5,91, ð<0,05).
Èíòåðåñíûå äàííûå áûëè âûÿâëåíû ó áîëüíûõ àäåíîêàðöèíîìîé: ãåíîòèï ÀÀ âñòðå÷àëñÿ
ñ òîé æå ÷àñòîòîé, ÷òî è â êîíòðîëå, à âîò ïðîöåíò
íîñèòåëåé ãåíîòèïà GG (17,6 %) áûë ñíèæåí â
1,5 ðàçà ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëåì (27,4 %). Ïîëó÷åííûå äàííûå, âåðîÿòíî, óêàçûâàþò íà òî,
÷òî ôîðìèðîâàíèå îïðåäåëåííîãî ãèñòîëîãè÷åñêîãî òèïà îïóõîëè, â ÷àñòíîñòè ïëîñêîêëåòî÷íîãî ðàêà ëåãêîãî èëè àäåíîêàðöèíîìû, â
êàêîé-òî ìåðå îáóñëîâëåíî ãåíîòèïîì EGF.
Äåéñòâèòåëüíî, ñðåäè íîñèòåëåé ãåíîòèïà GG
ïëîñêîêëåòî÷íàÿ ôîðìà ÐË áûëà âûÿâëåíà ó 81 %
ïàöèåíòîâ, â ãðóïïå áîëüíûõ ñ ãåíîòèïîì GÀ òàêîé ãèñòîëîãè÷åñêèé òèï îáíàðóæèâàëñÿ ó 68 %,
è òîëüêî ó 56 % áîëüíûõ ñ ãåíîòèïîì ÀÀ áûëà
äèàãíîñòèðîâàíà ýòà ôîðìà ÐË (ðèñ. 3).
Ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî âåðîÿòíîñòü çàáîëåòü êàêîé-ëèáî ôîðìîé èç äâóõ íàõîäèòñÿ â
çàâèñèìîñòè îò ãåíîòèïà: ó áîëüíûõ ñ ãåíîòèïîì GG âåðîÿòíîñòü âîçíèêíîâåíèÿ ïëîñêîêëåòî÷íîé ôîðìû ðàêà â 4 ðàçà âûøå, ÷åì àäåíîêàðöèíîìû ( 2 = 13,05, ð = 0,0003), ïðè ãåíîòèïå
GA âåðîÿòíîñòü çàáîëåòü ïëîñêîêëåòî÷íûì
Òàáëèöà 1
Ðàñïðåäåëåíèå ÷àñòîò ãåíîòèïîâ è àëëåëåé ãåíà EGF ó áîëüíûõ ÐË
Ïðèìå÷àíèå: * — ð < 0.05, ð — óðîâåíü çíà÷èìîñòè ðàçëè÷èé ïî êðèòåðèþ
ñ êîíòðîëüíîé ãðóïïîé
46
2
â ñðàâíåíèè
Îíêîëîãè÷åñêèé æóðíàë, Ò.3, ¹1 (9), 2009
Ðèñóíîê 3 – Âëèÿíèå ãåíîòèïà íà âåðîÿòíîñòü
ðàçâèòèÿ ãèñòîëîãè÷åñêîé ôîðìû ÐË
ðàêîì ëåãêîãî èëè àäåíîêàðöèíîìîé ñîîòâåòñòâóåò ïðîïîðöèè 2:1 ( 2 = 7,93, ð = 0,048), ïðè íàëè÷èè ãåíîòèïà ÀÀ âîçìîæíîñòü çàáîëåòü òîé
èëè èíîé ôîðìîé ñòàíîâèòñÿ ðàâíîâåðîÿòíîé
( 2 = 0,08, ð = 0,7). Îäíàêî îáíàðóæåííûå òåíäåíöèè íîñÿò âñå æå ïðåäâàðèòåëüíûé õàðàêòåð,
è òðåáóþò áîëåå òùàòåëüíîé ïðîâåðêè.
Îöåíêà çàâèñèìîñòè ðàçìåðà îïóõîëè îò
ãåíîòèïà ïîêàçàëà, ÷òî â öåëîì â ãðóïïå áîëüíûõ
ÐË ñ ðàçìåðîì îïóõîëè ìåíåå 3 ñì (èíäåêñ Ò1
ïî êëàññèôèêàöèè ÒNM) ÷àñòîòà íîñèòåëåé ãåíîòèïà ÀÀ (25 %) áûëà â 2 ðàçà âûøå, ÷åì ó ïàöèåíòîâ ñ ðàçìåðîì îïóõîëè áîëåå 3 ñì (12 %) (ðèñ. 4).
Ðèñóíîê 4 – ×àñòîòà ðàñïðåäåëåíèÿ ãåíîòèïîâ ó
áîëüíûõ ÐË ñ ðàçëè÷íûì ðàçìåðîì îïóõîëè
Ïîëó÷åííûå íàìè äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò
î âëèÿíèè ïîëèìîðôèçìà À+61G ãåíà EGF íà
ïðåäðàñïîëîæåííîñòü ê âîçíèêíîâåíèþ ÐË, è
íåêîòîðûå êëèíè÷åñêèå õàðàêòåðèñòèêè îïóõîëè è ñîãëàñóþòñÿ ñ ðåçóëüòàòàìè äðóãèõ èññëåäîâàòåëåé. Èç ëèòåðàòóðíûõ èñòî÷íèêîâ èçâåñòíî, ÷òî ìîíîíóêëåàðíûå êëåòêè ñ ãåíîòèïîì ÀÀ
in vitro ïðîäóöèðóþò äîñòîâåðíî ìåíüøèé óðîâåíü ýïèäåðìàëüíîãî ôàêòîðà ðîñòà, ÷åì êëåòêè, èìåþùèå àëëåëü G [13]. Ïîêàçàíî òàêæå, ÷òî
ïðè ðÿäå îïóõîëåé ýïèòåëèàëüíîé ïðèðîäû, â
÷àñòíîñòè ïðè ðàêå ïå÷åíè è êèøå÷íèêà, ïàöèåíòû ñ ãåíîòèïîì ÀÀ èìåëè ìåíüøèé óðîâåíü
ýêñïðåññèè EGF â òêàíÿõ ïî ñðàâíåíèþ ñ ïàöèåíòàìè, èìåþùèìè ãåíîòèïû GG è GA [21, 22].
Ìåíüøèé óðîâåíü ýêñïðåññèè EGF ïðè íàëè÷èè
ãåíîòèïà ÀÀ, ïî-âèäèìîìó, è îáåñïå÷èâàåò ïðîòåêòèâíîå äåéñòâèè äàííîãî ãåíîòèïà â ïðåäðàñïîëîæåííîñòè ê âîçíèêíîâåíèþ ÐË è â îòíîøåíèè ïðîãíîçà ðàçâèòèÿ çàáîëåâàíèÿ.
 íàñòîÿùèé ìîìåíò íàìè íà÷àòî èçó÷åíèå
ãåíåòè÷åñêîãî ïîëèìîðôèçìà EGF ó áîëüíûõ
Ðß. Äàííûå ðåçóëüòàòîâ ãåíîòèïèðîâàíèÿ EGF
â ýòîé ãðóïïå ïàöèåíòîâ ïðåäñòàâëåíû â òàáë. 2.
×àñòîòà ãåíîòèïîâ ðàñïðåäåëèëàñü ñëåäóþùèì îáðàçîì: GG — 25,0 %, GA — 63,9 %,
ÀÀ — 11,1 %. Êîëè÷åñòâî íîñèòåëåé ãåíîòèïîâ
GG è GA ó áîëüíûõ çëîêà÷åñòâåííîé êàðöèíîìîé ÿè÷íèêîâ (88,9 %) áûëà íåñêîëüêî âûøå,
÷åì â êîíòðîëüíîé ãðóïïå (74,7 %), à ÷àñòîòà
âñòðå÷àåìîñòè íîñèòåëåé áëàãîïðèÿòíîãî ãåíîòèïà ÀÀ â ãðóïïå áîëüíûõ áûëà â 2,2 ðàçà íèæå
ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíîé. Ïðè ýòîì ó áîëüíûõ ñ III–IV ñòàäèåé çàáîëåâàíèÿ ãåíîòèï GG
âñòðå÷àëñÿ â 2 ðàçà ÷àùå, ÷åì ó áîëüíûõ íà ðàííèõ ñòàäèÿõ ðàçâèòèÿ îïóõîëè. Òàêèì îáðàçîì,
ïðè ñðàâíåíèå ÷àñòîòû âñòðå÷àåìîñòè ãåíîòèïîâ
ó áîëüíûõ Ðß ñ êîíòðîëüíîé ãðóïïîé, áûëè îáíàðóæåíû òå æå òåíäåíöèè, ÷òî è ó áîëüíûõ ÐË.
Îäíèì èç îñíîâíûõ ôàêòîðîâ âûæèâàíèÿ
è ðàñïðîñòðàíåíèÿ îïóõîëåâûõ êëåòîê ÿâëÿåòñÿ
àíãèîãåíåç. Êëþ÷åâóþ ðîëü â ôîðìèðîâàíèè
Òàáëèöà 2
Ðàñïðåäåëåíèå ÷àñòîò ãåíîòèïîâ è àëëåëåé ãåíà EGF ó áîëüíûõ Ðß
47
Îðèãèíàëüíûå èññëåäîâàíèÿ
íîâîé ñîñóäèñòîé ñåòè ïðè ðàçâèòèè îïóõîëè
èãðàåò ñåìåéñòâî ýíäîòåëèàëüíûõ ôàêòîðîâ
ðîñòà ñîñóäîâ — VEGF [18]. Ïîÿâëåíèå íîâûõ
ñîñóäîâ ñïîñîáñòâóåò ïðîãðåññèðîâàíèþ çàáîëåâàíèÿ, óâåëè÷èâàÿ òåìïû ðîñòà îïóõîëè è åå
ñïîñîáíîñòü ê ìåòàñòàçèðîâàíèþ. Îöåíêà àíãèîãåíåçà îïóõîëè ÿâëÿåòñÿ âàæíîé äëÿ ïðîãíîçèðîâàíèÿ òå÷åíèÿ áîëåçíè è íàçíà÷åíèÿ õèìèîòåðàïèè ïðè ìíîãèõ çëîêà÷åñòâåííûõ îïóõîëÿõ.
Àíàëèç äàííûõ ïî ãåíîòèïèðîâàíèþ VEGF
(ïîçèöèÿ G+405Ñ) ó áîëüíûõ ðàêîì ëåãêîãî, ïðåäñòàâëåííûé â òàáë. 3, íå âûÿâèë ðàçëè÷èé â ðàñïðåäåëåíèè ÷àñòîòû âñòðå÷àåìîñòè ãåíîòèïîâ
GG/GÑ/ÑÑ ãåíà VEGF ìåæäó ãðóïïîé ïàöèåíòîâ
(0,31:0,56:0,13) è êîíòðîëåì (0,31:0,53:0,16). Îäíàêî
ñóùåñòâîâàëè çàìåòíûå ðàçëè÷èÿ â ðàñïðåäåëåíèè ãåíîòèïîâ ìåæäó ãðóïïàìè áîëüíûõ ïëîñêîêëåòî÷íûì ðàêîì ëåãêîãî è àäåíîêàðöèíîìîé: ñðåäè áîëüíûõ ñ àäåíîêàðöèíîìîé ãåíîòèï
GG âñòðå÷àëñÿ â 2 ðàçà ÷àùå, ÷åì ó ïàöèåíòîâ ñ
ïëîñêîêëåòî÷íûì ÐË, à íîñèòåëåé ãåíîòèïà ÑÑ
ó áîëüíûõ àäåíîêàðöèíîìîé â íàøåé ãðóïïå
îáñëåäîâàííûõ ïàöèåíòîâ íå áûëî îáíàðóæåíî.
Áûëî òàêæå ïîêàçàíî, ÷òî ãåíîòèï ÑÑ âñòðå÷àåòñÿ â 2 ðàçà ÷àùå ó áîëüíûõ ÐË ñ íàëè÷èåì ìåòàñòàçîâ (N1-3) ïî ñðàâíåíèþ ñ ïàöèåíòàìè,
èìåþùèõ îïóõîëè áåç ìåòàñòàçîâ (N0).
Äàííûå ìîëåêóëÿðíîãî àíàëèçà ãåíà VEGF
ó áîëüíûõ Ðß ïðåäñòàâëåíû â òàáë. 4. Ðàñïðåäåëåíèå ÷àñòîò âñòðå÷àåìîñòè ãåíîòèïîâ GG/GÑ/ÑÑ
ãåíà VEGF áûëî ñëåäóþùèì: â ãðóïïå ïàöèåíòîâ — 0,45:0,52:0,03, â êîíòðîëå — 0,31:0,58:0,11.
Áûëî âûÿâëåíî, ÷òî ÷àñòîòà âñòðå÷àåìîñòè
íîñèòåëåé ãåíîòèïà ÑC ó áîëüíûõ çëîêà÷åñòâåííîé êàðöèíîìîé ÿè÷íèêîâ (3 %) áûëà íèæå, ÷åì
â êîíòðîëüíîé ãðóïïå (11,0 %), à ÷àñòîòà âñòðå÷àåìîñòè íîñèòåëåé ãåíîòèïà GG â ãðóïïå
áîëüíûõ áûëà â 1,5 ðàçà âûøå ïî ñðàâíåíèþ ñ
Òàáëèöà 3
Ðàñïðåäåëåíèå ÷àñòîò ãåíîòèïîâ è àëëåëåé ãåíà VEGF ó áîëüíûõ ÐË
Òàáëèöà 4
Ðàñïðåäåëåíèå ÷àñòîò ãåíîòèïîâ è àëëåëåé ãåíà VEGF ó áîëüíûõ Ðß
48
Îíêîëîãè÷åñêèé æóðíàë, Ò.3, ¹1 (9), 2009
êîíòðîëüíîé. Ïðè ýòîì ó áîëüíûõ ñ III–IV ñòàäèåé
çàáîëåâàíèÿ ãåíîòèï GG âñòðå÷àëñÿ â 4 ðàçà ÷àùå,
÷åì ó áîëüíûõ ñ I–II ñòàäèÿìè ðàçâèòèÿ îïóõîëè.
Îáíàðóæåííûå òåíäåíöèè íîñÿò ïðåäâàðèòåëüíûé õàðàêòåð â ñâÿçè ñ íåäîñòàòî÷íûì
êîëè÷åñòâîì îáñëåäîâàííûõ áîëüíûõ, îäíàêî
îíè íå ïðîòèâîðå÷àò ðåçóëüòàòàì äðóãèõ èññëåäîâàòåëåé [23–27]. Ðåçóëüòàòû íåñêîëüêèõ ðàáîò
âûÿâèëè îòñóòñòâèå àññîöèàöèè ïîëèìîðôèçìà
â ïîçèöèè +405 ãåíà VEGF ñ âîçíèêíîâåíèåì
íåêîòîðûõ âàðèàíòîâ ðàêà, âêëþ÷àÿ ÐË [23] è
Ðß [25], îäíàêî ïîêàçàëè åãî âëèÿíèå íà ñòåïåíü
äèôôåðåíöèðîâêè îïóõîëè ó áîëüíûõ ìåëàíîìîé [26], ðàêîì ïðîñòàòû [27], ðàêîì ìîëî÷íîé
æåëåçû [24], à òàêæå íà âûæèâàåìîñòü ó áîëüíûõ
ÐË è Ðß. Îáíàðóæåííîå âëèÿíèå ïîëèìîðôèçìà
â îáëàñòè +405 íà ðàçâèòèå îïóõîëåâîãî ïðîöåññà ìîæåò áûòü îáóñëîâëåíî ðàçëè÷èÿìè â ýêñïðåññèè VEGF ó èíäèâèäîâ ñ ðàçíûìè ãåíîòèïàìè. Watson et al. [12] â ñâîèõ èññëåäîâàíèÿõ
ïîêàçàë, ÷òî íàèáîëüøèé óðîâåíü ýêñïðåññèè
áåëêà VEGF áûë â ìîíîíóêëåàðíûõ êëåòêàõ
ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè ñ ãåíîòèïîì GG, ïðîìåæóòî÷íûé óðîâåíü — â êëåòêàõ ñ ãåíîòèïîì GÑ
è íàèìåíüøèé — â êëåòêàõ ñ ãåíîòèïîì ÑÑ.
Èìåþòñÿ òàêæå ñâåäåíèÿ, ÷òî ïîâûøåííûé óðîâåíü ýêñïðåññèè VEGF ÷àùå íàáëþäàåòñÿ ó
áîëüíûõ ñ îïóõîëÿìè âûñîêîé ñòåïåíè çëîêà÷åñòâåííîñòè.
Òàêèì îáðàçîì, ïðîâåäåííîå èññëåäîâàíèå
ïîäòâåðæäàåò ôóíêöèîíàëüíóþ çíà÷èìîñòü
ïîëèìîðôèçìîâ G+405Ñ â ãåíå VEGF è À+61G
â ãåíå EGF â îòíîøåíèè ïðîãíîçà ðàçâèòèÿ ÐË
è Ðß.  äàëüíåéøåì ïëàíèðóåòñÿ èçó÷åíèå óðîâíÿ ýêñïðåññèè VEGF â òêàíÿõ áîëüíûõ ðàêîì
ÿè÷íèêà äëÿ îïòèìèçàöèè ëå÷åíèè, ò.ê. VEGF
ñ÷èòàåòñÿ âàæíîé òåðàïåâòè÷åñêîé ìèøåíüþ
ïðîòèâîîïóõîëåâîé òåðàïèè [18].
Ñïèñîê èñïîëüçîâàííûõ èñòî÷íèêîâ
1. Ýïèäåìèîëîãèÿ çëîêà÷åñòâåííûõ íîâîîáðàçîâàíèé â Áåëàðóñè / È.Â. Çàëóöêèé [è äð.] — Ìèíñê:
Çîðíû âåðàñåíü, 2006. — 207ñ.
2. Äàâûäîâ, Ì.È. Ñìåðòíîñòü íàñåëåíèÿ Ðîññèè
è ñòðàí ÑÍà îò çëîêà÷åñòâåííûõ íîâîîáðàçîâàíèé
â 2005 ã. / Ì.È. Äàâûäîâ, Å.Ì. Àêñåëü // Âåñòíèê ðîññèéñêîãî îíêîëîãè÷åñêîãî öåíòðà èìåíè Í.Í. Áëîõèíà
ÐÀÌÍ. — 2007. — òîì 18, ¹ 2 (ïðèë. 1). — Ñ. 90–136.
3. Up-Regulated Expression of Cytoplasmic
Clusterin in Human Ovarian Carcinoma / Dan Xie [et
al] // Cancer. — 2005. — Vol. 103, ¹ 2. — P. 277–283.
4. Podratz, K. Advanced Ovarian Cancer: Surgical
Management / Ê. Podratz, G. Aletti, W. Cliby // International congress «Ovarian cancer», Krakow, 18–21
June 2008 / Jagellonian University Faculty of Medicine;
À. Basta. — Krakow, 2008. — Ð. 7–8.
5. Ethnic Differences in Survival among Women
with Ovarian Carcinoma / Jill S. Barnholtz-Sloan [et al] //
Cancer. — 2002. — Vol. 94, ¹ 7. — P. 1886–1893.
6. Êëèíè÷åñêàÿ îíêîëîãèÿ: ñïðàâ. ïîñîáèå /
Ñ.Ç. Ôðàäêèí [è äð.]; ïîä ðåä. Ñ.Ç. Ôðàäêèíà, È.Â. Çàëóöêîãî. — Ìèíñê: Áåëàðóñü, 2003. — 784 ñ.
7. Îïóõîëè æåíñêîé ðåïðîäóêòèâíîé ñèñòåìû /
Â.Â. Áàðèíîâ [è äð.]; ïîä îáù. ðåä. Ì.È. Äàâûäîâà,
Â.Ï.Ëåòÿãèíà, Â.Â. Êóçíåöîâà. — Ì.: ÎÎÎ «Ìåäèöèíñêîå èíôîðìàöèîííîå àãåíòñòâî», 2007. — 376 ñ.
8. Äàâûäîâ, Ì.È. Çàáîëåâàåìîñòü çëîêà÷åñòâåííûìè íîâîîáðàçîâàíèÿìè íàñåëåíèÿ Ðîññèè è ñòðàí
ÑÍÃ â 2005 ã. / Ì.È. Äàâûäîâ, Å.Ì. Àêñåëü // Âåñòíèê
ðîññèéñêîãî îíêîëîãè÷åñêîãî öåíòðà èìåíè Í.Í. Áëîõèíà ÐÀÌÍ. — 2007. — òîì 18, ¹ 2 (ïðèë. 1). — Ñ. 52–89.
9. Áàõèäçå, Å.Â. Çíà÷åíèå ìåòîäîâ èññëåäîâàíèé
ãåíîìà äëÿ äèàãíîñòèêè è òåðàïèè ðàêà ÿè÷íèêà /
Å.Â. Áàõèäçå, À.Â. Ìàëåê // Âîïðîñû îíêîëîãèè . —
2005. — Òîì 51, ¹ 2. — Ñ. 173–181.
10. Ìàëåê, À.Â. Ïîèñê ãåíîâ-ìèøåíèé äëÿ äèàãíîñòèêè è òåðàïèè ðàêà ÿè÷íèêà / À.Â. Ìàëåê, Å.Â. Áàõèäçå // Âîïðîñû îíêîëîãèè. — 2005. — Òîì 51, ¹ 2. —
Ñ. 182–186.
11. Îçîëèíÿ, Ë.À. Ïåðñïåêòèâû ðàííåé äèàãíîñòèêè ðàêà ýíäîìåòðèÿ è ÿè÷íèêîâ / Ë.À. Îçîëèíÿ //
Ðîññèéñêèé âåñòíèê àêóøåðà-ãèíåêîëîãà. — 2005. —
Òîì 5, ¹ 1. — Ñ. 32–35.
12. Identification of polymorphism within the
vascular endothelial growth factor (VEGF) gene:
correlation with variation in VEGF protein production /
C.J. Watson [et al] // Cytokine. — 2000. — Vol. 12. —
P. 1232–1235.
13. Association between functional polymorphism
in EGF gene and malignant melanoma / M. Shahbazi
[et al] // Lancet. — 2002. — Vol. 359. — P. 397–401.
14. Bridges, A.J. The rationale and strategy used to
develop a series of highly potent, irreversible, inhibitors
of the epidermal growth factor receptor family of
tyrosine kinases / A.J. Bridges // Curr. Med. Chem. —
1999. — Vol. 6. — P. 825–843.
15. Epidermal growth factor-related peptides and
their receptors in human malignancies / D.S. Salomon
[et al] // Crit. Rev. Oncol. Hematol. — 1995. — Vol. 19. —
P. 183–232.
16. Woodburn, J.R. The epidermal growth factor
receptor and its inhibition in cancer therapy / J.R. Woodburn // Pharmacol. Ther. — 1999. — Vol. 82. — P. 241–250.
17.Expression of growth factors, growth-inhibiting
factors and their receptors in invasive breast cancer: correlation with proliferation and angiogenesis / J.S. de Jong
[et al] // Jour. Patholog. — 1998. — Vol. 184. — P. 53–57.
49
Îðèãèíàëüíûå èññëåäîâàíèÿ
18. Ferrara, N. The biology of VEGF and its
receptors / N. Ferrara, H.P. Gerber, J. Le Couter // Nat.
Med. — 2003. — Vol. 9. — P. 669–676.
19. Mathew, C.C. The isolation of high molecular
weight eucaryotic DNA / C.C. Mathew // in Walker
JMNJ (ed): Methods in Molecular Biology, Clifton:
Human Press, 1984. — Vol. 2. — P. 31–34.
20. Vascular Endothelial Growth Factor Gene
Polymorphisms and Risk of Primary Lung Cancer / S.J. Lee
[et al] // Canc. Epid. Biom. and Prev. — Vol. 14. —
P. 571–575.
21. Epidermal Growth Factor Gene Functional
Polymorphism and the Risk of Hepatocellular Carcinoma in Patients With Cirrhosis / K.K. Tanabe [et al] //
JAMA. — 2008. — Vol. 299, N 1 — P. 53–60.
22. Epidermal growth factor (EGF) A61G polymorphism and EGF gene expression in normal colon tissue
from patients with colorectal cancer / K.L. Spindler [et
al] // Acta Oncol. — 2007 — Vol. 46, N 8. — P. 1113–1117.
50
23. VEGF polymorphisms and survival in earlystage non-small-cell lung cancer / R.S. Heist [et al] // J. Clin.
Oncol. — 2008. — Vol. 26, N 6. — P. 856–862.
24. Vascular endothelial growth factor polymorphisms in relation to breast cancerdevelopment and
prognosis / Q. Jin [et al] // Clin. Cancer Res. — 2005. —
Vol. 11, N 10. — P. 3647–3653.
25. Vascular Endothelial Growth Factor Gene
Polymorphisms Are Associated with Prognosis in
Ovarian Cancer / L.A. Hefler [et al] // Clin. Cancer Res. —
2007. — Vol. 13. — P. 898–901.
26. Influence of vascular endothelial growth factor
single nucleotide polymorphismson tumour development
in cutaneous malignant melanoma / W.M. Howell [et
al] // Genes. Immun. — 2002. — Vol. 3, N 4. P. 229–232.
27. Association of VEGF genetic polymorphisms with
prostate carcinoma risk and clinical outcome / S. Sfar [et
al] // Cytokine. — 2006. — Vol. 35, N 1 — 2. — P. 21–28.