Lactate (Liquid) Reagent Set Каталожный № HTI-L7596

Lactate (Liquid)
Reagent Set
Каталожный № HTI-L7596-50
Каталожные номера:
HTI-L7596-50
Назначение
Предназначен для количественного определения
концентрации лактата в плазме крови. Только для in
vitro диагностики.
Клиническое значение
Определение концентрации лактата полезно для
оценки лактат ацидоза. Развитие шока является
наиболее частой причиной лактатного ацидоза. Хотя,
возможно, повышение уровня лактата предшествует
развитию шока.
Инфаркт
миокарда,
тяжелая
сердечная
недостаточность, отек легких, потеря крови –
основные причины развития шока и лактат ацидоза.
Лактат ацидоз может развиться и у больных с
почечной недостаточностью и лейкемией. При
недостаточности
тиамина
и
диабетическом
кетоацидозе уровень лактата также повышен.
История метода
Для определения концентрации лактата в основном
используют титрование и колориметрические методы.
В первом ферментном методе определения
концентрации лактата использовали реакцию
переноса водорода с лактата на фероцианид калия,
катализируемую лактат дегидрогеназой. Эта
методика тяжела в проведении и адаптациидля
рутинной
клинико-лабораторной
практике.
В
последнее время используют измерение скорости
формирования NADH при окислении лактата лактат
дегидрогеназой. Этот метод стал популярным, но у
него также есть недостаток: нестабильность
аналитических систем. В настоящем методе
используется лактат оксидаза. Тест обладает
следующими
преимуществами:
простота
в
проведении, использование стабильных реагентов,
высокая точность получаемых результатов.
Принцип метода
Лактат оксидаза катализирует окисление молочной
кислоты до пирувата и перекиси водорода. Затем в
присутствии
4-аминофенозона
пероксидаза
катализирует реакцию перекиси водорода с донором
водорода. В результате реакции образуется
окрашенный комплекс, абсорбция которого измеряется
при 550 нм. Абсорбция прямо пропорциональна
концентрации лактата в исследуемом образце.
Лактат оксидаза
Лактат + O2 -------------------------------¾ Пируват + Перекись водорода
Пероксидаза
Перекись водорода + TOOS + 4-AAP-----------------------¾Окрашивание (550 нм)
Реагенты
Лактат реагент (R1): TRIS буфер 100 ммоль, 4аминоантипирен 1,7 ммоль, Пероксидаза (хрена) > 10000
МЕ/л, сурфактант, стабилизаторы, азид натрия (0,09%) в
качестве консерванта.
Лактат реагент (R2): TRIS буфер 100 ммоль, Лактат
оксидаза (микробная) > 1000 МЕ/л, TOOS 1,5 ммоль,
сурфактант, стабилизаторы, азид натрия (0,09%) в
качестве консерванта.
Предостережения
1. Только для in vitro диагностики.
2. Реагент содержит в качестве консерванта раствор
азида натрия 0.02%. Азид натрия при контакте с
металлом может образовывать взрывоопасные
соединения. Поэтому при удалении реагентов в
сточные трубы (свинец) необходимо смывать их
большим количеством проточной воды.
3. Ко всем исследуемым образцам и контролям
необходимо относиться как к потенциально
биологически опасным.
4. Не использовать реагенты с истекшим сроком
годности (указан на этикетке набора).
Подготовка реагентов
Реагенты полностью готовы к использованию.
Хранение реагентов
Неоткрытый набор можно хранить в холодильнике при 280С. Реагент стабилен в течение всего срока годности при
условии хранения в холодильнике при 2-80С.
Сбор и хранение образцов
Для анализа лучше всего использовать плазму крови с
оксалатом калия или натрия в качестве антикоагулянтов.
Кровь после сбора необходимо поместить на лед,
отделить форменные элементы крови от плазмы в
течение 15 минут. Кровь необходимо брать из вены
«свободной от застоя». Образцы плазмы можно хранить
Lactate (Liquid)
Reagent Set
Каталожный № HTI-L7596-50
в течение двух дней в холодильнике при 2-80С и 1
месяц при -200С.
Влияние других соединений
Гемоглобин в концентрации 500 мг/дл, билирубин в
концентрации 20 мг/дл не оказывает влияние на
результаты анализа. Если в исследуемом образце
предполагаемая концентрация лактата выше, чем в
последнем калибраторе, то необходимо провести
разведение: 1 объем исследуемой плазмы на 1
объем
изотонического
солевого
раствора.
Полученные результаты необходимо умножить на 2.
Материалы, входящие в состав набора
1. Реагенты лактата.
2. Стандарт/калибратор лактата.
Контроль качества
Рекомендовано при каждом проведении серии анализов
включать
коммерческие
контрольные
сыворотки
(патологические
и
нормальные)
с
известной
концентрацией лактата. Рекомендовано в каждой
лаборатории устанавливать свою частоту проведения
контроля качества.
Подсчет результатов
Материалы необходимые, но не
поставляемые
1. Стандарт/калибратор лактата.
2. Контроль лактата (патология и норма)
3. Автоматический биохимический анализатор, для
измерения абсорбции при длине волны 550 нм с
подходящей для анализа кюветой.
Методика определения
Ниже
представлена
методика
определения
концентрации
лактата
на
автоматическом
анализаторе. Для адаптации методики на конкретном
биохимическом анализаторе необходимо связываться
со службой технической поддержки.
37°C
37°C
Образец + Реагент 1 --------------¾Реагент 2 ------------¾ Измерение
6мл
300мл
30 сек.
200ul 5 мин абсорбции (700/546нм)
↓
Оценка результатов
Ограничения
1. Не использовать антикоагулянты, содержащие
цитрат.
2. Защищать реагенты от воздействия прямого
солнечного света.
3. Если в исследуемом образце предполагаемая
концентрация лактата выше, чем 20 ммоль/л, то
необходимо провести разведение: 1 объем
исследуемой плазмы на 1 объем изотонического
солевого раствора.
Калибровка
Для построения калибровочной кривой можно
использовать коммерческие стандарты или калибраторы.
Процедура калибровки должна проводиться в
соответствии с инструкцией для оператора. Если
концентрация
в
контрольных
материалах
не
соответствует таковой, указанной на этикетке, то
необходимо заново провести калибровку.
Для перевода в международные единицы необходимо
полученную концентрацию умножить на 9,01.
Пример: моль/л Х 9,01 = мг/дл
Концентрация у практически здоровых лиц
Лактат.
Венозная кровь: 0.5-2,2 ммоль/л
Артериальная кровь: 0,5 -1,6 ммоль/л
В каждой лаборатории рекомендовано устанавливать
свои границы нормальных значений.
Характеристики теста
Линейность: 0-20 ммоль/л
Сравнение
Проведен
корреляционный
анализ
результатов,
полученных на данных тест-наборах и другого
коммерческого тест-набора. Коэффициент корреляции
составил 0,998, регрессионный анализ: у=0,97Х+0,1,
n=57, диапазон концентраций: 0,3-10,4 ммоль/л.
Точность
Образец
Low
Mid
High
N Среднее
20
1.51
20
4.12
20
9.19
S.D
0.04
0.09
0.17
C.V.%
2.65
2.18
1.85
Чувствительность
Изменение абсорбции на 0,15 примерно эквивалентно
концентрации лактата 1 ммоль/л.
Произведено High Technology Inc.
109 Production Rd
Walpole, MA 02081 USA
Fax: 1 508 660-22-24
e-mail: [email protected]