Клиническое изучение фармакокинетических свойств

Клінічні дослідження
Клінічні дослідження
Клиническое изучение фармакокинетических свойств
кверцетина с углеводным комплексом
при пероральном введении
В.Ф. УСЕНКО3, Ю.В. ПОДПРУЖНИКОВ2, д. фарм. н., профессор; Н.П. БЕЗУГЛАЯ1, к. мед. н., доцент;
И.А. ЗУПАНЕЦ1, д. мед. н., профессор; А.С. ШАЛАМАЙ3, к. хим. н.
/1Национальный фармацевтический
университет, Харьков;
2
Биоаналитическая лаборатория
ООО «Клинфарм», Ирпень;
3
НПЦ «Борщаговский химикофармацевтический завод», Киев/
Резюме
Клінічне вивчення фармакокінетичних властивостей кверцетину з вуглеводним комплексом при пероральному введенні
В.Ф. Усенко, Ю.В. Підпружников, Н.П. Безугла, І.А. Зупанець, А.С. Шаламай
Створення препаратів на основі кверцетину вимагає модифікації показників його розчинності, у зв’язку
з чим і було розроблено новий лікарський препарат «Квертин» – таблетки для розжовування по 40 мг із введеними модуляторами розчинності. Метою даної роботи стало вивчення фармакокінетичних показників
нового оригінального препарату в ході проведення І фази його дослідження переносимості та фармакокінетики за участі здорових добровольців.
Дані, отримані при проведенні пілотного клінічного дослідження (І фаза) препарату «Квертин», дозволяють рекомендувати подальше вивчення препарату в клінічних умовах (проведення І, а потім ІІ фази клінічних досліджень). На підставі отриманих результатів надані рекомендації відносно точок забору проб крові
та оптимізовано режим дозування для подальших досліджень.
Ключові слова: фармакокінетика, переносимість, кверцетин, «Квертин»
Summary
Clinical Study оf Pharmacokinetic Properties оf Quercetin with Carbohydrate
Complex аt Oral use
V.F. Usenko, Yu.V. Pidprugnikov, N.P. Bezugla, І.А. Zupanets, А.S. Shalamay
Create drugs based on quercetin requires modifying its solubility parameters, there-fore it was developed
a new medicine «Quertin» – tablets for chewing 40 mg with modulators of solubility. The aim of this work was to
study pharmacokinetic parameters of the original medicine during carrying out I phase and research it portability
and pharmacokinetics on healthy volunteers.
Data obtained during the pilot clinical trial (phase I) of medicine «Quertin», allow to recommend further
study of the drug in clinical settings (for I, then II Phase of clinical trials). On the basis of results was created the
recommendations regarding blood sampling points and optimizing the dosage regimen for further
researches.
Key words: pharmacokinetics, portability, quercetin, «Quertin»
В последние годы большое внимание уделяется разработке и
изучению препаратов на основе растительных компонентов, в частности, биофлавоноидов. Так, кверцетин – флавоноид, обладающий
большим спектром фармакологических эффектов: капилляростабилизирующее, кардио- и радиопротекторное, регенеративное,
а также проостеокластное средство, проявляющее антиоксидантные, противовоспалительные, спазмолитические, антиульцерогенные, диуретические, антисклеротические свойства, представляет
значительный интерес в данном направлении [1, 3].
Кверцетин имеет свойства модуляторов активности различных
ферментов, принимающих участие в деградации фосфолипидов
(фосфолипаз, фосфогеназ, циклооксигеназ), влияющих на свободнорадикальные процессы и отвечающих за биосинтез в клетках оксида азота, протеиназ и др.
Обладая недостаточной растворимостью, кверцетин требует
модификации его физико-химических свойств, в связи с этим
актуальным является создание новых лекарственных препаратов
на его основе с достаточной высокой биодоступностью. Технологами ЗАО НПЦ «Борщаговский ХФЗ» был разработан новый
лекарственный препарат, содержащий кверцетин – «Квертин»,
таблетки для разжевывания по 40 мг, в состав которого введены
два модулятора растворимости кверцетина. Предполагается, что
данная модификация растворимости кверцетина обеспечит наиболее высокую биодоступность активного вещества из лекарственной формы и, соответственно, наиболее выраженный фармакодинамический эффект.
На сегодняшний день существует достаточно большое количество данных о фармакокинетике и фармакодинамике кверцетина при пероральном приеме [1–5].Тем не менее, литературные
данные относительно фармакокинетики кверцетина не допустимо экстраполировать на новые лекарственные препараты.
Цель работы – изучить переносимость и фармакокинетику
однократных доз препарата «Квертин», таблетки для разжевывания по 40 мг, производства ЗАО НПЦ «Борщаговский химикофармацевтический завод» у здоровых добровольцев.
Материалы и методы исследования
Данное исследование выполнено в соответствии с Законом
Украины «О лекарственных средствах» по утвержденному
65
LU_plus_5_2.indd 65
30.06.2011 12:36:34
ДІАБЕТIСЕРЦЕ
Протоколу исследования с соблюдением принципов
Надлежащей клинической практики (GCP), Надлежащей
лабораторной практики (GLP), требований Руководств
42–7.1:2005 «Исследования по биодоступности и биоэквивалентности» [6], 42–7.0:2005 «Надлежащая клиническая практика» [7], руководящих документов Европейского сообщества, Всемирной организации здравоохранения (WHO)
и других [8–11].
Дизайн исследования – пилотное открытое клиническое
исследование (I фаза). Клиническая часть исследования была
проведена на клинической базе «Клинико-диагностический
центр Национального фармацевтического университета»,
г. Харьков. Исследование состояло из нескольких этапов:
скрининг, I период исследования, период «отмывки», II период
исследования, заключительный визит [12–16].
Протоколом данного исследования предусмотрено введение натощак (после 12-часового голодания) однократной
дозы (I период – 40 мг, 1 таблетка), II период – 240 мг (6 таблеток)
изучаемого препарата здоровым добровольцам.
Для изучения концентрации исследуемого препарата и
его метаболитов в сыворотке крови здоровых добровольцев
после однократного приема каждой дозы препарата (40 мг
и 240 мг) было отобрано 15 проб крови – 0 ч (до приема препарата), через 15 мин, 30 мин, 45 мин, 1 ч, 1,5 ч, 2 ч, 4 ч, 6 ч, 8 ч,
12 ч, 16 ч, 24 ч, 36 ч, 48 ч после приема препарата.
Биоаналитическая часть исследования была проведена
в ООО «Биоаналитическая лаборатория «Клинфарм»
(г. Ирпень) методом ультраэффективной жидкостной хроматографии с масс-селективным детектором.
Статистический анализ ФК-параметров включал [17–18]:
построение графиков зависимости концентрации от времени
для каждого добровольца и для каждой фазы (дозы) как в
исходных единицах, так и логарифмически преобразованных.
Построение графиков зависимости средних значений концентрации от времени для обеих фаз в исходных и логарифмически
преобразованных единицах; вычисление значения показателя
AUC0–t с использованием метода трапеций; оценка с использованием логарифмически преобразованных значений концентрации вещества в крови при помощи метода наименьших
квадратов постоянной элиминации Кэл.; оценка с использованием постоянной элиминации Кэл. значений показателей AUC0–∞
и t1/2 (t1/2=0,693/Кэл.), а также доли измеренной площади под
кривой по отношению ко всей площади под кривой, полученной
посредством экстраполяции по формуле: (AUC0–t/AUC0–∞)x100%;
выполнение логарифмического преобразования показателей
Смакс., AUC0–t, AUC0–∞; оценка показателей описательной статистики для ФК-параметров как в исходных, так и в логарифмически
преобразованных единицах Смакс., AUC0–t, AUC0–∞, Тмакс. и Кэл.
(среднее арифметическое, медиана, стандартное отклонение, коэффициент вариации – для каждого периода); выполнение многофакторного дисперсионного анализа как для логарифмически преобразованных показателей С макс., AUC 0–t,
AUC0–∞, так и для Тмакс. и Кэл. в исходных единицах, основываясь
на смешанной модели: фактор «Субъекты» – случайный, фактор
«Период» – фиксированный (уровни: доза 40 и доза 240); вычисление простого контраста между уровнями фактора «Период»
для показателя Смакс. и AUC0–t. Оценка коэффициентов межсубъектной и внутрисубъектной вариации для каждого
ФК-параметра, используя средний квадрат ошибки из соответствующей таблицы дисперсионного анализа.
№1 (5) / 2011
Рис. 1. Зависимость средних значений концентрации общего кверцетина
в плазме крови от времени (однократный прием 40 мг «Квертина»)
Рис. 2. Зависимость средних значений концентрации общего кверцетина
в плазме крови от времени (однократный прием 240 мг «Квертина»)
Рис. 3. Зависимость средних значений концентрации конъюгированного
кверцетина в плазме крови от времени (прием 40 мг «Квертина»)
Рис. 4. Зависимость средних значений концентрации конъюгированного
кверцетина в плазме крови от времени (прием 240 мг «Квертина»)
66
LU_plus_5_2.indd 66
30.06.2011 12:36:34
Клінічні дослідження
Клінічні дослідження
Результаты и их обсуждение
и изорамнетина имеет меньшую разницу при приеме 40 мг и 240 мг
«Квертина» – 9,03 ч и 12,75 ч соответственно.
В данное исследование согласно требованиям протокола
было включено 6 добровольцев обоего пола (3 женщины, что
составило 50% и 3 мужчин, соответственно 50%). Средний возраст добровольцев – 34,5±2,72 лет (средний возраст женщин –
39±3,51, средний возраст мужчин – 30±2,08 лет).
Вес всех добровольцев находился в нормальном диапазоне
(от 50,52 до 80,44 кг, в среднем 68,98±5,05 кг), рост добровольцев
находился в пределах от 156 см до 185 см, в среднем
172,83±5,16 см, весоростовой показатель находился в пределах
от 19,97 до 26,10 кг/м2 (в среднем 22,99±1,04 кг/м2), что соответствует принятым нормальными значениями – ≥18 кг/м2 и ≥28 кг/м2.
Все добровольцы, принявшие участие в исследовании,
отвечали требованиям критериев включения/не включения протокола исследования (код исследования BHFZ 0701).
Рис. 5. Зависимость средних значений концентрации общего изорамнетиНа рисунках 1 и 2 представлены данные о средней конценна в плазме крови от времени (прием 40 мг «Квертина»)
трации общего кверцетина в плазме добровольцев (n=6) после
однократного перорального приема «Квертина» в дозе 40 мг
и 240 мг соответственно.
На рисунках 3 и 4 представлены данные о средней концентрации конъюгированного кверцетина в плазме добровольцев
(n=6) после однократного перорального приема «Квертина»
в дозе 40 мг и 240 мг соответственно.
На рисунках 5 и 6 представлены данные о средней концентрации общего изорамнетина в плазме добровольцев (n=6)
после однократного перорального приема «Квертина» в дозе
40 мг и 240 мг соответственно.
В таблице представлены рассчитанные фармакокинетические параметры (средние) при однократном приеме «Квертина»
здоровыми добровольцами в дозе 40 мг и 240 мг.
При приеме «Квертина» в дозе 40 мг свободный кверцетин Рис. 6. Зависимость средних значений концентрации общего изорамнетина в плазме крови от времени (прием 240 мг «Квертина»)
и свободный изорамнетин не обнаруживались
в плазме крови добровольцев во всех точках вреТаблица. Фармакокинетические параметры (средние)
мени.
При приеме «Квертина» в дозе 240 мг свободный
AUC0–t,
AUC0–∞,
Показатель/
Смакс.,
AUC0–t,
t1/2, ч
чxнг/
Тмакс., ч
Кэл.
чxнг/
кверцетин обнаружен в плазме крови только
ФК-параметр
нг/мл
%
мл
мл
у 1 добровольца (что недостаточно для расчета
Однократный прием 40 мг «Квертина»
ФК-параметров), свободный изорамнетин не обнаОбщий кверцетин
181,67
2,96
1310,34 1479,76
89,10
0,12
3,7576
руживался в плазме крови добровольцев во всех
точках времени.
Конъюгированный
181,67
2,96
1295,34 1526,82
82,29
0,10
9,62
кверцетин
Таким образом, рассчитаны ФК-параметры
общего и конъюгированного кверцетина, общего
Общий изорам21,68
3,50
112,79
223,70
66,92
0,14
5,23
нетин
и конъюгированного изорамнетина, суммы кверцетина и изорамнетина для каждого добровольца и их
Конъюгированный
21,68
3,50
112,77
223,70
66,90
0,14
5,23
изорамнетин
средние значения.
Анализ фармакокинетических параметров свиСумма общих
кверцетина и
201,00
2,96
1456,65 1631,11
89,31
0,11
9,03
детельствует о том, что Смакс. и AUC0–t, AUC0–∞ общего
изорамнетина
кверцетина и суммы кверцетина и изорамнетина
Однократный прием 240 мг «Квертина»
при применении «Квертина» в дозе 40 мг и 240 мг
изменяются прямо пропорционально.
Общий кверцетин
782,83
2,17
6104,13 6645,41
92,69
0,05
15,95
Tмакс. общего кверцетина и суммы кверцетина
Конъюгированный
782,83
2,17
6071,01 6544,41
93,18
0,06
14,96
и изорамнетина несколько уменьшается при приекверцетин
ме «Квертина» в дозе 240 мг, что может быть обусловОбщий изорам158,58
5,42
1153,28 1228,65
94,13
0,13
7,45
нетин
лено большим содержанием вспомогательных
веществ.
Конъюгированный
158,58
5,42
1132,78 1215,03
93,62
0,14
6,97
изорамнетин
Т1/2 общего кверцетина значительно изменяется
в зависимости от дозы «Квертина» и составляет
Сумма общих
кверцетина и
924,17
2,17
7223,19 7703,50
94,75
0,06
12,75
3,7576 ч при приеме «Квертина» в дозе 40 мг и 15,95 ч
изорамнетина
при приеме 240 мг «Квертина». Т1/2 суммы кверцетина
67
LU_plus_5_2.indd 67
30.06.2011 12:36:34
ДІАБЕТIСЕРЦЕ
Результаты дисперсионного анализа (ДА) ФК-параметров
общего кверцетина свидетельствуют, что значения Смакс., Кэл., t1/2,
AUCt, AUCinf cтатистически значимо различаются в зависимости
от дозы. Различия значений Тмакс. в зависимости от дозы статистически незначимы.
Результаты ДА ФК-параметров конъюгированного кверцетина
свидетельствуют, что Смакс., AUCt и AUCinf cтатистически значимо
различаются в зависимости от дозы. Различия значений Тмакс., Кэл.,
и t1/2 в зависимости от дозы статистически незначимы.
Результаты ДА ФК-параметров общего изорамнетина свидетельствуют, что Смакс., AUCt и AUCinf cтатистически значимо различаются в зависимости от дозы. Значения Тмакс., Кэл., и t1/2 в зависимости от дозы статистически незначимы.
Результаты ДА ФК-параметров конъюгированного изорамнетина свидетельствуют, что Смакс., AUCt и AUCinf cтатистически
значимо различаются в зависимости от дозы. В то же время различия Тмакс., Кэл., и t1/2 в зависимости от дозы статистически незначимы.
Результаты ДА ФК-параметров суммы кверцетина и изорамнетина свидетельствуют, что Смакс., AUCt и AUCinf и t1/2 cтатистически
значимо различаются в зависимости от дозы. Различия значений
Тмакс. и Кэл. в зависимости от дозы статистически незначимы.
Выводы
1. Данные, полученные в результате проведенного пилотного
клинического исследования (I фаза) препарата «Квертин»,
таблетки для разжевывания по 40 мг, производства
ЗАО «НПЦ «Борщаговский ХФЗ» позволяют рекомендовать
дальнейшее изучение препарата в клинических условиях
(проведение I, а затем II фазы клинических испытаний).
2. На основании данных исследования предложены рекомендации в отношении точек забора проб крови и оптимизировать
режим дозирования для дальнейших исследований.
№1 (5) / 2011
Литература
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
Hollman P.C., van Trijp J.M., Buysman M.N., van der Gaag M.S., Mengelers M.J.,
de Vries J.H., Katan M.B. Relative bioavailability of the antioxidant flavonoid quercetin
from various foods in man// FEBS Lett. – 1997, Nov 24. – Vol. 418, №1–2. – Р. 152–
156.
Manach C., Williamson G., Morand C., Scalbert A., Rеmеsy C. Bioavailability
and bioefficacy of polyphenols in humans. I. Review of 97 bioavailability studies //
American journal of clinical nutrition, 2005. – №81(1 Suppl). – Р. 230–242.
DiCenzo R., Frerichs V., Larppanichpoonphol P., Predko L., Chen A., Reichman R., Morris M. Effect of Quercetin on the Plasma and Intracellular Concentrations of Saquinavir
in Healthy Adults // Pharmacotherapy, 2006. – Vol. 26, №9. – Р. 1255–1261.
Katske F., Shoskes D.A., Sender M., Poliakin R., Gagliano K., Rajfer J. Treatment
of interstitial cystitis with a quercetin supplement // Techniques in urology. – 2001. –
Vol. 7, №1. – Р. 44–46.
Shoskes D.A., Zeitlin S.I., Shahed A., Rajfer J. Quercetin in men with category III
chronic prostatitis: a preliminary prospective, double-blind, placebo-controlled trial //
Urology, 1999. – Vol. 54, №6. – Р. 960–963.
Настанова з клінічних досліджень. Лікарські засоби. Дослідження біодоступності
та біоеквівалентності (Настанова 42–7.1:2005). – К.: Міністерство охорони
здоров’я України, 2005.
Настанова з клінічних досліджень. Лікарські засоби. Належна клінічна практика.
(Настанова 42–7.0:2005). – К.: Міністерство охорони здоров’я України, 2006.
Chow S.C., Shao J., Wang H. Sample Size Calculations in Clinical Research. –
London: Taylor&Francis, 2003. – 358 p. (P. 260).
FDA Guidance for Industry «Bioanalytical Method Validation» (May 2001)/FDA Руководство для промышленности «Валидация Биоаналитических методов» (Май 2001).
«Good laboratory practice». Oecd principles and guidance for compliance
monitoring. – Oecd, 2005.
Guidance for Industry. E14 Clinical Evaluation of QT/QTc Interval Prolongation and
Proarrhythmic Potential for Non-Antiarrhythmic Drugs / U.S. Department of Health
and Human Services Food and Drug Administration. – October, 2005. – 16 p. 7.
Порядок проведення клінічних випробувань лікарських засобів та експертизи
матеріалів клінічних випробувань. Затверджений Наказом Міністерства охорони здоров’я України № 66 від 13.02.2006.
Клинические испытания лекарств / Под ред. В.И. Мальцева, Т.К. Ефимцевой,
Ю.Б. Белоусова, В.Н. Коваленко. – 2-е изд., перераб. и доп. – К.: МОРИОН,
2006. – 456 с.
Вікторов О.П. Основні принципи організації клінічних випробувань лікарських
засобів // Ліки. – 1994. – № 5–6. – С. 4–7.
Вікторов О.П. Сучасні підходи до вивчення та контролю побічної дії ліків // Ліки. –
1995. – № 6. – С. 3–10.
Методичні рекомендації з клінічних випробувань лікарських засобів в Україні. –
К.: Авіценна. – 2001. – 724 с.
Лапач С.Н., Чубенко А.В., Бабич П.Н. Основные принципы применения статистических методов в клинических испытаниях. – К.: МОРИОН, 2002. – 160 с.
Лапач С.Н., Чубенко А.В., Бабич П.Н. Статистические методы в медико-биологических исследованиях с использованием Exel. – К.: Морион, 2000. – 320 с.
68
LU_plus_5_2.indd 68
30.06.2011 12:36:34