КРЕАТИНКИНАЗА (CK 50)

Проведение анализа
Длина волны Кювета Температура инкубации КРЕАТИНКИНАЗА Ном. номер 10003160 (CK 50)
Хранить
(с +2 до +8) °С
Набор реактивов для приготовления 210 мл рабочих растворов
для определения кат. концентрации ­креатин­киназы в сыворотке
крови. Объем достаточен для 50 анализов.
Принцип метода
Креатинкиназа (К. Ф. 2.7.3.2. аденозинтрифосфат-­креатинфосф
аттрансфераза) катализирует превраще­ние креатинина в креат­
инфосфат. Ион фосфата, осво­божденный при гидролизе креат­
инфосфата, определяют после депроте­инирования как желтый
комплекс фосфорно­ванадиевмолибденовой кислоты.
Литература
Kuby, S. S., Lardy, H. A.: J. Biol. Chem. 210, 65 (1954)
Ueda, I., Wada, T.: Anal. Biochem. 37, 169 (1970)
Реактивы
1 Стандартный раствор (5 мл)
фосфор 1,20 ммоль/л
2 Аммоний ванадевокислый (55 мл)
раствор 2 ммоль/л в хлорной кислоте 0,5 моль/л
3 Аммоний молибденовокислый (55 мл)
раствор 30 ммоль/л
4 Кислота трихлоруксусная (35 мл)
раствор 1,53 моль/л
5 Буфер (1 доза)
глицин 2,5 ммоль, натрий углекисный 2 ммоль,
магний сернокислый 0,17 ммоль/1 доза
6 Субстрат (1 доза)
глицин 2,5 ммоль, натрий углекисный 2 ммоль,
магний сернокислый 0,17 ммоль,
креатин 1,9 ммоль/1 доза
7 АТФ (5 доз)
0,07 ммоль двунатриевой соли аденозин­трифосфата
8 Активатор (2 дозы)
0,25 ммоль цистеин хлорида/1 доза
Состав инкубационной смеси
Буфер глицин/натрий углекисный, рН 9,8 (37 °С) Креатин Цистеин хлористый АТФ Соотношение сыворотка/инкубационная смесь Референтные величины
Креатикиназа (мккат/л) 106
45
12
4
ммоль/л
ммоль/л
ммоль/л
ммоль/л
1/17
до 0,33
Воспроизводимость
Около ± 8 %
Приготовление рабочих растворов
Раствор 1Содержимое пробирки с Реактивом 6 растворяют
в 10 мл бидист. воды при 80 °С, по охлаждении до 20 °С
добавляют 15 мл бидист. воды и переме­шивают.
Устойчивость: 2 недели (с +2 до +8) °С.
Раствор 2Приготавливают растворением содержимого про­бирки
с Реактивом 5 таким же образом, как раствор 1.
Устойчивость: 2 недели (с +2 до +8) °С.
Раствор 3Содержимое пробирки с Реактивом 8 растворяют
в 5 мл бидист. воды.
Устойчивость: 2 дня (с +2 до +8) °С.
Раствор 4Содержимое пробирки с Реактивом 7 растворяют
в 2,1 мл бидист. воды.
Устойчивость: ежедневно приготавливают све­жий
раствор.
Раствор 5Приготавливают смешиванием одинаковых долей
Реактива 2 и Реактива 3.
Устойчивость: ежедневно приготавливают све­жий
раствор.
(390 – 410) нм
1 см
(37 ± 0,1) °С
Контроль.
Контроль.
Отмериь (мл)
Проба
Стандарт
раствор 1
раствор 2
Раствор 1
0,50
–
0,50
–
Раствор 2
–
0,50
–
0,50
Реактив 1
–
–
0,05
–
Раствор 3
0,20
–
–
–
Сыв. крови
0,05
0,05
–
–
Бидист. вода
–
0,20
0,20
0,25
Перемешивают и предварительно инкубируют 5 мин при
37 °С.
Потом отмеривают
Раствор 4
0,10
0,10
0,10
0,10
Перемешивают и инкубируют точно 60 мин при 37 °С. Потом
отмеривают
Реактив 4
0,30
0,30
0,30
0,30
Перемешивают и центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин.
Надосадочная
жидкость
0,60
0,60
0,60
0,60
Раствор 5
0,60
0,60
0,60
0,60
Перемешивают и через 5 мин измеряют оптическую плотность
пробы (А1), контрольного раствора 1 (А2), стандарта (А3) и
контрольного раствора 2 (А4) против воды.
Расчет
A1 – A2
Креатинкиназа (мккат/л) = 0,33 . A – A
3
4
Предупреждение
Посуда для определения креатинкиназы не должна содержать следы фосфатов. Параллельно с каждой пробой следует
измерять контрольный раствор (А2). При разности оптических плотностей (А1 – А2) выше 0,4 исследование повторяют,
уменьш­ив дли­тельность инкубации до 10–30 мин, а результат
пересчитывают на инкубацию 60 мин. Сыворотку разводить не
рекомендуется!
Повторные внутримышечные инъекции могут вызвать значи­
тельное повышение кат. концентрации креатинкиназы в сыворотке крови.
Меры предосторожности
Набор реагентов предназначен для in vitro диагностики профессионально обученным лаборантом.
Реагенты набора содержат хлорную кислоту (R4, 25%), который
раздражающим веществом и опасным для окружающой среды,
едкую трихлороксустную кислоту (R2, 3%) – реагент клас. как
раздражающий, натрий углекисный (R5, 48,9% и R6, 32,5%),
являющуюся раздражающим веществом и цистеин хлорида (R8,
100%), являющуюся раздражающим веществом.
При работе необходимо соблюдать правила личной гигиены,
запрещается есть, пить и курить, надо использовать предо­
хранительные средства.
Оказание первой помощи
При приеме внутрь следует выпить 0,5 л воды. При попадании
в глаза их следует промывать минимально 10 мин в токе воды.
При попадании на кожу смыть проточной водой. Во всех случаях
серьезного повреждения здоровья должна быть оказана медиц­
инская помощь.
Ликвидация мусора
Все тестированные пробы считают материалом, который может
быть инфицирован, и совместно с возможными остатками реактивов подлежит уничтожению в соответствии с утвержденными
внутрибольничными правилами.
Бумажную упаковку сдайте в макулатуру, выполосканую заводскую тару в сортированный мусор.
Дата проведения последнего контроля: 13. 11. 2006
Выпускает PLIVA-Lachema Diagnostika s.r.o.
Карасек 1, 621 33 Брно, CZ
e-mail: [email protected], www.lachema.com