- NAC LIQUID 100

БИО-ЛА-ТЕСТ
Готовый рабочий раствор стабилен:
3 дня при 15-250С при хранении в защищенном от света месте.
30 дней при 2-80С при хранении в защищенном от света месте.
КРЕАТИНКИНАЗА NAC LIQUID 100
(CK NAC L 100)
Кат. №10004494
Хранить при (+2 - +8)0С
Метод
Набор реагентов для определения активности креатинкиназы в
сыворотке и плазме в соответствии с модификацией,
рекомендованной Международной федерацией клинической
химии (IFCC).
Принцип реакции
КФК
Креатинфосфат + АДФ
Креатин + АТФ
гексокиназа
АТФ + D-глюкоза
АДФ + D- Глюкозо-6-фосфат
Г-6-Ф-ДГ
D- Глюкозо-6-фосфат + НАДФ+
НАДФН + H+
Реагенты
R 1 Ферментный буфер
Имидазоловый буфер, pH 6.5
Глюкоза
Магния ацетат
ЭДТА
АМФ
N-Ацетил цистеин
Пентафосфат диаденозина
НАДФ
Гексокиназа
SH-стабилизатор
Натрия азид
R 2 Субстрат
АДФ
D-Глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа
Креатинфосфат
Натрия азид
Состав реакционной смеси
Имидазоловый буфер pH 6.5
Глюкоза
Магния ацетат
ЭДТА
АМФ
N-Ацетил цистеин
Пентафосфат диаденозина
НАДФ
Гексокиназа
SH-стабилизатор
АДФ
D-Глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа
Креатинфосфат
Натрия азид
D-Глюконат-6- фосфат +
4 x 20 мл
100 ммоль/л
20 ммоль/л
10 ммоль/л
2 ммоль/л
5 ммоль/л
0,20 ммоль/л
10 мкмоль/л
2 ммоль/л
> 3,2 E/ мл (66,7 мккат/л)
25 ммоль/л
0,095 %
1 x 20 мл
2 ммоль/л
>2.8 E/мл (46,7 мккат/л)
30 ммоль/л
0,095 %
80 ммоль/л
16 ммоль/л
8 ммоль/л
1,6 ммоль/л
4 ммоль/л
0,16 ммоль/л
8 мкмоль/л
1,6 ммоль/л
>4 E/ мл (53,4 мккат/л)
20 ммоль/л
0,4 ммоль/л
>0,56 E/ мл (9,34 мккат/л)
6 ммоль/л
0,095 %
Приготовление и стабильность рабочих реагентов
Двухреагентный метод – старт субстратом
Реагенты R1 и R2 жидкие, готовые к использованию.
Реагенты стабильны до достижения указанного срока годности,
если хранятся при (+2 - +8)0С.
После вскрытия, реагенты стабильны до 30 дней, если хранятся
при (+2 - +8)0C, в тщательно закрытых флаконах, избегая
испарения или контаминации реагентов.
Монореагентный метод – старт образцом
Смешать 4 части раствора реагента 1 (R1) с 1 частью раствора
реагента 2 (R2), тщательно перемешать.
Образцы
Сыворотка, гепаринизированная или ЭДТА плазма.
Избегать гемолиза!
Стабильность КФК в cывороткe и плазмe 7 дней при (+4 - +8)0С
Калибровка
Для калибровки рекомендуется
Калибратор, Кат.№ 10003200.
использовать
Лионорм
Контроль качества
Для проведения контроля качества рекомендуется контрольная
сыворотка:
Лионорм ГУМ Н, Кат.№10003204
Лионорм ГУМ П, Кат.№10003206
Анализ
Длина волны
Hg 365 нм, 340 нм или Hg 334 нм
Оптический путь
1 см
Температура
370С
Объемное соотношение
Сыворотка,
плазма/ 1/51 при работе двухреагентным
реакционная смесь
методом
Сыворотка,
плазма/ 1/41
при
работе
реакционная смесь
монореагентным методом
Объемы образца и реагентов могут быть изменены при
сохранении соотношения реагент/образец.
Двухреагентный метод – старт субстратом
25, 300C
370C
Реагент 1 (буфер)
1,000 мл
1,000 мл
Образец
0,050 мл
0,025 мл
Смешать, инкубировать 3 мин. Добавить:
Реагент 2 (субстрат)
0,250 мл
Смешать, инкубировать 3 мин. Измерить оптическую
плотность и одновременно включить секундомер. Измерить
поглощение точно через 1, 2 и 3 минуты. После измерений
рассчитать среднее изменение поглощения в минуту (∆А).
Монореагентный метод – старт образцом
25, 300C
370C
Рабочий раствор
1,000 мл
1,000 мл
Образец
0,050 мл
0,025 мл
Смешать, инкубировать 5 мин. Измерить оптическую
плотность и одновременно включить секундомер. Измерить
поглощение точно через 1, 2 и 3 минуты. После измерений
рассчитать среднее изменение поглощения в минуту (∆А).
Протоколы для использования на автоматических анализаторах
могут быть получены по запросу.
Расчеты
Рассчитайте активность КФК в пробе, используя
1. Калибратор
КФК (Е /л; мккат/л) = Скал х
∆Аобр
∆Акал
Скал. – активность КФК в калибраторе
2. Факторы:
КФК = Ф x ∆A/мин
Ф – фактор пересчета, см. нижеследующую таблицу
Факто
ры
Старт образцом
25, 300C
Длина
волны
334 нм
340 нм
365 нм
E/л
3398
мккат/
л
56,63
3333
55,55
6000
100
Старт субстратом
370C
E/л
6634
мккат/
л
110,57
6508
108,47
11714 195,23
25, 300C
E/л
370C
E/л
4207
мккат/
л
70,12
8252
мккат/
л
137,53
4127
68,78
8095
134,92
7429
123,82 14572 242,87
Москва, ул Нижегородская, 32, корп. 15, офис 503
Тел./факс: (495) 755-78-51, 755-55-80, 755-78-81, 755-78-92, е-mail: [email protected], www.lachema.ru
Коэффициент пересчета
1 кат/л = 1 моль/л. сек
1 мккат/л = 60 Е/л
Нормальные величины
КФК: сыворотка, плазма
0
0
25 С
0
30 С
37 С
E/л
мккат/л
E/л
мккат/л
E/л
мккат/л
мужчины
10–80
0,17–1,33
15-125
0,25–2,08
24–190
0,40–3,16
женщины
10-70
0,17–1,17
15-110
0,25–1,83
24-170
0,40–2,83
Приведенные диапазоны величин следует рассматривать как
ориентировочные. Каждой лаборатории необходимо определять
свои диапазоны.
Рабочие характеристики (при 370C)
Линейность: до 1620 E/л (27 мккат/л )
Чувствительность: 5,4 E/л (0,09 мккат/л)
Нижний предел определения: 17 E/л (0,29 мккат/л)
Диапазон измерений: 17 – 1620 E/л (0,29 - 27 мккат/л)
Воспроизводимость (при 370C)
Внутрисерийная Среднеарифме(число
тическое
измерений n =20)
значение
E/л
мккат/л
Образец 1
138,6
2,31
Образец 2
429,6
7,16
Образец 3
7734
128,9
Межсерийная
Среднеарифме(число
тическое
измерений n =10)
значение
E/л
мккат/л
Образец 1
141,6
2,36
Образец 2
431,4
7,19
Образец 3
7614
126,9
SD
E/л
4,2
13,2
184,8
мккат/л
0,07
0,22
3,08
SD
E/л
4,8
13,8
225
мккат/л
0,08
0,23
3,75
Утилизация использованных материалов
Все образцы теста должны рассматриваться как потенциально
инфицированные и вместе с остальными реагентами должны
быть уничтожены в соответствии с существующими в каждой
стране правилами для данного вида материалов.
Бумажная упаковка и другое (бумага, стекло, пластик) должны
быть рассортированы для выброса с мусором или отправления
на переработку.
Литература
1. DGKC: J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 15, p. 249, 1977.
2. Szasz, G. et al.: Clin. Chem., 22, p. 650. 1976.
3. Gruber, W.: Clin. Chem., 24, p. 177, 1978.
4. Chemnitz, G. et al.: Dtsch. Med. Wschr., 104, p. 257, 1977.
5. Klauke, R. et al.: Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 15, p. 901 909 , 1993.
6. Horder, M. et al.: Eur. J. Clin. Chem. Clin. Bioechem., 29, p.
435, 1991
CV
(%)
2,97
3,03
2,39
CV
(%)
3,46
3,17
2,95
Точность
Аналитическое смещение В (bias):
+ 1,55 % (423 E/л), (7,05 мккат/л)
Сравнение методов
Сравнение было проведено на 70 образцах с использованием
реагентов Pliva-Lachema Diagnostika CK NAC Liquid (у) и
имеющихся в продаже реагентов с коммерчески доступной
методикой (х).
Результаты: y = 0,9795 x – 0,0602 мккат/л, r = 0,999
Специфичность/Влияющие вещества:
Не влияют на результаты анализа:
Аскорбиновая кислота до 1,1 ммоль/л, билирубин до 684
мкмоль/л, триглицериды до 11,3 ммоль/л, гемоглобин мешает
определению, даже при низкой концентрации.
Примечание
1. Если изменение поглощения в минуту (∆А/мин) превышает
0,20 при 334 (340) нм или 0,110 при 365 нм, разбавить
образец физраствором (0,9 % NaCl) в соотношении 1+10 и
повторить
анализ,
используя
данное
разведение.
Полученный результат умножить на 11.
Меры предосторожности
Набор реагентов предназначен для in vitro диагностики
профессионально обученным лаборантом. Набор реагентов не
относится к категории опасных.
Первая помощь
При приеме внутрь следует прополоскать рот водой, выпить 0,5
л воды и вызвать рвоту. При попадании в глаза быстро промыть
их проточной водой. При попадании на кожу необходимо
промыть теплой водой с мылом. Во всех серьезных случаях
обратиться к врачу.
Москва, ул Нижегородская, 32, корп. 15, офис 503
Тел./факс: (495) 755-78-51, 755-55-80, 755-78-81, 755-78-92, е-mail: [email protected], www.lachema.ru