Шаблон секции нашей конференции
advertisement
Сочетание тонкослойной хроматографии аминокислот с их количественным определением каталитическим методом О.С. Долгушина Научный руководитель — к.х.н., доцент Ю.Ю. Петрова ГОУ ВПО «Сургутский государственный университет Ханты-Мансийского автономного округа — Югры», химико-технологический факультет, E-mail: frolechka@yandex.ru В данной работе в качестве индикаторной использовали известную реакцию восстановления железа(III) тиосульфатом натрия, катализируемую медью(II). Целью данной работы явилась реализация сорбционно-каталитического принципа для определения аминокислот по их ингибирующему действию на катализатор медь(II). В качестве носителей для проведения индикаторной реакции использовали фильтровальную бумагу с синей, красной и белой лентами, пластины для ТСХ Silufol и Sorbfil. Критерием скорости реакции служило время до появления заметной розовой окраски на носителе, а также учитывали размытость пятна, которое оценивали, измеряя его диаметр по горизонтали и по вертикали. В качестве оптимального носителя были выбраны пластины Sorbfil, на которых индикаторная реакция протекала с наибольшей скоростью при незначительной размытости. Был выбран светодиод для наблюдения за скоростью данной реакции методом спектроскопии диффузного отражения на приборе фотоколориметре-рефлектометре «УНИФОТ-СПЕКТР 8С-405» светодиод в интервале длин волн 470– 505 нм когда скорость реакции Fe(III) — Cu(II) — S2O32– максимальна. Скорость реакции характеризовали методом фиксированного времени и методом тангенсов, как тангенс угла наклона зависимости коэффициента отражения от времени на начальном участке через 30 секунд от начала реакции. Оптимизировали порядок нанесения реагентов на пластинах Sorbfil. Наибольшая скорость индикаторной реакции наблюдалась в случае следующего порядка: о-фенантролин — HCl — Cu(II) — Na2S2O3 –Fe(III). Оптимизировали концентрации реагентов индикаторной реакции, так чтобы ингибирующий эффект αаланина был максимален — от 5 до 15 мкг/мл меди(II), 7,5·10–4 М железа(III), 2·10–2 М тиосульфата натрия и 0,075 М о-фенантролина по 2 мкл каждого и 1 мкл 0,1 М HCl. В оптимизированных условиях проведения реакции на пластинах Sorbfil получена градуировочная зависимость скорости реакции от логарифма концентрации -аланина, которую можно использовать для определения выбранной аминокислоты в широком интервале концентраций от 510–6–110–2 М. Проверку правильности осуществили методом введено — найдено: введено 2,510–5 и 110–3 М, найдено (2,5 ± 1,8) · 10–5 и (1,3 ± 0,6) · 10–3 соответственно. Селективность предложенной сорбционно-каталитической методики определения -аланина низкая по сравнению с другими аминокислотами, так все 7 изученных -аминокислот (гистидин, аспарагин, метионин, треонин, валин, триптофан, цистеин) мешают определению 110–3 М -аланина на уровне концентраций 110–8–110– 6 М. Селективность данной методики предлагается повысить сочетанием тонкослойной хроматографии с последующим сорбционно-каталитическим детектированием. Для этого выбрали оптимальную подвижную фазу (н-пропанол– аммиак) из десяти, обеспечивающую эффективное разделение модельной смеси -аминокислот (аланин, аспарагиновая кислота, цистеин, глицин, метионин, серин, триптофан, валин и лизин). Пластины после ТСХ сушили не менее десяти минут в сушильном шкафу при температуре 105 °C. В этом случае аммиак подвижной фазы не влияет на условия проведения индикаторной реакции. В качестве свидетеля добавляли 0,01 М раствор -аланина, по которому устанавливали Rf, для выявления зон, в которых проводили индикаторную реакцию. В оптимальных условиях проведения индикаторной реакции Fe(III) — Cu(II) — S2O32– на пластинах после ТСХ получена градуировочная зависимость для определения -аланина в интервале концентраций 5·10–7–5·10–5 М. Проверку правильности методики осуществили методом введено — найдено: введено 2,510–5 и 2,510–6 М, найдено (2,3 ± 1,4) · 10–5 М и (4,5 ± 2,1) · 10–6 М соответственно. Изучена селективность методики на примере модельной смеси -аминокислот. Показано, что 10–7 М валина не мешает определению 10–5 М -аланина. Другие -аминокислоты (аспарагиновая кислота, цистеин, глицин, метионин, серин, триптофан и лизин) не мешают определению аланина в соотношении 100:1. Методику сорбционно-каталитического определения в сочетании с ТСХ применили в анализе косметических средств: маски для волос и бальзама после бритья для мужчин. Методом добавок найдено 0,16 ± 0,01 г(ala)/г и 2,1 ± 0,7 мг(ala)/г соответственно. По градуировочному графику результаты занижены.
