Гликозилированный сывороточный белок (ГСБ)

Гликозилированный
белок (ГСБ)
сывороточный
ЭДТА
50 мМ
Действительно с 2010.05.01
версия: 01
Ферментативный метод, 2 реагента
назначение
Диагностический
реагент
Гликозилированный
сывороточный белок используется для количественного
определения
в
лабораторных
условиях
Гликозилированноого сывороточного белка в сыворотке
крови
и
плазме
человека
с
использованием
фотометрических систем.
Обозначение
Содержание
GS7222
GSP Reagent R1:1×50mL; R2:1×10mL
(1-5)
Клиническое значение
Сахарный диабет является заболеванием, связанным с
плохим гликемическим контролем. Многочисленные
клинические исследования по контролю диабета и его
осложнений, показали, что осложнения от диабета могут
быть уменьшены с помощью долгосрочного мониторинга и
жесткого контроля уровня глюкозы в крови.
У пациентов с диабетом, у которых уровень глюкозы в
крови
аномально
повышен
концентрация
гликозилированного
сывороточного
белка
также
увеличивается. Причиной этого является то, что
Гликозилированный сывороточный белок формируется с
помощью неферментативной реакции Майяра между
глюкозой и аминокислотой оставшейся в белках. В ходе
этого
процесса
гликозилирования,
производятся
промежуточные лабильные основания Шиффа, которые
преобразуются
в
более
стабильный
аминокетон
(Гликозилированный сывороточный белок ) с помо щью
перегруппировки (реакции) Амадори.
Измерение гликозилированного сывороточного белка
полезно при мониторинге уровня глюкозы в крови по
сравнению с предыдущими 2-3 неделями. Поэтому это
является среднесрочным индикатором диабетического
контроля, а измерение уровня глюкозы в крови является
только краткосрочным индикатором.
Принцип
Реагент 1 содержит протеиназу К, которая реагирует с
гликированным белком с образованием фрагментов
гликированного белка, Аминокетон оксидаза (КАО) в
реагенте 2 окисляет аминокетон связующее вещество из
гликированных фрагментов белка. Как
результат
образуется перекись водорода, и она принимает участие в
колориметрических
реакциях по конечной точке
(Триндера). Количество полученного света при 550 нм
пропорционально концентрации гликозилированного белка
в образце.
Протеиназа K
Гликозилированный Белок
фрагменты Гликозилированного
белка
КАО
фрагменты Гликозилированного белка
аминокислоты +
H O
Пероксидаза
2
H O +хрм
о о гены
2
2
Комплект компонентов
Состав
Буфер
Протеиназа K
Пероксидаза
Калий гексацианоферрат
ТООС
БПС
Аминокетон оксидаза
4-аминоантипирин
2
цвет + H O
2
концентрации растворов
60 ммол/Л
700 U/мл
60 U/мл
90 μM
2.8мМ
144 μM
9 U/мл
10.5 ммол/Л
Хранение и стабильность
Невскрытые комплекты(флаконы): до истечения срока
годности при 2-8 ℃..
Подготовка реагентов
1) Растворить содержимое 1 флакона Р1 с Р1a. Осторожно
перемешать инверсией, а затем дать постоять в течение как
минимум 10 минут при комнатной температуре. Перед
использованием смешайте инверсией. Восстановленный
раствор Р1 * стабилен в течение 10 недель при температуре
от +2 до +8 ℃.
2) Развести содержимое 1 флакона Р2 с Р2a. Осторожно
перемешать инверсией, а затем дать постоять в течение как
минимум 10 минут при комнатной температуре. Перед
использованием смешайте осторожно инверсией.
Восстановленный раствор Р2 * стабилен в течение 10
недель при температуре от +2 до +8 ℃.
Подготовка препарата
Сыворотка, ЭДTA или литий гепаринизированная плазма
рекомендуется, и они должны быть отделены от клеток в
течение 3 часов после сбора.
Стабильность: 2 недель при температуре 2-8℃
5 недель при температуре -20℃
Образцы плазмы с ЭДТА на 6% меньше, чем образцы
сыворотки.
Процедура анализа
Бланк
Калибратор(Кал.) Образец
Реагент 1*
200μl
200μl
200μl
Дистиллиров 8μl
анная вода
Образец
8μl
Калибратор
8μl
Смесь выдерживается в течение 2минут при 37
℃.
Затем добавить:
Реагент 2*
40μl
40μl
40μl
Смесь инкубируется в течение 20 секунд
при
37 ℃.Пр
о
ч
ит
а
т
ь к
о
э
ф фициент поглощения
и
записать А1, через 5 минут прочитать коэффициент
поглощения и записать А2.
Основная длина волны 600нм
Суб длина волны
700нм
Метод
2 конечных точки
Расчеты
-A
A
(образец)
Конц. ГСБ=
A
(кал..)
-A
(бланк)
(бланк)
× конц. Кал.
(A=A2-A1)
Референтный интервал
122-236 μмол /л.
Рекомендуется, чтобы каждая лаборатория устанавливала
свой образцовый интервал .
Контроль качества
Для ежедневного контроля качества рекомендуются
Ледмэн
Гликозилированный
сывороточный
белок
контроль.
Контроль интервалов и ограничений должен быть
адаптирован к индивидуальным требованиям каждой
лаборатории. Полученные значения должны находиться в
определенных пределах. Каждая лаборатория должна
выработать меры по устранению, которые должны быть
приняты, в случае если значения выходят за пределы.
Гликозилированный сывороточный белок (ГСБ)
Ферментативный метод, 2 реагента
Калибровка
анализ
требует
использования
калибратора
Гликозилированного
сывороточного
белка.
Перекалибровка рекомендуется в любое время если
происходит одно из следующих событий:
- Меняется номер Лота реагентов.
-Осуществляется профилактическое обслуживание или
заменен важный компонент
-Контрольные значения изменились или находятся вне
диапазона и новая пробирка контроля не устраняет
проблему.
Метрологические характеристики
Линейность
Линейность метода до 1000μмол /л.
Образцы выше этой концентрации необходимо
разбавить 1 +1(один к одному) с 0,9% раствором
хлорида натрия , результат умножается на 2.
Аналитическая чувствительность (низкий предел
обнаружения)
Предел обнаружения: μмол
10
/л. (АНАЛИЗАТОРЫ
ХИТАЧИ)
Точность (при 37℃ )
Внутрисерийная
n= 20
Уровень 1
Уровень 2
Значение(μмол /л)
168.41
284.92
SD(μмол /л)
1.59
2.92
CV (%)
0.94
1.02
Межсерийная
n= 20
Уровень 1
Уровень 2
Значение(μмол /л
148.10
283.50
SD(μмол /л)
3.95
16.79
CV (%)
2.66
5.92
Взаимное влияние
Влиянием следующих веществ можно пренебречь, если
концентрации следующих веществ находится на уровне
или ниже данных значений.
Вещества
Концентрации
Билирубин
30мг/дл
Аскорбиновая кислота
400μмол /л
Глюкоза
100μмол /л
гемоглобин
5 г/Л
Триглицерид
15ммол/Л
Мочевая кислота
2.0ммол/Л
Сравнение методик
Сравнение определения
Гликозилированного
сывороточного
белка
методом Ледмэн (у) с
другим коммерчески
доступным методом (х) дало следующее
соотношение (μмол/Л):
y = -34.5003 + 1.0198 x
Действительно с 2010.05.01
версия: 01
r = 0.9991
Количество образцов измерения: 40
Концентрация образцов
была между 75,4и
μмол/Л.
645,6
Автоматизация
Специальные приспособления для автоматических
анализаторов могут быть сделаны по запросу.
Меры предосторожности и предупреждения
Общие меры предосторожности
Использовать только для диагностики in vitro.
Диагноз должен быть поставлен только после принятия
во внимание клинических симптомов и результатов
других испытаний .
Выполнение
обычных
мер
предосторожности,
необходимых для обработки всех лабораторных
реагентов.
Удаление всех отходов должно осуществляться в
соответствии с местными правилами.
Меры предосторожности для измерения
Образцы должны рассматриваться как потенциально
инфекционные (ВИЧ, вирус гепатита В, вирус гепатита
С, и т.д.) и необходимо обращаться с ними с
соответствующей осторожностью.
Реагенты с другими серийными номерами не должны
быть заменены или смешаны.
Для диагностических целей, результаты всегда должны
быть оценены в сочетании с историей болезни пациента,
клиническими обследованиями и другими выводами.
Данные
по
безопасности
материалов
профессиональных пользователей по запросу.
для
Ссылки
1. Cohen,P.M., Perspective:Measurement of Circulating
Glycated Proteins to Monitor Intermediate-Term Changes in
Glycaemic Control. Eur. J. Clin. Chem. Clin Biochem. 1992;
30(12):851-859.
2. The diabetes Control and Complications Trial Research
Group, The Effect of Intensive Treatment of Diabetes on the
Development and Progresion of Long-Term Complications
in Insulin-Dependant Diabetes Mellitus, The New England
Journal of Medicie, 1993; 329(14):977-986.
3. Armbruster, D.A., Glycosylated serum protein: Stucture,
Analysis, and Cliniacl Usefuless. Clin. Chem. 1987; 33(12):
2153-2163.
4. Benjamin, R.J. and Sacks, D.B., Glycated Protein Update:
Implications of Recent Studies, Including the Diabetes
Control and Complications Trial. Clin. Chem. 1994;
40(5):683-687.
5. Goldstein, M.D. et al., Tests of Glycemia in Diabetes.
Diabetes Care 1995; 18(6):896-909.
CE-JS-003-GSP-01
стр 2 из 3
Гликозилированный сывороточный белок (ГСБ)
Ферментативный метод, 2 реагента
IVD
Группа компаний «LEADMAN»
Адрес: Южная дорога Хонда, 5, Зона
технико-экономического развития, Пекин, Китай, 100176
Тел. 0086-10-67855500
Факс：0086-10-84923540
Действительно с 2010.05.01
версия: 01
CE-JS-003-GSP-01
стр 3 из 3