ОСОБЕННОСТИ ФАРМАКОДИНАМИКИ АЛФЛУТОПА Ивашев М.Н., Сергиенко А.В. Пятигорская государственная фармацевтическая академия,

ОСОБЕННОСТИ ФАРМАКОДИНАМИКИ АЛФЛУТОПА
Ивашев М.Н., Сергиенко А.В.
Пятигорская государственная фармацевтическая академия,
г. Пятигорск, Россия
Согласно данным Всемирной Организации Здравоохранения, до 10%
всех инвалидов страдают артропатиями. Наиболее высокий этот показатель в развитых странах, так в Великобритании, согласно Ph.H. Wood
(1978г.), он составляет 36% [8].
В России каждый 7 человек страдает каким-либо ревматическим недугом. При сохранении тех же темпов к 2005г. распространённость заболеваний данной группы составит 100 человек на 1000 человек населения, а
первичная заболеваемость дойдет до 35 человек на 1000. Среди гериатрических пациентов частота заболевания достигает 97%. Отдельные случаи
поражений суставов встречаются в возрасте 16 – 25 лет [20].
Это доказывает то, что дистрофические изменения суставов в России
являются национальной проблемой, требующей безотлагательного решения [9, 11].
Специфика патогенеза заболеваний суставов - хроническое течение и
тенденция к прогрессированию приводят к снижению трудоспособности в
60-64%, а к инвалидности - в 11,5%. Вследствие этого, разработка и исследование препаратов, направленных на предотвращение дистрофии суставов, является актуальной и социально значимой [8, 16].
Артриты - воспалительно-аутоиммунные заболевания первично инфекционной этиологии, сопровождаются нарушениями процесса обмена
веществ, в частности, выпадением микрокристаллов солей в синовиальной
жидкости, дегенеративными процессами в суставах. Артроз, остеоартроз –
дегенеративно-дистрофические заболевания суставов, конечностей и позвоночника, в основе которых лежит прогрессирующая дегенерация суставного хряща вплоть до его полного уничтожения, сопровождается разрастаниями краевых поверхностей суставных костей и вторичным синовитом. Остеоартроз характеризуется набуханием суставного хряща, разволокнением коллагенового каркаса хрящевой ткани, повышением синтеза
протеогликанов хондроцитами при одновременном освобождении из поврежденных клеток ферментов, разрушающих матрикс хряща и увеличение содержания воды в хрящевой ткани [4, 20].
В дальнейшем несоответствие между разрушением протеогликанов
протеазами и восстановительными процессами, приводит к снижению содержания протеогликанов в суставном хряще, наблюдается его истончение
и размягчение. Репаративные процессы не способны предотвратить развитие патологических изменений. Появляются участки остеосклероза, и остеофитов (в виде шпор) как результат перестройки и гипертрофии ткани.
В данном случае необходимо применение препаратов, снижающих
воспалительные процессы и одновременно препятствующие дегенеративным изменениям в суставах и окружающих тканях с восстановлением их
2
функциональной активности. Так как фармакотерапия комплексная и длительная, возникают проблемы сочетаемости лекарственных средств из
разных фармакологических групп, переносимости, синергизма отрицательных побочных эффектов. Перспектива поиска препаратов, оказывающих одновременно противовоспалительный и антидегенеративный эффект
в настоящее время весьма злободневна. В этой связи, для формирования
суставной ткани и профилактики деструктивных процессов в хряще интересны биогенетические предшественники гиалуроновой кислоты, хондроитин-сульфаты, содержащихся в морских животных [6, 7].
Гликозаминогликаны вырабатываются многими клетками: фибробластами, гладкомышечными элементами, эндотелием, макрофагами. Большинство эффектов протеогликанов являются противовоспалительными.
Хондроитин-сульфаты входят в состав сосудистых стенок и существенно
снижают проницаемость гистогематических барьеров, в значительно
большей степени, чем гепариноиды, таким образом, препятствуя экстравазации жидкости, ингибируя стадию экссудативного воспаления [14].
Гликозаминогликаны способны связывать липопротеиды, что способствует поставке в очаг воспаления холестерина, производные которого,
обладают значительным иммуномодулирующим действием [4, 19].
На фармацевтическом рынке представлен скудный ассортимент хондропротекторных препаратов для лечения артрозов, восстановления функциональной активности суставов: ХОНДРОКСИД (Нижфарма, Россия),
содержащая хондроитин сульфат, ДОНА (препарат фирмы CSC, Италия) и
пищевая добавка ИНОЛТРА содержащие D-глюкозамина сульфат [12].
Рынок России пополнился новым перспективным препаратом – алфлутоп.
Алфлутоп - препарат биоактивного концентрата морских организмов,
производства «Биотехнос С.А.», (г.Бухарест, Румыния) содержит в себе
протеогликаны, которые являясь естественными регуляторами воспалительного процесса, взаимодействуют с коллагеном и адгезивными белками, принимают участие в самосборке ткани при регенерации [23].
Учитывая особенности состава алфлутопа и его биологическое происхождение, было целесообразно провести исследование фармакодинамической активности алфлутопа в условиях острого и хронического воспаления, жаропонижающего и болеутоляющего действия [21, 22].
Материалы и методы исследования
1 ампула алфлутопа содержит биоактивный концентрат морских организмов 10mg, фенол 0,005g. вода для инъекций до 1ml., производства
«Биотехнос С.А.», г.Бухарест, Румыния. Серия № 08,02,0113. Стандартизированный очищенный (обезжиренный и депротеинизированный) экстракт из 4-х видов морских рыб содержит:
- Гликозаминогликаны – гиалуроновая кислотата, хондроитин–6сульфат, хондроитин-4-сульфат, дерматансульфат, кератансульфат;
- Полипептиды (Mm 50000);
- Свободные аминокислоты;
3
- Микроэлементы - Na, K, Fe, Са, Mg,Cu, Zn;
- Стабилизаторы и консерванты.
По аннотации, алфлутоп следует человеку вводить по 1 мл в день
(10мг). С учетом коэффициента межвидового переноса, экспериментальная
доза препарата составила 0,84мг/кг для крыс и 1,65мг/кг для мышей.
Все исследования проведены согласно “Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ”
(под редакцией В.П. Фисенко) [13]. Изучение фармакодинамики алфлутопа
проводили in vivo моделированием патологических состояний экспериментальных животных. Белые мыши m 20±2,0g, крысы Wistar m 220±10g,
крысы August m 200 ±10g выращены в питомнике РКНПК МЗ РФ (г. Москва), филиале НИИ биоорганической химии (г. Пущино), ПятГФА, (г. Пятигорск). Содержались на стандартном режиме вивария: температура окружающего воздуха 22±2 0С, 12-часовой синхронизированный световой
режим, комбинированный корм и вода ad libitum [5, 13]. Фармакодинамику
алфлутопа сравнивали с зарегистрированными препаратами [12].
Экспериментальные данные статистически обрабатывали с использованием t-критерия Стьюдента для независимых рядов [3]. Изменение исследуемых показателей считали статистически значимыми при p<0,05 [1,
18]. Расчёты результатов проводились в пакете компьютерной программы
MS Excel 2000 [10].
Результаты и их обсуждение
Установлено влияние алфлутопа на острый экссудативный компонент
воспаления. При определении антиэкссудативного действия алфлутопа
моделировали каррагениновый отек (0,1мл 1% раствора каррагенина
Sigma, США дорсовентрально, субплантарно) на крысах Wistar [13].
У контрольной группы животных отек лапки был принят за 100%.
Алфлутоп снизил степень экссудации через 3 часа на 69,23% (р<0,01). Через сутки в опытной группе животных показатель экссудативного воспаления был значимо меньше, чем в контрольной группе животных на 62,5%
(р<0,01). Динамика объема воспаленной лапы через сутки после введения
флогогенного агента, после завершения фазы экссудации, свидетельствуют
о флогомодулирующем действии алфлутопа. Это объясняется наличием в
составе препарата биогенетических предшественников гиалуроновой кислоты, хондроитин-сульфатов и согласуется с описанными в литературе
сведениями о том, что они являются регуляторами воспаления, относящиеся к группе гликозаминогликанов. Стимуляция и обострение воспалительного процесса в случае его хронического и вялотекущего характера, проявит
благотворное
влияние
на
стимуляцию
адаптационноприспособительных реакций местного и системного характера. Кроме того, будет предотвращаться развитие склерозированных рубцовых изменений в тканях, что является положительным прогностическим признаком
для восстановления поврежденных, либо утраченных клеток в ходе альтеративных и экссудативных стадий воспаления.
4
Учитывая, что процесс воспаления сопровождается повышением температуры, целесообразно было изучить влияние алфлутопа на острую экспериментальную гипертермию, индуцированную пирогеналом (0,6 мкг/кг).
Пирогенал (Предприятие по производству бакпрепаратов НИИЭМ, г. Москва, Россия), относится к группе иммунокорректоров бактериального
происхождения, содержит липополисахаридные комплексы микробных
тел, имитирует естественную пирогенную реакцию организма на микробные клетки. Воспалительные заболевания суставов в большинстве случаев
инфекционной этиологии, отчего выбор препарата представился наиболее
корректным. Мониторинг температуры крыс проводили ректально. Алфлутоп способствовал нормализации температурного режима, понижая
температуру в часы гипертермии и удерживая ее в стабильном состоянии в
часы компенсаторной гипотермии, в отличие от препарата сравнения. Это
является очень ценным для применения алфлутопа в клинической практике, так как нежелательное воздействие оказывает не только повышение
температуры, но и ее понижение, сопровождающееся снижением защитноприспособительных адаптационных возможностей организма.
Влияние алфлутопа на пролиферативное воспаление изучали на модели острого асептического воспаления, индуцированного имплантацией
мышам инородного тела cotton pellet [13]. Данная модель позволяет оценивать интенсивность экссудации и пролиферации при ревматизме, ревматоидном артрите, коллагенозах. У контрольной группы (не леченные животные) экссудативный компонент воспаления составил 135,33±8,3мг, а пролиферативный компонент 34,33±7,1мг. Это было принято за 100%. Синтетический противовоспалительный препарат индометацин (25 mg, Balcanpharma, Болгария) снизил экссудацию на 26,5% (р<0,05), что составило
101,91±8,5 мг, а пролиферацию на 21,5% (р<0,05) при 26,95±2,2 мг. Алфлутоп уменьшил экссудацию до 111,0±7,1мг, т.е. на 19,45% (p<0,05), а
пролиферацию на 20,86% (p<0,05), компонент которого составлял
27,17±1,8 мг, что не отличалось достоверно от индометацина.
Учитывая, что алфлутоп относится к группе биогенных аминов, не является противовоспалительным средством, но ингибирует, как стадию экссудации, так и стадию пролиферации по сравнению с группой не леченных
животных (контроль), его можно считать весьма перспективным препаратом для длительного лечения системных воспалительных процессов.
Поскольку воспаление сопровождается болевыми ощущениями, важно
было изучить влияние алфлутопа на болевую реакцию экспериментальных
животных. Болевую чувствительность крыс измеряли напряжением электрического тока, при котором возникал тремор хвоста, вокализация и попытка сбросить электрод. Порог чувствительности на фоне алфлутопа, вызывающий тремор хвоста, повышался на 19,85% (р<0,05), вокализация и
попытка сбросить электрод повышались, соответственно, на 38,26%
(р<0,01), и 36,58% (р<0,05), по сравнению с контролем (физиологический
раствор). Анальгин (500 mg ДАЛЬХИМФАРМ, г. Хабаровск, Россия) по-
5
высил порог болевой чувствительности, соответственно, на 29,15%
(р<0,05), 55,91% (р<0,05), и 38,29% (р<0,05). В отличие от препарата сравнения, эффект алфлутопа был только при наличии воспалительного процесса, что указывает о более мягком воздействии на ноцицептивную систему, как при длительном применении препарата, так и при его отмене.
При оценке терапевтического действия алфлутопа на фоне хронического неспецифического адъювантного артрита крыс линии August, алфлутоп вводили, начиная с 14го дня после инъекции адъюванта Фрейнда (0,1
мл субплантарно дорсовентрально) ежедневно, в течение 12 дней. Оценивали в динамике первичную и вторичную воспалительную реакцию. Онкометрически проводили измерения прироста объема обеих лапок [13].
Алфлутоп в первые сутки первичную воспалительную реакцию достоверно уменьшал при тенденции к увеличению вторичной иммунной реакции в сравнении с глюкозамином, проявил положительную динамику
первичного и вторичного хронического артрита. Важно отметить, что к
окончанию эксперимента объем лапки не был ниже начальных величин, в
отличие от глюкозамина. Это свидетельствует о сохранении целостности
структуры поврежденной ткани, воспаление закончилось именно реституцией, что указывает на хондропротективную активность алфлутопа. Для
хронических артритов характерны дистрофические изменения суставов. В
период обострения воспалительного процесса имеется достаточно большое
количество препаратов, на этапе же вялотекущего хронического течения
лекарственных средств не достаточно. Алфлутоп перспективен для длительного лечения хронических артритов, сопровождающихся деструкцией.
В эксперименте учитывались и другие симптомы генерализованной
воспалительной реакции организма: отек ушей, хвоста, температура тела,
полиартрит, общее состояние, снижение массы тела, гибель. У всех животных на первой неделе артрита наблюдались выраженные отек и гиперемия
конечностей, хвоста, ушей, увеличение болевой чувствительности. При
введении алфлутопа данные симптомы уменьшались в равной мере с глюкозамином, однако препарат сравнения вызывал явно выраженное усиление признаков воспаления и гибель экспериментальных животных на 20,
17 и 16-е сутки эксперимента. В группе животных, получавших алфлутоп,
случаев гибели не было. Масса тела в начале эксперимента снижалась, а
затем в некоторой степени увеличивалась. Это опять-таки свидетельствует
о стимуляции алфлутопом адаптационно-приспособительных реакций.
Проводили мониторинг температуры крыс в ходе хронического воспаления ректально каждые 2 дня, всего 10 измерений. До введения алфлутопа и препарата сравнения – глюкозамина температура тела крыс была
достоверно повышенной по сравнению с исходными значениями. С 14-го
дня (5 измерение) после введения препаратов температура тела стала меняться. Так, введение глюкозамина повлекло снижение температуры сразу
после начала терапии до показателей ниже исходного значения. При введении алфлутопа температура тела в первые сутки повысилась, что можно
6
объяснить стимуляцией иммунных реакций, и затем постепенно плавно
снизилась до исходных величин без симптомов компенсаторной гипотермии. Таким образом, в ходе хронического воспаления алфлутоп стабилизирует изменения температурного режима.
С целью выяснения возможного побочного действия, были изучены
ульцерогенные свойства алфлутопа по шкале согласно методическим рекомендациям Фармакологического Комитета МЗ РФ, (1983г.) посредством
введения 0,1% суспензии карбоксиметилцеллюлозы 1 мл/100г. Определение степени раздражения слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта проводились в сравнении с глюкозамином. Желудок вскрывали его по
curvature minor, микро морфологически исследовали слизистую оболочку
желудка и двенадцатиперстной кишки. У животных группы сравнения наблюдалась гиперемия слизистой оболочки желудка, оцениваемая на 2 балла, десквамация эпителия слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки
на 3 балла. В группе животных, получивших алфлутоп, не наблюдалось
патологических изменений слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки и желудка, что сопоставимо с контролем (физиологический раствор).
По степени влияния на слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта
алфлутоп является безопасным фармакологическим средством, что позволит сочетать его с нестероидными противовоспалительными препаратами
без потенцирования их побочного ульцерогенного эффекта.
Заключение.
Алфлутоп проявил выраженный противовоспалительный, антидегенеративный эффект, оказал положительное влияние на динамику первичного и вторичного проявления хронического артрита и стабилизацию температурного режима. Наряду с выраженным противовоспалительным действием, алфлутоп проявил антидегенеративное действие. На фоне хронического аутоиммунного воспаления алфлутоп вызывал стимуляцию адаптационно-приспособительных реакций. Положительное влияние на динамику первичного и вторичного проявления хронического артрита, сочетается с анальгетическим эффектом, отсутствием гепатотоксического, иммуно- и гематотоксического действия. Данные, полученные в ходе эксперимента, свидетельствуют о выраженном хондропротекторном эффекте алфлутопа без отрицательных побочных эффектов.
1.
2.
3.
Выводы.
Установлено выраженное влияние алфлутопа на течение острого первичного воспаления, на острое экссудативное и вторичное хроническое иммунное воспаление, стабилизация температурного режима.
Алфлутоп проявляет выраженный и мягкий эффект. На слизистую
оболочку желудка не оказывает токсического действия.
На фоне хронического вторичного аутоиммунного воспаления алфлутоп вызывал стимуляцию адаптационно-приспособительных реакций,
проявил выраженный ходропротекторный эффект.
7
Список литературы.
1. Hodge H.C., Sterner L.H., Am.industr. Hyg, Ass.Quart., 1943.,10,4,93
2. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. / Г.Г. Автандилов – М.:
Медицина, 1990. – 383 с.
3. Беленький, М.Л. Элементы количественной оценки фармакологичекого
эффекта. / М.Л.Беленький, - Л.: Гос. изд-во Мед.лит. – 1968.- 151с.
4. Внутренние болезни / Под ред. Ф.И. Комарова, В.Г. Кукеса А.С. Сметнева. - М..:Медицина, 1991. - 687с.
5. Гацура, В.В. Методы первичного фармакологического исследования
биологически активных веществ. / В.В.Гацура, – М.: Медицина, 1974. –
141 с.
6. Геннис, Р. Биомембраны: Молекулярная структура и функции: пер с
англ., Москва.: Мир 2000 - 624с.
7. Зупанец Н.Б. Экспериментальное обоснование использования глюкозоамина и его производных в медицине. Дис. в форме науч. докл. д –
ра. мед. наук. - Купавна. – 1993. – С. 42-43.
8. Клиническая ревматология: Пер. с англ. / Под ред. Х.Л.Ф. Каррея. – М.:
Медицина, 1990. – 448 с.
9. Кобзарь Л.В., Шмелёва О.П. Определение потребности в антиревматических лекарственных средствах // Фармация. – 1991. – Т. 41, № 4. – С.
11-15.
10. Макарова, Н.В. Статистика в Excel / Макарова Н.В., Трофимец В.Я. –
М.: Финансы и статистика, 2002. – 368 с.
11. Насонова В.А., Фоломеева О.М., Амирджанова В.А. Ревматические болезни в свете международной статистической классификации болезней
и проблем, связанных со здоровьем (десятый пересмотр) // Терапевт.
арх. – 1998. – Т. 70, № 5. – С. 5-8.
12. Регистр Лекарственных Средств России. РЛС - Энциклопедия лекарств
9-е изд перераб и доп./гл.ред. Ю.Ф. Крылов -М.: РЛС - 2002.- 1504 с
13. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Под редакцией В.П.Фисенко. – Москва.- 2000г. – 398c.
14. Сергиенко А.В. Особенности воспалительного процесса и его фармакологическая коррекция // Экология и здоровье: сборник науч.тр.- Ессентуки: ассоциация Мед.центр ЮНЕСКО, 2002.- Вып.6 - С.80-92.
15. Сернов, Л.Н. Элементы экспериментальной фармакологии. /
Л.Н.Сернов, В.В.Гацура, - М.,2000. – С.318-319.
16. Сигидин Я.А., Жуковский Г.Н. Антиревматические лекарственные
средства: Обзор. – М.: ВЦНФИ, 1990. – С. 22-23.
17. Сигидин, Я.А. Лекарственная терапия воспалительного процесса (экспериментальная и клиническая фармакология противовоспалительных
препаратов) / Сигидин Я.А., Шварц Г.Я., Арзамасцев Л.П., Либерман
С.С., - М., Медицина, - 1988, - 240с.
8
18. Стрелков Р.Б. Статистические таблицы для ускоренной оценки фармакологического эффекта. // Фармакология и токсикология. - 1986.-№4С.100-104.
19. Тринус Ф.П. Нестероидные противовоспалительные средства. / Тринус
Ф.П., Мохорт Н.А., Клебанов Б.М., - Киев «Здоровґя» - 240с.
20. “Arthritis pain” – the experience of arthritis from patientґs point of view. /
Butin D.N. Zhao S.L., Carr B.C. et al. // In: The clinical promise of specific
COX-2 inhibition in rheumatology: Symposium. Geneva; - 1998.- 25p.
21. Crolle G, Glucosamine sulphate for the management of arthrosis: a controlled clinical investigation. / Crolle G, D'Este E. // Curr Med Res Opin 7.
1980. Vol. 2. P.104-109.
22. Glucosamine sulfate compared to ibuprofen in osteoarthritis of the knee. /
Muller-Fasbender H, Bach GL, Haase W, et aI.//Osteoart Cart 1994. - Vol.
2. - P. 61-69
23. Taran AI, Experience gained with the use of local administration of medicinal remedies in rheumatic diseases / Taran AI, Puzanova OG, Lapenko OIe,
et al. // Lik Sprava, 2001 Sep-Dec;(5-6):182-5.
Реферат
АЛФЛУТОП, ХОНДРОПРОТЕКТОР, ВОСПАЛЕНИЕ ОСТРОЕ,
ВОСПАЛЕНИЕ
ХРОНИЧЕСКОЕ,
АНТИЭКССУДАТИВНОЕ
ДЕЙСТВИЕ, НОРМОТЕРМИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ.
Проведено изучение фармакодинамики алфлутопа в эксперименте in
vivo зарегистрированными методами: острое экссудативное воспаление,
индуцированное каррагенином (3ч, 24 ч), асептическое воспаление cotton
pellet (7 суток), аутоиммунное хроническое воспаление, индуцированное
адъювантом Фрейнда (4 недели), острая пирогеналовая гипертермия (48 ч).
Алфлутоп проявил выраженное хондропротекторное действие, антиэкссудативное, анальгетическое. Препарат стимулирует пролиферацию поврежденных тканей. Алфлутоп стабилизирует температурный режим при
воспалении. При длительном применении не проявляет гепатотоксического, гематотоксического, иммунотоксического, ульцерогенного влияния.