M.pneumoniae - Молекулярная диагностика

ИССЛЕДОВАНИЕ СТРУКТУРЫ
БАКТЕРИАЛЬНЫХ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ
ПНЕВМОНИИ В СМОЛЕНСКЕ
С ПОМОЩЬЮ РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ
ЭТИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ
С.А. Рачина, к.м.н.,
НИИ антимикробной химиотерапии,
Смоленская государственная медицинская
академия
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ
ВНЕБОЛЬНИЧНОЙ ПНЕВМОНИИ
• Заболеваемость ВП: США - 4 млн. случаев в год1,
Европа - 5-11 случаев на 1000 взрослого населения2,
Россия - не менее 1,5 млн. (расчетные данные)3
• Смертность при ВП: США - первая причина в структуре
смертности от инфекционных болезней (вместе
с гриппом)2
• Прямые затраты на ВП: Великобритания - 441 млн. £
в год, США - 10 млрд. $ в год4,5
1. Vital Health Stat 1998; 13: 1-225; 2. Thorax 2009; 64: iii1-iii55. ; 3. А.Г. Чучалин, и др. Пособие для врачей. 2006; 4.
Guest JF, e.a. Eur Respir J 1997;10:1530-34; 5. Agency for Healthcare Research and Quality. Research archives. 2008; 337: 25.
КЛЮЧЕВЫЕ ВОЗБУДИТЕЛИ НЕТЯЖЕЛОЙ
ВНЕБОЛЬНИЧНОЙ ПНЕВМОНИИ
1. Streptococcus pneumoniae - 20-60%
2. Атипичные микроорганизмы - 20-30%
- Mycoplasma pneumoniae
- Chlamydophila pneumoniae
+ H.influenzae
+ Грам(-) энтеробактерии (Klebsiella spp. и др. )
+ Legionella spp.
+ S.aureus
Чучалин А.Г. и соавт. Практические рекомендации по лечению,
диагностике и профилактике ВП у взрослых, 2010 г.
ЦЕЛИ ИССЛЕДОВАНИЯ
• Изучить структуру бактериальных возбудителей
ВП у взрослых госпитализированных пациентов
г. Смоленска
• Проанализировать распространенность “атипичных”
микроорганизмов, в т.ч. Legionella pneumophila среди взрослых
пациентов с ВП
• Проанализировать информативность иммуносеро-логически
методов в сравнении с ПЦР для идентификации M.pneumoniae,
C.pneumoniae, L.pneumophila
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ (I)
• Проспективное клинико-микробиологическое
исследование в ЛПУ г. Смоленска (2006-2007 гг.):
− МЛПУ «Клиническая больница скорой медицинской помощи»
(КБСМП)
− МЛПУ «Первая городская клиническая больница» (ГКБ №1)
− 421 Военный госпиталь Московского военного округа (СВГ)
− Смоленская областная клиническая больница (СОКБ)
− НУЗ «Отделенческая больница ст. Смоленск» ОАО РЖД (ЖДБ)
•
Критерии включения:
− Возраст >18 лет
− Рентгенологически подтвержденная внебольничная пневмония
− Наличие продуктивного кашля
− Продолжительность антибактериальной терапии по поводу данного
эпизода ВП < 24 ч или документированная ее неэффективность на
амбулаторном этапе
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ (II)
+
кровь
Legionella
agar base
Chlamydophila pneumoniae
Mycoplasma pneumoniae
мокрота,
БАЛ
Legionella pneumophila
аутопс.
материал
ELISA**:
ПЦР*
Ig M, G к Chlamydophila pneumoniae
Ig M, A, G к Mycoplasma pneumoniae
Ig M, G к Legionella pneumophila
сыворотка
крови
* тест системы «АмплиСенс® Legionella pneumophila-FL»,
АмплиСенс Mycoplasma pneumoniae/Chlamydophila pneumoniae-FL»
** SAVYON DIAGNOSTICS (Израиль);
VIRCELL (Испания)
ИССЛЕДОВАНИЕ ЭТИОЛОГИИ ВП В ЛПУ
СМОЛЕНСКА: ХАРАКТЕРИСТИКА ПАЦИЕНТОВ
ЛПУ
КБСМП
N
Возраст,
лет
142 49,8+17,5
Доля
Тяже- ОсложСоп.
мужчин лая ВП нения заболевания*
79%
27%
65%
45%
ГКБ №1
89
50,9+17,4
68,5%
18%
60%
49%
СВГ
84
22,9+10,9
99%
8%
11%
2%
СОКБ
7
42,6+20,2
5/7
2/7
4/7
4/7
ЖДБ
4
47,8+10,2
2/4
0
2/4
1/4
81%
19%
49%
35%
Всего
326 43,0+19,9
* ХОБЛ, ХСН, СД, алкоголизм, ХПН и др.
ЧАСТОТА УСТАНОВЛЕНИЯ ЭТИОЛОГИЧЕСКОГО
ДИАГНОЗА ВП В ЛПУ СМОЛЕНСКА
(ПЦР + Культуральное исследование)
N=295
%
59,0
42,7
37,1
КБСМП
34,2
ГКБ №1
СВГ
Всего
СТРУКТУРА ВОЗБУДИТЕЛЕЙ НЕТЯЖЕЛОЙ ВП В ЛПУ
СМОЛЕНСКА*
%
32
N=109
20
15,5
13
10
5,5
4
*ПЦР + культуральное исследование
СТРУКТУРА ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ТЯЖЕЛОЙ ВП В ЛПУ
СМОЛЕНСКА*
%
41
N=17
12
12
12
6
*ПЦР + культуральное исследование
6
5,5
5,5
СТРУКТУРА ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ВНЕБОЛЬНИЧНОЙ
ПНЕВМОНИИ В СВГ*
N=49
%
S.pneumoniae
M.pneumoniae
35
H.influenzae
16
H.influenzae+M.pneumoniae
C.pneumoniae
12
8
4
4
4
4
6
6
H.influenzae+S.pneumoniae
L.pneumophila
H.influenzae+S.aureus
C.pneumoniae+M.pneumoniae
+H.influenzae
Другие**
* 421 Военный госпиталь Московского военного округа
** C.pneumoniae+H.influenzae, C.pneumoniae+M.pneumoniae
СТРУКТУРА ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ВНЕБОЛЬНИЧНОЙ
ПНЕВМОНИИ В КБСМП*
N=47
%
S.pneumoniae
M.pneumoniae
26
17
23
H.influenzae
H.influenzae+S.pneumoniae
K.pneumoniae
8,5
4
4
17
H.influenzae+S.pneumoniae
+K.pneumoniae
Другие**
* Клиническая больница скорой медицинской помощи
** E.coli, E.coli+K.pneumoniae, E.cloaceae+K.pneumoniae, K.pneumoniae+Enterococcus spp
СТРУКТУРА ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ВНЕБОЛЬНИЧНОЙ
ПНЕВМОНИИ В ГКБ №1*
N=26
%
S.pneumoniae+M.pneumoniae
M.pneumoniae
19
31
H.influenzae
S.pneumoniae
E.coli
23
4
4
4
4
4
8
E.coli+K.pneumoniae
K.pneumoniae
K.pneumoniae+P.mirabilis
C.pneumoniae
* Городская клиническая больница №1
ФАКТОРЫ РИСКА ИНФИЦИРОВАНИЯ
ОПРЕДЕЛЕННЫМИ ВОЗБУДИТЕЛЯМИ ВП
• S.pneumoniae – мужской пол и хронические
сопутствующие заболевания
• Энтеробактерии – хронические сопутствующие
заболевания и тяжелое течение пневмонии
• H.influenzae – нетяжелая пневмония
• M.pneumoniae – отсутствие осложнений и
хронических сопутствующих заболеваний
ЧАСТОТА ВЫЯВЛЕНИЯ ДНК “АТИПИЧНЫХ”
ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ВП В ЛПУ СМОЛЕНСКА
N=295
%
35
M.pneumoniae
C.pneumoniae
L.pneumophila
30
25
20
15
10
5
0
КБСМП
ГКБ №1
СВГ
Всего
ЧАСТОТА ВЫЯВЛЕНИЯ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ
“АТИПИЧНОЙ” ИНФЕКЦИИ В ЛПУ СМОЛЕНСКА
N=160
%
90
M.pneumoniae
80
C.pneumoniae
L.pneumophila
70
60
50
40
30
20
10
0
КБСМП
ГКБ №1
СВГ
Всего
СРАВНЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ПЦР И СЕРОЛОГИЧЕСКОГО
ИССЛЕДОВАНИЯ ПРИ ВП В ЛПУ СМОЛЕНСКА
Наименовани
е
возбудителя
Метод исследования
N
ПЦР(+)
Серология (+)
N
Сероло
гия (-)
N
%
N
%
ПЦР(-)
Серология (+)
Серология (-)
N
%
N
%
M.pneumoniae
21
19
90,5
2
9,5
91
50
54,9
41
45,1
C.pneumoniae
2
2
100
-
-
110
29
26,4
81
73,6
L.pneumophila
3
3
100
-
-
109
18
16,5
91
83,5
ВЫВОДЫ (I)
•
Наиболее частыми бактериальными возбудителями ВП
в стационарах г. Смоленска являлись M.pneumoniae,
H.influenzae и S.pneumoniae (78% ВП установленной
этиологии)
•
Ведущими возбудителями тяжелой ВП являлись
S.pneumoniae (41,2%) и энтеробактерии (23,6%),
нетяжелой - M.pneumoniae (32,1%) и H.influenzae
(20,2%)
•
Факторы, достоверно повышающие риск инфицирования
определенными возбудителями при ВП - мужской пол,
хронические сопутствующие заболевания и тяжесть ВП
ВЫВОДЫ (II)
•
ПЦР, выявляющая ДНК С.pneumoniae, M.pneumoniae и
L.pneumophila позволяет существенно ↑ долю пациентов
с установленным этиологическим диагнозом ВП
•
Коммерческие ELISA тест-системы SAVYON DIAGNOSTICS
(Израиль) и VIRCELL (Испания) для детекции IgM и IgG
против С.pneumoniae, M.pneumoniae и L.pneumophila в
сравнении с ПЦР характеризуются высокой частотой
ложно-положительных результатов