Влияние антител к ДНК класса IgG на нейтрофилы человека in

Электронный журнал «Структура и динамика молекулярных систем». №7,А, 2009 г
УДК 571.27; 576.27
ВЛИЯНИЕ АНТИТЕЛ К ДНК КЛАССА IGG НА НЕЙТРОФИЛЫ
ЧЕЛОВЕКА IN VITRO
Иванова В.В., Невзорова Т.А.
Казанский государственный университет им. В.И.Ульянова-Ленина
420008, Казань, ул. Кремлёвская, 18, КГУ, кафедра биохимии
E-mail: [email protected], [email protected]
Препараты очищенных АТ к ДНК в зависимости от заряда и сродства к антигену оказывают
заметное влияние на жизнеспособность и метаболизм нейтрофилов здорового донора in vitro,
приводят к физиологическим и морфологическим изменениям клеток, которые могут вносить вклад в патологический процесс. АТ к ДНК больных приводят к гибели нейтрофилов,
увеличивают потребление глюкозы из питательной среды, изменяют выделение перекиси в
зависимости от субфракции и, в целом, не влияют на фагоцитарную активность нейтрофилов
здорового донора. ДНК, выделенная из культивированных с АТ к ДНК гранулоцитов, остается высокомолекулярной, и видимых изменений электрофоретическим методом не обнаружено.
Антитела к нативной ДНК, аутоиммунитет, системная красная волчанка, клетки крови при
аутоиммунной патологии, нейтрофилы
1. Введение
Увеличение заболеваемости системной красной волчанкой (СКВ), тяжелый
характер течения, высокий процент инвалидизации определяют медицинскую и
социальную значимость исследований подобных аутоиммунных заболеваний
(Фаворова, 1998). Этиология и механизмы развития этого хронического соединительно-тканного заболевания остаются неясными. Существуют предположения, что РНК-содержащие ретровирусы, генетические, эндокринные и факторы
окружающей среды могут приводить к возникновению аутоиммунной патологии. Предполагают, что основной причиной развития СКВ является повышенное содержание в крови больных антител (АТ) к нативной ДНК (нДНК) класса
IgG [2]. Недавние исследования показали, что эти антитела к ДНК способны
проникать в различные клетки и ядра, вызывая при этом их морфологические и
функциональные изменения [3]. Но истинная роль антител к нДНК класса IgG в
патогенезе СКВ до конца не выяснена.
Поскольку нейтрофилы являются неотъемлемым компонентом иммунной
системы и их количество в периферической крови наибольшее среди других клеток крови, т.е. они являются самыми многочисленными фагоцитирующими и элиминирующими клетками, следовательно, их функциональные изменения могут
приводить к развитию патологических процессов. В последнее время выдвигается
концепция о посреднической роли нейтрофилов между ЦНС и соединительной
тканью и на поверхности нейтрофилов обнаружены рецепторы к различным нейрогормональным и иммунным стимулам [4].
3
Электронный журнал «Структура и динамика молекулярных систем». №7,А, 2009 г
Таким образом, целью работы явилось: исследование влияния антител к
нативной ДНК класса IgG на жизнеспособность и метаболизм нейтрофилов человека in vitro. В связи с целью, поставлены задачи:
1) выделить и очистить антитела к нативной ДНК класса IgG из сывороток крови больного СКВ в активной стадии заболевания и клинически здорового донора;
2) исследовать влияние антител к нативной ДНК из крови больных СКВ
и здорового донора на биохимические и цитологические параметры культивирования нейтрофилов донора in vitro.
2. Материалы и методы
2.1. Выделение антител класса IgG к нативной ДНК из крови человека
В работе использовали 3 сыворотки крови клинически здоровых лиц, 3
сыворотки больных СКВ в стадии обострения, полученные в стационарах г. Казани.
Антитела выделяли осаждением сульфатом аммония с последующим обессоливанием белков и хроматографическим разделением по заряду на ДЭАЭцеллюлозе и сродству к антигену на ДНК-целлюлозе в MiniColdlab. Полученные препараты АТ собирали, концентрировали струей воздуха, диализовали
против 10 мМ трис-НС1-буфера, pH 7.5, с двукратной сменой в течение 72 часов при +4°С. Концентрацию белка после каждого этапа очистки определяли
методом Христиана-Варбурга [5].
2.2. Исследование влияния антител к нДНК на нейтрофилы донора
2.2.1. Оптимизация методики выделения гранулоцитов из периферической
крови
Для исследования влияния сывороточных и полученных высокоочищенных АТ класса IgG на нейтрофилы (гранулоциты выделяли по оптимизированной методике Долгушина И.И. [6] на двойном градиенте плотности фиколлверографина 1.095 и 1.077 г/мл)
2.2.2. Культивирование нейтрофилов в присутствии антител к нДНК
Для исследования влияния аутоантител на нейтрофилы проводили их инкубацию в 96-луночных планшетах в течение 24 часов при 37ºС, 0.5% СО2.
Эксперименты проводили в двух вариантах. Первый вариант: 40 тыс. клеток на
лунку в полной среде RPMI-1640, рН 7.4, 10 мкг/мл АТ сыворотки клинически
здорового донора (норма), больных СКВ на стадии обострения и в период ремиссии. Второй вариант: 40 тыс. кл/лунку, 5 мкг/мл очищенных АТ. Контрольные образцы содержали: фосфатно-солевой буфер (ФСБ), митоген фитогемагглютинин (ФГА), ДНКазу I (10 мкг/мл), перекись водорода (0.47 мМ), образцы
препаратов, показанных при СКВ: преднизолон и α2B интерферон (0.45 нг/мл и
1 млн е.а./мл соответственно). В качестве положительного контроля использовали сыворотку кролика с высоким титром ДНК-гидролизующих антител (10
4
Электронный журнал «Структура и динамика молекулярных систем». №7,А, 2009 г
мкг/мл), полученную иммунизацией комплексом ДНК-ДНКаза в полном адъюванте Фрейнда.
2.2.3. Определение жизнеспособности клеток после культивирования с препаратами АТ к ДНК
Жизнеспособность клеток определяли методом исключения трипанового
синего в камере Горяева.
2.2.4. Определение количества потребления глюкозы клетками
Концентрацию глюкозы в среде до и после инкубации клеток определяли
глюкозооксидазным колориметрическим методом, с использованием стандартный коммерческий набор реагентов. Результаты выражали в мМ потребленной
из питательной среды глюкозы в пересчете на одну клетку.
2.2.5. Определение образования перекиси водорода
Выделенную клетками перекись водорода определяли колориметрически с
использованием фенолового красного и пероксидазы хрена. Результаты выражали в ПкМ на одну клетку.
2.2.6. Определение фагоцитарной активности нейтрофилов (ФАН)
Фагоцитарную активность нейтрофилов (ФАН) определяли, добавляя к
клеткам после культивирования с АТ к ДНК и отмывки препарат дрожжей
Saccharomyces cerevisiae, инкубировали при 37ºС, 0.5% СО2 30 минут. Далее
проводили спиртовую фиксацию образцов с последующим окрашиванием по
Романовскому и определением фагоцитарного индекса микроскопированием.
2.2.7. Оценка уровня повреждения ДНК клеток
2.2.7.1. Определение изменения молекулярной массы ДНК клеток
Клетки лизировали 0,25% тритон Х-100 в 0.1н NaOH. ДНК очищали смесью
хлороформ-изоамиловый спирт (24:1). Маркер – Lambda DNA/Hind III. Образование комплексов АТ с ДНК исследовали окрашиванием геля Coomassie brilliant
blue G250 в течение 18 ч при комнатной температуре.
2.3. Статистическая обработка результатов
Из полученных результатов вычисляли медиану, 95 и 5 перцентили, используя стандартный пакет Microsoft Excel. Графические файлы электрофореграмм обрабатывали, используя программу TotalLab 2.01.
3. Результаты исследований и их обсуждение
Антитела к нДНК класса IgG обнаруживаются в крови клинически здоровых людей, но их уровень значительно повышен при системной красной вол5
Электронный журнал «Структура и динамика молекулярных систем». №7,А, 2009 г
чанке (СКВ) – аутоиммунном заболевании соединительной ткани неясной этиологии. Также известно, что при СКВ повышается фагоцитарная активность
нейтрофилов in vivo [7].
В литературе существуют противоречивые данные о происхождении, механизмах взаимодействия с клетками организма и биологической роли АТ к ДНК.
Литературые данные свидетельствуют о том, что популяция АТ к нДНК
класса IgG гетерогенна и это, вероятно, сказывается на противоречиях в характеристике и биологической роли АТ к нДНК при СКВ [8]. Поэтому для проведения исследований были получены высокоочищенные субфракции антител к
нДНК класса IgG, различающиеся по физико-химическим и иммунохимическим
свойствам.
В работе использовали сыворотки крови здорового донора, больных СКВ в
активной стадии заболевания и в период ремиссии. Выделение и очистку АТ
класса IgG из сывороток крови проводили согласно методике, оптимизированной в нашей лаборатории [5].
Из каждой сыворотки крови методом ионообменной хроматографии были
получены 3 фракций антител: основные (фракция I) и кислые (фракция II, IIІ),
различающиеся силой заряда. Фракция II элюирована с ДЭАЭ-целлюлозы 0.1 М
NaCl, фракция III – 0,145 М. Из каждой фракции методом аффинной хроматографии получили по 2 субфракции АТ к ДНК, различающиеся сродством к
нДНК-целлюлозе – субфракции а, элюированные 1М NaCl, и субфракции б,
элюированные с сорбента буфером Gly-HCl с низким значением рН 2.3 (рис. 1).
Рис. 1. Схема выделения очистки АТ к нДНК класса IgG из сыворотки крови
Показано, что в процессе патогенеза СКВ значительную роль играют антитела к нДНК класса IgG [9]. Однако исследований влияния гетерогенных высокоочищенных антител на гранулоциты не проводилось, следовательно, не выяснены
6
Электронный журнал «Структура и динамика молекулярных систем». №7,А, 2009 г
совместный вклад АТ в патологический процесс СКВ и происходящее при этом
изменения нейтрофильного ответа.
Известно, что в ответ на антиген нейтрофилы продуцируют радикалы кислорода, которые элиминируют не только антиген, но и приводят к сильным
повреждениям окружающих тканей. Отмечено, что фагоцитарная функция нейтрофилов у больных СКВ усилена. А также замечено, что при СКВ скорость
апоптоза нейтрофилов выше, чем у здоровых людей и коррелирует с активностью заболевания и уровнем АТ к ДНК [10].
Исследования проводили в двух вариантах: 1) влияние АТ сывороток крови; 2) влияние препаратов субфракций АТ к нДНК, выделенных и очищенных
из сывороток крови человека.
Контрольные образцы содержали: фосфатно-солевой буфер (ФСБ) – отрицательный контроль; фитогемагглютинин (ФГА) – неспецифический стимулятор пролиферации клеток; препарат, показанный при СКВ – преднизолон, дегидрированный аналог гидрокортизона, иммунодепрессант; интерферон α2B –
продукт B-лимфоцитов и лимфобластомных линий, противовирусное средство,
иммуностимулятор; ДНКазу I – фермент, осуществляющий фрагментацию ДНК
на поздних этапах апоптоза [11] перекись водорода – активная форма кислорода, использованная для сравнения уровня активности антиоксидантной системы
в здоровых клетках. В качестве положительного контроля использовали сыворотку кролика с высоким титром ДНК-гидролизующих антител класса IgG.
Исследования клеток проводили после культивирования с контрольными и
опытными препаратами в течение 24 часов [4], т.к. жизненный срок нейтрофилов
мал (1-4 дня).
По истечении времени инкубации все образцы исследовались по нескольким показателям жизнедеятельности нейтрофилов. Количество и жизнеспособность клеток, и потребление глюкозы среды за прошедшее время инкубации
являются показателями уровня жизнеспособности или клеточного апоптоза;
выделение перекиси водорода – изменение данного показателя характеризуют
степень активации нейтрофилов; ФАН как характерная способность нейтрофилов элиминировать чужеродный антиген, изменение этой активности коррелирует с изменением метаболизма клетки. Оценка воздействия АТ на геномную
ДНК нейтрофилов за прошедшее время инкубации проводилась методом электрофореза нуклеиновых кислот в агарозном геле, что позволяет выяснить степень изменения ДНК и РНК клеток после культивирования с АТ.
Влияние АТ сывороток крови. Для выяснения общих принципов действия
АТ на гранулоциты были использованы сыворотки.
При инкубации нейтрофилов донора с СКВ-антителами сывороток крови на
стадии обострения и периода ремиссии наблюдается уменьшение количества клеток, подобно действию ДНКазы на клетки донора (Рис.2).
7
Электронный журнал «Структура и динамика молекулярных систем». №7,А, 2009 г
Рис. 2. Общее количество и жизнеспособность нейтрофилов после культивирования в присутствии: 1 – ФСБ. 2 –ФГА. 3 –ДНКазы. 4 – перекиси водорода. 5 – преднизолона.
6 – интерферона. 7 – сыворотки СКВ активная стадия. 8 – сыворотки СКВ ремиссия. 9 –
сыворотки здорового донора*
В то время как АТ клинически здорового донора незначительно уменьшают количество нейтрофилов подобно некоторым контролям, таким как, митоген
ФГА, иммунностимулятор интерферон и перекись водорода. Возможно, уменьшение количества клеток в присутствии ФГА связано, с тем, что хроматин нейтрофилов не реплицируется, и митоген иначе воспринимается рецепторами
нейтрофилов. Необходимо учесть тот факт, что АТ и нейтрофилы были получены от одного донора, поэтому тенденция к уменьшению количества клеток менее выражена, чем в проведенных ранее в нашей лаборатории экспериментах, в
которых исследовали ответ моноцитов и лимфоцитов на АТ [12]. Тенденция к
уменьшению количества клеток в присутствии перекиси водорода наблюдалась
и в предыдущих опытах, но с другими видами клеток крови. Это свидетельствует о том, что свободные формы кислорода в целом снижают количество и
жизнеспособность клеток, разрушая мембрану и нарушая процессы жизнедеятельности клеток. Увеличение поглощения клетками глюкозы из инкубационной среды в присутствии СКВ АТ и нормальных АТ, как и в случае иммунностимулятора интерферона, указывает на ускорение метаболизма клеток, против
контролей ФСБ и ФГА (Рис. 3.).
Рис. 3. Потребление глюкозы из среды нейтрофилами, инкубированными в присутствии:*
8
Электронный журнал «Структура и динамика молекулярных систем». №7,А, 2009 г
Слабое поглощение глюкозы в присутствии ДНКазы коррелируют с их интенсивной гибелью. Присутствие перекиси водорода также ускоряет метаболизм нейтрофилов, что, возможно, является защитной реакцией клеток.
Преднизолон оказывает иммуно-депрессирующее действие на организм в
целом, но действие его на культуру клеток неоднозначно: нейтрофилы нормально поглотили глюкозу, хотя и наблюдается снижение количества клеток и их
жизнеспособности.
Свойство нейтрофилов элиминировать антигены оценивали по их способности выделять перекись водорода и обладать фагоцитарной активностью.
Рис. 4. Выделение перекиси нейтрофилами в расчете на живую клетку после инкубации в присутствии:*
Как видно на рис. 4, выделение нейтрофилом перекиси водорода в присутствии АТ активной стадии СКВ и стадии ремиссии не отличается от контроля
ФСБ, т.е. не происходит активации нейтрофильного ответа на антиген. В присутствии нормальных АТ обнаружено снижение выделения перекиси, возможно, потому, что, и АТ и клетки принадлежат одному донору и в условиях, приближенных к естественным, такой ответ является физиологически нормальным.
Присутствие перекиси ингибирует выделение свободных форм кислорода,
и приводит к гибели клеток, так как, возможно, наступает разрушение антиоксидантных ферментов (супероксиддисмутаза и др.), ответственных за выделение перекиси клетками нейтрофилов. Преднизолон, как иммунодепрессант, ингибирует выделение перекиси, что согласуется с данными литературы о его
действии in vivo. Действие интерферона не однозначно, так как он, как иммуностимулятор, должен активировать выделение перекиси [13]. Полученный результат снижения выделения перекиси может быть связан с высокой концентрацией интерферона в исследуемых образцах. ФГА ингибирует выделение перекиси по неизвестной причине, одной из которых может являться использование
чистой культуры гранулоцитов.
Таким образом, АТ сыворотки крови больного СКВ в активной стадии
приводят к гибели нейтрофилов (гранулоцитов), что сопровождается усилением
потребления глюкозы из среды и нормальному выделению перекиси водорода.
Действие этих антител отлично от действия ДНКазы и нормальных АТ на нейтрофилы донора.
9
Электронный журнал «Структура и динамика молекулярных систем». №7,А, 2009 г
Влияние субфракций АТ к нДНК класса IgG. Так как сыворотка крови является многокомпонентной системой, в которой активность АТ к ДНК может
быть замаскирована комплексами АТ – ДНК или АТ – АТ, поэтому исследовали
влияние выделенных и высокоочищенных АТ к ДНК класса IgG шести субфракций на жизнеспособность и метаболизм нейтрофилов in vitro.
При культивировании нейтрофилов были использованы АТ к нДНК класса
IgG активной стадии СКВ и клинически здорового донора.
Инкубация нейтрофилов в присутствии СКВ АТ приводит к достоверному
снижению жизнеспособных нейтрофилов, особенно субфракций «b» (рис. 5).
Рис. 5. Общее количество и жизнеспособность нейтрофилов после культивирования в присутствии: 1 – ФСБ, 2 – ДНКазы, 3 – АТ кролика, 4 – Нормы Іа, 5 – Нормы IIа, 6 – Нормы IIIа,
7 – Нормы Іb, 8 – Нормы IIb, 9 – Нормы IIIb, 10 – СКВ Іа, 11 – СКВ IIа, 12– СКВ IIIа, 13 –
СКВ Іb, 14 – СКВ IIb, 15 – СКВ IIIb*
В присутствии нормальных АТ также наблюдается снижение количества
жизнеспособных клеток, но в меньшей степени, чем при СКВ. Отмечено, что в
присутствии нормальных АТ и СКВ АТ наибольший эффект на гибель клеток,
подобно ДНКазе І, оказывают АТ ІΙI фракции, обладающие сильным отрицательным зарядом. АТ кролика, обладающие высоким сродством к нДНК, не оказали на нейтрофилы апоптотического эффекта, как на лимфоциты и моноциты
из предыдущих исследований в нашей лаборатории [12]. Это свидетельствует
об отличиях в механизмах связывания АТ с ДНК и проникновения АТ к ДНК в
клетку, в зависимости от субфракции АТ, типа и метаболизма различных клеток.
Как видно на рис. 6, нормальные АТ субфракций «a» снижают метаболизм
(потребление глюкозы) примерно в равной степени, а с ростом отрицательного
заряда (субфракции III) отмечена тенденция к поглощению глюкозы из среды.
Очищенные СКВ АТ, в целом, не усиливают метаболизм нейтрофилов в расчете
на живые клетки. Отмечено, что АТ кролика увеличивают потребление глюкозы
нейтрофилами, соответственно усиливая и метаболизм клеток.
10
Электронный журнал «Структура и динамика молекулярных систем». №7,А, 2009 г
Рис. 6. Потребление глюкозы из среды нейтрофилами, инкубированными в присутствии:*
Выделение нейтрофилами перекиси водорода в присутствии АТ сильно
варьирует (рис. 7). Нормальные АТ субфракций «a» – ингибируют, а кислые АТ
субфракции ІІІb c сильным отрицательным зарядом – активируют выделение
перекиси водорода нейтрофилами.
У СКВ АТ наблюдается похожая зависимость действия на выделение перекиси, причем кислая фракция ІІІb и здесь действует сильнее. Как видно из рис.
7 субфракция ІІ со слабым отрицательным зарядом ингибирует выделение перекиси, а с сильным – ІІІ – активирует. Индуцированные АТ кролика, обладающие высоким сродством к ДНК, усиливают выделение перекиси нейтрофилами.
Рис. 7.Выделение перекиси нейтрофилами в расчете на живую клетку после инкубации в
присутствии:*
В присутствии нормальных АТ, в целом, фагоцитарная активность снижается (рис. 8), причем, АТ субфракции III, активнее снижают фагоцитарную активность нейтрофилов. В присутствии СКВ АТ фагоцитарная активность повышается только в случаях с кислыми фракциями III, в остальных случаях ФАН
ниже контрольного значения. Отмечено, что у данного донора в присутствии
отрицательного контроля ФСБ ФАН выше нормальных значений (60 – 80 %).
АТ кролика, угнетают ФАН, относительно контроля (рис. 8). ФАН больных
СКВ сильно увеличивается в процессе заболевания (Прохоров, Борисова, 2006),
а при инкубации здоровых клеток с СКВ АТ такого не происходит, возможно,
11
Электронный журнал «Структура и динамика молекулярных систем». №7,А, 2009 г
потому, что нейтрофилам необходим стимул от лимфоцитов, и скоординированное действие всей иммунной системы.
Рис. 8. Процент нейтрофилов поглотивших 1 и более клеток дрожжей в присутствии:
1. –ФГА 2. – ФСБ 3. – ДНКаза 4. – АТ кролика 5. – Норма Іа 6. – Норма IIа 7. – Норма IIIа 8.
– Норма IIb 9. – Норма IIIb 10. – СКВ IIа, 11. – СКВ IIIа 12. – СКВ Іb 13. – СКВ IIIb
Таким образом, АТ оказывают заметное влияние на жизнеспособность и
метаболизм нейтрофилов здорового донора in vitro, это влияние зависит от заряда и сродства антитела к нДНК, соответственно приводят к биохимическим и
морфологическим изменениям нейтрофилов, которые в свою очередь могут
привести к патологическому процессу.
Полученные данные также указывают и на то, что результат культивирования клеток крови человека с АТ как здорового, так больного СКВ, in vitro только
приблизительно может объяснить процессы в клетке, приводящие к аутоиммунной патологии СКВ. Необходимо детально изучить проникновение и/или взаимодействие патологических антител к нуклеиновым кислотам с системой рецепторов мембраны отвечающей клетки и последующие физико-химические и
биологические процессы внутри клетки.
Влияние АТ к нДНК класса IgG на нуклеиновые кислоты нейтрофилов.
ДНК, выделенная из гранулоцитов, остается высокомолекулярной (рис. 9.) и
видимых изменений в нуклеиновых кислотах электрофоретическим методом не
наблюдается.
Рис. 9. Электрофореграмма ДНК выделенной из клеток, инкубированных в присутствии: 1 –
ФСБ, 2 – ДНКаза, 3 – АТ кролика, 4 – Норма Іа, 5 – Норма IIа, 6 – Норма IIIа, 7 – Норма Іb, 8
– Норма IIb, 9 – Норма IIIb, 10 – СКВ Іа, 11 – СКВ IIа, 12– СКВ IIIа, 13 – СКВ Іb, 14 – СКВ
IIb, 15 – СКВ IIIb
Методом неспецифического связывания белком красителя Coomassie brilliant blue G250 выяснили, что примесей белков с выделенной из нейтрофилов
нуклеиновой кислотой, нет, так как не произошло перехода красителя в голубую форму, следовательно, комплексов антиген-антитело, антитело-антитело
12
Электронный журнал «Структура и динамика молекулярных систем». №7,А, 2009 г
не образовалось. Следовательно, АТ могут способствовать возникновению одноцепочечных разрывов или модификаций в нуклеиновых кислотах, что приводит к изменению метаболизма и гибели клетки.
Литература
1. Фаворова, О.О. Аутоиммунные заболевания как следствие утраты иммунной системой
способности отличать «свое» от «чужого»/ О.О. Фаворова // Соросовский образовательный журнал. – 1998. – №12. – С. 19-24.
2. Koren, E. Murine and human antibodies to native DNA that cross-react with the A and D
SnRNP polypeptides cause direct injury of cultured kidney cells / Koren, Koscec,. WolfsonReichlin [et al.] // Journal Immunol.–1995.–V.154. – P. 4857-4864.
3. Foster M.H. Biology of Disease. Nephritogenic autoantibodies in systemic lupus erythematosus:
immunochemical properties. Mechanisms of immune deposition, and genetic origins / M.H.
Foster, B. Cizman, M.P. Madaio // Lab. Invest. – 1993. – V.69. – №5. – P. 494-507.
4. Fadeel, B. Involvement of Caspases in Neutrophil Apoptosis Regulation by Reactive Oxygen
Spesies / Fadeel, Anders, Henter, Orrenius and Hampton // Journal «Blood». – 1998. –№ 12. –
P. 4808 – 4818.
5. Невзорова, Т.А. ДНК-гидролизующая активность антител к ДНК при системной красной
волчанке: Дис. … канд. биол. наук: 03.00.04: защищена 24.03.05: утв. 03.06.05 / Невзорова
Татьяна Александровна. – Казань, 2005. – С.170.
6. Долгушин, И.И. Антимикробные эффекты секреторных продуктов нейтрофилов //
РАМН.. – 2001. –№23. – С.5.
7. Прохоров, Е.В., Борисова, Т.П. Особенности современного течения и терапии системной
красной волчанки у детей и подростков // Клинические лекции Украинского государственного медицинского университета. – 2007. – С.2-5.
8. Barbas, S.M. Human autoantibody recognition of DNA / S.M. Barbas, H.J. Ditzel, E.M.
Saloneh, et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. – 1995. –V.92.–№7 – P.2529-2533
9. Nevinsky, G.A. Effect of different drugs оn the level of DNA-hydrolyzing polyclonal IgG antibodies in sera of patients with Hashimoto's thyroiditis and nontoxic nodal goiter / G.A. Nevinsky, А.А. Breuzov, A.G. Baranovskii, et. al. // Med. Sci. Monit. – 2001. – V.7. – №2. – С. 201211.
10. Courtney, P.A. Increased apoptotic peripheral blood eutrophils in systemic lupus erythematosus:
relations with disease activity, antibodies to double stranded DNA, and neutropenia / P.A.
Courtney, , Crockard A.D., Williamson K. et al. // Ann. Rheuma. Dis. – 1999. – V. 58. – P. 309314.
11. Courtney, P.A. Increased apoptotic peripheral blood eutrophils in systemic lupus erythematosus:
relations with disease activity, antibodies to double stranded DNA, and neutropenia / P.A.
Courtney, , Crockard A.D., Williamson K. et al. // Ann. Rheuma. Dis. – 1999. – V. 58. – P. 309314.
12. Сабирзянова, А.З. Влияние антител класса IgG к нативной ДНК на моноциты человека in
vitro / А.З. Сабирзянова, Т.А. Невзорова // Ученые записки Казанского государственного
университета. – 2008. – Т.150. – Книга 2. – С.186-200.
13. Машковский, М.Д. // Лекарственные средства. – 1997. – Т.2. – №13. – С. 33-34.
13
Электронный журнал «Структура и динамика молекулярных систем». №7,А, 2009 г
INFLUENCE OF IGG ANTI-DNA ANTIBODIES ON HUMAN
NEUTROPHILS IN VITRO
Ivanova V.V., Nevzorova T.A.
Kazan State University named V.I.Ulyanov-Lenin
420008, Kazan, Kremlevskaya st., 18, KSU, Department of Biochemistry
E-mail: [email protected], [email protected]
Abstract
Isolated anti-DNA antibodies depending on a charge and affinity to an antigen show significant influence on viability and metabolism neutrophils of healthy donors in vitro and lead to physiological and morphological changes of cells that could bring the contribution to pathological process.
Аbs to DNA of patients lead to death neutrophils, increase consumption of glucose from a nutrient
medium, change allocation of peroxide depending on a subfraction and, as a whole, do not influence
on neutrophils phagocyte activity of healthy donors. DNA isolated from cultivated with anti-DNA
antibodies granulocytes, remains to be high-molecular-weight and visible changes by an electrophoresis method not revealed.
Keywords
Antibodies to native DNA, autoimmunity, systemic lupus erythematosus, the culture of eukaryotic
cells, blood cells at autoimmune pathologies, neutrophils
Сведения об авторах
№№
Ф.И.О.
Должность и место работы
1
Иванова Вилена
Витальевна
Студент V курса кафедры биохимии
КГУ
2.
Невзорова Татьяна
Александровна
Доцент, кафедра биохимии КГУ
Телефон рабочий
E-mail
+7 (843) 233-78-52
[email protected]
89600331043
+7 (843)233-78-45
[email protected]
89178589911
14