Попов Ю.Г. Разработка и изучение эффективности
реклама
На правах рукописи ПОПОВ Юрий Геннадьевич РАЗРАБОТКА И ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ПРИ БОЛЕЗНЯХ, ВЫЗЫВАЕМЫХ У ЖИВОТНЫХ УСЛОВНО ПАТОГЕННОЙ МИКРОФЛОРОЙ 16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук наук Новосибирск - 2005 Работа выполнена в Институте ветеринарной медицины Новосибирского государственного аграрного университета и ГНУ Институт эксперимен-тальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН Научный консультант: Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор Шкиль Николай Алексеевич доктор ветеринарных наук, профессор Самоловов Андрей Артемьевич доктор ветеринарных наук, старший научный сотрудник Зюбин Иван Никитович доктор ветеринарных наук, доцент Кашин Алексей Степанович Ведущая организация: ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный ин-ститут патологии, фармакологии и терапии Защита состоится в __00 часов на заседании диссертационного совета Д 006.045.01 при ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН по адресу: 630501, Новосибирская обл., Новосибирский р-н, п. Краснообск, СО РАСХН, ИЭВСиДВ С диссертацией можно ознакомиться в ЦНСХБ СО РАСХН. Автореферат разослан "___"_______________ 2005 г. Ученый секретарь диссертационного совета __________________________ С.И. Логинов 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы.Одной из главных задач современного животноводства является увеличение производства высококачественных продуктов для обеспечения полноценного питания населения России. Но успешное ведение высокопродуктивного животноводства предусматривает безусловное соблюдение человеком по отношению к сельскохозяйственным животным ряда условий, практически отрывающих их от природной среды и приближающих к биологической машине, производящей целевую продукцию. Главными из них являются: обеспечение полноценным питанием, защита от болезней, создание возможностей для реализации функции самовоспроизводства, содержание в неестественной экологической среде, искусственная регуляция численности (А.Г. Шахов с соавт., 2000). Практика последних десятилетий ведения продуктивного животноводства во всех странах мира показывает, что выполнение этих условий часто не только сталкивается с большими трудностями, но и ведет к нежелательным результатам. Несмотря на нарастающую интенсивность применения биологических и химиотерапевтических средств, остается стабильно высокой заболеваемость маточного поголовья и молодняка (И.А. Бакулов, В.В. Макаров, 1990; Г.К. Волков, 1998, 2003; А.Г Шахов, 2002; С.М. Сулейманов, В.С. Слободяник, 2002; Л.Б. Нехуров, 2003; Н.А. Шкиль, 2003). Анализ структуры заболеваемости крупного рогатого скота по регионам и в целом по стране показывает, что за последние 10-15 лет наблюдается относительно стабильное эпизоотическое благополучие по классическим инфекциям. Важнейшей проблемой современного животноводства являются инфекционные болезни, определяемые рядом авторов как факторные. Их практически повсеместные энзоотичность и стационарность свидетельствуют о том, что они не случайны и возникают как следствие постоянно присутствующих в среде обитания животных неблагоприятных факторов, закономерно вызывающих неспецифические изменения в организме. При этом условно-патогенная микрофлора играет роль конечного эффектора (разрешающего фактора), определяя нозологически дифференцируемую патологию. Из факторных инфекций наибольшее эпизоотологическое и экономическое значение имеют эндометриты и маститы у коров. Большой проблемой являются и ставшие массовыми заболевания дистального отдела конечностей. Эти болезни наносят хозяйствам огромный экономический ущерб за счет недополучения приплода, снижения продуктивности и преждевременной выбраковки коров (С.И. Джупина, 1994, 2001; Г.Ф. Коромыслов, 1998; В.П. Урбан, 1998; В.А. Апалькин, 1999; В.В. Макаров, 2004). Широкое распространение факторные инфекции получили при интенсивном ведении животноводческой отрасли. Это связано, с одной стороны, с воздействием многочисленных технологических стресс-факторов, отрицательно влияющих на физиологическое состояние животных и приводящих к снижению резистентности, а с другой стороны, создаются благоприятные условия для распространения условно патогенных микроорганизмов в результате высокой плотности поголовья, неоднородности его иммунологического статуса, оптимальных условий среды обитания для микроорганизмов (П.Н. Смирнов, 1997; Е.С. Воронин, 1998; Е.С. Воронин, А.Г. Шахов, 1999; В.А. Париков с соавт., 2000; В.А. Салимов с соавт., 2003; А.Г. Шахов, 2003). В числе выделяемой условно патогенной микрофлоры ведущее место занимают стафилококки, стрептококки, кишечная палочка, синегнойная палочка, протей, реже другие бактерии и грибы в различных ассоциациях. Замечено, что вышеупомянутые болезни, как правило, имеют массовый характер и этиологическую общность, о чем свидетельствует выделение идентичной микрофлоры при эндометрите и мастите и аналогичной при гнойно-некротических поражениях дистального отдела конечностей у коров (Н.М. Хилькевич с соавт., 1994; И.Н. Зюбин, 1998; П.Н. Никоноров с соавт., 1999; В.И. Слободяник с соавт., 1999; З.Я. Косорлукова с соавт., 2001; Н.И. Петров, П.Г. Захаров, 2002). В связи с недостаточной эффективностью проводимых мероприятий по борьбе с вышеназванными болезнями в настоящее время важная роль отводится фармакотерапевтическим и фармакопрофилактическим средствам. Наблюдения показывают, что результативность проводимого лечения при эндометритах, маститах и гнойно-некротических поражениях дистального отдела конечностей у крупного рогатого скота не достаточно высока. Во многом это связано с широким распространением лекарственно устойчивых штаммов условно патогенной микрофлоры и проведением лечебных мероприятий без учета особенностей этиологии и патогенеза указанных болезней. Все вышеизложенное свидетельствует об актуальности разработки новых, более эффективных и простых в применении лечебных препаратов, не оказывающих отрицательного влияния на организм и обеспечивающих комплексное фармакологическое действие. Ю.Я. Дольников такого рода препараты объединил под общим названием "комбитеры" (1985). Цель и задачи исследований. Цель настоящей работы - разработать комплексные химиотерапевтические препараты, научно обосновать схемы их применения при массовых болезнях, вызываемых у животных условно патогенной микрофлорой (маститы, эндометриты и гнойно-некротические поражения дистального отдела конечностей). При этом в задачи исследований входило: 1. Теоретически и практически обосновать и разработать эффективные комплексные химиотерапевтические препараты с последующей экспериментально-клинической оценкой их фармако-токсикологических свойств и лечебно-профилактической эффективности при маститах, эндометритах и гнойно-некротических поражениях дистального отдела конечностей у коров. 2. Изучить их влияние на клиническое состояние, гематологические показатели и неспецифическую резистентность организма больных животных. 3. Осуществить оценку в производственных условиях лечебной эффективности разработанных препаратов. 4. Разработать на них нормативную документацию и представить ее на утверждение в Ветфармбиосовет Департамента ветеринарии МСХ РФ. Научная новизна.Установлена этиологическая общность массовых болезней, вызываемых у животных условно патогенной микрофлорой, на примере маститов, эндометритов и гнойно-некротических поражений дистального отдела конечностей у крупного рогатого скота и теоретически обоснована необходимость разработки комплексных химиотерапевтических препаратов для их лечения, обеспечивающих этиотропное и патогенетическое действие. С учетом совместимости и синергизма разработано 3 комплексных химиотерапевтических препарата, обладающих высокой эффективностью при маститах, эндометритах и гнойно-некротических поражениях дистального отдела конечностей у коров и способы их применения животным. Разработан способ лечения скрытых и клинических маститов у коров препаратом перкутан (патент № 2223754 от 20.02.2004), препарат некрофарм и способ его применения для лечения гнойно-некротических поражений конечностей у крупного рогатого скота (патент № 2224508 от 27.02.2004), препарат хинасепт-гель и способ его применения для лечения острых послеродовых эндометритов у коров (патент № 2224509 от 27.02.2004). Изучены основные фармако-токсикологические свойства разработанных препаратов, в том числе определены параметры острой и хронической токсичности, изучены аллергенные и сенсибилизирующие свойства, влияние на кожный покров и слизистые оболочки. Установлено, что разработанные препараты относятся к Ш классу опасности по ГОСТ 12.1.007-76, не накапливаются в организме, не имеют аллергенных свойств, не обладают тератогенным и эмбриотоксическим действием. Изучена фармакокинетика разработанных препаратов и сроки выведения их с молоком. Определены сроки браковки молока при лечении животных. Исследовано антимикробное действие разработанных препаратов в отношении референтных штаммов и полевых изолятов условно патогенной микрофлоры, имеющей этиологическое значение при маститах, эндометритах и гнойно-некротических поражениях дистального отдела конечностей у коров. Установлено, что они обладают высокой антимикробной активностью, в составе препаратов отмечен синергизм антимикробного действия АДВ. Изучено влияние разработанных препаратов на клиническое состояние больных животных, морфологические и некоторые биохимические показатели крови и неспецифическую резистентность организма. Предложенные препараты обеспечивают высокий терапевтический и экономический эффект, быстрое выздоровление больных животных, восстановление гематологических показателей и уровня резистентности. Практическая значимость работы. В результате проведенных исследований ветеринарной практике предложены эффективные комплексные химиотерапевтические препараты, обладающие этиотропным и патогенетическим действием и предназначенные для лечения крупного рогатого скота при болезнях, вызываемых условно патогенной микрофлорой - маститах, эндометритах и гнойно-некротических поражениях дистального отдела конечностей. Разработанные препараты обеспечивают высокий лечебный эффект и короткие сроки выздоровления. Они успешно прошли широкие производственные испытания и внедрены в ветеринарную практику. Разработана нормативная документация, регламентирующая технологический процесс производства, показатели качества и методы их контроля, наставления по применению в ветеринарной медицине, которые одобрены Ветфармбиосоветом и утверждены Департаментом ветеринарии МСХ РФ и технические условия, согласованные с Всероссийским государственным научно-исследовательским институтом контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов и кормовых добавок и Департаментом ветеринарии МСХ РФ на следующие препараты: 1. Перкутан ТУ 9336-001-16923913-00 и "Наставление по применению перкутана для лечения маститов", одобрено Ветфармбиосоветом и утверждено Департаментом ветеринарии МСХ РФ 14.06.2000 г. 2. Некрофарм ТУ 9337-005-16923913-02 и "Временное наставление по применению некрофарма для лечения раневых инфекций в области дистального отдела конечностей у крупного рогатого скота", одобрено Ветфармбиосоветом и утверждено Департаментом ветеринарии МСХ РФ 29.01.2002 г. 3. Хинасепт-гель ТУ 9337-015-16923913-04 и "Временное наставление по применению хинасепт-геля для лечения послеродовых эндометритов" находятся на рассмотрении в Департаменте ветеринарии МСХ РФ. Разработаны и утверждены Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ (05.03.2004 г., протокол № 2) и решением подсекции "Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока" отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (05.03.2004 г., протокол № 7) методические рекомендации "Заболевания крупного рогатого скота, вызываемые условно патогенной микрофлорой". Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на: заседаниях Ветфармбиосовета Департамента ветеринарии МСХ РФ (1999, 2001, 2004), Всероссийской конференции "Новые фармакологические средства для животноводства и ветеринарии" (Краснодар, 2001), 5-й Международной конференции "Научное обеспечение АПК Сибири, Монголии, Казахстана, Беларуси и Башкортостана (Абакан, 2002), Международной научной конференции "Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях" (Воронеж, 2002), 1-ом международном ветеринарном конгрессе (Казахстан, Алматы, 2002), Международной научной конференции "Актуальные проблемы ветеринарной медицины и интенсивного животноводства" (Беларусь, Витебск, 2002), Международной конференции "Современные проблемы и достижения аграрной науки в животноводстве и растениеводстве" (Барнаул, 2003), Международной конференции "Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных" (Улан-Удэ, 2003), 6-й Международной конференции "Аграрная наука Сибири, Монголии, Казахстана и Башкортостана сельскому хозяйству" (Павлодар, 2003), ХV Международной конференции "Новые фармакологические средства в ветеринарии" (СанктПетербург, 2003), Международной конференции "Актуальные проблемы ветеринарной медицины и биологии" (Оренбург, 2003), Международной конференции "Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения" (Белгород, 2003), Сибирской международной конференции "Актуальные вопросы ветеринарной медицины" (Новосибирск, 2004), Международной конференции "Современные проблемы эпизоотологии" (Краснообск, 2004), Международной конференции "Актуальные вопросы микробиологии и инфекционной патологии животных" (Омск, 2004), межрегиональных конференциях (Новосибирск, 2000; Барнаул, 2001; Якутск, 2001; Кемерово, 2003), научных конференциях НГАУ (Новосибирск, 1997, 1999, 2001). Публикации.По теме диссертации опубликовано 43 работы в журналах "Ветеринария", "Молочное и мясное скотоводство", "Сибирский вестник сельскохозяйственной науки", материалах Международных, Всероссийских и межрегиональных научных конференций, сборниках научных трудов Новосибирского ГАУ, ИЭВСиДВ СО РАСХН и других научных и научно-производственных изданиях. Структура и объем работы.Диссертация изложена на 305 страницах текста, набранного на компьютере, и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 63 таблицами и 38 рисунками. Список литературы включает 633 наименования, из них 472 отечественных и 161 зарубежных авторов. Основные положения, выносимые на защиту: 1. Этиологическая общность массовых болезней, вызываемых у крупного рогатого скота условно патогенной микрофлорой, на примере маститов, эндометритов и гнойно-некротических поражений дистального отдела конечностей и теоретическое обоснование необходимости разработки комплексных химиотерапевтических препаратов для их терапии. 2. Результаты экспериментальных исследований, характеризующие антимикробные, фармакологические и токсикологические свойства, а также терапевтическую эффективность разработанных препаратов при маститах, эндометритах и гнойно-некротических поражениях дистального отдела конечностей у крупного рогатого скота на примере комплексных химиотерапевтических препаратов (перкутан, некрофарм, хинасепт-гель). 3. Данные экспериментальных исследований по изучению действия разработанных комплексных препаратов на клиническое состояние, морфологические и некоторые биохимические показатели крови и неспецифическую резистентность организма больных животных. 4. Результаты внедрения комплексных химиотерапевтических препаратов для лечения болезней, вызываемых у крупного рогатого скота условно патогенной микрофлорой. 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Комплекс экспериментально-клинических исследований, положенный в основу диссертации, выполнен в 1996-2004 гг. на кафедре хирургии и внутренних незаразных болезней Института ветеринарной медицины Новосибирского государственного аграрного университета, ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН, ЗАО "Росветфарм" и хозяйствах региона Сибири. Часть исследований вошла в планы НИР НГАУ на 2001-2005 гг. по заданию "Изучение и разработка схем применения новых комплексных препаратов для профилактики и лечения массовых факторных инфекционных болезней сельскохозяйственных и мелких домашних животных, вызванных потенциально-патогенной микрофлорой" (№ гос. регистрации 01.200.113908). Для изучения распространения в стадах крупного рогатого скота в Новосибирской области скрытых и клинических маститов, послеродовых эндометритов и болезней дистального отдела конечностей анализировали отчетную ветеринарную документацию и материалы диспансеризации молочного стада. Научно-исследовательская работа включала в себя клинико-экспериментальные изыскания по разработке комплексных химиотерапевтических препаратов, определению их фармако-токсикологических свойств, оценке терапевтической эффективности при маститах, эндометритах и гнойно-некротических поражениях дистального отдела конечностей у коров, оценке влияния разработанных препаратов на клиническое состояние, гематологические показатели и неспецифическую резистентность организма больных животных, а также внедрение их в ветеринарную практику. Состав и свойства разработанных препаратов. Перкутан - комплексный препарат для лечения субклинической и клинической форм маститов у коров. В его состав входят фурацилин, этакридина лактат, органические растворители и вода. Препарат обладает выраженными антимикробным и противовоспалительным свойствами. Перкутан применяли для лечения серозно-катаральных и субклинических маститов у коров. Перкутан наносили на кожу пораженной четверти вымени 2 раза в день с расстояния 10-15 см в течение 2-3 с. Некрофарм - пролонгированный препарат для лечения гнойно-некротических поражений дистального отдела конечностей у крупного рогатого скота. Некрофарм содержит окситетрациклина гидрохлорид в комплексе с хлористым магнием и вспомогательные вещества. АДВ препарата - окситетрациклина гидрохлорид - антибиотик широкого спектра действия, подавляет рост и развитие многих грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов. Препарат создает депо антибиотика в тканях, а комплекс с магнием сводит к минимуму побочные эффекты. Некрофарм вводили в мягкие ткани больной конечностей выше места поражения в дозе 1 мл на 7 кг массы тела. Введение препарата повторяли через 7 сут. Хинасепт-гель - комплексный препарат для профилактики и лечения эндометритов у коров. Он содержит хинозол, водорода пероксид, в качестве вспомогательных веществ - метилцеллюлозу и воду. АДВ хинасепт-геля - хинозол обладает выраженным антимикробным действием в отношении большинства вегетативных форм грампозитивных и грамнегативных микроорганизмов. Вспомогательные вещества усиливают регенеративные процессы в слизистых оболочках, оказывают противовоспалительное и ранозаживляющее действие. Хинасепт-гель применяли с лечебной целью при эндометритах и с профилактической целью после трудных родов и удаления задержавшегося последа у коров. Препарат вводили внутриматочно шприцом Жанэ с резиновой трубкой с лечебной целью в дозе 100 мл 1 раз в день в течение 3-5 дней, с профилактической целью - в дозе 50 мл 1 раз в день на 1-2 сут. после удаления задержавшегося последа. Методика изучения антимикробного действия препаратов. Антимикробную активность препаратов изучали методами диффузии в агар и серийных разведений с использованием в качестве тест-объектов референтных штаммов и полевых изолятов (В.Ф. Ковалев с соавт., 1988). Полевые изоляты микрофлоры выделяли от больных коров и дифференцировали путем высева на элективные среды, изучения морфологических, культуральных и биохимических свойств по общепринятым методикам. Идентификацию проводили по "Определителю бактерий Берджи" (1997). Для определения антимикробной активности перкутана использовали метод диффузии препарата с бумажного диска в МПА. Концентрация контрольных штаммов бактерий 1 млрд. КОЕ по стандарту мутности ГКИ. Результаты учитывали измерением зоны задержки роста на МПА, определением оптической плотности микробной взвеси при помощи КФК-2 и подсчетом колоний бактерий на МПА. Антимикробную активность некрофарма и хинасепт-геля определяли методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде (МПБ). Концентрация суспензии бактерий составляла 1,5х109 КОЕ/мл изотонического раствора натрия хлорида, т.е. 100 млн. КОЕ на 1 пробу. Исследования проводили в лунках иммунологического планшета. Соотношение вносимых компонентов: 0,45 мл МПБ, 0,5 раствора препарата и 0,05 мл суспензии микроорганизмов. Инкубацию проводили в термостате при 37°С в течение 24 ч. Антимикробную активность выражали в виде минимальной бактериостатической концентрации препарата (МБсК). Методика изучения токсичности препаратов. При изучении токсикологических параметров препаратов руководствовались "Методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве" (1988). О токсических свойствах препаратов судили по параметрам острой и хронической токсичности для животных (белые мыши, крысы, коровы, телята). ЛД50 рассчитывали по методу Г.Н. Першина (1950). Сенсибилизирующие и аллергенные свойства препаратов изучали на морских свинках, влияние на слизистые оболочки на кроликах, эмбриотоксическое и тератогенное действие на крысах линии "Вистар". В процессе наблюдения за животными в необходимых случаях клинические исследования сочетали с лабораторными (гематологическими, биохимическими, иммунологическими). Токсикологические параметры препаратов сопоставляли с ГОСТ 12.1.007-76. Для проведения токсикологических исследований использовано 419 белых нелинейных мышей с массой тела 18-22 г, 215 белых нелинейных крыс с массой тела 150-200 г, 70 крыс линии "Вистар" с массой тела 180-220 г, 40 морских свинок с массой тела 400-500 г, 24 кролика породы белый великан с массой тела 2-2,5 кг. Для изучения действия повышенных доз препаратов на сельскохозяйственных животных использовано 22 коровы и 12 телят. Методика изучения действия препаратов на клиническое состояние, гематологические показатели и неспецифическую резистентность организма больных животных. Действие разработанных препаратов на клиническое состояние определяли при скрытых и клинических маститах, послеродовых эндометритах, гнойно-некротических поражениях дистального отдела конечностей у коров. Для клинических экспериментов животных по принципу аналогов подбирали в опытные и контрольные группы. Препараты применяли для терапии больных животных согласно разработанным наставлениям. Для лечения животных контрольных групп применяли ранее предложенные, традиционные лекарственные средства в соответствии с действующими инструкциями и наставлениями. Основными критериями оценки терапевтической эффективности используемых препаратов являлись: 1) при эндометритах у коров исчезновение клинических признаков воспаления матки, улучшение общего состояния, восстановление способности к оплодотворению; 2) при маститах у коров - исчезновение признаков воспаления вымени и изменений в молоке; 3) при гнойно-некротических поражениях дистального отдела конечностей у коров - исчезновение признаков воспаления и хромоты, восстановление функции конечностей. До начала применения препаратов и по окончании наблюдения у животных брали кровь для исследования. Для определения морфологических и биохимических показателей использовали свежую стабилизированную кровь и свежую или однократно замороженную сыворотку крови. Исследования проводили на автоматическом многофункциональном спектроанализаторе "Infrapid61" (Венгрия) близкой инфракрасной области спектра в соответствии с методическими рекомендациями ИЭВСиДВ (2002). Полученные данные обрабатывали при помощи программы-приложения на РС АТ в лаборатории лейкозов ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН. В крови определяли содержание гемоглобина, количество эритроцитов, в сыворотке крови - содержание общего белка, общий кальций, неорганический фосфор, щелочной резерв, бактерицидную и лизоцимную активность сыворотки крови. Количество лейкоцитов определяли в камере Горяева. Показатели фагоцитоза - по П.Н. Никонорову (1979) в модификации П.Н. Смирнова с соавт. (1989). Методика изучения фармакокинетики разработанных препаратов. У коров в разные сроки после введения изучаемых препаратов определяли содержание их АДВ в биологических жидкостях (кровь, моча, молоко) для изучения фармакокинетики и сроков выведения остаточных количеств препаратов с молоком. Фармакокинетические параметры перкутана изучали по АДВ препарата - фурацилину. Для его определения использовали спектрофотометрический метод исследования (С. Димитров с соавт., 1986). Определение фармакокинетических характеристик некрофарма проводили по АДВ - окситетрациклина гидрохлориду. Для его определения в биологических жидкостях организма использовали метод диффузии в агар с применением в качестве тест-культуры Bac. subtilis вариант L2 (В.Ф. Ковалев с соавт., 1988). Определение фармакокинетических характеристик хинасепт-геля осуществляли по его АДВ - хинозолу. Для его определения в биологических жидкостях организма использовали флуориметрический метод исследования (И.А. Девяткина, 1973). Методика определения лечебной эффективности разработанных препаратов в производственных условиях. Производственные испытания лечебной эффективности изучаемых препаратов проведены нами в хозяйствах Новосибирской, Кемеровской и Томской областей. Перкутан апробирован на поголовье 3080 коров со скрытыми и клиническими (серозным и серозно-катаральным) маститами. Подопытных коров лечили перкутаном согласно разработанному нами наставлению, контрольных - в соответствии с "Рекомендациями по борьбе с маститом коров" (МСХ СССР, 1985). Некрофарм апробирован на поголовье 2930 голов крупного рогатого скота с гнойно-некротическими поражениями дистального отдела конечностей. Подопытных животных лечили некрофармом в соответствии с разработанным нами наставлением. Контрольных животных лечили в соответствии с "Правилами по профилактике и ликвидации некробактериоза животных" (МСХ и П РФ, 2000). Хинасепт-гель апробирован на поголовье 1750 коров с осложненными родами и задержанием последа - с профилактической и при послеродовых эндометритах - с лечебной целью. Подопытным коровам применяли хинасепт-гель в соответствии с разработанным нами наставлением, контрольных животных лечили по общерекомендованным схемам. Все полученные цифровые материалы обработаны методами математической статистики, принятыми в биологии и медицине (Г.Ф. Лакин, 1990). Экономическую эффективность применения разработанных препаратов определяли по "Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий", утвержденной Департаментом ветеринарии МСХиП РФ 21.02.97 г. Промышленное производство разработанных препаратов организовано в соответствии с документацией, утвержденной Департаментом ветеринарии МСХ РФ, на базе научно-производственного предприятия "Росветфарм" (п. Краснообск Новосибирской обл.). Автор выражает глубокую признательность и благодарность научному консультанту доктору вет. наук, профессору Н.А. Шкилю, а также руководству ЗАО "Росветфарм" в лице М.Н. Дольниковой и Н.А. Дровосекова и ИВМ НГАУ в лице С.Н. Магера за консультационную, методическую и практическую помощь в проведении исследований. 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Этиологическая общность маститов, эндометритов и гнойно-некротических поражений дистального отдела конечностей у коров и теоретическое обоснование необходимости разработки комплексных препаратов для их терапии Изучение распространения в стадах крупного рогатого скота скрытых и клинических форм маститов, послеродовых эндометритов и гнойно-некротических поражений дистального отдела конечностей проведено нами в Сибирском регионе на примере Новосибирской области. По данным Управления ветеринарии администрации Новосибирской области в 1996-2003 гг. заболеваемость клиническими формами мастита у коров была высокой и колебалась в пределах от 12,3 до 20,1%. Скрытые маститы были выявлены у 32,1-39,2% коров, соотношение скрытых и клинических маститов составило 1,9-2,6:1. По имеющимся данным Удельный вес послеродовых эндометритов в регионе Сибири также очень высок: заболеваемость послеродовыми патологиями у коров в течение всего времени наблюдения составляла от 23,7 до 57,7%. Послеродовые эндометриты отмечали у 16,8-48,1% поголовья, т.е. они составляли от 70,1 до 84,8% от всех послеродовых патологий у коров. На основании анализа документации нами был отмечен высокий уровень болезней конечностей у крупного рогатого скота, в основном, в области дистального отдела - от 15,3 до 23,4%. Таким образом, было установлено, что в регионе Сибири маститы, эндометриты и болезни дистального отдела конечностей являются массовыми патологиями, поражающими значительную часть поголовья крупного рогатого скота. Для изучения этиологической сущности указанных заболеваний нами были проведены бактериологические исследования проб секрета вымени при маститах, слизи цервикально-вагинального канала при послеродовых эндометритах и соскобов на границе поражений при болезнях дистального отдела конечностей у коров. При бактериологических исследованиях проб секрета вымени от коров с клиническим маститом нами было выделено 22 изолята бактерий, отнесенных по результатам исследований к следующим родам: Streptococcus - 10, Staphylococcus - 6, Escherihia - 4, другие микроорганизмы - 2. При исследовании соскобов на границе поражений у коров с гнойно-некротическими поражениями дистального отдела конечностей установлено, что микробный пейзаж характеризуется, в основном, тремя-шестью видами условно-патогенных аэробов и анаэробов. В 90% случаев нами выделены микробы рода Staphylococcus, в 75 - Escherihia, в 70 - Streptococcus и Pseudomonas, в 60 - Proteus, в 50 Micrococcus, в 35% - Clostridium. В 30% проб выявлены патогенные для белых мышей изоляты, представленные стафилококками, стрептококками, протеем. Степень патогенности изолятов была выше в ассоциациях культур. При бактериологических исследованиях проб слизи из цервикально-вагинального канала от коров с послеродовыми эндометритами было выделено 44 изолята бактерий. По результатам исследований мы отнесли их к следующим родам: Escherihia - 13, Staphylococcus 11, Streptococcus - 5, Proteus - 7, Pseudomonas - 6, другие микроорганизмы - 2. В 80% случаев нами были выделены различные ассоциации микробов (Escherihia + Staphylococcus + Proteus, Escherihia + Staphylococcus + Pseudomonas и др.) и лишь в 20% выделили монокультуры. При сравнении микробного пейзажа, выделенного при изучаемых нами болезнях крупного рогатого скота, оказалось, что микрофлора во многом сходна по своему видовому составу (рис. 1-3). Рис. 1. Микрофлора, выделенная от коров при клиническом мастите Рис. 2. Микрофлора, выделенная от коров при послеродовом эндометрите Рис. 3. Микрофлора, выделенная от коров с гнойно-некротическими поражениями дистального отдела конечностей На рис. 1-3 темно-серым цветом отмечена микрофлора, которая была выделена при всех изученных нами массовых болезнях у крупного рогатого скота. Она составляет от 49,5 до 90,9% от всех выделяемых изолятов. Таким образом, прослеживается этиологическая общность изучаемых нами болезней, что позволяет отнести их к одной группе - группе болезней, в этиологии которых участвует условно патогенная микрофлора. Применяемая в настоящее время терапия болезней, вызываемых у животных условно патогенной микрофлорой, с использованием ранее предложенных лекарственных средств не всегда достаточно эффективна. В связи с этим острый воспалительный процесс в матке или вымени переходит в хроническую форму и на этой почве коровы остаются бесплодными (симптоматическое бесплодие), происходит атрофия пораженных долей молочной железы. Гнойно-некротические поражения дистального отдела конечностей способствуют снижению молочной продуктивности. Все это обусловливает преждевременную выбраковку большого количества животных в наиболее продуктивном возрасте и экономический ущерб вследствие недополучения значительного количества животноводческой продукции. Конструирование химиотерапевтических препаратов в настоящее время идет по двум направлениям. Первое из них - синтез новых оригинальных соединений, к которым у микрофлоры отсутствует устойчивость, второе - создание комплексных химиотерапевтических препаратов на основе использования рациональных сочетаний известных субстанций (В.Ф. Ковалев с соавт., 1988; Б.В. Виолин с соавт., 2001). Следует учитывать, что синтез новых оригинальных соединений представляет собой длительный и дорогостоящий процесс. Кроме того, не создано ни одного препарата, к которому у бактерий не возникает резистентности. Использование комбинированной химиотерапии рассчитано на максимально возможный охват потенциальных возбудителей болезни, т.к. каждый компонент активен в отношении определенного представителя микробной ассоциации. Использование явления синергизма позволяет достигать бактерицидного эффекта, т.к. при инфекционном процессе защитные силы организма ослаблены и не могут самостоятельно справиться с микроорганизмами. В результате одновременного использования нескольких препаратов можно уменьшить курсовую дозу каждого из компонентов, входящих в комплекс, что снижает вероятность побочных реакций. Многие болезни сопровождаются тяжелыми функциональными нарушениями в организме животных. Сочетание средств патогенетической терапии с этиотропными способствует сокращению длительности болезни и более быстрому развитию репаративных процессов. Кроме того, использование комплексных препаратов позволяет резко снизить трудозатраты при проведении лечения. Позитивные моменты применения комплексных препаратов в полной мере были использованы профессором Ю.Я. Дольниковым при создании препаратов-комбитеров (комбинированных терапевтиков) серии стартина (Ю.Я. Дольников, 1985, 1988). Препараты этой серии рассчитаны на использование при массовых желудочно-кишечных болезнях телят, в этиологии которых основную роль играет условно патогенная микрофлора. В дальнейшем профессором Ю.Я. Дольниковым и его учениками для лечения болезней, вызываемых у животных условно патогенной микрофлорой, были разработаны комплексные препараты для терапии респираторных болезней у телят (пульмосан), для профилактики послеродовых эндометритов (метромуцин) и др. (Ю.Я. Дольников, В.В. Глушков, 1991; Ю.Я. Дольников, Ю.Г. Попов, 1991). Положительные результаты, полученные при использовании комплексных препаратов для лечения и профилактики массовых болезней, вызываемых у животных условно патогенной микрофлорой (желудочно-кишечные и респираторные болезни молодняка, послеродовые эндометриты), побудили нас продолжить исследования в данном направлении. Результатом этих исследований стала разработка и изучение препаратов перкутан, некрофарм и хинасепт-гель и разработка способов их применения для лечения массовых болезней, вызываемых у крупного рогатого скота условно патогенной микрофлорой (маститы, эндометриты, гнойно-некротические поражения дистального отдела конечностей). 3.2. Изучение препарата перкутан 3.2.1. Антимикробное действие Для изучения антимикробного действия были взяты два образца препарата с различным сроком хранения: образец № 1 - 1 год, образец № 2 - 1 мес. В качестве контрольных были взяты референтные штаммы St. albus, St. aureus АТСС 25923 (F-49), Strept. pyogenes 1972 гр. А, E. coli АТСС 25922 (F-50), E. coli 078 производственный контрольный, Salmonella dublin. Перкутан явился эффективным антимикробным средством по отношению к референтной микрофлоре. Зоны задержки роста у образца № 1 составили от 17,5 до 21 мм, антимикробная активность 65-80%, у образца № 2 от 17 до 20 мм, антимикробная активность 60-70%. На следующем этапе были использованы полевые изоляты микрофлоры от коров с клиническими маститами. Установлено, что перкутан обладает высокой антимикробной активностью по отношению ко всем основным представителям микрофлоры, участвующей в этиологии маститов у коров. Зоны задержки роста составили у образца № 1 от 18 до 22 мм, антимикробная активность 60-75%, у образца № 2 от 17 до 21 мм, антимикробная активность 60-70%. Длительный срок хранения (1 год) не оказывал влияния на антимикробную активность препарата. 3.2.2. Токсичность для лабораторных животных В экспериментах мы определили токсикологические параметры перкутана (мг/кг массы тела): для мышей при введении в желудок МПД - 60; LD100 - 360, расчетная LD50 - 198; для белых крыс - МПД - 60; LD100 - 360, расчетная LD50 - 216. Следовательно, в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76, перкутан относится к препаратам III класса опасности. В опыте на белых мышах нами установлено, что перкутан обладает умеренной хронической токсичностью. Проведенные нами экспериментальные исследования на морских свинках дают основание утверждать, что препарат не обладает аллергенным и сенсибилизирующим действием и не раздражает кожный покров. В экспериментах на половозрелых самках крыс линии "Вистар" с нормальным эстральным циклом нами были изучены тератогенное и эмбриотоксическое действие перкутана. О влиянии препарата на эмбриогенез судили по следующим показателям: число живых плодов, величина общей, предимплантационной и постимплантационной эмбриональной смертности, масса и краниокаудальный размер плода, масса и диаметр плаценты, соотношение плодов по полу, наличие внешних пороков развития. Отмечено, что показатели опытной группы не имели достоверных различий с показателями контрольной, т.е. перкутан не обладает эмбриотоксическим и тератогенным действием. Установленные токсикологические параметры перкутана позволили классифицировать его как малотоксичный для лабораторных животных и перейти к изучению переносимости его крупным рогатым скотом. 3.2.3. Действие на организм крупного рогатого скота В опыте на 10 коровах, которым перкутан наносили на кожу вымени в дозе 6 мл (3-кратная терапевтическая) 2 раза в день в течение 4 дней, установлено, что препарат, не вызывал отклонений в клиническом состоянии, не оказывал влияния на молочную продуктивность. У подопытных животных морфологические показатели крови незначительно снижались на 5 день опыта - количество эритроцитов с 6,75 до 6,33*1012/л, лейкоцитов с 7,34 до 6,98*109/л. Отмечали изменения биохимических показателей крови - содержание гемоглобина снизилось со 105,0 до 101,3 г/л, общего белка с 76,7 до 75,6 г/л, общего кальция с 2,78 до 2,70 ммоль/л, неорганического фосфора с 1,87 до 1,74, щелочного резерва с 12,70 до 12,28 ммоль/л. Иммунологические показатели (ЛАСК, БАСК) претерпевали незначительные изменения. В целом в конце опыта показатели крови у подопытных животных не имели достоверных различий с контрольными. 3.2.4. Разработка оптимальных схем применения перкутана С целью разработки оптимальной схемы применения перкутана для лечения субклинических маститов у коров нами проведены опыты в хозяйствах Маслянинского района Новосибирской области. В опыт взято 405 коров, у которых диагностирован субклинический мастит по результатам мастидиновой пробы, подтвержденной пробой отстаивания. Коровам опытных групп перкутан наносили на кожу пораженной доли вымени с расстояния 10-15 см в течение 2-3 с 2 раза в день. Изучали эффективность 2- и 3-дневного курсов лечения. Контрольных животных лечили по рекомендациям МСХ СССР (1985). Им применяли интрацистернально мастицид в дозе 10 мл 2 раза в день в течение 4 дней. Наблюдение за коровами осуществляли в течение 10 дней. Результаты представлены в табл. 1. Из представленных в табл. 1 данных видно, что 2-дневный курс лечения перкутаном является оптимальным и обеспечивает выздоровление в течение 2,0±0,5 дней 99,2% больных животных. 3-дневный курс лечения экономически нецелесообразен, т.к. приводит к перерасходу препарата без увеличения эффективности. В контрольной группе выздоровление наступило в 90,0% случаев в течение 4,3±0,5 дней. Таблица 1 - Лечебная эффективность перкутана при субклинических маститах С целью разработки оптимальной схемы применения перкутана для лечения серозных маститов у коров нами проведены опыты в хозяйствах Маслянинского района Новосибирской области. В опыт взято 250 коров, у которых был диагностирован серозный мастит по результатам клинического исследования и пробы отстаивания. Коровам опытных групп перкутан наносили на кожу пораженных долей вымени в течение 2-3 с 2 раза в день. Изучали эффективность 3- и 4-дневного курсов лечения. Контрольным животным применяли интрацистернально мастицид в дозе 10 мл 2 раза в день в течение 5 дней и блокаду по Логвинову в первые два дня лечения. Наблюдение за коровами осуществляли в течение 10 дней. Результаты представлены в табл. 2. Установлено, что 3-дневный курс лечения серозного мастита у коров недостаточно эффективен (выздоровело 93,3%). Оптимальным является 4-дневный курс лечения перкутаном, который обеспечивал выздоровление 97,5% больных животных в течение 4,6±0,4 дней. В контрольной группе выздоровело 87,5% больных в течение 6,4±0,5 дней. Мы считаем, что лечение маститов у коров перкутаном наиболее эффективно в субклинической стадии (выздоравливало 99,2% животных за 2,0±0,5 дня). Лечение клинических маститов (серозных) нужно проводить в течение 4 дней, что обеспечивает эффект 97,5%. Перкутан сокращает сроки выздоровления коров на 1,8-2,1 дня по сравнению с общепринятым лечением. 3.2.5. Влияниие перкутана на клиническое состояние и гематологические показатели коров при серозном мастите. Исследования проведены на 20 коровах с серозным маститом. Животных разделили по принципу аналогов на 2 группы по 10 голов опытную и контрольную. Коровам опытной группы перкутан наносили на кожу пораженных долей вымени в течение 2-3 с 2 раза в день в течение 4 дней. Контрольным животным интрацистернально вводили мастицид по 10 мл 2 раза в день в течение 5 дней и применяли блокаду по Логвинову в первые два дня лечения. Отмечено, что животные при применении перкутана менее реагировали на лечебные манипуляции, выздоравливали быстрее клинические признаки мастита исчезали на 4,5±0,3, удой восстанавливался на 6,2±0,7 день. В контрольной группе животные выздоравливали медленнее - клинические признаки мастита исчезали на 6,5±0,6 день, удой восстанавливался на 9,0±1,0 день. Таблица 2 - Лечебная эффективность перкутана при серозных маститах у коров Установлено, что при серозном мастите у коров происходит снижение количества эритроцитов на 6,8%, гемоглобина на 9,1, увеличение количества лейкоцитов на 68,7%. В крови больных увеличивается содержание общего белка на 14,2%, общего кальция на 15,3, неорганического фосфора на 6,9, на 18,7% снижается щелочной резерв (табл. 3). При лечении перкутаном к 10-му дню большинство показателей крови у коров не имели достоверных различий с показателями здоровых животных (10 гол.), содержащихся в аналогичных условиях, за исключением количества лейкоцитов (Р 0,01). Это указывает на выздоровление больных при лечении перкутаном в более короткие сроки, в сравнении с контрольным лечением (мастицид + блокада по Логвинову). 3.2.6. Влияниие перкутана на естественную резистентность организма коров Исследования проведены на 18 коровах. По принципу аналогов сформировали 3 группы по 6 коров. В первую и вторую группы включили коров с серозным маститом. Коровам 1-й опытной группы перкутан наносили на кожу пораженных долей вымени в течение 23 с 2 раза в день в течение 4 дней. Животным 2-й опытной группы интрацистернально вводили мастицид по 10 мл 2 раза в день 5 дней и применяли блокаду по Логвинову в первые два дня лечения. Животные третьей группы были клинически здоровы и служили контролем. Таблица 3 - Показатели крови у коров при лечении перкутаном Примечание: в числителе - показатели опытной, в знаменателе - контрольной группы коров; * - различие с показателями здоровых животных достоверно (Р<0,05); ** - различие достоверно (Р<0,01); *** - различие достоверно (Р<0,001). При серозном мастите у коров мы отмечали снижение бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови на 29,7 и 94,1% соответственно, фракций альбуминов и бета-глобулинов на 17,8 и 37,9 соответственно, повышение содержания альфа- и гаммаглобулинов на 34,1 и 21,3% соответственно. Клеточный иммунитет характеризовался снижением фагоцитарной активности нейтрофилов на 30,8 и их поглотительной способности на 46,7% (табл. 4). При лечении перкутаном по рекомендованной нами терапевтической схеме к 10-му дню с начала лечения показатели неспецифической резистентности организма у коров не имели достоверных различий с показателями здоровых животных, содержащихся в аналогичных условиях, т.е. в этот срок происходило восстановление уровня резистентности как в гуморальном, так и в клеточном его звеньях. Таблица 4 - Показатели резистентности организма коров в процессе лечения Примечание: в числителе показатели до лечения, в знаменателе - на 10 день с начала лечения; * - различие с контролем (здоровыми животными) достоверно (Р<0,05); ** - различие с контролем достоверно (Р<0,01). 3.2.7. Фармакокинетика перкутана и сроки выделения его с молоком Установлено, что перкутан быстро всасывается в организм через кожу молочной железы. Наблюдается и быстрое его выведение из организма. При однократном применении через 6 ч в крови обнаруживали 3,41, в моче - 6,23 мкг/мл фурацилина, через 12 ч его содержание в крови уменьшилось в 2,26 раза (до 1,02 мкг/мл), а в моче - в 2,6 раза (до 2,42 мкг/мл). Через 24 ч фурацилин в крови и моче не обнаружен. Увеличение числа обработок не приводило к накоплению фурацилина в организме. Концентрации фурацилина в крови и моче животных через 6 и 12 ч после последней обработки существенно не отличались от полученных при однократном применении препарата. Независимо от кратности обработок перкутан не обнаруживали в крови и моче животных через 24 ч после последнего его применения. При однократной обработке препарат выводился из молочной железы в течение 36 ч. Увеличение числа обработок приводило к накоплению фурацилина в молочной железе. При трехкратной обработке в первые 6 ч после последнего применения препарата наблюдали увеличение концентрации фурацилина в секрете молочной железы в 1,73, а при пятикратной в 2,54 раза, по сравнению с однократной обработкой. Соответственно, замедлялось его выведение. При четырех-пятикратной обработке концентрация фурацилина в секрете молочной железы через 24 ч после последней обработки составляла 12,05-13,81 мкг/мл, а полностью препарат выводился из тканей молочной железы через 60 ч. Это определяет сроки браковки молока. 3.2.8. Лечебная эффективность перкутана при субклинических маститах Изучение лечебной эффективности перкутана в производственных условиях проведено в 1998-2000 гг. в хозяйствах 4-х районов Новосибирской области. Животным опытной группы перкутан наносили на кожу пораженных долей вымени с расстояния 10-15 см в течение 2-3 с 2 раза в день в течение 1-2 дней. Животных контрольной группы лечили в соответствии с "Рекомендациями по борьбе с маститом коров" (МСХ СССР, 1985). Результаты опытов представлены в табл. 5. Установлено, что лечебный эффект при применении перкутана (99,0%) выше эффекта при контрольном лечении (91,5%) на 7,5%, сроки выздоровления коров (1,5 0,5 дней) короче, чем при контрольном лечении (3,9 1,1 дней) в 2,6 раза. Способ применения перкутана технологичнее, чем обычно используемое введение препаратов в сосок вымени. Таблица 5 - Лечебная эффективность перкутана при субклинических маститах Таблица 6 - Лечебная эффективность перкутана при серозных маститах 3.2.9. Лечебная эффективность перкутана при серозных маститах у коров. Изучение лечебной эффективности перкутана при серозных маститах в производственных условиях проведено в 1998-2000 гг. в хозяйствах 4-х районов Новосибирской, 2-х - Кемеровской и 1 районе Томской области. Животным опытных групп применяли перкутан на кожу пораженных долей вымени с расстояния 10-15 см в течение 2-3 с 2 раза в день в течение 3-4 дней. Животным контрольных групп применяли мастицид, мастисан или солвоветин интрацистернально в рекомендованных дозах. Результаты опытов представлены в табл. 6. Установлено, что лечебный эффект при применении перкутана (96,9%) выше эффекта контрольного лечения (85,7%) на 10,2%, сроки выздоровления коров (3,5 0,6 дней) короче, чем при контрольном лечении (6,1 1,3 дня) в 1,7 раза. Затраты на лечение 1 коровы перкутаном составляют 16,51 руб., контрольным препаратом мастицид - 87,65 руб.. Экономическая эффективность применения перкутана на 1 руб. затрат равна 12,1, мастицида 2,28 руб. 3.3. Изучение препарата некрофарм 3.3.1. Антимикробное действие препарата Антимикробную активность препарата исследовали методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде (МПБ) в сравнении с его АДВ - окситетрациклина гидрохлоридом. Первоначально в качестве контрольных были взяты референтные штаммы E. coli P-987, E. coli ATCC 25922, P. aeruginosae ATCC 9027, S. aureus ATCC 25923, B. subtilis THP-3, Salm. dublin. Установлено, что МБсК некрофарма в ряде случаев ниже, чем его АДВ. Так, в отношении Escherihia coli P-987 и Escherihia coli ATCC 25922 МБсК окситетрациклина гидрохлорида составила 1,95 и 7,81 мкг/мл соответственно, а некрофарма - 0,975 и 3,9 мкг/мл, т.е. была в 2 раза ниже. В отношении Staphylococcus aureus ATCC 25923 МБсК окситетрациклина гидрохлорида составила 3,9, а некрофарма - 1,95 мкг/мл, т.е. также была в 2 раза ниже. Затем в качестве контрольных использовали полевые изоляты микрофлоры от коров с гнойно-некротическими поражениями дистального отдела конечностей. Установлено, что наибольшую резистентность к некрофарму и его АДВ окситетрациклину проявляли изоляты родов Escherihia и Proteus, для которых МБсК окситетрациклина составила через 24 ч инкубации 31,25 и 250 мкг/мл соответственно, а через 48 ч - 62,5 и 500 мкг/мл. МБсК некрофарма через 24 и 48 ч инкубации была равна 31,25 и 250 мкг/мл соответственно. МБсК некрофарма в большинстве случаев ниже, чем его АДВ. Так для рода Streptococcus МБсК окситетрациклина гидрохлорида составила через 24 ч инкубации 3,9, а через 48 ч - 7,81 мкг/мл, в то время как для некрофарма МБсК через 24 ч инкубации равнялась 1,95, а через 48 ч - 3,9 мкг/мл. Еще более показательны данные, полученные в отношении рода Micrococcus. Для этого рода МБсК окситетрациклина гидрохлорида составила через 24 ч инкубации 15,625, а через 48 ч - 31,25 мкг/мл, в то время как для некрофарма МБсК через 24 ч инкубации равнялась 3,9, а через 48 ч - 7,81 мкг/мл. Полученные данные указывают на синергизм антимикробного действия АДВ в составе некрофарма. Известно, что в этиологии гнойно-некротических поражений дистального отдела конечностей у крупного рогатого скота определенную роль играет возбудитель некробактериоза - Fusobacterium necroforum. В связи с этим, нами в качестве тест-микроба был использован производственный штамм Fusobacterium necroforum, предоставленный лабораторией некробактериоза ИЭВСиДВ. В качестве питательных сред использовали среду Китт-Тароцци и аминокровино-сывороточный бульон. Применяли 10-кратные серийные разведения некрофарма. Препарат проявлял антимикробную активность в отношении полевого штамма возбудителя при разведении в 10 тыс. раз, что позволяет рекомендовать его для терапии болезней дистального отдела конечностей у коров, вызванных Fusobacterium necroforum. 3.3.2. Токсичность некрофарма для лабораторных животных В экспериментах мы определили токсикологические параметры некрофарма (мг/кг массы тела): для мышей при введении в желудок МПД - 300; ЛД100 - 600; расчетная ЛД50 - 425, для крыс - МПД - 300; ЛД100 - 700; расчетная ЛД50 - 466,7. Следовательно, некрофарм относится к препаратам III класса опасности. На белых мышах, которым некрофарм вводили подкожно, установлено, что токсические дозы, превышают терапевтическую в 17 раз. При изучении хронической токсичности некрофарма для белых мышей было установлено, что препарат обладает умеренной хронической токсичностью. В экспериментах на морских свинках определено, что некрофарм обладает слабым аллергенным действием и оказывает незначительное влияние на капиллярную проницаемость кожи. В опытах с использованием половозрелых самцов и самок крыс линии "Вистар" мы изучали эмбриотоксическое и тератогенное действие некрофарма при однократном внутримышечном введении 3-х кратной терапевтической дозы на 11, 12, 13 и 14-й дни беременности. Проведенные исследования эмбрионального материала и оценка состояния интегральных и специфических показателей постнатального развития крысят от самок, получавших некрофарм, не выявило достоверных различий с показателями контрольных животных, не получавших препарат. Определенные нами токсикологические параметры некрофарма позволили классифицировать его как умеренно токсичный для лабораторных животных и перейти к изучению переносимости его крупным рогатым скотом. 3.3.3. Токсичность некрофарма для крупного рогатого скота Токсичность некрофарма изучили на 12 телятах 3-месячного возраста, которым препарат вводили внутримышечно 1 раз в день 6 дней в дозах: 1-й группе - 10 (терапевтическая); 2-й - 30 (3-х кратная терапевтическая); 3-й - 50 мг/кг (5-ти кратная терапевтическая). Применение некрофарма в указанных дозах не сопровождалось отклонениями в общем физиологическом состоянии, не влияло на прирост живой массы. Гематологические показатели подопытных животных не имели достоверных различий с показателями контрольных. Таким образом, некрофарм не токсичен для телят при применении в дозах, превышающих терапевтическую в 3-5 раз. 3.3.4. Действие некрофарма на клиническое состояние и гематологические показатели коров с гнойно-некротическими поражениями дистального отдела конечностей Действие некрофарма изучено на 20 коровах. Коровам опытной группы вводили некрофарм по разработанной нами схеме. Животным контрольной группы применяли левотетрасульфин в дозе 0,2 мл/кг трехкратно с интервалом 4 дня. Животные опытной группы выздоравливали быстрее: гнойно-некротический экссудат исчезал на 4,0 1,0 сут., заживление происходило на 10,0 2,0 сут.. Животные контрольной группы выздоравливали медленнее: гнойно-некротический экссудат исчезал на 7,0 1,5 сут., заживление происходило на 14,0 3,0 сут. В результате проведенных исследований нами установлено, что у коров с гнойно-некротическими поражениями дистального отдела конечностей происходит снижение количества эритроцитов на 18%, увеличение количества лейкоцитов на 53,7%. Наблюдается снижение в крови содержания гемоглобина на 12,2%, общего белка на 12, неорганического фосфора на 31,8, щелочного резерва на 16,2%, нарушение соотношения кальция и фосфора (табл. 7). В ходе выздоровления основные морфологические и биохимические показатели крови у коров восстанавливались до физиологических норм и не имели достоверных различий со здоровыми животными, содержащимися в аналогичных условиях, к 20-му дню с начала лечения, причем в опытной группе были выше, чем в контрольной. 3.3.5. Действие некрофарма на естественную резистентность организма коров с гнойнонекротическими поражениями дистального отдела конечностей Действие некрофарма на естественную резистентность организма животных с гнойно-некротическими поражениями дистального отдела конечностей изучено на 18 коровах. По принципу аналогов сформировали 3 группы по 6 коров. В 1-ю и 2-ю группы включили коров с гнойно-некротическими поражениями дистального отдела конечностей. Коровам 1-й группы вводили некрофарм в мягкие ткани конечностей выше области поражения в дозе 1 мл на 7 кг массы тела 2 раза с интервалом 7 дней. Коровам второй группы применяли левотетрасульфин в дозе 0,2 мл на 1 кг массы тела трехкратно с интервалом 4 дня. Животные третьей группы были клинически здоровы и служили контролем. Таблица 7 - Показатели крови у коров с гнойно-некротическими поражениями дистального отдела конечностей Примечание: в числителе - показатели опытной, в знаменателе - контрольной группы коров * - различие с показателями здоровых животных достоверно (Р 0,05); ** - различие достоверно (Р 0,01); *** - различие достоверно (Р 0,001). В ходе изучения неспецифической резистентности организма коров с гнойно-некротическими поражениями дистального отдела конечностей было установлено, что у них наблюдается снижение бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови на 30,8 и 28,8% соответственно, содержания альбуминов на 14,5, повышение гамма-глобулинов на 17,3 и фагоцитарной активности нейтрофилов на 5,3% (табл. 8). При лечении некрофармом по рекомендованной нами схеме показатели неспецифической резистентности организма коров не имели достоверных различий с показателями здоровых животных, содержащихся в аналогичных условиях, на 20-е сут. с начала лечения, т.е. у них в эти сроки происходила нормализация гуморальных и клеточных факторов резистентности. 3.3.6. Изучение фармакокинетики некрофарма В опыт было взято 6 телок массой 350-370 кг. Некрофарм ввели подопытным животным внутримышечно однократно в дозе 1 мл на 7 кг массы тела. Для изучения фармакокинетики препарата у животных брали кровь из яремной вены по 20 мл на 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10 сут. после введения препарата. Содержание некрофарма в сыворотке крови оценивали по окситетрациклину, концентрацию которого определяли методом диффузии в агар с использованием в качестве тест-культуры Bac. subtilis вариант L2 (В.Ф. Ковалев с соавт., 1988). Таблица 8 - Показатели резистентности у коров при лечении некрофармом Примечание: в числителе показатели до лечения, в знаменателе - на 20 день с начала лечения; * - различие с контролем достоверно (Р<0,05); ** - различие с контролем достоверно (Р<0,01). Терапевтическая концентрация окситетрациклина в сыворотке крови у телок (1,0 мкг/мл) сохранялась в течение 7 сут. На 8-е сут. она опускалась ниже, до 0,33 0,05 мкг/мл, что не обеспечивает бактериостатический эффект. На 10-е сут. окситетрациклина в сыворотке крови не обнаружено. Проведенные исследования позволяют сделать заключение, что для поддержания терапевтической (бактериостатической) концентрации в сыворотке крови некрофарм следует вводить в дозе 1 мл на 7 кг массы тела с интервалом 7 дней. Таблица 9 - Лечебная эффективность некрофарма в производственных условиях 3.3.7. Изучение сроков выведения некрофарма с молоком В опыт было взято 6 коров массой 450-480 кг с суточным удоем 18-20 кг. Некрофарм ввели животным внутримышечно однократно в дозе 1 мл на 7 кг массы тела. У подопытных животных 1 раз в день в течение 5-ти дней после введения препарата брали пробы молока в количестве 20 мл. Остаточные количества препарата определяли методом диффузии в агар. Тест-микробом служила культура Bac. subtilis вариант L2. Концентрации некрофарма, задерживающие рост тест-микроба, сохранялись в молоке в течение 4 сут., т.е. в течение этого срока молоко от леченых животных нельзя употреблять в пищу. 3.3.8. Лечебная эффективность некрофарма в производственных условиях Производственные испытания лечебной эффективности некрофарма при гнойно-некротических поражениях дистального отдела конечностей у крупного рогатого скота проведены в 1999-2003 гг. на базе хозяйств 6-ти районов Новосибирской и 2-х районов Кемеровской области. Подопытных животных лечили некрофармом, который вводили в мягкие ткани больной конечностей выше области поражения в дозе 1 мл на 7 кг массы тела. При необходимости введение повторяли через 7 дней. Контрольных животных лечили в соответствии с "Правилами по профилактике и ликвидации некробактериоза животных", утвержденными Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ (2000). Им применяли левотетрасульфин в дозе 0,2 мл/кг трижды с интервалом 4 дня. В течение 30 дней с начала лечения учитывали количество выздоровевших животных и сроки их выздоровления. Результаты производственных опытов представлены в табл.9. Изучение лечебной эффективности некрофарма при гнойно-некротических поражениях дистального отдела конечностей у крупного рогатого скота в производственных условиях показало, что терапевтический эффект при его применении (91,4%) был выше, чем эффект лечения контрольных животных (74,3%) на 17,1%. Сроки выздоровления животных при лечении некрофармом (9,3 1,2 сут.) в 1,33 раза короче, чем при лечении контрольных (12,3 1,3 сут.). Затраты на лечение 1 коровы препаратом некрофарм составили 36,6 руб., контрольным препаратом левотетрасульфин - 82,8 руб. Экономическая эффективность применения некрофарма равна 7,04 руб. на 1 руб. затрат. 3.4. Изучение препарата хинасепт-гель 3.4.1. Антимикробное действие препарата Для исследования были взяты образцы хинасепт-геля и его АДВ - хинозола. На первом этапе использовали референтные штаммы микроорганизмов: St. albus ATCC 6538 P, St. aureus ATCC 25923 (F-49), Strept. pyogenes 1972 гр. А, E. coli ATCC 25922 (F-50), Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Proteus vulgaris. На втором - полевые изоляты, выделенные из цервикально-вагинального канала коров с эндометритом. Хинасепт-гель и его АДВ проявляли высокую антимикробную активность в отношении референтных штаммов микроорганизмов, участвующих в этиологии вагинитов и эндометритов у коров. Наиболее чувствительными были штаммы Streptococcus pyogenes 1972 гр. А и Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, для которых МБсК хинасепт-геля составила 0,00195 и 0,0078 мг/мл, а его АДВ - 0,00195 и 0,015 мг/мл соответственно. Высокую устойчивость к препарату и его АДВ проявил Proteus vulgaris (МБсК - 0,25 мг/мл). В отношении полевых изолятов микрофлоры, участвующей в этиологии эндометритов у коров, хинасепт-гель и его АДВ - хинозол также показали высокую антимикробную активность. Наиболее чувствительными были штаммы Streptococcus pyogenes и Pseudomonas aeruginosa, для которых МБсК хинасепт-геля составила 0,0039 и 0,0015, а его АДВ - 0,0078 и 0,03 мг/мл соответственно. Высокую устойчивость к препарату и его АДВ проявил St. albus (МБсК - 0,125 мг/мл). Отмечено, что хинасепт-гель оказывал бактериостатическое действие в меньших концентрациях (МБсК), чем его АДВ. Это указывает на синергизм антимикробного действия АДВ в препарате. 3.4.2. Изучение токсичности хинасепт-геля для лабораторных животных В экспериментах мы определили токсикологические параметры хинасепт-геля (мг/кг массы тела): для мышей при введении в желудок МПД - 1200, ЛД100 - 2200, расчетная ЛД50 - 1700, для крыс - МПД - 1200, ЛД100 - 2200, расчетная ЛД50 - 1633,4. По результатам исследований сделано заключение, что хинасепт-гель относится к препаратам III класса опасности. В экспериментах на белых мышах была изучена хроническая токсичность хинасепт-геля. Установлено, что препарат обладает умеренной хронической токсичностью и не накапливается в организме. Методом эпикутанных аппликаций мы установили, что хинасепт-гель не обладает аллергенным и сенсибилизирующим действием и не раздражает кожный покров. На кроликах, которым препарат наносили на конъюнктиву глаза, установлено, что хинасепт-гель не оказывает раздражающего действия на слизистые оболочки. В опытах с использованием половозрелых самцов и самок крыс линии "Вистар" нами проведены исследования эмбриотоксического и тератогенного действия препарата. Изучение эмбрионального материала и оценка состояния интегральных и специфических показателей постнатального развития крысят от самок, получавших хинасепт-гель в дозе 50 мг/кг на 11, 12, 13 и 14-й дни беременности не выявило каких-либо достоверных различий с показателями контрольных. Таким образом, хинасепт-гель не обладает эмбриотоксическим и тератогенным действием. Изучение мутагенного действия хинасепт-геля показало, что введение его внутрь в дозе 15 мг/кг самцам белых крыс на различных стадиях спермиогенеза не вызывает достоверных наследственных изменений в половых клетках родительских особей и не приводит к гибели потомков первого поколения в период эмбрионального развития. Определенные нами токсикологические параметры хинасепт-геля позволили классифицировать его как малотоксичный для лабораторных животных и перейти к исследованиям на крупном рогатом скоте. 3.4.3. Влияние хинасепт-геля на слизистую оболочку влагалища коров В опытах использовано 12 клинически здоровых коров, прошедших гинекологическое обследование. Хинасепт-гель вводили интравагинально в терапевтической и трехкратной терапевтической дозах 1 раз в день в течение 5 дней. За животными вели наблюдение в период введения препарата и последующие 10 дней. Проводили исследования слизистой оболочки влагалища, используя гинекологическое зеркало с осветителем. Измеряли рН вагинально-цервикальной слизи, используя универсальную индикаторную бумагу. Перед введением препарата и по окончании опыта исследовали цельную кровь и сыворотку. Установлено, что введение препарата в терапевтической и трехкратной терапевтической дозах в течение 5 дней не сопровождалось изменениями в клиническом состоянии подопытных коров. При исследовании слизистых оболочек преддверия влагалища и влагалища подопытных и контрольных животных не выявлено никаких видимых изменений: в период наблюдения слизистые оболочки были умеренно влажные, гладкие, блестящие, покрытые небольшим количеством прозрачной слизи. Влагалищная часть шейки матки имела розеткообразную форму, цервикальный канал закрыт. Показатель рН вагинально-цервикальной слизи у подопытных и контрольных животных колебался в пределах 6,6-7,6, изменяясь незначительно в период наблюдений. Показатели крови у подопытных коров по окончании опыта не имели достоверных различий с показателями контрольных животных. Таким образом, препарат не оказывает негативного действия на организм и раздражающего на слизистую оболочку влагалища при превышении вводимой дозы в 3 раза. 3.4.4. Влияние хинасепт-геля на гематологические показатели и естественную резистентность организма коров с послеродовыми эндометритами Для исследований сформировали 2 группы по 6 коров. В опытной группе - коровы с послеродовым гнойно-катаральным эндометритом, в контрольной - с нормальным течением родов и послеродового периода. Коровам опытной группы вводили хинасепт-гель в дозе 100 мл внутриматочно 1 раз в день в течение 4-х дней. Контрольным животным препарат не вводили. Таблица 10 - Гематологические показатели у коров в процессе лечения Примечание: в числителе показатели больных коров, в знаменателе - здоровых. * - различие с контролем достоверно (Р<0,05); ** - различие с контролем достоверно (Р<0,01). Из данных, приведенных в табл. 10 видно, что гематологические показатели коров опытной и контрольной групп находились в пределах границ физиологических норм, хотя имели достоверные различия у больных эндометритами и здоровых животных (количество лейкоцитов и альфа- глобулины (Р 0,05), щелочной резерв, общий белок, альбумины, и гамма-глобулины (Р 0,01). По мере выздоровления к 15-му дню указанные различия с контролем исчезали. Таблица 11 - Естественная резистентность у коров в процессе лечения Примечание: в числителе показатели больных коров, в знаменателе - здоровых. * - различие с контролем достоверно (Р 0,05); ** - различие с контролем достоверно (Р 0,01). Нами установлено (табл. 11), что у животных, больных эндометритом, показатели гуморального иммунитета резко снижались (БАСК на 22,4, ЛАСК на 27,4%), причем достоверные различия с показателями здоровых животных сохранялись на 5-й день. К 15-му дню показатели БАСК и ЛАСК не имели достоверных различий с показателями здоровых животных. Фагоцитарная активность нейтрофилов (ФАН) у коров с гнойно-катаральным эндометритом снижалась на 11,9%, не имея однако достоверных различий с показателями здоровых животных. К 15-му дню показатель ФАН превысил таковой у здоровых (контрольных) коров. 3.4.6. Изучение фармакокинетики хинасепт-геля Определение концентрации препарата в крови в динамике проведены на 6 коровах, которым хинасепт-гель ввели внутриматочно однократно в дозе 100 мл. Для анализа у животных брали кровь до введения хинасепт-геля и затем через 2, 4, 6, 12, 24 ч после введения препарата. Содержание хинасепт-геля в плазме крови оценивали по концентрации в ней хинозола (АДВ препарата) флуориметрическим методом на электронном флуориметре (И.А. Девяткина, 1973). Установлено, что при внутриматочном введении хинозол практически не всасывается. Следовательно, действие препарата ограничивается местом введения, т.е. мясо и молоко от животных, которых лечили хинасепт-гелем, можно использовать без ограничений. 3.4.7. Изучение профилактической и терапевтической эффективности хинасепт-геля при эндометритах у коров в производственных условиях Производственные испытания профилактической и терапевтической эффективности хинасепт-геля провели на базе хозяйств 5-ти районов Новосибирской области в 2001-2003 гг. Для проведения исследований использовали коров с осложненными родами и задержанием последа. Коровам опытных групп применяли хинасепт-гель внутриматочно по разработанной нами схеме - с профилактической целью в дозе 50 мл 1 раз в день в течение 2-3 дней, с лечебной целью при развитии послеродового эндометрита в дозе 100 мл 1 раз в день в течение 3-5 дней. Коровам контрольных групп применяли внутриматочно свечи с фуразолидоном, неомицином или ихтиолом (2-3 штуки) и вводили внутримышечно окситоцин по 40-60 ЕД 1-2 раза в день в течение 3-5 дней. Результаты производственных испытаний представлены в табл. 12. Из данных, представленных в табл. 12 видно, что применение хинасепт-геля обеспечивало высокий профилактический эффект (85,4%) в группах риска, т.е. у коров с осложненными родами и задержанием последа. Терапевтическое применение хинасепт-геля обеспечило выздоровление 96,5% больных с послеродовыми эндометритами, в то время как контрольное лечение дало эффект лишь в 77,5% случаев. Применение препарата сокращало сервис-период у переболевших животных с 66,5 5,5 до 46,3 3,4 дней, т.е. в среднем на 20 дней, обеспечивало высокую степень оплодотворения в первую и вторую охоту (87,4% в опыте и 74,3% в контроле). Таблица 12. Профилактическая и лечебная хинасепт-геля Затраты на лечение 1 коровы хинасепт-гелем составили 38 руб., применение контрольной схемы - 42 руб. Экономическая эффективность на 1 руб. затрат равна при лечении хинасепт-гелем 3,55, при контрольном лечении - 1,6 руб. Комплексные химиотерапевтические препараты перкутан, некрофарм и хинасепт-гель являются высокоэффективными средствами лечения болезней, вызываемых у крупного рогатого скота условно патогенной микрофлорой. Указанные препараты выпускаются ЗАО "Росветфарм" (п. Краснообск, Новосибирской области), ими ежегодно обрабатываются от 20 до 30 тысяч голов крупного рогатого скота в регионе Сибири. ВЫВОДЫ 1. Болезни, вызываемые условно патогенной микрофлорой, имеют широкое распространение и охватывают значительное поголовье крупного рогатого скота. Ежегодно клинические формы мастита выявляют у 12,3-20,1%, скрытые - у 32,1-39,2% коров, соотношение скрытых и клинических маститов составляет 1,9-2,6:1. Послеродовые эндометриты охватывают от 16,8 до 48,1%, болезни конечностей в области дистального отдела - от 15,3 до 23,4% поголовья. 2. Установлена этиологическая общность маститов, эндометритов и гнойно-некротических поражений дистального отдела конечностей у коров. В их возникновении существенную роль играет условно патогенная микрофлора, представленная стафилококками, стрептококками, кишечной палочкой, которые выделяют в 49,5-90,9% случаев. 3. Теоретически обоснована необходимость создания комплексных химиотерапевтических препаратов, обеспечивающих широкий спектр и синергизм антимикробного действия, а также патогенетический эффект при болезнях животных, в этиологии которых участвует условно патогенная микрофлора. 4. Для терапии болезней, вызываемых у животных условно патогенной микрофлорой, разработаны комплексные химиотерапевтические препараты и способы их применения животным: - перкутан (АДВ - фурацилин и этакридина лактат) для лечения скрытых и клинических маститов у коров; - некрофарм (АДВ - окситетрациклина гидрохлорид) для терапии гнойно-некротических поражений дистального отдела конечностей; - хинасепт-гель (АДВ - хинозол) для профилактики и лечения послеродовых эндометритов у коров. 5. Перкутан обладает широким спектром антимикробного действия в отношении грамположительной и грамотрицательной микрофлоры, имеющей этиологическое значение при скрытых и клинических формах маститов у коров. Препарат умеренно токсичен ( ЛД50 для белых мышей -198, для крыс - 216 мг/кг), не оказывает аллергенного и сенсибилизирующего действия, не раздражает кожный покров, не обладает эмбриотоксическими и тератогенными свойствами. 6. Перкутан обеспечивает терапевтическую эффективность 96,9% при серозных и серозно-катаральных и 99,0% при субклинических маститах при нанесении на кожу пораженных долей вымени с расстояния 10-15 см в течение 2-3 с 2 раза в день при субклинических маститах в течение 1-2, серозных и серозно-катаральных - 3-4 дней. При традиционном лечении выздоравливало соответственно 85,7 и 91,5%. Перкутан сокращает сроки выздоровления животных при субклиническом мастите с 3,9 1,1 до 1,5 0,5 дней, т. е. 2,6 раза, при клиническом - с 6,1 1,3 до 3,5 0,6 дней, т.е. в 1,7 раза. 7. При серозном мастите в крови коров происходит снижение количества эритроцитов на 6,8%, гемоглобина на 9,1, щелочного резерва на 18,7, возрастает количество лейкоцитов на 68,7, содержание общего белка на 14,2, общего кальция на 15,3, неорганического фосфора на 6,9,%. В крови больных наблюдается снижение бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови на 29,7 и 94,1% соответственно, фагоцитарной активности нейтрофилов на 30,8, альбуминов и бета-глобулинов на 17,8 и 37,9 соответственно, повышение содержания альфа- и гамма-глобулинов на 34,1 и 21,3% соответственно. При лечении перкутаном к 10-му дню гематологические показатели и неспецифическая резистентность не имеют достоверных различий с показателями здоровых животных. 8. Некрофарм имеет широкий спектр антимикробного действия в отношении условно патогенной микрофлоры, участвующей в этиологии гнойно-некротических поражений дистального отдела конечностей у крупного рогатого скота, в том числе в отношении возбудителя некробактериоза. Некрофарм умеренно токсичен ( ЛД50 для белых мышей - 425, для крыс - 466,7 мг/кг), обладает слабыми аллергенными свойствами, не оказывает тератогенного и эмбриотоксического действия. Препарат не токсичен для крупного рогатого скота в дозах, превышающих терапевтическую в 3-5 раз. 9. Применение некрофарма при гнойно-некротических поражениях дистального отдела конечностей у крупного рогатого скота в дозе 1 мл на 7 кг массы тела двукратно с интервалом 7 дней обеспечивает терапевтическую эффективность 91,4%, тогда как при лечении контрольных групп - 74,3%. Некрофарм сокращает сроки выздоровления животных с 12,3 1,3 до 9,3 1,2 дней, т.е. в 1,33 раза. 10. У коров с гнойно-некротическими поражениями дистального отдела конечностей происходит снижение в крови количества эритроцитов на 18%, гемоглобина на 12,2, общего белка на 12, неорганического фосфора на 31,8, щелочного резерва на 16,2, увеличение количества лейкоцитов на 53,7%, нарушение соотношения кальция и фосфора. Бактерицидная и лизоцимная активность сыворотки крови снижаются на 30,8 и 28,8% соответственно, фагоцитарная активность нейтрофилов на 5,3, фракция альбуминов на 14,5, происходит повышение гамма-глобулинов на 17,3%. При лечении некрофармом к 20-му дню гематологические показатели и неспецифическая резистентность не имеют достоверных различий с показателями здоровых животных. 11. Хинасепт-гель обладает широким спектром антимикробного действия в отношении грамположительной и грамотрицательной микрофлоры, имеющей этиологическое значение при послеродовых эндометритах у коров. Препарат мало токсичен ( ЛД50 для белых мышей - 1700, для крыс - 1633,4 мг/кг), не оказывает аллергенного и сенсибилизирующего действия, не раздражает кожу и слизистые оболочки, не обладает тератогенными, эмбриотоксическими и мутагенными свойствами. Препарат не оказывает токсического действия на организм и раздражающего на слизистую оболочку влагалища коров при превышении лечебной дозы в 3 раза. 12. Хинасепт-гель, используемый для профилактики послеродовых осложнений у коров связанных с тяжелыми родами и оперативным отделением последа внутриматочно в дозе 50 мл 1-2 раза, обеспечивает профилактику эндометритов в 85,2% случаев. Терапевтическая эффективность хинасепт-геля при применении в дозе 100 мл 1 раз в день в течение 3-4 дней при послеродовых гнойно-катаральных эндометритах у коров составляет 96,4%. Традиционная схема лечения обеспечивает эффект 75,8%. Применение хинасепт-геля сокращает сервис-период с 66,5 5,5 до 46,3 3,4 дней, т.е. на 20 дней и обеспечивает высокую степень оплодотворения в первую и вторую охоту (88,2%). 13. При послеродовых эндометритах гематологические показатели у коров имеют достоверные различия с показателями здоровых животных (количество лейкоцитов и альфа-глобулины (Р 0,05), щелочной резерв, общий белок, альбумины, и гамма-глобулины (Р 0,01). У больных животных снижаются показатели резистентности: бактерицидная и лизоцимная активность сыворотки крови на 22,4 и 27,4% соответственно, фагоцитарная активность нейтрофилов на 11,9%. При лечении хинасепт-гелем к 15-му дню показатели резистентности не имеют достоверных различий с показателями здоровых животных. 14. Применение новых химиотерапевтических препаратов перкутан, некрофарм и хинасепт-гель экономически выгодно. Затраты на курс лечения 1 животного перкутаном составляют 16,51 руб., некрофармом - 36,6; хинасепт-гелем - 38 руб. Экономическая эффективность на 1 руб. затрат равна при лечении перкутаном 12,1 руб., некрофармом - 7,04, хинасепт-гелем - 3,55 руб. ПРЕДЛОЖЕНИЯ 1. При серозном, катаральном и субклиническом мастите у коров применять перкутан путем нанесения на кожу пораженной четверти вымени 2 раза в день с расстояния 10-15 см в течение 2-3 с. Курс лечения при субклинической форме заболевания 1-2 дня, при серозном и серозно-катаральном мастите - 3-4 дня. Наставление по применению перкутана для лечения маститов утверждено Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ (№ 13-5-2/2052 от 14 июня 2000 г.). 2. При гнойно-некротических поражениях дистального отдела конечностей у крупного рогатого скота использовать препарат некрофарм путем введения в мягкие ткани больной конечностей выше места поражения в дозе 1 мл на 7 кг массы тела. При необходимости введение препарата повторить через 7 сут. Временное наставление по применению некрофарма для лечения раневых инфекций в области дистального отдела конечностей у крупного рогатого скота утверждено Департаментом ветеринарии МСХ РФ (№ 134-03/0319 от 29 января 2002 г.). 3. Для профилактики послеродовых эндометритов у коров с осложненными родами применять препарат хинасепт-гель внутриматочно в дозе 50 мл 1-2 раза. При возникновении послеродовых эндометритов вводить препарат в дозе 100 мл 1 раз в день 3-4 дня. Временное наставление по применению хинасепт-геля при послеродовых эндометритах у коров находится на рассмотрении в Департаменте ветеринарии МСХ РФ. 4. При разработке мероприятий по профилактике и лечению болезней, вызванных у крупного рогатого скота условно патогенной микрофлорой, руководствоваться методическими рекомендациями "Заболевания крупного рогатого скота, вызываемые условно патогенной микрофлорой", утвержденными подсекцией "Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока" отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 7 от 5 марта 2004 г.). СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Комплексная терапия послеродовых эндометритов у коров/ Соавт.: З.Г. Шелюгина, Л.В. Смирнова// Анализ современных аграрных проблем: Тез. докл. науч.-практ. конф. ученых НГАУ и Гумбольд. ун-та (г. Берлин)/ Новосиб. гос. аграр. ун-т. - Новосибирск, 1995. - С. 47-48. 2. Комплексная терапия послеродовых эндометритов у коров// Актуальные проблемы ветеринарии: Мат. междунар. конф. - Барнаул, 1995. - С. 186-187. 3. Новое в лечении скрытых и клинических маститов у коров/ Соавт. Н.А. Дровосеков// Проблемы экологии в программах профессионального образования: Мат. межрегион. науч.-практ. конф. - Новосибирск, 2000. - С. 53-55. 4. Изучение фармакокинетических параметров препарата перкутан/ Соавт.: Л.В. Смирнова, В.А. Бидюкова// Практик. - 2000. - № 12. С. 20-24. 5. Перкутан в лечении маститов у коров/ Соавт. М.Н. Шадрина// Практик. - 2001. - № 3. - С. 18-20. 6. Терапия скрытых и клинических маститов у коров/ Соавт.: Н.А. Шкиль, Н.А. Дровосеков// Новые фармакологические средства для животноводства и ветеринарии: Мат. юбилей. конф. - Краснодар, 2001. - Т. 2. - С. 106-108. 7. Новое в лечении гнойно-некротических поражений конечностей у крупного рогатого скота// Сиб. вестник с.-х. науки. - 2001. - № 1- 2. - С. 81-84. 8. Результаты производственного испытания эффективности препарата "Перкутан" при маститах коров/ Соавт. О.В. Распутина// Актуальные вопросы ветеринарии: Мат. науч.-практ. конф. НГАУ. - Новосибирск, 2001. - С. 101-102. 9. Эффективность некрофарма при гнойно-некротических поражениях дистального отдела конечностей у крупного рогатого скота// Актуальные проблемы диагностики, профилактики и терапии болезней животных в современных экологических условиях: Мат. межрегион. науч.-практ. конф. - Барнаул, 2001. - С. 110-113. 10. Этиология послеродовых эндометритов у коров в Новосибирской области// Актуальные проблемы диагностики, профилактики и терапии болезней животных в современных экологических условиях: Мат. межрегион. науч.-практ. конф. - Барнаул, 2001. - С. 168-170. 11. Новые эффективные препараты для животных// Соавт.: М.Н. Дольникова, О.В. Распутина// Практик. - 2001. - № 12. - С. 32-36. 12. Токсикологическая характеристика препарата некрофарм/ Соавт. В.И. Шайкин// Научное обеспечение АПК Сибири, Монголии, Казахстана, Беларуси и Башкортостана: Мат. 5-й междунар. науч.-практ. конф. - Новосибирск, 2002. - С. 457-459. 13. Токсикологическая характеристика препарата перкутан/ Соавт. В.И. Шайкин// Сиб. вестник с.-х. науки. - 2002. - № 1-2. - С. 100103. 14. Проблемы воспроизводства крупного рогатого скота// Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: Мат. междунар. науч.-практ. конф. - Воронеж, 2002. - С. 497-498. 15. Перкутан для лечения маститов у коров/ Соавт. Н.А. Шкиль// Молочное и мясное скотоводство. - 2002. - № 7. - С. 28-29 16. Иммунологические и экологические аспекты болезней крупного рогатого скота// Ученые записки ВГАВМ: Сб. Междунар. науч. конф. - Витебск, 2002. - Т. 38. - ч. 1. - С. 101-102. 17. Влияние препарата перкутан на естественную резистентность организма коров с субклиническим маститом/ Соавт. Ю.В. Итэсь// Роль сельскохозяйственной науки в стабилизации и развитии агропромышленного производства Крайнего Севера: Сб. мат. науч.-практ. конф./ РАСХН. Сиб. отд-ние. Якут. НИИСХ. - Новосибирск, 2002. - С. 325-328. 18. Влияние хинасепт-геля на микрофлору матки коров при послеродовых эндометритах// Роль сельскохозяйственной науки в стабилизации и развитии агропромышленного производства Крайнего Севера: Сб. мат. науч.-практ. конф./ РАСХН. Сиб. отд-ние. Якут. НИИСХ. - Новосибирск, 2002. - С. 320-323. 19. Естественная резистентность организма коров, больных маститом, при лечении перкутаном// Мат. 1-го междунар. ветеринар. конгр. - Алматы, 2002. - С. 44-46. 20. Лечение раневых инфекций дистального отдела конечностей крупного рогатого скота// Современные проблемы и достижения аграрной науки в животноводстве и растениеводстве: Юбилей. междунар. науч.-практ. конф. Сб. статей. Часть 3. - Барнаул: Изд-во АГАУ, 2003. - С. 124-129. 21. Препарат некрофарм для лечения болезней конечностей у скота/ Соавт. Н.А. Шкиль// Молочное и мясное скотоводство. - 2003. - № 3. - С. 34-35. 22. Применение некрофарма при ранах в области дистального отдела конечностей// Ветеринария. - 2003. - № 4. - С. 40-42. 23. Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия некрофарма/ Соавт. В.И. Шайкин// Новые фармакологические средства в ветеринарии: Мат. междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 300-летию Санкт-Петербурга. - СПб., 2003. - С. 33. 24. Действие хинасепт-геля на микрофлору матки при послеродовых эндометритах у коров// Новые фармакологические средства в ветеринарии: Мат. междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 300-летию Санкт-Петербурга. - СПб., 2003. - С. 32. 25. Изучение влияния хинасепт-геля на гематологические и иммунологические показатели у коров/ Соавт. Ю.В. Итэсь// Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных: Мат. международ. науч. конф. - Улан-Удэ: Изд-во БГСХА, 2003. - Ч. 1. - С. 7980. 26. Токсикологическая характеристика препарата хинасепт-гель/ Соавт. Н.А. Шкиль// Аграрная наука Сибири, Монголии, Казахстана и Башкортостана - сельскому хозяйству: Тр. 6-й междунар. науч.-практ. конф. - Новосибирск, 2003. - С. 135-137. 27. Некоторые аспекты проблемы болезней крупного рогатого скота// Повышение устойчивости и эффективности агропромышленного производства в Сибири: наука, техника, практика: Сб. мат. межрегион. науч.-практ. конф. - Кемерово, 2003. - С. 127-128. 28. Профилактическая и лечебная эффективность хинасепт-геля при эндометритах у коров// Актуальные проблемы ветеринарной медицины и биологии: Мат. междунар. науч. -практ. конф. - Оренбург: Оренбургская губерния, 2003. - С. 121-123. 29. Новое в лечении маститов у коров// Сиб. вестник с.-х. науки. - 2003. - № 4. - С. 92-96. 30. Неспецифическая резистентность и картина крови при некоторых патологических состояниях у скота// Актуальные вопросы ветеринарной медицины: Мат. Сибир. междунар. науч.-практ. конф. - Новосибирск: НГАУ, 2004. - С. 60-62. 31. Новый противомаститный препарат перкутан/ Соавт. Н.А. Шкиль// Ветеринария. - 2004. - № 2. - С. 36-38, 32. Хинасепт-гель для лечения эндометритов у коров// Молочное и мясное скотоводство. - 2004. - № 2. - С. 29 33. Заболевания крупного рогатого скота, вызываемые условно патогенной микрофлорой: Метод. рекомендации/ Соавт.: Н.А. Шкиль, Н.А. Дровосеков/ РАСХН, Сиб. отд-ние, ИЭВСиДВ, НГАУ, ЗАО "Росветфарм". - Новосибирск, 2004. - 71 с. 34. Заболевания скота, вызываемые условно патогенной микрофлорой// Практик. - 2004. - № 7-8. - С. 74-76. 35. Этиопатогенетическая роль условно патогенной микрофлоры при массовых болезнях скота// Современные проблемы эпизоотологии: Мат. междунар. науч. конф. - Новосибирск, 2004. - С. 204-207. 36. Изменения неспецифической резистентности и картины крови при некоторых патологических состояниях// Современные проблемы эпизоотологии: Мат. междунар. науч. конф. - Новосибирск, 2004. - С. 207-209. 37. Проблема заболеваний крупного рогатого скота, вызываемых условно патогенной микрофлорой/ Соавт. Н.А. Шкиль// Современные проблемы эпизоотологии: Мат. междунар. науч. конф. - Новосибирск, 2004. - С. 322-325. 38. Гнойно-воспалительные заболевания дистального отдела конечностей у крупного рогатого скота// Сельскохозяйственная наука АПК Сибири, Монголии, Казахстана и Кыргызстана/ Тр. 7-й Междунар. науч.-практ. конф. - Новосибирск, 2004. - С. 361-368. 39. Значение условно патогенной микрофлоры при массовых болезнях крупного рогатого скота// Актуальные вопросы микробиологии и инфекционной патологии животных: Мат. науч.-произв. конф., посвящ. 100-летию проф. Н.Г. Кондюрина - Омск, 2004. - С. 127-129. 40. Проблема заболеваний крупного рогатого скота, вызываемых условно патогенной микрофлорой// Актуальные проблемы эпизоотологии на современном этапе: Мат. Междунар. науч.-произв. конф. - СПб., 2004. - С. 103-104. 41. Пат. 2223754 Российская Федерация. Способ лечения скрытых (субклинических) и клинических маститов у коров/ Попов Ю.Г., Дольникова М.Н., Дровосеков Н.А. - заявл. 11.05.01; опубл. 20.02.04, Бюл. № 5. 42. Пат. 2224508 Российская Федерация. Препарат для лечения гнойно-некротических поражений конечностей у крупного рогатого скота и способ его применения/ Попов Ю.Г., Дольникова М.Н., Дровосеков Н.А. и др. - заявл. 07.08.01; опубл. 27.02.04, Бюл. № 6. 43. Пат. 2224509 Российская Федерация. Препарат для лечения острых послеродовых эндометритов у коров и способ его применения/ Попов Ю.Г., Дольникова М.Н., Дровосеков Н.А. и др. - заявл. 07.08.01; опубл. 27.02.04, Бюл. № 6.
