Определение антибиотиков тетрациклиновой группы в

ЖИДКОСТНЫЙ
ХРОМАТОГРАФ
ЛЮМАХРОМ®
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИБИОТИКОВ ТЕТРАЦИКЛИНОВОЙ ГРУППЫ В
ПРОДУКТАХ ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ
Методика М 04-76-2012
ВВЕДЕНИЕ
Тетрациклины представляют собой группу антибиотиков широкого спектра антибактериального
действия. Их часто используются в животноводстве для лечения различных заболеваний животных,
кроме того, тетрациклины являются стимуляторами роста.
При нарушении режима профилактики и лечения животных, а также в результате несоблюдения
времени выдержки перед забоем, остатки препаратов тетрациклиновой группы могут попадать в
пищевые продукты животного происхождения. Потребление человеком таких продуктов может
спровоцировать у него дисбактериоз, вторичные грибковые инфекции, проявления аллергического
характера, снижает сопротивляемость организма и повышает устойчивость патогенных
микроорганизмов к антибиотикам. Выраженные побочные явления, характерные для препаратов
тетрациклиновой группы, привели к необходимости контроля их остаточного количества в
продовольственном сырье и пищевых продуктах.
Для решения этой задачи Группа компаний «ЛЮМЭКС» разработала методику «Продукты
животного происхождения. Методика измерений содержания антибиотиков тетрациклиновой
группы методом ВЭЖХ со спектрофотометрическим детектированием с использованием
жидкостного хроматографа “ЛЮМАХРОМ®”».
МЕТОД ИЗМЕРЕНИЙ
Сущность метода заключается в экстракции тетрациклиновых антибиотиков (окситетрациклина,
тетрациклина, хлортетрациклина, доксициклина) из образца экстракционным буферным раствором;
очистке и концентрировании полученного экстракта с использованием картриджа для твердофазной
экстракции и последующей идентификации и определении содержания этих антибиотиков методом
обращенно-фазовой ВЭЖХ с использованием жидкостного хроматографа «ЛЮМАХРОМ®» со
спектрофотометрическим детектором при длине волны детектирования 350 нм.
Ориентировочное время подготовки пробы – 2 часа.
Время хроматографического анализа – 30 минут.
ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ
Диапазон измеряемых массовых долей окситетрациклина, тетрациклина, хлортетрациклина при
массе анализируемой навески пробы 10 г составляет 0,01–5 мг/кг, а доксициклина – 0,02–10 мг/кг.
Согласно CанПиН 2.3.2.1078-01 с учетом СанПиН 2.3.2.2804-10, содержание окситетрациклина,
тетрациклина, хлортетрациклина в продуктах животного происхождения не допускается (менее 0,01
мг/кг). Допустимый уровень содержания доксициклина варьируется от 0,1 до 0,6 в зависимости от
наименования продукта.
ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАКТИВЫ ДЛЯ АНАЛИЗА
При выполнении измерений применяются следующие оборудование и реактивы:
• жидкостный хроматограф «ЛЮМАХРОМ®» со спектрофотометрическим детектором;
• хроматографическая колонка с предколонкой, заполненные обращенно-фазовым сорбентом,
например, «Кромасил® С18»;
• картриджи для твердофазной экстракции «Oasis® HLB 6cc (500 mg) LP», производства
компании «Waters»;
• устройство для перемешивания проб;
• лабораторная центрифуга (не менее 4000 об/мин);
• лабораторный вакуумный насос (мембранный или водоструйный);
• устройство для удаления растворителя;
• устройство для измельчения пробы;
ЖИДКОСТНЫЙ
ХРОМАТОГРАФ
ЛЮМАХРОМ®
• тетрациклина гидрохлорид, содержание основного вещества не менее 95%;
• окситетрациклина гидрохлорид, содержание основного вещества не менее 95%;
• хлортетрациклина гидрохлорид, содержание основного вещества не менее 95%;
• доксициклина гиклат, содержание основного вещества не менее 95%;
• аммоний щавелевокислый 1-водный, х.ч.;
• Трилон Б, х.ч.;
• кислота трифторуксусная, имп;
• кислота лимонная, 1-водная, ос.ч. (х.ч.);
• натрий фосфорнокислый двузамещенный, 2-водный, ч.д.а.;
• ацетонитрил для жидкостной хроматографии, ос.ч.;
• метиловый спирт, или карбинол, х.ч.
Сбор, обработку и вывод данных осуществляют с помощью персонального компьютера с ОС не ниже
«Windows® 2000/XP», на котором установлена соответствующая программа сбора и обработки данных.
ПРИМЕРЫ АНАЛИЗА
1.5 mAU
Проба: яйцо с добавкой доксициклина
1
Найдено: 1 – доксициклин (0,034 мг/кг)
Элюент: смесь ацетонитрил – раствор
оксалата аммония (20:80)
0
2
4
6
10 12 14 16 18 20 22 24 26 мин
8
7 mAU
1
Проба: мясо курицы
Найдено: 1 – окситетрациклин (0,011 мг/кг)
Элюент: смесь ацетонитрил – раствор
оксалата аммония (15:85)
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
мин
УСЛОВИЯ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО АНАЛИЗА
Колонка: «Кромасил® С18» (150х2,1 мм, 5 мкм)
Элюент: состав зависит от определяемого компонента, 200 мкл/мин
Объем дозируемой пробы: 50 мкл
Детектирование: спектрофотометрическое (350 нм)
Вся информация в данной листовке является справочной. По вопросу получения более подробной информации следует
обращаться к разработчику методики – Группе компаний «ЛЮМЭКС».
Центральный офис «ЛЮМЭКС»: 192029, г. Санкт-Петербург, пр. Обуховской обороны, д. 70, корп. 2.
Тел. (812) 718-53-90 Факс: (812) 718-68-65 E-mail: [email protected]
Почтовый адрес: 190000, г. Санкт-Петербург, BOX 1234