ХОЛЕСТЕРИН ОБЩИЙ

www.olvex-d.ru
|
+7 (812) 412-5185, 412-8380, 412-6546
ХОЛЕСТЕРИН ОБЩИЙ
Кат.№: 013.001 – 100 мл
Кат.№: 013.111 – 200 мл
Кат.№: 013.011 – 250 мл
Кат.№: 013.021 – 500 мл
Кат.№: 013.031 – 1000 мл
Набор реагентов для определения концентрации
общего холестерина в сыворотке и плазме крови
энзиматическим колориметрическим методом. Реакция
Триндера, CHOD-PAP.
Согласно стандартной процедуре анализа набор рассчитан на 100/200/250/500/1000 определений.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Холестерин из состава эфиров высвобождается под
действием фермента холестеринэстеразы (ХЭ). При
участии фермента холестериноксидазы (ХО) холестерин
окисляется до 4-холестен-3-она. Образующаяся перекись водорода, при участии фермента пероксидазы,
способствует окислительному азосочетанию 4-аминоантипирина (4-ААП) и фенола с образованием окрашенного соединения (хинониминовый краситель).
Интенсивность окраски реакционной среды пропорциональна содержанию холестерина в исследуемом
материале и определяется фотометрически при длине
волны 500 (490-520) нм.
СХЕМА РЕАКЦИИ
Количество определений зависит
от характеристик используемого анализатора
и минимального рабочего объема кюветы.
ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
КОМПОНЕНТЫ
РЕАКЦИОННОЙ СРЕДЫ
Рабочий реагент, мл
1.0
1.0
Сыворотка (плазма), мкл
10
-
1.0
-
Калибратор, мкл
-
10
-
Вода дистилл., мкл
-
-
10
Реакционную смесь тщательно перемешайте и инкубируйте не менее 15 минут при комнатной температуре
(18-25°С) или 10 минут при температуре 37°С. После
окончания инкубации измерьте оптическую плотность
опытной и калибровочной проб против контрольной
(холостой) пробы при длине волны 500 нм (490 – 540
нм). Окраска растворов стабильна не менее 1 часа после
окончания инкубации при хранении проб в защищенном
от света месте при комнатной температуре.
АВТОМАТИЧЕСКИЕ АНАЛИЗАТОРЫ
Длина волны
500 нм
Измерение против
Контрольной пробы
ХЭ
жирные
Эфиры холестерина + Н2О _______> холестерин + кислоты
Метод измерения
Конечная точка
Изменение оптической плотности
Возрастает
ХО
Холестерин + О2 ______> 4-холестен-3-он + Н2О2
Температура
37°С
Соотношение образец/реагент
1:100
Время преинкубации
3 секунд
пероксидаза
2Н2О2 + 4-ААП + фенол ________> хинониминовый + 4Н2О
краситель
ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ
Сыворотка, гепаринизированная или ЭДТА-плазма
крови без следов гемолиза. Проба стабильна 7 дней при
температуре 2-8°С.
СОСТАВ НАБОРА
Монореагент.
Калибратор – раствор холестерина 5,17 ммоль/л.
ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ К ПРОЦЕДУРЕ АНАЛИЗА
И ИХ СТАБИЛЬНОСТЬ
Монореагент готов к применению. После вскрытия
флакона монореагент стабилен не менее 6 месяцев при
температуре 2-8°С в защищенном от света месте.
Бледно-розовая окраска монореагента с величиной
оптической плотности до 0,200 А, измеренной против
дистиллированной воды при длине волны 500 нм, не
влияет на правильность определения холестерина в
исследуемом образце.
Время реакции
600 секунд
Предел абсорбции контрольной пробы
0.20 А
Предел максимальной абсобрции
2.00 А
Калибратор
5.17 ммоль/л
Линейность
0.5-25.8 ммоль/л
РАСЧЕТ
Расчет концентрации холестерина проведите
формуле:
Е пробы
С = ________________ х 5,17 ммоль/л
Е калибр.
Калибратор готов к применению. После вскрытия флакона калибратор стабилен не менее 6 месяцев при
температуре 2-8°С.
Невскрытые реагенты стабильны не менее 18 месяцев
при температуре 2-8°С, монореагент в защищенном
от света месте. Дата изготовления, серия и номер по
каталогу указаны на упаковке.
Тщательно закрывайте флаконы с реагентами после
каждого использования!
по
где: Е пробы – оптическая плотность исследуемой пробы,
Е калибр. – оптическая плотность калибровочной пробы,
5,17 ммоль/л – концентрация холестерина в калибраторе.
НОРМАЛЬНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ
Нормальные значения содержания общего холестерина
зависят от возраста, пола, характера питания.*
ДЕТИ И ПОДРОСТКИ
(12-18 ЛЕТ)
НОРМА
71
ОПЫТНАЯ КАЛИБРОВОЧН. КОНТРОЛЬНАЯ
ПРОБА
ПРОБА
ПРОБА
ГРУППА РИСКА
ПАТАЛОГИЯ
ВЗРОСЛЫЕ
< 4.39 ммоль/л
< 5.15 ммоль/л
4.40-5.17 ммоль/л
5.16-6.19 ммоль/л
> 5.18 ммоль/л
> 6.20 ммоль/л
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
Линейность – 0,5-25,8 ммоль/л.
Коэффициент вариации – не более 5%.
ЛИТЕРАТУРА
Trinder P., Ann. clin. Biochem., 1969, vol. 6, p. 24.
*Fishbach F., Dunning M. A manual of laboratory diagnostic
tests. 7th ed. Lippincott Williams & Wilkins, 2004.1291p.