БИО-ЛА-ТЕСТ Раствор 2 Растворите содержимое флакона с реагентом 2 (стандартный раствор) деонизованной водой в соотношении 1+9. Раствор 2 содержит Fe2+ 20 мкмоль/л. Стабильность: 1 месяц в полиэтиленовой посуде при (+2-+8)0С. ЖЕЛЕЗО ПСТ (FE 100 PST) Кат. №: 10003169 Хранить при (+2 - +25)0С Набор для приготовления 100 мл рабочего раствора для определения железа в сыворотке крови. Данный набор может быть использован также для определения общей связывающей способности сыворотки – см. рабочую инструкцию БЛТ Общая связывающая способность. Принцип метода Реактив, содержащий динатриевую соль 3-(2-пиридил)-5,6-бис (4-сульфо-фенил)-1,2,4-триазина, образует с ионами Fe2+ комплекс фиолетового цвета. Интенсивность образующегося окрашивания пропорциональна концентрации железа в пробе. Литература Ceriotti, F., Ceriotti, G.: Clin. Chem. 26, 327 (1980) Stooky, L.L.: Anal. Chem. 42, 779 (1970) Ruuto, R.: Clin. Chem. Acta 61, 229 (1975) Реактивы Хромоген динатриевая соль 3-(2пиридил)-5,6-бис (4-сульфофенил)-1,2,4-триазина (ПСТ) Тиомочевина Кислота L-аскорбиновая Стандартный раствор Fe2+ Состав реакционной смеси ПСТ Тиомочевина Кислота L-аскорбиновая Соотношение сыворотка/реакционная смесь (2 флакона) 0,077 ммоль/фл 0,792 ммоль/фл 5,72 ммоль/фл (1,2 мл) 200 мкмоль/л 1,15 ммоль/л 11,90 ммоль/л 85,80 ммоль/л 1/4 Нормальные величины (мкмоль/л) Сыворотка: Мужчины 10,6 – 28,3 Женщины 6,6 – 26,0 Приведенный диапазон является ориентировочным. Рекомендуется каждой лаборатории вычислять свои диапазоны нормальных величин. Калибровка и контроль качества Для калибровки рекомендуется: Био-ЛА-Тест® ЛИОНОРМ КАЛИБРАТОР, Кат. номер 10003200 или стандарт, который входит в состав набора. Для контроля рекомендуется: Био-ЛА-Тест® ЛИОНОРМ ГУМ Н, Кат. номер 10003204 Био-ЛА-Тест® ЛИОНОРМ ГУМ П, Кат. номер 10003206 Вспомогательный раствор (не входит в состав набора) Раствор кислоты хлористоводородной 0,08 моль/л. Приготавливают растворением 0,7 мл хлористоводородной кислоты в 100 мл деонизованной воды. Приготовление растворов Раствор 1 Содержимое флакона с реактивом 1 растворяют в хлористоводородной кислоте в мерной колбе вместимостью 50 мл. Стабильность: 1 месяц при (+2 - +8)0С в темном месте. Проведение анализа Образцы: Негемолизированная сыворотка Длина волны (540-570) нм Кювета 1 см Температура (+15 - +25)0С В трех пробирках смешивают раствор 1 в соотношении 3+1 с сывороткой (проба), раствором 2 (стандарт) или деонизованной водой (контрольный раствор 1) – например, 1,5 мл раствора 1 и 0,5 мл сыворотки, раствора 2 или деонизованной воды. В другой пробирке смешивают раствор хлористоводородной кислоты в соотношении 3+1 с сывороткой (контрольный раствор 2) – например, 1,5 мл раствора хлористоводородной кислоты и 0,5 мл сыворотки. Инкубируют 15 мин и измеряют оптическую плотность пробы (А1), стандарта (А2), контрольного раствора 1 (А3) и контрольного раствора 2 (А4) против деонизованной воды. Отмерить (мл) Проба Стандарт Контр. Контр. раствор раствор 1 2 Раствор 1 1,5 1,5 1,5 --Сыворотка 0,5 ----0,5 0,5 ----Раствор 2 ------0,5 --Деонизов. вода Кислота --------хлористоводородная Смешать, инкубировать 15 мин и измерить оптическую плотность пробы (А1), стандарта (А2), контрольного раствора 1 (А3) и контрольного раствора 2 (А4) против дионизованной воды. Расчет Железо (мкмоль/л) = 20 х А1 − ( А3 + А 4) А2 − А3 Примечание Определение должно проводиться в совершенно чистой посуде, предназначенной исключительно для анализа железа, с использованием бидистиллированной или деонизованной воды. Рекомендуется мыть лабораторную посуду в 20% -ной HCl или хромпике (оставлять в них посуду на ночь), потом тщательно промыть дистиллированной водой и, наконец, деонизованной водой. Рабочие (аналитические) характеристики Линейность: до 200 мкмоль/л Оптический предел измерения (чувствительность): 0,65 мкмоль/л Диапазон измерений: 2,15-200 мкмоль/л Воспроизводимость (при 370С) Внутрисерийная Среднеарифме(число измерений тическое значение n = 20) (мкмоль/л) Образец 1 21,7 Образец 2 33,8 Образец 3 38,3 Межсерийная (число измерений n = 10) Образец 1 Образец 2 Образец 3 Среднеарифметическое значение (мкмоль/л) 21,5 33,9 38,5 SD (мкмоль/л) CV (%) 0,04 1,39 0,97 2,04 4,13 2,53 SD (мкмоль/л) CV (%) 0,90 1,25 1,06 4,20 3,68 2,75 Москва, ул Нижегородская, 32, корп. 15, офис 503 Тел./факс: (495) 755-78-51, 755-55-80, 755-78-81, 755-78-92, е-mail: [email protected], www.lachema.ru Сравнение методов Сравнение было проведено с использованием реагентов PlivaLachema Diagnostika s.r.o. и имеющихся в продаже реагентов с коммерчески доступной методикой. Результаты: N = 44, r=0,983, y = 1,177 x - 4,433 мкмоль/л Меры предосторожности Реактив 1 содержит тиомочевину (5,5%) являющуюся потенциально канцерогенным веществом (Категория 3). При случайном приеме внутрь следует выпить 0,5 л воды. При попадании на кожу или в глаза их следует промыть проточной водой. Пострадавшему необходимо оказать медицинскую помощь. Стабильность и хранение Набор хранить при температуре (+2 - +8)0С, в темном месте. Срок годности указан на упаковке. После использования флаконы немедленно закрывайте, чтобы предотвратить возможность испарения реактива или его контаминации. Утилизация использованных материалов Все тестированные пробы считают материалом, который может быть инфицирован, и вместе с возможными остатками реактивов подлежит уничтожению в соответствии с утвержденными внутрибольничными правилами. Бумажную упаковку сдайте в макулатуру, промытую заводскую тару в сортированный мусор. Москва, ул Нижегородская, 32, корп. 15, офис 503 Тел./факс: (495) 755-78-51, 755-55-80, 755-78-81, 755-78-92, е-mail: [email protected], www.lachema.ru