пролиферация нормальных и опухолевых клеток в присутствии

2010
ÖÈÒÎËÎÃÈß
Ò î ì 52, ¹ 9
ÏÐÎËÈÔÅÐÀÖÈß ÍÎÐÌÀËÜÍÛÕ È ÎÏÓÕÎËÅÂÛÕ ÊËÅÒÎÊ
 ÏÐÈÑÓÒÑÒÂÈÈ ÑÛÂÎÐÎÒÊÈ ÊÐÎÂÈ ÁÎËÜÍÛÕ ÐÀÊÎÌ ÌÎËÎ×ÍÎÉ ÆÅËÅÇÛ
ÏÎÑËÅ ÊÓÐÑÀ ÔÎÒÎÒÅÐÀÏÈÈ ÂÈÄÈÌÛÌ È ÁËÈÆÍÈÌ ÈÍÔÐÀÊÐÀÑÍÛÌ ÑÂÅÒÎÌ
À. À. Çèìèí, Ê. À. Ñàìîéëîâà, Í. À. Æåâàãî
Èíñòèòóò öèòîëîãèè ÐÀÍ, Ñàíêò-Ïåòåðáóðã;
ýëåêòðîííûé àäðåñ: [email protected]
À. À. Çèìèí, Ê. À. Ñàìîéëîâà, Í. À. Æåâàãî
Íèçêîèíòåíñèâíîå âèäèìîå (ÍÂ) è áëèæíåå èíôðàêðàñíîå (ÁÈÊ) èçëó÷åíèÿ îò ëàçåðíûõ è íåëàçåðíûõ èñòî÷íèêîâ èñïîëüçóþòñÿ ïðè ëå÷åíèè îñëîæíåíèé ó îíêîëîãè÷åñêèõ áîëüíûõ, ðàçâèâàþùèõñÿ ïîñëå õèðóðãè÷åñêîãî óäàëåíèÿ îïóõîëè, õèìèî- è ëó÷åâîé òåðàïèè. Îñòàåòñÿ, îäíàêî, îòêðûòûì âîïðîñ î
õàðàêòåðå âëèÿíèÿ ýòîãî ôèçèîòåðàïåâòè÷åñêîãî ìåòîäà íà ïðîëèôåðàòèâíóþ àêòèâíîñòü îïóõîëåâûõ
êëåòîê ïàöèåíòîâ ñ îíêîïàòîëîãèåé è êëåòîê, ó÷àñòâóþùèõ â ïðîöåññàõ ðàíîçàæèâëåíèÿ — ôèáðîáëàñòîâ (ÔÁ) è êåðàòèíîöèòîâ (ÊÖ).  íàñòîÿùåé ðàáîòå èçó÷åíî âëèÿíèå êóðñà îáëó÷åíèé áîëüíûõ ÐÌÆ â
ïîñëåîïåðàöèîííîì ïåðèîäå âèäèìûì è ÁÈÊ ñâåòîì (480—3400 íì, 95%-íàÿ ïîëÿðèçàöèÿ, 40 ìÂò/cì2,
12 Äæ/cì2) íà ïðîëèôåðàòèâíóþ àêòèâíîñòü ÊÖ è ÔÁ ÷åëîâåêà, à òàêæå íåñêîëüêèõ âèäîâ îïóõîëåâûõ
êëåòîê (BT-474, HBL-100, Hs578T è À431) â ïðèñóòñòâèè ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíûõ ÐÌÆ. 1-íåäåëüíûé
êóðñ ôîòîòåðàïèè âèäèìûì è ÁÈÊ ñâåòîì ó áîëüíûõ ÐÌÆ ïðèâîäèë ê ïîâûøåíèþ ïðîëèôåðàöèè ÔÁ
(îòíîñèòåëüíî èñõîäíîãî óðîâíÿ) è ÊÖ (îòíîñèòåëüíî ïîñëåîïåðàöèîííîãî óðîâíÿ) íà 22 è 28 % ñîîòâåòñòâåííî. Ïðîëèôåðàòèâíàÿ àêòèâíîñòü êëåòîê BT-474, Hs578T è À431 ñíèæàëàñü íà 31.5, 8.97 è
6.47 % îòíîñèòåëüíî äîîïåðàöèîííîãî (èñõîäíîãî) óðîâíÿ ñîîòâåòñòâåííî, òîãäà êàê ïðîëèôåðàöèÿ êëåòîê BT-474, HBL-100, Hs578T è À431 áûëà òàêæå íèæå â ñðàâíåíèè ñ ïîñëåîïåðàöèîííûì óðîâíåì íà
32, 16, 8.65 è 6.26 % ñîîòâåòñòâåííî. Ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû ñâèäåòåëüñòâóþò â ïîëüçó îíêîëîãè÷åñêîé
áåçîïàñíîñòè êóðñîâîãî îáëó÷åíèÿ âèäèìûì è ÁÈÊ ñâåòîì áîëüíûõ ÐÌÆ â ïåðèîä ïîñëåîïåðàöèîííîé
ðåàáèëèòàöèè.
Ïðîëèôåðàöèÿ íîðìàëüíûõ è îïóõîëåâûõ êëåòîê â ïðèñóòñòâèè ñûâîðîòêè êðîâè
Ê ë þ ÷ å â û å ñ ë î â à: ðàê ìîëî÷íîé æåëåçû, âèäèìûé è áëèæíèé èíôðàêðàñíûé ñâåò, ïðîëèôåðàöèÿ
îïóõîëåâûõ êëåòîê, ôèáðîáëàñòû è êåðàòèíîöèòû.
Ï ð è í ÿ ò û å ñ î ê ð à ù å í è ÿ: ÁÈÊ — áëèæíèé èíôðàêðàñíûé, ÊÖ — êåðàòèíîöèòû, Í — íèçêîèíòåíñèâíîå âèäèìîå, ÐÌÆ — ðàê ìîëî÷íîé æåëåçû, ÔÁ — ôèáðîáëàñòû, ÝÒÑ — ýìáðèîíàëüíàÿ òåëÿ÷üÿ ñûâîðîòêà.
ïèè. Êàê ïîêàçûâàåò ïðîâåäåííûé íàìè àíàëèç îïóáëèêîâàííûõ çà ïîñëåäíèå 25 ëåò ðàáîò â îáëàñòè ýêñïåðèìåíòàëüíîé è êëèíè÷åñêîé îíêîëîãèè (Zimin et al., 2008), ðàçëè÷íûå ôîòîòåðàïåâòè÷åñêèå ìåòîäû íå òîëüêî íå óñêîðÿþò îïóõîëåâûé ðîñò è ìåòàñòàçèðîâàíèå, íî
çíà÷èòåëüíî òîðìîçÿò ýòè ïðîöåññû ó ÷åëîâåêà è æèâîòíûõ. Ïðèðîäà èíãèáèðîâàíèÿ îïòè÷åñêèì èçëó÷åíèåì
ïðîëèôåðàöèè îïóõîëåâûõ êëåòîê â óñëîâèÿõ in vivo
îñòàåòñÿ íåèçâåñòíîé.
Èññëåäóÿ â ïîñëåäíåå äåñÿòèëåòèå ñèñòåìíîå äåéñòâèå âèäèìîãî ñâåòà è ÁÈÊ ïðè îáëó÷åíèè ïîâåðõíîñòè
òåëà (óñêîðåíèå ðàíîçàæèâëåíèÿ, ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîå
è èììóíîìîäóëèðóþùåå), ìû äîêàçàëè, ÷òî êëþ÷åâàÿ
ðîëü â åãî ôîðìèðîâàíèè ïðèíàäëåæèò òðàíñêóòàííîé
ôîòîìîäèôèêàöèè íåáîëüøèõ êîëè÷åñòâ êðîâè ïàöèåíòà,
êîòîðàÿ â òå÷åíèå íåñêîëüêèõ ìèíóò ïðèâîäèò ê èçìåíåíèþ ñâîéñòâ è ôóíêöèîíàëüíîãî ñîñòîÿíèÿ êëåòîê âñåõ
òèïîâ è ìíîãèõ êîìïîíåíòîâ ïëàçìû âñåãî îáúåìà öèðêóëèðóþùåé êðîâè (Samoilova et al., 1998; Æåâàãî è äð.,
2002). Ôîòîàêòèâàöèÿ êîíñòèòóòèâíîé NO-ñèíòàçû (Samoilova et al., 2008) â êëåòêàõ ýíäîòåëèÿ è êðîâè âåäåò ê
ñòèìóëÿöèè ñèíòåçà îêñèäà àçîòà (NO), êîòîðûé íå òîëü-
Óæå ìíîãèå ãîäû Í è ÁÈÊ èçëó÷åíèÿ èñïîëüçóþòñÿ
â êëèíè÷åñêîé ïðàêòèêå äëÿ ñòèìóëÿöèè ðåïàðàòèâíûõ
ïðîöåññîâ, ãåìîïîýçà è èììóíîãåíåçà, ò. å. äëÿ àêòèâàöèè
íà ñèñòåìíîì óðîâíå ïðîëèôåðàòèâíûõ ïðîöåññîâ. Îäíàêî ïðèìåíåíèå ñîâðåìåííûõ ôîòîòåðàïåâòè÷åñêèõ ìåòîäîâ, îñíîâàííûõ íà èñïîëüçîâàíèè ëàçåðíûõ, ñâåòîäèîäíûõ è äðóãèõ èñòî÷íèêîâ ýòèõ èçëó÷åíèé, ñäåðæèâàåòñÿ
èç-çà îïàñåíèÿ âîçìîæíîñòè ñòèìóëÿöèè ïðîëèôåðàöèè
íå òîëüêî íîðìàëüíûõ, íî è òðàíñôîðìèðîâàííûõ êëåòîê,
êîòîðûå ïîñòîÿííî ïðèñóòñòâóþò â îðãàíèçìå â òîì èëè
èíîì êîëè÷åñòâå. Îïàñåíèÿ áàçèðóþòñÿ íà äàâíî è íåîäíîêðàòíî óñòàíîâëåííîì ôàêòå, ñâèäåòåëüñòâóþùåì î
òîì, ÷òî èçëó÷åíèå îïòè÷åñêîãî äèàïàçîíà ñòèìóëèðóåò
ïðîëèôåðàöèþ îïóõîëåâûõ êëåòîê â óñëîâèÿõ in vitro
(Karu, Pyatibrat, 1987; Pinheiro et al., 2002; Renno et al.,
2007). Ïðè ýòîì, îäíàêî, íå ó÷èòûâàåòñÿ òî îáñòîÿòåëüñòâî, ÷òî â êëèíè÷åñêîé îíêîëîãèè íàêîïëåí ìíîãîëåòíèé
îïûò óñïåøíîãî ïðèìåíåíèÿ íèçêîèíòåíñèâíîé ôîòîòåðàïèè äëÿ óñêîðåíèÿ çàæèâëåíèÿ ïîñëåîïåðàöèîííûõ
ðàí, ðàäèàöèîííûõ ïîâðåæäåíèé ñëèçèñòûõ è êîæè, âîññòàíîâëåíèÿ ãåìîïîýçà è èììóíîãåíåçà ïîñëå ðàäèêàëüíîãî óäàëåíèÿ îïóõîëåé, à òàêæå õèìèî- è ëó÷åâîé òåðà785
786
À. À. Çèìèí, Ê. À. Ñàìîéëîâà, Í. À. Æåâàãî
êî óëó÷øàåò ìèêðîöèðêóëÿöèþ êðîâè íà ëîêàëüíîì è ñèñòåìíîì óðîâíÿõ, íî îáëàäàåò è ïðîòèâîîïóõîëåâûì äåéñòâèåì (Ïðîñêóðÿêîâ è äð., 2000). Ñóùåñòâåííûå èçìåíåíèÿ ïðîèñõîäÿò òàêæå â öèòîêèíîâîé ñåòè: â ñûâîðîòêå
êðîâè ñíèæàåòñÿ (èñõîäíî ïîâûøåííîå) ñîäåðæàíèå ïðîâîñïàëèòåëüíûõ öèòîêèíîâ (TNF-a, IL-6 è IL-12) è çíà÷èòåëüíî âîçðàñòàåò óðîâåíü ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíûõ ôàêòîðîâ (IL-10 è TGFb1); îñîáåííî ðåçêî âîçðàñòàåò êîíöåíòðàöèÿ èíòåðôåðîíà ãàììà (IFN-g) ïðè åãî èñõîäíî
íèçêîì è íîðìàëüíîì óðîâíÿõ (Æåâàãî è äð., 2002).
Ðàíåå ïðè èçó÷åíèè ðîñòîñòèìóëèðóþùåé àêòèâíîñòè ïëàçìû ñûâîðîòêè ôîòîìîäèôèöèðîâàííîé êðîâè ÷åëîâåêà ìû êóëüòèâèðîâàëè êëåòêè ÷åëîâåêà èç ðàçëè÷íûõ
òêàíåé íà ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ, ñîäåðæàùèõ âìåñòî ÝÒÑ
ïëàçìó êðîâè çäîðîâûõ äîíîðîâ (Áåëèøåâà, Ñàìîéëîâà,
1984; Ñàìîéëîâà è äð., 1984). Ïðè ýòîì àêòèâíîñòü ñûâîðîòêè âûÿâëÿëè ïî èçìåíåíèþ ñêîðîñòè ïðîëèôåðàöèè
ðàçëè÷íûõ êëåòîê ÷åëîâåêà â óñëîâèÿõ in vitro.  ýòèõ
óñëîâèÿõ êëåòêè ñîõðàíÿëè âûñîêóþ æèçíåñïîñîáíîñòü è
àêòèâíî ïðîëèôåðèðîâàëè, à èõ ïàðàëëåëüíîå êóëüòèâèðîâàíèå íà ñòàíäàðòíîé ñðåäå, ñîäåðæàùåé 10 % ÝÒÑ, ïîçâîëÿëî îöåíèòü èíäèâèäóàëüíûå ðîñòîñòèìóëèðóþùèå
ñâîéñòâà êðîâè êàæäîãî ÷åëîâåêà.  äàëüíåéøåì ýòîò
ïîäõîä áûë èñïîëüçîâàí ïðè îöåíêå ýôôåêòèâíîñòè êóðñà ôîòîòåðàïèè ó äîáðîâîëüöåâ ïî óðîâíþ ïðîëèôåðàöèè
ÊÖ è ÔÁ ïðè äîáàâëåíèè ñûâîðîòêè èõ êðîâè (2.5 %) â
ñðåäó êóëüòèâèðîâàíèÿ (Ñàìîéëîâà è äð., 2003; Áîãà÷åâà
è äð., 2004). Âàæíûì èòîãîì ýòèõ äâóõ ðàáîò áûëè ñëåäóþùèå ôàêòû: ðîñòîñòèìóëèðóþùàÿ àêòèâíîñòü êóëüòóðàëüíîé ñðåäû äëÿ ÔÁ è ÊÖ, ñîäåðæàùåé 2.5 % ïëàçìû êðîâè äîáðîâîëüöåâ, íå îòëè÷àåòñÿ îò òàêîâîé ñðåäû,
ñîäåðæàùåé 10 % ÝÒÑ; îáëó÷åíèå íåáîëüøîãî ó÷àñòêà ïîâåðõíîñòè òåëà ÷åëîâåêà âèäèìûì ñâåòîì ïðèâîäèëî
ê ïîÿâëåíèþ â êðîâè ðàñòâîðèìûõ ôàêòîðîâ, ñïîñîáñòâóþùèõ óñèëåíèþ ïðîëèôåðàöèè ÔÁ è ÊÖ â óñëîâèÿõ
in vitro.
Âåäóùåå ìåñòî â ñòðóêòóðå îíêîëîãè÷åñêèõ çàáîëåâàíèé æåíùèí çàíèìàåò ÐÌÆ, ïðè ýòîì ÷àñòîòà âîçíèêíîâåíèÿ ýòîãî çàáîëåâàíèÿ åæåãîäíî óâåëè÷èâàåòñÿ íà 2 %
(Òàðóòèíîâ è äð., 1996; Òþëÿäèí, Ìîèñååíêî, 2004).
 ñâÿçè ñ ýòèì ïîèñê ôîòîòåðàïåâòè÷åñêèõ ìåòîäîâ ïîñëåîïåðàöèîííîé èììóíîðåàáèëèòàöèè ïàöèåíòîâ ñ ýòèì
çàáîëåâàíèåì ÿâëÿåòñÿ âàæíîé çàäà÷åé ñîâðåìåííîé ìåäèöèíû. Ïðè ýòîì íåîáõîäèìî çíàòü õàðàêòåð âëèÿíèÿ
ýòèõ ìåòîäîâ íà ïðîëèôåðàöèþ êëåòîê ÐÌÆ äëÿ èñêëþ÷åíèÿ âîçìîæíîñòè ðåöèäèâîâ è ìåòàñòàçèðîâàíèÿ â ïîñëåîïåðàöèîííîì ïåðèîäå.
Ó÷èòûâàÿ âûøåèçëîæåííîå, ìû ïîñòàâèëè ïåðåä ñîáîé çàäà÷ó èçó÷èòü âëèÿíèå ïîñëåîïåðàöèîííîãî êóðñà
ôîòîòåðàïèè âèäèìûì è ÁÈÊ ñâåòîì íà õàðàêòåð èçìåíåíèé ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè íîðìàëüíûõ è îïóõîëåâûõ êëåòîê ó áîëüíûõ ÐÌÆ.
Ìàòåðèàë è ìåòîäèêà
Ðàáîòà âûïîëíåíà íà áàçå êëèíè÷åñêîé áîëüíèöû
ÐÀÍ (Ñàíêò-Ïåòåðáóðã). Ýòè÷åñêèé êîìèòåò áîëüíèöû
ðàññìîòðåë äèçàéí èññëåäîâàíèÿ è äàë ðàçðåøåíèå íà åãî
ïðîâåäåíèå.
Áîëüíûå ÐÌÆ è èññëåäóåìûå îáðàçöû
ê ð î â è.  èññëåäîâàíèè ïðèíÿëè ó÷àñòèå 17 áîëüíûõ
ÐÌÆ I—II ñòàäèè, êîòîðûõ ëå÷èëè õèðóðãè÷åñêè. Âñå ïàöèåíòû áûëè ðàíäîìèçèðîâàííî ðàçäåëåíû íà îñíîâíóþ
è êîíòðîëüíóþ ãðóïïû, â êîòîðûõ áîëüíûå áûëè ñîïîñòà-
âèìû ïî âîçðàñòó (54.3 ± 3.87 è 57.6 ± 2.99 ãîäà ñîîòâåòñòâåííî) è ñòàäèè îïóõîëåâîãî ïðîöåññà ñîãëàñíî
êëàññèôèêàöèè TNM. Äèàãíîç óñòàíàâëèâàëñÿ íà îñíîâàíèè ðåçóëüòàòîâ ìàììîãðàôè÷åñêîãî, óëüòðàçâóêîâîãî è
öèòîëîãè÷åñêîãî èññëåäîâàíèé. Áîëüíûì êîíòðîëüíîé
ãðóïïû (n = 7) ïðîâîäèëè ñòàíäàðòíûé êóðñ ïîñëåîïåðàöèîííîé ðåàáèëèòàöèè. Áîëüíûì îñíîâíîé ãðóïïû
(n = 10) íà÷èíàÿ ñ 1-õ ñóò ïîñëå îïåðàöèè äîïîëíèòåëüíî
ïðîâîäèëè êóðñ ôîòîòåðàïèè â òå÷åíèå 7 ñóò.
Îáðàçöû ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíûõ âûäåëÿëè çà 1 ñóò
äî îïåðàöèè, ÷åðåç 1 ñóò è íà 8-å ñóò ïîñëå îïåðàöèè. Ñûâîðîòêó èç öåëüíîé êðîâè âûäåëÿëè öåíòðèôóãèðîâàíèåì
â òå÷åíèå 10 ìèí ïðè 1500 g. Ïîñëå ýòîãî îáðàçöû èíäèâèäóàëüíûõ ñûâîðîòîê çàìîðàæèâàëè ïðè –20 °C. Ïåðåä
òåñòèðîâàíèåì ðîñòîñòèìóëèðóþùèõ ñâîéñòâ îáðàçöû
ðàçìîðàæèâàëè. Òåïëîâóþ èíàêòèâàöèþ ñûâîðîòêè áîëüíûõ è ÝÒÑ íå ïðîâîäèëè, ïîñêîëüêó îíà ìîæåò ïðèâåñòè
ê íàðóøåíèþ àêòèâíîñòè öèòîêèíîâ è ðîñòîâûõ ôàêòîðîâ, êîòîðûå âëèÿþò íà ïðîëèôåðàöèþ èçó÷àåìûõ â ðàáîòå êëåòîê-ìèøåíåé. Íåïîñðåäñòâåííî ïîñëå ðàçìîðàæèâàíèÿ íà÷èíàëè ãîòîâèòü ñðåäû äëÿ êóëüòèâèðîâàíèÿ êëåòîê-ìèøåíåé ñ äîáàâëåíèåì ñûâîðîòîê êàæäîãî áîëüíîãî
íà ñîîòâåòñòâóþùèé ñðîê òåñòèðîâàíèÿ. Ïðè ïðèãîòîâëåíèè ñðåä â êàæäóþ ìèêðîïðîáèðêó âíîñèëè 15 ìêë èíäèâèäóàëüíîé ñûâîðîòêè è 585 ìêë ïèòàòåëüíîé ñðåäû, íåîáõîäèìîé äëÿ êóëüòèâèðîâàíèÿ êëåòîê êàæäîãî òèïà
(ò. å. ãîòîâûå ñðåäû ñîäåðæàëè 2.5 % ñûâîðîòîê áîëüíûõ). Ïîëó÷åííûå ñðåäû âíîñèëè â 96-ëóíî÷íûå ïëàíøåòû ñ êëåòêàìè âìåñòî ÝÒÑ.
Ô î ò î ò å ð à ï è ÿ. 7-äíåâíûé êóðñ åæåäíåâíîãî îáëó÷åíèÿ ïîÿñíè÷íî-êðåñòöîâîé îáëàñòè áîëüíûõ ÐÌÆ âèäèìûì è ÁÈÊ ñâåòîì ïðîèçâîäèëè ñ èñïîëüçîâàíèåì
øâåéöàðñêîãî àïïàðàòà Bioptron-2 (480—3400 íì,
95%-íàÿ ïîëÿðèçàöèÿ, 40 ìÂò/cì2, äîçà, 12 Äæ/cì2, âðåìÿ
îáëó÷åíèÿ 10 ìèí, äèàìåòð îáëàñòè îáëó÷åíèÿ 15 ñì).
Ìåòîäèêà ôîòîòåðàïèè áûëà ðàçðàáîòàíà ðàíåå (Samoilova et al., 1998).
Êóëüòèâèðîâàíèå îïóõîëåâûõ êëåòîê ÷åë î â å ê à. Èñïîëüçîâàëè òðè ëèíèè êëåòîê ÐÌÆ ÷åëîâåêà
(BT-474, HBL-100, Hs578T) è êëåòêè ýïèäåðìîèäíîé êàðöèíîìû À431. Âñå êëåòêè ïîëó÷åíû èç êîëëåêöèè Áàíêà êëåòî÷íûõ êóëüòóð Èíñòèòóòà öèòîëîãèè ÐÀÍ
(Ñàíêò-Ïåòåðáóðã). Äâå ëèíèè êëåòîê ÐÌÆ (BT-474 è
HBL-100) êóëüòèâèðîâàëè â ïèòàòåëüíîé ñðåäå RPMI
1640 (Áèîëîò, Ðîññèÿ), ñîäåðæàùåé 10 % ÝÒÑ (Áèîëîò,
Ðîññèÿ), 80 ìêã/ìë ãåíòàìèöèíà (Sigma, ÑØÀ) è äëÿ êëåòîê BT-474 — 10 ìêã/ìë áû÷üåãî èíñóëèíà (Sigma,
ÑØÀ). Äëÿ ýêñïåðèìåíòîâ êëåòêè âûñåâàëè â 96-ëóíî÷íûå ïëàíøåòû ñ ïëîòíîñòüþ 12.5$103 êëåòîê íà ëóíêó è
êóëüòèâèðîâàëè â àòìîñôåðå ñ 5 % ÑO2 ïðè 37 °Ñ. ×åðåç
2 ÷ ïîñëå ïðèêðåïëåíèÿ êëåòîê ê ïëàñòèêó ïðîâîäèëè
ñìåíó ïèòàòåëüíîé ñðåäû, äîáàâëÿÿ 2.5 % ñûâîðîòêè áîëüíûõ ÐÌÆ (âìåñòî 10 % ÝÒÑ).
Îïóõîëåâûå êëåòêè äâóõ äðóãèõ ëèíèé (Hs578T è
À431) êóëüòèâèðîâàëè â ïèòàòåëüíîé ñðåäå DMEM (Áèîëîò, Ðîññèÿ), ñîäåðæàùåé 10 % ÝÒÑ è 80 ìêã/ìë ãåíòàìèöèíà è äîïîëíèòåëüíî 10 ìêã/ìë áû÷üåãî èíñóëèíà äëÿ
êëåòîê Hs578T. Êóëüòèâèðîâàíèå êëåòîê ïðîâîäèëè â
96-ëóíî÷íûõ ïëàíøåòàõ ñ ïëîòíîñòüþ 1$104 êëåòîê íà
ëóíêó â àòìîñôåðå 5 % ÑO2 ïðè 37 °Ñ. Ñìåíó ïèòàòåëüíîé
ñðåäû ñ äîáàâëåíèåì ñûâîðîòêè áîëüíûõ ÐÌÆ ïðîâîäèëè òàêèì æå îáðàçîì, êàê è â ïðåäûäóùåì ñëó÷àå.
Ê ó ë ü ò è â è ð î â à í è å Ô Á. Â ðàáîòå èñïîëüçîâàíû
ïîñòíàòàëüíûå ÔÁ êðàéíåé ïëîòè ÷åëîâåêà, ïîëó÷åííûå
èç êîëëåêöèè Áàíêà êëåòî÷íûõ êóëüòóð Èíñòèòóòà öèòî-
Ïðîëèôåðàöèÿ íîðìàëüíûõ è îïóõîëåâûõ êëåòîê â ïðèñóòñòâèè ñûâîðîòêè êðîâè
ëîãèè ÐÀÍ. Êëåòêè êóëüòèâèðîâàëè â ïèòàòåëüíîé ñðåäå
Iscove’s MDM (StemCell Technologies, ÑØÀ) ñ äîáàâëåíèåì 10 % ÝÒÑ. Äëÿ ýêñïåðèìåíòîâ êëåòêè âûñåâàëè â
96-ëóíî÷íûå ïëàíøåòû ñ ïëîòíîñòüþ 1$104 êëåòîê íà
ëóíêó è êóëüòèâèðîâàëè â àòìîñôåðå 5 % ÑO2 ïðè 37 °Ñ.
×åðåç 2 ÷ ïîñëå ïðèêðåïëåíèÿ êëåòîê ê ïëàñòèêó ïèòàòåëüíóþ ñðåäó ìåíÿëè, äîáàâëÿÿ ñûâîðîòêó áîëüíûõ ÐÌÆ
(2.5 %).
Ê ó ë ü ò è â è ð î â à í è å Ê Ö. Âûäåëåíèå è êóëüòèâèðîâàíèå ÊÖ èç ôðàãìåíòîâ êîæè ëèöà ïðàêòè÷åñêè çäîðîâûõ æåíùèí, ïîëó÷åííûõ ïðè êîñìåòè÷åñêèõ îïåðàöèÿõ,
ïðîâîäèëè ïî ìåòîäó Ðåéíâàëüäà è Ãðèíà (Rheinwald,
Green, 1975) â ìîäèôèêàöèè (Þäèíöåâà è äð., 1999). Èçîëèðîâàííûå èç áàçàëüíîãî ñëîÿ ýïèäåðìèñà êëåòêè ñóñïåíäèðîâàëè â ñìåñè ïèòàòåëüíûõ ñðåä DMEM è F12
(3 : 1) ñ äîáàâëåíèåì 10 % ÝÒÑ, âûñåâàëè â 96-ëóíî÷íûå
ïëàíøåòû ñ ïëîòíîñòüþ 4$104 êëåòîê íà ëóíêó è êóëüòèâèðîâàëè â àòìîñôåðå 5 % ÑO2 ïðè 37 °Ñ. ×åðåç 2 ñóò ïðîâîäèëè ñìåíó ïèòàòåëüíîé ñðåäû ñ äîáàâëåíèåì ýïèäåðìàëüíîãî ôàêòîðà ðîñòà (ÝÔÐ, 10 ìã/ìë), èíñóëèíà, ãèäðîêîðòèçîíà, õîëåðíîãî òîêñèíà, òðàíñôåððèíà, àäåíèíà
è ëèîòèðîíèíà, îäíàêî âìåñòî 10 % ÝÒÑ âíîñèëè 2.5 %
ñûâîðîòêè êðîâè íåîáëó÷åííûõ èëè îáëó÷åííûõ áîëüíûõ
ÐÌÆ, êîòîðóþ ïîëó÷àëè çà 1 ñóò äî ìàñòýêòîìèè, à òàêæå
÷åðåç 1 è 8 ñóò ïîñëå îïåðàöèè.
Ïðîäîëæèòåëüíîñòü êóëüòèâèðîâàíèÿ êëåòîê êàæäîé
ëèíèè ñîñòàâëÿëà äëÿ êëåòîê ÐÌÆ (BT-474, Hs578T è
HBL-100) 72 ÷, äëÿ ÔÁ, ÊÖ è A431 — 60 ÷. Äëÿ îöåíêè èñõîäíîãî óðîâíÿ ïðîëèôåðàöèè êëåòîê âñåõ èçó÷àåìûõ ëèíèé â ïðèñóòñòâèè 2.5 % ñûâîðîòîê áîëüíûõ èõ ïàðàëëåëüíî êóëüòèâèðîâàëè íà ñòàíäàðòíîé ïèòàòåëüíîé ñðåäå, ò. å. â ïðèñóòñòâèè 10 % ÝÒÑ. Êëåòêè êàæäîé ëèíèè
êóëüòèâèðîâàëè ñ ñûâîðîòêàìè êðîâè 7 áîëüíûõ, ïîëó÷àâøèõ ñòàíäàðòíûé êóðñ ïîñëåîïåðàöèîííîé ðåàáèëèòàöèè, è ñ ñûâîðîòêàìè êðîâè 10 áîëüíûõ, êîòîðûì íàçíà÷àëè ôîòîòåðàïåâòè÷åñêèé êóðñ âèäèìûì è ÁÈÊ ñâåòîì.
Òåñòèðîâàíèå ñûâîðîòîê áîëüíûõ ïðîâîäèëè íà òðåõ ñðîêàõ (äî îïåðàöèè, ÷åðåç 1 è 8 ñóò ïîñëå) â òðåõ ïàðàëëåëÿõ. Îïûò ïîâòîðÿëè 3 ðàçà.
Î ö å í ê à ï ð î ë è ô å ð à ö è è Ô Á, Ê Ö è î ï ó õ î ë åâ û õ ê ë å ò î ê ÷ å ë î â å ê à. ×èñëî êëåòîê îïðåäåëÿëè êîñâåííî ïî èçìåíåíèþ îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè îêðàøåííûõ
ÿäåð â 96-ëóíî÷íûõ ïëàíøåòàõ, èñïîëüçóÿ êðèñòàëë-âèîëåò. Àâòîðàìè ýòîãî ìåòîäà (Mosman, 1983; Kueng et al.,
1989) áûëî óñòàíîâëåíî, ÷òî ìåæäó îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòüþ ýêñòðàãèðîâàííîãî èç ÿäåð êëåòîê êðèñòàëë-âèîëåòà è ÷èñëîì êëåòîê ñóùåñòâóåò ëèíåéíàÿ çàâèñèìîñòü.
Ïåðåä ôèêñèðîâàíèåì êëåòîê â 70%-íîì ýòèëîâîì ñïèðòå
(5 ìèí) ïðîâîäèëè äâóêðàòíóþ îòìûâêó êëåòîê â ëóíêàõ
ðàñòâîðîì PBS. Ïîñëå ôèêñàöèè âíîñèëè êðèñòàëë-âèîëåò (0.1 % íà 10 ìèí), çàòåì îòìûâàëè ëóíêè ñ êëåòêàìè
äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé. Äàëåå êðàñèòåëü ýêñòðàãèðîâàëè 10%-íîé óêñóñíîé êèñëîòîé â òå÷åíèå 20 ìèí íà øåéêåðå ïðè ñêîðîñòè âðàùåíèÿ 150 îá/ìèí. Èçìåðåíèå îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ýêñòðàãèðîâàííîãî êðàñèòåëÿ ïðè
570 íì ïðîâîäèëè íà ïëàíøåòíîì ñïåêòðîôîòîìåòðå
STATFAX 2100 (Awareness Technology, ÑØÀ).
Ñ ò à ò è ñ ò è ÷ å ñ ê à ÿ î ö å í ê à ð å ç ó ë ü ò à ò î â. Èñïîëüçîâàëè êîìïüþòåðíóþ ïðîãðàììó Statistica 6.0. Äîñòîâåðíîñòü ðàçëè÷èé ÷èñëà êëåòîê, êóëüòèâèðóåìûõ ñ
ñûâîðîòêîé êðîâè áîëüíûõ äî îïåðàöèè, ÷åðåç 1 è 8 ñóò
ïîñëå îïåðàöèè, à òàêæå ÷åðåç 24 ÷ ïîñëå 7-äíåâíîãî êóðñà ôîòîòåðàïèè, îöåíèâàëè íåïàðàìåòðè÷åñêèì ìåòîäîì
äëÿ ïîïàðíî ñâÿçàííûõ ðåçóëüòàòîâ, èñïîëüçóÿ êðèòåðèé
Âèëêîêñîíà U.
787
Ðåçóëüòàòû
Ï ð î ë è ô å ð à ò è â í à ÿ à ê ò è â í î ñ ò ü í î ð ì à ë üí û õ è î ï ó õ î ë å â û õ ê ë å ò î ê. 1. Êëåòêè ÔÁ. Î ïðîëèôåðàöèè êëåòîê ñóäèëè ïî èíòåíñèâíîñòè îêðàñêè êðèñòàëë-âèîëåòîì, êîòîðàÿ ïðÿìî ïðîïîðöèîíàëüíà ÷èñëó
êëåòîê (Mosman 1983; Kueng et al., 1989). Èñõîäíûå (äî
îïåðàöèè) ïîêàçàòåëè ïðîëèôåðàöèè ÔÁ ïðè êóëüòèâèðîâàíèè ñ îáðàçöàìè ñûâîðîòêè êðîâè 17 áîëüíûõ ÐÌÆ â
êîíòðîëüíîé è îñíîâíîé ãðóïïàõ âàðüèðîâàëè ñîîòâåòñòâåííî â 3.8 è 2.9 ðàçà è â ñðåäíåì áûëè äîñòîâåðíî íèæå,
÷åì ïðè êóëüòèâèðîâàíèè ñ ÝÒÑ (110 ïðîòèâ 206 îòí. åä.
â êîíòðîëüíîé ãðóïïå è 114 ïðîòèâ 193 îòí. åä. â ãðóïïå
áîëüíûõ, ïîëó÷àâøèõ êóðñ ôîòîòåðàïèè). ×åðåç 1 ñóò ïîñëå îïåðàöèè ïðîëèôåðàòèâíàÿ àêòèâíîñòü êëåòîê â êîíòðîëüíîé è îñíîâíîé ãðóïïàõ íå ìåíÿëàñü (ðèñ. 1). Ó áîëüíûõ êîíòðîëüíîé ãðóïïû ïðîëèôåðàöèÿ êëåòîê íå ìåíÿëàñü íà âñåõ ñðîêàõ òåñòèðîâàíèÿ (ò. å. çà 1 ñóò äî
îïåðàöèè è ÷åðåç 1 è 8 ñóò ïîñëå ìàñòýêòîìèè). Îäíàêî ó
ïàöèåíòîâ îñíîâíîé ãðóïïû, êîòîðûì â òå÷åíèå 7 ñóò ïîñëå îïåðàöèè ïðîâîäèëè êóðñ ôîòîòåðàïèè, ðåãèñòðèðîâàëîñü äîñòîâåðíîå ïîâûøåíèå ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè êëåòîê ñî 114 (èñõîäíûé óðîâåíü) äî 134 îòí. åä. ó
6 áîëüíûõ ÐÌÆ ýòîé ãðóïïû (ðèñ. 1).
2. Ê ë å ò ê è Ê Ö. Ïîêàçàòåëè ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè ýòèõ êëåòîê äî îïåðàöèè (ò. å. èñõîäíûå) â ïðèñóòñòâèè ñûâîðîòîê êðîâè áîëüíûõ âàðüèðîâàëè â êîíòðîëüíîé è îñíîâíîé ãðóïïàõ ñîîòâåòñòâåííî â 2.3 è 3.7 ðàçà è
â ñðåäíåì áûëè äîñòîâåðíî íèæå ïî ñðàâíåíèþ ñ àêòèâíîñòüþ êëåòîê ïðè êóëüòèâèðîâàíèè ñ ÝÒÑ (83 îòí. åä. ïî
ñðàâíåíèþ ñî 129 â ïðèñóòñòâèè ÝÒÑ â êîíòðîëüíîé
ãðóïïå è 57 îòí. åä. ïî ñðàâíåíèþ ñî 125 — â îñíîâíîé).
Îäíàêî îáå ãðóïïû áîëüíûõ (êîíòðîëüíàÿ è îñíîâíàÿ)
áûëè ñîïîñòàâèìû ïî èñõîäíûì çíà÷åíèÿì ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè (83 è 57 îòí. åä. ñîîòâåòñòâåííî,
P > 0.05). ×åðåç 1 ñóò ïîñëå óäàëåíèÿ îïóõîëè ïðîëèôåðàöèÿ êëåòîê â îáåèõ ãðóïïàõ íå èçìåíÿëàñü (ðèñ. 1).
Ó áîëüíûõ êîíòðîëüíîé ãðóïïû ïðîëèôåðàòèâíàÿ àêòèâíîñòü êëåòîê íå ìåíÿëàñü è ÷åðåç 7 ñóò ïîñëå îïåðàöèè.
Îäíàêî ó ïàöèåíòîâ îñíîâíîé ãðóïïû, êîòîðûì â òå÷åíèå
7 ñóò ïîñëå îïåðàöèè ïðîâîäèëè êóðñ ôîòîòåðàïèè, íàáëþäàëè ïîâûøåíèå ïðîëèôåðàöèè ñ 50 îòí. åä. (ïîñëåîïåðàöèîííûé óðîâåíü) äî 62 ó 8 áîëüíûõ ÐÌÆ (P < 0.05).
3. Ê ë å ò ê è B T - 4 7 4. Ïîêàçàòåëè èñõîäíîé ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè ýòèõ êëåòîê â ïðèñóòñòâèè ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíûõ ÐÌÆ âàðüèðîâàëè â êîíòðîëüíîé è
îñíîâíîé ãðóïïàõ ñîîòâåòñòâåííî â 3.3 è 2.7 ðàçà è â ñðåäíåì áûëè äîñòîâåðíî íèæå, ÷åì â ïðèñóòñòâèè ÝÒÑ
(219 îòí. åä. ïðîòèâ 525 ïðè êóëüòèâèðîâàíèè ñ ÝÒÑ â
êîíòðîëüíîé ãðóïïå è 259 îòí. åä. ïðîòèâ 583 — â îñíîâíîé). ×åðåç 1 ñóò ïîñëå îïåðàöèè ïðîëèôåðàòèâíàÿ àêòèâíîñòü êëåòîê â îáåèõ ãðóïïàõ íå èçìåíÿëàñü (ðèñ. 2). ×åðåç 7 ñóò ïîñëå îïåðàöèè â êîíòðîëüíîé ãðóïïå áîëüíûõ
îòìå÷àëîñü ïîâûøåíèå ïðîëèôåðàöèè êëåòîê ñ 240 (èñõîäíûé óðîâåíü) äî 263 îòí. åä. ïî ñðàâíåíèþ ñ îñíîâíîé
ãðóïïîé, â êîòîðîé ïðîëèôåðàòèâíàÿ àêòèâíîñòü êëåòîê â
ýòîò æå ñðîê òåñòèðîâàíèÿ îòíîñèòåëüíî íà÷àëüíîãî
óðîâíÿ ñíèæàëàñü c 259 äî 175 îòí. åä. (ðèñ. 2). Ïðè÷åì
ýòî ñíèæåíèå íàáëþäàëîñü ó 6 áîëüíûõ. Áîëåå òîãî, ñíèæåíèå ïðîëèôåðàöèè êëåòîê c 251 äî 175 îòí. åä. ó
7 áîëüíûõ îòíîñèòåëüíî ïîñëåîïåðàöèîííîãî óðîâíÿ
áûëî äîñòîâåðíûì (P < 0.05).
4. Ê ë å ò ê è H B L - 1 0 0. Ïîêàçàòåëè èñõîäíîé ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè ýòèõ êëåòîê ïðè êóëüòèâèðîâàíèè
ñ ñûâîðîòêàìè êðîâè áîëüíûõ ÐÌÆ âàðüèðîâàëè â êîíò-
788
À. À. Çèìèí, Ê. À. Ñàìîéëîâà, Í. À. Æåâàãî
Ðèñ. 1. Âëèÿíèå ñûâîðîòêè (2.5 %) áîëüíûõ ÐÌÆ, íå ïðîøåäøèõ (I, III) è ïðîøåäøèõ (II, IV) êóðñ ôîòîòåðàïèè, íà ïðîëèôåðàöèþ
êåðàòèíîöèòîâ (ÊÖ) è ôèáðîáëàñòîâ (ÔÁ).
Ïî ãîðèçîíòàëè — òðè ñðîêà òåñòèðîâàíèÿ ñûâîðîòêè: 0 — èñõîäíûé óðîâåíü äî îïåðàöèè, 1 — ÷åðåç 1 ñóò ïîñëå îïåðàöèè, 2 — ÷åðåç 8 ñóò ïîñëå îïåðàöèè; ïî âåðòèêàëè — îïòè÷åñêàÿ ïëîòíîñòü, îòí. åä. Çâåçäî÷êîé îòìå÷åíà äîñòîâåðíîñòü îòëè÷èé ìåæäó óðîâíÿìè èñõîäíûì è ÷åðåç 8 ñóò ïîñëå îïåðàöèè (II, P < 0.05), à òàêæå ìåæäó óðîâíÿìè ïîñëå îïåðàöèè ÷åðåç 1 è 8 ñóò (IV, P < 0.05). Çäåñü è íà ðèñ. 2: î ïðîëèôåðàöèè ñóäèëè ïî èíòåíñèâíîñòè
îêðàøèâàíèÿ êëåòîê êðèñòàëë-âèîëåòîì. Ñûâîðîòêó äîáàâëÿëè â ñðåäó êóëüòèâèðîâàíèÿ.
Ðèñ. 2. Âëèÿíèå ñûâîðîòêè (2.5 %) áîëüíûõ ÐÌÆ áåç êóðñà ôîòîòåðàïèè (I) è ïîñëå êóðñà ôîòîòåðàïèè (II) íà ïðîëèôåðàöèþ
4 îïóõîëåâûõ ëèíèé ÷åëîâåêà — BT-474, HBL-100, Hs578T è À431.
Ïî îñÿì — òî æå, ÷òî è íà ðèñ. 1. Çâåçäî÷êè óêàçûâàþò íà äîñòîâåðíûå îòëè÷èÿ îò èñõîäíîãî óðîâíÿ: * P < 0.05, ** P < 0.01, *** P < 0.001. Äîñòîâåðíûå ðàçëè÷èÿ ìåæäó óðîâíÿìè ÷åðåç 1 è 8 ñóò: à — P < 0.05, b — P < 0.01, c — P < 0.001. g — äîñòîâåðíîå ðàçëè÷èå ìåæäó ãðóïïàìè îòíîñèòåëüíî èñõîäíîãî óðîâíÿ ïðè P < 0.05; D è s — äîñòîâåðíûå ðàçëè÷èÿ ìåæäó ãðóïïàìè îòíîñèòåëüíî ïîñëåîïåðàöèîííîãî óðîâíÿ ñîîòâåòñòâåííî ïðè P < 0.05
è P < 0.01.
Ïðîëèôåðàöèÿ íîðìàëüíûõ è îïóõîëåâûõ êëåòîê â ïðèñóòñòâèè ñûâîðîòêè êðîâè
ðîëüíîé è îñíîâíîé ãðóïïàõ ñîîòâåòñòâåííî â 3.4 è
3.6 ðàçà è áûëè äîñòîâåðíî íèæå, ÷åì ïðè êóëüòèâèðîâàíèè êëåòîê ñ ÝÒÑ (209 îòí. åä. ïðîòèâ 343 â êîíòðîëüíîé
ãðóïïå è 189 îòí. åä. ïðîòèâ 370 â îñíîâíîé). Îïåðàöèÿ
íå èçìåíÿëà ïðîëèôåðàòèâíóþ àêòèâíîñòü êëåòîê â îáåèõ
ãðóïïàõ (ðèñ. 2). ×åðåç 7 ñóò â êîíòðîëüíîé ãðóïïå áîëüíûõ ÐÌÆ îòìå÷àëîñü ïîâûøåíèå ïðîëèôåðàöèè êëåòîê
ýòîé ëèíèè c 167 äî 182 îòí. åä. (ðèñ. 2). Ìåæäó òåì â
îñíîâíîé ãðóïïå â ýòîò æå ñðîê òåñòèðîâàíèÿ ïðîëèôåðàòèâíàÿ àêòèâíîñòü ñíèçèëèñü cî 184 äî 157 îòí. åä. îòíîñèòåëüíî óðîâíÿ ïîñëå îïåðàöèè (P < 0.05). Ïðè÷åì òàêîå
ñíèæåíèå íàáëþäàëîñü ó 7 áîëüíûõ. Ðåãèñòðèðóåìîå èçìåíåíèå ïðîëèôåðàöèè êëåòîê îêàçàëîñü äîñòîâåðíûì
(P < 0.05) ìåæäó äâóìÿ ãðóïïàìè.
5. Ê ë å ò ê è H s 5 7 8 T. Ðåãèñòðèðîâàëàñü âàðèàáåëüíîñòü èñõîäíûõ ïîêàçàòåëåé ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè êëåòîê ïðè êóëüòèâèðîâàíèè ñ ñûâîðîòêîé êðîâè
áîëüíûõ â êîíòðîëüíîé è îñíîâíîé ãðóïïàõ ñîîòâåòñòâåííî â 2.2 è 2.3 ðàçà. Ïðè ýòîì ïðîëèôåðàòèâíàÿ àêòèâíîñòü êëåòîê â ýòèõ ãðóïïàõ íå îòëè÷àëàñü îò òàêîâîé â
ïðèñóòñòâèè ÝÒÑ. Îïåðàöèÿ íå èçìåíÿëà ïðîëèôåðàöèþ
êëåòîê â îáåèõ ãðóïïàõ (ðèñ. 2). ×åðåç 7 ñóò ïîñëå îïåðàöèè â êîíòðîëüíîé ãðóïïå íå ïðîèñõîäèëî èçìåíåíèé ïîêàçàòåëåé ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè êëåòîê, òîãäà êàê
â îñíîâíîé ãðóïïå â ýòîò ñðîê ðåãèñòðèðîâàëîñü åå äîñòîâåðíîå ñíèæåíèå c 533 äî 476 îòí. åä. îòíîñèòåëüíî èñõîäíîãî óðîâíÿ, à òàêæå îòíîñèòåëüíî óðîâíÿ ïîñëå îïåðàöèè ñ 527 äî 476 îòí. åä. (p < 0. 01).
6. Ê ë å ò ê è A 4 3 1. Ïîêàçàòåëè èñõîäíîé ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè êëåòîê çà 1 ñóò äî îïåðàöèè (èñõîäíî)
âàðüèðîâàëè â êîíòðîëüíîé ãðóïïå â 1.8 ðàçà, â îñíîâíîé — â 2 ðàçà è áûëè äîñòîâåðíî íèæå, ÷åì ïðè êóëüòèâèðîâàíèè ñ ÝÒÑ (617 îòí. åä. ïðîòèâ 692 â ïðèñóòñòâèè
ÝÒÑ â êîíòðîëüíîé ãðóïïå è 599 îòí. åä. ïðîòèâ 702 â
îñíîâíîé). Îïåðàöèÿ íå èçìåíÿëà ïðîëèôåðàöèè êëåòîê â
îáåèõ ãðóïïàõ (ðèñ. 2). ×åðåç 7 ñóò â êîíòðîëüíîé ãðóïïå
áîëüíûõ ÐÌÆ îòìå÷àëîñü ïîâûøåíèå ïðîëèôåðàòèâíîé
àêòèâíîñòè êëåòîê c 617 îòí. åä. (èñõîäíûé óðîâåíü) äî
643 è c 603 îòí. åä. (ïîñëåîïåðàöèîííûé óðîâåíü) äî 643
(ðèñ. 2).  îáîèõ ñëó÷àÿõ óâåëè÷åíèå áûëî îòìå÷åíî ó
7 áîëüíûõ.  îñíîâíîé ãðóïïå ÷åðåç 7 ñóò ðåãèñòðèðîâàëîñü ñíèæåíèå ïðîëèôåðàöèè êëåòîê c 617 îòí. åä. (èñõîäíûé óðîâåíü) äî 558 è c 597 îòí. åä. (ïîñëåîïåðàöèîííûé óðîâåíü) äî 558. Ýòè ðàçíîíàïðàâëåííûå ðàçëè÷èÿ
ÿâëÿþòñÿ ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíûìè (P < 0.05) â îáîèõ
ñëó÷àÿõ.
Îáñóæäåíèå
 íàñòîÿùåì èññëåäîâàíèè ïîêàçàíî, ÷òî èñõîäíàÿ
(äî îïåðàöèè) ïðîëèôåðàòèâíàÿ àêòèâíîñòü ïåðâè÷íûõ
êóëüòóð (ÔÁ è ÊÖ) ïðè êóëüòèâèðîâàíèè â ñðåäå ñ ñûâîðîòêîé êðîâè áîëüíûõ ÐÌÆ áûëà íèæå, ÷åì â ïðèñóòñòâèè ÝÒÑ, â ñðåäíåì íà 44.8 %. Ïî ýòîìó ïîêàçàòåëþ áîëüíûå ÐÌÆ îòëè÷àëèñü îò çäîðîâûõ äîáðîâîëüöåâ, âëèÿíèå
ñûâîðîòêè êîòîðûõ íà ïðîëèôåðàöèþ ÔÁ è ÊÖ áûëî ñîïîñòàâèìî ñ òàêîâûì ÝÒÑ (Ñàìîéëîâà è äð., 2003; Áîãà÷åâà è äð., 2004). Ìîæíî ïðåäïîëàãàòü, ÷òî îñîáåííîñòü
ñûâîðîòêè êðîâè îíêîëîãè÷åñêèõ áîëüíûõ ÿâëÿåòñÿ îäíîé èç ïðè÷èí âÿëîãî òå÷åíèÿ ó íèõ ïðîöåññîâ çàæèâëåíèÿ ðàí. Âëèÿíèå ñûâîðîòêè áîëüíûõ ÐÌÆ íà ïðîëèôåðàöèþ îïóõîëåâûõ êëåòîê òàêæå áûëà â ñðåäíåì íà
33.4 % íèæå, ÷åì âëèÿíèå ÝÒÑ. Èñêëþ÷åíèå ñîñòàâëÿëè
êëåòêè Hs578T, óðîâåíü ïðîëèôåðàöèè êîòîðûõ çà 1 ñóò
789
äî îïåðàöèè äîñòîâåðíî íå îòëè÷àëñÿ îò ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè êëåòîê ïðè êóëüòèâèðîâàíèè ñ ÝÒÑ.
×åðåç 1 ñóò ïîñëå õèðóðãè÷åñêîãî óäàëåíèÿ îïóõîëè
ïðîëèôåðàòèâíàÿ àêòèâíîñòü âñåõ âèäîâ èçó÷åííûõ â
äàííîé ðàáîòå êëåòîê (êàê íîðìàëüíûõ, òàê è îïóõîëåâûõ) íå èçìåíÿëàñü. Îíà íå ìåíÿëàñü è â êóðñå ñòàíäàðòíîãî ïîñëåîïåðàöèîííîãî ëå÷åíèÿ áîëüíûõ, òîãäà êàê ÷åðåç 7 ñóò ïîñëå êóðñà ôîòîòåðàïèè Í è ÁÈÊ ñâåòîì ïðîèñõîäèëî óâåëè÷åíèå ïðîëèôåðàöèè ÔÁ íà 22 %
îòíîñèòåëüíî èñõîäíîãî óðîâíÿ, à äëÿ ÊÖ — íà 28 %
îòíîñèòåëüíî ïîñëåîïåðàöèîííîãî óðîâíÿ. Âìåñòå ñ òåì
ïðîëèôåðàöèÿ êëåòîê BT-474, Hs578T è À431 â ïðèñóòñòâèè ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíûõ ñíèæàëàñü îòíîñèòåëüíî
äîîïåðàöèîííîãî (èñõîäíîãî) óðîâíÿ íà 31.5, 9 è 6.5 %
ñîîòâåòñòâåííî, à äëÿ îïóõîëåâûõ êëåòîê BT-474,
HBL-100, Hs578T è À431 â ñðàâíåíèè ñ ïîñëåîïåðàöèîííûì óðîâíåì — íà 32, 16, 8.6 è 6.3 % ñîîòâåòñòâåííî.
Ïðè îáñóæäåíèè âîçìîæíûõ ìåõàíèçìîâ òàêèõ èçìåíåíèé ïðîëèôåðàöèè êëåòîê íåîáõîäèìî îáðàòèòüñÿ ê
äàííûì, ïîëó÷åííûì íàìè â ïðåäûäóùèõ èññëåäîâàíèÿõ.
Ñîãëàñíî îäíîìó èç íèõ, óæå ÷åðåç 30 ìèí ïîñëå îáëó÷åíèÿ Í è ÁÈÊ ñâåòîì äîáðîâîëüöåâ èëè îáðàçöîâ èõ êðîâè in vitro â ïëàçìå ñíèæàåòñÿ ñîäåðæàíèå ïðîâîñïàëèòåëüíûõ öèòîêèíîâ (TNF-a, IL-6 è IL-12) è âîçðàñòàåò óðîâåíü ðîñòîâûõ ôàêòîðîâ PDGF è TGF-b1 (Æåâàãî è äð.,
2005). Ïðè÷åì ó äîáðîâîëüöåâ ñ íåâûñîêèì èñõîäíûì
óðîâíåì PDGF åãî ñîäåðæàíèå â ïëàçìå êðîâè óâåëè÷èâàåòñÿ íà 20 %, à ÷åðåç 24 ÷ — íà 24 %; â ýòè æå ñðîêè ïðè
èñõîäíî íèçêîì ñîäåðæàíèè âîçðàñòàåò è óðîâåíü TGF-b1
íà 43 è 38 % ñîîòâåòñòâåííî. Ýòè èçìåíåíèÿ êîððåëèðîâàëè ïî âðåìåíè ñ ïîâûøåíèåì ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè ÔÁ.
Õîòÿ PDGF è ýïèäåðìàëüíûé ôàêòîð ðîñòà (ÝÔÐ),
êîíöåíòðàöèÿ êîòîðûõ â êðîâè ïîñëå ñâåòîâîãî âîçäåéñòâèÿ ïîâûøàåòñÿ ïðåæäå âñåãî â ñâÿçè ñ âûõîäîì èç òðîìáîöèòîâ (Kiaru et al., 1991), ñòèìóëèðóþò ïðîëèôåðàòèâíûå ïðîöåññû, â îïóõîëåâûõ êëåòêàõ ýòè öèòîêèíû ìîãóò
îêàçûâàòü ïðîòèâîïîëîæíûé ýôôåêò è èíäóöèðîâàòü
àïîïòîç (Armstrong et al., 1994).  ÷àñòíîñòè, ÝÔÐ çàïóñêàåò ïðîöåññ ãèáåëè êëåòîê ÐÌÆ, êîòîðûå ýêñïðåññèðóþò ïîâûøåííîå êîëè÷åñòâî ðåöåïòîðà ê ýòîìó öèòîêèíó.
Âåðîÿòíî, èìåííî ýòèì ìîæíî îáúÿñíèòü îáíàðóæåííîå â
äàííîì èññëåäîâàíèè ñíèæåíèå ïðîëèôåðàöèè êëåòîê
A431, òàê êàê íà ïîâåðõíîñòè ýòèõ êëåòîê òàêæå ðàñïîëàãàåòñÿ îãðîìíîå êîëè÷åñòâî ðåöåïòîðîâ ê ÝÔÐ.
Ñîãëàñíî èìåþùèìñÿ äàííûì (Æåâàãî è äð., 2005),
îñîáåííîñòüþ âëèÿíèÿ ÍÂ è ÁÈÊ ñâåòà íà öèòîêèíîâóþ
ñåòü ÿâëÿåòñÿ ïî÷òè 6-êðàòíîå óâåëè÷åíèå ñîäåðæàíèÿ â
ïëàçìå IFN-g è â ñðåäíåì 5-êðàòíîå âîçðàñòàíèå óðîâíÿ
ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîãî öèòîêèíà IL-10. Ïîâûøåíèå ñîäåðæàíèÿ IFN-g ïðè âîçäåéñòâèè âèäèìîãî ëàçåðíîãî ñâåòà îòìå÷àåòñÿ òàêæå â èññëåäîâàíèè Ëåîíîâîé ñ ñîòðóäíèêàìè (1994). Ïîñêîëüêó ÔÁ ÷åëîâåêà èìåþò ðåöåïòîðû
è ê IFN-, è ê IL-10 (Anderson, Nagler, 1984; Ritchin, Haas-Smith, 2001), ñëåäóåò îáñóäèòü âîçìîæíûå ïîñëåäñòâèÿ
èõ âëèÿíèÿ íà ôóíêöèîíàëüíîå ñîñòîÿíèå êëåòîê ñîåäèíèòåëüíîé òêàíè.
Àíòèïðîëèôåðàòèâíûå ñâîéñòâà IFN-g õîðîøî èçâåñòíû, è â ïðîöåññàõ ðàíîçàæèâëåíèÿ ýòîìó öèòîêèíó îòâîäèòñÿ ðîëü èíãèáèòîðà ïðîëèôåðàöèè è ìèãðàöèè ÔÁ
(Eisenbeiss et al., 1998). Îäíàêî èìåþòñÿ äàííûå î òîì,
÷òî IFN-g ïîäàâëÿåò ïðîëèôåðàöèþ òîëüêî áûñòðî ðàçìíîæàþùèõñÿ ÔÁ, à ïîêîÿùèåñÿ êëåòêè îí ñòèìóëèðóåò
(Elias et al., 1987). Ó êóëüòèâèðóåìûõ ÔÁ êîíúþíêòèâû
÷åëîâåêà IFN-g ïîäàâëÿåò ïðîäóêöèþ ýêñòðàöåëëþëÿðíî-
790
À. À. Çèìèí, Ê. À. Ñàìîéëîâà, Í. À. Æåâàãî
ãî ìàòðèêñà è ìèãðàöèþ êëåòîê, íî íå âëèÿåò íà èõ ïðîëèôåðàöèþ (Yamanaka et al., 2003). Ñ äðóãîé ñòîðîíû,
ýòîò öèòîêèí ñòèìóëèðóåò â äîçîçàâèñèìîé ìàíåðå ïðîëèôåðàöèþ ÔÁ çóáíîé ïóëüïû ÷åëîâåêà (Melin et al.,
1989). Â ëèòåðàòóðå òàêæå ïðèâîäÿòñÿ äàííûå î âëèÿíèè
IL-10 íà ïðîëèôåðàöèþ ÔÁ è çàæèâëåíèå ðàí. Ïî äàííûì
íåêîòîðûõ àâòîðîâ (Dosanjh et al., 2001), êîíäèöèîíèðîâàííàÿ ñðåäà, ïîëó÷åííàÿ îò ýïèòåëèàëüíûõ êëåòîê áðîíõîâ çäîðîâîãî ÷åëîâåêà, ñîäåðæèò áîëüøîå êîëè÷åñòâî
IL-10 è ñòèìóëèðóåò ðîñò ëåãî÷íûõ ÔÁ. Òàêèì æå ñâîéñòâîì îáëàäàåò îáû÷íàÿ ïèòàòåëüíàÿ ñðåäà, ê êîòîðîé äîáàâëåí IL-10 â êîíöåíòðàöèÿõ 100, 200 è 500 ïã/ìë.
Ñ äðóãîé ñòîðîíû, â äåðìàëüíûõ ðàíàõ ýìáðèîíîâ ìûøåé
áëàãîäàðÿ âûñîêîìó ñîäåðæàíèþ IL-10 ñíèæàþòñÿ ñîäåðæàíèå ïðîâîñïàëèòåëüíûõ öèòîêèíîâ è ñòåïåíü ñàìîãî
âîñïàëèòåëüíîãî ïðîöåññà, ÷òî ñäåðæèâàåò ãèïåðïðîäóêöèþ êëåòîê ñîåäèíèòåëüíîé òêàíè (Liechty et al., 2000).
Íà ýòîì îñíîâàíèè àâòîðû ïîëàãàþò, ÷òî IL-10 íåîáõîäèì äëÿ áåçðóáöîâîé ðåãåíåðàöèè ðàí. Ìåõàíèçì ïîâûøåíèÿ ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè ÊÖ ó áîëüíûõ ÐÌÆ
ìîæåò áûòü ñâÿçàí ñ äåéñòâèåì ñâåòà íå òîëüêî íà êðîâü,
íî è íà êîìïîíåíòû ïîâåðõíîñòíûõ îòäåëîâ êîæè. Çíà÷èòåëüíûé âêëàä, ïî-âèäèìîìó, âíîñÿò ñàìè ÊÖ. Ýòè êëåòêè
ïðîäóöèðóþò êîíñòèòóòèâíî èëè ïîä äåéñòâèåì èíäóêòîðîâ ðàçëè÷íûå öèòîêèíû (IL 1a, 1b, 6, 7, 8, 10, 12, 18, 20,
TNF-a, IFN a, b è g), íåêîòîðûå èç êîòîðûõ ñòèìóëèðóþò
ïðîëèôåðàöèþ ÊÖ (IL-4, IL-6), èíäóöèðóþò èõ õåìîòàêñèñ (IL-1, IL-8, TNF-a è IFN-g) è äèôôåðåíöèðîâêó
(IFN-g) (Gröne, 2002). ÊÖ ñåêðåòèðóþò òàêæå ðîñòîâûå
ôàêòîðû, íåîáõîäèìûå äëÿ ïðîöåññîâ ðåãåíåðàöèè êîæè.
Ñðåäè íèõ ëèãàíäû äëÿ ðåöåïòîðîâ EGF — EGF, TGFa,
ãåïàðèíñâÿçûâàþùèé EGF-ïîäîáíûé ôàêòîð (HB-EGF) è
àìôèðåãóëèí. Îíè ñèíòåçèðóþòñÿ ÊÖ â ìåìáðàííî-ñâÿçàííîé ôîðìå è ìîãóò äåñîðáèðîâàòüñÿ ñ ïîâåðõíîñòè ïîä
äåéñòâèåì ðàçëè÷íûõ ôàêòîðîâ (Massague, Pandiella,
1993). Ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ïðè âîçäåéñòâèè íà
êîæó îïòè÷åñêîãî èçëó÷åíèÿ ýòè ðîñòîâûå ôàêòîðû äåñîðáèðóåþòñÿ ñ ïîâåðõíîñòè ÊÖ è, ïîñòóïàÿ â ïëàçìó
êðîâè, ñïîñîáñòâóþò âîçðàñòàíèþ ïðîëèôåðàöèè ýòèõ
êëåòîê. Íå èñêëþ÷åíî òàêæå, ÷òî â óñëîâèÿõ in vivo ñâåò
ïîòåíöèðóåò äåðìàëüíî-ýïèäåðìàëüíûå âçàèìîäåéñòâèÿ,
è ðîñòîâîé ôàêòîð ÊÖ ñåêðåòèðóåòñÿ ÔÁ. Ïîêàçàíî, íàïðèìåð, ÷òî ïðè ðàçäðàæåíèè è ïîâðåæäåíèè êîæè ýïèäåðìàëüíûå êëåòêè ñåêðåòèðóþò IL-1, ÷òî ñòèìóëèðóåò
ñåêðåöèþ ôèáðîáëàñòàìè ôàêòîðà ðîñòà êåðàòèíîöèòîâ
(Maas-Szabowski et al., 2000).
Ïîâûøåíèå ìèòîãåííîé àêòèâíîñòè ïëàçìû äëÿ ÔÁ
ïðè ôîòîìîäèôèêàöèè êðîâè ìîæåò áûòü òàêæå ñâÿçàíî ñ
âîçäåéñòâèåì ñâåòà íà òðîìáîöèòû è âûõîäîì èõ íèõ âåùåñòâ áåëêîâîé ïðèðîäû (Ñàìîéëîâà è äð., 2003; Áîãà÷åâà è äð., 2004). Ïîêàçàíî, ÷òî ïðè àêòèâàöèè êðîâÿíûõ
ïëàñòèíîê â ïðîöåññå ñâåðòûâàíèÿ êðîâè ÝÔÐ îñâîáîæäàåòñÿ â âèäå íåñêîëüêèõ ôðàêöèé ðàçíîé ìîëåêóëÿðíîé
ìàññû (Kiaru et al., 1991; Hwang et al., 1992). Ðÿäîì àâòîðîâ îïèñàíà âûñîêàÿ ÷óâñòâèòåëüíîñòü òðîìáîöèòîâ ê âèäèìîìó è ÁÈÊ ëàçåðíîìó èçëó÷åíèþ è èõ êîìáèíàöèè.
Òàê, ó îáëó÷åííûõ â ìàëûõ äîçàõ òðîìáîöèòîâ ðåçêî ñíèæàåòñÿ àãðåãàöèîííàÿ ñïîñîáíîñòü (Brill et al., 1996). Ïî
äàííûì äðóãèõ àâòîðîâ (Olban et al., 1998), êðàñíûé ñâåò â
äîçå 1.8—2.0 Äæ ñòèìóëèðóåò â ýòèõ êëåòêàõ îáðàçîâàíèå
ñóïåðîêñèäíûõ ðàäèêàëîâ, ñåêðåöèþ áåëêîâ è àäåíèíîâûõ íóêëåîòèäîâ.
Äàííûå ëèòåðàòóðû ñâèäåòåëüñòâóþò î ñïîñîáíîñòè
IFN-g èíãèáèðîâàòü ïðîëèôåðàöèþ êëåòîê âñåõ ëèíèé
ÐÌÆ, êîòîðûå èçó÷àëè â íàñòîÿùåé ðàáîòå. Ðîñò êëåòîê
HBL-100 òîðìîçèòñÿ ïðè äîáàâëåíèè IFN-g (Tsai, Gaffney,
1987). Àíàëîãè÷íûé ýôôåêò ðàçâèâàåòñÿ ïðè äîáàâëåíèè
IFN-g è ê êëåòêàì BT-474 (Kopreski et al., 1996). Â îòíîøåíèè êëåòîê Hs578T óñòàíîâëåí ìåõàíèçì àêòèâàöèè
èíòåðôåðîíðåãóëèðóþùåãî ôàêòîðà IRF-1, êîòîðûé îêàçûâàåò èíãèáèðóþùåå âëèÿíèå íà ýòó ëèíèþ îïóõîëåâûõ
êëåòîê (Yim et al., 2003). Óãíåòåíèå ïðîëèôåðàöèè ýòèõ
êëåòîê ïðè äåéñòâèè IFN-g òàêæå îïèñûâàåòñÿ â ðàáîòå
äðóãèõ àâòîðîâ (Mueller et al., 1996). Âëèÿíèå IFN-g íà
ïðîëèôåðàöèþ êëåòîê A431 ñõîäíî ñ ýôôåêòîì íà êëåòêè
ÐÌÆ ÷åëîâåêà: ïðîèñõîäèò àêòèâàöèÿ ïðîöåññà êëåòî÷íîé ãèáåëè ïîñðåäñòâîì âëèÿíèÿ íà òðàíñêðèïöèîííûé
ôàêòîð STAT1 (Chin et al., 1997).
 óñëîâèÿõ in vitro IFN-g ñïîñîáåí èíäóöèðîâàòü
àïîïòîç êëåòîê ÐÌÆ â êîìáèíàöèè ñ ïðîòèâîîïóõîëåâûìè ïðåïàðàòàìè (Ossina et al., 1997) è àíòèìåòàáîëèòàìè
(Koshiji et al., 1997). Ïðîòèâîîïóõîëåâàÿ àêòèâíîñòü IFN-g
òàêæå îòìå÷àåòñÿ è â êëèíè÷åñêèõ èññëåäîâàíèÿõ. Ó áîëüíûõ ÐÌÆ ñ ìåòàñòàçàìè â êîæó ìåñòíûå èíúåêöèè
IFN-g ïðèâîäèëè ê èõ ÷àñòè÷íîé èëè ïîëíîé ðåãðåññèè
(Habif et al., 1995). Äðóãèå àâòîðû ïðèâîäÿò äàííûå î ïîâûøåíèè ñïîñîáíîñòè òàìîêñèôåíà â êîìáèíàöèè ñ IFN-g
èíãèáèðîâàòü ðîñò îïóõîëè ó áîëüíûõ ñ äèññåìèíèðîâàííûì ÐÌÆ (Seymour, Bezwoda, 1993). Îïðåäåëåííûé ïðîðûâ â îáëàñòè ïðàêòè÷åñêîãî èñïîëüçîâàíèÿ òêàíåâûõ
ìàðêåðîâ, ñâÿçàííûõ ñ îïîñðåäîâàííîé ðåöåïòîðàìè ÝÔÐ
ðåãóëÿöèåé ðîñòà ðàêà ìîëî÷íîé æåëåçû, ïðîèçîøåë ïîñëå ïîÿâëåíèÿ ïðåïàðàòà Ãåðöåïòèí, ïðåäñòàâëÿþùåãî
ñîáîé àíòèòåëà ê HER2/neu — îäíîìó èç ðåöåïòîðîâ ñåìåéñòâà ErbB, ê êîòîðîìó ïðèíàäëåæèò è ðåöåïòîð ÝÔÐ.
Äåéñòâèå IFN-g íà êëåòêè ÐÌÆ ÷åëîâåêà ëèíèé BT-474 è
MCF-7 ïðèâîäèò ê ïîâûøåíèþ ýêñïðåññèè ðåöåïòîðà
HER2/neu è óñèëåíèþ ñâÿçûâàíèÿ àíòèòåë ïðîòèâ ýòîãî
ðåöåïòîðà, ÷òî â èòîãå ïîâûøàåò ýôôåêòèâíîñòü ïðèìåíåíèÿ Ãåðöåïòèíà (Fan et al., 2006).
Ìíîãèå ýôôåêòû öèòîêèíîâ çàâèñÿò íå òîëüêî îò èõ
ñîáñòâåííûõ, íî òàêæå è îò ñâîéñòâ äðóãèõ öèòîêèíîâ è
áèîëîãè÷åñêè àêòèâíûõ âåùåñòâ, ñîâìåñòíî ñ êîòîðûìè
îñóùåñòâëÿåòñÿ äåéñòâèå íà îïóõîëåâûå êëåòêè â ýêñïåðèìåíòå. Ýòî õîðîøî èëëþñòðèðóåòñÿ â èññëåäîâàíèè
ãðóïïû àâòîðîâ (Sun et al., 2000), â êîòîðîì ó ìûøåé ñ ýêñïåðèìåíòàëüíûìè îïóõîëÿìè ÐÌÆ ïðîòèâîîïóõîëåâîå
äåéñòâèå IL-10 çàâèñåëî îò ïðèñóòñòâèÿ îêñèäà àçîòà
(NO). Èíãèáèðîâàíèå NO-ñèíòàçû ôàðìàêîëîãè÷åñêèìè
ïðåïàðàòàìè çíà÷èòåëüíî ñíèæàëî àíòèïðîëèôåðàòèâíûå
ñâîéñòâà IL-10. Ýêñïðåññèÿ NO-ñèíòàçû óñèëèâàëàñü ïðè
äåéñòâèè IFN-g. Òàêèì îáðàçîì, êîíå÷íûé èíãèáèðóþùèé ýôôåêò íà îïóõîëåâûå êëåòêè îïðåäåëÿëñÿ ñîâìåñòíûì äåéñòâèåì óêàçàííûõ âåùåñòâ. Ìåæäó òåì, ïî íàøèì äàííûì (Samoilova et al., 2008), ïîëèõðîìàòè÷åñêèé
ñâåò ñòèìóëèðóåò NO-ñèíòàçó è ñïîñîáñòâóåò ïîâûøåíèþ óðîâíÿ NO â öèðêóëÿöèè.
Îáíàðóæåííîå â íàñòîÿùåì èññëåäîâàíèè èíãèáèðîâàíèå ïðîëèôåðàöèè êëåòîê ÐÌÆ ìîæåò ñëóæèòü îäíèì
èç îáîñíîâàíèé îíêîëîãè÷åñêîé áåçîïàñíîñòè ïðèìåíåíèÿ Í è ÁÈÊ ñâåòà äëÿ ëå÷åíèÿ áîëüíûõ ÐÌÆ. Óñèëåíèå æå ïîñëå òàêîãî êóðñà ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè
ÊÖ è ÔÁ ìîæåò ñîñòàâëÿòü îäíî èç îáúÿñíåíèé óñèëåíèÿ
ïðîöåññîâ ðåãåíåðàöèè ðàí è ñíèæåíèÿ ÷àñòîòû îñëîæíåíèé ïîñëå õèìèî- è ëó÷åâîé òåðàïèè ó áîëüíûõ ñ ýòèì
çëîêà÷åñòâåííûì çàáîëåâàíèåì.
Ïðîëèôåðàöèÿ íîðìàëüíûõ è îïóõîëåâûõ êëåòîê â ïðèñóòñòâèè ñûâîðîòêè êðîâè
Ñïèñîê ëèòåðàòóðû
Áåëèøåâà Í. Ê., Ñàìîéëîâà Ê. À. 1984. Ìåõàíèçì êëèíè÷åñêèõ ýôôåêòîâ ÓÔ-îáëó÷åííîé êðîâè: ñòèìóëÿöèÿ ÄÍÊ-ñèíòåòè÷åñêîé àêòèâíîñòè êëåòîê ÷åëîâåêà â êóëüòóðå. Áþë. ýêñïåðèì. áèîë. ìåä. 12 : 675—678.
Áîãà÷åâà Î. Í., Ñàìîéëîâà Ê. À., Æåâàãî Í. À., Îáîëåíñêàÿ Ê. Ä., Áëèíîâà Ì. È., Êàëìûêîâà Í. Â., Êóçüìèíûõ Å. Â.
2004. Ïîâûøåíèå ðîñòîñòèìóëèðóþùåé àêòèâíîñòè êðîâè ÷åëîâåêà äëÿ ôèáðîáëàñòîâ ïîñëå åå îáëó÷åíèÿ in vivo (òðàíñêóòàííî) è in vitro âèäèìûì è èíôðàêðàñíûì ïîëÿðèçîâàííûì
ñâåòîì. Öèòîëîãèÿ. 46 (2) : 159—171.
Æåâàãî Í. À., Ñàìîéëîâà Ê. À., Îáîëåíñêàÿ Ê. Ä., Ñîêîëîâ Ä. È. 2005. Èçìåíåíèå ñîäåðæàíèÿ öèòîêèíîâ â ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè äîáðîâîëüöåâ ïîñëå îáëó÷åíèÿ ïîëèõðîìàòè÷åñêèì âèäèìûì è èíôðàêðàñíûì ñâåòîì. Öèòîëîãèÿ. 47 (5) :
450—460.
Æåâàãî Í. À., Ñàìîéëîâà Ê. À., Ñîêîëîâ Ä. È., Îáîëåíñêàÿ Ê. Ä. 2002. Íåìåäëåííûå èçìåíåíèÿ ñîîòíîøåíèÿ ïðî- è
ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíûõ öèòîêèíîâ â êðîâè ÷åëîâåêà ïîñëå åå
îáëó÷åíèÿ in vivo è in vitro ïîëèõðîìàòè÷åñêèì ñâåòîì â òåðàïåâòè÷åñêèõ äîçàõ. Öèòîêèíû è âîñïàëåíèå. 1 (2): 87—88.
Ëåîíîâà Ã. Í., Ìàéñòðîâñêàÿ Î. Ñ., ×óäíîâñêèé Â. Ì.
1994. Ãåëèé-íåîíîâîå èçëó÷åíèå êàê èíäóêòîð èíòåðôåðîíîîáðàçîâàíèÿ. Âîïð. âèðóñîë. 39 (3) : 119—121.
Ïðîñêóðÿêîâ Ñ. ß., Êîíîïëÿíèêîâ À. Ã., Èâàííèêîâ À. È.,
Ñêâîðöîâ Â. Ã., Öûá À. Ô. 2000. Îêñèä àçîòà è òåðàïèÿ çëîêà÷åñòâåííûõ íîâîîáðàçîâàíèé. Ðîñ. îíêîë. æóðí. 3 : 41—45.
Ñàìîéëîâà Ê. À., Áåëèøåâà Í. Ê., Çàðèöêèé À. Þ., Ìèðîíîâà À. Ï., Ôèðóëèíà È. È. 1984. Ïîâûøåíèå ðîñòîñòèìóëèðóþùèõ ñâîéñòâ êðîâè ÷åëîâåêà ïîñëå åå îáëó÷åíèÿ ÓÔ ëó÷àìè.
Öèòîëîãèÿ. 26 (9) : 1088—1089.
Ñàìîéëîâà Ê. À., Áîãà÷åâà Î. Í., Îáîëåíñêàÿ Ê. Ä., Áëèíîâà Ì. È., Êàëìûêîâà Í. Â., Êóçüìèíûõ Å. Â. 2003. Ïîâûøåíèå
ðîñòîñòèìóëèðóþùåé àêòèâíîñòè êðîâè ÷åëîâåêà äëÿ êåðàòèíîöèòîâ ïîñëå åå îáëó÷åíèÿ in vivo (òðàíñêóòàííî) è in vitro
âèäèìûì è èíôðàêðàñíûì ïîëÿðèçîâàííûì ñâåòîì. Öèòîëîãèÿ. 45 (6) : 596—605.
Òàðóòèíîâ Â. È., Ãàìàëåÿ Í. Ô., Ñêëÿð Ñ. Þ., Áóêàâèí À. Ñ., Ðóäûõ Ç. Ì., Ñòàäíèê Â. ß., Ãàëàõèí Ê. À., Ñêèâêà Ë. Ì., Òêà÷åâ Â. À., Âåðáåöêèé Â. Â. 1996. Ïðèìåíåíèå ëàçåðíîé òåðàïèè â ïðåäîïåðàöèîííîì ïåðèîäå ó áîëüíûõ ðàêîì ìîëî÷íîé æåëåçû. Êëèí. õèðóðãèÿ. 1 : 31—34.
Òîòîëÿí À. À., Ôðåéäëèí È. Ñ. 1999. Êëåòêè èììóííîé ñèñòåìû. ÑÏá.: Íàóêà. 231 ñ.
Òþëÿíäèí Ñ. À., Ìîèñååíêî Â. Ì. 2004. Ýïèäåìèîëîãè÷åñêèå ôàêòîðû ðèñêà, ðàííÿÿ äèàãíîñòèêà ðàêà ìîëî÷íîé æåëåçû.  êí.: Ïðàêòè÷åñêàÿ îíêîëîãèÿ: èçáðàííûå ëåêöèè. ÑÏá.:
Öåíòð ÒÎÌÌ. 15—22.
Þäèíöåâà Í. Ì., Ãîðåëèê Þ. Â., Äüÿêîíîâ È. À., Êàëìûêîâà Í. Â., Áëèíîâà Ì. È., Ïèíàåâ Ã. Ï., Ïàðàìîíîâ Á. À. 1999.
Òðàíñïëàíòàöèÿ àëëîãåííûõ ýïèòåëèàëüíûõ ïëàñòîâ êåðàòèíîöèòîâ íà îæîãîâûå ðàíû. Öèòîëîãèÿ. 41 (3/4) : 328.
Anderson P., Nagler C. 1984. Photoaffinity labeling of an interferon-gamma receptor on the surface of cultured fibroblasts. Biochem. Biophys. Res. Commun. 16 : 828—833.
Armstrong D. K., Kaufmann S. H., Ottaviano Y. L., Furuya Y.,
Buckley J. A., Isaacs J. T., Davidson N. E. 1994. Epidermal growth
factor-mediated apoptosis of MDA-MB-468 human breast cancer
cells. Cancer Res. 54 : 5280—5283.
Brill A. G., Kirichuk V. F., Brill G. E. 1996. Influence of
He-Ne laser irradiation on platelet aggregation. Laser Therapy. 8 :
63—65.
Chin Y. E., Kitagawa M., Kuida K., Flavell R. A., Fu X. Y.
1997. Activation of the STAT signaling pathway can cause expression of caspase 1 and apoptosis. Mol. Cell. Biol. 17 : 5328—
5337.
Dosanjh A., Morris R. E., Wan B. 2001. Bronchial epithelial
cell-derived cytokine IL-10 and lung fibroblast proliferation. Transplant. Proc. 33 : 352—354.
Eisenbeiss W., Peter F. W., Bakhtiari C., Frenz C. 1998. Hypertrophic scars and keloids. J. Wound Care. 7 : 255—257.
791
Elias J. A., Jimenez S. A., Freundlich B. 1987. Recombinant
gamma, alpha, and beta interferon regulation of human lung fibroblast porliferation. Amer. Rev. Respir. Dis. 135 : 62—65.
Fan Y. X., Luo R. C., Fang Y. X., Yan X., Lu C. W. 2006. Effects of interferon-gamma on Her-2/neu expression and antitumor
activity of 131I-Herceptin in breast cancer cell lines. Ai Zheng. 25 :
443—446.
Grone A. 2002. Keratinocytes and cytokines. Vet. Immunol.
Immunopathol. 88 : 1—12.
Habif D., Ozello C., De la Rossa C., Cantell K., Lattes R. 1995.
Regression of skin recurrences of breast cancer treated with intralesional injections of natural interferon alpha and gamma. Cancer Invest. 13 : 165—173.
Hwang D. L., Lev-Ran A., Yen C. F., Sniecinski I. 1992. Release of different fractions of epidermal growth factor from human platelets in vitro: preferential release of 140kDa fraction. Regul. Pept.
37 : 95—100.
Karu T. J., Pyatibrat L. V. 1987. Biostimulation of HeLa cells
by low-intensity visible light. V. Stimulation of cell proliferation in
vitro by He-Ne laser irradiation. Novo Cimento. 9D. N12 : 1485—
1494.
Kiaru J., Viinikka L., Myllyla G., Pesonen K., Perheentupa J.
1991. Cytoskeleton-dependent release of human platelet epidermal
growth factor. Life Sci. 49 : 1997—2003.
Kopreski M. S., Lipton A., Harvey H. A., Kumar R. 1996.
Growth inhibition of breast cancer cell lines by combinations of anti-P185HER2 monoclonal antibody and cytokines. Anticancer Res.
16 : 433—436.
Koshiji M., Adachi Y., Taketani S., Takeuchi K., Hioki K., Ikehara S. 1997. Mechanisms underlying apoptosis induced by combination of 5-fluorouracil and interferon-g. Biochem. Biophys. Res.
Commun. 240 : 376—381.
Kueng W., Silber E., Eppenberger U. 1989. Quantification of
cells cultured on 96-well plates. Anal. Biochem. 182 : 16—19.
Liechty K. W., Kim H. B., Adzick N. S., Crombleholme T. M.
2000. Fetal wound repair results in scar formation in interleukin-10-deficient mice in a syngeneic murine model of scarless fetal
wound repair. J. Pediatr. Surg. 35 : 866—873.
Maas-Szabowski N., Stark H., Fusenig N. E. 2000. Keratinocyte growth regulation in defined organotypic cultures through IL-1
induced keratinocyte growth factor expression in resting fibroblast.
J. Invest. Dermatol. 114 : 1075—1084.
Massague J., Pandiella A. 1993. Membrane-anchored growth
factors. Annu. Rev. Biochem. 62 : 515—541.
Melin M., Hartmann D. J., Magloire H., Falcoff E., Auriault C., Grimaud J. A. 1989. Human recombinant gamma-interferon
stimulates proliferation and inhibits collagen and fibronectin production by human dental pulp fibroblasts. Cell. Mol. Biol. 35 :
97—110.
Mosman T. 1983. Rapid colometric assay for cellular growth
and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. J.
Immunol. Meth. 65 : 55—63.
Mueller H., Flury N., Liu R., Scheidegger S., Eppenberger U.
1996. Tumour necrosis factor and interferon are selectively cytostatic in vitro for hormone-dependent and hormone-independent human breast cancer cells. Eur. J. Cancer. 32A : 2312—2318.
Olban M., Wachowicz Â., Koter M., Bryszewska M. 1998. The
biostimulatory effect of red laser irradiation on pig blood platelet
function. Cell Biol. Int. 22 : 245—248.
Ossina N. K., Cannas A., Powers V. C., Fitzpatrick P. A.,
Knight J. D., Gilbert J. R., Shekhtman E. M., Tomei L. D., Umansky S. R., Kiefer M. C. 1997. Interferon-g modulates a p53-independent apoptotic pathway and apopthosis-related gene expression. J.
Biol. Chem. 272 : 16 351—16 357.
Pinheiro A. L., Nascliento S. C., Vieira A. L., Rolim A. B., Silva P. S., Brugnera A., Jr. 2002. Does LLLT stimulate laryngeal carcinoma cells? An in vitro study. Braz. Dent. J. 13 : 109—
112.
Renno A. C., McDonnel P. A., Parizotto N. A., Laakso E. L.
2007. The effects of laser irradiation on osteoblast and osteosarcoma cell proliferation and differentiation in vitro. Photomed. Laser
Surg. 25 : 275—280.
792
À. À. Çèìèí, Ê. À. Ñàìîéëîâà, Í. À. Æåâàãî
Rheinwald J. G., Green H. 1975. Serial cultivation of a strain
of human epidermal keratinocytes: the formation of keratinizing colonies from single cells. Cell. 6 : 331—334.
Ritchlin C., Haas-Smith S. A. 2001. Expression of interleukin
10 mRNA and protein by synovial fibroblastoid cells. J. Rheumatol.
28 : 698—705.
Samoilova K. A., Obolenskaya K. D., Vologdina A. V., Snopov S. A., Shevchenko E. V. 1998. Single skin exposure to visible
polarized light induces rapid modification of entire circulating blood. I. Improvement of rheologic and immune parameters. SPIE
Proc. 3569 : 90—103.
Samoilova K. A., Zhevago N. A., Petrishchev N. N., Zimin A. A.
2008. Role of nitric oxide in the visible light-induced rapid increase of human skin microcirculation at the local and systemic
levels. II. Healthy volunteers. Photomed. Laser Surg. 25 : 275—
280.
Seymour L., Bezwoda W. 1993. Interferon plus tamoxifen treatment for advanced breast cancer: in vivo biological effects of two
growth modulator. Br. J. Cancer. 68 : 352—356.
Sun H., Gutierrez P., Jackson M. J., Kundu N., Fulton A. M.
2000. Essential role of nitric oxide and interferon-gamma for tumor
immunotherapy with interleukin-10. J. Immunother. 23 : 208—214.
Tsai S. C., Gaffney E. V. 1987. Modulation of cell proliferation
by human recombinant interleukin-1 and immune interferon. J. Nat.
Cancer Inst. 79 : 77—81.
Yamanaka O., Saika S., Okada Y., Ooshima A., Ohnishi Y.
2003. Effects of interferon-gamma on human subconjunctival fibroblasts in the presence of TGF beta 1: reversal of TGF beta-stimulated collagen production. Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol.
241 : 116—124.
Yim J. H., Ro S. H., Lowney J. K., Wu S. J., Connett J., Doherty G. M. 2003. The role of interferon regulatory factor-1 and interferon regulatory factor-2 in IFN-gamma growth inhibition of human breast carcinoma cell lines. J. Interferon Cytokine Res. 23 :
501—511.
Zimin A. A., Zhevago N. A., Samoilova K. A. 2008. Low power
visible and near IR light in clinical oncology. Photodiagnosis Photodyn. Ther. 5 : 37—38.
Ïîñòóïèëà 15 III 2010
PROLIFERATION OF NORMAL AND TUMOR CELLS AT THE PRESENCE
OF SERUM FROM PATIENTS WITH BREAST CANCER AFTER PHOTOTHERAPY
WITH VISIBLE AND NEAR INFRARED LIGHT
A. A. Zimin, K. A. Samoilova, N. A. Zhevago
Institute of Cytology, RAS, St. Petersburg;
e-mail: [email protected]
Simultaneous low-intensity visible (VIS) and near infrared (nIR) irradiation from laser and non-laser sources was used for treatment of complications developing in cancer patients after surgical tumor resection, chemoand radiation therapy. However, the question remains about the impact of this physiotherapeutic method on proliferative activity of the patients’ tumor cells and cells involved in wound healing, fibroblasts (FB) and keratinocytes (KC). In this paper, we studied the effect blood serum obtained from the patients with breast cancer after
the course of irradiation with visible and NI light (480—3400 nm, 95 % polarization, 40 mW/cm2, 12 J/cm2) in
postoperative period on the proliferative activity of primary cultures of human FB and KC, and of several human tumor cell lines (BT-474, HBL-100, Hs578T and À431). Seven-day course of phototherapy increase proliferation of FB (as compared to the initial level) and KC (as compared to postoperative level) by 22 and 28 %,
respectively. The tumor cells BT-474, Hs578T and À431 showed statistically significant decrease in proliferative activity compared with the preoperative (initial) level by 31.5, 8.97 and 6.47 %, respectively, whereas the
cells BT-474, HBL-100, Hs578T and À431 also reduced their proliferative activity by 32, 16, 8.65 and 6.26 %,
respectively, as compared with postperative level. The results obtained demonstrate the safety of the phototherapy with the visible and NI light for BC patients in the postoperative period.
K e y w o r d s: breast cancer, blood growth factors of cancer patients, phototherapy, polychromatic visible
and infrared irradiation, proliferation of tumor cells, proliferation of fibroblasts and keratinocyte primary cultures.