ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ ТЕСТ-СИСТЕМА «АБ-ГРАМОТР» МИКРООРГАНИЗМОВ

ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ
ТЕСТ-СИСТЕМА «АБ-ГРАМОТР» ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫХ
МИКРООРГАНИЗМОВ К АНТИБИОТИКАМ
Тест-система «АБ-ГРАМОТР» для определения чувствительности грамотрицательных микроорганизмов к антибиотикам однократного
использования служит для определения чувствительности грамотрицательных микроорганизмов к антибиотикам в полужидкой среде после 18-24
ч инкубации. Учѐт чувствительности возможен визуально или инструментально с помощью анализатора иммуноферментного АИФ М/340 или
Ф 300 - мультискан и компьютера с программным обеспечением «Мicrobi».
В культуральную среду добавляется бактериальная взвесь, которые затем вносятся в лунки планшета, содержащего лиофильно высушенные
антибиотики. После инкубации производится визуальный или инструментальный учѐт. Резистентные штаммы растут в лунке, делая среду
непрозрачной, а если штамм чувствителен к антибиотику среда остаѐтся прозрачной.
НАЗНАЧЕНИЕ
Тест-система «АБ-ГРАМОТР» для определения чувствительности грамотрицательных микроорганизмов к антибиотикам предназначена для
определения чувствительности грамотрицательных микроорганизмов к антибиотикам.
Область применения тест-системы – клиническая медицина.
СОСТАВ НАБОРА
Компоненты тест-системы «АБ-ГРАМОТР» для определения чувствительности грамотрицательных микроорганизмов к антибиотикам:
96-луночный плоскодонный планшет – 1 шт;
Среда АБ (5+0,1) мл – 4 флакона;
Стерильный раствор хлорида натрия с массовой долей 0,9 %, (5+0,1) мл, в ампуле – 4 ампулы;
Наконечники полипропиленовые стерильные для автоматических дозаторов вместимостью 200 мкл – 4 шт;
Планшет содержит 96 лунок (12 колонок и 8 рядов, по 2 ряда - 24 лунки для определения чувствительности одного штамма микроорганизма).
Всего планшет позволяет определять чувствительность к 23 антибиотикам четырех штаммов микроорганизмов. Последняя лунка каждого четного
ряда не содержит антибиотика и служит для определения положительного контрольного роста. Остальные 23 лунки содержат антибиотик в одной
пороговой концентрации.
Концентрации антибиотиков в лунках планшета (в мкг/мл или г/л после внесения питательной среды) представлены в таблице 1.
Таблица 1. Концентрации антибиотиков в лунках планшета (в мкг/мл или г/л после внесения питательной среды)
Обозначения
Номер лунки
антибиотиков для
1
2
3
4
5
6
7
8
9
рядов:
10
11
12
- A, С, E, G
Амп
8
А+К
16/8
Цеф
64
Цфл
8
Цфт
16
Цфм
32
Цфз
16
Ими
8
Мер
8
Азт
32
Цтр
32
Ази
12
- B, D, F, H
Ген
8
Нет
16
Ами
32
Мок
16
Нор
4
Офл
8
Цип
4
Леф
8
Лом
8
Кот
38
Дио
20
К
Сокращѐнные названия антибиотиков с концентрациями и примечаниями по определению устойчивости представлены в таблице 2.
Таблица 2. Сокращѐнные наименования антибиотиков с концентрациями и примечаниями по определению устойчивости
Антибиотик
Сокращѐнное
наименование
Концентрация, мкг/мл
Примечания
Ампициллин
Амоксициллин/
Клавуланат
Цефоперазон
Амп
8
При наличии роста в лунке, штамм считать устойчивым
А+К
16/8
При наличии роста в лунке, штамм считать устойчивым
Цеф
64
При наличии роста в лунке, штамм считать устойчивым
Цефалексин
Цфл
8
При наличии роста в лунке, штамм считать устойчивым
Цефотаксим
Цфт
16
При наличии роста в лунке, штамм считать устойчивым
Цефепим
Цфм
32
При наличии роста в лунке, штамм считать устойчивым
Цефтазидим
Цфз
16
При наличии роста в лунке, штамм считать устойчивым
Имипенем
Ими
8
При наличии роста в лунке, штамм считать устойчивым
Меропенем
Мер
8
При наличии роста в лунке, штамм считать устойчивым
Азтреонам
Азт
32
При наличии роста в лунке, штамм считать устойчивым
Цефтриаксон
Цтр
32
При наличии роста в лунке, штамм считать устойчивым
Азитромицин
Ази
12
При наличии роста в лунке, штамм считать устойчивым
Гентамицин
Ген
8
При наличии роста в лунке, штамм считать устойчивым
Нетилмицин
Нет
16
При наличии роста в лунке, штамм считать устойчивым
Амикацин
Ами
32
При наличии роста в лунке, штамм считать устойчивым
Моксифлоксацин
Мок
16
При наличии роста в лунке, штамм считать устойчивым
Норфлоксацин
Нор
4
При наличии роста в лунке, штамм считать устойчивым
Офлоксацин
Офл
8
При наличии роста в лунке, штамм считать устойчивым
Ципрофлоксацин
Цип
4
При наличии роста в лунке, штамм считать устойчивым
Левофлоксацин
Леф
8
При наличии роста в лунке, штамм считать устойчивым
Ломефлоксацин
Лом
8
При наличии роста в лунке, штамм считать устойчивым
Ко-тримоксазол
Кот
38
При наличии роста в лунке, штамм считать устойчивым
Диоксидин
Дио
20
При наличии роста в лунке, штамм считать устойчивым
К
0
Наличие роста в лунке обязательно
Контрольная лунка
ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ
Флаконы со средой и планшеты должны быть выдержаны при температуре 18 – 30 °С 20 минут.
Работа с планшетом должны проводиться в стерильном боксе после 30 минут обработки ультрафиолетовым облучением.
Необходимое лабораторное оборудование:
- холодильник;
- термостат электрический с автоматической регулировкой и поддержанием температуры в пределах (37±1)°С;
- спиртовая или газовая горелка;
- дозаторы автоматические с погрешностью 1 % объѐмом от 5 до 50 мкл и от 20 до 200 мкл;
- денситометр, спектрофотометр или стандартный образец оптической плотности 0,5 оптических единиц McFarland ;
- Анализатор иммуноферментный АИФ М/340 или Ф 300 - мультискан;
- программное обеспечение «Мicrobi»;
- IBM совместимый компьютер.
МЕТОДИКА ПОСТАНОВКИ
В стерильный флакон внести 2 мл стерильного раствора хлорида натрия с массовой долей 0,9 %.
Приготовить взвесь бактерий.
Для этого бактериологической петлей внести одну или более колоний бактерий, выращенных в течение 18-24 ч при 37°С на мясо-пептонном
агаре или селективной среде для грамотрицательных бактерий, например, цетилпиридиний-хлориде, в стерильном флаконе с 2 мл стерильного
раствора хлорида натрия с массовой долей 0,9 %.
Оптическая плотность взвеси в пробирке после внесения микроорганизма должна соответствовать 0,5 оптических единиц McFarland. Этого
можно достичь путем:
- измерения на денситометре или на спектрофотометре при длине волны 550 нм - 0,125 OD (составляет 1,5х 108 КОЕ/мл);
- сравнения со стандартом оптической плотности 0,5 McFarland;
Перенести в ампулу с питательной АБ средой 7 мкл приготовленной взвеси бактерий и тщательно перемешать.
Внести в каждую лунку планшета по 135 мкл питательной среды АБ с микроорганизмами (106 КОЕ/мл).
Планшет накрыть крышкой. Инкубировать 18-24 ч при 37 °С в термостате.
УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
Резистентные штаммы растут в лунке, делая среду непрозрачной, а если штамм чувствителен к антибиотику среда остаѐтся прозрачной.
При отсутствии роста в контрольной лунке – тест считается недействительным, и его необходимо повторить.
Визуальный учет
Интерпретация:
 прозрачная
Ч (S)
чувствительный штамм

мутная
+
Р (R)
устойчивый или резистентный штамм
Инструментальный учет
Измерение оптической плотности проводят на иммуноферментном анализаторе АИФ М/340 или Ф300 - мультискане с помощью
программного обеспечения «Мicrobi» при длине волны 570 нм.
Положительным считается результат при оптической плотности ≥0,4 OD, а отрицательным <0,23 OD. «Серая зона» располагается в интервале
от <0,4 до ≥0,23 – тест считается спорным и требуется для учѐта визуальное подтверждение.
При отсутствии роста в контрольной лунке – тест считается недействительным, и его необходимо повторить.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА
Тест-система должна храниться при температуре плюс (4+2) °С на протяжении всего срока годности, указанного на упаковке.
Флаконы со средой и планшеты перед постановкой опыта должны быть выдержаны при 20-30 0С 20 минут.
Для исследования необходимо использовать только 18-24 ч культуру микроорганизма.
Количество вносимого инокулята должно быть стандартным. Поэтому обязательно необходимо пользоваться денситометром или стандартом
оптической плотности.
Для отбора и добавления реагентов необходимо использовать полуавтоматические пипетки со сменными наконечниками, аттестованные на
точность по значению средней дозы и воспроизводимость результатов пипетирования.
Инкубация планшета должна производиться только в температурном режиме 36 -38 0С. При повышении или понижении температуры
возможен некорректный результат.
Большое количество пузырьков в культуральной среде может изменить результаты автоматического учѐта чувствительности.
Собранный материал и бактериальные культуры следует считать потенциально опасными, что требует опытного и квалифицированного
обращения. После использования все планшеты, флаконы и наконечники должны быть простерилизованы в паровом стерилизаторе при
температуре (120+2) °С давлении (0,11+0,02) мПа (1,1+0,2) кгс/см2 в течении (45+3) мин, сожжены или дезинфицированы погружением в раствор
хлорамина Б с массовой долей 0,5 % с экспозицией 30 мин.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.
ФОРМА ВЫПУСКА
Планшет позволяет определять чувствительность к 23 антибиотикам четырех штаммов микроорганизмов.
Компоненты тест-системы в виде комплекта, включающего 1 планшет с антибиотиками, 1 пакетик с силикагелем, 4 флакона питательной
среды АБ (5+0,1) мл, 4 флакона стерильного раствора хлорида натрия с массовой долей 0,9% (5+0,1) мл, 4 наконечника стерильных для
автоматических дозаторов вместимостью 200 мкл, лист с комплектностью (таблица 2) и инструкция по применению помещаются в коробку из
картона коробочного.
В тару с тест-системами, направлением в каждый адрес по требованию заказчика вкладывается 1флакон стандартного образца оптической
плотности 0,5 оптических единиц McFarland, объемом (4+0,1) мл.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ
Хранение тест-системы должно производиться при температуре плюс (4+2) °С на протяжении всего срока годности.
Транспортирование тест-системы осуществлять при температуре плюс (4+2) °С в сухих, чистых, крытых транспортных средствах
(ГОСТ 17768).
Срок годности тест-системы - 12 месяцев с даты изготовления.
При нарушении условий хранения, транспортирования и схемы постановки опыта рекламации не принимаются.
В остальных случаях рекламации на качество тест-системы направляются по адресу учреждения изготовителя:
211309, Республика Беларусь, Витебская обл., Витебский р-н, д. Должа, ул. Советская, 26А.
Тел/факс +375212-20-94-10.
Открытое акционерное общество «БелВитунифарм».