УСТОЙЧИВОСТЬ К КАТИОННОМУ БЕЛКУ ЛЕЙКОЦИТОВ

Çóðî÷êà À.Â.*, Ãîðîäå÷íûé Ï.Ï.*, Ãðèöåíêî Â.À.**,
Ãðèöåíêî ß.Â.**, Äóêàðäò Â.Â.*, Êóçüìèíà Å.Å.*
*ÃÎÓ ÂÏÎ «×åëÿáèíñêàÿ ãîñóäàðñòâåííàÿ ìåäèöèíñêàÿ àêàäåìèÿ» Ðîñçäðàâà, ã. ×åëÿáèíñê
**Èíñòèòóò êëåòî÷íîãî è âíóòðèêëåòî÷íîãî ñèìáèîçà ÓðÎ ÐÀÍ, ã. Îðåíáóðã
ÓÑÒÎÉ×ÈÂÎÑÒÜ Ê ÊÀÒÈÎÍÍÎÌÓ ÁÅËÊÓ ËÅÉÊÎÖÈÒΠ«ÈÍÒÅÐÖÈÄÓ»
ÊÎÏÐÎÈÇÎËßÒΠSTAPHYLOCOCCUS AUREUS È ÈÕ ÂËÈßÍÈÅ
ÍÀ ÕÅÌÎÒÀÊÑÈÑ ÏÎËÈÌÎÐÔÍÎßÄÅÐÍÛÕ ËÅÉÊÎÖÈÒÎÂ Ó ËÈÖ
ÑÎ ÑÒÀÔÈËÎÊÎÊÊ-ÀÑÑÎÖÈÈÐÎÂÀÍÍÛÌ ÄÈÑÁÀÊÒÅÐÈÎÇÎÌ
ÊÈØÅ×ÍÈÊÀ
Ôåêàëüíûå øòàììû Staphylococcus aureus îò ëþäåé ñ äèñáàêòåðèîçîì êèøå÷íèêà ïðîÿâëÿþò
îòíîñèòåëüíî íèçêèé óðîâåíü óñòîé÷èâîñòè ê êàòèîííîìó áåëêó ëåéêîöèòîâ «èíòåðöèäó». Â
ñðàâíåíèè ñ òåñò-øòàììîì S. aureus «Cowan 209» êîïðîèçîëÿòû S. aureus âûçûâàþò áîëåå
âûðàæåííóþ àêòèâàöèþ ïîëèìîðôíîÿäåðíûõ ëåéêîöèòîâ ïàöèåíòîâ, îò êîòîðûõ îíè ïîëó÷åíû.
Êëþ÷åâûå ñëîâà: Staphylococcus aureus, äèñáàêòåðèîç êèøå÷íèêà, êàòèîííûå áåëêè ëåéêîöèòîâ, óñòîé÷èâîñòü, ïîëèìîðôíîÿäåðíûå ëåéêîöèòû, õåìîòàêñèñ
Ââåäåíèå
Íàðóøåíèÿ ìèêðîáèîöåíîçà êèøå÷íèêà
ñ íàêîïëåíèåì â íåì çîëîòèñòûõ ñòàôèëîêîêêîâ íåðåäêî âûçûâàþò ó ïàöèåíòîâ äëèòåëüíî òåêóùèé âîñïàëèòåëüíûé ïðîöåññ, êîòîðûé ñîïðîâîæäàåòñÿ òÿæåëûì òîêñèêîçîì,
ãèïåðòåðìè÷åñêîé ðåàêöèåé, óïîðíîé ðâîòîé,
ìåòåîðèçìîì, ó÷àùåííûì æèäêèì ñòóëîì,
èíîãäà ñ ïðèìåñüþ ñëèçè è êðîâè, à òàêæå ñïîñîáñòâóþò âîçíèêíîâåíèþ àëëåðãè÷åñêèõ ïîðàæåíèé êîæè è îðãàíîâ äûõàíèÿ [5]. Èçâåñòíî, ÷òî äëèòåëüíûå äèñáèîòè÷åñêèå ñäâèãè
êèøå÷íîãî ìèêðîáèîöåíîçà ïðèâîäÿò ê èçìåíåíèÿì èììóííîãî ñòàòóñà ïî òèïó âòîðè÷íîãî èììóíîäåôèöèòà, ñëåäñòâèåì êîòîðîãî
ÿâëÿþòñÿ õðîíè÷åñêèå âîñïàëèòåëüíûå çàáîëåâàíèÿ, îáóñëîâëåííûå ïîòåíöèàëüíî ïàòîãåííûìè ìèêðîîðãàíèçìàìè, â òîì ÷èñëå
Staphylococcus aureus [4, 7].  ýòîé ñâÿçè áîëüøîé èíòåðåñ âûçûâàåò âîïðîñ î ïàòîãåíåòè÷åñêîé ïðè÷àñòíîñòè ê ðàçâèòèþ ïîäîáíîé
ïàòîëîãèè áèîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâ çîëîòèñòûõ ñòàôèëîêîêêîâ è, ïðåæäå âñåãî, óñòîé÷èâîñòè äàííûõ áàêòåðèé ê ãóìîðàëüíûì ôàêòîðàì àíòèáàêòåðèàëüíîé çàùèòû ìàêðîîðãàíèçìà (â ÷àñòíîñòè, êàòèîííûì áåëêàì ëåéêîöèòîâ) [1]. Íå ìåíüøåãî âíèìàíèÿ çàñëóæèâàåò âîïðîñ, çàòðàãèâàþùèé îñîáåííîñòè âçàèìîäåéñòâèÿ çîëîòèñòûõ ñòàôèëîêîêêîâ ñ
ïðîôåññèîíàëüíûìè ôàãîöèòàìè ÷åëîâåêà (â
÷àñòíîñòè, ïîëèìîðôíîÿäåðíûìè ëåéêîöèòàìè – ÏÌßË), ó÷èòûâàÿ âàæíóþ ðîëü ïîñëåäíèõ â îáåñïå÷åíèè ïðîòèâîèíôåêöèîííîé
çàùèòû ìàêðîîðãàíèçìà.
ВЕСТНИК ОГУ №12/ДЕКАБРЬ`2006
Öåëü íàñòîÿùåãî èññëåäîâàíèÿ – àíàëèç
óñòîé÷èâîñòè ê êàòèîííîìó áåëêó ëåéêîöèòîâ «èíòåðöèäó» êîïðîèçîëÿòîâ S. aureus,
âûäåëåííûõ îò ëþäåé ñî ñòàôèëîêîêê-àññîöèèðîâàííûì äèñáàêòðèîçîì êèøå÷íèêà, è
õåìîòàêñè÷åñêèõ ïàðàìåòðîâ ÏÌßË ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè ïàöèåíòîâ, àêòèâèðîâàííûõ
àóòîøòàììàìè çîëîòèñòûõ ñòàôèëîêîêêîâ.
Ìàòåðèàëû è ìåòîäû
Ïîä íàáëþäåíèåì â Êëèíèêå ÃÎÓ ÂÏÎ
«×åëÃÌÀ» Ðîñçäðàâà íàõîäèëñÿ 51 ïàöèåíò ñ
äèñáàêòåðèîçîì êèøå÷íèêà, ó êîòîðîãî çîëîòèñòûå ñòàôèëîêîêêè âûäåëÿëèñü èç 1 ã ôåêàëèé â òèòðàõ 104 è áîëåå. Ó âûäåëåííûõ îò ýòèõ
áîëüíûõ 56 êîïðîèçîëÿòîâ S. aureus îïðåäåëÿëè óðîâåíü óñòîé÷èâîñòè ê «èíòåðöèäó» (êîíöåíòðàöèÿ – 5,0 ìã áåëêà/ìë) ïî îïèñàííîìó
ìåòîäó [2], ðàññ÷èòûâàÿ èíäåêñ ðåçèñòåíòíîñòè (ÈíäÐ,%) ñòàôèëîêîêêîâ ïî ôîðìóëå: ÈíäÐ
= ODo/ODk*100, ãäå ODo è ODk – îïòè÷åñêèå ïëîòíîñòè îïûòíîé è êîíòðîëüíîé ïðîá.
Ñ ïîìîùüþ ìåòîäèêè îïðåäåëåíèÿ õåìîòàêñèñà êëåòîê ïîä àãàðîçíûì ãåëåì [8, 9] ó âñåõ
ïàöèåíòîâ èçó÷åíà õåìîòàêñè÷åñêàÿ ðåàêöèÿ
ÏÌßË íà ñîáñòâåííûå øòàììû ñòàôèëîêîêêîâ è «ìóçåéíûé» òåñò-øòàìì «Cowan 209».
ÏÌßË âûäåëÿëè èç ãåïàðèíèçèðîâàííîé ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè (15 ÅÄ ãåïàðèíà ñóëüôàòà íà 1 ìë êðîâè) ïàöèåíòîâ ïóòåì ãðàäèåíòíîãî öåíòðèôóãèðîâàíèÿ. Äëÿ ðåãèñòðàöèè
íàïðàâëåííîñòè õåìîòàêñè÷åñêîãî îòâåòà ðàññ÷èòûâàëñÿ èíäåêñ õåìîòàêñèñà – îòíîøåíèå
âåëè÷èíû ìèãðàöèè ÏÌßË ê õåìîàòòðàêòàí-
Çóðî÷êà À.Â. è äð.
Óñòîé÷èâîñòü ê êàòèîííîìó áåëêó ëåéêîöèòîâ...
òó ê âåëè÷èíå ìèãðàöèè îò íåãî. Ïîñëå èçó÷åíèÿ ïîäâèæíîñòè ÏÌßË îöåíèâàëàñü àêòèâíîñòü íåñïåöèôè÷åñêèõ ýñòåðàç ôàãîöèòîâ â
çîíàõ ìèãðàöèè ìåòîäîì îäíîâðåìåííîãî àçîñî÷åòàíèÿ ïî Ïèðñó ñ îïðåäåëåíèåì àêòèâíîñòè ýñòåðàç (%) è ñóììàðíîãî öèòîõèìè÷åñêîãî êîýôôèöèåíòà (ÑÖÊ, óñë.åä.). Îöåíêó ðàñïðåäåëåíèÿ ÏÌßË â çîíàõ ìèãðàöèè îñóùåñòâëÿëè ïî èíäåêñàì àêòèâíîñòè ýñòåðàç è èíäåêñ ÑÖÊ, äëÿ ÷åãî âûñ÷èòûâàëè îòíîøåíèÿ
âåëè÷èí àêòèâíîñòè ôåðìåíòîâ è ÑÖÊ â çîíàõ ìèãðàöèè ê õåìîàòòðàêòàíòó ê ñîîòâåòñòâóþùèì âåëè÷èíàì â îïïîçèòíûõ çîíàõ.
Ñòàòèñòè÷åñêàÿ îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ ïðîâåäåíà â ïðîãðàììå «Statistica 6.0» ñ ïðèìåíåíèåì êðèòåðèåâ Mann-Whitney è Wald-Wolfowitz è
êîððåëÿöèîííîãî àíàëèçà [3, 6].
Ðåçóëüòàòû è îáñóæäåíèå.
Èññëåäîâàíèå ïîêàçàëî, ÷òî ñðåäíèé
óðîâåíü ðåçèñòåíòíîñòè ê êàòèîííîìó áåëêó ëåéêîöèòîâ «èíòåðöèäó» ó ñòàôèëîêîêêîâ, âûäåëåííûõ îò ïàöèåíòîâ, ñîñòàâèë
36,4%±3,2% (òàáë. 1).
Ïîäîáíûé óðîâåíü óñòîé÷èâîñòè êîïðîèçîëÿòîâ S. aureus ê «èíòåðöèäó», ñîïîñòàâèìûé ñ ðåçèñòåíòíîñòüþ ìóçåéíîãî òåñò-øòàììà S. aureus «Cowan 209», õàðàêòåðåí äëÿ êîàãóëàçîîòðèöàòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ è çíà÷èòåëüíî íèæå ïîêàçàòåëåé óñòîé÷èâîñòè çîëîòèñòûõ ñòàôèëîêîêêîâ, âûäåëåííûõ èç
ãíîéíî-âîñïàëèòåëüíûõ î÷àãîâ [2]. Ñëåäóåò
îòìåòèòü, ÷òî ãðóïïà êîïðîøòàììîâ S. aureus
îòëè÷àëàñü âûñîêîé ñòåïåíüþ ãåòåðîãåííîñòè ïî àíàëèçèðóåìîìó ïàðàìåòðó. Îá ýòîì, â
÷àñòíîñòè, ñâèäåòåëüñòâîâàë øèðîêèé äèàïàçîí âàðüèðîâàíèÿ ÈíäÐ (îò 10,0 äî 118,8%), à
òàêæå íàëè÷èå èçîëÿòîâ çîëîòèñòûõ ñòàôèëîêîêêîâ, ïðîÿâëÿâøèõ êàê î÷åíü íèçêóþ
(<20%), òàê è î÷åíü âûñîêóþ (>100%) óñòîé÷èâîñòü ê «èíòåðöèäó» – èõ äîëè ñîîòâåòñòâåííî ñîñòàâèëè 10,7±4,1 è 3,6±2,5% îò âñåõ
èññëåäîâàííûõ ôåêàëüíûõ øòàììîâ S. aureus.
Ïîëó÷åííûå äàííûå ïîçâîëÿþò ñäåëàòü
çàêëþ÷åíèå, ÷òî ïðè ñòàôèëîêîêê-àññîöèèðîâàííîì êèøå÷íîì äèñáàêòåðèîçå â êèøå÷íèêå ìîãóò íàõîäèòüñÿ ðàçëè÷íûå ïî óðîâíþ
óñòîé÷èâîñòè ê «èíòåðöèäó» S. aureus, ïðè÷åì íåêîòîðûå èç íèõ ñïîñîáíû ïðîÿâëÿòü
«ñóïåð-ðåçèñòåíòíîñòü» ê äàííîìó ýôôåêòîðó èììóíèòåòà ìàêðîîðãàíèçìà. Ïîñëåäíåå
îáñòîÿòåëüñòâî êîñâåííî ñâèäåòåëüñòâóåò î
ðîëè êèøå÷íèêà êàê ïîòåíöèàëüíîãî èñòî÷íèêà âîçáóäèòåëåé ãíîéíî-âîñïàëèòåëüíûõ
çàáîëåâàíèé ñòàôèëîêîêêîâîé ýòèîëîãèè.
Îöåíêà õåìîòàêñè÷åñêîé è ìåòàáîëè÷åñêîé àêòèâíîñòè ïîëèìîðôíîÿäåðíûõ ëåéêîöèòîâ íåéòðîôèëîâ âûÿâèëà èíîé ïî âûðàæåííîñòè îòâåò ôàãîöèòîâ íà àóòîøòàììû
çîëîòèñòûõ ñòàôèëîêîêêîâ ïî ñðàâíåíèþ ñ
«ìóçåéíûì» òåñò-øòàììîì S. aureus «Cowan
209» (òàáë. 2).
Òàáëèöà 1. Ïîêàçàòåëè ðåçèñòåíòíîñòè êîïðîøòàììîâ Staphylococcus aureus
ê êàòèîííîìó áåëêó ëåéêîöèòîâ «èíòåðöèäó»
Ïàðàìåòðû ðåçèñòåíòíîñòè áàêòåðèé ê "èíòåðöèäó
Øòàììû áàêòåðèé
ÈíäÐ, %
(M±m)
Äèàïàçîí
ÈíäÐ, % (min-max)
Äîëÿ øòàììîâ
ñ ÈíäÐ<20% (%)
Äîëÿ øòàììîâ
ñ ÈíäÐ>100% (%)
Êîïðîøòàììû S. aureus (n=56)
36,4±3,2
10,0-118,8
10,7±4,1
3,6±2,5
S. aureus «Cowan 209»
21,2±5,8
12,5-38,2
–
–
Ïðèìå÷àíèå: ÈíäÐ – èíäåêñ ðåçèñòåíòíîñòè áàêòåðèé
Òàáëèöà 2. Õåìîòàêñè÷åñêàÿ è ìåòàáîëè÷åñêàÿ àêòèâíîñòü ïîëèìîðôíîÿäåðíûõ ëåéêîöèòîâ
ó ëèö ñî ñòàôèëîêîêê-àññîöèèðîâàííûì äèñáàêòåðèîçîì êèøå÷íèêà
Ïîêàçàòåëè ëåéêîöèòîâ
Õåìîàòòðàêòàíòû
Òåñò-øòàìì S. aureus
«Cowan 209»
Àóòîøòàììû
S. aureus
Èíäåêñ õåìîòàêñèñà (n=51)
1,35±0,03
1,64±0,10*
Èíäåêñ àêòèâíîñòè ýñòåðàç (n=51)
0,92±0,03
1,08±0,05*
Èíäåêñ ÑÖÊ (n=51)
0,94±0,02
1,06±0,05*
Ïðèìå÷àíèå: * – îòëè÷èå îò ïîêàçàòåëåé â îïûòàõ ñ S. aureus «Cowan 209», p<0,05.
ВЕСТНИК ОГУ №12/ДЕКАБРЬ`2006
Ìèêðîáèîëîãèÿ, èììóíîëîãèÿ, áèîòåõíîëîãèÿ
 öåëîì àóòîøòàììû S. aureus îáëàäàëè
áîëåå âûðàæåííûì àêòèâèðóþùèì äåéñòâèåì íà ïîëèìîðôíîÿäåðíûå ëåéêîöèòû ïàöèåíòîâ, îò êîòîðûõ áûëè âûäåëåíû, ÷åì «ìóçåéíûé» øòàìì S. aureus «Cowan 209», êîòîðûé, êàê áûëî ïîêàçàíî âûøå, îáëàäàë è
áîëåå íèçêîé óñòîé÷èâîñòüþ ê «èíòåðöèäó».
Äëÿ óòî÷íåíèÿ âçàèìîñâÿçè ìåæäó èçó÷åííûìè ïàðàìåòðàìè («èíòåðöèä»-ðåçèñòåíòíîñòü ñòàôèëîêîêêîâ è ïîêàçàòåëè õåìîòàêñè÷åñêîé àêòèâíîñòè ëåéêîöèòîâ) áûë
ïðîâåäåí êîððåëÿöèîííûé àíàëèç, êîòîðûé
âûÿâèë íàëè÷èå äîñòîâåðíîé ïîëîæèòåëüíîé êîððåëÿöèîííîé ñâÿçè ñðåäíåé ñèëû
(r=0,33) ìåæäó èíäåêñîì àêòèâíîñòè ýñòåðàç
ëåéêîöèòîâ è óðîâíåì óñòîé÷èâîñòè àóòîø-
òàììîâ S. aureus ê «èíòåðöèäó». Ýòî ÿâëÿåòñÿ êîñâåííûì ïîäòâåðæäåíèåì òîãî, ÷òî óêàçàííàÿ êà÷åñòâåííàÿ õàðàêòåðèñòèêà ñòàôèëîêîêêîâ ñïîñîáíà îêàçûâàòü íà ñîñòîÿíèå
ôàãîöèòèðóþùèõ êëåòîê ìîäèôèöèðóþùèé
ýôôåêò, ïðîÿâëÿþùèéñÿ â âûðàæåííîé ñòèìóëÿöèè íàïðàâëåííîé ïîäâèæíîñòè êëåòîê
è àêòèâàöèè èõ ëèçîñîìàëüíîãî àïïàðàòà.
Íåëüçÿ èñêëþ÷èòü, ÷òî ïîâûøåííàÿ ðåàêöèÿ
ëåéêîöèòîâ íà «èíòåðöèä»-ðåçèñòåíòíûå
øòàììû ñëóæèò ýôôåêòèâíûì ìåõàíèçìîì
ñäåðæèâàíèÿ ðàñïðîñòðàíåíèÿ ñòàôèëîêîêêîâ èç êèøå÷íèêà âî âíóòðåííèå îðãàíû ÷åëîâåêà, ïðåäîòâðàùàÿ òåì ñàìûì ðàçâèòèå
èíôåêöèîííî-âîñïàëèòåëüíîãî ïðîöåññà â
ìàêðîîðãàíèçìå.
Ñïèñîê èñïîëüçîâàííîé ëèòåðàòóðû:
1. Áóõàðèí Î.Â. Ïåðñèñòåíöèÿ ïàòîãåííûõ áàêòåðèé. Ì.: Ìåäèöèíà, 1999.
2. Ãðèöåíêî Â.À., Ãðèöåíêî ß.Â. ×óâñòâèòåëüíîñòü è àäàïòàöèÿ ñòàôèëîêîêêîâ ê áàêòåðèöèäíîìó äåéñòâèþ êàòèîííîãî áåëêà ëåéêîöèòîâ «èíòåðöèäà». Âåñòíèê ÎÃÓ, 2005, 5 (Ïðèëîæåíèå): 19-22.
3. Ãóáëåð Å.Â., Ãåíêèí À.À. Ïðèìåíåíèå íåïàðàìåòðè÷åñêèõ êðèòåðèåâ ñòàòèñòèêè â ìåäèêî-áèîëîãè÷åñêèõ èññëåäîâàíèÿõ. Ë. Ìåäèöèíà, 1973.
4. Äåðÿáèí Ä.Ã. Ñòàôèëîêîêêè: ýêîëîãèÿ è ïàòîãåííîñòü. Åêàòåðèíáóðã: Óðî ÐÀÍ, 2000.
5. Êðàñíîãîëîâåö Â.Í. Äèñáàêòåðèîç êèøå÷íèêà. Ì.: Ìåäèöèíà, 1989.
6. Ëàêèí Ã.Ô. Áèîìåòðèÿ, Ì.: Âûñø. øê., 1990.
7. Õàèòîâ Ð.Ì., Ïèíåãèí Á.Â. Âòîðè÷íûå èììóíîäåôèöèòû: êëèíèêà, äèàãíîñòèêà, ëå÷åíèå. Èììóíîëîãèÿ, 1999, 1: 14-17.
8. Ýáåðò Ë.ß., ×óêè÷åâ À.Â., Çóðî÷êà À.Â., Ìàðà÷åâ Ñ.È., Íîâîêðåùåíîâ Ë.Á. Ñïîñîá îïðåäåëåíèÿ âèäà áàêòåðèàëüíîé
èíôåêöèè, À.Ñ. 1156644 (ÑÑÑÐ), Îôèö. áþëë. Îòêðûòèÿ è èçîáðåòåíèÿ, 1985, 19: 9.
9. Nelson R.D., Quie P.G., Simmons R.L. Chemotaxis under agarose: A new and simple method for measuring chemotaxis and
spontaneous migration of human polymorphonuclear leucocytes and monocytes. J. Immunol., 1975, 115: 1050-1058.
ВЕСТНИК ОГУ №12/ДЕКАБРЬ`2006