Girfanov A.I. Summary

MORPHOLOGY OF THE ARBOR BRONCHIALLY OF THE LUNGS IN SABLE
Girfanov A.I.
Summary
The purpose of this investigated to examine structured of arbor
bronchially.
For investigated to use lungs of the 10 dead mink. In the lung trough
trachea was injected acryl polymers «Redont - 03». The lungs dissolved in the
alkali solution.
Found that the structure of the bronchial tree corresponds to the location
of shares of the lung. Lobar bronchi of the right and left lungs are developed
differently. Bronchi of caudal shares advanced more than others bronchi because
they are more involved in the process of respiration.
УДК 619:612.017
СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ДИАГНОСТИКИ ПРИОННЫХ
БОЛЕЗНЕЙ
Госманов Р.Г.
ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной
медицины имени Н.Э.Баумана»
Ключевые слова: прион, белковая инфекционная частица,
прионные болезни, методы диагностики.
Key words: prion, prion diseases, proteinaceous infections particles,
methods diagnostics.
Общая характеристика прионов. В конце ХХ в. кроме известных
микроорганизмов, в том числе и вирусов, вызывающих инфекционные
болезни макроорганизмов, был обнаружен возбудитель заболеваний
нервной системы животных и людей. Американский биохимик Прузинер
(1982) на основании результатов исследований установил, что возбудитель
не имеет нуклеиновых кислот и состоит из низкомолекулярного белка
(27…30 кД), который он назвал инфекционным прионным белком. В
качестве инфекционной единицы Прузинер предложил название «прион».
Термин «прион» образован из английских слов proteinaceons infections
particles – белковая инфекционная частица. В очищенных препаратах
прион имел палочковидные структуры (фибриллы) диаметром 10…20 нм и
длиной 100…200 нм, которые состояли примерно из 1000 молекул
прионного белка.
78
Установлено, что нормальный (клеточный) прионный белок
синтезируется во многих органах и тканях человека и животных.
Назначение приона изучено недостаточно, но полагают, что он необходим
для функционирования нейронов, межклеточного узнавания и клеточной
активации и т.д. Ген, кодирующий синтез прионного белка, картирован в
20-й хромосоме у человека, во 2-ой – у мыши и в 14-й – у серебристочерной лисицы. Ген (прионного белка крысы имеет 1600 пар нуклеотидов)
представляет мозайчатую структуру и состоит из экзонов и интронов. Он
транскрибируется полностью с образованием предшественника иРНК, из
каждой удаляются интроны, а экзоны соединяются и формируется зрелая
иРНК, которая транспортируется в цитоплазму и на рибосомах
обеспечивает синтез белка. Длина молекулы белка у человека и различных
животных составляет 252…264 аминокислотных остатков.
Нормальный прионный белок превращается в инфекционный
прионный белок следующим образом: 1) спонтанно; 2) под воздействием
экзогенного инфекционного прионного белка; 3) при мутациях в
кодирующей части гена прионного белка (Р.В.Белоусова, 2007).
Инфекционный прионный белок обладает высокой устойчивостью к
неблагоприятным факторам внешней среды (повышенная температура,
ультрафиолетовые лучи, свет, ионизирующая радиация, дезинфектанты и
др.).
Инфекционный прионный белок у животных вызывает следующие
болезни: скрепи овец и коз, трансмиссивную энцефалопатию норок,
губкообразную энцефалопатию крупного рогатого скота, хроническую
изнуряющую болезнь оленей и лосей, губкообразную энцефалопатию
кошек и экзотических животных. Заболевание происходит в возрасте от 16
до 40 лет.
Патогенез прионных болезней на примере скрепи овец происходит
следующим образом: оральная инфекция → репликация в мононуклеарных
фагоцитах → отсутствие иммунного ответа → распространение с
кровотоком → внедрение в центральную нервную систему (ЦНС) →
репликация в ЦНС → индукция амилоидоза → дегенерация нервной ткани
→ клинический симптомокомплекс → смерть.
Сложность диагностики прионных болезней заключается в
следующем: ретроспективная диагностики невозможна, поскольку у
больных животных к возбудителю не образуются антитела; иммунизация
лабораторных животных прионом с целью получения гипериммунных
диагностических антисывороток малоэффективно, поскольку прионные
белки разных видов животных имеют почти одинаковую структуру и
поэтому трудно получить антисыворотки с необходимым титром антител;
отсутствуют методы прижизненной диагностики прионных болезней, т.к.
основная масса возбудителя локализована в продолговатом мозгу
79
животного и он не выделяется в спинно-мозговую жидкость, мочу или
кровь в количествах, достаточных для его обнаружения.
Диагноз ставят на основании прижизненных клинических признаков
и гистологических исследованиях головного мозга (посмертно). В качестве
дополнительного приема пользуются микроскопией с целью обнаружения
в экстрактах мозга больных животных фибрилл, ассоциированных со
скрейпи.
Разработка прижизненных методов диагностики прионных
заболеваний является целью многих исследователей во всем мире, но
вместе с этим эта задача пока практически оказалась неразрешенной.
В настоящее время основным способом диагностики прионных
заболеваний остается лабораторное исследование ткани головного мозга,
прежде всего его стволовой части, как наиболее поражаемой.
Предложено и применяется ряд лабораторных методов посмертной
диагностики болезней, вызванных прионами: прижизненная диагностика,
гистопатологический
метод,
иммуногистохимический
метод,
иммунофлуоресцентный анализ, иммуноферментный метод, электронная
микроскопия.
Прижизненная диагностика. Так как при жизни до сих пор не
предложено специфических тестов для диагностики прионных
заболеваний, ветеринарный врач должен обращать внимание, прежде
всего, на клинический статус животных как перед отправкой их из
хозяйства на убой, так и на самом мясокомбинате при приемке и перед
подачей на переработку. Прежде всего, необходимо обращать на
клинические признаки нейрологического характера.
Несмотря на характерную клиническую картину болезни. Прионные
заболевания
следует
дифференцировать
от
ряда
заболеваний
инфекционной и незаразной этиологии, имеющих сходные клинические
признаки.
В ранней стадии развития клинических признаков болезни ее, прежде
всего, необходимо дифференцировать от классического бешенства,
листериоза, нервных форм кетоза и различных отравлений. Как известно
при острых инфекционных заболеваниях практически всегда отмечается
подъем температуры и отсутствие аппетита, а, например, при губчатой
энцефалопатии температура и аппетит сохраняются в норме на всем
протяжении болезни. Кроме того, выделение возбудителя того или иного
инфекционного заболевания дифференцируют их от прионных
заболеваний.
Учитывается эпизоотическая ситуация.
Гистопатологический метод. В основе этого метода лежит
обнаружение в головном мозге вакуолей. Метод заключается в обычном
гистологическом исследовании препаратов мозга, где развивается
патология прионной инфекции. Под микроскопом наблюдается ряд
80
гистологических изменений: клеточные реакции (отсутствие воспаления),
признаки церебрального милоидоза, в том числе образование характерных
амилоидных бляшек. Совокупность этих признаков может быть
использована для подтверждения клинического диагноза прионной
инфекции.
Для получения окончательного результата с помощью данного
метода требуется не менее 16 дней, из которых 14 дней уходит на
фиксацию тканей. В связи с относительной простотой выполнения
гистопатологического метода он является широко используемым методом
диагностики.
Иммуногистохимический метод. Этот метод основан на
обнаружении скоплений патогенной изоформы прионного белка в
перикорионных и отростках нейронов, а также
скоплений между
глиальными клетками. Сначала проводится предварительная обработка
препаратов с целью разрушения антигенности нормального приона и
повышения её у патогенного прионного белка. Стандартная процедура для
этих целей включает инкубирование кусочков ткани в концентрированной
муравьиной кислоте
в течение 20 минут с последующим
автоклавированием.
Далее
проводится
обычная
процедура
иммуногистохимического окрашивания. Анализ препаратов позволяет
обнаружить крупные рассеянные скопления патогенного прионного белка.
Учитывая сложность получения антисывороток к патогенным
прионным белкам, обычно получают поликлональные антисыворотки к
синтетическим пептидам или моноклональные антитела. В последние
годы на их основе разработано несколько выскочувствительных методов
(иммунофлуоресцирующий и иммуноферментный методы).
Иммунофлуоресцентный метод. Этот метод является одним из
быстрых тестов, рекомендованных Европейской комиссией ЕЭС.
Сущность метода состоит в следующем: участок головного или шейного
отдела мозга массой 0,5 г гомогенизируют, обрабатывают в
полиакриламидный гель. После элекрофоретического разделения белки
распределяются на мембране
и приона обнаруживают, используя
запатентованные моноклональные антитела 6НЧ
с последующей
люминесцентной
микроскопией.
Чувствительность
100%,
продолжительность процедуры 7-8 часов.
Иммуноферментный метод. Суть заключается в следующем. От
образца шейного отдела спинного мозга больных животных отбирают
пробу массой 0,5г, которую гомогенизируют, а затем подвергают
обработке протеазой
для разрушения нормального прионного белка.
Затем пробы помещают в лунки плашек. После адсорбции наслаивают
антитела к пептиду – фрагменту патогенного прионного белка, затем
антитела, меченные пероксидазой. Хемилюминесцентный
реагент
взаимодействует с пероксидазой с образованием светового сигнала,
81
интенсивность которого измеряют в хемилюминометре при длине волны
450 нм.
Образцы с оптической плотностью выше или равной пороговой
величине (0,060 + 0,09 = 0,150) рассматриваются
как исходно
положительные и анализируются повторно в параллелях, прежде чем
вынести окончательное заключение.
Ложноположительные реакции мозга были получены на основе
недостаточно размельченных гомогенатов или приготовленных из
неправильно
хранившихся
нервных
тканей.
Для
увеличения
эффективности этих диагностических методов в повседневную практику,
необходимо
усовершенствовать
методы
получения
и
оценки
антисывороток и провести оценку
методологии с целью ее
стандартизации.
Электронно-микроскопический метод. При выполнении этого
метода необходимо концентрирование патогенного прионного белка путем
многократного высокоскоростного
ультрацентрифугирования при
200000д в течение 2 ч с последующей обработкой протеазой и оценкой под
электронным микроскопом. Вся процедура занимает около 2 дней.
Биологические пробы.
Биологические методы тестирования
подразделяются на способы культивирования in vitro на клеточных
культурах и животных. Биопроба на мышах пока единственный
практический способ обнаружения инфекционных агентов, вызывающих
трансмиссивную губкообразную энцефалопатию крупного рогатого скота
и др.
Единственным способом, позволяющим определить степень
инфекционности
биологического
материала,
является
его
внутрицеребральная инокуляция лабораторным животным. Инфекционный
титр
можно определить по ЛД50: эта техника может считаться
высокочувствительной, поскольку с ее помощью можно обнаружить
минимального количества патогенного прионного белка. Однако эта
методика требует длительного времени (инкубационные периоды длятся
несколько месяцев). Методика дорогостоящая и не дает 100%-ной
гарантии. В действительности, штамм трансмиссивного возбудителя из-за
видового различия может и не вызвать заболевания в экспериментальной
модели с первого пассажа.
ЛИТЕРАТУРА: 1. Гусева Е.В., Сатина Т.А., Рыбаков С.С.
Губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота (обзор литературы)
- /Владимир, 1997: 91 с.; 2. Григорьев В.Б. Прионные болезни человека и
животных // Вопросы вирусологии. – М.: Медицина, 2004, 5:4-12 с.;
3. Покровский В.И., Киселев О.И. Молекулярные основы прионных
болезней // Вестник РАМН, 1998,10: 45-55.; 4. Надточий Г.А. Прионные
инфекции: диагностика, профилактика и меры борьбы // Бюллетень ВИЭВ
82
им. Я.Р. Коваленко, выпуск №77 «Прионные и ретровирусные инфекции
животных». Москва, 1996: 5-10.
СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ДИАГНОСТИКИ ПРИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ
Госманов Р.Г.
Резюме
В этой статье приведены: общая характеристика прионов,
прижизненная
диагностика,
гистопатологические,
иммуногистохимические, иммунофлуоресцентные, иммуноферментные,
электронномикроскопические и биологические методы, используемые для
лабораторной диагностики прионных болезней.
MODERN STATUS DIAGNOSTIC OF PRION DISEASES
Gosmanov R.G.
Summary
In article described: general characteristic of prions, life time diagnostics,
gistopatologic, immunogistochimic, immunoflourescence, Elisa – test, electron
microscopy and biological methods for laboratory method diagnostic of prions
diseases.
УДК 619:616. 995.421:619:578. 833:616.9 (470.44/.47)
ОСОБЕННОСТЬ УЧАСТИЯ ИКСОДОВЫХ КЛЕЩЕЙ НИЖНЕГО
ПОВОЛЖЬЯ В ХРАНЕНИИ, ПЕРЕДАЧИ ИНФЕКЦИОННЫХ И
АРБАВИРУСНЫХ БОЛЕЗНЕЙ СРЕДИ ЖИВОТНЫХ И ЛЮДЕЙ
Денисов А.А.
ФГОУ ВПО «Волгоградская государственная сельскохозяйственная
академия»
Ключевые слова: паразитология, иксодовые клещи, инфекции,
арбовирусы, Нижнее Поволжье.
Key words: parasitology, the iksodovie ticks, infections, arbovirusi,
Lower Povolge.
Сокращения: реакции агглютинации (РА), реакции прямой
гемагглютинации (РПГА), Крым-Конго геморрагической лихорадки
(ККГЛ).
Введение. Большое значение
имеют иксодовые клещи как
переносчики возбудителей многих болезней животных и человека.
Накопившиеся сведения к середине 20-го века о переносчиках разного
83