PALCAM Listeria Agar

ИНСТРУКЦИИ ПО
ПРИМЕНЕНИЮ — ГОТОВАЯ
К ИСПОЛЬЗОВАНИЮ СРЕДА
В ЧАШКАХ
PA-254539.02
Ред.: сентябрь 2011 г.
BD PALCAM Listeria Agar
НАЗНАЧЕНИЕ
BD PALCAM Listeria Agar (агар для обнаружения и изоляции видов Listeria) — это
селективная дифференциальная среда для изоляции и обнаружения бактерий Listeria
monocytogenes и других видов Listeria в пище и клинических образцах.
ПРИНЦИПЫ И ОПИСАНИЕ МЕТОДИКИ
Микробиологический метод.
Агар PALCAM основан на рецептуре Ван-Неттена (van Netten) и др., которые разработали
данную селективную и дифференциальную среду для изоляции и подсчета видов Listeria
в образцах пищи.1 Среда PALCAM рекомендована Американской ассоциацией
здравоохранения (APHA) и организацией AFNOR для обнаружения бактерий Listeria
monocytogenes в пищевых продуктах, а также Международной федерацией
производителей молока в качестве дополнительной среды для обнаружения видов
бактерий Listeria в молоке и молочных продуктах.2–4 Среда PALCAM также рекомендована
Департаментом здравоохранения Канады для обнаружения L. monocytogenes в пищевых
продуктах и экологических пробах и организацией OADC для обнаружения
микроорганизмов в пище.5,6 Она также может использоваться для изоляции L.
monocytogenes в клинических образцах.7,8
В агаре BD PALCAM Listeria Agar основой является колумбийский кровяной агар,
который является источником питательных веществ и кофакторов, необходимых для
роста Listeria. Селективность среды достигается за счет присутствия хлорида лития,
сульфата полимиксина B, гидрохлорида акрифлавина и цефтазидима, которые подавляют
рост не относящихся к видам Listeria бактерий, присутствующих в пищевых и клинических
образцах. Концентрация цефтазидима снижена с 20 мг/л до 8 мг/л для улучшения роста и
выделения бактерий Listeria. Дифференцирование в среде PALCAM основано на
гидролизе эскулина и ферментации маннита. Все виды Listeria подвергают гидролизу
эскулин, что выражается почернением среды. Продукт гидролиза, эскулетин (=6,7дигидроксикумарин), вступает в реакцию с ионами железа и образует комплекс с
коричневой или черной окраской. Иногда в этой среде возможен рост микроорганизмов, не
относящихся к бактериям Listeria, таких как стафилококки или энтерококки. Маннит и pHиндикатор, феноловый красный краситель, добавлены для дифференцирования штаммов
этих видов, ферментирующих маннит, от бактерий Listeria. Ферментация маннита
выражается изменением цвета среды от красного до желтого за счет образования кислот.
РЕАГЕНТЫ
BD PALCAM Listeria Agar
Рецептура* на литр очищенной воды
Основа из колумбийского кровяного
39,0 г
Акрифлавина
0,005
агара Bacto Columbia Blood Agar Base
гидрохлорид
Маннит
10,0
Полимиксина В сульфат 0,01
Глюкоза
0,5
Цефтазидим
0,008
Эскулин
1,0
Агар Bacto
2,0
Железа-аммония цитрат
0,5
Лития хлорид
15,0
Феноловый красный
0,08
pH 7,2 ± 0,2
* При необходимости изменяется и/или дополняется для соответствия критериям
эффективности.
PA-254539.02
-1-
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Только для профессионального применения.
Не используйте чашки при наличии признаков бактериального заражения, изменения
цвета, высыхания или других признаков разложения продукта.
Прочитайте документ ОБЩИЕ ИНСТРУКЦИИ ПО ПРИМЕНЕНИЮ, в котором приведено
описание асептических методов работы, биологических опасностей и утилизации
использованных продуктов.
ХРАНЕНИЕ И СРОК ГОДНОСТИ
После получения храните чашки в темноте при температуре от 2 до 8 °C в оригинальной
обертке до начала использования. Избегайте замораживания и перегрева. Чашки могут
быть засеяны до даты истечения срока годности (см. этикетку на упаковке) и
инкубированы в течение рекомендованного времени инкубации.
Чашки из открытых стопок по 10 чашек могут использоваться в течение одной недели при
условии хранения с соблюдением чистоты при температуре от 2 до 8 °C.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Засейте репрезентативные образцы следующими штаммами (подробные сведения см. в
документе ОБЩИЕ ИНСТРУКЦИИ ПО ПРИМЕНЕНИЮ). Инкубируйте среду. Инкубируйте
в аэробных условиях в течение 42 – 48 ч при температуре от 35 до 37 °C и проведите
считывание через 18 – 24 ч и после 42 – 48 ч инкубации.
Штамм
Результат роста
Рост от умеренного до превосходного; колонии сероListeria monocytogenes
ATCC 19112
зеленого цвета, окруженные ореолами с окраской от
темно-коричневого до черного цвета.
Рост от хорошего до превосходного; колонии сероListeria monocytogenes
ATCC 19115
зеленого цвета, окруженные ореолами с окраской от
темно-коричневого до черного цвета.
Escherichia coli ATCC 25922
Ингибирование (от частичного до полного)
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Полное ингибирование
Ингибирование (от частичного до полного)
Pseudomonas aeruginosa
ATCC 27853
Ингибирование частичное; колонии желтоватого
Staphylococcus aureus
ATCC 25923
цвета, окруженные желтыми ореолами.
Незасеянные
Красный цвет, прозрачный или с мутными следами
МЕТОДИКА
Поставляемые материалы
BD PALCAM Listeria Agar (чашки Stacker 90 мм). Свободные от микроорганизмов.
Непредоставляемые материалы
Дополнительная питательная среда, реагенты и лабораторное оборудование по мере
необходимости.
Типы образцов и транспортировка
Эта среда используется, главным образом, для изоляции бактерий Listeria в пищевых и
молочных продуктах. Среда также может использоваться для изоляции в клинических
образцах, например кала, во время эпидемиологических исследований числа носителей
Listeria или в других клинических образцах, в которых большая вероятность загрязнения
нормальной флорой (см. также ЭФФЕКТИВНОСТЬ И ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДИКИ). Для
исследования образцов из изначально стерильных сред организма см. раздел Методика
тестирования. Образцы и пробы следует отправлять в лабораторию напрямую или в
среде для транспортировки. В качестве среды для транспортировки Listeria могут
использоваться жидкие обогащенные среды.2–7 Для транспортировки продолжительностью
более 24 ч образцы можно заморозить, чтобы избежать избыточного заражения.7
PA-254539.02
-2-
Методика тестирования
Выполните посев образца или пробы штрихами (напрямую или из обогащенного бульона)
на поверхности среды. Агар BD PALCAM Listeria Agar следует засевать клиническими
образцами, если подозревается тяжелое заражение. Клинические образцы из изначально
стерильных сред организма (например, спинномозговая жидкость, околоплодные воды,
плацента или эмбриональные образцы) должны быть сначала засеяны в неселективную
среду, такую как колумбийский агар с 5 % овечьей крови BD Columbia Agar with 5%
Sheep Blood или шоколадный агар (агар GC с добавкой IsoVitaleX) BD Chocolate Agar
(GC Agar with IsoVitaleX). Необходимо включить также селективную среду для
грамположительных бактерий, например колумбийский агар с CNA и 5 % овечьей крови
BD Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood.7,8 Инкубируйте засеянную среду BD
PALCAM Listeria Agar в аэробных условиях (и все среды, содержащие кровь, в аэробной
атмосфере, обогащенной CO 2 ) в течение 18 – 24 ч при температуре 35 – 37 °C. В случае
отрицательного результата продлите инкубацию еще на 24 ч.
Результаты
В среде агара BD PALCAM Listeria Agar колонии Listeria выглядят серо-зелеными с
черным ореолом.
Для подтверждения присутствия Listeria выполняется дальнейший пересев в
соответствующие среды и биохимическое/серологическое исследование.2,3,7 Колонии
ферментирующих маннит микроорганизмов, таких как
стафилококки, которые могут размножаться в этой среде, выглядят желтоватыми с
желтым ореолом.
ЭФФЕКТИВНОСТЬ И ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДИКИ
Агар BD PALCAM Listeria Agar — это одна из утвержденных сред, используемых для
селективной изоляции бактерий Listeria monocytogenes и других видов Listeria в пищевых и
клинических образцах.2–8
В этой среде все виды Listeria будут размножаться и иметь одинаковый внешний вид
колоний. Поэтому все изоляты должны быть идентифицированы с помощью
биохимических и/или серологических процедур до уровня вида.
Инкубация этой среды в аэробной атмосфере, обогащенной диоксидом углерода, или в
микроаэробной атмосфере может привести к смене окраски фенолового красного pHиндикатора на желтую или оранжевую, что является ложным признаком положительной
ферментации маннита. Поэтому предпочтительнее использовать аэробную атмосферу.
Рост определенных штаммов Listeria может быть медленным в этой среде. Поэтому
инкубацию засеянных чашек следует продлить, если через 18 – 24 ч будут получены
отрицательные результаты.
В определенных образцах или пробах бактерии Listeria могут присутствовать в очень
малых количествах, находящихся ниже уровня обнаружения данной среды. В этих случаях
может потребоваться предварительное обогащение среды.3–7
СПРАВОЧНЫЕ МАТЕРИАЛЫ
1. Van Netten, P., I. Perales, A. Van de Moosalijk, G. D. W. Curtis, and D. A. A. Mossel. 1989.
Liquid and solid selective differential media for the detection and enumeration of L.
monocytogenes and other Listeria spp. Int. J. of Food Microbiol. 8:299-317.
2. L’association française de normalisation (AFNOR). 1993. Food Microbiology- Detection of
Listeria monocytogenes-Routine Method, V 08-055. AFNOR, Paris.
3. International Dairy Federation. 1990. Milk and milk products - Detection of Listeria
monocytogenes. IDF Provisional International Standard no. 143. International Dairy
Federation, Brussels.
4. Ryser, E.T., and C.W. Donnelly. 2001. Listeria. In: Downes, F.P., and K. Ito. Compendium of
methods for the microbiological examination of foods. 4th edition. American Public Health
Association (APHA). Washington, D.C. USA.
5. Farber, J. M., D. W. Warburton, and T. Babiuk. 1994. Isolation of Listeria monocytogenes
from all food and environmental samples. Health Protection Branch Ottawa, MFHPB-30.
Polyscience Publications, Quebec.
PA-254539.02
-3-
6. Bacteriological Analytical Manual. American Organization of Analytical Chemists., 8th ed.,
revision A, 1998. AOAC International, Gaithersburg, MD, USA.
7. Bille, J., J. Rocourt, and B. Swaminathan. 2003. Listeria and Erysipelothrix. In: Murray, P.
R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical
microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
8. Halle, E., et al. 2000. Genitalinfektionen Teil II. In: Mauch, H., Lüttiken, R., and S.
Gatermann (eds.): MiQ -Qualitätsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen
Diagnostik, vol. 11. Urban & Fischer, Munich, Germany.
УПАКОВКА И НАЛИЧИЕ
BD PALCAM Listeria Agar
№ по каталогу 254539
Готовая к использованию среда в чашках; 20 чашек
ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ
Для получения дополнительной информации обратитесь к местному представителю
компании BD.
Becton Dickinson GmbH
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
[email protected]
http://www.bd.com
http://www.bd.com/europe/regulatory/
Bacto is a trademark of Difco Laboratories, division of Becton, Dickinson and Company.
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection.
BD and BD logo are trademarks of Becton, Dickinson and Company
 2011 BD
PA-254539.02
-4-