ЗАО «ЭКОлаб» лабораторная диагностика сифилиса Толстых

Толстых Наталья Станиславовна.
ЗАО «ЭКОлаб»
лабораторная диагностика
сифилиса
1
Серологические исследования являются в настоящее
время основным элементом клинической лабораторной
диагностики сифилиса.
Они решают три задачи:
n
n
n
скрининг на сифилис;
диагностика сифилиса при наличии
подозрений на него;
контроль эффективности лечения
диагностированного сифилиса
2
Динамика антителообразования при сифилисе
IgG
Рецидив или
реинфекция
Эффективное лечение
IgM
Реагины
Недели после инфицирования
3
Нетрепонемные тесты
n
n
Сифилис-АгКЛ-РСК
реакция связывания комплемента с
кардиолипиновым антигеном
Сифилис-АгКЛ-РМП
реакция микропреципитации
и её модификация
n
Сифилис RPR-тест
q
Сифилис VDRL -тест
4
Трепонемные тесты
n
n
n
n
Сифилис-РПГА –тест
реакция пассивной гемагглютинации
ИФТС
ИФА-Антипаллидум-скрин
ИФА-Антипаллидум-одностадийный
ИФА-Антипаллидум-IgM
ИФА-Антипаллидум-IgG
иммуноферментный анализ
Лайн-блот-сифилис
иммунный блоттинг
Сифилис-IgG-РИФ и Сифилис-IgM-РИФ
реакция иммунофлюоресценции
5
Продукция ЗАО «ЭКОлаб» для серологической диагностики
сифилиса
Отдельные реагенты:
n
n
n
n
n
Комплемент сухой
Сыворотка диагностическая гемолитическая
для РСК
Кровь баранья дефибринированная для РСК
Сыворотки контрольные для диагностики
сифилиса (из крови человека или кролика)
Рекомбинантные антигены Treponema
pallidum (TpN15, TpN17, TpN47, TmpA)
6
Сифилис -РПГА -тест
Набор реагентов для определения антител
к Treponema pallidum в реакции пассивной
гемагглютинации.
РУ № ФС 012а2006/5026012а2006/5026-06 от 29.12.06 г.
Единственный отечественный набор с использованием лизатных
антигенов T.pallidum (штамм Nichols), что обеспечивает его
эффективность, не уступающую лучшим мировым образцам
(фирмы Spinreact, Испания; Newmarket Laboratories Ltd,
Великобритания; BioKit, Испания; Human, Германия.), также
использующих лизатные антигены T.pallidum
7
7
Формулировка результатов РПГА
В случае положительного результата в бланке
направления на РПГА используется формулировка
(пример):  Обнаружены АТ к Т.pallidum в титре
1:2560 (положительный, 4+).
q
При отрицательном результате выдается
следующее заключение :
 АТ к Т.pallidum не обнаружены (отрицательный).
q
Сифилис--РПГА
Сифилис
РПГА--тест
основные характеристики
Аналитическая чувствительность метода – 0,05 МЕ/мл
Набор выпускается в двух вариантах комплектации:
комплект № 1 – только для качественного исследования
комплект № 2 – для качественного и полуколичественного исследования
Наименование реагента
Комплект № 1
Комплект № 2
Тест--эритроциты (ТЭ)
Тест
1 фл. (8,5 мл)
2 фл. ( по 8,5 мл)
Контрольные эритроциты (КЭ)
1 фл. (8,5 мл)
1 фл. (8,5 мл)
Буферный раствор (БР)
1 фл. (20
(20 мл)
1 фл. (25
(25 мл)
Контрольный положительный образец (К+)
1 фл. (0,5
(0,5 мл)
1 фл. (0,5
(0,5 мл)
Контрольный отрицательный образец (К(К-)
1 фл. (0
(0,5 мл)
1 фл. (0
(0,5 мл)
Планшет для микротитрования
2 шт.
2 шт.
Объемы реагентов достаточны для исследования 100 образцов, включая контрольные
К+ стандартизован по содержанию антител с использованием международного
стандарта ВОЗ (NIBSC, London, UK); титр 1:2560.
Исследуемые образцы – сыворотка (плазма) крови, ликвор.
Время экспозиции до учета результатов – 45 мин.
Экспозиция при комнатной температуре.
9
Срок годности набора – 1,5 года
Схема постановки РПГА при качественном определении
Внесение образцов
(предварительно разведены 1:20 в БР)
1
2
3
4
6
5
К-
К+
Внесение тест- эритроцитов
1
2
3
4
5
6
Иссл.
образец
2
3
4
5
6
Перемешива ние соде рж имого лунок
осторожным покачиванием
2
Иссл.
образец
3
qВ одну из двух лунок с каждым разведенным
образцом внести по 75 мкл ТЭ
4
К+
q Во вторую лунку с каждым
разведенным
образцом внести по 75 мкл КЭ
К-
К+
1
по 25 мкл каждого образца,
предварительно разведенного 1:20, в две
смежные лунки.
К-
К+
Вне сение к онтрольных эритроцитов
1
q Внести
5
6
К-
q Планшет
осторожно
покачать,
чтобы
перемешать содержимое лунок, и выдержать не
менее 45 мин при комнатной температуре, после
чего учесть результаты реакции.
10
Схема постановки РПГА при определении титра антител в
пробах, давших положительную реакцию при качественном
определении
Приготовле ние серийных 2-кра тных разведений
исс ледуемых и контрольных образцов
1
2
3
4
5
6
7
8
Буфер ный ра с тво р
обр азец с ыво ротки,
разве денный 1:20
Внесе ние контрольных и те ст- эритроцитов
1
2
3
4
6
7
8
5
Те ст-э ритр оциты
q Для титрования использовать по 8 лунок в
каждом ряду планшета (один ряд для каждого
исследуемого образца, включая К+).
В первые лунки всех рядов внести по 25 мкл
соответствующих образцов, разведенных 1:20,
во все остальные - по 25 мкл БР.
Приготовить
серийные
двукратные
разведения каждого образца, (от 1:40 в лунке 2
до 1:2560 в лунке 8), из лунки 8 удалить
удалить 25 мкл полученного раствора.
q В первую лунку каждого ряда внести по
75 мкл КЭ, во все остальные лунки по 75 мкл
ТЭ
Контр о льные
э ритр оциты
Перемешивание с одерж имого лунок
осторожным пока чиванием
1
2
3
4
5
6
7
8
qПланшет осторожно покачать, чтобы
перемешать содержимое лунок, и выдержать
не менее 45 мин при комнатной температуре,
после чего учесть результаты реакции.
11
Учет результатов РПГА
4+
3+
2+
1+ или +
--
Резко положительная реакция - ровный слой ("зонтик") агглютинированных
эритроцитов, распределенных по дну лунки (4+)
Положительная реакция – эритроциты располагаются на большей части дна
лунки, при этом по периферии осадка формируется заметное кольцо (3+).
Слабоположительная реакция - эритроциты располагаются на небольшой
части дна лунки, формируя плотное кольцо из осадка эритроцитов с
заметным просветлением в центре (2+).
Неопределенная реакция – наличие небольшого рыхлого осадка эритроцитов
в центральной части лунки с нечеткими краями с незначительным просветом
в центре (1+ или +)
Отрицательная реакция – компактный осадок ("пуговка") в центральной
части дна лунки на чистом окружающем фоне (–)
12
Ложнотрицательные результаты
РПГА
Могут быть вызваны:
n Конкуренцией между IgG и IgM за места
связывания на антигене.
n Феноменом «прозоны», который
возникает из-за гиперпродукции А/Т.
Положительная реакция наступает при
большем разведении сыворотки.
Для автоматизации постановки РПГА и учета ее
результатов могут быть использованы
отечественные аппаратноаппаратно-программные
комплексы "Критерий
"Критерий--2", "Эксперт"Эксперт-Лаб",
импортные ридеры типа Anthos LP
LP400,
400, MRX,
MRX,
MR7000,
MR
7000, Dynateh MRXII и автоматические
анализаторы типа
Olimpus РК 3000.
Комплекс «Эксперт-Лаб»
14
15
В серодиагностике сифилиса РПГА может
использоваться для:
q
скрининга образцов - (простота, скорость, хорошая
воспроизводимость, возможность автоматизации )
q
подтверждающих исследований - (высокая
чувствительность и специфичность реакции ).
16
Источники ошибок
Небиологические:
Небиологические:
n загрязнённые плашки
n неправильное пипетирование
n наличие вибрации в лаборатории
n температура воздуха в лаборатории выходит за рамки 1818-25
градусов.
Биологические::
Биологические
n Зарегистрированы ложные позитивы у больных с
инфекционным мононуклеозом, боррелиозом, СКВ, у
наркоманов, у больных с коллагенозами, лепрой.
n Из двух стандартных трепонемных тестов (флюоресценция и
гемагглютинация), РПГА даёт меньшее количество
ложноположительных результатов.
n В основном , встречаемость ложноположительных
результатов в РПГА исследованиях очень редка у «здоровых»
людей (меньше 1%).
17
Основные конкурентные преимущества набора
«Сифилис--РПГА
«Сифилис
РПГА--тест»
1.
В отличие от других аналогичных наборов отечественного производства,
в которых используются рекомбинантные антигены Treponema pallidum
pallidum,, в нашем
наборе, как и в лучших импортных аналогах, используются нативные антигены
возбудителя..
возбудителя
2.
Использование для одного анализа по 75 мкл ТЭ и КЭ, хотя и повышает
стоимость исследования сравнительно с другими наборами, в которых расходуется
по 25 мкл этих реагентов, но зато обеспечивает существенно большую надежность
(чувствительность и специфичность) исследования
исследования..
3.
Стандартизация К+ (калибровка образца по международному стандарту)
обеспечивает высокую воспроизводимость исследования
исследования..
4.
Тест применим для исследования не только сыворотки (плазмы) крови
человека, но и СМЖ
СМЖ..
5.
Только в нашем наборе предусмотрен комплект № 2, позволяющий
проводить как скрининговые исследования, так и определение титра антител
антител..
6.
По отзывам многих специалистов набор "Сифилис
"Сифилис--РПГА
РПГА--тест" по своим
аналитическим и потребительским характеристикам занимает первое место среди
отечественных аналогов
аналогов..
18
Сифилис-АгКЛ- РМП
Набор применяется при диагностике сифилиса для исследования плазмы или
инактивированной сыворотки в реакции микропреципитации (РМП).
СОСТАВ НАБОРА:
Антиген кардиолипиновый (АгКЛ) - раствор в спирте этиловом абсолютированном
трех высокоочищенных липидов: кардиолипина - 0,03 %; лецитина - 0,27 % и
холестерина - 0,9 %; 10 ампул (по 2,0 мл).
Раствор холин-хлорида в 0,9 % растворе натрия хлористого; 2 флакона (по 5,0 мл)
или 1 флакон (10 мл).
Набор рассчитан на проведение 1000 определений
Срок годности – 1 год.
Сифилис-АгКЛ- РСК
Для проведения нетрепонемного теста при серологической диагностике сифилиса
по реакции связывания комплемента (РСК).
СОСТАВ НАБОРА
Антиген кардиолипиновый (АгКЛ) - раствор в спирте этиловом абсолютированном
трех высокоочищенных липидов: кардиолипина - 0,0175 %; лецитина - 0,0875 % и
холестерина - 0,3 %; 10 ампул (по 2,0 мл).
Ампульный нож.
Антиген рассчитан на проведение 1000 определений.
19
Срок годности – 1 год.
Сифилис-RPR-ТЕСТ
Для серодиагностики сифилиса и контроля результатов его лечения.
СОСТАВ НАБОРА
RPR-антиген – водная 0,02 % суспензия угольных частиц
сенсибилизированных смесью холестерина, кардиолипина, лецитина;
содержит консервант – азид натрия в конечной концентрации 0,095 %.
Положительная контрольная сыворотка (К+)
Отрицательная контрольная сыворотка (К-)
В комплект поставки входят также карточки для реакции, флакондиспенсер, игла дозирующая.
Набор выпускается в двух вариантах комплектации:
комплект № 1 (на 100 определений);
комплект № 2 (на 500 определений).
Быстрый скрининговый метод. Время постановки 8
Срок годности – 2 года.
минут
Незаменим при мониторинге эффективности лечения
К (+) сдантартизован по стандарту ВОЗ (NIBSC, London,
UK)
Аналитическая чувствительность набора составляет1,5 МЕ/мл
20
Иммуноферментные тест-системы
ИФА-Антипаллидум-скрин (антитела классов M, G, A)
ИФА-Антипаллидум-одностадийный (антитела M, G, A)
ИФА-Антипаллидум-IgM
ИФА-Антипаллидум-IgG
Исследуемые образцы – сыворотка (плазма) крови, ликвор
Комплектация наборов позволяет использовать их как для ручной
постановки, так и с ИФА
ИФА--анализаторами.
Возможно определение титра антител, в том числе по коэффициенту
позитивности (КП), т.е. без использования дополнительных стрипов
Аналитическая чувствительность метода – 0,02 МЕ/мл
Цветная индикация растворов
Срок годности = 12 месяцев.
21
Лайн--Блот Сифилис
Лайн
Тест-система для выявления антител к отдельным антигенам
Тествозбудителя сифилиса методом иммунного блоттинга с
использованием рекомбинантных антигенов.
22
Состав набора
Лайн-Блот-Сифилис
Маркировка
Зона TpN15
Зона TmpA
Контроль
интенсивности
реакции
Стандартная схема
нанесения антигенов
Treponema pallidum и
контролей на стрип
Иммуносорбент – тест-полоски (стрипы) из нитроцеллюлозной
мембраны, на каждую из которых в виде поперечных полос
нанесены рекомбинантные аналоги антигенов Treponema pallidum
(TpN15, TpN17, TmpA, TpN47), а также четыре контрольные полосы:
контроль специфичности реакции (КАГ),
контроли интенсивности окрашивания:
•
полоса с максимальной интенсивностью окрашивания
("3+");
•
полоса со средней интенсивностью окрашивания ("1+") –
служит одновременно контролем внесения образца.
•
полоса с минимальной интенсивностью окрашивания
("0,5+")
Контрольный положительный образец (К+)
Контрольный отрицательный образец (К–)
Конъюгат (концентрат) – антитела козьи к IgG человека,
конъюгированные со щелочной фосфатазой в стабилизирующем
растворе; прозрачная фиолетового цвета жидкость.
Раствор для разведения коньюгата (РРК)
Раствор для разведения образцов (РРО)
Субстратный раствор (СР)
10-кратный концентрат промывочного раствора (ПРх10)
Образец для анализа:сыворотка (плазма) крови , ликвор
Количество определений :24 включая контроли
Срок годности 1 год
Чувствительность и спцефичность : 100%
23
Сыворотки контрольные для диагностики
сифилиса
Жидкие высокоположительные, слабоположительные и
отрицательные сывороткм крови человека или кролика
Предназначены для контроля качества лабораторных
исследований на сифилис в
q
q
q
q
RPR ,РПМ, РСК
ИФА,
РПГА,
Иммуноблотинге.
Предусмотрено 4 варианта комплектации – отдельные комплекты каждого типа
сывороток и полный их набор.
Срок годности = 2,0 года
24
q
Производство диагностических систем.
q
142530, Московская обл., г. Электрогорск,
ул. Буденного, д. 1 http://www.ekolab.ru
q
Отдел маркетинга:
тел./факс: +7 (496) 433-35-29
E-mаil: [email protected]; [email protected]
n
n
q
n
n
Представительство в г. Москве:
тел./факс: +7(495) 938-8165, 938-8174
E-mаil: [email protected]
25
24
Спасибо за
внимание !