ИНСТРУКЦИЯ ОнкоГенетика BRCA - ДНК

ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов
для определения генетических полиморфизмов, ассоциированных с
риском развития рака молочной железы,
методом полимеразной цепной реакции
в режиме реального времени
ОнкоГенетика BRCA
Регистрационное удостоверение МЗ СР РФ
ФСР 2010/08415
ВНИМАНИЕ! Изучите инструкцию перед началом работы
2
СОДЕРЖАНИЕ
1.
Назначение………………………………………………………………………………
4
2.
Характеристика набора……………………………………………………………
4
2.1.
Принцип действия………………………………………………………
4
2.2.
Состав набора……………………………………………………………… 4
3.
Аналитические характеристики……………………………………………… 5
3.1.
Специфичность анализа……………………………………………… 5
3.2.
Чувствительность анализа…………………………………………… 5
4.
Требования к помещениям и организации работ…………………… 6
5.
Меры предосторожности…………………………………………………………
6.
Оборудование и материалы……………………………………………………… 6
7.
Анализируемый материал………………………………………………………… 7
8.
Проведение полимеразной цепной реакции…………………………… 7
9.
Регистрация результатов с использованием детектирующих
амплификаторов ДТ–322 и ДТ–96…………………………………………… 9
10.
Условия транспортирования, хранения и эксплуатации
комплектов…………………………………………………………………………………. 11
6
Приложение. Работа с программным обеспечением
перед запуском программы амплификации…………………………… 12
1.
Добавление нового теста………………………………………………………… 12
2.
Создание протокола с использованием параметра «Тест»…… 16
3.
Улучшение визуализации и корректировка результатов……… 16
3
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов
для определения генетических полиморфизмов,
ассоциированных с риском развития рака молочной железы,
методом полимеразной цепной реакции
в режиме реального времени
ОнкоГенетика BRCA
1.
НАЗНАЧЕНИЕ
1.1.
Набор реагентов ОнкоГенетика BRCA предназначен для
определения для определения аллельных вариантов генов
BRCA1 и BRCA2 человека (полиморфизмы 185delAG,
4153delA, 5382insC, 617 delT) методом полимеразной
цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени в
препаратах ДНК человека, полученных из периферической
крови.
1.2.
Комплекты реагентов могут быть использованы в клинико–
диагностических лабораториях медицинских учреждений и
научно–исследовательской практике.
2.
ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1.
Принцип действия
В основе работы комплектов реагентов лежит принцип
амплификации ДНК методом ПЦР. Процесс амплификации
заключается в серии повторяющихся циклов температурной
денатурации ДНК, отжига праймеров (затравок) комплементарных
специфическому
участку
ДНК
и
последующей
достройке
полинуклеотидных цепей ДНК–полимеразой.
В смесь для амплификации введены сигнальный зонды,
содержащие флуоресцентные метки FAM и HEX, на каждый вариант
определяемого генетического полиморфизма. После окончания ПЦР
проводится раунд температурного плавления сигнальных зондов, в
результате чего изменяется уровень флуоресценции, который
фиксируется и представляется программным обеспечением прибора
в виде графика. Если сигнальный зонд частично комплементарен
ДНК–мишени, температура его плавления будет отличаться от
температуры плавления полностью комплементарного зонда. На
основании температуры плавления сигнальных зондов проводится
интерпретация результатов анализа.
4
В набор включены два положительных контрольных
образца для каждого полиморфизма: гомозиготный по одному из
аллелей и гетерозиготный.
2.2.
Состав набора
1.
Смесь для амплификации:

[BRCA1: 185delAG] – 1 пробирка (960 мкл);

[BRCA1: 4153delA] – 1 пробирка (960 мкл);

[BRCA1: 5382insC] – 1 пробирка (960 мкл);

[BRCA2: 6174delT] – 1 пробирка (960 мкл);

Taq–AT–полимераза – 1 пробирка (96 мкл);

ПЦР–буфер – 2 пробирки (по 960 мкл);

минеральное масло – 1 флакон (3,84 мл).
2.
Положительные контрольные образцы (всего 8
пробирок по 40 мкл):

К+1: [BRCA1: 185delAG n/n] – 1 пробирка (40 мкл);

К+1: [BRCA1: 4153delA n/n] – 1 пробирка (40 мкл);

К+1: [BRCA1: 5382insC n/n] – 1 пробирка (40 мкл);

К+1: [BRCA2: 6174delT n/n] – 1 пробирка (40 мкл);

К+2: [BRCA1: 185delAG n/del] – 1 пробирка (40 мкл);

К+2: [BRCA1: 4153delA n/del] – 1 пробирка (40 мкл);

К+2: [BRCA1: 5382insC n/ins] – 1 пробирка (40 мкл);

К+2: [BRCA2: 6174delT n/del] – 1 пробирка (40 мкл).
2.3.
Время проведения анализа – около 4 часов.
2.4.
Набор рассчитан на исследование 48 образцов, включая
анализ неизвестных образцов, положительных контрольных
образцов и отрицательных контрольных образцов.
3.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1.
Специфичность анализа
В образцах биологического материала человека после
завершения реакции амплификации должен определяться генотип
исследуемого образца.
5
Анализируемые
участки
ДНК
находятся
в
генах,
встречающихся
не
только
у
человека.
Набор
реагентов
ОнкоГенетика
BRCA
может
регистрировать
положительный
результат (генотип исследуемого образца) в случае попадания в
реакционную пробирку ДНК любых других организмов, содержащих
аналогичную последовательность.
3.2.
Чувствительность анализа
Количество анализируемой ДНК должно быть не менее 1,0
нг на амплификационную пробирку. При использовании меньшего
количество ДНК производитель не гарантирует адекватную работу
комплекта.
В образцах с недостаточным количеством ДНК после
завершения реакции амплификации регистрируется сомнительный
результат.
Примечание.
Для
оценки
количества
выделенной
ДНК
рекомендуется использовать набор реагентов для контроля взятия
материала методом ПЦР (КВМ) (ООО «НПО ДНК–Технология»).
4.
ТРЕБОВАНИЕ К ПОМЕЩЕНИЯМ И ОРГАНИЗАЦИИ РАБОТ
Требования к помещениям и организации работ должны
соответствовать
Методическим
указаниям
МУ
1.3.2569–09
«Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала,
инфицированного патогенными биологическими агентами III–IV
групп патогенности».
Требования
к
проведению
работ
с
патогенными
микроорганизмами изложены в санитарных правилах СП 1.3.2322–
08 «Безопасность работы с микроорганизмами III–IV групп
патогенности
(опасности)
и
возбудителями
паразитарных
болезней».
5.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Мерами предосторожности при работе с набором реагентов
является соблюдение «Правил устройства, техники безопасности,
производственной санитарии, противоэпидемического режима и
личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах)
санитарно–эпидемиологических учреждений системы Министерства
здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).
6.
ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
При работе с набором реагентов требуются следующие
оборудование и материалы:
6

детектирующий амплификатор: ДТ–322, ДТ–96 (ООО
«НПО ДНК–Технология»);

микроцентрифуга/вортекс;

холодильник бытовой;

морозильник бытовой;

пробирки одноразовые пластиковые объёмом 1,5 мл;

пробирки одноразовые пластиковые объёмом 0,2 мл
для амплификации;

штатив «рабочее место» для пробирок объёмом 0,2
мл;

пипетки
полуавтоматические
одноканальные
с
переменным объёмом: 0,5–20 мкл, 20–200 мкл, 200–
1000 мкл;

одноразовые наконечники для полуавтоматических
пипеток объёмом 1–20 мкл; 20–200 мкл; 100–1000
мкл;

одноразовые
наконечники
с
фильтром
полуавтоматических пипеток объёмом 1–20 мкл;

одноразовые перчатки медицинские;

ёмкость для сброса использованных наконечников.
для
Программное обеспечение к ДТ–322, ДТ–96:

7.
Перед началом работы должны быть созданы «Тесты»
для
каждого
исследуемого
полиморфизма
(см.
Приложение, п.1.).
АНАЛИЗИРУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ
Анализируемым материалом являются препараты
человека, полученные из цельной периферической крови.
ДНК
Взятие цельной периферической крови. Взятие
цельной периферической крови проводится в пластиковые
пробирки объёмом 2,5 мл или 4,0 мл с добавленной в качестве
антикоагулянта динатриевой солью этилендиаминтетраацетата
(ЭДТА) в конечной
концентрации
2 мг/мл. В
качестве
антикоагулянта допускается также использование цитрата натрия.
Для перемешивания содержимого пробирку переворачивают 2–3
раза после взятия материала.
7
ВНИМАНИЕ! Не допускается использование гепарина в качестве
антикоагулянта.
Хранение образцов цельной периферической крови.
Допускается хранение образцов при температуре 2–8 °С не более
24 ч.
Выделение ДНК. Для получения ДНК из цельной
периферической крови рекомендуется использовать комплект
реагентов для выделения ДНК ПРОБА–ГС–ГЕНЕТИКА или ПРОБА–
РАПИД–ГЕНЕТИКА (производства ООО «НПО ДНК–Технология»).
Комплект
ПРОБА–ГС–ГЕНЕТИКА
рекомендуется
использовать в случае, если предполагается длительное хранение
выделенной ДНК (до 6 месяцев).
ДНК, полученная с использованием комплекта ПРОБА–
РАПИД–ГЕНЕТИКА, хранится не более 1 месяца.
8.
ПРОВЕДЕНИЕ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ
ВНИМАНИЕ! Одновременно с исследованием неизвестных образцов
провести исследование отрицательного контрольного образца,
прошедшего этап выделения ДНК (см. Инструкции к комплектам
реагентов для выделения ДНК ПРОБА–ГС–ГЕНЕТИКА и ПРОБА–
РАПИД–ГЕНЕТИКА).
Для определения аллельных вариантов генов BRCA1 и BRCA2
человека для каждого полиморфизма (185delAG, 4153delA,
5382insC, 617 delT) необходимо применять соответствующую смесь
для амплификации.
8.1.
Промаркировать необходимое количество пробирок для
амплификации объёмом 0,2 мл (количество анализируемых
образцов, умноженное на количество определяемых
генетических полиморфизмов; а также пробирку для
отрицательного контрольного образца «К-», пробирки для
положительных контрольных образцов – «К+1», «К+2».).
8.2.
Встряхнуть пробирки со смесью для амплификации в
течение 3–5 с и центрифугировать в течение 1–3 с на
микроцентрифуге/вортексе.
8.3.
Внести в промаркированные пробирки по 20 мкл
соответствующей смеси для амплификации (для каждого
полиморфизма отдельно).
8.4.
Встряхнуть пробирки с ПЦР–буфером и Taq–AT полимеразой
в течение 3–5 с и центрифугировать в течение 1–3 с на
микроцентрифуге/вортексе.
8
Внимание! Taq–AT полимеразу доставать из морозильной камеры
непосредственно перед использованием.
8.5.
Приготовить в отдельной пробирке смесь ПЦР–буфера и
Taq–AT полимеразы:

10 × (N+1) мкл ПЦР–буфера,

0,5 × (N+1) мкл Taq–AT полимеразы,
где N – количество промаркированных пробирок (п.8.1.) с
запасом на 1 образец.
Закрыть крышку пробирки, встряхнуть пробирку в течение
3–5 с и центрифугировать в течение 1–3 с на
микроцентрифуге/вортексе.
ВНИМАНИЕ! Смесь ПЦР–буфера и Taq–AT полимеразы готовить
непосредственно перед использованием, не допускается её
хранение.
8.6.
Добавить в каждую пробирку со смесью для амплификации
(п.8.3.) по 10 мкл смеси ПЦР–буфера и Taq–AT полимеразы.
8.7.
Добавить в каждую пробирку по одной капле (20 мкл)
минерального масла, закрыть крышки пробирок.
8.8.
Добавить в соответствующие пробирки по 5,0 мкл
анализируемого препарата ДНК (кроме пробирок «К-»,
«К+1» и «К+2»), закрыть крышки пробирок.
ВНИМАНИЕ! Во избежание контаминации следует вносить образцы
ДНК наконечниками с аэрозольными барьерами.
8.9.
Добавить в пробирку «К-» 5,0 мкл отрицательного
контрольного образца, прошедшего этап выделения ДНК, а
в пробирки, промаркированные «К+1», «К+2» внести по
5,0 мкл соответствующих положительных контрольных
образцов, закрыть крышки пробирок.
8.10.
Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге/вортексе
в течение 1–3 с.
8.11.
Установить
пробирки
амплификатора.
8.12.
Заполнить протокол (с использованием соответствующего
параметра
«Теста»
для
каждого
определяемого
полиморфизма) в программном обеспечении к прибору.
в
блок
детектирующего
Примечание.
Если
определение
данного
генетического
полиморфизма выполняется в первый раз, необходимо создать для
него соответствующий «Тест». Если «Тест» для определения
данного генетического полиморфизма уже существует, следует
9
сразу перейти к заполнению протокола (см. Приложение, п.2.).
8.13.
Закрыть блок детектирующего амплификатора и запустить
программу.
Продукты амплификации можно хранить при температуре
2–8 °С в течение 24 ч.
9.
РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОМ АМПЛИФИКАЦИИ С
ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ
ДЕТЕКТИРУЮЩИХ
АМПЛИФИКАТОРОВ ДТ–322 И ДТ–96
9.1.
Учёт результатов ПЦР осуществляется автоматически с
помощью программного обеспечения, поставляемого с
детектирующим амплификатором.
9.2.
В образцах ДНК, прошедших ПЦР, программа определяет
генотип исследуемого образца, который отображён в
таблице (рисунок 1) в графе «Анализ мутаций».
Интерпретацию результатов необходимо проконтролировать
с
помощью
визуального
анализа
кривых
плавления
и
откорректировать результаты (см. Приложение, п.3.).
Рисунок 1. Таблица результатов анализа
ВНИМАНИЕ! После корректировки результатов полученные
температурные пики не должны отличаться от заданных более чем
на 1,5 °С. Различия более чем на 1,5 °С могут свидетельствовать об
ошибках при проведении ПЦР (раскапывании смечи для
амплификации другого полиморфизма, неправильном задании
10
теста, некорректной расстановки пробирок в матрицу термоблока
прибора и др.).
Температурные пики должны соответствовать условиям:
гомозигота, определяемая по
каналу FAM:
Tm, °С FAM > Tm, °С HEX
гомозигота, определяемая по
каналу HEX:
гетерозигота:
Tm, °С FAM ≈ Tm, °С HEX
Полученные
экспериментальные
параметры
анализа
полиморфизмов следует ввести в параметры «Теста» для данного
полиморфизма (см. Приложение).
9.3.
Программа
определяет
следующих случаях:
сомнительный
результат
в

в образцах, не прошедших ПЦР;

в образцах с недостаточным количеством ДНК;

при значительных отличиях полученной температуры
плавления продуктов амплификации от заданной.
Следует повторить ПЦР для подобных образцов.
9.4.
В
отрицательных
контрольных
образцах
должен
регистрироваться сомнительный результат. При получении
положительного результата (определение генотипа) для
отрицательных контрольных образцов «К-», результаты
всей постановочной серии бракуют.
10.
УСЛОВИЯ
ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ,
ЭКСПЛУАТАЦИИ КОМПЛЕКТОВ
10.1.
Срок годности комплектов – 6 месяцев с даты изготовления.
10.2.
Смесь для амплификации, ПЦР–буфер и минеральное масло
хранить при температуре 2–8 °С в течение всего срока
годности.
10.3.
Taq–AT полимеразу хранить при температуре минус 20 °С в
течение всего срока годности.
10.4.
Транспортирование комплектов осуществляют всеми видами
крытого транспорта при температурах, соответствующих
условиям хранения комплектов реагентов, входящих в
состав набора.
11
ХРАНЕНИЯ
И
10.5.
Комплект с истекшим сроком годности применению не
подлежит.
10.6.
Для получения надёжных результатов необходимо строгое
соблюдение инструкции по применению набора.
10.7.
Предприятие–изготовитель
гарантирует
соответствие
набора требованиям технических условий при соблюдении
условий
транспортировки,
хранения
и
применения,
установленных техническими условиями.
По вопросам, касающимся набора реагентов для определения
генетических полиморфизмов методом полимеразной цепной
реакции в режиме реального времени ОнкоГенетика BRCA, следует
обращаться в ООО «НПО ДНК–Технология» по адресу:
117587, Москва, Варшавское ш., д.125ж, корп.6, этаж 11
Тел./факс + 7 (495) 980-45-55
Е-mail: [email protected]
www.dna-technology.ru
12
ПРИЛОЖЕНИЕ
РАБОТА С ПРОГРАММНЫМ ОБЕСПЕЧЕНИЕМ ПЕРЕД ЗАПУСКОМ
ПРОГРАММЫ АМПЛИФИАЦИИ
Добавление нового теста и заполнение
выполняется в режиме «Работа с прибором» программы.
1.
ДОБАВЛЕНИЕ НОВОГО ТЕСТА
1.1.
Для создания нового теста необходимо:
протокола

перейти
в
пункт
меню
«Создать/Редактировать тест»,

в открывшемся окне нажать кнопку «Создать новый
тест» или «Копировать текущий тест»,

ввести в пустое поле название нового теста,

нажать кнопку «ОК». Откроется окно «Тест».

Необходимо создать следующие тесты:

BRCA_185delAG;

BRCA_4153delA;

BRCA_5382insC;

BRCA_6174delT.
«Тест»
–>
Примечание. В случае копирования теста для каждого нового
теста сохраняются некоторые характеристики предыдущего – тип и
метод
анализа,
тип
исследуемых
пробирок,
программа
амплификации.
1.2.
Установить в окне «Тест» следующие параметры:
п.1. Анализ
Тип «Анализ полиморфизмов, плавление»
Метод «Геометрический (Ср)».
п.2. Пробирки
Выбрать «Образец»
(Убрать галочки у строк «контроль+» и «контроль-»)
п.5. Объём рабочей смеси в пробирку «35 мкл»
п.6. Флуорофоры:
«FAM» – вместо «а» внести «n»,
13
«HEX» – вместо «b» внести «del» (для полиморфизмов
185delAG,
4153delA,
6174delT)
или
«ins»
(для
полиморфизма 5382insC).
п.7. Критерий анализа полиморфизма
указать
соответствующие
температуры
плавления
продуктов амплификации (Tm, °C) (см. таблицу 1).
п.8. Программа аплификации (приведена в таблице 2).
Указать программу
способов:
амплификации
можно
одним

создать новую программу амплификации;

добавить имеющуюся программу.
из
ВНИМАНИЕ! В программе амплификации используется тип блока
«Кривая плавления» (см. п.1.3.).
После заполнения всех параметров нажать кнопку «ОК» в
окне «Тест».
Таблица 1
Критерий анализа полиморфизмов
(температуры плавления для аллельных вариантов генов BRCA1 и
BRCA2)
n/n
del/del
(ins/ins)
n/del
(n/ins)
BRCA_185delAG
FAM,
HEX,
TmoC
TmoC
56
49
BRCA_4153delA
FAM,
HEX,
TmoC
TmoC
49
41,5
BRCA_5382insC
FAM,
HEX,
TmoC
TmoC
52
40,5
BRCA_6174delT
FAM,
HEX,
TmoC
TmoC
52
42,5
44
57,5
39,5
50
45,5
52
40
49
55,5
57,5
48,5
50
51
50,5
50,5
49,5
14
Рисунок 2. Вид окна «Тест» с заполненными параметрами.
1.3.
Создание новой программы
«Кривая плавления»
амплификации
с
блоком
В окне «Редактор программ амплификации» указать имя
программы амплификации, заполнить таблицу программы в
соответствие с таблицей 2.
Таблица 2
Программа амплификации для детектирующих амплификаторов
ДТ–322 и ДТ–96 (ООО «НПО ДНК–Технология»)
№
Температура,
мин
блока
°С
сек
Число
циклов
Режим
оптических
измерений
Δt, oC
Тип блока
1
80
94
2
5
00
30
1
2
94
62
67
0
0
0
30
10
5
5
3
94
62
0
0
5
15
45
Цикл
4
25
0
30
1
Цикл
5*
25
0
15
50
6
10
…
…
Хранение
15
Цикл
Цикл
√
1,0 oC
«Кривая
плавления,
∆t=1 °С;
Tкон=75 °С
Хранение
* – при создании блока 5 отметить его тип как «Кривая плавления»
(рисунок 4, в таблице появится дополнительный параметр «Δt oC»
Рисунок 3. Фрагмент окна «Редактор программ амплификации» при
заполнении блока №5.
Ввести в графу «Температура °C» значение «25» (рис. 5).
поле
Для заполнения параметров кривой плавления нажать на
(блок №5 в графе «Δt oC).
В открывшемся окне «Кривая плавления» установить
парамаетры Δt=1,0 oС, Tкон=75 °С и нажать кнопку «ОК».
Рисунок 4. Фрагмент окна «Редактор программ амплификации» при
заполнении блока №5.
Рисунок 5. Вид окна «Кривая плавления».
16
1.4.
Создать многотестовый режим тест «BRCA»:
выбрать в меню «Тест» пункт «Создать/редактировать»,
создать тест «BRCA», отметить много тестовый режим;
редактировать тест «BRCA», в окне редактирования
выбрать
тесты
«BRCA_185delAG»,
«BRCA_4153delA»,
«BRCA_5382insC», «BRCA_6174delT» и нажать кнопку «ОК».
2.
СОЗДАНИЕ ПРОТОКОЛА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ
ПАРАМЕТРА «ТЕСТ»
2.1.
На вкладке «Протокол» окна программы нажать кнопку
«Добавить тест».
2.2.
В открывшемся окне «Добавить тест» выбрать из списка
необходимый тест, ввести количество анализируемых
образцов в строке «Количество» пункта «Образцы», нажать
кнопку «ОК».
2.3.
Отметить расположение пробирок на матрице термоблока
(снять галочку «Автозаполнение», нажать «Очистить поле
матрицы», нажать «Порядок заполнения»).
ВНИМАНИЕ! Расположение пробирок на матрице термоблока
должно строго соответствовать порядку установки пробирок в блоке
(п.8.12.).
2.4.
Заполнить поле «Идентификатор»
анализируемым образцам.
таблицы,
согласно
2.5.
При использовании нескольких тестов в одном протоколе
повторить пункты 2.1. – 2.4.
2.6.
Нажать кнопку «Применить» на вкладке «Протокол».
ВНИМАНИЕ! В
открывшейся вкладке «Запуск
программы
амплификации должна быть отражена программа амплификации,
приведённая в таблице 2.
2.7.
При необходимости заполнить поле «Комментарий» на
вкладке «Запуск программы амплификации».
2.8.
Закрыть блок детектирующего амплификатора и нажать
кнопку «Запуск программы».
3.
УЛУЧШЕНИЕ ВИЗУАЛИЗАЦИИ
РЕЗУЛЬТАТОВ
И
КОРРЕКТИРОВКА
Для
лучшей
визуализации
результатов
необходимо
скорректировать цветовую гамму пробирок в термоблоке.
17
Для
(кнопка
этого
следует
открыть
инструментальную
панель
), нажать «Анализ полиморфизмов, плавление» (кнопка
), выбрать «Цветовая гамма пробирок» (кнопка
).
Образцы, гомозиготные по полиморфизму, определяемому
каналом FAM, будут автоматически покрашены в синий цвет;
гетерозиготные – в красный; сомнительные – в жёлтый.
Рисунок 6. Кривые плавления, покрашенные в соответствии с
результатами анализа.
18
Рисунок 7. Корректировка значений температурных пиков кривых
плавления.
После
корректировки
«Температурных
баров»
экспериментальную температуру плавления можно увидеть в окне
«Параметры анализа» (вызывается кнопкой
«Параметры анализа полиморфизма».
), в пункте 5
Рисунок 8. Экспериментальная температура плавления
Полученные
экспериментальные
параметры
анализа
полиморфизмов следует ввести в параметры «Тест» для данного
полиморфизма
(см.
п.1.2.).Корректированные
температурные
параметры будут автоматически использоваться при дальнейших
исследованиях
изучаемого
полиморфизма
на
данном
детектирующем амплификаторе.
Номер 149–3
03.09.10
19
ООО «НПО ДНК–Технология»
117587, Москва, Варшавское ш., д.125ж, корп.6, этаж 11
Тел./факс +7 (495) 980-45-55
Е-mail: [email protected]
www.dna-technology.ru
20