ИЗУЧЕНИЕ МЕХАНИЗМОВ ВЛИЯНИЯ ПОВЕРХНОСТНО

146
ВЮНИК ФАРМАЦИ 2 (30) 2002
У Д К 615.454:615.32
ИЗУЧЕНИЕ МЕХАНИЗМОВ ВЛИЯНИЯ ПОВЕРХНОСТНОАКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ НА БИОДОСТУПНОСТЬ
И ФАРМАКОЛОГИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ
МЯГКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ
Л.В. Иванов, А.Ф. Пиминов, Ю . В . Зеленин
Национальная фармацевтическая академия У к р а и н ы
Д л я мягких лекарственных средств биодоступность
во м н о г о м зависит от с р а в н и т е л ь н о г о сродства ле­
карственных веществ (ЛВ) к к о л л о и д н ы м пространст­
венным структурам мази (крема) и м е м б р а н а м клеток
биологической поверхности, т. е. от распределения Л В
в системе коллоидных структур-мембран клеток.
В работах И в а н о в а Л .В. и его сотрудников показа­
но, что механизмы м о д у л я ц и и биодоступности под
действием ряда вспомогательных веществ заключаются
в эффективном связывании их с мембранами различных
клеток, вытеснении Л В из м е м б р а н по конкурентному
механизму, изменению текучести липидов мембран кле­
ток, а также дегидратации клеток [1-4].
Для Л В , имеющих в структуре заряды, важным мо­
ментом для их биодоступности является присутствие
в мягких лекарственных формах йоногенных П А В .
Целью работы явилось изучение механизмов влия­
ния ряда ПАВ на биодоступность и фармакологическую
активность мягких лекарственных средств, имеющих
в качестве фармакологически активных веществ отри­
цательно или положительно заряженные вещества.
Материалы и методы
Для изучения механизмов влияния П А В на биодос­
тупность использовали метод флуоресцентных зондов
[5]. В качестве флуоресцентного зонда использовали
1-анилинонафталин-8-сульфонат (1,8-АНС) производст­
ва «Serva»(OPr) [5]. В качестве клеток, моделирующих
клетки биоповерхностей использовали липосомы. П о ­
лучение липосом, введение в них зонда и П А В , а также
анализ сродства П А В к л и п о с о м а м осуществляли со­
гласно ранее описанным методикам [1,3,4].
Исследовали следующие П А В : ОС-20, твин-80, этоний, лаурилсульфат, цетилперидиний, цетилбензалконий, додецилбензалконий, бензалконий хлорид и др.
Результаты и обсуждение
Отрицательно з а р я ж е н н ы й зонд 1,8-АНС с одной
стороны моделирует отрицательно заряженные ЛВ, име­
ющие в молекуле гидрофобный фрагмент (нестероидные
противовоспалительные вещества), а с другой — явля­
ется чувствительным индикатором, изменяющим заряд
на мембранах клеток и мицеллах П А В .
Зонд 1,8-АНС растворяется в воде и липофильной
фазе, однако интенсивность флуоресценции зонда резко
возрастает при переходе его в липофильное окружение
и наоборот.
Добавление небольших количеств (0,01%) лаурилсульфата к липосомам приводило к резкому снижению
интенсивности флуоресценции 1,8-АНС в липосомах
(рисунок), а добавление 0,2% — к полному тушению
флуоресценции зонда вследствие его полного вытесне­
ния из мембраны липосом. Это можно объяснить эффек­
тивным связыванием анионного П А В с липосомами, по­
следующим увеличением отрицательного заряда на мем­
бране и отталкиванием отрицательно заряженного зонда
от мембраны в воду, которая тушит флуоресценцию
зонда. Введении катионного ПАВ-этония в липосомы,
напротив, приводило к резкому увеличению флуоресцен-
200
-I
0.00
0.0S
0.10
0.1S
020
Концентрация ПАВ
Влияние ПАВ на интенсивность флуоресценции зонда 1,8АНС в липосомах: 1 — этоний; 2 — твин-80; 3 — твин-80
(щелочная среда); 4 — лаурилсульфат
КЛ1Н1ЧН1АСПЕКТИ ВИВЧЕННЯ ТА ВПРОВАДЖЕННЯ НОВИХ М'ЯКИХ ЗАСОБ1В
ции зонда в мембране (см. рисунок) вследствие уве­
личения положительного заряда мембраны и увеличения
связывания отрицательно заряженного зонда с липосомами.
Уменьшение флуоресценции в присутствии твин-80
связано с вытеснением зонда из мембраны молекулами
ПАВ.
Н а м и проведены эксперименты, в которых опреде­
лялась флуоресценция зонда отдельно в липосомах,
в растворе исследуемого П А В , а также в их смеси (липо­
сомы и ПАВ). П р и этом флуоресценция зонда в липосо­
мах была п р и н я т а за 100%.
Исходя из д а н н ы х , представленых в таблице сле­
дует, что введение зонда в водные р а с т в о р ы П А В при­
водит к заметному изменению интенсивности флуорес­
ценции, о с о б е н н о в случае й о н о г е н н ы х П А В . Т а к ,
в растворе этония флуоресценция зонда б ы л а п р а к т и ­
чески такая же высокая, как и в л и п о с о м а х , что сви­
детельствует об эффективном взаимодействии зонда
с катионным П А В .
Высокое сродство зонда н а б л ю д а л о с ь к додецилбензалконию, цетилперидинию и бензалконию хлорида
с различной д л и н о й а л к и л ь н о г о хвоста. Н а и л у ч ш е е
взаимодействие зонда с молекулой бензалкония хлорида
происходило при длине а л к и л ь н о й цепи С и это де­
монстрировало тонкие механизмы влияния заряда, раз­
меров и структуры как молекулы Л В , так и пространст­
венных коллоидных структур на распределение заря­
женных молекул Л В в мягких лекформах.
Интенсивность флуоресценции 1,8-АНС в растворе
лаурилсульфата была низкой, что указывает на слабое
взаимодействие зонда с молекулами лаурилсульфата
вследствие электростатического отталкивания молекул.
А н а л и з д а н н ы х п о к а з а л (таблица), что хорошее
сродство к липосомам наблюдалось для нейоногенного
П А В — п р е п а р а т а ОС-20, лаурилсульфата натрия и бен­
залкония хлорида (наибольшее сродство для бензалко­
ния хлорида с длиной алкильной цепи С ) . Этоний, додецилбензалконий и цетилбензалконий имели неболь­
шое сродство к липосомам.
Исходя из этого, можно определить несколько меха­
низмов влияния П А В на биодоступность: увеличение
биодоступности за счет изменения заряда мембран под
действием йоногенных П А В , увеличение биодоступнос­
ти вследствие переноса Л В н а м е м б р а н ы с п о м о щ ь ю
П А В (ОС-20) и вытеснение Л В из мембран молекулами
ПАВ.
Способность П А В увеличивать сродство Л В к мем­
бранам м о ж н о использовать не т о л ь к о для увеличения
биодоступности Л В , но и для увеличения антимикроб1 4
14
Вещество
(ПАВ)
Флуоресценция
зонда в системе:
ЛИПОСОМЫ+
вещество (%)
147
Флуоресценция
зонда
в растворе ПАВ (%)
Этоний
190
102
Дб
193
110
Цб
205
113
БХ-12
228
150
БХ-14
200
185
БХ-16
190
130
ОС-20
95
98
Твин-80
112
13
Лаурил­
сульфат
31
10
ных свойств и противовоспалительного действия мазей
при их местном применении. Х о р о ш е й иллюстрацией
этого являются данные о влиянии лаурилсульфата нат­
рия и ОС-20 на увеличение диаметов зон задержки роста
Staphylococcus aureus 209 Р эмульсиями, содержащими
1% н и т а з о л а и с т а б и л и з и р о в а н н ы м и 5% с м е с и
различных э м у л ь г а т о р о в [6].
Полученные результаты, а также данные о механиз­
мах влияния неводных гидрофильных растворителей на
д е г и д р а т а ц и ю клеток и а н т и м и к р о б н у ю активность
[1,3,4] б ы л и н а м и и с п о л ь з о в а н ы при создании кремов
гомеопатического действия, в к о т о р ы х состав вспомо­
гательных веществ (ПЭО-400, пропиленгликоль, нейоногенные и йоногенные П А В и др.) автономно обеспе­
чивал н е о б х о д и м о е п р о т и в о о т е ч н о е и бактерицидное
действие.
ВЫВОДЫ
1. М е т о д о м флуоресцентных зондов изучены меха­
низмы взаимодействия ряда нейоногенных и йоногенных
П А В с липосомами, а также механизмы взаимодействия
П А В с флуоресцентной м о д е л ь ю (зонд 1,8-АНС) ле­
карственных веществ, имеющих в молекуле отрицатель­
ный заряд.
2. П о к а з а н о , что зонд 1,8-АНС эффективно взаимо­
действует с к а т и о н н ы м и П А В , некоторыми нейоногенными П А В и слабо взаимодействует с анионными.
3. М е х а н и з м ы увеличения биодоступности и фар­
макологической активности заряженных Л В могут быть
связаны с изменением заряда мембран клеток биологи­
ческих поверхностей п о д действием йоногенных П А В
и со с п о с о б н о с т ь ю н е к о т о р ы х П А В переносить Л В на
мембраны.
ЛИТЕРАТУРА
1. Влияние состава двухкомпонентныхрастворителей на биологические мембраны /Иванов Л.В., Ляпунов И. А.,
ЦымбалЛ.В. и др. // Хим.-фармац. ж.—1986.—№ 12.— С. 1437-1443.
148
ВЮНИК ФАРМАЦИ 2 (30) 2002
ЦымбалЛ.В. и др. // Хим.-фармац. ж.—1986.—№ 12.— С. 1437-1443.
2. Иванов Л. В. Изучение кинетики дегидратации клеток эритроцитов под действием ряда гидрофильных неводных
растворителей//Фармаком.—1998.—№5.-—
С. 43-46.
3. Иванов Л. В. Изучение взаимодействия некоторых гидрофильных неводных растворителей с биомембранами
различных клеток методами спиновых и флуоресцентных зондов // Фармаком.— 1999.— № 2.— С. 45-47.
4. Иванов Л. В., Орлова И. Н. Биофармацевтические исследования, направленные на оптимизацию состава, свойств
и пути введения лекарственных препаратов //В сб.: «Технология и стандартизация лекарств».— Т. 2.— X.,
2000.— С. 558-615.
5. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран.— М.:
Наука,— 1980.—320 с.
6. Исследование эмульсионных лекарственных форм. И. Лиофобные эмульсии. /Ляпунов Н.А., Иванов Л.В.,
Чернобай Ю.В. и другие //Хим.-фармац. журн.— 1985.— № 3.— С. 214-219.
У Д К 615.322:615.276
ИЗУЧЕНИЕ МОДУЛИРУЮЩЕГО ВЛИЯНИЯ
ДЕЙСТВУЮЩИХ ВЕЩЕСТВ ЛЯДВЕНЦА РОГАТОГО
НА РАЗЛИЧНЫЕ СТАДИИ И КОМПОНЕНТЫ
ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ПРОЦЕССА
i О.И. Набока, Л.Н. Воронина, В.Н. Ковалев, В.В. Король, Л.Г. Савченко,
J Л.В. Галузинская
Национальная фармацевтическая академия У к р а и н ы
Цель исследования. В настоящее время отмечается
тенденция к более ш и р о к о м у и с п о л ь з о в а н и ю лекарст­
венных средств растительного происхождения.
Фитохимическое изучение т р а в ы лядвенца р о г а т о ­
го (Lotus corniculatus L.) семейства бобовых (Fabaceae),
проведенное на кафедре фармакогнозии Н Ф А У , позво­
лило выявить в ее составе высокое содержание полифенольных соединений, представленных ф е н о л к а р б о н о в ы м и кислотами, ф л а в о н о и д а м и , к у м а р и н а м и . Л и п о фильная фракция содержит хлорофиллы, токоферолы,
каротиноиды, жирные кислоты [1].
Широкий спектр биологической активности указан­
ных фитокомпонентов, а также сведения эмпирической
медицины послужили основанием для эксперименталь­
ного изучения влияния действующих веществ некоторых
экстрактов (сухого и густого) лядвенца рогатого на фор­
мирование фаз экссудации и пролиферации в условиях
их моделирования.
Методы и результаты исследований
Антиэксеудативное действие изучали на модели каррагенинового отека задней конечности белых крыс мас­
сой 180-230 г. Ф л о г о г е н н ы й агент (1% р а с т в о р к а р р а генина) вводили с у б п л а н т а р н о в объеме 0,1 м л [4].
Суммарный полифенольный экстракт лядвенца ро­
гатого (Locorin) в дозах 25, 50, 100 мг/кг и п р е п а р а т
сравнения ортофен ( Е Д =8 мг/кг) вводили per os за
1 час до инъекции флогистика.
Развитие отека регистрировали в «пиковый» момент
каррагенинового воспаления - через три часа после на­
чала эксперимента [3].
Влияние препаратов лядвенца р о г а т о г о н а репаративные процессы в очаге повреждения изучали на мо­
дели линейных резаных ран. Наркотизированным белым
крысам массой 230-280 г в области спины делали линей­
ный разрез, швы накладывали на расстоянии 10 мм один
от другого [5]. В течение 5 последующих дней животным
наносили на раневую поверхность мази на основе дейст­
вующих веществ лядвенца р о г а т о г о (Lotus) в различ­
ных концентрациях - 1 % и 3%.
В качестве основных объектов исследования исполь­
зовали в о д н у ю (В - 1% и В - 3%) и хлороформенную
(X - 1 % и X - 3%) вытяжки лядвенца рогатого на мазевой
гидрофильно-гидрофобной основе.
О д н о в р е м е н н о исследовали в а н а л о г и ч н о м опыте
р а н о з а ж и в л я ю щ е е действие мази календулы 10%, на­
шедшей ш и р о к о е применение для лечения различных
видов р а н [2].
Д а н н ы е экспериментов свидетельствуют об ингибир о в а н и и экссудативных проявлений в очаге карраге­
нинового воспаления экстрактом лядвенца рогатого по
50