Èñêóññòâåííûé ãàìåòîãåíåç: äèôôåðåíöèðîâêà ýìáðèîíàëüíûõ ñòâîëîâûõ êëåòîê â ãàìåòû 32 Ò.Â. Ëîïàòèíà

32
Ìèíè-îáçîðû
Èñêóññòâåííûé ãàìåòîãåíåç: äèôôåðåíöèðîâêà
ýìáðèîíàëüíûõ ñòâîëîâûõ êëåòîê â ãàìåòû
Ò.Â. Ëîïàòèíà
Ñ ðàçâèòèåì ìåòîäîâ âûäåëåíèÿ, êóëüòèâèðîâàíèÿ è íàïðàâëåííîé äèôôåðåíöèðîâêè ýìáðèîíàëüíûõ ñòâîëîâûõ
êëåòîê (ÝÑÊ) ÷åëîâåêà ïåðåä ó÷¸íûìè è âðà÷àìè îòêðûëèñü
çàìàí÷èâûå ïåðñïåêòèâû çàìåñòèòåëüíîé êëåòî÷íîé òðàíñïëàíòàöèè äëÿ ëå÷åíèÿ ìíîãèõ äåãåíåðàòèâíûõ çàáîëåâàíèé.
Óæå ïîëó÷åíî áîëüøîå êîëè÷åñòâî ìíîãîîáåùàþùèõ ðåçóëüòàòîâ, êàñàþùèõñÿ äèôôåðåíöèðîâêè ÝÑÊ â ðàçëè÷íûå òèïû òêàíåé. Íàèáîëåå èíòåðåñíûì è ïåðñïåêòèâíûì
íàïðàâëåíèåì ýòèõ ðàáîò ÿâëÿåòñÿ ïîëó÷åíèå ïîëîâûõ êëåòîê èç ÝÑÊ. Ýòè ðàáîòû ìîãóò äàòü âîçìîæíîñòü íå òîëüêî
èññëåäîâàòü áèîëîãè÷åñêèå ïðîöåññû â ãàìåòàõ è ãàìåòîãåíåç, íî è ñòàòü îäíèì èç ñïîñîáîâ ëå÷åíèÿ áåñïëîäèÿ è
èíñòðóìåíòîì äëÿ èñêóññòâåííîãî ïîääåðæàíèÿ ÝÑÊ â áóäóùåì. Èñòîðèþ âûäåëåíèÿ ïîëîâûõ êëåòîê èç ÝÑÊ ìîæíî
ñ÷èòàòü íîâåéøåé, ïîñêîëüêó îíà íàñ÷èòûâàåò ÷óòü áîëåå
ïÿòè ëåò. Èçâåñòíî, ÷òî â ýìáðèîíàëüíîì ðàçâèòèè ÝÑÊ äàþò
íà÷àëî ïîëîâûì êëåòêàì â ïðîöåññå ãàìåòîãåíåçà. Íåñêîëüêî
èññëåäîâàòåëüñêèõ ãðóïï ïîïûòàëèñü ïîëó÷èòü ãàìåòîïîäîáíûå êëåòêè èç ÝÑÊ in vitro.
Îñíîâûâàÿñü íà óñïåøíûõ ýêñïåðèìåíòàõ ïî äèôôåðåíöèðîâêå ÝÑÊ âî ìíîãèå òèïû êëåòîê è òêàíåé, Hans Scholer ñ
êîëëåãàìè â Max Planck Institute of Molecular Medicine (Ãåðìàíèÿ) è University of Pennsylvania (ÑØÀ) ðåøèë ïðîâåðèòü,
Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ ¹ 2(4), 2006
íåò ëè ñðåäè ìíîæåñòâà ñòâîëîâûõ êëåòîê íà ðàçíûõ ñòàäèÿõ äèôôåðåíöèðîâêè òåõ, êîòîðûå ìîãóò áûòü ïðåäøåñòâåííèêàìè ãàìåò. Ó÷åíûå ââåëè ãåí çåëåíîãî ôëþîðåñöèðóþùåãî áåëêà â ñòâîëîâûå êëåòêè ìûøè òàêèì îáðàçîì, ÷òî îí
íà÷èíàë ñèíòåçèðîâàòüñÿ òîëüêî â ïîëîâûõ êëåòêàõ. ×åðåç
íåñêîëüêî äíåé êóëüòèâèðîâàíèÿ íåêîòîðûå ãðóïïû êëåòîê
ñòàëè ñïîíòàííî ñèíòåçèðîâàòü çåëåíûé áåëîê è ìàðêåðíûå
áåëêè, ñïåöèôè÷íûå äëÿ ïîëîâûõ êëåòîê. Åùå ÷åðåç íåêîòîðîå âðåìÿ ýòè êëåòêè ìîðôîëîãè÷åñêè ñòàëè ïîõîäèòü íà
îâîãîíèè. Êëåòêè âûæèëè â êóëüòóðå íåñêîëüêî ìåñÿöåâ è,
÷òî áîëåå óäèâèòåëüíî, íà÷àëè âûäåëÿòü ïîëîâûå ãîðìîíû
(ýñòðàäèîë). Îíè îïðåäåëèëè ýêñïðåññèþ ñïåöèôè÷åñêèõ ãåíîâ, íåîáõîäèìûõ äëÿ ñèíòåçà ýñòðàäèîëà, â ìåëêèõ êëåòêàõ,
ñîñòàâëÿþùèõ îñíîâó àãðåãàòà, ïîëîæèòåëüíîãî ïî çåë¸íîìó
áåëêó. Â 2003 ãîäó Karin Hubner èç ãðóïïû Scholer îïóáëèêîâàëà ñòàòüþ â Science [1], â êîòîðîé îïèñàëà ïðåâðàùåíèå
ýìáðèîíàëüíûõ ñòâîëîâûõ êëåòîê ìûøè â îâîöèòîïîäîáíûå
êëåòêè. Èíòåðåñíî, ÷òî Hubner èñïîëüçîâàëà ïðîòîêîë êóëüòèâèðîâàíèÿ â ñðåäå áåç êàêèõ-ëèáî ñïåöèôè÷åñêèõ ôàêòîðîâ ðîñòà èëè ïèòàþùèõ êëåòîê, òåì ñàìûì ïîêàçàâ âîçìîæíîñòü ñïîíòàííîãî ãàìåòîãåíåçà èç ÝÑÊ. Ñðåäè îòîáðàííûõ
ïî ýêñïðåññèè ìàðêåðíîãî çåëåíîãî áåëêà êëåòîê ñòàëè ïîÿâëÿòüñÿ òå, êîòîðûå ýêñïðåññèðóþò Vasa-ñïåöèôè÷åñêèé
Ìèíè-îáçîðû
áåëîê ïîñòìèãðàöèîííûõ ãåðìèíàëüíûõ êëåòîê, òî åñòü òåõ
ýìáðèîíàëüíûõ êëåòîê, êîòîðûå âñòóïèëè íà ïóòü äèôôåðåíöèðîâêè â ãàìåòû è ëîêàëèçîâàëèñü îáîñîáëåííî [2].
Íà 26-é äåíü êóëüòèâèðîâàíèÿ îâîöèòîïîäîáíûå êëåòêè
îòäåëÿëèñü îò îêðóæàâøèõ èõ êëåòîê è ñâîáîäíî ïëàâàëè â ñðåäå. Îíè áûëè ïîêðûòû ïðîçðà÷íîé îáîëî÷êîé, íàïîìèíàâøåé
zona pellucida. Áîëüøèíñòâî ýòèõ êëåòîê áûëè 50-70 ìèêðîìåòðîâ â äèàìåòðå, ÷òî ñðàâíèìî ñ ðàçìåðàìè íàñòîÿùèõ
îâîöèòîâ [3]. Òàêæå îíè ýêñïðåññèðîâàëè ìàðêåðíûå áåëêè
îâîöèòîâ: ZP1, ZP2, ZP3, Fig-alpha, GDF-9 [4-8], è áåëêè, ñïåöèôè÷íûå äëÿ ìåéîçà: DMC1, SCP3/COR1 [9], SCP/SYN1
[10]. Äîáàâëåíèå â ñðåäó ãîíàäîòðîïèíà ïðèâîäèëî ê ôîðìèðîâàíèþ ñòðóêòóðû, ïî ìîðôîëîãèè íàïîìèíàþùåé
ïîëÿðíîå òåëüöå, ÷òî ãîâîðèò î òîì, ÷òî «îâîöèò» ìîæåò
ïðîéòè ïåðâóþ ôàçó ìåéîçà. Íà 43-é äåíü êóëüòèâèðîâàíèÿ ýòè «îâîöèòû» îáðàçîâûâàëè ãðóïïû êëåòîê, êîòîðûå ïî
ýêñïðåññèðóåìûì ãåíàì è ìîðôîëîãèè ñîîòâåòñòâîâàëè ïðåäèìïëàíòàöèîííûì ýìáðèîíàì. Îíè ðàçâèâàëèñü äî ñòàäèè
ìîðóëû. Ó÷åíûå ïîñ÷èòàëè ýòè ôîðìèðîâàíèÿ ïàðòåíîòàìè ýìáðèîíàìè, ïîëó÷åííûìè îò àêòèâèðîâàííîé, íî íåîïëîäîòâîðåííîé ÿéöåêëåòêè.
 òî æå âðåìÿ áûëà îïóáëèêîâàíà ðàáîòà ïî ïîëó÷åíèþ
ìóæñêèõ ïîëîâûõ êëåòîê èç ÝÑÊ [11]. Toyooka Y. ñ êîëëåãàìè
ïîêàçàëè, ÷òî ãåðìèíàëüíûå ñòâîëîâûå êëåòêè, âûäåëåííûå
èç ýìáðèîíàëüíûõ òåëåö, ïðè ïåðåñàäêå â ÿè÷êî ìûøåé, ñïîñîáíû äèôôåðåíöèðîâàòüñÿ â òàêîì ìèêðîîêðóæåíèè â
«ìîðôîëîãè÷åñêè çðåëûå» ñïåðìàòîçîèäû. Äëÿ ýòèõ êëåòîê
áûëà ïîäòâåðæäåíà ñïîñîáíîñòü óñïåøíî ïåðåäàâàòü ñâîé
ãåíîì â áëàñòîöèñòó ïðè èíúåêöèè â îâîöèò.
Íåäàâíî Julang Li, èññëåäîâàòåëü èç University of Guelph
(Êàíàäû), ñîîáùèëà, ÷òî âìåñòå ñ êîëëåãàìè îíè ïðåâðàòèëè ñòâîëîâûå êëåòêè, âûäåëåííûå èç ýìáðèîíàëüíîé êîæè
ñâèíüè, â êëåòêè, ñèëüíî íàïîìèíàþùèå îâîöèòû. Ýêñïåðèìåíò Li áûë íàïðàâëåí íà òî, ÷òîáû èç íåñêîëüêèõ ìèëëèîíîâ
ñòâîëîâûõ êëåòîê êîæè 40-50-äíåâíîãî çàðîäûøà ñâèíüè
ìîæíî ïîëó÷èòü ãàìåòî-ïîäîáíûå êëåòêè ïîä äåéñòâèåì
ðàñòâîðà, ñîñòàâ êîòîðîãî àâòîð íå îïèñûâàåò. Îêîëî òðåòè
àãðåãàòîâ, ôîðìèðóþùèõñÿ â êóëüòóðå ñòâîëîâûõ êëåòîê,
èìåëè áîëüøóþ êëåòêó â öåíòðå. Ýòè àãðåãàòû áûëè ïåðåíåñåíû â ñðåäó, ñîäåðæàùóþ ãîíàäîòðîïèí, ãîðìîí, ñòèìóëèðóþùèé îáðàçîâàíèå îâîöèòîâ. Li îòêàçàëàñü íàçâàòü
âñå èíãðåäèåíòû ýòîé ñðåäû, òàê êàê ýòè äàííûå åùå íå
îïóáëèêîâàíû è íå çàïàòåíòîâàíû.  10% àãðåãàòîâ ñôîðìèðîâàëèñü î÷åíü êðóïíûå êëåòêè, 80-100 ìêì â äèàìåòðå.
Ïî ôîðìå è ìîðôîëîãèè îíè î÷åíü íàïîìèíàëè îâîöèòû.
Òàêæå ýòè êëåòêè ýêñïðåññèðîâàëè îêîëî 6 ãåíåòè÷åñêèõ
ìàðêåðîâ îâîöèòîâ. Li òàêæå ñîîáùèëà, ÷òî íåêîòîðûå èç
ýòèõ êðóïíûõ êëåòîê ñïîíòàííî ôîðìèðîâàëè ïàðòåíîòû
[12].
Èññëåäîâàòåëü èç Àâñòðàëèè Orly Lacham-Kaplan îïèñàë ñïîñîá ïîëó÷åíèÿ ãàìåò èç ïðåäøåñòâåííèêîâ, êîòîðûå,
ÿêîáû, ñïîíòàííî îáðàçóþòñÿ èç ÝÑÊ. Ýòè ïðåäøåñòâåííèêè ïîëîâûõ êëåòîê (embryonic germ cells, EGCs) îáðàçóþò
«áåññìåðòíóþ» êîëîíèþ êëåòîê, ñïîñîáíûõ ìíîãîêðàòíî
äåëèòüñÿ, íå òåðÿÿ ñâîåé ïëþðèïîòåíòíîñòè [13].  êà÷åñòâå
èíäóêòîðà äèôôåðåíöèðîâêè Kaplan èñïîëüçîâàë ñðåäó,
êîíäèöèîíèðîâàííóþ àêòèâíî äåëÿùèìèñÿ òåñòèêóëÿðíûìè
êëåòêàìè íîâîðîæäåííûõ ìûøåé. Ýòè êëåòêè ÿâëÿþòñÿ èñòî÷íèêîì ìíîæåñòâà öèòîêèíîâûõ ôàêòîðîâ (BMP-4, SCF,
LIF, FGF, GDF-9 è äðóãèõ), ñïîñîáíûõ ñòèìóëèðîâàòü äèôôåðåíöèðîâêó è ïîääåðæèâàòü ïëþðèïîòåíòíîñòü ñòâîëîâûõ
êëåòîê [14]. Ññûëàÿñü íà ñòàòüþ Karin Hubner [1], àâòîðû íå
ñìîãëè ïîâòîðèòü ýêñïåðèìåíò ñ ïîëó÷åíèåì îâîöèòîâ, ôîëëèêóëà è ïðîõîæäåíèåì ìåéîçà áåç ñòèìóëèðóþùèõ ôàêòîðîâ. Êëþ÷åâûì ìîìåíòîì â ïðîöåññå äèôôåðåíöèðîâêè
ïîëîâûõ êëåòîê in vitro Lacham-Kaplan ñ÷èòàåò ïîëó÷åíèå èç
33
ýìáðèîíàëüíûõ òåëåö ïðåäøåñòâåííèêîâ ýòèõ êëåòîê, êîòîðûå
îáðàçóþòñÿ ïîä âëèÿíèåì íåèçó÷åííûõ, ïðåäñòàâëåííûõ â
ìèêðîêîëè÷åñòâàõ â ýìáðèîíàëüíûõ òåëüöàõ, íî íåîáõîäèìûõ ôàêòîðîâ. Âñå ýòî ãîâîðèò î òîì, ÷òî â ýêñïåðèìåíòàõ
èñêóññòâåííî âîññîçäàþòñÿ óñëîâèÿ äëÿ ðàçâèòèÿ ïîëîâûõ
êëåòîê, íî ýòà òåõíîëîãèÿ åùå äî êîíöà íå èçó÷åíà.
Åùå îäèí èíòåðåñíûé è çíà÷èòåëüíûé ðåçóëüòàò ïîëó÷èëà ãðóïïà ó÷åíûõ âî ãëàâå ñ George Q. Daley èç Harvard
Stem Cell Institute [15]. Ýêñïåðèìåíò Daley áûë îñíîâàí íà
âûäåëåíèè ãåðìèíàëüíûõ êëåòîê, ïîçèòèâíûõ ïî ìàðê¸ðó
SSEA-1, èç ýìáðèîíàëüíûõ òåëåö. Ýòè êëåòêè ïðè êóëüòèâèðîâàíèè â ñðåäå ñ ðåòèíîåâîé êèñëîòîé (êîòîðàÿ ñòèìóëèðóåò äåëåíèå ãåðìèíàëüíûõ êëåòîê) è ðîñòîâûìè ôàêòîðàìè
äàâàëè íà÷àëî ñàìîîáíîâëÿåìîé ãåðìèíàëüíîé êëåòî÷íîé
ëèíèè (ñì. ðèñ.). Êëåòêè ëèíèè ýêñïðåññèðîâàëè «ïîëîâûå»
ìàðê¸ðû (Dazl, Piwil2, Rnf17, Tdrd1 è äð.). Êðîìå òîãî, ó íèõ
àêòèâèðîâàëèñü èìïðèíòèðóåìûå ãåíû, ÷òî òîæå ÿâëÿåòñÿ
ïðèçíàêîì ðàçâèòèÿ ïîëîâûõ êëåòîê. Åñëè æå ýìáðèîíàëüíûå òåëüöà êóëüòèâèðîâàëè ïðîäîëæèòåëüíîå âðåìÿ, òî
ïîëó÷àëè áîëåå çðåëûå êðóãëûå êëåòêè, íàïîìèíàþùèå
ñïåðìàòèäû. Èõ âûäåëÿëè ïðè ïîìîùè àíòèòåë íà àêðîñîìû
(FE-J1). Ýòà ïîïóëÿöèÿ â îñíîâíîì ñîñòîèò èç ãàïëîèäíûõ
êëåòîê, êîòîðûå ìîãóò óñïåøíî îïëîäîòâîðÿòü îâîöèò è èíäóöèðîâàòü ýìáðèîãåíåç äî ñòàäèè áëàñòîöèñòû. Ðàçëè÷íûìè ìåòîäàìè áûëî ïîêàçàíî ó÷àñòèå èñêóññòâåííîãî ñïåðìàòîçîèäà â îïëîäîòâîðåíèè è âçàèìîäåéñòâèå åãî ãåíîìà ñ
ãåíîìîì ÿéöåêëåòêè. Íî ïåðåíîñ â ìàòêó ýòèõ èñêóññòâåííûõ ýìáðèîíîâ íå ïðîâîäèëè, ïîýòîìó îöåíèòü èõ ôóíêöèîíàëüíóþ ïîëíîöåííîñòü íåëüçÿ [15].
Íåñìîòðÿ íà ìíîãèå íåðåøåííûå âîïðîñû, òåõíîëîãèÿ
ïîëó÷åíèÿ ïîëîâûõ êëåòîê â ïðîáèðêå èìååò áîëüøèå ïåðñïåêòèâû. Ýòà òåõíîëîãèÿ äàñò íå òîëüêî îãðîìíûå âîçìîæíîñòè äëÿ èçó÷åíèÿ ïîëîâûõ êëåòîê, íî òàêæå ïîçâîëèò ó÷åíûì ïðîâîäèòü ïåðåíîñ ñîìàòè÷åñêîãî ÿäðà, íå èñïîëüçóÿ
äîíîðñêèå îâîöèòû, à òàêæå ïîëó÷àòü ïîñëå ýòîãî êëåòêè ñ
àóòîãåííûìè ìèòîõîíäðèÿìè. Áîëåå îòäàë¸ííàÿ ïåðñïåêòèâà - ïîëó÷åíèå ïîñòîÿííî ñàìîâîçîáíîâëÿåìîãî èñòî÷íèêà ÝÑÊ. Êëèíè÷åñêèå ïåðñïåêòèâû èñïîëüçîâàíèÿ òåõíîëîãèè ñâÿçàíû ñ âîçìîæíîñòüþ ðåøåíèÿ ïðîáëåìû
áåñïëîäèÿ, õîòÿ åùå íèêòî íå ñìîã óñïåøíî ïðîâåñòè îïëîäîòâîðåíèå èñêóññòâåííî ïîëó÷åííûìè ãàìåòàìè.
Giuseppe Testa â ñâîåì îáçîðå î âîçìîæíîñòÿõ ïðàêòè÷åñêîãî ïðèìåíåíèÿ èñêóññòâåííûõ ïîëîâûõ êëåòîê [16] óïîìÿíóë äàæå âîçìîæíîñòü èìåòü äåòåé â ãîìîñåêñóàëüíûõ
ïàðàõ.
Îñìûñëèâàÿ ïåðñïåêòèâû è âîçìîæíîñòè ýòîé òåõíîëîãèè, íåëüçÿ çàáûâàòü î ïðîáëåìàõ, âîçíèêàþùèõ ïî ìåðå åå
ðàçâèòèÿ.  ïåðâóþ î÷åðåäü, äàâíî èçâåñòíî, ÷òî ïðè êóëüòèâèðîâàíèè êëåòîê â ãåíîìå íàêàïëèâàþòñÿ ìóòàöèè è ìåíÿåòñÿ èìïðèíòèíã, ÷òî ïðèâîäèò ê ñåðüåçíûì íàðóøåíèÿì
ðàçâèòèÿ êàê òêàíè, òàê è îðãàíèçìà â öåëîì. Ïîýòîìó äëÿ
èñïîëüçîâàíèÿ èñêóññòâåííûõ ãàìåò îäíîãî ôàêòà èõ ïîëó÷åíèÿ íåäîñòàòî÷íî, íåîáõîäèìî åùå è äîêàçàòü èõ íîðìàëüíîå ôóíêöèîíèðîâàíèå. Áîëåå ñåðüåçíûå ïðîáëåìû
ìîãóò áûòü ñâÿçàíû ñ ïðèìåíåíèåì ýòèõ ãàìåò â ýêñòðàêîðïîðàëüíîì îïëîäîòâîðåíèè, òàê êàê ñëåäóåò ó÷èòûâàòü ïðè÷èíû
áåñïëîäèÿ, âîçìîæíûå ãåíåòè÷åñêèå áîëåçíè ïàöèåíòîâ. Âåäü
â ïðîöåññå íîðìàëüíîãî îïëîäîòâîðåíèÿ ïðîèñõîäèò ñëîæíûé è ñòðîãèé îòáîð ïîëîâûõ êëåòîê, èñêëþ÷àþùèé âñå êëåòêè ñ êàêèìè-ëèáî äåôåêòàìè. Íî â òîæå âðåìÿ, èçó÷åíèå
ìåõàíèçìîâ èíäóêöèè äèôôåðåíöèðîâêè ïîëîâûõ êëåòîê,
áåññïîðíî, èìååò îãðîìíîå çíà÷åíèå äëÿ ñîâðåìåííîé
ìåäèöèíû è áèîëîãèè â öåëîì. Ñåé÷àñ ýòî îäíî èç ñàìûõ
íîâûõ è ïåðñïåêòèâíûõ íàïðàâëåíèé â áèîëîãèè, è èìåííî
ïîýòîìó îíî ïîðîæäàåò ìíîæåñòâî íàäåæä, ñïîðîâ è íîâûõ
âîïðîñîâ.
Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ ¹ 2(4), 2006
34
Ìèíè-îáçîðû
ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ:
1. Hubner K., Fuhrmann G., Christenson L.K. et al. Derivation of oocytes from
mouse embryonic stem cells. Science 2003; 300(5623): 1251-6.
2. Toyooka Y. Tsunekawa N., Takahashi Y. et al. Expression and intracellular
localization of mouse Vasa-homologue protein during germ cell development.
Mech. Dev. 2000; 93(1-2): 139-49.
3. Eppig J.J., O’Brien M.J. Development in vitro of mouse oocytes from
primordial follicles. Biol. Reprod. 1996; 54(1): 197-207.
4. Dong J., Albertini D.F., Nishimori K. et al. Growth differentiation factor-9 is
required during early ovarian folliculogenesis. Nature 1996; 383(6600): 531-5.
5. East I.J., Mattison D.R., Dean J. Monoclonal antibodies to the major protein
of the murine zona pellucida: effects on fertilization and early development. Dev.
Biol. 1984; 104(1): 49-56.
6. Liang L., Soyal S.M., Dean J. FIGalpha, a germ cell specific transcription
factor involved in the coordinate expression of the zona pellucida genes. Dev. 1997;
124(24): 4939-47.
7. Matzuk M.M. Revelations of ovarian follicle biology from gene knockout
mice. Mol. Cell Endocrinol. 2000; 163(1-2): 61-6.
8. Soyal S.M., Amleh A., Dean J. FIGalpha, a germ cell-specific transcription
factor required for ovarian follicle formation. Dev. 2000; 127(21): 4645-54.
Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ ¹ 2(4), 2006
9. Tarsounas M., Pearlman R.E., Moens P.B. Meiotic activation of rat pachytene
spermatocytes with okadaic acid: the behaviour of synaptonemal complex
components SYN1/SCP1 and COR1/SCP3. J. Cell Sci. 1999; 112(Pt 4): 423-34.
10. Rankin T., Talbot P., Lee E., Dean J. Abnormal zonae pellucidae in mice
lacking ZP1 result in early embryonic loss. Dev. 1999; 126(17): 3847-55.
11. Toyooka Y., Tsunekawa N., Akasu R., Noce T. Embryonic stem cells can
form germ cells in vitro. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2003; 100(20): 11457-62.
12. Vogel, G. Stem cells. Scientists chase after immortality in a petri dish.
Science 2005. 309(5743): 1982-3.
13. Lacham-Kaplan O., Chy H., Trounson A.. Testicular cell conditioned
medium supports differentiation of embryonic stem (ES) cells into ovarian
structures containing oocytes. Stem Cells 2005; 24(2): 266-73.
14. Creemers L.B., den Ouden K., van Pelt A.M., de Rooij D.G. Maintenance of
adult mouse type A spermatogonia in vitro: influence of serum and growth factors
and comparison with prepubertal spermatogonial cell culture. Reproduction 2002;
124(6): 791-9.
15. Geijsen N., Horoschak M., Kim K. et al. Derivation of embryonic germ
cells and male gametes from embryonic stem cells. Nature 2004; 427(6970):
148-54.
16. Testa G., Harris J. Ethics and synthetic gametes. Bioethics 2005; 19(2):
146-66.