ÔÈÇÈÎËÎÃÈß ÂËÈßÍÈÅ ÎÐÈÃÈÍÀËÜÍÎÃÎ ÑÒÐÓÊÒÓÐÍÎÃÎ ÀÍÀËÎÃÀ ÀÂÏ(6-9) — Ac-D-SPRG ÍÀ ÎÐÈÅÍÒÈÐÎÂÎ×ÍÎ-ÈÑÑËÅÄÎÂÀÒÅËÜÑÊÎÅ

ÂÅÑÒÍ. ÌÎÑÊ. ÓÍ-ÒÀ. ÑÅÐ. 16. ÁÈÎËÎÃÈß. 2012. ¹ 1
3
ÔÈÇÈÎËÎÃÈß
ÓÄÊ 612.821.2+612.434.018+591.51
ÂËÈßÍÈÅ ÎÐÈÃÈÍÀËÜÍÎÃÎ ÑÒÐÓÊÒÓÐÍÎÃÎ ÀÍÀËÎÃÀ ÀÂÏ(6-9) —
Ac-D-SPRG ÍÀ ÎÐÈÅÍÒÈÐÎÂÎ×ÍÎ-ÈÑÑËÅÄÎÂÀÒÅËÜÑÊÎÅ
ÏÎÂÅÄÅÍÈÅ È ÓÐÎÂÅÍÜ ÒÐÅÂÎÆÍÎÑÒÈ ÁÅËÛÕ ÊÐÛÑ
À.Ñ. Áåëÿêîâà, Î.Ã. Âîñêðåñåíñêàÿ, À.À. Êàìåíñêèé, Â.Ï. Ãîëóáîâè÷*
(êàôåäðà ôèçèîëîãèè ÷åëîâåêà è æèâîòíûõ; e-mail: [email protected])
Èçó÷åíî âëèÿíèå ñèíòåòè÷åñêîãî ñòðóêòóðíîãî àíàëîãà àðãèíèí-âàçîïðåññèíà Ac-D-SPRG
íà îðèåíòèðîâî÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîå ïîâåäåíèå è óðîâåíü òðåâîæíîñòè áåëûõ êðûñ. Ac-DSPRG ââîäèëè èíòðàíàçàëüíî â äîçàõ 0,01; 0,1; 1,0 è 10,0 ìêã/êã â îáúåìå 1 ìêë/10 ã ìàññû
òåëà çà 5 ìèí äî òåñòèðîâàíèÿ. Àc-D-SPRG âî âñåõ äîçàõ âûçûâàë óãíåòåíèå îðèåíòèðîâî÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîé ðåàêöèè (ÎÈÐ) è ïîâûøåíèå óðîâíÿ òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ. Ïðîòèâîðå÷èâûå ëèòåðàòóðíûå äàííûå íå äàþò âîçìîæíîñòè îäíîçíà÷íî ãîâîðèòü î ìåõàíèçìàõ,
ëåæàùèõ â îñíîâå ðåãóëÿöèè óðîâíÿ òðåâîæíîñòè è ÎÈÐ ñî ñòîðîíû ÀÂÏ, íî, áåçóñëîâíî,
ïîäòâåðæäàþò ó÷àñòèå äàííîãî ãîðìîíà â ýòîì ïðîöåññå.
Êëþ÷åâûå ñëîâà: íåéðîôèçèîëîãèÿ, àðãèíèí-âàçîïðåññèí, òðåâîæíîñòü, ôàðìàêîëîãèÿ, ðåãóëÿòîðíûå ïåïòèäû.
Ðåãóëÿòîðíûå ïåïòèäû âûçûâàþò áîëüøîé èíòåðåñ ó ñîâðåìåííûõ èññëåäîâàòåëåé.  ÷àñòíîñòè,
â íàñòîÿùåå âðåìÿ óñòàíîâëåí öåëûé ðÿä íåéðîïåïòèäîâ, èãðàþùèõ ðîëü íåéðîìåäèàòîðîâ è íåéðîìîäóëÿòîðîâ [1]. Ýòî ãèïîòàëàìè÷åñêèå ãîðìîíû (ëþëèáåðèí, òèðîëèáåðèí, ìåëàíîñòàòèí, ñîìàòîñòàòèí
è äð.), íåêîòîðûå òàõèêèíèíû (âåùåñòâî Ð, íåéðîòåíçèí è äð.), áîìáåçèíîïîäîáíûå ïåïòèäû, àíãèîòåíçèí, à òàêæå ãèïîôèçàðíûå ãîðìîíû: âàçîïðåññèí,
îêñèòîöèí, êîðòèêîòðîïèí è äð.
Ýòè ãîðìîíû, êàê ñòàëî èçâåñòíî ñ ñåðåäèíû
60-õ ãã. ÕÕ â., îáëàäàþò, ïîìèìî ñâîåé ñïåöèôè÷åñêîé ãîðìîíàëüíîé àêòèâíîñòè, ðÿäîì ýêñòðàãîðìîíàëüíûõ ýôôåêòîâ [2]. Îäíèì èç ïðåäñòàâëÿþùèõ
íàèáîëüøèé èíòåðåñ ãîðìîíîâ ïåïòèäíîé ïðèðîäû
ÿâëÿåòñÿ àðãèíèí-âàçîïðåññèí (ÀÂÏ), ñèíòåçèðóþùèéñÿ â çàäíåé äîëå ãèïîôèçà. Ïîìèìî ïåðèôåðè÷åñêîãî äåéñòâèÿ, îí âûçûâàåò ðÿä öåíòðàëüíûõ
ýôôåêòîâ, ìîäóëèðóÿ ïðîöåññû îáó÷åíèÿ è ïàìÿòè
è îòâåòíûå ðåàêöèè îðãàíèçìà íà äåéñòâèå ñòðåññîãåííûõ ôàêòîðîâ [3].
Èçâåñòíî, ÷òî àðãèíèí-âàçîïðåññèí ðàñïàäàåòñÿ â îðãàíèçìå íà íåñêîëüêî ëèíåéíûõ ôðàãìåíòîâ,
è äàííûå ïðîäóêòû ïðîòåîëèçà îáëàäàþò íåéðîòðîïíîé àêòèâíîñòüþ, êîòîðàÿ íå óñòóïàåò (à çà÷àñòóþ è
ïðåâîñõîäèò) àêòèâíîñòü öåëîé ìîëåêóëû ÀÂÏ â îòíîøåíèè ñòèìóëÿöèè ïîâåäåíèÿ, óëó÷øåíèÿ îáó÷åíèÿ è ïàìÿòè [3].
Ïðè àíàëèçå ðåçóëüòàòîâ, ïîëó÷åííûõ â íàøåé
ëàáîðàòîðèè ïðè èññëåäîâàíèè ðàçëè÷íûõ ôðàã-
ìåíòîâ àðãèíèí-âàçîïðåññèíà, áûëî âûäâèíóòî ïðåäïîëîæåíèå, ÷òî äëÿ ñîõðàíåíèÿ ó àíàëîãà ïîâåäåí÷åñêîé àêòèâíîñòè íåîáõîäèìà ñëåäóþùàÿ îñíîâíàÿ
ñòðóêòóðà: Z6-Pro7-Arg8-Gly9-NH2 (ãäå Z — àìèíîêèñëîòíûé îñòàòîê). Òàêèì îáðàçîì, äëÿ ïîëó÷åíèÿ
àíàëîãà ÀÂÏ(6-9), îáëàäàþùåãî âûðàæåííûì íîîòðîïíûì ýôôåêòîì, áûëî öåëåñîîáðàçíî ñèíòåçèðîâàòü
ïåïòèä ñ çàìåíîé Cys6 íà äðóãóþ àìèíîêèñëîòó, ñïîñîáñòâóþùóþ ïîâûøåíèþ åãî óñòîé÷èâîñòè ê ïðîòåîëèçó. Íà îñíîâàíèè êîíôîðìàöèîííîãî àíàëèçà,
ïðîâåäåííîãî ïðîôåññîðîì Â.Ï. Ãîëóáîâè÷åì â Èíñòèòóòå áèîîðãàíè÷åñêîé õèìèè ÍÀÍ Áåëàðóñè,
áûë ñèíòåçèðîâàí òåòðàïåïòèä Ac-D-Met6-Pro7-Arg8Gly9-NH2. Ïî äàííûì Í.Ñ. Ïîíîìàðåâîé, äàííûé
òåòðàïåïòèä îáëàäàåò ÿðêî âûðàæåííûì íîîòðîïíûì
äåéñòâèåì, îí óëó÷øàåò âîñïðèÿòèå èíôîðìàöèè è
ñïîñîáñòâóåò êîíñîëèäàöèè ïàìÿòíîãî ñëåäà [4]. Êðîìå òîãî, îí óñèëèâàåò îðèåíòèðîâî÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîå ïîâåäåíèå è ñíèæàåò ýìîöèîíàëüíîñòü æèâîòíûõ [5]. Îí òàêæå îáëàäàåò àíêñèîëèòè÷åñêèì è
àíòèäåïðåññàíòíûì äåéñòâèåì [6, 7].
Ñëåäóþùèì àíàëîãîì ÀÂÏ(6-9), ñèíòåçèðîâàííûì
â èíñòèòóòå áèîîðãàíè÷åñêîé õèìèè ÍÀÍ Áåëàðóñè, áûë òåòðàïåïòèä Ac-D-Ser6-Pro7-Arg8-Gly9-NH2
(Ac-D-SPRG).
Öåëüþ íàøåé ðàáîòû áûëî èññëåäîâàíèå âëèÿíèÿ îñòðîãî ââåäåíèÿ òåòðàïåïòèäà Ac-D-SPRG íà
îðèåíòèðîâî÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîå ïîâåäåíèå è óðîâåíü òðåâîæíîñòè áåëûõ êðûñ.
* Èíñòèòóò áèîîðãàíè÷åñêîé õèìèè ÍÀÍ Áåëàðóñè, Ðåñïóáëèêà Áåëàðóñü.
2 ÂÌÓ, áèîëîãèÿ, ¹ 1
4
ÂÅÑÒÍ. ÌÎÑÊ. ÓÍ-ÒÀ. ÑÅÐ. 16. ÁÈÎËÎÃÈß. 2012. ¹ 1
Ìàòåðèàëû è ìåòîäû èññëåäîâàíèÿ
Ðàáîòà ïðîâîäèëàñü íà ïîëîâîçðåëûõ ñàìöàõ íåëèíåéíûõ áåëûõ êðûñ ìàññîé 220—250 ã, â êàæäîé
ãðóïïå áûëî èñïîëüçîâàíî â ñðåäíåì ïî 18 æèâîòíûõ.
Ac-D-SPRG ââîäèëè èíòðàíàçàëüíî â äîçàõ 0,01;
0,1; 1,0 è 10,0 ìêã/êã â îáúåìå 1 ìêë/10 ã ìàññû òåëà
çà 5 ìèí äî òåñòèðîâàíèÿ. Êîíòðîëüíûì æèâîòíûì
ââîäèëè ýêâèâàëåíòíûé îáúåì ðàñòâîðèòåëÿ (äèñòèëëèðîâàííàÿ âîäà).
Èíòðàíàçàëüíûé ñïîñîá ââåäåíèÿ áûë âûáðàí
ñ öåëüþ áîëåå áûñòðîé äîñòàâêè ïåïòèäà â ãîëîâíîé
ìîçã, ìèíóÿ ãåìàòîýíöåôàëè÷åñêèé áàðüåð. Êðîìå
òîãî, ýòîò ñïîñîá ââåäåíèÿ íàèìåíåå ñòðåññîãåííûé,
÷òî ÿâëÿåòñÿ âàæíûì äëÿ èññëåäîâàíèÿ ïîâåäåí÷åñêèõ ðåàêöèé æèâîòíûõ.
Îðèåíòèðîâî÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîå ïîâåäåíèå æèâîòíûõ èññëåäîâàëè â òåñòàõ “îòêðûòîå ïîëå” (“áåññòðåññîðíàÿ” è “ñòðåññîãåííàÿ” ìîäèôèêàöèè) è “íîðêîâàÿ êàìåðà”. Ïðè òåñòèðîâàíèè â “îòêðûòîì ïîëå”
æèâîòíîå ïîìåùàëè â öåíòð àðåíû è â òå÷åíèå 2 ìèí
(êàæäûå 30 ñ) âèçóàëüíî îöåíèâàëè ãîðèçîíòàëüíóþ
è âåðòèêàëüíóþ äâèãàòåëüíóþ àêòèâíîñòü, êîëè÷åñòâî îòõîäîâ îò ñòåíêè àðåíû è êîëè÷åñòâî âûõîäîâ
â öåíòð àðåíû, óðîâåíü ãðóìèíãà. Îïûòû ïðîâîäèëè
â òèøèíå ïðè ñâåòå êðàñíîé ëàìïû â áåññòðåññîðíîé ìîäèôèêàöèè, à â ñòðåññîãåííîé ìîäèôèêàöèè
âìåñòî êðàñíîé ëàìïû íàä àðåíîé ïîìåùàëè ëàìïó
ìîùíîñòüþ 200 Âò è èñïîëüçîâàëè ýëåêòðè÷åñêèé
çâîíîê. Â òåñòå “íîðêîâàÿ êàìåðà” êðîìå ãîðèçîíòàëüíîé è âåðòèêàëüíîé äâèãàòåëüíîé àêòèâíîñòè è
ãðóìèíãà ðåãèñòðèðîâàëè õàðàêòåðíóþ äëÿ êðûñ èññëåäîâàòåëüñêóþ àêòèâíîñòü, à èìåííî êîëè÷åñòâî
îáñëåäîâàííûõ îòâåðñòèé â ïîëó àðåíû. Ðåãèñòðàöèþ
ïðîâîäèëè âèçóàëüíî â òå÷åíèå òðåõ ìèíóò â òèøèíå ïðè ñâåòå êðàñíîé ëàìïû.
Óðîâåíü òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ èññëåäîâàëè â
òåñòàõ “ïðèïîäíÿòûé êðåñòîîáðàçíûé ëàáèðèíò” è
“ñâåòëàÿ-òåìíàÿ êàìåðà”.  “ïðèïîäíÿòîì êðåñòîîáðàçíîì ëàáèðèíòå” â òå÷åíèå òðåõ ìèíóò ðåãèñòðèðîâàëè îáùåå âðåìÿ íàõîæäåíèÿ íà ñâåòó, ëàòåíòíûé
ïåðèîä çàõîäà â çàêðûòûé ðóêàâ, êîëè÷åñòâî âûõîäîâ íà îòêðûòûå ðóêàâà, êîëè÷åñòâî âûõîäîâ íà ïåðâóþ èëè âòîðóþ ïîëîâèíó ñâåòëîãî ðóêàâà, êîëè÷åñòâî ïåðåõîäîâ èç îäíîãî òåìíîãî îòñåêà â äðóãîé,
êîëè÷åñòâî ïåðåõîäîâ èç îäíîãî ñâåòëîãî îòñåêà â
äðóãîé, îáùåå êîëè÷åñòâî ïåðåõîäîâ, êîëè÷åñòâî ñâåøèâàíèé ñ îòêðûòûõ ðóêàâîâ ëàáèðèíòà, êîëè÷åñòâî
âûãëÿäûâàíèé èç çàêðûòûõ ðóêàâîâ ëàáèðèíòà, âåðòèêàëüíóþ äâèãàòåëüíóþ àêòèâíîñòü è ãðóìèíã.
 òåñòå “ñâåòëàÿ-òåìíàÿ êàìåðà” â òå÷åíèå 3 ìèí
âèçóàëüíî ðåãèñòðèðîâàëè ñóììàðíîå âðåìÿ, ïðîâåäåííîå â ñâåòëîì îòñåêå, ëàòåíòíûé ïåðèîä ïåðåõîäà â òåìíûé îòñåê, êîëè÷åñòâî ñòîåê â ñâåòëîì è
òåìíîì îòñåêàõ, êîëè÷åñòâî âûãëÿäûâàíèé èç òåìíîãî îòñåêà, êîëè÷åñòâî ïåðåõîäîâ ìåæäó ñâåòëûì
è òåìíûì îòñåêàìè, ãðóìèíã â ñâåòëîì îòñåêå.
Ïðè îáðàáîòêå äàííûõ èñïîëüçîâàëè ñòàíäàðòíûå ìåòîäû ñòàòèñòè÷åñêîãî àíàëèçà. Ïðè ñðàâíåíèè
ïîëó÷åííûõ ìàññèâîâ äàííûõ èñïîëüçîâàëè êðèòåðèé Ñòüþäåíòà (ïàðàìåòðè÷åñêèé êðèòåðèé), à òàêæå
òî÷íûé êðèòåðèé Ôèøåðà è c2 (íåïàðàìåòðè÷åñêèå
êðèòåðèè). Îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ ïðîèçâîäèëàñü ñ
ïîìîùüþ ïàêåòà ñòàòèñòè÷åñêèõ ïðîãðàìì Statistica 5.0 è ñðåäñòâ Microsoft Excel.
Ðåçóëüòàòû
 áåññòðåññîðíîé ìîäèôèêàöèè òåñòà “îòêðûòîå ïîëå” ââåäåíèå òåòðàïåïòèäà Ac-D-SPRG â äîçå
0,01 ìêã/êã íå îêàçûâàëî âëèÿíèÿ íà ïîâåäåíèå
æèâîòíûõ.
Ïðè ââåäåíèè äàííîãî ïðåïàðàòà â äîçå 0,1 ìêã/êã
áûëî çàðåãèñòðèðîâàíî óâåëè÷åíèå ïðîäîëæèòåëüíîñòè ëàòåíòíîãî ïåðèîäà âûõîäà çà ïðåäåëû öåíòðàëüíîãî ñåêòîðà. Ââåäåíèå ïðåïàðàòà â äîçå 1,0 ìêã/êã
ïðèâåëî ê óâåëè÷åíèþ ñóììàðíîãî êîëè÷åñòâà ñòîåê
ó æèâîòíûõ îïûòíîé ãðóïïû.
Âåùåñòâî â äîçå 10 ìêã/êã íå îêàçûâàëî âëèÿíèÿ íà îðèåíòèðîâî÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîå ïîâåäåíèå
æèâîòíûõ. Îäíàêî ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî íàáëþäàëîñü
äîñòîâåðíîå ñíèæåíèå ãðóìèíãà â îïûòíîé ãðóïïå
ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíûìè æèâîòíûìè.
 ñòðåññîãåííîé ìîäèôèêàöèè òåñòà “îòêðûòîå
ïîëå” ââåäåíèå Ac-D-SPRG â äîçàõ 1,0 è 0,01 ìêã/êã
íå âûçûâàëî èçìåíåíèé ïàðàìåòðîâ îðèåíòèðîâî÷íîèññëåäîâàòåëüñêîãî ïîâåäåíèÿ. Îäíàêî íàáëþäàëîñü
äîñòîâåðíîå ñíèæåíèå ãðóìèíãà â îïûòíûõ ãðóïïàõ
ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíûìè æèâîòíûìè, ÷òî ìîæåò ñâèäåòåëüñòâîâàòü îá óñèëåíèè ïàññèâíî-îáîðîíèòåëüíîé ðåàêöèè íà ôîíå ïîâûøåííîé òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ â ñòðåññîãåííûõ óñëîâèÿõ. Â äîçå
0,1 ìêã/êã ïðåïàðàò ïðèâîäèë ê ïîâûøåíèþ ñóììàðíîãî êîëè÷åñòâà ñòîåê. Ââåäåíèå Ac-D-SPRG â äîçå
10 ìêã/êã ïðèâåëî ê óìåíüøåíèþ äëèíû ïðîáåãà
â îïûòíîé ãðóïïå ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíîé, ÷òî
ñâèäåòåëüñòâóåò î ñíèæåíèè äâèãàòåëüíîé àêòèâíîñòè æèâîòíûõ (ðèñ. 1). Ïðè ýòîì òàêæå íàáëþäàëîñü
äîñòîâåðíîå óìåíüøåíèå êîëè÷åñòâà îòõîäîâ îò ñòåí-
Ðèñ. 1. Âëèÿíèå Ac-D-SPRG â äîçå 10 ìêã/êã íà äâèãàòåëüíóþ
àêòèâíîñòü æèâîòíûõ â ñòðåññîãåííîé ìîäèôèêàöèè òåñòà “îòêðûòîå ïîëå”. Äîñòîâåðíîå îòëè÷èå îò êîíòðîëÿ îòìå÷åíî çâåçäî÷êîé (p < 0,05)
ÂÅÑÒÍ. ÌÎÑÊ. ÓÍ-ÒÀ. ÑÅÐ. 16. ÁÈÎËÎÃÈß. 2012. ¹ 1
Ðèñ. 2. Âëèÿíèå Ac-D-SPRG íà îðèåíòèðîâî÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîå ïîâåäåíèå æèâîòíûõ â òåñòå “íîðêîâàÿ êàìåðà”: À — êîëè÷åñòâî ñòîåê, Á — êîëè÷åñòâî îáñëåäîâàííûõ îòâåðñòèé. Äîñòîâåðíîå îòëè÷èå îò êîíòðîëÿ îòìå÷åíî: çâåçäî÷êîé ïðè p < 0,05,
äâóìÿ çâåçäî÷êàìè ïðè p < 0,01
êè àðåíû â îïûòíîé ãðóïïå ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíîé, ÷òî ÿâëÿåòñÿ ïîêàçàòåëåì ïîâûøåííîé òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ.
 òåñòå “íîðêîâàÿ êàìåðà” áûëî çàðåãèñòðèðîâàíî âûðàæåííîå óãíåòåíèå îðèåíòèðîâî÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîãî ïîâåäåíèÿ ïðè ââåäåíèè Àc-D-SPRG
â äîçàõ 0,01; 0,1 è 10,0 ìêã/êã (ðèñ. 2). Íàèáîëåå âûðàæåííûé ýôôåêò â îòíîøåíèè âèäîñïåöèôè÷åñêîé
èññëåäîâàòåëüñêîé àêòèâíîñòè æèâîòíûõ — êîëè÷åñòâà îáñëåäîâàííûõ îòâåðñòèé — íàáëþäàëñÿ ïðè èñïîëüçîâàíèè ïðåïàðàòà â äîçå 0,01 ìêã/êã (ðèñ. 2, Á).
Ââåäåíèå Ac-D-SPRG â äàííîì ñëó÷àå ïðèâîäèëî ê
äîñòîâåðíîìó ñíèæåíèþ êîëè÷åñòâà îáñëåäîâàííûõ
îòâåðñòèé êàê íà ïåðâûõ äâóõ ìèíóòàõ òåñòà, òàê è
ñóììàðíî. Ïðåïàðàò â äîçå 0,1 ìêã/êã âûçûâàë ñíèæåíèå êàê ãîðèçîíòàëüíîé äâèãàòåëüíîé àêòèâíîñòè
íà ïðîòÿæåíèè âñåãî âðåìåíè òåñòèðîâàíèÿ, òàê è
ñóììàðíîãî êîëè÷åñòâà èññëåäîâàííûõ îòâåðñòèé.
 äîçå 1,0 ìêã/êã Ac-D-SPRG íå îêàçûâàë çíà÷èìîãî âëèÿíèÿ íà ïîâåäåíèå æèâîòíûõ â äàííîì òåñòå. Ïðè ââåäåíèè ïðåïàðàòà â äîçå 10,0 ìêã/êã âåðòèêàëüíàÿ àêòèâíîñòü æèâîòíûõ ñíèæàëàñü íà ïðîòÿæåíèè âñåãî âðåìåíè òåñòèðîâàíèÿ (ðèñ. 2, À), íàáëþäàëîñü ñíèæåíèå ÷èñëà èññëåäîâàííûõ îòâåðñòèé
íà òðåòüåé ìèíóòå ýêñïåðèìåíòà. Òàêæå çàðåãèñòðèðîâàíî äîñòîâåðíîå ñíèæåíèå ãðóìèíãà â îïûòíîé ãðóïïå.
 òåñòå “ïðèïîäíÿòûé êðåñòîîáðàçíûé ëàáèðèíò”
ïðè ââåäåíèè Ac-D-SPRG â äîçå 0,01 ìêã/êã íàáëþ3 ÂÌÓ, áèîëîãèÿ, ¹ 1
5
äàëîñü ïîâûøåíèå óðîâíÿ òðåâîæíîñòè, âûðàæåííîå â äîñòîâåðíîì óìåíüøåíèè êîëè÷åñòâà ïåðåõîäîâ ìåæäó ñâåòëûìè îòñåêàìè ëàáèðèíòà, êîëè÷åñòâà âûõîäîâ íà ïåðâóþ è âòîðóþ ïîëîâèíû ñâåòëîãî
ðóêàâà (ðèñ. 3).  äîçå 0,1 ìêã/êã Ac-D-SPRG íå îêàçûâàë çíà÷èìîãî âëèÿíèÿ íà óðîâåíü òðåâîæíîñòè
æèâîòíûõ â äàííîì òåñòå. Ïðè ââåäåíèè Ac-D-SPRG
â äîçå 1,0 ìêã/êã íàáëþäàëîñü äîñòîâåðíîå óìåíüøåíèå âðåìåíè, ïðîâåäåííîãî æèâîòíûì íà ñâåòó,
÷èñëà ñâåøèâàíèé ñ îòêðûòûõ ðóêàâîâ ëàáèðèíòà, êîëè÷åñòâà âûõîäîâ íà ïåðâóþ ïîëîâèíó ñâåòëîãî ðóêàâà è êîëè÷åñòâà ïåðåõîäîâ ìåæäó ñâåòëûìè îòñåêàìè ëàáèðèíòà, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î ïîâûøåííîì
óðîâíå òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ (ðèñ. 3, À). Ïðåïàðàò
â äîçå 10,0 ìêã/êã âûçûâàë äîñòîâåðíîå óìåíüøåíèå ñóììàðíîãî êîëè÷åñòâà ñòîåê è êîëè÷åñòâà âûõîäîâ íà ïåðâóþ ïîëîâèíó ñâåòëîãî ðóêàâà ëàáèðèíòà (ðèñ. 3, Á). Íàáëþäàâøååñÿ äîñòîâåðíîå ñíèæåíèå
ãðóìèíãà â äàííîì ñëó÷àå, ïî-âèäèìîìó, ñâèäåòåëüñòâóåò îá ýìîöèîíàëüíîé çàòîðìîæåííîñòè æèâîòíûõ ïðè ïîâûøåííîì óðîâíå òðåâîæíîñòè. Òàêèì
îáðàçîì, ââåäåíèå äàííîãî òåòðàïåïòèäà âî âñåõ èñïîëüçîâàííûõ äîçàõ ïðèâîäèëî ê ïîâûøåíèþ óðîâíÿ òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ, âûðàæåííîìó â ñíèæåíèè
âðåìåíè ïðåáûâàíèÿ íà ñâåòó, ñíèæåíèè âåðòèêàëüíîé àêòèâíîñòè è êîëè÷åñòâà âûõîäîâ íà îòêðûòûå
ðóêàâà ëàáèðèíòà.
Ðèñ. 3. Âëèÿíèå Ac-D-SPRG íà óðîâåíü òðåâîæíîñòè êðûñ â òåñòå “ïðèïîäíÿòûé êðåñòîîáðàçíûé ëàáèðèíò”: À — âðåìÿ, ïðîâåäåííîå íà ñâåòó, Á — êîëè÷åñòâî âûõîäîâ íà îòêðûòûå ðóêàâà
ëàáèðèíòà. Äîñòîâåðíîå îòëè÷èå îò êîíòðîëÿ îòìå÷åíî çâåçäî÷êîé (p < 0,05)
6
ÂÅÑÒÍ. ÌÎÑÊ. ÓÍ-ÒÀ. ÑÅÐ. 16. ÁÈÎËÎÃÈß. 2012. ¹ 1
Ðåçóëüòàòû, ïîëó÷åííûå ïðè òåñòèðîâàíèè æèâîòíûõ â “ñâåòëîé-òåìíîé êàìåðå”, íå ïîçâîëÿþò
îäíîçíà÷íî ñóäèòü î íàïðàâëåííîñòè äåéñòâèÿ AcD-SPRG â èñïîëüçîâàííûõ äîçàõ íà óðîâåíü òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ, à òàêæå íà äðóãèå ïîêàçàòåëè,
ðåãèñòðèðóåìûå â äàííîì òåñòå.
Òàê, ñóììàðíîå êîëè÷åñòâî ñòîåê çíà÷èìî èçìåíÿëîñü òîëüêî ó æèâîòíûõ, êîòîðûì ââîäèëè Ac-DSPRG â äîçå 10,0 ìêã/êã (ñíèæàëîñü), â òî âðåìÿ
êàê â îñòàëüíûõ äîçàõ âëèÿíèÿ íà äàííûé ïàðàìåòð
âûÿâëåíî íå áûëî.
Îäíàêî äëÿ ïîêàçàòåëÿ âåðòèêàëüíîé àêòèâíîñòè æèâîòíûõ â ñâåòëîì îòñåêå êàìåðû òàêàÿ êàðòèíà íå ñîõðàíÿåòñÿ.  ýòîì ñëó÷àå çíà÷èìûå îòëè÷èÿ íàáëþäàþòñÿ äëÿ ìàëûõ äîç (0,01 è 0,1 ìêã/êã);
ïðè ýòîì ó æèâîòíûõ, ïîëó÷àâøèõ Ac-D-SPRG â äîçå
0,01 ìêã/êã, âåðòèêàëüíàÿ àêòèâíîñòü â ñâåòëîì îòñåêå êàìåðû çíà÷èìî âîçðàñòàåò, à ó êðûñ, ïîëó÷àâøèõ ïðåïàðàò â äîçå 0,1 ìêã/êã, íàîáîðîò, ñíèæàåòñÿ.
Äëÿ áîëüøèõ äîç çíà÷èìûõ îòëè÷èé çàðåãèñòðèðîâàíî íå áûëî, îäíàêî ýôôåêò òàêæå íå áûë îäíîíàïðàâëåííûì äëÿ ðàçíûõ äîç.
Âðåìÿ ïðåáûâàíèÿ æèâîòíûõ íà ñâåòó çíà÷èìî èçìåíÿëîñü (ñíèæàëîñü) òîëüêî â ãðóïïå æèâîòíûõ, ïîëó÷àâøèõ Ac-D-SPRG â äîçå 0,1 ìêã/êã. Äëÿ
äðóãèõ äîç äîñòîâåðíûõ èçìåíåíèé çàðåãèñòðèðîâàíî íå áûëî.
Êîëè÷åñòâî óìûâàíèé çíà÷èìî ñíèæàëîñü â ãðóïïàõ æèâîòíûõ, ïîëó÷èâøèõ Ac-D-SPRG â äîçàõ 1,0 è
10,0 ìêã/êã.
Îáñóæäåíèå ðåçóëüòàòîâ
Ðåçóëüòàòû ïðîâåäåííûõ ýêñïåðèìåíòîâ ïîêàçàëè, ÷òî èíòðàíàçàëüíîå ââåäåíèå Àc-D-SPRG â äîçàõ 10,0; 1,0; 0,1 è 0,01 ìêã/êã âûçûâàëî óãíåòåíèå
îðèåíòèðîâî÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîãî ïîâåäåíèÿ, êîòîðîå áûëî íàèáîëåå âûðàæåíî â òåñòå “íîðêîâàÿ
êàìåðà”: ââåäåíèå Àc-D-SPRG ïðèâîäèëî ê äîñòîâåðíîìó óìåíüøåíèþ ñóììàðíîãî êîëè÷åñòâà ñòîåê
è êîëè÷åñòâà îáñëåäîâàííûõ îòâåðñòèé. Ïî ëèòåðàòóðíûì äàííûì [8], ñàì ãîðìîí àðãèíèí-âàçîïðåññèí ïðè âíóòðèáðþøèííîì ââåäåíèè çà 1 ÷ äî òåñòèðîâàíèÿ â “íîðêîâîé êàìåðå” â äîçå 0,001 ìã/êã
ïîâûøàë êîëè÷åñòâî îáñëåäîâàííûõ îòâåðñòèé. Íàøå
èññëåäîâàíèå ïðîäåìîíñòðèðîâàëî, ÷òî Ac-D-SPRG
â äîçàõ 10; 1,0; 0,1 è 0,01 ìêã/êã îêàçûâàåò îáðàòíîå äåéñòâèå.
Ââåäåíèå Ac-D-SPRG íå îêàçûâàëî çíà÷èòåëüíîãî âëèÿíèÿ íà îðèåíòèðîâî÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîå
ïîâåäåíèå â áåññòðåññîðíîé ìîäèôèêàöèè òåñòà, îäíàêî ïðèâîäèëî ê ñíèæåíèþ ãîðèçîíòàëüíîé äâèãàòåëüíîé àêòèâíîñòè æèâîòíûõ â ñòðåññîãåííîé ìîäèôèêàöèè òåñòà. Ýòî èçìåíåíèå, ïî-âèäèìîìó, ñâÿçàíî ñ ïîâûøåííûì óðîâíåì òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ,
ïîëó÷àâøèõ ïåïòèä, ÷òî ïðîÿâëÿåòñÿ â ðåàêöèè çàòàèâàíèÿ êðûñ â ñòðåññîãåííûõ óñëîâèÿõ. Î ïîâûøåííîì óðîâíå òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ ñâèäåòåëüñòâóåò òàêæå ñíèæåíèå âðåìåíè ïðåáûâàíèÿ íà ñâåòó,
ñíèæåíèå âåðòèêàëüíîé àêòèâíîñòè è êîëè÷åñòâà
âûõîäîâ íà îòêðûòûå ðóêàâà “ïðèïîäíÿòîãî êðåñòîîáðàçíîãî ëàáèðèíòà”, íàáëþäàåìûå ïðè ââåäåíèè
ïåïòèäà âî âñåõ èñïîëüçîâàííûõ äîçàõ.
Ïðîòèâîðå÷èâûå ëèòåðàòóðíûå äàííûå íå äàþò
âîçìîæíîñòè îäíîçíà÷íî ãîâîðèòü î ìåõàíèçìàõ, ëåæàùèõ â îñíîâå ðåãóëÿöèè óðîâíÿ òðåâîæíîñòè ñî ñòîðîíû ÀÂÏ, íî, áåçóñëîâíî, ïîäòâåðæäàþò ó÷àñòèå
äàííîãî ãîðìîíà â ýòîì ïðîöåññå.
Ïðîåêöèè îò ÀÂÏ-ñèíòåçèðóþùèõ êëåòîê íàïðàâëÿþòñÿ â ïåðåäíèé ìîçã, â ÷àñòíîñòè â ëàòåðàëüíóþ
îáëàñòü ñåïòóìà. Çäåñü ñîäåðæèòñÿ ãóñòàÿ ñåòü ÂÏ-ñîäåðæàùèõ âîëîêîí [9]. Ïîâðåæäåíèÿ ýòîé çîíû ìîçãà
ñíèæàþò óðîâåíü òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ. ÀÂÏ, âûäåëÿþùèéñÿ â ñåïòóìå, ó÷àñòâóåò â ôîðìèðîâàíèè ýìîöèîíàëüíîãî ñòàòóñà (ðåãóëÿöèè óðîâíÿ òðåâîæíîñòè
è ñòðàõà [10]). Èìåþùèåñÿ ëèòåðàòóðíûå äàííûå îòðèöàþò ó÷àñòèå V1b-ðåöåïòîðîâ â ðåãóëÿöèè òðåâîæíîñòè [11]. Îäíàêî ðÿäîì àâòîðîâ [12, 13] áûëî ïîêàçàíî, ÷òî èñïîëüçîâàíèå àíòàãîíèñòà V1a-ðåöåïòîðîâ
èìååò àíêñèîëèòè÷åñêîå äåéñòâèå, ÷òî áûëî ïðîäåìîíñòðèðîâàíî â òåñòå “ïðèïîäíÿòûé êðåñòîîáðàçíûé ëàáèðèíò”.
Ïîëó÷åííûå íàìè ðåçóëüòàòû ñâèäåòåëüñòâóþò î
òîì, ÷òî çàìåíà àìèíîêèñëîòíîãî îñòàòêà Cys6 â ìîëåêóëå ÀÂÏ(6-9) íà D-Ser ïðèâåëà ê ñíèæåíèþ îðèåíòèðîâî÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîãî ïîâåäåíèÿ è ïîâûøåíèþ óðîâíÿ òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ. Ñëåäîâàòåëüíî, ìû ìîæåì ïðåäïîëîæèòü, ÷òî Ac-D-SPRG
ÿâëÿåòñÿ àãîíèñòîì V1a ðåöåïòîðîâ ÀÂÏ.
Òàêèì îáðàçîì, èñõîäÿ èç ïîëó÷åííûõ â íàøèõ
ýêñïåðèìåíòàõ ðåçóëüòàòîâ, ìîæíî ñäåëàòü çàêëþ÷åíèå, ÷òî çàìåíà àìèíîêèñëîòíîãî îñòàòêà â 4-ì ïîëîæåíèè ìîëåêóëû ÀÂÏ(6-9) ìîæåò ñïîñîáñòâîâàòü
ñîçäàíèþ íîâûõ ïåïòèäíûõ ñîåäèíåíèé ñ îïðåäåëåííûì çàäàííûì ôèçèîëîãè÷åñêèì äåéñòâèåì.
* * *
Ðàáîòà âûïîëíåíà ïðè ïîääåðæêå ÔÖÏ “Íàó÷íûå è íàó÷íî-ïåäàãîãè÷åñêèå êàäðû èííîâàöèîííîé
Ðîññèè” íà 2009—2013 ãã. (¹ Ï1057).
ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ
1. Herbert E. Discovery of pro-opiomelanocortin-cellular
polyprotein // Trends in Biochemical Sciences. 1981. Vol. 6.
P. 184—188.
2. de Wied D. The influence of the posterior and inter-mediate lobe of the pituitary and pituitary peptides on the
maintenance of a conditioned avoidance response in rats //
International Journal of Neuropharmacology. 1965. Vol. 4. N 3.
P. 157—167.
3. Burbach J.P., Kovacs G.L., de Wied D., van Nispen J.W., Greven H.M. A major metabolite of arginine vaso-
ÂÅÑÒÍ. ÌÎÑÊ. ÓÍ-ÒÀ. ÑÅÐ. 16. ÁÈÎËÎÃÈß. 2012. ¹ 1
pressin in the brain is a highly potent neuropeptide // Science. 1983. Vol. 221. P. 1310—1312.
4. Ïîíîìàðåâà Í.Ñ., Âîñêðåñåíñêàÿ Î.Ã., Êàìåíñêèé À.À.
Âëèÿíèå îðèãèíàëüíîãî àíàëîãà Ñ-êîíöåâîãî ôðàãìåíòà
âàçîïðåññèíà íà ïîâåäåíèå áåëûõ êðûñ // Æóðí. ÂÍÄ.
1998. Ò. 48. ¹ 3. Ñ. 471—477.
5. Ïîíîìàðåâà Í.Ñ., Âîñêðåñåíñêàÿ Î.Ã., Êàìåíñêèé À.À.
Óëó÷øåíèå ñåëåêòèâíîãî âîñïðèÿòèÿ è îáó÷åíèÿ êðûñ îðèãèíàëüíûì àíàëîãîì Ñ-êîíöåâîãî ôðàãìåíòà âàçîïðåññèíà // Ôèçèîë. æóðí. 1998. Ò. 84. ¹ 12. Ñ. 1363—1369.
6. Âîñêðåñåíñêàÿ Î.Ã., Êàìåíñêèé À.À., Ãîëóáîâè÷ Â.Ï.
Íåéðîòðîïíàÿ àêòèâíîñòü ñèíòåòè÷åñêîãî àíàëîãà Ñ-êîíöåâîãî ôðàãìåíòà àðãèíèí-âàçîïðåññèíà // News of Biomedical Sciences ÍÀÍ Áåëàðóñè. 2004. ¹ 1. Ñ. 72—78.
7. Voskresenskaya O.G., Golubovich V.P., Kamensky A.A.
Prenatal administration of analog of AVP(6-9) — Ac-D-MPRG
influences on the postpound behavior in white rats // Abstracts of the 21st Congress of the European College of Neuropsychopharmacology, August 20—September 3, 2008. Barcelona, 2008.
8. Íèêîíîâà À.Á., Ìàêàðîâà Í.Â., Òèòîâ Ñ.À. Èçáèðàòåëüíîå ñòèìóëèðîâàíèå âàçîïðåññèíîì èññëåäîâàòåëü-
7
ñêîãî ïîâåäåíèÿ ó êðûñ // Æóðí. ÂÍÄ. 1987. Ò. 37. ¹ 3.
Ñ. 570—572.
9. de Vries G.J., Miller M.A. Anatomy and function of
extrahypothalamic vasopressin system in the brain // Prod.
Brain Res.1998. Vol. 119. P. 3—20.
10. de Vries G.J., Buijs R.M. The origin of the vasopressinergic and oxitocinergic innervation of the rat brain with
special reference to the lateral captum // Brain. Res. 1983.
Vol. 273. N 2. P. 307—317.
11. Stemmelin J., Lukovic L., Salome N., Griebel G. Evidence that the lateral septum is involved in the antidepressant-like effects of the vasopressin V1b receptor antagonist,
SSR149415 // Neuropsychopharmacology. 2005. Vol. 30. N 1.
P. 35—42.
12. Landgraf R. Intracerebrally released vasopressin and
oxitocin (measurement, mechanism and behavioural consequences) // J. Neuroendocrinol. 1995. P. 243—253.
13. Everts H.G.J., Koolhaas J.M. Differential modulation
of lateral septal vasopressin receptor blockade in spatial-learning, social recognition, and anxiety-related behavior in rats //
Behav. Brain Res. 1999. Vol. 99. P. 7—16.
Ïîñòóïèëà â ðåäàêöèþ
13.12.10
INFLUENCE OF ORIGINAL STRUCTURAL ANALOGUE AVP(6-9), Ac-D-SPRG,
ON EXPLORATORY ACTIVITY AND LEVEL OF ANXIETY OF WHITE RATS
A.S. Belyakova, O.G. Voskresenskaya, A.A. Kamensky, V.P. Golubovich
The influence of synthetic structural analogue of arginine-vasopressin (AVP) Ac-D-SPRG on
orientation and exploratory activity and level of anxiety of white rats was studied. The c-D-SPRG
was injected nasally in doses of 0,01; 0,1; 1,0 and 10,0 mg/kg in volume of 1 ml per 10 g of body
weight 5 min before the testing. The analogue caused depression of orientation and exploratory activity (OEA) and increase of anxiety level in animals. The contradictory literature data give no opportunity to conclude unambiguously on mechanisms underlying bases of regulation of anxiety level
and OEA from AVP but nevertheless confirm the participation of this hormone in given process.
Key words: neurophysiology, arginine-vasopressin, anxiety, pharmacology, regulatory peptides.
Ñâåäåíèÿ îá àâòîðàõ
Áåëÿêîâà Àëåêñàíäðà Ñåðãååâíà — èíæåíåð-ëàáîðàíò, ñîèñêàòåëü êàôåäðû ôèçèîëîãèè ÷åëîâåêà è
æèâîòíûõ áèîëîãè÷åñêîãî ôàêóëüòåòà ÌÃÓ. Òåë.: 8-495-939-28-95; e-mail: [email protected]
Âîñêðåñåíñêàÿ Îëüãà Ãåîðãèåâíà — êàíä. áèîë. íàóê, ñò. íàó÷. ñîòð. êàôåäðû ôèçèîëîãèè ÷åëîâåêà
è æèâîòíûõ áèîëîãè÷åñêîãî ôàêóëüòåòà ÌÃÓ. Òåë.: 8-495-939-28-95; e-mail: [email protected]
Êàìåíñêèé Àíäðåé Àëåêñàíäðîâè÷ — äîêò. áèîë. íàóê, ïðîô., çàâ. êàôåäðîé ôèçèîëîãèè ÷åëîâåêà è
æèâîòíûõ áèîëîãè÷åñêîãî ôàêóëüòåòà ÌÃÓ. Òåë.: 8-495-939-33-55; e-mail: [email protected]
Ãîëóáîâè÷ Âëàäèìèð Ïåòðîâè÷ — äîêò. áèîë. íàóê, ïðîô., çàâ. ëàáîðàòîðèåé ïðèêëàäíîé áèîõèìèè ÃÍÓ èíñòèòóòà áèîîðãàíè÷åñêîé õèìèè ÍÀÍ Áåëàðóñè. E-mail: [email protected]
4 ÂÌÓ, áèîëîãèÿ, ¹ 1