сравнительная оценка качества сред для определения

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА
КАЧЕСТВА СРЕД ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ
К АНТИБИОТИКАМ
Научно-исследовательский институт антимикробной
химиотерапии
Смоленская государственная медицинская академия
О.И.Кречикова
Москва, 2 октября 2013 г.
ДИСКО-ДИФФУЗИОННЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АБП
Достоинства
•
Простота и доступность
•
Хорошая стандартизация
•
Обеспечивает достоверность и воспроизводимость
результатов
• При хорошо стандартизованных и контролируемых
условиях тестирования связан с величиной МПК АБП
в отношении тестируемого М.О.
ДИСКО-ДИФФУЗИОННЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АБП
Факторы, влияющие на фармакодинамические параметры
антибиотиков (1)
•
Пригодность для роста тестируемых микроорганизмов
•
Сбалансированность двухвалентных катионов Ca+2, Mg+2,
Zn+2 , содержания тимина и тимидина
•
pH среды и плотность
ДИСКО-ДИФФУЗИОННЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АБП
Факторы, влияющие на фармакодинамические параметры
антибиотиков (2)
• Соблюдение условий приготовления и хранения среды
•
Стандартизация содержания АБП в диске и условия их
хранения
•
Условия инокуляции чашек и термостатирования
ДИСКО-ДИФФУЗИОННЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АБП
Стандартизация содержания АБП в диске определена
национальными и международными техническими
рекомендациями
•
ВОЗ - содержание АБП от 75 до 135% от заданного
•
FDA, США - содержание АБП от 67,5% до 150 % от
заданного
Несоблюдение условий хранения дисков влияет на
снижение активности АБП (бета-лактамные антибиотики)
ДИСКО-ДИФФУЗИОННЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АБП
Содержание двухвалентных катионов Ca+2, Mg+2, Zn+2 ,
Cu +2, Fe +2 сложно поддаѐтся стандартизации
•
изменяет фармакодинамические параметры
аминогликозидов при тестировании P.aeruginosa
Избыток двухвалентных катионов приводит к ложной
резистентности
ДИСКО-ДИФФУЗИОННЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АБП
Содержание тимина и тимидина влияет на определение
чувствительности е сульфаниламидам и триметоприму
•
избыточное содержание снижает активность
антифолиевых препаратов приводя к получению ложнорезистентных результатов
ДИСКО-ДИФФУЗИОННЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АБП
Стандартизация катионного состава и тимидина
•
Содержание катионов Ca+2 не более 50 мг/л
•
Содержание катионов Mg +2 не более 25 мг/л
•
Содержание тимина и тимидина не менее 0, 03 мг/л
Technical recommendation for in vitro susceptibility testing. 1996 Report of the Comite de
I,Antibioticgramme de la Societe Fracaise de Microbiologie// Clin.Microbiol.Infect.-1996. –V.2P.S11-S25
Bushby S.R. Trimethoprim-Sulfamethoxazol: in vitro microbiological aspects // J.Infect.Dis.—
1973.-V.128. – P.S442-S462.
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА КАЧЕСТВА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АМП
Оценка качества сред разных производителей
Среда сравнения - Агар Мюллера-Хинтона
(Becton Dickinson, США)
•
Среда Мюллера-Хинтона
(SIFIN, Германия)
•
Среда Мюллера-Хинтона
(Biolife, Италия)
•
Основа агара для определения чувствительности
(Biolife, Италия)
ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АМП
Методика и нормативные документы
•
ГОСТ ISO 11133-1 – 2011, ГОСТ ISO 11133-2 – 2011
«Микробиология пищевых продуктов и кормов для
животных»
Руководящие указания по приготовлению питательных сред
часть 1 Общие руководящие указания …
часть 2 Практические руководящие указания
ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АМП
Методика и нормативные документы
•
МУК 4.2.2316 – 08
«Методы контроля бактериологических питательных сред»
•
CLSI 2012 M100-S22 Perfomance Standards for Antimicrobial
Susceptibility Testing
Clinical and Laboratory Standards Institute
ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АМП
Среды тестировались контрольными штаммами
S.aureus
ATCC 25923,
E.coli
ATCC 25922 ,
P.aeruginosa
ATCC 27853
Enterococcus faecalis
ATCC 29212
Оценивались:
•
•
чувствительность (производительность) сред
воспроизводимость
ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АМП
Воспроизводимость оценивалась по результатам
тестирования активности АМП
•
S.aureus
ATCC 25923
Цефокситин, 30 мкг
Гентамицин, 10 мкг
Эритромицин, 15 мкг
Фузидин, 10 мкг
Клиндамицин, 2 мкг
Рифампин, 5 мкг
Ципрофлоксацин, 5 мкг
Линезолид, 30 мкг
Ко-тримоксазол, 1,25/23,75
ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АМП
Воспроизводимость оценивалась по результатам
тестирования активности АМП
•
P.aeruginosa ATCC 27853
Амикацин, 30 мкг
Имипенем,
10 мкг
Гентамицин, 10 мкг
Меропенем, 10 мкг
Цефтазидим, 30 мкг
Ципрофлоксацин, 5 мкг
ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АМП
Воспроизводимость оценивалась по результатам
тестирования активности АМП
•
E.coli
ATCC 25922
Ампициллин, 10 мкг
Эртапенем, 10 мкг
Гентамицин, 10 мкг
Фосфомицин, 200 мкг
Цефтазидим, 30 мкг
Нитрофурантоин, 300 мкг
Цефотаксим, 30 мкг
Ципрофлоксацин, 5 мкг
РЕЗУЛЬТАТЫ СКРИНИНГА ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА СРЕД ДЛЯ
ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АМП (1)
•
Среды обеспечивали хороший рост
контрольных штаммов S.aureus A TCC 25923,
E.coli A TCC 25922 , P.aeruginosa A TCC 27853:
- чувствительность сред (производительность )
– 65-70%
•
Среды имели невысокое содержание тимидина:
- зоны задержки роста Enterococcus faecalis
ATCC 29212 25-30 мм (d - ˃ 20 мм)
ПРИНЦИП ОЦЕНКИ РЕЗУЛЬТАТОВ ВКК СРЕД ДЛЯ
ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АМП
Диаметр
зон в мм
Единичные результаты за пределами
контрольных зон
Воспроизводимост ь
Различие не более 3 мм
Дни
РЕЗУЛЬТАТЫ СКРИНИНГА ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА СРЕД ДЛЯ
ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АМП (2)
•
Результаты ВК (скрининга) качества
сред Мюллера-Хинтона производителей
SIFIN (Германия), Biolife (Италия) показали
результаты сопоставимые со средой
сравнения - агаром Мюллера-Хинтона
Becton Dickinson (США)
РЕЗУЛЬТАТЫ СКРИНИНГА ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА СРЕД ДЛЯ
ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АМП (2)
•
На среде Antibioticogramma Base Agar (Biolife,
(Италия) получено несовпадение
результатов со
средой сравнения - агаром Мюллера-Хинтона
Becton Dickinson (США) – различие в диаметрах
зон подавления роста более 3 мм
•
14,8% определений активности АМП имели
значения за пределами допустимых значений
РЕЗУЛЬТАТЫ СКРИНИНГА ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА СРЕД ДЛЯ
ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АМП
Выводы:
•
Результаты скрининга показали сопоставимость
качества агаров Мюллера-Хинтона разных
производителей, однако требуется более
широкое исследование
• Требуется дополнительные исследования
по
оценке качества сред Antibioticog ramma Base
Agar (Biolife, Италия)
СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ