Иммуноферментная тест-система для выявления антител Treponema pallidum Обратите внимание на выделенные изменения

Иммуноферментная тест-система для выявления антител
к Treponema pallidum
Обратите внимание на выделенные изменения
См. раздел РЕАГЕНТЫ для полного
пояснения символов, используемых для
обозначения компонентов набора.
1
НАЗВАНИЕ
ICE* SYPHILIS
НАЗНАЧЕНИЕ
Тест-система ICE* Syphilis предназначена для
выявления антител к Treponema pallidum.
РЕЗЮМЕ И ОПИСАНИЕ ТЕСТА
При первичном сифилисе в крови можно
обнаружить антитела ко многим антигенам
T.pallidum,
которые
обычно
появляются
одновременно или немного позже, но иногда
перед первыми симптомами. При вторичном и
раннем латентном сифилисе появляются
антитела
к
некоторым
дополнительным
антигенам, и, наконец, антитела к некоторым
антигенам обнаруживаются на любой стадии
сифилиса.1
К одним и тем же антигенам вырабатываются
сначала IgM, а затем IgG. И если после лечения
и при поздних формах сифилиса выработка IgM
ко многим антигенам заканчивается, ответ IgG
сохраняется.1
Анализ ICE* Syphilis позволяет выявлять
антитела к специфическим антигенам T.pallidum
групп IgM и IgG, которые характерны для
разных стадий сифилиса.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРИНЦИПЫ ПРОЦЕДУРЫ
В анализе ICE* Syphilis используются меченые и
немеченые рекомбинантные белки TpN15,
TpN17 и TpN47 с иммунодоминантными
эпитопами
T.pallidum.
Микроячейки
с
антителами к IgG и IgM человека покрыты
немечеными антигенами.
Образцы сыворотки или плазмы крови
инкубируются в ячейках; при наличии в них
антител к T.pallidum они связываются с
соответствующими
антигенами
на
микроячейках. Кроме того, часть общих IgG и
IgM из образца связываются с антителами к
иммуноглобулинам человека. Затем проводится
промывание
для
удаления
образца
и
несвязанных антител. На последующем этапе
добавляется конъюгат, который, в свою
очередь, связывается со специфическими
антителами, ранее связавшимися с антигенами
на ячейках. После промывания для удаления
несвязанного конъюгата в ячейки добавляется
раствор,
содержащий
3,3',5,5'тетраметилбензидин
(ТМБ)
и
перекись
водорода.
В
ячейках
со
связавшимся
конъюгатом
появляется
пурпурное
окрашивание, которое сменяется на оранжевое
после добавления серной кислоты для
остановки реакции.
РЕАГЕНТЫ
ОПИСАНИЕ,
ПОДГОТОВКА
К
ИСПОЛЬЗОВАНИЮ И УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
Смотрите также Меры предосторожности.
Если не указано иного, все компоненты должны
храниться при температуре 2-8°С. В этих
условиях активность сохраняется в течение
всего срока годности.
COATED WELLS
1. Ячейки, покрытые антителами
1 плашка (8Е04-02) или 5 плашек (8Е04-01),
содержащие по 96 ячеек, покрытых смесью
антител к IgG и IgM человека, а также
рекомбинантными антигенами T.pallidum.
Если вы планируете использовать не всю
плашку, дайте ячейкам достичь комнатной
температуры (18-30°С) перед извлечением их
из
упаковки.
Неиспользованные
ячейки
поместите в прилагаемый закрывающийся
пакет для хранения и поместите в холодильник
(2-8°С).
SAMPLE DIL
2. Разбавитель образца
1 флакон, содержащий 36 мл буфера с
детергентами. Консервант: Bronidox®, 0,05%.
CONTROL —
3. Отрицательный контроль
1 флакон, содержащий 2,5 мл нормальной
сыворотки крови человека (не реактивной на
HBsAg, антитела к ВИЧ типов 1 и 2, HCV и
HTLV) в буфере с бычьими белками.
Консервант: Bronidox®, 0,05%.
CONTROL +
4. Положительный контроль
1
флакон,
содержащий
1,5
мл
инактивированной сыворотки крови человека,
реактивной на антитела к T.pallidum (не
реактивной на HBsAg, антитела к ВИЧ типов 1 и
2 и HCV) в буфере с бычьим белком.
Консервант: Bronidox®, 0,05%.
CONJUGATE DIL
5. Разбавитель конъюгата
1 флакон, содержащий 7 мл (8Е04-02) или 36 мл
(8Е04-01) раствора, состоящего из буфера,
бычьего белка и детергента, красного цвета.
Консервант: Bronidox®, 0,05%.
CONJUGATE
6. Конъюгат
1 флакон, содержащий лиофилизированные
рекомбинантные белки T.pallidum, меченные
пероксидазой хрена. После восстановления
содержимое одного флакона рассчитано на 1
(8Е04-02) или 5 (8Е04-01) плашек.
Восстановление конъюгата
Для полного удаления конъюгата, скопившегося
под резиновой крышкой, аккуратно постучите
кончиком пробирки по столу. Перелейте около 2
мл (8Е04-02) или около 5 мл (8Е04-02)
разбавителя
конъюгата
во
флакон
с
2
конъюгатом. Закройте флакон крышкой и
оставьте на 5-10 минут, иногда взбалтывая
содержимое.
Перед
использованием
с
помощью
трансферной пипетки перенесите содержимое
всего флакона с восстановленным конъюгатом
во флакон из-под разбавителя конъюгата и
тщательно
перемешайте.
Напишите
на
флаконе, что он содержит конъюгат Syphilis.
Восстановленный конъюгат можно хранить при
температуре
2-8°С
до
10
дней
или
замороженным при температуре -15°С или
более низкой до 3 месяцев с учетом не более
11 циклов размораживания/замораживания.
SUBSTRATE DIL
7. Разбавитель субстрата
1 флакон, содержащий 35 мл бесцветного
раствора тринатриевой соли цитрата и
перекиси водорода.
SUBSTRATE CONC
8. Концентрат субстрата
1 флакон, содержащий 35 мл раствора розового
цвета: 3,3',5,5'-тетраметилбензидин (ТМБ) и
стабилизаторы.
Приготовление раствора субстрата
Приготовьте раствор субстрата в чистом
стеклянном
или
одноразовом
полистироловом
сосуде,
добавив
бесцветный
разбавитель
субстрата
к
равному количеству розового концентрата
субстрата. Очень важно соблюдать этот
порядок смешивания и следить, чтобы все
используемые пипетки и контейнеры были
чистыми.
Кроме того, раствор субстрата можно
приготовить, перелив все содержимое
флакона с разбавителем субстрата во
флакон с концентратом субстрата. Смотрите
таблицу 1.
Таблица 1
Необходимый объем концентрата субстрата
и разбавителя субстрата
Кол-во ячеек
Кол-во
плашек
8 16 24 32 40 48 56 64 72 80 88 1 2 3 4
Концентрат субстрата (мл)
1,0 1,5 2,0 2,5 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 4,5 5,0 6 12 18 22
Разбавитель субстрата (мл)
1,0 1,5 2,0 2,5 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 4,5 5,0 6 12 18 22
При использовании автоматической системы
может
понадобиться
дополнительное
количество реагентов. Не допускайте попадания
прямых солнечных лучей. Раствор субстрата
должен быть розовым; если он имеет
пурпурный цвет, необходимо вылить его и
приготовить свежий раствор.
Приготовленный раствор субстрата из этого
набора и растворы из других наборов Murex, в
которых используется концентрат субстрата
розового цвета, могут быть взаимозаменяемы.
ICE* SYPHILIS
Проверьте, чтобы раствор субстрата был
приготовлен из разбавителя субстрата и
концентрата субстрата из одного набора.
Приготовленный раствор субстрата сохраняет
стабильность в течение 2 суток при хранении в
холодильнике (2-8°С) или при 15-25°С; при
выпадении кристаллов раствор необходимо
выбросить.
WASH FLUID
9. Промывочная жидкость
1 (8Е04-02) или 2 (8Е04-01) флакона,
содержащих по 125 мл 20-кратного концентрата
промывочной
жидкости
(глицин/борат).
Консервант: Bronidox®, 0,2%.
Разведите
промывочную
жидкость
дистиллированной
или
деионизированной
водой в соотношении 1:20 для получения
необходимого
количества
раствора,
или
разведите все содержимое одного флакона
промывочной
жидкости
до
2500
мл.
Разведенная промывочная жидкость содержит
консервант Bronidox® в концентрации 0,01%.
Промывочная жидкость из этого набора и
промывочные жидкости из других наборов
Murex, содержащие глицин/борат, могут быть
взаимозаменяемы.
При
разведении
промывочной жидкости будьте внимательны,
убедитесь, что оно проведено в правильном
соотношении (1:20).
Промывочную жидкость в рабочем разведении
храните при температуре 18-30°С в закрытом
сосуде, при этих условиях она сохраняет свои
свойства в течение 1 месяца.
ПРИМЕЧАНИЕ: При хранении промывочная
жидкость может стать желтого цвета. Это не
влияет на качество анализа и аспирацию
промывочной жидкости из ячеек.
ПРИМЕЧАНИЕ: Несмотря на то, что можно
использовать раствор субстрата и промывочную
жидкость из других наборов, не используйте их
по истечении сроков годности, напечатанных на
этикетках их компонентов.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
IVD
Только для диагностики in vitro.
Только для профессионального использования.
Следуйте рекомендациям производителя и
информации на этикетках по использованию
потенциально опасных компонентов.
ПРАВИЛА БЕЗОПАСНОСТИ
ВНИМАНИЕ: В этом продукте содержатся
компоненты, полученные от человека. Образцы
сыворотки крови человека, использовавшиеся
для изготовления отрицательного контроля,
были протестированы на наличие HBsAg и
антител к ВИЧ, HTLV и HCV с отрицательным
результатом. Для изготовления положительного
3
контроля использовались образцы сыворотки
крови человека, реактивные на антитела к
T.pallidum, но не реактивные на HBsAg и
антитела к ВИЧ (типов 1 и 2), HTLV и HCV. Все
реактивные
образцы
сыворотки
перед
приготовлением из них реагентов набора были
инактивированы.
Однако
все
материалы
человеческого
происхождения
должны
считаться потенциально инфицированными. С
набором реагентов и образцами пациентов
рекомендуется обращаться с соблюдением
правил работы в лабораториях.
Концентрат субстрата содержит лимонную
кислоту и, согласно директивам Европейского
экономического сообщества (ЕЭС), относится к
едким веществам (С). Ниже приводятся
пояснения к значкам «риск» (R) и «меры
предосторожности» (S).
С
R35 Вызывает тяжелые ожоги.
S26 При попадании в глаза немедленно
промойте их большим количеством
воды и обратитесь к врачу.
S35 Материал и контейнер, в котором он
хранился, должны утилизироваться
с
соблюдением
правил
безопасности.
S36/37/39
Используйте
защитную
одежду, перчатки и защитные
средства для глаз и лица.
S45 При
несчастных
случаях
или
появлении плохого самочувствия
следует немедленно обратиться к
врачу (по возможности показав ему
этикетку).
Информация
для
европейских
распространителей: Данные по безопасности
продуктов, не относящихся к классу опасных в
соответствии с Европейскими директивами
1999/45/ЕС, предоставляются по требованию
профессиональных пользователей.
1. Неодноразовые
материалы
после
использования необходимо стерилизовать.
Предпочтительнее
стерилизовать
в
автоклаве в течение 1 часа при температуре
121°С; одноразовые материалы стерилизуют
в автоклаве или сжигают.
2. Капли
пролитых
потенциально
инфицированных
материалов
нужно
немедленно
промокнуть
впитывающей
бумажной салфеткой и до продолжения
работы
протереть
зону
загрязнения
1,0%-ным раствором гипохлорита натрия.2
Следы
кислотосодержащих
жидкостей
нельзя обрабатывать гипохлоритом натрия,
пока зона загрязнения не вытерта насухо.
Материалы, использованные для вытирания
пролитой жидкости, в том числе перчатки,
следует утилизировать с соблюдением
правил для потенциально биологически
опасных материалов. Материалы со следами
гипохлорита натрия нельзя автоклавировать.
3. Нейтрализованные кислоты и другие жидкие
отходы обеззараживают путем добавления
гипохлорита
натрия
в
конечной
концентрации, равной как минимум 1,0%. Для
эффективного
обеззараживания
может
потребоваться
обработка
1,0%-ным
раствором гипохлорита натрия в течение 30
минут.
4. Не пипетируйте ртом. При работе с
образцами
и
проведении
анализа
используйте
одноразовые
перчатки
и
защитные средства для глаз. После
завершения работы тщательно мойте руки.
5. В следующих реагентах в невысокой
концентрации содержатся опасные или
раздражающие вещества.
а) в разбавителе конъюгата и разбавителе
образца содержатся детергенты и сапонин.
При попадании любого из этих веществ на
кожу или в глаза необходимо тщательно
промойте их водой.
6. Серная кислота, необходимая для получения
стоп-раствора,
и
соляная
кислота,
используемая для промывания стеклянной
посуды, являются едкими веществами. При
обращении
с
ними
соблюдайте
соответствующие меры безопасности. При
попадании этих кислот на кожу или в глаза,
тщательно промойте их водой.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ВО ВРЕМЯ
АНАЛИЗА
1. Не используйте реагенты с истекшим
сроком
годности.
Не
допускайте
бактериального загрязнения реагентов, что
может приводить к уменьшению срока
годности продукта и получению ошибочных
результатов анализа.
2. Не отступайте от порядка Процедуры
анализа и не используйте реагенты других
производителей или из других наборов,
если не указано, что они являются
взаимозаменяемыми.
Не
уменьшайте
рекомендуемое время инкубации.
3. Все
реагенты
и
образцы
перед
использованием должны быть комнатной
температуры. Сразу после применения
верните их в рекомендуемые для хранения
условия.
4. Стеклянную посуду, в которую наливали
реагенты, необходимо тщательно промыть
соляной
кислотой
(2М),
а
затем
дистиллированной или деионизированной
водой высокого качества.
5. Не используйте для хранения реагентов и
образцов
саморазмораживающуюся
морозильную камеру.
6. Не допускайте воздействия на реагенты
яркого света или паров гипохлорита в
процессе хранения или инкубации.
7. Во время процедуры анализа не допускайте
высыхания ячеек.
8. Не допускайте перекрестной контаминации
реагентов. Пипетка для переноса раствора
субстрата в анализах Murex должна быть
надписана. Кроме того, должны быть
4
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
надписаны
пипетки
для
переноса
конъюгата.
Не трогайте и не допускайте попадания
брызг на край ячейки с конъюгатом. Не
выдувайте
содержимое
из
пипетки,
рекомендуется
использовать
обратное
пипетирование.
Перед началом анализа проверьте, чтобы
дно плашки было чистым и сухим, а на
поверхности жидкости не было пузырьков.
Не допускайте попадания в микроячейки
порошка с одноразовых перчаток.
При
работе
с
автоматическими
анализаторами для микроплашек, не
обязательно использовать крышки для
плашек и высушивать ячейки.
Не
позволяйте
жидкостям
из
автоматического анализатора попадать в
образцы и реагенты.
Проверьте,
чтобы
инкубатор
был
установлен на температуру 37±1°С.
Не используйте СО2-инкубатор.
Не храните стоп-раствор в неглубокой
посуде или переливайте его обратно во
флакон после использования.
СБОР, ТРАНСПОРТИРОВКА И ХРАНЕНИЕ
ОБРАЗЦОВ
СБОР ОБРАЗЦОВ
Для анализа можно использовать образцы
сыворотки крови или плазмы крови с гепарином,
ЭДТА или цитратом. Проверьте, чтобы в
образцах сыворотки свертывание было полным.
При наличии любых видимых взвешенных
частиц, удалите их путем центрифугирования.
ТРАНСПОРТИРОВКА
И
ХРАНЕНИЕ
ОБРАЗЦОВ
Образцы следует хранить при температуре
2-8°С. Если анализ образца не будет проведен
в течение 72 часов, его нужно отделить от
сгустков и форменных элементов и хранить
замороженным (при температуре -15°С или
более низкой). Многократного замораживания и
размораживания
образцов
необходимо
избегать.
После
размораживания
перед
анализом
образцы
нужно
тщательно
перемешать.
ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЫ, НЕ ВХОДЯЩИЕ
В НАБОР
1. Стоп-раствор (серная кислота, от 0,5М до
2М), добавьте от 3 мл до 11 мл
концентрированной
серной
кислоты
аналитической чистоты (18,0М) к 80 мл
дистиллированной или деионизированной
воды, а затем, добавив еще воды, доведите
общее количество до 100 мл. Кроме того,
можно использовать следующий реагент:
серная кислота, 1N (кат. № 7212-01).
2. Свежая
дистиллированная
или
деионизированная
вода
высокого
качества необходима для разведения
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
ICE* SYPHILIS
промывочной жидкости, для приготовления
стоп-раствора
и
использования
в
автоматических промывателях.
Многоканальные
микропипетки
соответствующего объема (от 10 до 1000
мкл).
Микропипетки объема от 10 до 1000 мкл.
Водяная баня/инкубатор, поддерживающий
температуру 37±1°С. Смотрите раздел Меры
предосторожности во время анализа.
Нагревательный блок (кат. № 05F09-02).
Для использования в инкубаторах. Лучше
всего держать нагревательный блок в
инкубаторе, в котором он применяется. Если
же это невозможно, помещайте блок в
инкубатор как минимум за 4 часа до начала
анализа.
Аппаратура
а) система для промывания плашек с
микроячейками (автоматическая или ручная).
б) регистрирующая система для оценки
результата
анализа
в
плашках
с
микроячейками.
или
в) полностью автоматический анализатор
для микроплашек.
Перед использованием всей аппаратуры
должна быть проверена правильность ее
работы.
Полную
информацию
о
рекомендуемых
системах,
протоколах
программного обеспечения и процедурах
проверки можно получить у местного
представителя.
Одноразовые ванночки для реагентов
(кат. № RT01-05F24).
Гипохлорит натрия для обеззараживания.
ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
Перед
началом
анализа
внимательно
прочитайте раздел Меры предосторожности
во время анализа.
Визуально контролируйте внесение различных
компонентов в ячейки по соответствующему
окрашиванию.
Разбавитель
образца
имеет
зеленую/коричневую окраску. При добавлении
образца
пациента
или
контроля
цвет
изменяется
на
синий/зеленый.
Цвет
разбавленных образцов может отличаться, но
изменение окраски должно наблюдаться.
Восстановленный конъюгат имеет красную
окраску.
Раствор субстрата сначала розового цвета, в
ячейках
с
реактивными
образцами
он
становится пурпурным. После добавления стопраствора в ячейках с реактивными образцами
цвет из пурпурного становится оранжевым, в то
время как в ячейках с нереактивными
образцами цвет остается розовым.
5
Добавление образца или реагента можно
подтвердить с помощью регистрирующей
системы для микроплашек следующим образом:
смешивание разбавителя образца с образцом
анализируется при 570 или 620 нм с длиной
волны
сравнения
690
нм,
добавление
конъюгата – при 490 нм с длиной волны
сравнения 690 нм, раствора субстрата – при
490 нм (без сравнения).
Этап Восстановите и перемешайте конъюгат,
1
приготовьте
раствор
субстрата
и
промывочную жидкость.
Этап Используйте только необходимое для анализа
количество ячеек.
2
Этап Внесите 50 мкл разбавителя образца в
каждую ячейку.
3
Этап Добавьте по 50 мкл образца или контроля в
ячейки. В каждой плашке используйте первый
4
ряд ячеек для анализа контролей. Контроли
вносите в обозначенные ячейки после
добавления образцов. Внесите по 50 мкл
отрицательного контроля в каждую из 3 ячеек
А1-С1 и 50 мкл положительного контроля в
ячейку D1.
Используйте белый фон для визуального
контроля за внесением образцов.
Этап Закройте ячейки крышкой и инкубируйте в
течение 30 минут при температуре 37°С.
5
Этап После завершения инкубации промойте
плашку, как описано в разделе Процедура
6
промывания.
Этап Сразу после промывания плашки в каждую
ячейку добавьте 50 мкл конъюгата.
7
Этап Закройте ячейки крышкой и инкубируйте в
течение 60 минут при температуре 37°С.
8
Этап После завершения инкубации промойте
плашку, как описано в разделе Процедура
9
промывания.
Этап Сразу после промывания плашки в каждую
ячейку
добавьте
100
мкл
раствора
10
субстрата.
Этап Закройте ячейки крышкой и инкубируйте в
течение 30 минут при температуре 37°С.
11
Не допускайте попадания прямых солнечных
лучей. В ячейках с реактивными образцами
появится пурпурное окрашивание.
Этап В каждую ячейку добавьте 50 мкл стоп12
раствора (серная кислота, от 0,5М до 2М).
Этап В течение 15 минут анализируйте оптическую
плотность при 450 нм, с длиной волны
13
сравнения 620-690 нм, если возможно.
Проведите холостую пробу по воздуху (без
плашки).
50
мкл
50
мкл
30
мин
50
мкл
60
мин
100
мкл
30
мин
50
мкл
А450
В автоматических анализаторах требуется,
чтобы был указан диапазон длительности
инкубирования. Чтобы установить возможность
использования такого анализатора для данного
анализа
необходимо
проверить
его
соответствие следующим критериям:
Для
каждого
инкубирования
при
37°С,
запрограммированное
время
можно
увеличивать на 20%.
Не устанавливайте время инкубирования
меньше допустимого, указанного выше.
Ячейки с разбавителем образца перед и после
добавления образца можно оставлять при
18-30С до 60 минут перед началом проведения
5 этапа.
ПРОЦЕДУРЫ ПРОМЫВАНИЯ
Протоколы по рекомендуемым системам для
промывания и процедур проверки этих систем и
анализаторов можно получить у местного
представителя.
Рекомендуется
следовать
следующему
протоколу:
а) Протокол автоматического промывания
Проведите 5 циклов промывания с помощью
промывочной
жидкости
рабочей
концентрации. По возможности убедитесь,
что:
(i) Общий объем жидкости в каждой ячейке
составляет 500 мкл, при использовании
аппаратуры
Abbott
Murex.
При
использовании
другой
аппаратуры
проверьте,
чтобы
ячейка
была
полностью наполнена.
(ii) Уровень наполнения установлен так,
чтобы ячейка полностью наполнялась (со
слегка положительным мениском), но не
переполнялась.
(iii) Для проведения одного полного цикла
аспирации/промывания/замачивания
требуется приблизительно 30 секунд.
(iv) В ячейке не осталось жидкости (по
возможности дважды повторяйте этап
аспирации в последнем цикле).
б) Протокол ручного промывания
(i) Проведите аспирацию из первого ряда
ячеек.
(ii) Полностью наполните ячейки первого
ряда промывочной жидкостью рабочей
концентрации.
(iii) Повторите эти этапы для каждого ряда
ячеек по очереди.
(iv) Следите, чтобы ячейки каждого ряда
оставались наполненными в течение 30
секунд.
(i) Повторите этапы с (i) по (iv) 4 раза.
(ii) Аспирируйте содержимое ячеек. После
последнего промывания рекомендуется
высушить плашку, перевернув ее и
постучав по поверхности, покрытой
бумажным полотенцем или тканью.
ПРИМЕЧАНИЕ:
Во время процедуры
анализа не допускайте высыхания ячеек.
Во избежание засорения и появления
ржавчины в конце каждого теста промывайте
промывочное устройство дистиллированной
или деионизированной водой.
РЕЗУЛЬТАТЫ
РАСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
Независимо от количества используемых
плашек, расчет и интерпретация результатов в
каждой плашке производится отдельно.
Для расчета и интерпретации результатов
можно
использовать
утвержденные
компьютерные программы.
6
Отрицательный контроль
Рассчитайте среднюю оптическую плотность
отрицательных контролей.
Пример:
Ячейка 1 = 0,084, ячейка 2 = 0,086, ячейка 3 =
0,070
Общее значение = 0,240
Среднее значение отрицательных контролей =
0,240/3 = 0,080
Если в одной из ячеек с отрицательным
контролем оптическая плотность превышает
среднее значение (по трем ячейкам) более чем
на 0,15 ед., пересчитайте среднее значение по
двум оставшимся ячейкам, не учитывая
значение в этой ячейке.
Пороговое значение
Рассчитайте пороговое значение, прибавив 0,2
к среднему значению отрицательных контролей
(смотри выше).
Среднее значение отрицательного контроля =
0,080
Пороговое значение = 0,080 + 0,200 = 0,280
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Результат анализа считается достоверным,
если
результаты
анализа
контролей
соответствуют следующим критериям:
Отрицательный контроль
Средняя оптическая плотность должна быть
меньше 0,15.
Положительный контроль
Оптическая
плотность
положительного
контроля
должна
превышать
среднюю
оптическую
плотность
отрицательных
контролей больше чем на 0,8.
Если результат не удовлетворяет критериям,
анализ необходимо повторить. Если результаты
повторного
анализа
также
не
будут
удовлетворять критериям контроля качества
или ожидаемым характеристикам теста (что
маловероятно), свяжитесь с местным торговым
представителем.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Нереактивные результаты
Образцы с оптической плотностью меньше
порогового
значения
расцениваются
как
отрицательные в анализе ICE* Syphilis.
Реактивные результаты
Образцы с оптической плотностью, равной или
превышающей
пороговое
значение,
расцениваются как первично реактивные в
данном анализе (см. раздел Ограничения
процедуры). Такие образцы должны быть
протестированы еще раз в двух повторах (из
той же пробы). Образцы, реактивные хотя бы в
одном из повторных тестов, расцениваются как
повторно реактивные в ICE* Syphilis и
ICE* SYPHILIS
предположительно содержащие антитела к
T.pallidum. Такие образцы
следует
дополнительно проанализировать. Образцы,
оказавшиеся нереактивными в обоих повторных
тестах, признаются нереактивными на антитела
к T.pallidum.
ХАРАКТЕРИСТИКИ АНАЛИЗА
Характеристики анализа ICE* Syphilis оценивали
с помощью анализа образцов доноров крови,
больных сифилисом и пациентов других
клинических категорий.
Диагностическая чувствительность
Протестировали образцы 407 больных с
установленным сифилисом, все они были
реактивными в анализе Murex ICE* Syphilis.
Исследовали образцы больных с разными
формами сифилиса, в том числе образцы 37
больных первичным сифилисом.
Диагностическая чувствительность методики
Murex ICE* Syphilis на этом материале,
установленная с помощью биноминального
распределения составила 100% (407/407),
нижний предел доверительного интервала —
99,1% (403/407).
Диагностическая специфичность
С помощью Murex ICE* Syphilis протестировали
458 образцов пациентов с различными
заболеваниями (не связанными с T.pallidum).
Сюда включали образцы беременных, больных
аутоиммунной патологией и острыми вирусными
инфекциями.
В
этом
исследовании
диагностическая
специфичность Murex ICE* Syphilis составила
100% (458/458), с нижним пределом 95%-ного
доверительного интервала, равным 99,2%
(454/458).
Кроме
того,
протестировали
панели
отрицательных на T.pallidum образцов с
гемолизом, с высокой концентрацией липидов
или
билирубина.
Все
образцы
были
нереактивными в анализе.
Специфичность в скрининге
С помощью анализа Murex ICE* Syphilis был
проведен скрининг 8032 образцов доноров
крови
в
четырех
Европейских
центрах
переливания
крови.
Результаты
этого
исследования суммированы в таблице 2.
99,94%
(8027/8032)
образцов
были
нереактивными, 0,06% (5/8032) – повторно
реактивными. Один из повторно реактивных
образцов
был
признан
подтверждено
положительным после анализа с помощью
коммерческой методики анализа антител к
T.pallidum. В остальных 4 образцах наличие
антител к T.pallidum не было подтверждено.
Специфичность анализа Murex ICE* Syphilis в
скрининге на материале предположительно
отрицательных образцов европейских доноров
крови,
установленная
с
помощью
7
биноминального распределения, составила
99,95% (8027/8031) с 95%-ным доверительным
интервалом от 99,87% (8021/8031) до 99,98%
(8029/8031).
Воспроизводимость анализа
Для оценки воспроизводимости анализа Murex
ICE* Syphilis в 10 повторах 4 раза тестировали 4
панели
образцов
известного
качества.
Результаты исследования суммированы в
таблице 3.
Таблица 2
Реактивность в Murex ICE* Syphilis
предположительно отрицательных
образцов обычных доноров крови
Центр
А
В
С
D
Всего
Кол-во
Кол-во
Кол-во
Кол-во
образцов повторно подтвержденно
ложно
доноров реактивных положительных реактивных
крови
образцов
образцов
образцов
2841
3
1
2 (0,07%)
2182
1
0
1 (0,05%)
849
1
0
1 (0,12%)
2160
0
0
0
8032
5
1
4 (0,05%)
е) Отсутствие проверки того, чтобы дно
ячейки было чистым и сухим, а на
поверхности жидкости в ячейке перед
считыванием
результата
в
плашке
отсутствовали пузырьки воздуха.
ж) Неправильно выбрана длина волны для
анализа (450 нм) или длина волны
сравнения.
6. Использование образцов с выраженным
гемолизом
или
значимой
микробной
контаминацией, сыворотки с неполным
свертыванием крови, а также плазмы с
фибрином может привести к получению
неправильных результатов анализа.
7. Возможность анализа с помощью этой
методики образцов трупной крови не
оценивалась.
Таблица 3
Воспроизводимость анализа Murex ICE*
Syphilis
ОбраКол-во
Кол-во
Средняя
%CV
%CV
зец
анализов повторов оптическая внутри между
плотность, запуска запуспороговое
ками
значение
QA01
4
10
1,96
5,5
8,0
QA02
4
10
1,11
6,3
8,2
QA03
4
10
1,65
4,5
6,4
QА04
4
10
0,37
4,4
13,0
ОГРАНИЧЕНИЯ ПРОЦЕДУРЫ
1. Соблюдайте этапы, описанные в разделах
Процедура анализа и Интерпретация
результатов.
2. Методика предназначена только для анализа
отдельно
взятых
(не
объединенных)
образцов сыворотки крови или плазмы крови
с
ЭДТА,
гепарином
или
цитратом.
Возможность использования анализа ICE*
Syphilis для других целей не исследовалась.
3. Отрицательный результат анализа на
антитела не исключает наличия инфекции.
4. При
использовании
любых
иммуноферментных
анализов
возможно
получение
однократно
реактивных
результатов.
5. Самые
частые
причины
получения
ошибочных результатов анализа:
а) Внесение
в
ячейку
неправильного
количества образца, конъюгата или
субстрата.
б) Попадание конъюгата в субстрат.
в) Попадание
конъюгатов
из
других
анализов.
г) Полная
или
частичная
закупорка
промывочных зондов.
д) Недостаточная аспирация, приводящая к
тому, что в ячейке остается небольшое
количество промывочной жидкости.
8