Аминогликозиды восстанавливают функцию дистрофина у мышей
реклама
Аминогликозиды восстанавливают функцию дистрофина у мышей . Elisabeth R. Barton-Davis1, Laurence Cordier1, Daria I. Shoturma1, Stuart E. Leland2 and H. Lee Sweeney1 1Department of Physiology, and 2Institute for Human Gene Therapy, University of Pennsylvania School of Medicine, Philadelphia, Pennsylvania 19104, USA Адрес для корреспонденции: H. Lee Sweeney, A700 Richards Building, Department of Physiology, 3700 Hamilton Walk, University of Pennsylvania School of Medicine, Philadelphia, Pennsylvania 19104-6085, USA. Телефон: (215) 898-0486; Fax: (215) 898-0475; E-mail: [email protected]. Опубликовано 15 августа, 1999 Подготовлено к печати 14 июля , 1999, исправлено и пересмотрено 16 июля , 1999. Мышечная дистрофия Дюшена (МД) вызвана мутациями гена , ведущими к отсутствию белка дистрофина в поперечно- полосатых мышцах. Значительное количество этих мутаций связано с преждевременной остановкой кодонов. На основе наблюдения, что аминогликозиды способны подавлять этот процесс в разных клетках, мы протестировали эффект гентамицина в развитых мышечных клетках mdx мыши - модели животного для МД.. Раскрытие mdx миофибрилл при использовании гентамицина вело к увеличению экспрессии и локализации дистрофина на мембране клеток. Мы оценивали эффекты различных дозировок гентамицина по функциональной защите мышц mdx мышей. Мы определили режим лечения, который приводил к наличию дистрофина в мембране клеткок во всех поперечно-полосатых мышцах, что предусматривало функциональную защиту против повреждения мышц. Наши исследования впервые доказали, что аминогликозиды могут подавлять остановку кодонов не только in vitro, но также in vivo. Кроме того, эти результаты показывают возможности нового режима лечения миодистрофии и других болезней вызванных мутациями преждевременной остановки кодонов. Это лечение могло бы помочь вплоть до 15% пациентов с МД J. Clin. Invest. 104:375-381 (1999). Введение Мышечная дистрофия Дюшена (МД) является генетическим наследственным заболеванием, которое наследуется Х-сцепленно рецессивно, и обусловлено отсутствием белка дистрофина. Болезнь выявляется приблизительно у 1 из 3,500 новорожденных мальчиков. Приблизительно один из трех случаев возникает из новых мутаций в гене (1) дистрофина. Это связано с большим размером гена дистрофина (2.4 megabases (2)), в результате чего он чаще подвергается спонтанным мутациям. Приблизительно половина этих мутаций незначительна в пределах гена и не приводит к нарушению структуры конечного белка (3). Тем не менее, 60% остальных случаевявляются значимыми мутациями приводят к нарушению точки считывания, увеличению количества ошибок или преждевременной остановке в последовательности (4) кодирования полипептида. Исследование 158 пациентов с нон-делециями обнаружило, что, 16 пациентов имело преждевременную остоновку кодонов в последовательности (5) кодирования дистрофина. MDX мыши, которые служит в качестве модели животного для МД, содержит указанную мутацию (6). Эта мутация вызывает преждевременное завершение синтеза белка и ведет к отсутствию дистрофина и дистрофин- связанного белкового комплекса в пределах мембраны миоцитов. Мышцы mdx мыши показывают критические проявления человеческой формы болезни, включая высокую восприимчивость к повреждению, значимую степень мышечной дегенерации и регенерации, и повышение процессов фиброзирования позже на более поздних сроках (7-9). Мdx мыши таким образом служит в качестве как фенотипической так и генетической модели для тех пациентов, у которых МД возникает из-за преждевременной остановки кодонов. Подавление преждевременной остановки кодонов может быть связано аминогликозидами в развитых клетках (10, 11). Эти антибиотики заставляют истолковываясь неправильно код РНК и этим самым допускают вставку альтернативных аминокислот на месте видоизмененного кодона (10). Последние сообщения показали, что развитые клетка, у которых выявлены мутации преждевременной остановки в волокнах трансмембранного регулятора электропроводности (CFTR) лечатся аминогликозидами, с восстановлением синтеза полного белка (12, 13). Хотя это никогда не наблюдали in vivo, это не исключало возможности, что любая болезнь вызванная указаными мутациями могла быть вылечена с использованием аминогликозидов. Мы протестировали эту гипотезу на первичных культурах мышц от mdx мышей, а также в целом на животных. Мы обнаружили, что лечение гентамицином заканчивается синтезом и соответствующей локализацией дистрофина in vitro и in vivo. Наиболее важно,что функциональная защита дистрофина против повреждения отмечена в гентамицин-обработанных мышцах mdx мышей. Следовательно, аминогликозиды могли бы стать новым подходом к лечению миодистрофии и других болезней вызванных мутациями преждевременной остановки кодонов . Методы Обработка гентамицином первичной культуры клеток. Первичная культура клеток скелетный мышц мышей была выделена из мышц 1- дневных mdx мышей как описано прежде (14). Клетки были культивированы в течение 10 дней в присутствии 0-500 ug/mL гентамицина сульфата (GIBCO BRL, Grand island, НЬЮ-ЙОРК, США). Среда культуры была заменена каждые 4 дня. Присутствие дистрофина в миобластах культуры было обнаружено методом иммунофлюоресценции, как описано прежде (15). Был использован первичный неразбавленный mAb (F192A12; Alexis Corp., Сан Диего, Калифорния, США). Родамин коньюгированные противомышинные IgG (Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc., Пенсильвании, США), были использованы как вторичные антитела. Для исследования был использован микроскоп Leica DMR (Leica Microsystems Inc., Deerfield, Illinois, США), цифровая камера, и соответствующее программное обеспечение (OpenLab, Improvision, Coventry, Объединенное Королевство). Лечение гентамицином мышей. Используя фармакокинетические данные полученные при исследовании на собаках, аллометрический эквивалент (16) дозы гентамицина сульфата (Boehringer Ingelheim, Ridgefield, Коннектикут, США) у мышей был вычислен как 17 мг./кг. Мужским особям mdx мышей были проведены подкожные инжекции 100%, 200%, и 400% рассчитанного эквивалента дозы в день в течение 14 дней. Контрольные группы включали самцов mdx мышей, которым не вводился гентамицин, самцов мышей C57BL/6J и самцов мышей C57BL/6J, которым вводилось 200% рассчитанного эквивалента дозы гентамицина сульфата. В отдельном эксперименте лечение гентамицином проводилось с помощью осмотических насосов Alzet (Alza Corp., Альт Palo, Калифорния, США). Осмотические насосы были имплантированы под кожу мышей в соответствии с инструкцией изготовителя. Насосы были загружены оответствующий концентрацией лекарства для мышей, чтобы получать 50%, 100%, и 200% рассчитанной дозы в течение 2 недель. В конце режима лечение, животные были анестезированы кетамином (Phoenix Pharmaceuticals Inc., Калифорния, США) и обескровлены. Почки, сердце, диафрагма, передние большеберцовые мыщцы (TA), и длинный разгибатель пальцев (EDL) был удален для последующего анализа. Сыворотка была проанализирована на активность креатинкиназы(CK) (Sigma Chemical Co., Ст. Луис, Миссури, США) и также для определения уровня гентамицина, используя флюоресцентный метод (Диагностическая лаборатория, Университета Комел, НЬЮ-ЙОРК, НЬЮ-ЙОРК, США). Почки были изучены на наличие нефроза для оценки токсичности (M.S. Hershey Медицинского Центра, Hershey, Пенсильвании, США) (17). Сердце, диафрагма, и TA быстро были заморожены в изопентане для иммунофлюоресцентного анализа. У EDL было проанализировано функциональное состояние как описано ниже. Измерение механики мышц. Защита против механического повреждения, порожденного серией эксцентричных сжатий 10% Lo (8) была оценена. Повреждение было определено как снижение силы между первым и последним эксцентричным сжатием. В конце механических измерений, мышцы были взвешены, и затем быстро замороженны в изопентане для последующего анализа. В течение механического повреждения, процион ораньжевый ( низкий-молекулярный-вес, мембрана-краска impermeant) был нанесен в середину мышцы. Таким образом, дальнейшее подтверждение повреждения мышц определялось количеством красителя в поврежденных волокнах EDL, как описано прежде (8). Иммуногистохимия. Присутствие и локализация на мембране как дистрофина так и саркогликана ( одног из составляющих дистрофиновый гликопротеиновый комплекс;(19)), были обнаружены методом иммунофлюоресценции на 10-µm замороженном срезе поперечно-полосатых мышца. Первичные антитела для дистрофина (60 kDa; от Eric Hoffman, University Pittsburgh, Pittsburgh, Пенсильвания, США; (20), был разведен в соотношении 1:500 в 10% сыворотке лошади, и вторичные антитела ( FITC анти-овца; Джэксон ImmunoResearch Laboratories Inc.), был разбавлен 1:200. Саркогликановые поликлональные антитела ( дар Elizabeth McNally, University Чикаго, Чикаго, Illinois, США; ссшлитесь на 21), были разбавлены 1:600 в 5% BSA, и вторичные антитела ( FITC анти-кролик; Джэксон ImmunoResearch Laboratories Inc.), были разбавлены1:3,000. Для исследования использовался микроскоп Leica DMR и цифровая камера, программное обеспечение анализа изображения (OpenLab). Иммуноблот. Оценка восстановления гликопротеинового комплекса дистрофина на сарколемме была выполнена методом иммуноблота гомогенезированных мыщц. Антитела дистрофина (терминальное антитело COOH-; Dys2 [Novacastra Laboratories Ltd., Newcastle в(о;с) Tyne, Объединенном Королевстве]) и саркогликана были использованы для этого исследования. Результаты Чтобы определить, мог ли гентамицин привести к подавлению преждевременной остановке кодона гена дистрофина у mdx мыши, первичные миобласты были культивированы от новорожденных mdx мышей в присутствии гентамицина. Дистрофин был обнаружен в 14-дневных культурах, обработанных 300 μg/mL гентамицина (иллюстрация 1 и таблица 1). В предшественниках мышечных волокон были обнаружены саркомеры. Кроме того, непосредственные сокращения наблюдались даже на этом уровне обработки. Более низкие дозы не приводили к обнаружению дистрофина. При более высоких уровнях обработки гентамицином размер и число миобластов уменьшились до отметки, в которой никаких миобласты не развивалось (500 μg/mL). Это дает нам понять, что есть режим дозирования гентамицином, который может привести к восстановлению синтеза дистрофина. Однако, чрезмерные дозы препарата могут вызывать отсутствие роста и развития клеток. Рисунок 1 Таблица 1 Наличие митобластов Размер миофибрилл Дистрофин Обработка гентамицином способствует увеличению экспрессии дистрофина Контроль 100 µg/mL 200 µg/mL 300 µg/mL 400 µg/mL +++ +++ +++ ++ + 500 µg/mL - +++ +++ +++ ++ + - - - - + + - Иммуногистохимически наличие дистрофина было обнаружено в митобластах C57 и mdx мышей Дистрофин присутствовал в митобластах от мышей C57 и митобластах mdx мышей обработанных 300 µg/mL гентамицина.В контрольной группе дистрофин не выявлялся.. Затем, мы исследовали диапазон доз гентамицина у женских особей mdx мышей и мужских особей. Сначала мы искали свидетельства того что дистрофин защищает от повреждений вызванных сокращениями. Для оценки использовался метод с эксцентричными сокращениями. Результаты этих измерений продемонстрированы в иллюстрациях 2, a и b. Существенная защита против повреждений вызванных сокращением наблюдалась в 7 из 8 группах mdx мышей мужского пола, которые получали 200%-ую эквивалентную дозу. У mdx мышей женского пола сопоставимая защита была достигнута в 50%-ой дозе (иллюстрация 2a). Обработка гентамицином в других дозах, или непрерывное поступление препарата, не дало существенной защиты против повреждений вызванных сокращением (иллюстрация 2b). Рисунок 2 Функциональная защита против повреждения также была подтверждена просмотром повреждений сарколеммы в мышцах что оценивалось при окраске волокон процион ораньжевым. Эта флюоресцентная краска может входить; в мышечную клетку только при нарушении мембраны (8). Уменьшения силы эксцентричных сжатий коррелировало с объемом повреждений сарколеммы, независимо от группы лечения. Этот результат показан на Рисунке 2c для поперечного сечения мышцы C57, контрольной mdx, и самца получавшего эквивалент 200% дозы mdx мышей. Количество поврежденных волокон у мышц mdx мышей, получавших лечение, были значительно меньше, чем в контрольной группе. Результаты функционального и структурного анализа поддерживают гипотезу, что лечение гентамицином может защитить мышцы mdx мышей от повреждения сжатия. Мы подтвердили, что механизм, которым гентамицин восстанавливает защиту против повреждения восстановление дистрофина. Для того, чтобы проверить эффективность лечения гентамицином по восстановлению трансляции и стабилизации дистрофина была выполнена иммуногистохимия в поперечных сечениях мышц. Во всех случаях мышцы EDL, которые демонстрировали защиту против повреждения сжатия продемонстрировали хорошее окрашивание по сравнению с мышцами EDL из контрольной группы. Кроме того, у животных, которые демонстрировали функциональную защиту, мы видели локализацию на мембране дистрофина во всех мышцах, включая TA, сердце, и диафрагму. Поперечные сечения мышца TA показаны на Рисунке 3. Рисунок 3 Иммуногистохимия. Поперечные сечения мышц, свечение дистрофина (a-c) и саркогликана (d-f). Контрольная группа C57 TA отображало положительное окрашивание для белков (a так и d). Уменьшение интенсивности свечения дистрофина и саркогликана было в TA mdx мышей получавших гентамицин (b и e).Отсутствие свечения дистрофина, и только минимальное свечение саркогликана наблюдалось у контрольной группы mdx мышей (c и f). (19) Было выполнено иммуногистохимическое исследование саркогликана для определения дистрофинсвязанного гликопротеинового комплекса. Присутствие саркогликана было обнаружено во всех мышцах, в которыхбыл обнаружен дистрофин, включая сердца, диафрагмы, и TA. . (Свечение TA изображено на Рисунке 3.) Тем не менее, что очевидно на Рисунке 3, животные получавшие гентамицин показывают некоторое окрашивание цитоплазмы, как для дистрофина так и для саркогликана. Таким образом, не все комплексы дистрофина локализованы на мембране и вероятно, функциональны. (Рисунок 4) Дистрофин (терминальное антитела для обнаружения полного белока) или саркогликан, обнаруженный у самцов mdx, получавших эквивалент 200% дозы, или у самкак, получавших эквивалент 50% дозы, был 10-20% от уровня мышц C57. Восстановление дистрофина и связанного комплекса был обнаружен во всех поперечно-полосатых мышцах, что(, которые мы изучили, включая TA, EDL, диафрагму, и сердце. Таким образом, системная поставка гентамицина может усилить синтез функционального дистрофина во всех поперечно- полосатые мышцах. Иммуноблот мышц TA на наличие дистрофина и саркогликана. Получавших гентамицин в эквиваленте 200% дозы значительно повышала как уровень дистрофина так и саркогликана по сравнению с контрольной группой mdx мышей.полоса движения 2) когда гентамицин вводился инъекцией (полоса движения 3) или насосом вливания (полоса движения 5) у самцов mdx мышей. Белковые уровни были приблизительно 10-20% от контрольной группы C57 (полоса движения 1). Самки mdx мышей, получавшие только 50% дозы гентамицина (полоса движения 4) также показали значимые уровни обоих белков по сравнению с контрольной группой. Парадоксально, самые высокие уровни дистрофина у mdx мышей были в группе самцов получавших эквивалент 200% дозы насосом вливания. Хотя эти мышцы были очень подверженными повреждению сжатия (Цифра 2b), они содержали приблизительно 20% нормального уровня дистрофина. Чтобы получить дальнейшее подтверждение зашиты, при лечении гентамицином мы определили уровни креатинкиназы(КК) в сыворотке. Как показано на Рисунке 5, креатинкиназа выравнивается у самцов мышей, получавших гентамицин (эквивалент 200% дозы), не было значительного повышения ее уровня по сравнению с контрольной группой (C57). У mdx мышей уровни КK в значительной степени повышены (Рисунок 5). Таким образом, уровень защиты, достигнутый лечением, был достаточным, чтобы возвращать уровни КK до нормы. Хотя аминогликозиды используються для лечения бактериальных инфекций, есть возможные побочные эффекты, которые должны быть проверены. Они включают нефро и ототоксичность (17). Предшествующие исследования показали, что хелатирующие агенты , как например, 2,3-дигидробензоат (DHB), использованные в комбинации с гентамицином предотвращать ототоксичность (23), и не создают помехи с использованием гентамицина как антибиотика (24). Соответственно, мы изучили комбинированное использование DHB и гентамицина (самцы с эквивалентом 200% дозы). Это заканчивался функциональной защитой у 4 из 6 животных (Цифра 2a). Мышцы остальных 2 животных не показывали защиту против эксцентричного сжатия. Мышцы самцов mdx мышей, получающих DHB плюс 400% эквивалента дозы гентамицина не показали защиту против эксцентричного сжатия, соответствующую результатам применения только одного гентамицина. Эти результаты показывают, что DHB не создавался помехи гентамицину для восстанавления функции дистрофина, и,) может даже предотвращать токсичные побочные эффекты. Для того, чтобы выявить потенциальные почечные осложнения связанные с ежедневными инъекциями гентамицина, мыши были обследованы на наличие признаков уремии таких, как например, депрессия, уменьшенный уровень активности, и уменьшенный аппетит. Показатели оставались в норме для всех режимов лечения. В конце серии инъекций, почки изучались гистологически, но патологии не было выявлено. Максимальная сывороточная концентрация гентамицина (65.0 5.8 µg/mL; n = 3), наблюдалась через 20 минут после инъекции и уменьшалась быстро до 1 µg/mL через 4-24часа . (Токсичность приблизительно 10 µg/mL у людей.) Сывороточная концентрация гентамицина была примерно одинакова у mdx мышей получавших лекарство насосом вливания 2.5 0.2 µg/mL (n = 4) на момент анализа. Дискуссия Мы провели первые эксперементы in vivo по изучению способности аминогликизидов подавлять преждевременную остановку кодонов. Эти результаты дают надежду разработки лечения для пациентов с МД и другими болезнями вызванными подобными мутациями Хотя генная терапия служит надеждой для лечения MД и других генетических болезней (25, 26), аминогликозидные антибиотики предлагают другой непосредственный метод лечения генетических болезней. Инъекции гентамицина обеспечивают системную поставку терапевтического агента, как демонстрируют описанные результаты выше, могут достичь фенотипического подавления для всего животного. Это - четкое преимущество перед более ориентированными методами генной терапии, особенно при миодистрофии, при которой дефект - во всех мышцах тела. Хотя начальные исследования аденовирусной передачи гена дистрофина показывают, что восстановление дистрофина выравнивается приблизительно у 50% волокон, что может защитить поперечно-полосатую мускулатуру от повреждения (27) . Ясно , что поставка средства передачи гена является основной нерешенной проблемой. С другой стороны,, системная поставка аминогликозидов проста и может потенциально восстановить дистрофин во всех мышечных волокнах . Аминогликозиды могут восстановить только долю нормального уровня полного белка, как показано на Рисунке 4. Исследования mdx мышей с полным отсутствием дистрофина продемонстрировали, восстановление 20% уровня дистрофина от нормы , что может предотвращать симптомы болезни (28). В том же анализе, мыши с значительно более низкими уровнями (<5%) дистрофина также показали уменьшение симптомов. Мы оцениваем уровень дистрофина у mdx мышей, получавших лечение - приблизительно 10-20% уровней от нормы.. Хотя в этих мышцах присутствует значимая степень функциональной защиты против повреждения по сравнению с контрольной группой mdx мышей (Рисунок 2), полное функциональное восстановление не было достигнуто. Наши эксперименты показывают, что низкие уровни дистрофина могут позволить себе значимую защиту больной мышци, но есть критический уровень , который должен быть достигнут для того, чтобы восстанавливать полную функцию. Тем не менее, уровень защиты достигнутой гентамицином значительно больше, чем защита предоставляемая сверхсинтезом усеченного дистрофина от пациента с миодистрофией Беккера. То, что некоторые животные не реагируют на лечение гентамицином, предполагает, что есть критический уровень гентамицина необходимый для получения значимой трансляции дистрофина. Любая мышь склонна к изменчивости метаболизма гентамицина или нарушение техники инъекции, могли обусловить небольшое количество животных, у которых не было эффекта от лечения. Результаты инъекций у самок mdx мышей напоминают, чтобы показатель метаболизма лекарства являлся вероятным источником изменчивости. У самок mdx мышей, эквивалент дозы для восстановления дистрофина был 50%, а не 200%. Это соответствует более низкому показателю метаболизма лекарства у самок. Таким образом, ясно что в наших как in vitro так и in vivo экспериментах есть узкий диапазон дозы, в котором лечение гентамицином эффективно для восстановления функции дистрофина. Интуитивно, можно представить себе, что ниже определенного уровня, неправильная трансляция не произойдет, и, что выше некоторого уровня, показатель будет слишком высоко, чтобы допускать белковый синтез. Тем не менее, цель остается достичь уровня, который нарушает преждевременную остановку кодонов и не вызывает конкуренции с "правильный" тРНК. Тогда как мы идентифицировали ежедневный эквивалент дозы, который реализовал эту цель у мышей, частота поставки лекарства была также критической. Оказывается, что ежедневное болюсное введение может быть оптимальней. Когда мы поставили тот же эквивалент дозы, который был эффективным при одном введении в день через осмотический насос, никакой функциональной защиты не было , даже если значительные количества дистрофина были произведены (Рисунок 4). Этот эксперимент обеспечивает понимание ключевой характеристики лечения гентамицином. Мы выдвинули гипотезу, что "пик" гентамицина в крови после инъекции позволять запустить процесс неправильной транскрипции и, таким образом, способность подавлять преждевременную остановку кодонов С другой стороны,, быстрый возврат к низкому уровню лекарства в сыворотке может быть необходимо для предотвращения широко распространенному неправильному синтезу белков и, таким образом, нежелательным побочным эффектам. . У мышей, получавших 200% дозой, уровни лекарства в сыворотке были на максимуме (65.0 µg/mL) в течение менее чем 2 часов. Лекарство быстро метаболизировалось, минимальные величины наблюдались (<1 µg/mL) к 4 часам вскоре после инжекции. Мы показали, что пик должен достичь по крайней мере 40 µg/mL в течение максимальной фазы, так как более низкие дозы не увеличивали продукцию дистрофина. Но неясно какой уровень лекарства в сыворотке должен быть достигнут у людей для, того чтобы эффективно подавить преждевременную остановку кодонов. Очевидно, такие испытания могут включить пациентов с подтвержденной преждевременной остановкой кодонов. Более ранние исследования фенотипического подавления аминогликозидами включали многие антибиотики, так же как определенные формы каждого препарата с различными заменами кусочков цепи. Активные формы гентамицина включают X2, C1a, C2, и A. Стандартные фармацевтические смеси гентамицина содержат приблизительно 50 % изомеров, которые являются активными в фенотипическом подавлении. Чтобы признать гентомицин средством от МД требуются долгие клинические испытания, которые подтвердили бы нетоксичность и безопасность данного препарата. Однако при наличии результатов данного эксперимента стоило бы провести эти испытания как можно скорее. Это могло бы помочь 15% людей страдающих МД. Список литературы: Moser, H. Duchenne muscular dystrophy: pathogenic aspects and genetic prevention. Hum Genet 1984. 66:17-40. View this article via: PubMed CrossRef Koenig, M, Monaco, AP, Kunkel, LM. The complete sequence of dystrophin predicts a rod-shaped cytoskeletal protein. Cell 1988. 53:219-228. View this article via: PubMed CrossRef Koenig, M, et al. Complete cloning of the Duchenne muscular dystrophy (DMD) cDNA and preliminary genomic organization of the DMD gene in normal and affected individuals. Cell 1987. 50:509-517. View this article via: PubMed CrossRef Hoffman, EP. Molecular diagnostics of Duchenne/Becker dystrophy: new additions to a rapidly expanding literature. J Neurol Sci 1991. 101:129-132. View this article via: PubMed CrossRef Prior, TW, et al. Spectrum of small mutations in the dystrophin coding region. Am J Hum Genet 1995. 57:22-33. View this article via: PubMed Sicinski, P, et al. The molecular basis of muscular dystrophy in the mdx mouse: a point mutation. Science 1989. 244:15781580. View this article via: PubMed CrossRef Karpati, G, Carpenter, S, Prescott, S. Small-caliber skeletal fibers do not suffer necrosis in mdx mouse dystrophy. Muscle Nerve 1988. 11:795-803. View this article via: PubMed CrossRef Petrof, BJ, Shrager, JB, Stedman, HH, Kelly, AM, Sweeney, HL. Dystrophin protects the sarcolemma from stresses developed during muscle contraction. Proc Natl Acad Sci USA 1993. 90:3710-3714. View this article via: PubMed CrossRef Stedman, HH, et al. The mdx mouse diaphragm reproduces the degenerative changes of Duchenne muscular dystrophy. Nature 1991. 352:536-539. View this article via: PubMed CrossRef Palmer, E, Wilhelm, JM, Sherman, F. Phenotypic suppression of nonsense mutants in yeast by aminoglycoside antibiotics. Nature 1979. 277:148-150. View this article via: PubMed CrossRef Singh, A, Ursic, D, Davies, J. Phenotypic suppression and misreading in Saccharomyces cerevisiae. Nature 1979. 277:146148. View this article via: PubMed CrossRef Bedwell, DM, et al. Suppression of a CFTR premature stop mutation in a bronchial epithelial cell line. Nat Med 1997. 3:1280-1284. View this article via: PubMed CrossRef Howard, M, Frizzell, RA, Bedwell, DM. Aminoglycoside antibiotics restore CFTR function by overcoming premature stop codons. Nat Med 1996. 2:467-469. View this article via: PubMed CrossRef Neville, C., Rosenthal, N., McGrew, M., Bogdanova, N., and Hauschka, S. 1998. Skeletal muscle cultures. In Methods in cell biology. Volume 52. H.L. Sweeney and C. Emerson, editors. Academic Press. San Diego, CA. 85–116. View this article via: PubMed Sweeney, H.L., and Feng, H. 1998. Structure-function analysis of cytoskeletal/contractile proteins in avian myotubes. In Methods in cell biology. Volume 52. H.L. Sweeney and C. Emerson, editors. Academic Press. San Diego, CA. 275–282. View this article via: PubMed Morris, TH. Antibiotic therapeutics in laboratory animals. Lab Anim 1995. 29:16-36. View this article via: PubMed CrossRef Swan, SK. Aminoglycoside nephrotoxicity. Semin Nephrol 1997. 17:27-33. View this article via: PubMed Barton-Davis, ER, Shoturma, DI, Musaro, A, Rosenthal, N, Sweeney, HL. Viral-mediated expression of insulin-like growth factor I blocks the aging-related loss of skeletal muscle function. Proc Natl Acad Sci USA 1998. 95:15603-15607. View this article via: PubMed CrossRef Ervasti, JM, Campbell, KP. Membrane organization of the dystrophin-glycoprotein complex. Cell 1991. 66:1121-1131. View this article via: PubMed CrossRef Hoffman, EP, Brown (Jr), RH, Kunkel, LM. Dystrophin: the protein product of the Duchenne muscular dystrophy locus. Cell 1987. 51:919-928. View this article via: PubMed CrossRef McNally, EM, et al. Mutations that disrupt the carboxyl-terminus of γ-sarcoglycan cause muscular dystrophy. Hum Mol Genet 1996. 5:1841-1847. View this article via: PubMed CrossRef Rafael, JA, et al. Prevention of dystrophic pathology in mdx mice by a truncated dystrophin isoform. Hum Mol Genet 1994. 3:1725-1733. View this article via: PubMed CrossRef Song, B, Schacht, J. Variable efficacy of radical scavengers and iron chelators to attenuate gentamicin ototoxicity in guinea pig in vivo. Hear Res 1996. 94:87-93. View this article via: PubMed CrossRef Pearce, RA, Finley, RJ, Mustard, RA, Duff, JH. 2,3-dihydroxybenzoic acid. Arch Surg 1985. 120:937-940. View this article via: PubMed Hauser, MA, Chamberlain, JS. Progress towards gene therapy for Duchenne muscular dystrophy. J Endocrinol 1996. 149:373-378. View this article via: PubMed CrossRef Karpati, G, Ascadi, G. The potential for gene therapy in Duchenne muscular dystrophy and other genetic muscle diseases. Muscle Nerve 1993. 16:1141-1153. View this article via: PubMed CrossRef Hauser, MA, Amalfitano, A, Kumar-Singh, R, Hauschka, SD, Chamberlain, JS. Improved adenoviral vectors for gene therapy of Duchenne muscular dystrophy. Neuromuscul Disord 1997. 7:277-283. View this article via: PubMed CrossRef Phelps, SF, et al. Expression of full-length and truncated dystrophin mini-genes in transgenic mdx mice. Hum Mol Genet 1995. 4:1251-1258. View this article via: PubMed CrossRef Tuffery, S, et al. Mutation analysis of the dystrophin gene in Southern French DMD or BMD families: from Southern blot to protein truncation test. Hum Genet 1998. 102:334-342. View this article via: PubMed CrossRef Оригинал статьи: http://www.jci.org/articles/view/7866 Перевод осуществлен проектом МойМио http://www.mymio.org
