Инструкция

Инструкция
по применению набора реагентов для количественного определения липопротеинов низкой плотности холестерина в сыворотке и плазме крови человека
«ЛПНП-ХОЛЕСТЕРИН-UTS»
Набор реагентов «ЛПНП-ХОЛЕСТЕРИН - UTS» разрешен к производству, продаже и применению на территории РФ.
Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/05461
Информация для заказа набора «ЛПНП-ХОЛЕСТЕРИН - UTS»
Кат. №
Комплектация
Количество
определений
ЛПНП-09-014-120
Р1 (90 мл) + Р2 (30 мл) + калибратор (лиофилизат)
1 флакон
где v – объем фотометрической ячейки анализатора.
120/v
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «ЛПНП – ХОЛЕСТЕРИН - UTS» предназначен для определения холестерина липопротеинов низкой плотности (ЛПНПхолестерина) в сыворотке или плазме крови человека ферментативным методом в клинико-диагностических и биохимических лабораториях для целей
диагностики заболеваний и контроля проводимого лечения пациентов.
ЛПНП-холестерин - молекула липопротеина, участвующая в доставке холестерина клеткам организма. Часто ЛПНП-холестерин называют «плохой
холестерин», поскольку высокий уровень его содержания вызывает риск сердечно-сосудистых заболеваний. Увеличение концентрации ЛПНПхолестерина в плазме является показателем склонности к атеросклеротическим болезням, инфаркту миокарда, инсульту. На этом основано клиническое
значение анализа.
1.2. Потенциальный риск применения набора – класс 2а. Основной риск косвенный и связан с возможностью получения неверного результата анализа, что
может привести к неправильно поставленному диагнозу и назначению неэффективного лечения пациента. Для снижения указанного риска необходимо в
каждой аналитической серии контролировать качество результатов анализов с применением контрольных сывороток в соответствии с ОСТ 91500.13.00012003.
2. ПРИНЦИП МЕТОДА
2.1. Набор основан на прямом методе определения в исследуемом образце ЛПНП-холестерина, без стадий осаждения и центрифугированияи включает 2
этапа:
I. Разрушение в анализируемом образце с помощью ферментативных реакции (1-3) всех видов холестерина, кроме ЛПНП-холестерина, защищаемого
детергентом 1:
Эфиры-Холестерина + H2O Холестеринэстераза Холестерин + Жирные кислоты
(1)
Холестерин + О2
Холестериноксидаза
2Н2О2
Каталаза
4-Холестенон + Н2О2
+ 2Н2О + О2
(2)
(3)
II. Высвобождение из комплекса и измерение только ЛПНП-холестерина по схеме реакций (4-6):
Эфиры-Холестерина + H2O Холестеринэстераза Холестерин + Жирные кислоты
(4)
Холестерин + О2
2Н2О2 + N-Диметоксианилин + 4 – Аминоантипирин
Холестериноксидаза
Пероксидаза
4-Холестенон + Н2О2
(5)
Хинонимин + 4Н2О (6)
2.2. Фотометрическое измерение основано на наличии пика поглощения с максимумом при длине волны 580 нм молекулами хинонимина. Все остальные
компоненты реакционной смеси слабо поглощают свет при этой длине волны. Таким образом, увеличение оптической плотности реакционной смеси
пропорционально интенсивности окраски хинонимина и, следовательно, прямо пропорционально концентрации ЛПНП-холестерина в пробе [1,2,3].
3. СОСТАВ НАБОРА
3.1. Набор реагентов «ЛПНП-ХОЛЕСТЕРИН - UTS» поставляется в виде двух растворов - Реагента 1 и Реагента 2, а также лиофилизированного
калибратора.
Компоненты и их состав:
Наименование
Состав
Концентрация
Р1
Буфер Гуда
50 ммоль/л
Ферментный раствор, pH 6,5
Холестериноксидаза
380 Е/л
Холестеринэстераза
380 Е/л
Каталаза
490 Е/л
N-(2-гидрокси-3-сульфопропил)-3-50,45 ммоль/л
диметоксианилин
Детергент 1
<2%
Р2
Буфер Гуда
50 ммоль/л
Ферментно-субстратный раствор, pH
4-Аминоантипирин
1ммоль/л
6,5
Пероксидаза
1000 Е/л
Детергент 2
<2%
Калибратор ЛПНП-холестерина
Лиофилизат
концентрация
сыворотки крови человека
указана на
этикетке флакона
4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
4.1. Набор обеспечивает линейную область определения концентрации холестерина в диапазоне от 0,07
до 12,5 ммоль/л, отклонение от линейности не превышает 5,0%.
4.2. Чувствительность определения – не более 0,07 ммоль/л.
4.3. Коэффициент вариации результатов определений – не более 2,5%.
4.4. Фактор пересчета: 1 ммоль/л = 1мг/дл × 0,02586.
4.5. Величины концентрации ЛПНП-холестерина в сыворотке или плазме взрослого человека [3]:
Степень риска ишемической болезни сердца
Концентрация ЛПНП-холестерина
Низкая
<3,4 ммоль/л
Средняя
3,4 - 4,1 ммоль/л
Высокая
>4,1 ммоль/л
4.6. Для проверки правильности определения рекомендуется использовать контрольные сыворотки, аттестованные по значению активности ЛПНПхолестерина прямым ферментативным методом без осаждения и центрифугирования.
5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
5.1. Реагент1 содержит N-(2-гидрокси-3-сульфопропил)-3-5-диметоксианилин, реагент 2 содержит 4-аминоантипирин. Следует избегать попадания этих
реагентов на кожу и слизистые. В случае попадания их на кожу и слизистые оболочки необходимо промыть поражённые участки большим количеством
проточной воды.
5.2. Набор содержит калибратор на основе человеческой сыворотки. Используемые донорские сыворотки были предварительно проверены на отсутствие
HbsAg и антител против HIV 1+2 и HCV. Тем не менее, следует обращаться с калибратором с теми же мерами предосторожности, как с образцами
пациентов.
5.3. При выполнении лабораторного исследования необходимо соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии,
противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы
Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).
5.4. При работе с биологическими пробами следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. образцы крови человека следует
рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирусы гепатита или любой другой
возбудитель вирусной инфекции.
6. ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ
6.1. Для выполнения анализа по определению концентрации ЛПНП-холестерина с применением набора реагентов «ЛПНП-ХОЛЕСТЕРИН–UTS»
рекомендуется использовать фотометр, фотоэлектроколориметр, полуавтоматический или автоматический биохимический анализаторы, позволяющие
выполнять измерение поглощение оптической плотности при длине 600 (530-630 нм) (режим по конечной точке), и обеспечивающий термостатирование
фотометрической ячейки при температуре +(37±0,5) ОС.
6.2. Общелабораторное оборудование.
7. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
7.1. Сыворотка или гепаринизированная, ЭДТА-плазма крови без следов гемолиза.
7.2. Сыворотку или плазму крови следует отделить от форменных элементов крови не позднее одного часа, после взятия крови.
7.3. Анализ на ЛПНП-холестерин рекомендуется проводить сразу после отбора крови.
7.4. Образцы сыворотки или плазмы, для проведения анализа на содержание ЛПНП-холестерин, стабильны не более 7-х суток при +(2-8) ОС [3].
7.5. Замораживание и оттаивание образцов сыворотки и плазмы крови не рекомендуется.
8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
8.1. Реагенты 1 и 2 готовы к использованию. Перед применением следует прогревать до комнатной температуры и тщательно перемешивать калибратор,
контрольные сыворотки и пробы
8.2. Приготовление раствора калибратора: в содержимое флакона добавить 1 мл дистиллированной воды, закрыть крышкой, перемешать до полного
растворения, избегая вспенивания.
Проведение ручного анализа с использованием фотометра или фотоэлектроколориметра.
8.3. Отобрать компоненты реакционной смеси с использованием пипеточных дозаторов в объемах, указанных в таблице:
Анализируемая проба,
Калибровочная проба,
Холостая проба,
Внести в кювету
мкл
мкл
мкл
Реагент 1
300
300
300
Калибратор
–
4
–
Сыворотка крови или
плазма
4
–
–
Пробы перемешать и инкубировать при температуре +(37±0,5) ОС в течение 5 минут.
Добавить:
Реагент 2
100
100
100
8.4. Пробы тщательно перемешать и инкубировать при температуре +(37±0,5) ОС в течение 5 минут
8.5. Измерить оптическую плотность анализируемого образца (Аобр) и калибровочной пробы (Акал) против холостой пробы в кювете с длиной оптического
пути 10 мм при длине волны 600 (530-630) нм.
Концентрацию ЛПНП-холестерина в сыворотке крови или плазме (ммоль/л) определить по формуле:
С
Аобр
Акал
 Cкал
где: С – концентрация ЛПНП-холестерина в анализируемом образце сыворотки или плазмы крови;
Аобр – оптическая плотность анализируемой пробы отн. холостой пробы, ед. опт. плотн.;
Акал – оптическая плотность калибровочной пробы отн. холостой пробы, ед. опт. плотн.;
Cкал – концентрация ЛПНП-холестерина в калибраторе (указана на этикетке флакона), ммоль/л.
8.6. Если полученная концентрация холестерина в образце выше 12,5 ммоль/л, то исследование следует повторить: разбавить анализируемый образец 0,9%
раствором NaCl в соотношении 1:1 и полученный результат определения умножить на 2.
8.7. Для выполнения измерений на полуавтоматическом или автоматическом биохимическом анализаторах следует:
8.7.1. Установить программу определения концентрации ЛПНП-холестерина согласно таблице:
Наименование параметра
Значение
Метод измерения
Длина волны, нм
Измерение против
Температура реакции
Единица измерения
Число знаков после запятой
Изменение оптической плотности
Соотношение Реагент 1 / проба
Концентрация калибратора, ммоль/л
Время преинкубации (Реагент 1 + проба), мин:
Время реакции (с Реагентом 2), мин
Верхний предел абсорбции реагента против воды, ед.
опт. плот.
Нижний предел абсорбции реагента против воды, ед.
опт. плот.
Конечная точка
Основная 600 (530-630)
дист. вода
37 ОС
ммоль/л
2
Увеличивается
300:4
Указана на флаконе с калибратором
5
5
0,2
0
Границы линейности, ммоль/л
0,07 - 12,5
Максимум нормы, ммоль/л
3,4
Минимум нормы, ммоль/л
1,8
8.7.2. При первом использовании набора, а также при получении новой серии необходимо провести калибровку с использованием входящего в состав
набора калибратора ЛПНП-холестерина.
8.7.3. Концентрация ЛПНП-холестерина в образце рассчитывается в ммоль/л на основании калибровочной прямой, рассчитанной автоматически и
сохраненной в памяти биохимического анализатора.
8.7.4. Если полученная концентрация ЛПНП-холестерина в образце выше 12,5 ммоль/л, то исследование следует повторить: разбавить анализируемый
образец 0,9% раствором NaCl в соотношении 1:1 и полученный результат определения умножить на 2.
9. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
9.1. Набор реагентов «ЛПНП - ХОЛЕСТЕРИН–UTS» должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2..+8 ОС в течение всего
срока годности. Допускается хранение наборов при температуре до +25 ОС не более 5 суток. Замораживание компонентов набора не допускается.
9.2. Срок годности набора указан на упаковке.
9.3. Реагенты 1 и 2 после вскрытия флакона могут храниться при температуре +2..+8 ОС в защищенном от света месте в течение всего срока годности в
плотно закрытом флаконе.
9.4. Раствор калибратора после приготовления стабилен 7 дней при 2-8 ОС или 5 недель при –20 ОС. Повторное замораживание раствора калибратора после
его размораживания не допускается.
9.5. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.
Список литературы
1. Kaplan A et al. Lipoprotein. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St. Louis. Toronto. Princeton 1984; 1194-11206 and 437
2. Okada M. et al. Low-density lipoprotein cholesterol can be chemically measured J. Lab Clin Mad., 1998; 132, 195-201.
3. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
Производится ООО «Эйлитон» по заказу ЗАО «А/О Юнимед».
По вопросам, касающимся качества набора «ЛПНП-ХОЛЕСТЕРИН–UTS» следует обращаться в ЗАО «А/О ЮНИМЕД» по адресу: 129301, Москва, ул.
Касаткина, 3а; Тел. (495) 734-91-31, 8-800-333-91-31,
Факс: (495) 564-86-41.
E-mail: [email protected]; http://www.unimedao.ru