МОРФО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ ПРИ ОСТРОМ ОДОНТОГЕННОМ ПЕРИОСТИТЕ АВТОРЕФЕРАТ
реклама
На правах рукописи БОНДАРЕНКО НИКОЛАЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ МОРФО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ ПРИ ОСТРОМ ОДОНТОГЕННОМ ПЕРИОСТИТЕ 14.00.15 патологическая анатомия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград 2006 Работа выполнена в ГОУ ВПО «Кубанский государственный медицинский университет» федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ Н АУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ доктор биологических наук профессор Славинский Александр Александрович О ФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ : доктор медицинских наук профессор Богомолова Нина Викторовна доктор медицинских наук профессор Новочадов Валерий Валерьевич В ЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ Государственное некоммерческое учреждение «Гематологический научный центр Российской академии медицинских наук» Защита состоится _____________________ 2006 года в _____ часов на заседании диссертационного совета Д 208.008.01 при Волгоградском государственном медицинском университете по адресу: 400131, г. Волгоград, пл. Павших Борцов 1. С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Волгоградского государственного медицинского университета Автореферат разослан _______________________ 2006 года Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук профессор С.И. Зайченко 3 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Популяция нейтрофильных лейкоцитов – основное звено противоинфекционной защиты организма. В очаге воспаления эти клетки осуществляют лизис омертвевших тканей, превращают их в гнойный экссудат, очищающий поврежденный участок от нежизнеспособных тканей и бактерий (Пальцев М.А., Аничков Н.М., 2001; Faurschou M., Borregaard N., 2003; Alptekin N.O. et al., 2005). Вместе с тем, есть данные, указывающие на способность активированных нейтрофилов вызывать повреждение тканей и оказывать отрицательное влияние на развитие патологических процессов (Kassirer M. et al., 1999; Tralau T. et al., 2004). Особое место среди воспалительных заболеваний занимает острая одонтогенная инфекция. Эта патология развивается преимущественно у лиц молодого и среднего возраста, что придает проблеме не только медицинское, но и социальное значение. В последнее время наблюдается тенденция к более тяжелому течению воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области с развитием опасных гнойных осложнений (Бажанов Н.Н., Козлов В.А., 1998; Гречишников В.В., 2002; Huang C.H., Brunsvold M.A., 2006). Одним из объяснений неблагоприятного течения одонтогенной инфекции является несостоятельность иммунных реакций организма, в частности, нарушение фагоцитарной функции лейкоцитов (Александров В. Н., Кураскуа А. А., 2000; Бажанов Н.Н., и др. 2001; Jevnikar N., et al., 2001; Майбородин И.В., Любарский М.С., Лойко Е.Р., 2002). Однако четких морфологических признаков, определяющих функциональное состояние клеточной популяции нейтрофилов у больных с острым одонтогенным периоститом до настоящего времени не существует. Функциональные возможности нейтрофилов зависят от состояния антибактериальных систем, компоненты которых (миелопероксидаза, нафтол-AS-D-хлорацетат эстераза, щелочная фосфатаза, НАДФН-оксидаза, неферментные катионные белки) содержатся в цитоплазматической 4 зернистости (Bainton D.F., 1999; Borregaard N., 2001; Alptekin N.O., et al., 2005). Для лейкоцитов оценки функциональных представление о возможностей внутриклеточном нейтрофильных распределении антибактериальных компонентов должно иметь количественное выражение, основанное на определении геометрических и оптических параметров гранул и интергранулярной цитоплазмы (Славинский А.А., 2002). Визуальная оценка клеток в микроскопических препаратах не может привести к адекватному решению такой задачи. Световой микроскоп не позволяет точно подсчитать количество гранул в клетке, измерить отдельные внутриклеточные структуры. Применение телевизионного компьютерного анализа клеточного изображения расширяет возможности светового микроскопа. Переход от визуального наблюдения к измерению характеристик объекта по его изображению позволяет получить принципиально новые данные о клетке (Левин Г.Г., Козинец Г.И., 1997; Славинский А.А., 2002). При развитии одонтогенной инфекции клинические признаки не всегда адекватно отображают глубину воспалительного процесса (Майбородин И.В., Любарский М.С., Лойко Е.Р., 2002; Radics T. et al., 2003; Huang C.H., Brunsvold M.A., 2006). Вот почему актуально количественное цитохимическое исследование нейтрофилов крови и микрофагов экссудата у больных с различной тяжестью течения острого одонтогенного периостита. Выявление закономерностей распределения антибактериальных систем особенностей будет нейтрофильных в цитоплазме способствовать лейкоцитов, компонентов установлению которые обусловлены тех их функционированием в очаге воспаления периоста челюсти. Цель исследования. Выявить характерные для острого одонтогенного периостита различной степени тяжести структурно-цитохимические и цитофизиологические признаки функциональной активности нейтрофильных лейкоцитов крови и микрофагов очага воспаления на основе телевизионного компьютерного анализа клеточного изображения. 5 Задачи исследования: 1. Определить в цифровом изображении нейтрофильных лейкоцитов изменение структурно-цитохимических показателей активности НАДФН-оксидазы и щелочной фосфатазы для выявления уровня активации клеточной популяции при различной тяжести течения острого одонтогенного периостита. 2. Охарактеризовать распределение миелопероксидазы и нафтол-AS-Dхлорацетат эстеразы в цитоплазме нейтрофильных лейкоцитов больных с острым периоститом челюсти. Найти зависимость между внутриклеточным содержанием цитохимических маркеров азурофильной зернистости и функциональной активностью нейтрофилов. 3. Оценить фагоцитарные возможности циркулирующих нейтрофильных лейкоцитов при легком и тяжелом течении острого одонтогенного периостита. 4. Выявить с помощью компьютерного анализа изображения клеток структурные, цитохимические и функциональные различия между нейтрофилами микроциркуляторного русла и очага острого воспаления периоста челюсти. 5. Определить структурные параметры содержания и распределения цитохимических маркеров антибактериальных систем в цитоплазме микрофагов воспалительного очага при легком и тяжелом течении острого одонтогенного периостита. 6. Оценить возможности компьютерного анализа изображения нейтрофильных лейкоцитов в диагностике и прогнозировании течения острого одонтогенного периостита. Научная новизна работы. 1. Установлены новые количественные показатели активации циркулирующих нейтрофильных лейкоцитов, связанные с изменениями геометрических и оптических параметров гранул НАДФН-оксидазы и щелочной фосфатазы. Выявлен высокий уровень активации нейтрофилов при тяжелом течении острого одонтогенного периостита. 6 2. Получены новые данные о снижении активности миелопероксидазы и нафтол-AS-D-хлорацетат эстеразы в цитоплазме нейтрофильных лейкоцитов периферической крови. Эти изменения при тяжелом течении острого одонтогенного периостита указывают на дегрануляцию азурофильной зернистости активированных нейтрофилов в кровеносном русле до выхода в очаг воспаления. 3. Получены новые сведения о содержании катионных белков в цитоплазме нейтрофильных лейкоцитов периферической крови и очага воспаления, свидетельствующие о том, что при остром одонтогенном периостите циркулирующие потенциал бактерицидных активированные катионных нейтрофилы белков и сохраняют реализуют его непосредственно в воспалительном очаге. особенности содержания цитохимических маркеров антибактериальных систем в нейтрофилах 4. Выявлены неизвестные ранее локальной крови очага воспаления при легком течении одонтогенного периостита, указывающие на способность выходить из кровеносного русла в ткани популяции клеток с наибольшей функционально-метаболической активностью и высоким антибактериальным потенциалом. 5. Разработан новый способ диагностики тяжести течения острого одонтогенного периостита, основанный на оценке цифрового изображения нейтрофильных лейкоцитов. Научно-практическая значимость работы. Новые данные о функционально-метаболических изменениях нейтрофильных лейкоцитов при остром периостите челюсти углубляют представления о роли этих клеток в патогенезе одонтогенной инфекции. Эти сведения могут применяться в дальнейшей научно-исследовательской работе и в учебном процессе со студентами медицинских и биологических специальностей. Выявленные изменения активности ферментов в цитоплазме нейтрофилов у больных острым одонтогенным периоститом могут быть 7 использованы в клинической лабораторной диагностике для получения объективной информации о степени тяжести заболевания, для оценки прогноза и эффективности проводимого лечения. Апробация работы. По материалам исследований опубликовано 10 печатных работ. Основные положения диссертации представлены на научно-практической конференции Саратовского государственного медицинского университета (Саратов, 2003); 58-ой межвузовской научной конференции молодых ученых (Екатеринбург, 2003); II Общероссийской Конференции амбулаторных хирургов стоматологов (Краснодар, 2002); научной конференции ученых юга России (Ставрополь, иммунореабилитации 2006); Международном VII (Нью-Йорк, США, 2001); IX конгрессе по Международном конгрессе по иммунореабилитации (Дагомыс, 2003). Внедрение результатов исследования. Способ определения цитохимических признаков активации нейтрофильных лейкоцитов периферической крови при различной степени тяжести острого одонтогенного периостита используется в работе кафедры профилактики и пропедевтики стоматологических заболеваний Кубанского государственного медицинского университета и в практике Ростовской областной стоматологической поликлиники. Предложение об использовании цитохимических критериев для прогнозирования исхода острого одонтогенного периостита внедрено в учебный процесс кафедры челюстнолицевой хирургии и хирургической государственной медицинской активированных нейтрофильных стоматологии академии. Данные лейкоцитов в Ставропольской об патогенезе участии острого одонтогенного периостита применяются в работе кафедры стоматологии ФПК и ППС Кубанского государственного медицинского университета. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 146 машинописных страницах, содержит 10 таблиц, 14 рисунков (гистограммы, 8 микрофотографии, компьютерные изображения нейтрофильных лейкоцитов). Работа состоит из введения, 5 глав, выводов, указателя использованной литературы и приложения. Библиография включает 268 источников, из них 112 на русском языке и 156 на иностранных языках. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Объект исследования венозная кровь, кровь из десневого сосочка и экссудат воспалительного очага 54 больных с острым одонтогенным периоститом. По распространенности и глубине воспалительного процесса, выраженности клинической картины больные были распределены на 2 группы: 26 пациентов с легким и 28 – с тяжелым течением заболевания. Кровь из подкожных вен руки и из десневого сосочка брали в 1-й день обращения больного, до лечения. Материал из очага воспаления получали при оперативном лечении. В контрольной группе из 25 здоровых мужчин и женщин от 21 до 63 лет исследовали венозную кровь и кровь из микроциркуляторного русла десневого сосочка. Гистологическое исследование операционного материала выявило отек, утолщение, разволокнение надкостницы с частичным отслоением от кости, полнокровие сосудов и участки кровоизлияний. Ткани инфильтрированы лейкоцитами. Между костью и надкостницей серозно-гнойный экссудат, содержащий большое количество нейтрофильных лейкоцитов. У всех здоровых лиц и пациентов с острым одонтогенным периоститом проводили тестирование фагоцитарной функции циркулирующих нейтрофильных лейкоцитов, определяли активность НАДФН-оксидазы с помощью НСТ-теста в модификации И.В. Нестеровой (1980). В нейтрофилах всех указанных объектов выявляли активность миелопероксидазы бензидиновым методом (Sato A., 1928), щелочной фосфатазы реакцией азосочетания (Шубич М.Г., 1965). Выявление активности нафтол-AS-Dхлорацетат эстеразы проводили по методу А.А.Славинского и Г.В. Никитиной (2000). Цитохимическое определение катионных белков 9 осуществляли методом с амидо черным 10Б (Славинский А.А., Никитина Г.В., 1999). Компьютерный анализ изображения нейтрофилов проводили при помощи цветной исследований телевизионной "MagiScop". Для системы для компьютерного микроскопических анализа изображения применяли пакеты прикладных программ "Magisoft" и "Видеотест". Анализ изображения нейтрофильных лейкоцитов производили с использованием следующего алгоритма. 1. Изображение, сформированное иммерсионной системой микроскопа (рис. 1 А), вводили через телекамеру в видеопамять компьютера. 2. С помощью программной линейной аппроксимации увеличивали изображение клетки (рис. 1 Б), что позволило вывести внутриклеточные структуры из области шумов и сделать их доступными для измерений. 3. Делали медианную фильтрацию для равномерной очистки изображения от высокочастотных шумов. 4. В цветовом координатном пространстве LSH выполняли контрастирование изображения по гистограмме яркости. Применяли фильтр, усиливающий резкость. 5. Производили бинаризацию изображения по яркости или цвету цитохимической реакции. Последовательно выделяли клетку в целом, гранулы вещества (рис. 1 В), зону его диффузно-гранулярного распределения (рис. 1 Г). В автоматическом режиме измеряли параметры бинарных изображений. Цифровые данные обрабатывали в компьютере при помощи программы "Microsoft Excel", делали статистическую и графическую обработку результатов. Для оценки результатов компьютерного анализа изображения использованы три вычисляемых показателя (Славинский А.А., 2000). Интегральный цитохимический показатель (ИЦП) произведение суммарной площади продукта цитохимической реакции в клетке и его оптической плотности, характеризует общую активность фермента или 10 общее содержание вещества в клетке. Показатель заполнения клетки процентная доля суммарной площади измеряемых структур в площади всего нейтрофила. Показат ель конгломерации гранул – отношение площади самой крупной гранулы в клетке к средней площади гранул. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 11 СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЦИРКУЛИРУЮЩИХ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ Тестиро вание фагоцитарной функции циркулирующих нейтрофильных лейкоцитов показало (рис. 2), что при легком течении острого одонтогенного периостита число активных фагоцитов, их способность поглощать и убивать микроорганизмы не имеют существенных отличий от показателей лиц контрольной группы. У больных с тяжелым течением заболевания по сравнению со здоровыми лицами число активных фагоцитов крови 12 уменьшено в 1,5 раза. Поглотительная способность нейтрофилов возрастает в 3,3 раза, однако способность к умерщвлению бактерий снижена в 1,7 раза. Компьюте рный анализ клеточного изображения. Согласно интегральному цитохимическому показателю (рис.3) у пациентов с легким течением острого одонтогенного периостита в циркулирующих нейтрофилах активность НАДФН-оксидазы повышена в 1,4 раза, активность щелочной фосфатазы - в 2,6 раза. Активность миелопероксидазы и нафтол-AS-D-хлорацетат эстеразы, напротив, снижена соответственно в 1,3 раза и 1,5 раза. 13 При тяжелом течении заболевания в циркулирующих нейтрофилах активность НАДФН-оксидазы повышается в 2,3 раза, активность щелочной фосфатазы возрастает в 4,8 раза (p<0,001). Активность миелопероксидазы в нейтрофилах больных с тяжелым течением острого одонтогенного периостита по сравнению с нейтрофилами здоровых людей снижается в 1,9 раза, в 4 раза падает активность нафтол-AS-D-хлорацетат эстеразы (р<0,001). При распределении антибактериальных показателей площади в систем цитоплазме наблюдается нейтрофилов выраженная компонентов вариабельность диффузно-гранулярной зоны. При легком течении периостита показатели заполнения клетки миелопероксидазой и нафтол-ASD-хлорацетат эстеразой не имеют статистически значимых отличий от показателей контрольной группы (p>0,05). В 2,5 раза повышается заполнение нейтрофила щелочной фосфатазой, в 3,5 раза возрастает доля в клетке НАДФН-оксидазы (р<0,001). У больных с тяжелым течением заболевания выражено уменьшается заполнение циркулирующих нейтрофилов миелопероксидазой и нафтол-AS-D-хлорацетат эстеразой – в 2,3 раза, в 2,7 раза соответственно (р<0,001). Значительно возрастает доля в клетке щелочной фосфатазы (в 3,5 раза) и НАДФН-оксидазы (в 4 раза) (р<0,001). В циркулирующих нейтрофилах больных с легким течением заболевания по сравнению со здоровыми лицами число гранул ферментных компонентов зернистости изменяется менее чем в 2 раза. При тяжелом течении острого одонтогенного периостита в клетках крови значительно (в 3,4 раза) увеличивается число гранул НАДФН-оксидазы, в 3,8 раза больше становиться гранул щелочной фосфатазы (р<0,001). Количество гранул миелопероксидазы уменьшается в 1,4 раза, в 2,7 раза становится меньше гранул нафтол-AS-Dхлорацетат эстеразы (р<0,001). Показатели содержания и распределения катионных белков в нейтрофилах венозной крови больных с различной тяжестью течения заболевания не имеет существенных отличий от параметров лиц контрольной группы (p>0,05). 14 Таким образом, в нейтрофилах крови пациентов с острым одонтогенным периоститом компьютерный анализ клеточного изображения выявил следующие цитохимические изменения. При легком течении заболевания повышение активности в 2,6 раза проявляет щелочная фосфатаза. Активность НАДФН-оксидазы, миелопероксидазы, нафтол-AS-D-хлорацетат эстеразы по сравнению со здоровыми лицами изменяется незначительно, что позволяет говорить об умеренной активации клеток. У больных с тяжелым течением в циркулирующих нейтрофилах резко повышается активность щелочной фосфатазы и НАДФН-оксидазы; снижается активность миелопероксидазы и нафтол-AS-D-хлорацетат эстеразы. Одновременно с уменьшением или увеличением активности фермента наблюдается соответствующее изменение количества его гранул и площади диффузно-гранулярного распределения в цитоплазме. НАДФН-оксидаза и щелочная фосфатаза маркерные ферменты активации нейтрофильных лейкоцитов. Высокие показатели активности НАДФН-оксидазы и щелочной фосфатазы у пациентов с тяжелым течением острого одонтогенного периостита Уменьшение свидетельствуют в о гиперактивации циркулирующих циркулирующих нейтрофилах количества клеток. гранул миелопероксидазы и нафтол-AS-D-хлорацетат эстеразы при одновременном снижении показателя заполнения клетки этими ферментами можно трактовать как признак дегрануляции азурофильных гранул с потерей части антибактериальных компонентов в системном кровотоке. Снижение антибактериального потенциала азурофильной зернистости может быть одной из причин угнетения фагоцитарной активности нейтрофилов еще до выхода в очаг воспаления. Довольно стабильное в нейтрофилах крови больных содержание катионных белков, по-видимому, связано с их двойственным положением в азурофильной и специфической зернистости, а также с принадлежностью к кислороднезависимой антибактериальной системе, которая не участвует в респираторном взрыве и менее чувствительна к активации клеток. 15 СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ НЕЙТРОФИЛОВ КРОВИ И ОЧАГА ВОСПАЛЕНИЯ Нейтрофильные лейкоциты десневого сосочка. По данным компьютерного анализа клеточного изображения, при легком течении острого одонтогенного периостита в нейтрофилах локальной крови имеет место увеличение количества гранул всех исследуемых веществ (рис. 4): гранул миелопероксидазы становиться больше в 1,5 раза; гранул нафтол-AS-Dхлорацетат эстеразы – в 2,5 раза (р<0,001); число гранул катионных белков возрастает в 1,8 раза, гранул щелочной фосфатазы – в 1,4 раза (р<0,01). Известно, что формирование гранул и синтез их компонентов в основном происходит на стадиях развития нейтрофилов в костном мозге, а зрелые нейтрофильные лейкоциты обладают низким уровнем биосинтетической активности (Sengelov H., Borregaard N., 1999; Bainton D.F., 1999; Воробьев А.И., 2002). Можно предположить, что при отсутствии выраженной внутрисосудистой активации в ткани мигрирует популяция нейтрофильных лейкоцитов, обладающих наиболее высоким внутриклеточным антибактериальным потенциалом. У больных с тяжелым течением острого одонтогенного периостита нейтрофилы микроциркуляторного русла очага воспаления находятся в состоянии активации со сниженным уровнем функционального резерва. При этом выраженное повышение активности в нейтрофилах локальной крови проявляет щелочная фосфатаза: в 2 раза увеличивается количество гранул и площадь этого фермента в цитоплазме, в 1,6 раза возрастает способность гранул к конгломерации (р<0,001). Количество и доля в клетке гранул миелопероксидазы, напротив, уменьшается более чем в 2 раза, при этом активность фермента снижается в 1,7 раза (р<0,001). В 2 раза уменьшается площадь, занимаемая гранулами катионных белков, в 2,2 снижается их способность (р<0,001). к конгломерации 16 Нейтрофилы (микрофаги) экссудата очага воспаления. У больных с легким течением одонтогенного периостита значения интегрального цитохимического показателя миелопероксидазы и катионных белков в микрофагах в 1,2 раза выше, чем в нейтрофилах десневого сосочка. Активность нафтол-AS-D-хлорацетат эстеразы возрастает в 1,5 раза (p<0,01). Активность щелочной фосфатазы в микрофагах экссудата в сравнении с нейтрофилами десневого сосочка при легком течении периостита изменяется незначительно. При тяжелом течении заболевания миелопероксидаза, нафтолAS-D-хлорацетат эстераза и катионные белки имеют достаточно низкие 17 значения интегрального цитохимического показателя как в нейтрофилах микроциркуляторного русла так и в микрофагах воспалительного очага. В микрофагах экссудата больных с легким течением периостита по сравнению с нейтрофилами десневого сосочка количество гранул катионных белков уменьшается в 1,3 раза, занимаемая ими площадь в 1,4 раза, гранул миелопероксидазы становится меньше в 1,5 раза (p<0,01). Количество суммарная площадь гранул щелочной фосфатазы и нафтол-AS-D-хлорацетат эстеразы в микрофагах экссудата при легком течении периостита соответствует показателям нейтрофилов микроциркуляторного русла. При тяжелом течении заболевания в микрофагах экссудата воспалительного очага гранул катионных белков в 1,5 больше, чем в нейтрофилах десневого сосочка, занимаемая ими площадь в клетке также возрастает в 1,5 раза (p<0,001). В 1,3 раза в микрофагах увеличивается число гранул нафтол-AS-D-хлорацетат эстеразы (p<0,01). Количество гранул миелопероксидазы и заполнение ими цитоплазмы в микрофагах экссудата при тяжелом течении периостита сохраняется на уровне показателей нейтрофилов десневого сосочка. Число гранул щелочной фосфатазы уменьшается в 1,9 раза, однако показатель заполнения микрофагов этим ферментом в 3,9 раза выше, чем в нейтрофилах локальной крови (p<0,001). При сравнении цитохимического профиля микрофагов экссудата воспалительного очага выявлено, что при тяжелом течении острого одонтогенного периостита, по сравнению с легким, в клетках в 1,7 раза снижено содержание неферментных катионных белков. Также, в 1,7 раза, падает активность миелопероксидазы, при этом количество гранул фермента уменьшено в 2,3 раза. Активность нафтол-AS-D-хлорацетат эстеразы снижена в 2 раза, с уменьшением количества гранул в 1,6 раза. Активность щелочной фосфатазы в нейтрофилах экссудата при тяжелом течении периостита, напротив выше в 1,7 раза, количество гранул содержащих этот фермент уменьшено в 1,3 раза, но в 2 раза повышена их конгломерация. 18 Перераспределение в микрофагах гнойного экссудата щелочной фосфатазы видимо обусловлено мобилизацией этого фермента из секреторных пузырьков и транслокацией к плазматической мембране в процессе активации. Миелопероксидаза и нафтол-AS-D-хлорацетат эстераза компоненты азурофильных гранул, а катионные белки содержатся и в азурофильной, и в специфической зернистости нейтрофилов (Bainton D.F., 1999; Faurschou M., Borregaard N., 2003). Уменьшение содержания этих веществ в микрофагах экссудата при тяжелом течении периостита можно рассматривать как признак дегрануляции цитоплазматической зернистости при непосредственном взаимодействии с микроорганизмами в очаге гнойного воспаления. ВЫВОДЫ 1. Активация нейтрофильных лейкоцитов крови при остром одонтогенном периостите проявляется увеличением числа гранул и площади диффузно-гранулярного распределения в цитоплазме НАДФН-оксидазы и щелочной фосфатазы. У больных с тяжелым течением заболевания циркулирующие нейтрофилы периферической крови находятся в состоянии гиперактивации: активность НАДФН-оксидазы возрастает в 2,3 раза, а щелочной фосфатазы в 4,8 раза. 2. Активированные нейтрофилы периферической крови при легком течении острого одонтогенного периостита сохраняют высокий уровень антибактериального потенциала азурофильных гранул. Гиперактивация нейтрофилов при тяжелом течении заболевания приводит к уменьшению активности миелопероксидазы в 2 раза, а нафтол-AS-D-хлорацетат эстеразы в 4 раза с соответствующим уменьшением числа гранул этих ферментов в цитоплазме, что указывает на дегрануляцию азурофильной зернистости нейтрофилов в системном кровотоке до выхода в очаг воспаления. 3. Циркулирующие нейтрофильные лейкоциты венозной крови больных с легким течением острого одонтогенного периостита обладают способностью к полноценному завершенному фагоцитозу микроорганизмов. Тяжелое 19 течение заболевания характеризуется депрессией фагоцитарной функции нейтрофилов крови еще до выхода в очаг воспаления: количество захваченных in vitro бактерий увеличивается, однако способность к их умерщвлению снижается, что приводит к накоплению внутри фагоцитов жизнеспособных микробных клеток. 4. В микрофагах воспалительного экссудата при легком течении острого одонтогенного периостита показатели активности миелопероксидазы, нафтол-AS-D-хлорацетат эстеразы и содержания катионных белков выше, чем в нейтрофилах локальной крови десневого сосочка, что указывает на выход из микроциркуляторного русла в очаг воспаления клеточной популяции с наибольшей функционально-метаболической активностью. При тяжелом течении заболевания показатели антибактериального потенциала нейтрофилов локальной крови резко снижаются, свидетельствуя об истощении функциональных возможностей клеток еще до встречи с микроорганизмами. 5. У больных с тяжелым течением острого одонтогенного периостита в нейтрофилах экссудата резкое снижение активности миелопероксидазы, нафтол-AS-D-хлорацетат эстеразы и содержания катионных белков сопровождается уменьшением количества их гранул и площади диффузногранулярного распределения в цитоплазме. Эти изменения указывают на угнетение функциональных возможностей микрофагов очага воспаления со снижением их способствовать способности к инактивации прогрессированию гнойного бактерий, процесса что и может развитию осложнений. 6. Количественные параметры распределения в цитоплазме цитохимических маркеров антибактериальных систем, определяемые в процессе компьютерного анализа клеточного изображения, можно рассматривать как морфологический эквивалент степени тяжести течения острого одонтогенного периостита. 20 РАБОТЫ, ОПУБЛИКОВАННЫЕ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Бондаренко Н.А. Клинико-лабораторное исследование показателей цитохимических маркеров нейтрофилов периферической крови и динамики течения одонтогенного периостита. // Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения. Екатеринбург, 2003. С. 221-222. 2. Бондаренко Н.А. Некоторые показатели цитохимических маркеров нейтрофильных лейкоцитов у больных периоститом челюсти. // Научнопрактическая конференция Саратовского государственного медицинского университета “Молодые ученые – здравоохранению региона”. Саратов, 2003. С. 183-184. 3. Бондаренко Н.А. Динамика изменения нейтрофильных лейкоцитов у больных острым гнойным периоститом. // Новое в теории и практике стоматологии. Сборник научных работ. Ставрополь, 2003. С. 307-309. 4. Бондаренко Н.А., Авагимов А.Г., Напольников Л.В., Славинский А.А., Ермошенко Р.Б. Миелопероксидаза нейтрофилов крови при острых воспалительных заболеваниях челюстно-лицевой области. Компьютерный анализ клеточного изображения. // Актуальные вопросы амбулаторной хирургической стоматологии. – Москва-Краснодар, 2002. С. 21-24. 5. Бондаренко Н.А., Ермошенко Р.Б., Напольников Л.В., Славинский А.А. Цитоплазматическая зернистость нейтрофилов крови при воспалительных процессах челюстно-лицевой области. Компьютерный анализ клеточного изображения. // Сборник научных трудов по медицине, выпуск 1 Тула, 2002 С. 18-21. 6. Бондаренко Н.А., Славинский А.А. Цитохимические маркеры азурофильной зернистости нейтрофилов крови у больных гнойным периоститом. // International Journal on immunorehabilitation. Дагомыс, 2003. Том 5. №1. С. 63 7. Бондаренко Н.А., Славинский А.А., Бондаренко А.Н., Авагимов А.Г., Ермошенко Р.Б., Славинский И.А., Напольников Л.В. Цитохимические маркеры азурофильной зернистости нейтрофилов крови у больных с воспалительными процессами околозубных тканей // Кубанский научный медицинский вестник № 4 (61) Краснодар, 2002. С. 3234. 8. Бондаренко Н.А., Славинский А.А., Бондаренко М.А. Прогнозирование течения острого одонтогенного периостита на основе компьютерного анализа антибактериальных систем нейтрофильных лейкоцитов. // Организация управления, экономика и бухгалтерский учет в стоматологии. Актуальные вопросы современной стоматологии. Москва-Краснодар, 2005. С.165169. 9. Бондаренко Н.А., Славинский А.А., Напольников Л.В., Аксенова Т.В., Кульченко М.И. Компьютерная морфометрия маркеров азурофильной зернистости нейтрофилов крови у пациентов с острым апикальным периодонтитом. // Современная стоматология. Международный научно-практический информационно-аналитический журнал. 2005. № 2(31). С.6567. 21 10. Бондаренко Н.А., Славинский И.А., Бондаренко А.Н., Ермошенко Р.Б., Бондаренко М.А. Новые подходы к получению цитологического материала и анализу состояния антибактериальных систем нейтрофильных лейкоцитов из очага воспаления при пародонтите. // Новое в теории и практике стоматологии. Ставрополь, 2006. С. 2932.
