Методическое пособие по криптоспоридиозу.

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ
УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ
“МОСКОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ
МЕДИЦИНЫ И БИОТЕХНОЛОГИИ
ИМЕНИ К. И. СКРЯБИНА”
М.Ш. АКБАЕВ, Н.В. ЕСАУЛОВА, О.Е. ДАВЫДОВА,
С.А. ШЕМЯКОВА, Д.Н. ШЕМЯКОВ
ДИАГНОСТИКА КРИПТОСПОРИДИОЗА ТЕЛЯТ
Методические рекомендации
Москва - 2004
УДК: 619:616.993.192
М.Ш. АКБАЕВ, Н.В. ЕСАУЛОВА, О.Е. ДАВЫДОВА, С.А. ШЕМЯКОВА,
Д.Н. ШЕМЯКОВ. Диагностика криптоспоридиоза телят: Методические
рекомендации. М.: ФГОУВПО «МГАВМиБ им. К.И. Скрябина», 2004. 14 с.
Описаны методы диагностики криптоспоридиоза телят с учетом
эпизоотологии, симптомов болезни и современных лабораторных методов
исследований.
Предназначена для студентов факультета ветеринарной медицины,
ветеринарно-биологического факультета и специалистов ветеринарного профиля.
Рецензент: и.о. зав. кафедрой клинической диагностики и болезней
молодняка профессор В.А. Есепенок
Утверждена на заседании учебно-методической комиссии ФВМ ФГОУВПО
«МГАВМиБ им. К.И. Скрябина» от 19 октября 2004 г., протокол № 2.
2
ВВЕДЕНИЕ
Криптоспоридиоз – остро или подостро протекающее заболевание
молодняка животных, вызываемое простейшими из рода Cryptosporidium,
семейства Cryptosporidiidae, отряда Coccidiida, класса Coccidea, типа Sporozoa (6).
Криптоспоридии выявлены у различных видов млекопитающих, птиц,
рептилий, рыб, а также у человека. Криптоспоридиоз относится к категории
зоонозов. У млекопитающих, включая человека, криптоспоридии локализуются
обычно в кишечнике, но известны случаи и внекишечной локализации. Так, у
поросят криптоспоридий находили в конъюнктиве глаз, в трахее, у обезьянрезусов и жеребят – в протоках поджелудочной железы (4).
У млекопитающих криптоспоридиоз вызывают два вида – C. parvum и
C.muris (4). Криптоспоридии не имеют узкой видовой специфичности в
отношении хозяев. Ооцистами от телят успешно заражали ягнят, козлят, крыс,
мышей в возрасте от 3 до 5 дней (Heine, Boch, 1981). Криптоспоридиоз был
диагностирован у 12 людей, имевших прямой контакт с телятами в период
вспышки у них криптоспоридиоза (болезнь проявлялась диареей и спазмами в
области живота) (Reese, 1982).
В природе источниками инвазии являются дикие и синантропные грызуны,
кошки, собаки, птицы, у которых криптоспоридиоз протекает без выраженных
симптомов болезни (14). У телят криптоспоридиоз характеризуется поражением
желудочно-кишечного тракта, клинические признаки болезни регистрируют
преимущественно в возрасте 2-20 дней. Необходимым условием развития
тяжелых форм криптоспоридиоза является сдвиг иммунологических показателей.
Криптоспоридиоз также отмечается в качестве оппортунистического заболевания,
значительно осложняющего течение основных – вирусных и бактериальных
инфекций.
В настоящее время разработаны методы диагностики криптоспоридиоза
животных, однако нет литературы, которая обобщала бы эти данные и
рекомендовала ветеринарным врачам наиболее доступные и эффективные методы
лабораторной диагностики.
3
Биология развития возбудителя
Паразитирующий в кишечнике млекопитающих
Cryptosporidium parvum
является гомоксенным паразитом (развивается без смены хозяев).
Во внешнюю среду из кишечника больных животных возбудитель
выделяется в виде инвазионной ооцисты, по строению напоминающей ооцисту
широко
известного
паразитического
простейшего
–
эймерии.
Ооциста
криптоспоридиума отличается от нее значительно более мелкими размерами (в
среднем – 4-5 мкм), и свободно лежащими внутри нее, не заключенными в
спороцисту, 4-мя спорозоитами. Ооцисты криптоспоридиумов обычно округлой
формы, имеют остаточное тело.
Инвазионные ооцисты, выделяемые больным животным или носителем,
попадают в организм здорового животного алиментарным путем. В тонком отделе
кишечника их оболочка разрушается, освобождая 4 червеобразных спорозоита,
которые внедряются в зону между ворсинками эпителиальных клеток. В
цитоплазму клеток они не проникают, дальнейшее развитие происходит
на
поверхности щеточной каймы эпителиальных клеток (в зоне микроворсинок) (4).
Образуется так называемая паразитофорная вакуоль: криптоспоридии находятся в
контакте с клетками, у основания микроворсинок; микроворсинки над ними
соединяются, «склеиваются», их мембраны сливаются, ограничивая паразита от
просвета кишечника. Соседние ворсинки уплощаются, атрофируются. Со стороны
цитоплазмы
пораженной
клетки
формируется
складчатое
образование
–
питающая органелла.
Паразитофорные вакуоли образуются уже через 24 ч после заражения.
Внутри них происходит бесполое размножение возбудителя – шизогония
(множественное
деление)
трофозоитов
(образованых
из
округлившихся
спорозоитов, приступивших к питанию). Шизогония происходит в течение 72 ч,
генерируются многочисленные шизонты, оседающие на щеточной кайме других
клеток. После образования 2-й генерации шизонтов наступает гаметогония –
половой
процесс.
Образуются
мужские
половые
клетки
(микрогаметы),
сливающиеся с женскими (макрогаметами) в области щеточной каймы.
4
Образуется зигота, которая выпадает в просвет кишечника, покрывается
оболочкой, становясь собственно ооцистой. Ооциста спорулирует (внутри нее
формируются 4 спорозоита) и выводится уже инвазионной во внешнюю среду.
Около 80% ооцист выделяются из кишечника с фекалиями и имеют толстую
оболочку. Остальные
20% ооцист
имеют тонкую оболочку и остаются в
кишечнике, обуславливая аутоинвазию и подострое течение болезни (12).
Препатентный
период
возбудителя
(время,
проходящее
с
момента
заражения до выделения первых ооцист) у телят составляет 3-7 сут, патентный
(массового выделения ооцист) – 8-12 дней. В течение болезни на протяжении
тонкого кишечника (особенно в области тощей и подвздошной кишки)
образуются обширные участки атрофии и десквамации эпителия.
Эпизоотология
Особенно часто криптоспоридиоз как ведущий фактор диареи отмечается у
телят в возрасте 6-20 дней (1). Также указывается возраст 2-30 дней (14); 9-20
дней (2); 6-12 дней (10); 7-11 дней (8); 8-14 дней (Anderson, 1981). Однако все
авторы отмечают, что по достижению телятами возраста 30 дней, случаи
криптоспоридиоза становятся спорадическими.
Болезнь
развивается
чаще
всего
у
ослабленных
животных
с
иммунодефицитом, а также на фермах, неблагополучных по стрептококкозам,
эшерихиозу, вирусным инфекциям (3; 11) . Экстенсивность инвазии (ЭИ) телят
может достигать 6-68%, летальность – 17-50% (1; 7).
Болезнь проявляется во все сезоны года. J. Fiedler (1985) наблюдал
максимальное число случаев в зимнее-весенний период, минимальное – в августе.
А.В Лабинов и В.Ф. Никитин (2001) (7) приводят другие данные для хозяйств
Московской области: апрель, май и август – 66%; сентябрь – 86% (при
содержании в помещении; при содержании в летнем лагере – 33%). Они
отмечают, что содержание телят летом на открытом воздухе под навесом снижает
ЭИ более чем в 2 раза.
5
Обострение эпизоотической обстановки по криптоспоридиозу в последнее
время связано, вероятно, с вводом технологии содержания, при которой животные
концентрируются на небольшой площади, а животноводческие помещения
эксплуатируются
с
повышенной
нагрузкой
(9).
Способствует
быстрому
распространению болезни в хозяйствах выделение с фекалиями больных телят
уже спорулированных (инвазионных) ооцист, значительная устойчивость их во
внешней среде (сохраняют жизнеспособность до 16 мес при температурных
колебаниях, при дезинфекции обычными средствами), а также высокая
интенсивность выделения (в 1г фекалий больного теленка может содержаться
свыше 1 млн. ооцист) (12).
Заразившиеся
в
первые
дни
жизни
телята
остаются
носителями
криптоспоридий до 8-ми месячного возраста. Источниками инвазии иногда могут
служить взрослые коровы, обслуживающий персонал, кошки, собаки, насекомые
(12).
Источником
заражения
являются
корм,
вода,
инвентарь
и
т.п.,
контаминированные возбудителями.
Для обеззараживания телятников рекомендуется применять 10% раствор
формалина или 5% раствор аммиака, которые вызывают гибель ооцист за 18 ч.
Также необходимо вести борьбу с крысами как с основными переносчиками и
распространителями инвазии на фермах.
Патогенез и клинические признаки
Криптоспоридии локализуются обычно в тонком отделе кишечника, реже –
в слизистой оболочке желудка, казуистично – в трахее, конъюнктиве глаза.
Значительные изменения отмечаются в терминальном отделе подвздошной кишки
и в тощей кишке. Там наблюдается атрофия ворсинок, кратерообразные
вдавления эпителия. Пораженные ворсинки слипаются между собой, теряют
бокаловидные клетки (1; 12). Как следствие этого, происходит нарушение
всасывания. Механическое разрушение ворсинок паразитами ведет к появлению
некрозов. Содержимое кишечника жидкое, с пузырьками газа (13).
6
На
месте
всасывающая
прикрепления
поверхность
паразитов
кишечника
отсутствуют
сильно
микроворсинки,
сокращается,
значительно
уменьшается и его абсорбционная способность, что является основной причиной
диареи. Изменяется активность ферментов, нарушается кишечное пищеварение,
происходит гнилостный распад белка в кишечнике. Развивается интоксикация
организма вторичного характера.
Первые признаки болезни наблюдают с первых дней жизни телят, далее
болезнь прогрессирует, усиливается профузный понос, угнетение, отказ от корма,
слабость. Фекалии животных желтые или бело-серые, водянистые вследствие
нарушения всасывания, с гнилостным запахом – вследствие нарушений
ферментного пищеварения. Часто в них видны прожилки крови и кусочки
слизистой оболочки. При развитии болезни тенезмы могут прекращаться, фекалии
вытекают самопроизвольно. Температура тела в течение болезни обычно не
повышена, а при тяжелом течении – понижена.
В
крови
наблюдается
эозинофилия,
лейкопения,
лимфоцитопения.,
снижение общего сывороточного белка и гамма-глобулинов, глюкозы (1; 2).
Подострое
течение,
обусловленное
аутоинвазией
тонкостенными
ооцистами, остающимися в кишечнике, носит длительный характер со стертыми
клиническими признаками и приводит к задержке роста, недобору привесов и в
конечном счете – к снижению продуктивных и репродуктивных качеств
животных (5).
Патологоанатомические изменения
У больных животных в пораженном кишечнике наблюдается сплошное или
очаговое катаральное воспаление слизистой оболочки, ее набухание и истончение,
гиперемия, отложения фибрина и слизи, десквамация эпителия, кровоизлияния.
На гистологических препаратах, приготовленных из срезов тонкого кишечника
больных телят, можно видеть укорачивание, уплощение ворсинок и атрофию
микроворсинок, у которых отсутствует или сильно редуцирован гликокаликс.
Цитоплазма
энтероцитов
вакуолизирована,
7
наблюдается
интра-
и
экстрацеллюлярный отек, инфильтрация слизистого и подслизистого слоев
кишечной стенки макрофагами и нейтрофилами, диапедезные кровоизлияния из
поврежденных сосудов. Кишечные железы сморщены и заполнены клеточным
детритом (1; 5).
Брыжеечные лимфоузлы увеличены, местами покрасневшие, на разрезе сочные. Наблюдается прямая зависимость выраженности патологоанатомических
изменений от степени поражения клеток криптоспоридиями.
Следует подчеркнуть, что похожие изменения могут быть вызваны и
другими
причинами
поражения
кишечника;
патогенез
собственно
криптоспоридиоза мало изучен (1).
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА КРИПТОСПОРИДИОЗА
Диагноз на криптоспоридиоз устанавливают на основании лабораторных
исследований фекалий (прижизненно) и патологического материала (посмертно) с
учетом эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных.
Для исследования в лабораторию направляют:
свежие пробы фекалий массой около 10 г из прямой кишки, взятые от 10-20
подозреваемых в заболевании животных, пробы исследуют в день отбора;
пробы патматериала от трупов - соскобы и мазки-отпечатки из пораженных
мест кишечника или участки тонкого кишечника, которые необходимо
исследовать не позднее 6 ч после гибели животного.
Исследование фекалий.
Приготовление мазка из свежих фекалий. На обезжиренное предметное
стекло наносят каплю фекалий, разбавляют каплей физиологического раствора,
распределяют тонким слоем (без нажима!). Полученный мазок высушивают при
комнатной температуре.
Применение флотационных методов. Пробу фекалий массой 3 г помещают в
стакан объемом 50 мл, заливают небольшим количеством насыщенного раствора
хлорида натрия (400 г на 1 литр горячей воды, плотность раствора 1,18 г/мл) или
сульфата цинка (400 г на 1 л воды, плотность раствора 1,24 г/мл) или смесью
8
Павласека (хлорид цинка – 220 г, хлорид натрия – 210 г, вода – 800 мл).
Тщательно размешивают палочкой, добавляют раствор до краев стакана,
фильтруют через сито и отстаивают в течение 15-20 мин. Затем металлической
петлей снимают 15-20 капель с поверхностной пленки, переносят на предметное
стекло, делают тонкий мазок и высушивают на воздухе.
Применение центрифугирования в сочетании с флотацией. Пробу фекалий
массой 3 г помещают в стакан емкостью 50 мл, добавляют 15 мл воды,
размешивают,
фильтруют
через
металлическое
сито,
переливают
в
центрифужную пробирку и центрифугируют при 2000-3000 об/мин в течение 1-2
мин.
Надосадочную
флотационных
жидкость
растворов,
сливают,
указанных
к
осадку
выше,
добавляют
перемешивают
один
и
из
снова
центрифугируют при том же режиме. Металлической петлей снимают 15-20
капель с поверхностной пленки, переносят на предметное стекло, делают тонкий
мазок и высушивают на воздухе.
Фиксация мазков. На высушенный мазок наносят несколько капель
этилового (метилового) спирта и фиксируют в течение 10-15 минут до полного
испарения спирта. Затем мазок окрашивают одним из следующих способов.
Окраска мазков по Цилю-Нильсену. Для приготовления карболового
фуксина Циля в ступку вносят фуксин основной – 2г, добавляют 2-3 капли
глицерина, растирают, тщательно перемешивают при постепенном добавлении
спирта этилового 96°- 12 мл, карболовой кислоты
– 5 г и воды
дистиллированной – 100мл. Раствор сливают в склянку с плотной пробкой,
помещают на сутки в термостат при температуре 37°С и фильтруют через
бумажный фильтр.
Зафиксированные мазки окрашивают в течение 20 мин в растворе
карболового фуксина, промывают в проточной воде, слегка высушивают и
наносят на стекло 7-10 % раствор серной кислоты на 30-60 секунд для
обесцвечивания. Затем промывают в проточной воде и докрашивают мазок 5%
раствором малахитового зеленого в течение 1-2 минут.
9
Окраска мазков сафранином по Кюстеру. Готовят отдельно 3% раствор
сафранина и 5,6% раствор КОН в дистиллированной воде. Перед применением
готовят рабочий раствор: берут 5 капель свежеприготовленного раствора
сафранина и смешивают с 1,5 мл раствора КОН.
Фиксированный мазок окрашивают рабочим раствором сафранина в
течение 5 мин, промывают водой, обесцвечивают 0,5% раствором серной кислоты
в течение 15 секунд, промывают водой, докрашивают 5% раствором малахитового
зеленого на 10% этиловом спирте в течение 10-15 секунд, промывают водой,
высушивают на воздухе.
Окраска мазков по Романовскому-Гимзе. Рабочий раствор краски готовят из
расчета 1-3 капли готовой краски на 1 мл воды (рН=7,0-7,2). На один препарат
используют 3-4 мл разведенной краски.
Окрашивают фиксированные мазки в течение 20-30 мин, после чего их
промывают дистиллированной водой и высушивают.
Оценка результатов окраски. Высушенные мазки просматривают под
большим увеличением микроскопа, с использованием иммерсионного объектива.
Результаты окраски:
- по Цилю-Нильсену – кислотоустойчивые ооцисты криптоспоридий округлой
формы , 4-5 мкм, ярко-красного цвета различных оттенков; они хорошо
различимы на общем зеленом фоне мазка.
- по Кюстеру – ооцисты окрашиваются в бледно-розовый цвет.
-
по
Романовскому-Гимзе
–
округлые
ооцисты
не
окрашиваются
или
окрашиваются слабо, внутри них по периферии заметны спорозоиты удлиненной
формы, слегка изогнутые, бледно-голубого цвета с красной гранулой.
Оценка интенсивности инвазии в среднем по 10 полям зрения микроскопа:
+ - низкая (1-3 ооцисты);
++ - средняя (до 25 ооцист);
+++ - высокая (более 25 ооцист).
Исследование нативных препаратов фекалий. Применяется метод И.
Павласека (1990) с применением глицерина (1). В каплю фекалий добавляют
10
несколько капель глицерина, при этом ооцисты криптоспоридий приобретают
слегка розоватый цвет и становятся хорошо различимы. В ооцистах четко
выявляются спорозоиты. Другие простейшие и частицы не обладают свойством
менять свой цвет под влиянием глицерина. Следует отметить, что такая окраска
ооцист криптоспоридий может исчезнуть через 30-40 мин после приготовления
нативного препарата. В связи с этим, необходимо исследовать только
свежеприготовленные препараты. Исследование проводят под увеличением
микроскопа 40х10.
Количественный метод диагностики криптоспоридиоза (13). Методика
основана на способности эфира, будучи добавленным во взвесь фекалий,
просветлять ее, захватывая частицы детрита и жира, поднимать их на поверхность
при центрифугировании. К пробе фекалий (1 мл) добавляют 5 мл 2% раствора
кальцинированной соды и тщательно перемешивают, затем смесь фильтруют
через металлическое сито в центрифужную пробирку, добавляют воду, доводя
объем взвеси до 10 мл. Взвесь центрифугируют в течение 3 мин при 2500-3000
об/мин. Надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 6-7 мл 2%
раствора кальцинированной соды и 1,5-2 мл этилового эфира. Пробирку
закрывают пробкой, осторожно перемешивают и центрифугируют 10 мин при
250-500
об/мин.
После
центрифугирования
образовавшуюся
в
пробирке
надосадочную жидкость отсасывают пипеткой до метки 1 мл. Осадок тщательно
перемешивают и пипеткой из гемометра Сали быстро набирают 0,01 мл взвеси,
выдувают на предметное стекло и готовят мазок. Полученный мазок высушивают,
фиксируют и окрашивают по Цилю-Нильсену. Подсчет ооцист криптоспоридий
ведут по всей поверхности мазка под большим увеличением микроскопа, с
использованием иммерсионного объектива. Полученное количество ооцист
умножают на 1000 и получают количество ооцист в 1 г фекалий. Для удобства
подсчета ооцист криптоспоридий мы рекомендуем применять сетку Акбаева (12).
11
Посмертная диагностика.
Посмертный диагноз на криптоспоридиоз представляет определенные
сложности: в связи с мелкими размерами ооцист, их внешней схожестью на
мазках-отпечатках с каплями жира, эритроцитами и др., а также быстрым
аутолизом. Обязательное условие – недопущение замораживания и оттаивания
проб патматериала. Мазки-отпечатки и соскобы фиксируют этанолом и
окрашивают по Цилю-Нильсену, затем просматривают под большим увеличением
микроскопа, с использованием иммерсионного объектива (5; 13).
Дифференциальный диагноз.
В исследуемых мазках ооцисты криптоспоридий следует отличать от других
возбудителей, вызывающих энтериты молодняка. Ооцисты эймерий в мазках –
различной формы, значительно крупнее криптоспоридий, внутри бывают
различимы 4 спороцисты, содержащие по 2 спорозоита. Яйцо гельминта –
крупное, овальное, круглое или бочонковидное, с оболочкой сложного строения
(1).
В связи с
достаточно неспецифичными клиническими проявлениями
энтерита криптоспоридиозной этиологии, его следует отличать от энтеритов
инфекционной
возникновении.
природы,
Л.
А.
определять
Небайкиной
ведущую
роль
возбудителей
(2001)
(11)
предложен
в
их
способ
ориентировочного выявления ведущего возбудителя энтерита в окрашенных по
Грамму мазках-отпечатках со слизистой оболочки кишечника телят (таблица 1).
12
Таблица 1.
Дифференциальная диагностика криптоспоридиоза по мазкамотпечаткам со слизистой оболочки кишечника.
Вид в поле зрения микроскопа при
исследовании мазка-отпечатка
Ориентировочный диагноз
Почти чистая культура Граммотрицательных, мелких, толстых
палочек с закругленными концами,
расположенных группами
Колибактериоз
Преобладают Грамм-положительные,
толстые с прямоугольными концами
бациллы, расположенные одиночно,
парами, короткими цепочками
Энтеротоксемия, вызванная
Clostridium perfringens
Преобладают нейтрофильные клетки
с микробами
Сальмонеллез
Разная микрофлора, трудно выделить
преобладающую
Вирусные инфекции
Преобладают неокрасившиеся по
Грамму образования, по величине и
форме напоминающие эритроциты,
часть из них имеет светлый ободок
КРИПТОСПОРИДИОЗ
13
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК
1.
Алиев А.А.
Криптоспоридиоз (диагностика, культивирование
Cryptosporidium parvum в клетках культуры тканей, экспресс-оценка препаратов)
– Дисс. … канд. вет. наук, СПб, 1993. – 115 с.
2. Бочкарев И.И Испытание химиотерапевтических препаратов при
криптоспоридиозе телят // Селекция, разведение, болезни сельскохозяйственных
животных: Сб. научн. тр.ЯНИИСХ – Новосибирск, 1993. – С. 80-83.
3. Бочкарев И.И., Шибалова Т.А. Роль криптоспоридий в возникновении
диареи телят // Вузовская наука – сельскохозяйственному производству: Сб.
научн. тр. ЯСХИ – Якутск, 1991. – С. 28-31.
4. Вершинин И.И. Атлас основных видов кокцидий животных и их
морфобиологическая характеристика. – Екатеринбург, 2001.
5. Временные Методические Указания по лабораторным исследованиям на
криптоспоридиозы животных (утв. ГУ ветеринарии РФ 9.06.88.) – М., 1988.
6. Крылов М.В. Определитель паразитических простейших. – СПб:
Зоологический институт РАН, 1996.
7. Лабинов А.В., Никитин В.Ф. О кокцидиозах телят в скотоводческом
хозяйстве Московской области // Теория и практика борьбы с паразитарными
болезнями: Матер.докл. научн. Конф. – М.: ВИГИС, 2001. – С. 137-138.
8. Лаковникова Е.В., Пашкин П.Н. Сезонная и возрастная динамика
криптоспоридиоза телят в животноводческих хозяйствах Ленинградской области
// Сб. научн. Тр. ЛВИ. – Л., 1989. - № 104. – С. 77-81.
9. Литвинский Я.П., Гутый В.И. Криптоспоридиоз телят // Ветеринария. –
1989. № 8. – С. 46-48.
10. Лоскот В.И. и др. Распространение криптоспоридиоза телят в
животноводческих хозяйствах Ленинградской области // С. Научн. Тр. ЛВИ. –
1989. - № 104. – С.82-85.
11.
Небайкина Л.А.
Диагностика диарей криптоспоридиозноэшерихиозной этиологии у молодняка животных // Теория и практика борьбы с
паразитарными болезнями: Матер.докл.научн.конф. – М.: ВИГИС, 2001. – С. 170171.
12. Паразитология и инвазионные болезни животных / под ред. Проф.
Акбаева М.Ш. – М.: Колос, 1998.
13. Рекомендации по диагностике криптоспоридиоза поросят // Тр. ВИГИС.
– т. 40. – 2004. – С. 419-454.
14. Тайчинов У.Г., Дурдусов С.Д. Эпизоотологический процесс при
криптоспоридиозе – Элиста, 1996.
14