ПАНАВИР (Форвет) токсикология и фармакология

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПАНАВИРА
4.1 Токсические свойства
Всетоксикологические исследования Панавирабыли выполнены в соответствиис
рекомендациями государственного ФармкомитетаМЗ РФ и «Руководством по
экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ»
(Москва, 2005)- по стандартным методикам, прописанным в этих документах. Поэтому в
данном разделе мы кратко остановимсятолько на результатах этих исследований.
При изучении мутагенности и потенциальной канцерогенной опасности
Панавира были проведены следующие исследования:
1. Учет генных мутаций на микроорганизмах в тесте Эймса.
2. Учет хромосомных аберраций в клетках костного мозга млекопитающих.
3.Учет доминантных летальных мутаций в зародышевых клетках мышей.
4. Изучение ДНК - повреждающего действия в SOS - хромотесте.
Все эти эксперименты показали отсутствие у Панавира мутагенных и
канцерогенных свойств в широком диапазоне доз и концентраций, существенно
превышающих потенциальные терапевтические дозы.
При изучении острой токсичности Панавира использовано 3 вида животных:
мелкие животные (мыши-самцы гибриды, неинбредные крысы линии Wistar) и крупные
животные (собаки обоего пола породы «английский бигл»). Мышам препарат вводили
внутривенно (2% раствор) и внутрибрюшинно (1% раствор), крысам - внутрибюшинно
(1% раствор). Препарат вводили в интервале доз: 3000 мг/кг, 1500 мг/кг, 1000 мг/кг, 600
мг/кг, 400 мг/кг, 300 мг/кг и 100 мг/кг. При внутрибрюшинном введении Панавира мышам
и крысам в дозах 3000-1500 мг/кг препарат применяли дробно от 3 до 7 раз в день с
интервалом в 1 час. Собакам Панавир вводили внутривенно в рекомендуемой в клинику
лекарственной форме в виде 0,004% раствора.
Результаты исследования
Мыши
В результате проведенных исследований установлены следующие критерии
количественной токсичности для мышей при внутривенном и внутрибрюшинном
введении Панавира:
Внутривенно
Внутрибрюшинно
LD50=1075 мг/кг
LD50=240 мг/кг
LD16=680 мг/кг
LD16=160 мг/кг
LD84=1750 мг/кг
LD84=360 мг/кг
LD10=580 мг/кг
LD10=140 мг/кг
При однократном внутривенном и внутрибрюшинном применении Панавира мышам в
переносимых дозах и нетоксических дозах (100 мг/кг и ниже) клинических проявлений
токсичности и изменений в поведении животных отмечено не было.
При однократном внутривенном и внутрибрюшинном применении Панавира мышам в
летальных (LD50, LD16,LD84) и максимальнопереносимых (LD10) дозах отмечались
изменения в общем состоянии и поведении, которые проявлялись в изменении походки
животных (брюшком касались пола), появлении адинамии и/или гиподинамии, вялости,
заторможенности, появлении у животных позы "ежа", пилоэрекции, сужении глазных
щелей, гнойных выделений из глаз и конъюнктивита, одышки и снижении массы тела. У
единичных животных были зафиксированы адинамия (с креном вправо) и диарея.
Основная гибель мышей от Панавира в летальных дозах происходила на 2-3 сутки опыта
при явлениях интоксикации, описанных выше, и сосудистых нарушениях (сукровичные
выделения из носа). При патологоанатомическом вскрытии павших животных отмечали
следующую картину: в области верхушки сердца - участок ишемии, легкие - отечны,
кишечник "голодный", с большим содержанием желчи, часть тонкого кишечника
гиперемирована, некроз пейеровыхбляшек и солитарных фолликулов, атрофия селезенки,
печень нормальных размеров, зернистая. Остальные органы макроскопически - без
видимых изменений. При вскрытии животных, павших от препарата при
внутрибрюшинном применении в летальных дозах дополнительно отмечали изменения в
брюшной полости: гиперемию сальника, белый налет в виде манной крупы, состоящий из
некротизированных клеток, на задней стенке брюшины, т. е. проявления местного
раздражения брюшины.
У выживших животных внешние признаки интоксикации исчезали быстро, в течение 1-2
суток. В течение более длительного срока восстанавливалась масса тела мышей - от 14 до
45 сутокнаблюдений, в зависимости от величины примененной дозы. При аутопсии
умерщвленных в конце срока наблюдения (45 сутки опыта) выживших после
однократного применения препарата мышей отмечали только гипертрофию селезенки,
остальные органы макроскопически - без патологии.
Крысы.
При изучении острой токсичности Панавира на крысах установлены критерии
количественной токсичности препарата при однократном внутрибрюшинном введении:
Крысы-самки
Крысы-самцы
LD50=710 мг/кг
LD50=435 мг/кг
LD16= 440 мг/кг
LD16= 305 мг/кг
LD84= 1002 мг/кг LD84= 620 мг/кг
LD10= 430 мг/кг
LD10= 270 мг/кг
Основная гибель крыс при однократном применении Панавира в летальных дозах
происходила на 2-3 сутки при явлениях интоксикации и изменений в поведенческих
реакциях, аналогичных однократному применению Панавира мышам. При вскрытии крыс,
павших от препарата в летальных дозах, отмечалась картина, аналогичная картине
вскрытия павших мышей.
Признаки интоксикации у выживших крыс исчезали так же быстро, как у мышей. В
отличие от мышей, у крыс после однократного применения Панавира также быстро
восстанавливалась и масса тела (до 7 дня наблюдения).
Собаки.
Острую токсичность Панавира на собаках изучали при однократном внутривенном
применении препарата в дозах 90 мг/кг, 0,4 мг/кг и 0,04 мг/кг. При внутривенном
применении Панавира в однократной дозе 90 мг/кг, превышающей оптимальную
терапевтическую дозу для собак, равную 0,02 мг/кг в 4500 раз, отмечали следующую
картину интоксикации:гиперсаливация, рвота, анорексия, двухкратный оформленный стул
с кровью и слизью. При этом наблюдалось угнетение и заторможенность в поведении
животных. Длительность наблюдаемых внешних клинических проявлений интоксикации
и изменений в поведенческих реакциях составляла не более 3 часов. В последующие 60
суток наблюдения внешних проявлений токсичности у собак от препарата в названной
дозе не отмечалось.
При гематологическом исследовании периферической крови собаки, получившей дозу 90
мг/кг, отмечали на 3-14 сутки опыта увеличение общего числа лейкоцитов до до 40103 в
мм3крови за счет увеличения количества элементов белой крови, без смещения
морфологического состава влево или вправо.
При биохимическом исследовании сыворотки крови собаки, получившей Панавир в дозе
90 мг/кг, наблюдали на 3-14 сутки опыта увеличение активности ферментов АЛТ (в 20
раз) и щелочной фосфатазы (в 2,5 раза) по сравнению с фоновыми показателями.
Анализ электрической активности сердца собаки, получившей Панавир в указанной дозе,
не выявил каких-либо изменений в показателях ЭКГ.
При вскрытии собаки, получавшей Панавир в дозе 90 мг/кг, на 60 день опыта наблюдали
гипертрофию селезенки, лимфатических узлов, полнокровие печени и ее умеренное
увеличение. Остальные органы - макроскопически без особенностей.
Внутривенное применение собакам Панавира в однократной дозе 0,4 мг/кг, превышающей
оптимальную терапевтическую дозу для собак в 20 раз, у 3 из 4 собак не выявило
изменений в поведении и внешних клинических проявлений токсичности и побочного
действия со стороны систем и органов животных. Лишь у 1 из 4 собак в первые часы
после введения отмечали двукратную рвоту и вялость.
При гематологическом исследовании периферической крови у собак на 7-14 сутки опыта
отмечали уменьшение общего числа лейкоцитов в пределах нормы в 1,5 раза по
сравнению с исходными данными за счет снижения числа лимфоцитов и сегментоядерных
нейтрофилов. Отмечено увеличение относительного и абсолютного числа эозинофилов в 3
раза по сравнению с фоновыми показателями. На эти же сроки зафиксировано
уменьшение времени начала свертывания крови в 2-3,5 раза по сравнению с фоновыми
показателями. Количество гемоглобина колебалось (увеличивалось или уменьшалось) в
пределах физиологической нормы, число эритроцитов, тромбоцитов, СОЭ оставались без
изменения.
При биохимическом исследовании сыворотки крови собак, получавших препарат в
однократной дозе 0,4 мг/кг, каких-либо патологических нарушений не наблюдали.
Анализ ЭКГ собак, получавших Панавир в названной дозе, не выявил изменений в
электрической активности сердца.
При вскрытии собак, получавших препарат в однократной дозе 0,4 мг/кг, наблюдали
резкое увеличение и полнокровие селезенки, умеренное увеличение и полнокровие
печени, полнокровие почек, границы мозгового и коркового слоя которых смазаны.
Остальные органы и ткани оставались без видимых макроскопических изменений.
При однократном внутривенном применении Панавира в дозе 0,04 мг/кг, превышающую
терапевтическую дозу собак в 2 раза, внешних клинических проявлений токсичности и
изменений в поведении животных не отмечали.
При гематологическом исследовании периферической крови собак в течение всего срока
наблюдений общее число лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобина колебалось в пределах
физиологической нормы (увеличивалось, уменьшалось, или оставалось без изменений по
сравнению с фоновыми показателями). При этом отмечалось, как правило, увеличение
числа лимфоцитов и уменьшение числа сегментоядерных нейтрофилов в пределах
физиологической нормы.Зафиксировано уменьшение времени начала свертывания крови.
СОЭ и число тромбоцитов оставались без изменения.
Биохимические исследования не выявили каких-либо патологических изменений в
показателях сыворотки крови собак, получавших препарат в названной дозе.
Анализ ЭКГ собак, получавших Панавир в однократной дозе 0,04 мг/кг, не выявил
изменений в функциональном состоянии сердца. При вскрытии усыпленных собак
наблюдали полнокровие селезенки, умеренное увеличение лимфатических узлов,
увеличение и гиперемию щитовидной_железы, полнокровие почек, границы коркового и
мозгового слоя которых смазаны. Остальные органы и ткани без видимых
патологических изменений.
На основании проведенных исследований для собак установлены уровни токсических доз.
Однократная доза 90 мг/кг охарактеризована как высокая токсическая доза (ВТД), доза
0,04 мг/кг охарактеризована как высокая нетоксическая доза (ВНТД), близкая к
терапевтической, не вызывающая токсического и побочного действия на органы и ткани.
Промежуточная доза - 0, 4 мг/кг – охарактеризована как низкая токсическая доза (НТД),
вызывающая незначительные побочные эффекты в органах и тканях собак.
Выводы:
В результате проведенных исследований по изучению острой токсичности Панавира
установлены летальные (LD16, LD50, LD84), максимальнопереносимые (LD10) и
нетоксические дозы для мышей и крыс при внутривенном и внутрибрюшинном введении
препарата, превышающие терапевтические дозы для этих животных в 102-103 раз; высокая
токсическая доза (ВТД), превышающая терапевтическую более чем в 103 раз, низкая
токсическая доза (НТД) и высокая нетоксическая доза (ВНТД) для собак при
внутривенном применении препарата. Выявлены основные виды острой токсичности
Панавира, проявляющиеся в летальных и высоких токсических дозах гастроинтестинальная (диарея, рвота), гематотоксичность (лейкоцитоз, уменьшение
времени начала свертывания крови) и сосудистые нарушения.
Установлено, что гибель мелких животных (мыши, крысы) после однократного
применения Панавира происходит от острой сердечно-сосудистой недостаточности
(ишемия миокарда). Величина дозы, при которой возможны указанные выше проявления
токсичности, должны превышать терапевтическую дозу для мышей (1 мг/кг) в140-580
раз.
При изучении острой токсичности на мелких животных (крысах) установлена зависимость
токсического действия от пола животного. Применение Панавира крысам-самкам в тех же
дозах, что и крысам-самцам не вызывает гибели животных, клинических проявлений
интоксикации и изменений в поведенческих реакциях.
Токсические проявления у собак при однократном внутривенном применении Панавира:
сосудистые нарушения (кровь в кале), гематотоксичность (стимуляция лейкопоэза),
кратковременные проявления гастроинтестинальной токсичности (рвота) и
гепатотоксичности (увеличение активности АЛТ, АСТ и щелочной фосфатазы)
возможны.
Таким образом, полученные данные по токсическому действию Панавира позволяют
прогнозировать его безвредность (безопасность) при однократном внутривенном
применении человеку в нетоксических и высоких нетоксических дозах.
Учитывая данные по количественной токсичности, а также уровень токсического
действия, Панавир по степени опасности можно классифицировать как малоопасный
препарат (степень токсичности по ГОСТу 12.1.00.7.76- IV).
Хроническая (субхроническая) токсичность Панавира исследовалась на 40
неинбредных крысах-самцах массой 150-250 г и 9 собаках породы "английский бигл" (5
самцов и 4 самки). Крысам Панавир вводили в виде 0,5% раствора, приготовленного на
0,9% физиологическом растворе хлористого натрия, внутрибрюшинно, ежедневно, в
течение 7 дней. В качестве контроля использовали интактных животных. Собакам
препарат вводили в рекомендуемой в клинику лекарственной форме в виде 0,004%
раствора, внутривенно, ежедневно, в течение 7 дней. Продолжительность наблюдения
после хронического введения Панавира крысам и собакам - 30 суток.
Результаты исследования
Крысы.
В опытах по хронической токсичности Панавир применяли крысам ежедневно
внутрибрюшинно в течение 7 дней в разовых дозах 120 мг/кг (суммарная доза 840 мг/кг);
40 мг/кг (суммарная доза 280 мг/кг) и 4 мг/кг (суммарная доза 28 мг/кг). Препарат вводили
в 0,5% концентрации.
Таблица 1. Дозы, характеризующие хроническую токсичность Панавира на крысах при
7-кратном внутрибрюшинном применении.
Разовая
доза
Суммарная Клинические проявления
доза
Характеристика
уровня доз
(мг/кг)
(мг/кг)
токсичности и побочного действия
120
840
Увеличение общего числа лейкоцитов в
1,5 раза, лимфоцитов в 2 раза,
эозинофилов в 5-10 раз. Изменения
количественных показателей ЭКГ.
НТД (низкая
токсическая доза)
40
280
Увеличение общего числа лейкоцитов в
1,5 раза, лимфоцитов и эозинофилов в 2
раза.
ВНТД (высокая
нетоксическая
доза)
4
28
Не выявлено
НД (нетоксическая
доза)
У всех животных, получавших Панавир в разовых дозах 120 мг/кг, 40 мг/кг и 4 мг/кг,
внешних клинических проявлений интоксикации и изменений в поведении не
наблюдалось. Не изменялась на протяжении всего срока наблюдения и масса тела
животных, по сравнению с массой тела контрольных животных.
Клинический анализ крови крыс при применении Панавира в разовых дозах 120 мг/кг и 40
мг/кг на 7 день наблюдения показал увеличение общего числа лейкоцитов в 1,5 раза, по
сравнению с исходными и контрольными данными. Увеличение общего числа лейкоцитов
сохранялось до 30 суток наблюдения при применении препарата в разовой дозе 120 мг/кг.
Число эритроцитов, тромбоцитов и количество гемоглобина не изменялись на протяжении
всего срока наблюдения при применении Панавира во всех исследованных дозах и
оставались в пределах физиологической нормы.
В лейкоцитарной формуле крыс на 7-14 день наблюдения после применения препарата в
разовых дозах 120 мг/кг, 40 мг/кг и 4 мг/кг наблюдалось увеличение абсолютного числа
лимфоцитов в 1,5 раза по сравнению с исходными данными и значениями контрольных
животных. Увеличение абсолютного числа лимфоцитов сохранялось до 30 суток
наблюдения. Относительное число лимфоцитов при этом оставалось без изменения, но
относительное число сегментоядерных нейтрофилов на 14 сутки наблюдения
уменьшалось в 2-3 раза, по сравнению с контрольными и фоновыми показателями. На 1 и
14 сутки наблюдений отмечалось увеличение относительного и абсолютного числа
эозинофилов в 2-10 раз, по сравнению с данными контрольных животных. Указанные
изменения в лейкоцитарной формуле были быстрообратимыми, и уже на 21-30 сутки
опыта отмечалось восстановление всех показателей крови.
Проведенные биохимические исследования сыворотки крови крыс показали, что после 7кратного ежедневного внутрибрюшинного применения Панавира в разовых дозах 120
мг/кг, 40 мг/кг и 4 мг/кг изменения в биохимических показателях отсутствуют или не
отличаются от данных у контрольных животных.
На 1, 15 и 30 сутки после окончания курса применения Панавира у крыс исследовали
суточный диурез и проводили клинико-морфологический анализ мочи. Во все сроки
наблюдения количество выпитой и выделенной жидкости у животных в опыте и контроле
было близким, белок, глюкоза не обнаруживались, значение рН не менялось. При
микроскопии осадка мочи цилиндрические клетки не обнаруживались.
Анализ электрокардиограмм крыс, получавших препарат в разовой дозе 120 мг/кг, выявил
влияние Панавира на функцию сердечной мышцы, заключающееся в увеличении
систолического показателя и частоты сердечных сокращений. Обратимость указанных
изменений отмечалась к 30 суткам наблюдения. Анализ электрокардиограмм крыс,
получавших препарат в разовых дозах 40 мг/кг и 4 мг/кг, не выявил качественных и
количественных изменений в показателях электрокардиограмм.
При вскрытии животных, получавших Панавир в разовых дозах 120 мг/кг и 40 мг/кг,
умерщвленных на 1 и 30 сутки наблюдения, отмечали гипертрофию селезенки и
увеличение мезентериальных лимфоузлов. Остальные органы макроскопически
оставались без изменений. При вскрытии крыс, получавших Панавир в разовой дозе 4
мг/кг, умерщвленных на 1 и 30 сутки наблюдения, макроскопически не отмечали какихлибо изменений в органах и тканях животных.
При взвешивании внутренних органов крыс установлено изменение массы некоторых из
них. На 1 сутки после 7-кратного введения Панавира в разовых дозах 120 мг/кг и 40 мг/кг
было отмечено увеличение массы селезенки в 2 раза по сравнению с массой селезенки
контрольных животных. На 30 сутки после 7-кратного применения Панавира у животных,
получавших Панавир в разовой дозе 120 мг/кг, было зафиксировано увеличение массы
тимуса по сравнению с массой тимуса контрольных животных.
На основании проведенных исследований по изучению хронической токсичности
Панавира на крысах установлены уровни токсических доз: разовая доза 120 мг/кг
(суммарная доза 840 мг/кг) была охарактеризована как низкая токсическая доза (НТД),
разовая доза 4 мг/кг (суммарная доза 28 мг/кг) классифицирована как нетоксичесая доза
(НТ), близкая к терапевтической, не вызывающая токсического и побочного действия на
органы и ткани; разовая доза 40 мг/кг (суммарная доза 80 мг/кг) - промежуточная доза
между низкой токсической и нетоксической дозой. Разовая доза 40 мг/кг охарактеризована как высокая нетоксическая доза (ВНТД).
Индекс кумуляции Панавира для крыс рассчитан исходя из формулы:
(МПД)1 – (МПД)n
К = ----------------------  100,
(n-1)  (МПД)n
где МПД - максимальнопереносимая доза при однократном и n-кратном введении (Чернов
В. А. "Методы экспериментальной химиотерапии".М., Медицина, 1973, стр. 317).
270 мг/кг-(120)7
К= -----------------------  100 = -11,3%
(7-1)  (120) 7
Индекс кумуляции Панавира при внутрибрюшинном введении показывает отсутствие
кумулятивных свойств препарата, а также обратимость токсических эффектов.
Собаки.
Хроническую (субхроническую) токсичность исследовали на 8 собаках (4 самца и 4
самки) породы "английский бигл" при внутривенном введении Панавира в рекомендуемой
для клинического применения форме в виде 0,004 % раствора. Препарат вводили
ежедневно в течение 7 дней в разовых дозах 0,08 мг/кг (суммарная доза 0,56 мг/кг); 0,008
мг/кг (суммарная доза 0,056 мг/кг); 0,0008 мг/кг (суммарная доза 0,0056 мг/кг).
В период введения и после окончания введения препарата во всех исследованных дозах не
отмечалось нарушения общего состояния, внешних проявлений интоксикации и
изменений в поведенческих реакциях. У 2-х собак-самцов, получавших препарат в
разовой дозе 0,008 мг/кг и 0,08 мг/кг, после курсового введения Панавира отмечалось
периодическое кратковременное увеличение луковичных желез до размера грецкого
ореха, других изменений в поведении выявлено не было. Шерстный покров был гладким,
стул оформлен, нормального цвета. Масса тела собак на протяжении всего срока
наблюдения существенно не менялась.
Таблица 2. Дозы, характеризующие токсичность Панавира при 7-кратном ежедневном
внутривенном введении собакам породы английский бигл.
Пол
Доза (мг/кг)
Клинические проявления
Характеристика уровня
интоксикации
доз
разовая суммарная
самка 0,08
0,56
Увеличение числа
эозинофилов в 20 раз
НТД (низкая токсическая
доза)
самец 0,08
0,56
Не выявлено
НТД
самка 0,08
0,56
Не выявлено
НТД
самка 0,008
0,056
Увеличение числа
эозинофилов в 6 раз
ВНТД (высокая
нетоксическая доза)
самец 0,008
0,056
Увеличение числа
эозинофилов в 2 раза
ВНТД
самка 0,008
0,056
Увеличение числа
эозинофилов в 3 раза
ВНТД
самка 0,0008
0,0056
Увеличение числа
эозинофилов в 4 раза
ВНТД
самка 0,0008
0,0056
Увеличение числа
эозинофилов в 8 раз
ВНТД
При гематологическом исследовании состояния периферической крови было
установлено, что после 7-кратного ежедневного внутривенного применения Панавира в
разовых дозах 0,08 мг/кг, 0,008 мг/кг и 0,0008 мг/кг на 3-7, 30 сутки наблюдения
отмечалось увеличение общего числа лейкоцитов в 1,5-3 раза, увеличение числа
эритроцитов в 1,5 раза, сокращение времени начала свертывания крови в 1,5-5 раз по
сравнению с фоновыми показателями. Число тромбоцитов, количество
гемоглобина и СОЭ в течение всего срока наблюдения не менялось. В лейкоцитарной
формуле собак отмечалось увеличение относительного и абсолютного числа
лимфоцитов, числа эозинофилов в 2-20 раз, палочкоядерных нейтрофилов и моноцитов в
1,5-2,5 раза по сравнению с данными контрольных животных. При этом относительное
и абсолютное число сегментоядерных нейтрофилов снижалось в 1,5-2 раза. Указанные
изменения в показателях периферической крови, как правило, оставались в пределах
физиологической нормы, за исключением показателя начала свертывания крови и
числа эозинофилов.
При оценке биохимических показателей крови собак, получавших препарат в указанных
дозах, не было выявлено изменений по сравнению с фоновыми данными.
Анализ электрической активности сердца показал, что применение Панавира в разовых
дозах 0,08 мг/кг, 0,008 мг/кг и 0,0008 мг/кг не вызывает изменений в количественных и
качественных показателях ЭКГ собак.
При вскрытии усыпленных собак, получавших Панавир в разовой дозе 0,08 мг/кг, на 1 и
30 сутки опыта наблюдали следующую картину: селезенка незначительно увеличена,
полнокровна, печень - гипертрофирована, лимфоузлы - увеличены в размерах, почки полнокровны, граница коркового и мозгового слоя сглажена, щитовидная железа
гиперемирована. Остальные органы макроскопически без изменений.
При вскрытии усыпленных собак, получавших Панавир в разовой дозе 0,008 мг/кг и
0,0008 мг/кг, на 1 и 30 сутки опыта обнаружили следующую картину: селезенка полнокровна или "сухая", светлая с темными участками, лимфоузлы - умеренно
увеличены в размерах, печень - незначительно увеличена, щитовидная железа
гиперемирована или без особенностей. Почки умеренно полнокровны, корковый и
мозговой слой сглажен. Другие органы - макроскопически без особенностей.
На основании проведенных исследований по субхронической токсичности на собаках
найдены уровни токсических доз Панавира, характеризующие токсичность препарата при
многократном применении: разовую дозу 0,08 мг/кг (суммарная доза 0,56 мг/кг,
превышающая однократную терапевтическую дозу для собак в 28 раз), можно охарактеризовать как низкую токсическую дозу (НТД). Разовые дозы 0,008 мг/кг (суммарная
доза 0,056 мг/кг, превышающая однократную терапевтическую дозу для собак в 2,5 раза),
и 0,0008 мг/кг (суммарная доза 0,0056 мг/кг) характеризуются как дозы, близкие к высоким нетоксическим (ВНТД), но вызывающие побочное действие на органы и ткани
собак.
Полученные данные по субхронической токсичности Панавира на собаках позволяют
рассчитать индекс кумуляции препарата для собак при внутривенном применении:
0,4 - 0,56
К = ------------  100 % = - 4,08 %.
7  0,56
Токсичность Панавира при внутривенном применении - обратима. Препарат
кумулятивными свойствами не обладает.
Таким образом, в результате изучения хронической токсичности Панавира на крысах и
собаках определены три уровня токсических доз препарата, характеризующие его
хроническую (субхроническую) токсичность: низкие токсические дозы (НТД),
превышающие однократные терапевтические в 840-28 раз, для крыс и собак
соответственно,высокие нетоксические дозы (ВНТД) для крыс и собак и нетоксические
дозы (НД) для крыс. Выявлено, что при хроническом (субхроническом) применении
Панавир в низких токсических и высоких нетоксических дозах вызывает токсическое и
побочное действие на периферическую кровь, проявляющееся в увеличении общего числа
лейкоцитов и числа эозинофилов, уменьшения времени начала свертывания крови.
Зафиксированнаяэозинофилия является основным проявлением побочного действия
Панавира при многократном применении. Препарат в низких токсических дозах также
оказывает токсическое влияние на сердце, связанное с количественными изменениями в
ЭКГ (увеличение систолического показателя и частоты сердечных сокращений). При
аутопсии у животных, получавших Панавир в НТД и ВНТД, отмечена гипертрофия
селезенки и лимфоузлов.
Функциональная обратимость побочного действия Панавира при хроническом
применении в низких токсических дозах (НТД) составляет 30 суток.
Влияние Панавира на функции органов и систем организма
1. Влияние Панавира на периферическую кровь
Изучение влияния Панавира на периферическую кровь было проведено на крысах в
хроническом опыте и собаках в опытах по острой и хронической токсичности.
В опытах на крысах применение Панавира в разовых низкой токсической дозе 120 мг/кг
(НТД) и высокой нетоксической дозе 40 мг/кг (ВНТД) на 7 день наблюдения показало
увеличение общего числа лейкоцитов в 1,5 раза, по сравнению с исходными и
контрольными данными. Увеличение общего числа лейкоцитов сохранялось до 30 суток
наблюдения при применении препарата в разовой низкой токсической дозе 120 мг/кг.
Число эритроцитов, тромбоцитов и количество гемоглобина не изменялись на протяжении
всего срока наблюдения при применении Панавира во всех исследованных дозах и
оставались в пределах физиологической нормы.
В лейкоцитарной формуле крыс на 7-14 день наблюдения после применения препарата в
разовых дозах 120 мг/кг (НТД), 40 мг/кг (ВНТД) и 4 мг/кг (НД) наблюдалось увеличение
абсолютного числа лимфоцитов в 1,5 раза по сравнению с исходными данными и значениями контрольных животных. Увеличение абсолютного числа лимфоцитов сохранялось до
30 суток наблюдения. Относительное число лимфоцитов при этом оставалось без
изменения, но относительное число сегментоядерных нейтрофилов на 14 сутки
наблюдения уменьшалось в 2-3 раза, по сравнению с контрольными и фоновыми
показателями. На 1-14 сутки наблюдения отмечалось увеличение относительного и
абсолютного числа эозинофилов в 2-10 раз в зависимости от дозы по сравнению с
данными контрольных животных. Указанные изменения в лейкоцитарной формуле были
быстрообратимыми, и уже на 21-30 сутки опыта отмечалось восстановление всех
показателей крови.
При гематологическом исследовании периферической крови собаки, получавшей
внутривенно однократную высокую токсическую дозу 90 мг/кг (ВТД) на 3-14 день
наблюдения отмечали увеличение общего числа лейкоцитов до 40103 в мм3 крови за счет
увеличения числа всех форменных элементов белой крови без смещения
морфологической формулы вправо или влево. Анализ периферической крови собак,
получавших Панавир внутривенно в однократной низкой токсической дозе 0,4 мг/кг
(НТД) на 7-14 сутки опыта отмечали уменьшение общего числа лейкоцитов в пределах
физиологической нормы в 1,5 раза по сравнению с исходными данными, за счет снижения
числа лимфоцитов и сегментоядерных нейтрофилов. Отмечено увеличение относительного и абсолютного числа эозинофилов в 3 раза по сравнению с фоновыми
показателями. На эти же сроки зафиксировано уменьшение времени начала свертывания
крови в 2-3,5 раза, по сравнению с фоновыми показателями. Количество гемоглобина
колебалось (увеличивалось или уменьшалось) в пределах физиологической нормы, число
эритроцитов, тромбоцитов, СОЭ оставались без изменения.
При гематологическом исследовании периферической крови собак, получавших Панавир
в однократной высокой нетоксической дозе 0,04 мг/кг (ВНТД), в течение всего срока
наблюдения общее число лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобина колебалось в пределах
физиологической нормы (увеличивалось, уменьшалось, или оставалось без изменений по
сравнению с фоновыми показателями). При этом отмечалось, как правило, увеличение
числа лимфоцитов и уменьшение числа сегментоядерных нейтрофилов в пределах
физиологической нормы. Зафиксировано уменьшение времени начала свертывания крови.
СОЭ и число тромбоцитов оставались без изменения.
При гематологическом исследовании состояния периферической крови собак было
установлено, что после 7-кратного ежедневного внутривенного применения Панавира в
разовых низкой токсической дозе 0,08 мг/кг (HТД), и высоких нетоксических дозах
(ВНТД) 0,008 мг/кг и 0,0008 мг/кг на 3-7, 30 сутки наблюдения отмечалось увеличение
общего числа лейкоцитов в 1,5-3 раза, увеличение числа эритроцитов в 1,5 раза по
сравнению с фоновыми показателями. Число тромбоцитов, количество гемоглобина и
СОЭ в течение всего срока наблюдения не менялось. В лейкоцитарной формуле собак
отмечалось увеличение относительного и абсолютного числа лимфоцитов, числа
эозинофилов в 2-20 раз, палочкоядерных нейтрофилов и моноцитов в 1,5-2,5 раза по
сравнению с данными контрольных животных и с исходными данными. При этом
относительное и абсолютное число сегментоядерных нейтрофилов снижалось в 1,5-2 раза.
Указанные изменения в показателях периферической крови, как правило, оставались в
пределах физиологической нормы, за исключением показателя начала свертывания крови
и числа эозинофилов. Указанные изменения в периферической крови животных,
получавших Панавир, имеют дозозависимый и обратимый характер.
2. Влияние Панавира на желудочно-кишечный канал
Исследование влияния Панавира на желудочно-кишечный канал проводили во всех
опытах по изучению острой и хронической токсичности. Основными критериями
токсичности служили клиническая картина интоксикации и макроскопическая оценка при
патологоанатомическом вскрытии животных. Особое внимание уделяли изучению
гастроинтестинальной токсичности в опытах на собаках.
При однократном внутрибрюшинном и внутривенном введении Панавира мышам и
крысам в летальных и максимальнопереносимых дозах отмечали у некоторых животных
диарею и снижение массы тела. При вскрытии этих животных отмечали гиперемию
тонкого кишечника, некроз пейеровых бляшек и солитарных фолликулов.
При внутривенном однократном введении Панавира собаке в высокой токсической дозе
90 мг/кг (ВТД) отмечали 2-кратный оформленный стул с примесью крови и слизи на фоне
гиперсаливациии и анорексии. При внутривенном однократном введении Панавира
собакам в низкой токсической дозе 0,4 мг/кг (НТД) отмечали 2-кратную рвоту. При
вскрытии этих собак изменений со стороны желудочно-кишечного канала
макроскопически не обнаруживалось. Во всех других исследованиях по изучению острой
токсичности Панавира влияние препарата на желудочно-кишечный канал не выявлено.
При многократном внутрибрюшинном применении Панавира в хроническом опыте
крысам и внутривенном применении собакам во всех исследованных дозах каких-либо
изменений со стороны желудочно-кишечного канала не обнаружено.
3. Влияние Панавира на функции печени
Изучение влияния Панавира на функции печени проводили в опытах по острой и
хронической токсичности на крысах и собаках.
При изучении хронической токсичности биохимические исследования сыворотки крови
крыс показали, что после 7-кратного ежедневного внутрибрюшинного применения
Панавира во всех дозах на все сроки наблюдения (1, 15 и 30 сутки наблюдения) изменения
в активности печеночных ферментов (АЛТ, ACT, ЛДТ, щелочной фосфатазы)
отсутствуют или не отличаются от данных контрольных животных.
При внутривенном применении Панавира собаке в однократной высокой токсической
дозе 90 мг/кг (ВТД) на 3-14 сутки опыта в сыворотке крови отмечали увеличение
активности ферментов АЛТ (в 20 раз) и щелочной фосфатазы (в 2,5 раза) по сравнению с
фоновыми показателями.
При оценке биохимических показателей крови собак, получавших Панавир внутривенно
однократно и многократно (7-кратно) во всех других исследованных дозах (НТД, ВНТД и
НД) изменений в показателях функции печени не отмечено.
Проведенные исследования показывают, что Панавир в низких токсических, высоких
нетоксических и нетоксических дозах не оказывает влияния на функциональное состояние
печени.
4. Влияние Панавира на функциональное состояние сердечно-сосудистой системы
При изучении влияния Панавира на функциональное состояние сердечно-сосудистой
системы установлено, что Панавир в исследованиях по острой и хронической токсичности
на собаках во всех исследованных дозах не изменял количественных показателей ЭКГ
(ЧСС, систолический показатель), не влиял на ее качественные показатели по сравнению с
фоновыми данными.
Однако, анализ электрокардиограмм крыс при хроническом применении Панавира в
разовой низкой токсической дозе 120 мг/кг (НТД) выявил влияние Панавира на функцию
сердечной мышцы, заключающееся в увеличении систолического показателя и частоты
сердечных сокращений. Обратимость указанных изменений отмечалась к 30 суткам
наблюдения.
Хроническое применение Панавира в более низких дозах (40 мг/кг и 4 мг/кг) не вызывало
качественных и количественных изменений в показателях электрокардиограмм животных.
Панавир в "остром опыте" вызывал незначительное увеличение артериального давления
собак при применении в однократной дозе 0,08 мг/кг, превышающей терапевтическую
дозу в 4 раза.
5. Влияние Панавира на функцию мочевыделительной системы
Изучение проводили в опытах по острой токсичности на собаках и в опытах по
хронической токсичности на крысах и собаках. При 7-кратном внутрибрюшинном
ежедневном применении Панавира крысам было установлено, что препарат не влияет на
функцию почек, о чем говорят результаты функциональных исследований почек и данные
биохимических анализов сыворотки крови крыс и собак. При однократном и
многократном внутривенном применении Панавира собакам также не было выявлено
влияния препарата на функцию почек.
6. Влияние Панавира на ЦНС
Влияние Панавира на ЦНС оценивали в опытах по изучению острой токсичности на
мышах, крысах и собаках. Поведенческие реакции животных оценивали сразу после
введения препарата и в течение всего срока наблюдения. При применении препарата в
летальных и высоких токсических дозах, превышающих терапевтические дозы Панавира в
140-4500 раз, отмечали вялость, гиподинамию, атаксию, позу "ежа", снижение
эмоциональных реакций, изменение "рефлекса позы". Влияния Панавира в более низких
дозах (низких токсических и нетоксических) на поведенческие реакции животных не
выявлено.
Заключение
При исследовании хронической токсичности Панавира установлены три уровня
токсических доз препарата для крыс и собак, характеризующие его токсичность при
многократном применении: низкие токсические дозы (НТД), высокие нетоксические дозы
(ВНТД) и нетоксические дозы (НД).
Проведенные исследования по хронической токсичности показали, что Панавир в низких
токсических дозах (НТД) вызывает побочное и токсическое действие на периферическую
кровь (увеличение числа лейкоцитов, уменьшение времени начала свертывания крови).
Зафиксированнаяэозинофилия является основным проявлением побочного действия
Панавира при многократном применении. Препарат в низких токсических дозах (НТД)
также оказывает влияние на сердце (увеличение систолического показателя и частоты
сердечных сокращений).
Анализируя полученные данные по токсичности Панавира необходимо отметить
обратимость токсических проявлений. Функциональная обратимость токсического и
побочного действия на органы и ткани составляет 30-60 дней.
Полученные критерии количественной токсичности Панавира при однократном и
многократном применении стали основой для определения кумулятивных свойств
препарата.
Индекс кумуляции Панавира при расчете по данным количественной токсичности при
внутрибрюшинном применении (для крыс) составляет -11,3%, а при расчете по критериям
количественной токсичности при внутривенном введении (для собак) - 4,08%.
Сопоставляя полученные данные по разным видам животных и разным путям применения
препарата, можно определенно сказать, что Панавир не обладает кумулятивными
свойствами, и его токсическое и побочное действие при внутрибрюшинном и
внутривенномприменении имеет обратимый характер.
При оценке количественной токсичности Панавира на разных видах животных
необходимо отметить, что проявления токсического действия Панавира возможны лишь
при применении его животным в дозах, превышающих оптимальные терапевтические в
140-4500 раз. Величины токсических доз зависят от вида животных. Выявлено, что
наиболее чувствительным видом животных к действию Панавира при внутривенном
применении при расчете доз препарата на массу тела являются собаки (ВТД=МПД=90
мг/кг), а наименее чувствительными - мыши (МПД=LD10=580 мг/кг). При пересчете доз
препарата на поверхность тела мыши и собаки при внутривенном введении Панавира
обладают практически одинаковой чувствительностью (МПД=LD10 длямышей =1740 мг/м2;
ВТД=МПДдля со6ак=1800 мг/м2).
'
Коэффициент видовой чувствительности (КВЧ) определен как отношение МПД для
мышей к МПД (ВТД) для собак при однократном внутривенном введении Панавира. Это
отношение, величины доз которого взяты в мг/кг массы тела, равно 6,4, что соответствует
умеренным различиям в видовой чувствительности животных к препарату. Однако, при
расчете КВЧ с учетом поверхности тела животных (мг/м2) его величина составляет 1,03,
что соответствует невыраженным различиям в чувствительности к ПанавирУ разных
видов животных. Полученные результаты показывают, что ожидать особую
чувствительность человека к Панавиру, нет оснований.
Оценивая внутрибрюшинное применение Панавира животным (мыши, крысы), можно
констатировать наличие местнораздражающего действия препарата. Проведенные
исследования, однако, показали, что местнораздражащее действие при внутрибрюшинном
применении макроскопически выявляется при применении препарата только в
концентрациях более 0,5%. В связи с наличием местнораздражающего действия Панавира
его клиническое применение при введении в брюшную полость не рекомендуется.
Учитывая данные по количественной токсичности, а также дозовый уровень токсического
действия, Панавир по степени опасности можно классифицировать как малоопасный
препарат (степень токсичности по ГОСТу 12.1.00.7.76 - IV).
Исследование репродуктивной токсичности Панавиравключало выявление
возможного эмбриотоксического действия Панавира, его влияния на постнатальное
развитие потомства и репродуктивную (генеративную) функцию животных.
В результате проведенных исследований было установлено, что Панавир при
внутрибрюшинном введении в дозах 0,02 мг/кг и 2,0 мг/кг во время беременности не
изменяет общего состояния и поведения животных. Прирост массы крыс в различные
сроки беременности не отличался от контрольных значений. Панавир не изменял
показателей спонтанной пред- и постимплантационной эмбриональной гибели. Масса
тела и размер плодов, подвергнутых антенатальному воздействию панавира в дозах 0,02
мг/кг и 2,0 мг/кг, были близки к контрольным значениям. Панавир в изучаемых дозах не
вызывал аномалий развития внутренних органов и дефектов скелета.
Панавир в дозе 2,0 мг/кг при введении крысам с 6 дня беременности до родов не оказывал
существенного влияния на физическое развитие и поведение крысят в течение
двухмесячного периода наблюдения. Наблюдаемые отклонения находились в пределах
колебаний исторического контроля.
Панавир в дозах 0,02 мг/кг и 2,0 мг/кг в опытах на самках и самцах не влиял на
способность животных к спариванию и оплодотворению. Наблюдения за развитием
потомства в течение месяца не выявили существенных различий в поведении и
показателях гибели контрольных и подопытных крысят. Масса крысят, из пометов от
самок и самцов, получавших препарат до спаривания, несколько превышала контрольные
показатели.
Заключение
В результате проведенных исследований установлено, что Панавир в дозах 0,02 мг/кг и
2,0 мг/кг не обладает эмбриотоксическим и тератогенным действием.
Панавир в использованных дозах не оказывает существенного влияния на постнатальное
развитие потомства, способность к спариванию и оплодотворению и репродуктивную
функцию самок и самцов крыс.
Изучение токсичности Панавирана неполовозрелых животных проведено при
однократном внутривенном введении крысятам («острая» токсичность) и длительном
введении крольчатам («подострая» токсичность).
При внутривенном введении субстанции Панавира крысятам в дозах 1500 и 2000 мг/кг не
отмечали симптомов «острой» интоксикации. На протяжении всего периода наблюдения
гибель животных не зарегистрирована, в связи с чем не удалось установить параметры
«острой» токсичности препарата.
Внутривенное введение крысятам более высоких доз Панавира было невозможно изза ограниченности объема введения.
Максимальная введенная доза препарата – 2000 мг/кг, приблизительно в 300000 раз
превышала суточную терапевтическую.
Таким образом, субстанция Панавира проявляет низкую токсичность при однократном
внутривенном введении крысятам двухнедельного возраста.
В условиях подострого эксперимента Панавир в виде готовой лекарственной формы 0,004% раствор для инъекций, изучали в условиях 14-дневного внутривенного
ежедневного введения крольчатам двухмесячного возраста в дозах 14 мкг/кг - IIгруппа и
28мкг/кг - III группа (2- и 4-кратные суточные терапевтические для ребенка массой тела
25-30 кг). Контролем (I группа) служили крольчата, получавшие внутривенно
эквивалентные дозы стерильного раствора NaCl. В каждой группе было по 5 животных.
Как показали проведенные исследования, ежедневное введение препарата не
изменяло основные интегральные показатели животных: поведение, двигательную
активность, аппетит, суточное потребление воды и корма, состояние шерстного покрова.
Крольчата, получавшие Панавир в испытанных дозах, прибавляли в массе тела
несколько больше, чем в контроле.
При ежедневном визуальном осмотре места инъекции препарата не отмечено
признаков раздражения вены у крольчат всех экспериментальных групп.
На протяжении подострого эксперимента не зарегистрировано гибели
экспериментальных животных I – III групп.
14-дневное внутривенное введение Панавира не влияло на гематологические
показатели периферической крови крольчат (количество эритроцитов, тромбоцитов,
содержание гемоглобина, гематокрит, среднее эритроцитов, ширина распределения
эритроцитов по объему, гемограммы). Необходимо отметить относительное увеличение
количества лейкоцитов у крольчат, получавших максимальную дозу Панавира по
сравнению с контролем, а также появление плазматических клеток у 2-х крольчат во II
группе и у 1-ого в III группе при подсчете гемограмм (на 100 просчитанных
лейкоцитов), что возможно связано с иммуномодулирующими свойствами препарата
Панавир.
Внутривенное введение Панавира не вызывало изменений уровня общего белка,
альбуминов, общего билирубина, общего холестерина и глюкозы. Панавир в испытанных
дозах снижал уровень мочевины и креатинина по сравнению с контролем, что, возможно,
связано с его гипоазотемическим действием.
14-дневное внутривенное введение Панавира несколько увеличивало активность
щелочной фосфатазы и аспартаттрансаминазы у крольчат III группы по сравнению с
контролем. Активность аланинтрансаминазы у животных всех экспериментальных групп
не имела статистически достоверных различий.
ЭКГ- исследования, проведенные в конце эксперимента, выявили, статистически
достоверное удлинение интервала R-R и урежение частоты сердечных сокращений по
сравнению с контролем под действием препарата в дозе 14 мкг/кг. Аналогичные
изменения параметров ЭКГ были зарегистрированы и у крольчат, получавших Панавир в
дозе 28 мкг/кг, однако они не были статистически значимы.
При патогистологическом исследовании внутренних органов крольчат, получавших
Панавир в обеих испытанных дозах, выявлена активизация имуннокомпетентных органов
(селезенка и тимус), более выраженная при введении Панавира в дозе 14 мкг/кг.
Полученные результаты свидетельствуют об иммуномодулирующем действии препарата.
Не установлено токсического действия Панавира в дозах 14 и 28 мкг/кг на сердце, легкие,
почки, желудок, поджелудочную железу, тонкий кишечник, надпочечники. Длительные
внутривенные инъекции Панавира в дозах 14 и 28 мкг/кг вызывают незначительную
очаговую дистрофию печени с признаками регенерации.
Учитывая, что Панавир в дозе 28 мкг/кг вызывает изменения в структуре печени и
тимуса, следует считать указанную дозу пороговой по токсическому действию.
По картине патогистологического изучения длительное внутривенное введение
Панавира не вызывает флебитов.
Таким образом, проведенные исследования свидетельствуют, что Панавир
проявляет низкую токсичность как при однократном, так и при длительном внутривенном
введении и может быть рекомендован для применения в педиатрии.
Изучение общетоксического действия Панавира на новорожденных животных
(крысятах) показало, что в условиях подострого эксперимента на новорожденных
крысятах 3-дневного возраста при ежедневном внутрибрюшинном введении в течение 14
дней готовой лекарственной формы Панавира (стерильный раствор в ампулах по 200 мкг в
5 мл) в дозе 400 мкг/кг (10-кратная терапевтическая для новорожденного ребенка
массой тела 5 кг) установлена его хорошая переносимость и отсутствие влияния на
общее состояние и поведение животных, а также на гематологические показатели.
Длительные внутрибрюшинные инъекции Панавира в дозе 400 мкг/кг вызывают
функциональные нарушения печени и не оказывают повреждающего действия на сердце,
легкие, почки, поджелудочную железу, селезенку, надпочечники, органы желудочнокишечного тракта (по показателям биохимических тестов и данных патоморфологических
исследований).
Панавир в испытанной дозе вызывает активизацию функции тимуса при стабильности
структуры селезенки, что свидетельствует об иммуномодулирующем действии препарата.
Результаты проведенных исследований позволяют рекомендовать Панавир в
лекарственной форме суппозитории ректальные 200 мкг у новорожденных.
4.2 Фармакологические свойства Панавира
Экспериментальное изучение противовоспалительного действия Панавира
Оценку специфического противовоспалительного действия Панавира проводили на
трёх экспериментальных моделях: модели экссудативного отёка стопы крыс на
каррагенан, согласно Методическим указаниям по изучению новых нестероидных
противовоспалительных препаратов, утверждённым Фармакологическим комитетом в
2000 году; модели конканавалин А – индуцированного воспаления у мышей, согласно
Методическим указаниям по оценке аллергизирующих свойств фармакологических
веществ, утверждённым Фармакологическим комитетом в 2005 году и модели
хронического пролиферативного воспаления у крыс, согласно Методическим указаниям
по изучению новых нестероидных противовоспалительных препаратов, утверждённым
Фармакологическим комитетом в 2005 году.
Модель экссудативного отёка стопы крыс на каррагенан используется для
определения ингибиторов циклооксигеназы. В данной модели отёк развивается в
результате последовательного выделения ряда провоспалительных медиаторов –
гистамина, 5-окситриптамина, кинина и простагландинов.
Модель конканавалин А – индуцированного воспаления у мышей используется для
регистрации у изучаемых соединений противовоспалительного действия различного
генеза. Реакция воспаления на конканавалин А (псевдоаллергическая реакция) основана
на способности конканавалина А - неспецифически, т.е. без участия реагинов с
аллергенами, в результате прямого действия на рецепторы мембран тучных клеток и
базофильных лейкоцитов,- высвобождать медиаторы воспаления (гистамин, серотонин,
лейкотриены и др.).
Модель хронического пролиферативного воспаления у крыс используется для
оценки влияния исследуемого соединения на интенсивность экссудативного и
пролиферативного воспалительных процессов различной этиологии.
В качестве эталонного препарата с выраженной противовоспалительной
активностью, для всех трёх моделей был выбран диклофенак натрия. Использовался
лекарственный препарат Диклофенак (Хемофарм) в форме раствора для инъекций.
Противовоспалительное действие диклофенака натрия основано на
неизбирательном угнетении циклооксигеназы 1 и 2, в результате которого блокируются
реакции арахидоновогокаскада и нарушается синтез простагландинов E2 и F2α,
тромбоксанаA2, простациклина, лейкотриенов и выброс лизосомальных ферментов в очаге
воспаления.
В экспериментах использовались нелинейные крысы-самцы, массой 200-250г
(модель хронического пролиферативного воспаления) и 150-200г (модель экссудативного
отёка на каррагенан), и мыши-самцы линии СВА массой 18-20г (модель конканавалин А –
индуцированного воспаления) после двухнедельного карантина в виварии. Животных
содержали в стандартных условиях со свободным доступом к корму и воде. В качестве
основного корма использовались специализированные брикетированные
гранулированные корма фирмы «МЭСТ».
Подготовка первичных данных к статистической обработке и расчёты проводились
в среде пакета статистических программ (PSP) STATISTICA (версия 6.0) для WINDOWS.
Результаты статистической обработки показателя были представлены в виде средней
арифметической и её средней ошибки. Достоверность различий оценивалась по tкритерию Стьюдента.
В эксперименте на модели экссудативного отёка на каррагенан исследовались
четыре опытные группы и одна контрольная. За 60 минут до введения каррагенана
животным вводили внутрибрюшинно: 1 группе – Панавир в дозе 0,02 мг/кг; 2 группе –
Панавир в дозе 0,5 мг/кг; 3 группе – Панавир в дозе 2,5 мг/кг; 4 группе – диклофенак
натрия в дозе 6,75 мг/кг, что в пересчёте на крыс по E.J.Freirechetal.[…] соответствует
суточной дозе для человека – 75 мг. Контрольной группе аналогично вводили
физиологический раствор. Через час всем животным в подушечку правой задней стопы
вводили 0,1 мл 1% раствора каррагенана (Sigma), а в подушечку левой задней стопы
(контроль) 0,1 мл физиологического раствора. Далее, в течение 5 часов у всех животных
каждый час измеряли микрометром отёк стоп задних конечностей. Через 5 часов опыта,
сразу после забоя животных, стопы обеих задних лап отрезали по линии голеностопного
сустава и оценивали выраженность острого экссудативного воспаления по разнице масс
опытной и контрольной лап.
Выраженность воспалительной реакции в контрольной группе достигала
максимума на 2-3 час эксперимента и затем незначительно снижалась. В 4 группе
(диклофенак) максимум реакции приходился на 1-2 час и затем выраженность отёка резко
снижалась. В 1 группе (Панавир 0,02 мг/кг) максимум реакции достигался к 1 часу
эксперимента и по выраженности совпадал с контролем, а затем медленно снижался. В
третьей (Панавир 0,5 мг/кг) и четвёртой (Панавир 2,5 мг/кг) группах максимум также
достигался к 1 часу, но был достоверно менее выражен, чем в 4 группе (диклофенак), а
затем выраженность реакции плавно снижалась, достигая к окончанию эксперимента тех
же значений, что и в 4 группе.
Дополнительно воспалительная реакция оценивалась по индексу реакции острого
экссудативного воспаления через 5 часов после введения каррагенана. Индекс
рассчитывался делением разности средних масс правых (опытных) и левых (контрольных)
лап на среднюю массу контрольных лап.
Для контроля и 1 группы (Панавир 0,02 мг/кг) индексы были сопоставимы (40,0% и
40,9% соответственно), так же как сопоставимы были вдвое меньшие индексы третьей
(Панавир 2,5 мг/кг) и четвёртой (диклофенак) групп (19,1% и 19,6% соответственно).
Индекс 2 группы (Панавир 0,5 мг/кг) занимал промежуточное положение (23,8%).
Эксперимент показал выраженный дозозависимый противовоспалительный эффект
Панавира, сопоставимый с действием диклофенака.
В эксперименте на модели конканавалин А – индуцированного воспаления также
исследовались четыре опытные группы и одна контрольная. За 60 минут до введения
конканавалина А животным первых трёх опытных групп вводили Панавир внутривенно: 1
группе – в дозе 0,02 мг/кг; 2 группе – в дозе 0,5 мг/кг; 3 группе – в дозе 2,5 мг/кг. А 4
группе вводили диклофенак натрия внутримышечно в дозе 6,75 мг/кг, что в пересчёте на
крыс по E.J.Freirechetal. соответствует суточной дозе для человека – 75 мг. Контрольной
группе внутривенно вводили физиологический раствор. Через час всем животным в
подушечку правой задней стопы вводили 0,02 мл 5мг/мл раствора конканавалина А, а в
подушечку левой задней стопы (контроль) 0,02 мл физиологического раствора. Через 1
час после введения конканавалина А животных забивали, стопы обеих задних лап
отрезали по линии голеностопного сустава и оценивали выраженность острого
экссудативного воспаления по Индексу реакции острого экссудативного воспаления.
Индекс рассчитывался делением разности средних масс правых (опытных) и левых
(контрольных) лап на среднюю массу контрольных лап.
Внутривенное введение Панавира в дозах 0,02 мг/кг, 0,5 мг/кг и 2,5 мг/кг
приводило к подавлению конканавалин А – индуцированной воспалительной реакции на
41,6%, 47,5% и 52,5% соответственно. Для четвёртой опытной группы (диклофенак)
индекс составил 38,4%
Эксперимент показал выраженный дозозависимый противовоспалительный эффект
Панавира, сопоставимый и превышающий соответствующее действие диклофенака.
В эксперименте на модели хронического пролиферативного воспаления аналогично
исследовались четыре опытные группы и одна контрольная.Хроническое
пролиферативное воспаление вызывали подкожным вживлением двух ватных шариков
массой 10 мг в межлопаточную область спины. Операция проводилась в асептических
условиях под лёгким эфирным наркозом.
Животным первой опытной группы в день операции однократно внутривенно
вводили Панавир в дозе 0,5 мг/кг. Животным второй и третьей опытных групп ежедневно
в течение 7 дней, начиная со дня операции, вводили Панавир внутримышечно: 2 группе –
в дозе 0,02 мг/кг; 3 группе – в дозе 0,5 мг/кг. Четвёртой опытной группе ежедневно в
течение 7 дней, начиная со дня операции, внутримышечно вводили диклофенак натрия в
дозе 6,75 мг/кг, что в пересчёте на крыс по E.J.Freirechetal. соответствует суточной дозе
для человека – 75 мг. Контрольной группе внутримышечно вводили физиологический
раствор. На 8 день после операции ватные шарики с образовавшейся вокруг них
грануляционной тканью извлекали, взвешивали на электронных весах и высушивали при
температуре 70°С в течение суток, после чего вновь взвешивали.
Пролиферативную реакцию оценивали по разнице между массой высушенной
гранулёмы и исходной массой ватного шарика. Экссудативную реакцию оценивали по
разнице между массой сырой и высушенной гранулёмы.
Зарегистрировано подавление экссудативной реакции по сравнению с контролем: в
1 группе на 34,5%, во 2 группе на 39,2%, в 3 группе на 34,7%. В группе препарата
сравнения (группа 4, диклофенак) экссудативная реакция подавлялась на 41%.
Пролиферативная реакция подавлялась (по сравнению с контролем) на 43% в
первой группе, на 51% - во второй и на 43,8% - в третьей. В группе препарата сравнения
(группа 4, диклофенак) пролиферативная реакция подавлялась на 53%.
Таким образом, в исследовании установлен выраженный противовоспалительный
эффект Панавира на модели хронического пролиферативного воспаления, сравнимый с
аналогичным действием диклофенака. Максимальный противоспалительныйэффект
Панавира в отношении экссудативного и пролиферативного компонентов хронического
воспаления достигнут при ежедневном внутримышечном введении Панавира в дозе 0,02
мг/кг.
Результаты проведённых экспериментов убедительно доказывают наличие у Панавира
выраженного дозозависимого противовоспалительного действия, по-видимому, не
связанного с ингибированием циклооксигеназы.
Экспериментальное изучение жаропонижающего действия Панавира
Оценку специфического жаропонижающего (антипиретического) действия
Панавира проводили на экспериментальной модели «дрожжевой лихорадки», вызываемой
подкожным введением пекарских дрожжей, согласно Руководству по экспериментальному
(доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, утверждённому
Фармакологическим комитетом в 2005 году.
Уменьшение лихорадочной реакции под воздействием препаратов связано, по
современным представлениям, с ингибированием биосинтеза простагландинов в головном
мозге, либо с их взаимодействием с рецепторными образованиями , в частности, в тканях
центральной нервной системы (термочувствительные нейроны в гипоталамусе). При
этом,антипиретические свойства препаратов отражают их способность проникать в мозг,
т.е. зависят от фармакокинетических характеристик.
В качестве эталонного препарата сравнения с выраженной жаропонижающей
активностью, был выбран диклофенак натрия. Использовался лекарственный препарат
Диклофенак (Хемофарм) в форме раствора для инъекций.
В эксперименте использовались крысы-самцы линии Wistar, массой 150-175г после
двухнедельного карантина в виварии. Животных содержали в стандартных условиях со
свободным доступом воде и однократным кормлением в течение суток. В качестве
основного корма использовались экструдированные гранулы комбикорма рецепта ПК-120.
Экспериментальную гипертермию вызывали введением экзогенногопирогена. В
качестве пирогена использовали 20% суспензию пекарских дрожжей. Пироген вводили
подкожно в дозе 1мл/100г массы тела.Выраженность гипертермии регистрировали
методом измерения температуры электрическим термометром в прямой кишке на глубине
2-3 см.
Пик гипертермии достигался через 18 часов после введения пирогена. Препарат
вводился животным на пике гипертермии однократно. Животным первой и второй
опытных групп внутрибрюшинно вводился Панавир в дозах 0,02 мг/кг и 2,5 мг/кг
соответственно. Третьей опытной группе внутримышечно вводили диклофенак натрия в
дозе 6,75 мг/кг, что в пересчёте на крыс по E.J.Freirechetal. соответствует суточной дозе
для человека – 75 мг. Контрольной группе внутрибрюшинно вводилось соответствующее
количество физиологического раствора. Контрольные измерения температуры
проводились на 30, 60, 120, 180 и 240 минутах от момента введения препарата.
Жаропонижающие свойства оценивали по способности оказывать гипотермический
эффект в сравнении с контролем.
Подготовка первичных данных к статистической обработке и расчёты проводились
в среде пакета статистических программ (PSP) STATISTICA (версия 6.0) для WINDOWS.
Результаты статистической обработки показателя были представлены в виде средней
арифметической и её средней ошибки. Достоверность различий оценивалась по tкритерию Стьюдента.Различия считали достоверными при вероятности ошибки (p) менее
0,05.
Исходная температура в группах в среднем была одинаковой и составляла 36,336,5°C. На пике экспериментальной лихорадки – 38,1-38,3°C.В контрольной группе
температура в течение эксперимента незначительно снижалась (до 37,5°C к исходу 240
минут), тем не менее оставаясь высокой.
В 1 и 2 опытных группах уже через 30 минут отмечалось уменьшение пирогенной
реакции. Гипотермическое действие наблюдалось в течение всего эксперимента. В 1
группе (Панавир 0,02 мг/кг) температура снижалась на 0,3-0,9°C в час, во 2 группе
(Панавир 2,5 мг/кг) - на 0,4-1,2°C в час.
В группе препарата сравнения (3 опытная группа, диклофенак) температура
снижалась сопоставимо со 2 группой в течение первых двух часов, а затем – более
динамично с выходом к моменту окончания эксперимента на исходные значения.
Таким образом, Панавир показал на модели «дрожжевой лихорадки» выраженный
жаропонижающий эффект, сравнимый с эффектом диклофенака, но в отличие от него «мягкого» типа. Купируя пирогенную реакцию и плавно приближая исходно повышенную
температуру тела животных к норме, Панавир выгодно отличается от диклофенака,
критически резко снижающего температуру и, тем самым, провоцирующего сосудистый
коллапс за счёт резкого падения общего периферического сопротивления.
Экспериментальное изучение анальгетического действия Панавира.
Оценку специфического анальгетического действия Панавира проводили на пяти
экспериментальных моделях: теста отдёргивания хвоста – «TailFlick», теста горячей
пластины – «HotPlate», регистрации ноцицептивногофлексорного рефлекса, нейрогенного
болевого синдрома, острой и тонической боли при воспалении (формалиновая модель).
Тест отдёргивания хвоста (TailFlick) позволяет оценить особенности регуляции
болевой чувствительности на уровне сегментарных отделов спинного мозга.
Тест горячей пластины (HotPlate) позволяет оценить особенности регуляции
болевой чувствительности на уровне центральных структур мозга.
Регистрация ноцицептивногофлексорного рефлекса используется для оценки
болевой чувствительности.
Моделирование нейрогенного болевого синдрома позволяет оценить
интенсивность нейропатического болевого синдрома по выраженности аутотомий.
Модель острой и тонической боли показывает уровни ноцицептивной системы, на
которых действует обезболивающий препарат.
В эксперименте использовались крысы-самцы линии Wistar, массой 220-250г после
двухнедельного карантина в виварии. Животных содержали в стандартных условиях со
свободным доступом к корму (стандартная диета ГОСТ Р50258-92) и воде, а также с
естественной сменой светового режима.
Подготовка первичных данных к статистической обработке и расчёты проводились в
среде пакета статистических программ (PSP) STATISTICA (версия 6.0) для WINDOWS.
Результаты статистической обработки показателя были представлены в виде средней
арифметической и её средней ошибки. Достоверность различий оценивалась по tкритерию Стьюдента.Различия считали достоверными при вероятности ошибки (p) менее
0,05.
В тесте «отдёргивания хвоста» исследовались три опытных и одна контрольная
группы. Опытным группам однократно внутрибрюшинно вводили Панавир в дозе 0,05
мг/кг, 0,5 мг/кг и 2,5 мг/кг соответственно. Контрольной группе внутрибрюшинно
вводили физиологический раствор в соответствующем объёме. Болевую реакцию
вызывали сфокусированным на хвост экспериментального животного пучком света.
Время появления болевой реакции (латентный период) фиксировалось по отдёргиванию
хвоста животного. Латентный период болевой реакции оценивался до введения препарата
и через 10 минут, 30 минут, 1 час, 24 часа и 48 часов после введения препарата.
В тесте «горячей пластины» также исследовались три опытных и одна контрольная
группы. Опытным группам однократно внутрибрюшинно вводили Панавир в дозе 0,05
мг/кг, 0,5 мг/кг и 2,5 мг/кг соответственно. Контрольной группе внутрибрюшинно
вводили физиологический раствор в соответствующем объёме. Болевую реакцию
вызывали помещением экспериментального животного на металлическую пластину,
нагретую до 55°C. Время появления болевой реакции (латентный период) фиксировалось
по появлению реакции облизывания задних лап. Латентный период болевой реакции
оценивался до введения препарата и через 10 минут, 30 минут, 1 час, 24 часа и 48 часов
после введения препарата.
Тесты показали, что Панавир в дозе 0,05 мг/кг не вызывал анальгезии.
Повышение порога болевой чувствительности в тесте «отдёргивания хвоста»
фиксировалось уже на 10 минуте и имело дозозависимую продолжительность (при 0,5
мг/кг – сутки, а при 2,5 мг/кг – двое суток, соответственно).
В тесте же «горячей пластины» достоверного анальгетического эффекта выявлено не
было.
Эксперименты показали, что анальгетический эффект Панавира реализуется на уровне
периферических болевых рецепторов, не затрагивая высшие интегративные центры
восприятия боли.
В модели влияния на ноцицептивныйфлексорный рефлекс, исходя из данных,
полученных в тестах «отдёргивания хвоста» и «горячей пластины» исследовались две
опытных группы. Первой однократно внутрибрюшинно вводился Панавир в дозе 0,5
мг/кг, а второй - 2,5 мг/кг.
У животных под этаминал-натриевым наркозом (40 мг/кг) регистрировали,
используя биполярные игольчатые электроды, биоэлектрическую активность в двуглавой
мышце бедра в ответ на болевое раздражение током силой 15мА рецепторного поля
икроножного нерва. Ноцицептивныйфлексорный рефлекс исследовали до и после
введения Панавира.
Биоэлектрическая активность в двуглавой мышце бедра в ответ на болевое
раздражение током состояла из двух компонентов: раннего, возникающего с латентным
периодом 25±13,6мс и позднего, с латентным периодом 296±76мс.
Возникновение раннего компонента ноцицептивногофлексорного рефлекса
связывают с активацией А-дельта миелинизированных афферентов, а позднего – с
активацией немиелинизированных С волокон.
Введение Панавира не оказало влияния на ранний компонент рефлекса, но
практически сразу (через 5 минут) вызвало достоверное повышение порога позднего
компонента. Уровень повышения порога возникновения рефлекса оказался
дозозависимым (11,4±2,6мА для первой группы и 12,8±4,2мА для второй).
Продолжительность эффекта от дозы не зависела.
В эксперименте с моделированием нейрогенного болевого синдрома животным
перерезали седалищный нерв на уровне подколенной ямки в месте его трифуркации с
последующим лигированием для предотвращения регенерации. Развитие болевого
синдрома определяли по появлению признаков аутотомий на оперированной лапе.
Исследовались две опытных группы. Первой Панавир вводился в дозе 0,5 мг/кг, а второй 2,5 мг/кг. Животным контрольной группы вводился физиологический раствор в
количестве 1 мл.
Препарат вводился внутрибрюшинно в день перерезки седалищного нерва, а также
на 4 и 8 дни после операции. Наблюдение продолжалось 28 дней.
Интенсивность аутотомий оценивалась по 11-ти балльной шкале.
Аутотомии у крыс контрольной группы появились на 4 день эксперимента и к 28
дню отмечены у 50% животных. Схожая динамика отмечалась в первой опытной группе
(Панавир в дозе 0,5 мг/кг). Во второй группе (Панавир в дозе 2,5 мг/кг) аутотомии
появились на 20-й день и к 28 дню были отмечены лишь у 10% животных. Также, у
второй группы было отмечено и снижение интенсивности нейрогенного болевого
синдрома.
В эксперименте на модели острой и тонической боли была применена классическая
формалиновая модель воспаления. Для создания очага воспаления использовали
подкожную инъекцию 50 мкл 5% раствора формалина в подошву правой задней
конечности экспериментального животного. Клиническая картина развития боли после
введения в лапу формалина характеризовалась наличием двух фаз: короткой (острая боль)
и длительной (тоническая боль). Между фазами существовал интервал, в течение которого
болевые реакции отсутствовали. Количественно первая фаза оценивалась суммарным
количеством отдёргиваний лапы от пола и держанием её на весу в течение каждой минуты
за первые пять минут эксперимента (проявление ноцицептивногофлексорного рефлекса).
Через пять минут наступал безболевой период продолжительностью 15 минут. Вторая
фаза оценивалась суммарной длительностью вылизываний и выкусываний правой задней
конечности (в которую был введён формалин) за минуту в каждый 5-и минутный отрезок
времени от момента наступления второй фазы и до истечения 60 минут после инъекции
формалина.
Исследовалось пять групп животных. 1 группе внутрибрюшинно вводился Панавир
в дозе 0,02 мг/кг; 2 группе – Панавир в дозе 0,5 мг/кг; 3 группе – Панавир в дозе 2,5 мг/кг;
4 группе – диклофенак натрия в дозе 6,75 мг/кг, что в пересчёте на крыс по E.J.Freirechetal.
соответствует суточной дозе для человека – 75 мг. Контрольной группе аналогично
вводили физиологический раствор. Препарат вводился за 20 минут до инъекции
формалина.
В 4 группе (диклофенак) было продемонстрировано значительное снижение
болевой чувствительности в обеих фазах. В первой и второй опытных группах Панавир
достоверно оказал влияние лишь на первую фазу развития воспалительной боли. В 3
группе (Панавир 2,5 мг/кг) было отмечено снижение болевых проявлений и во вторую
фазу.
Первую фазу развития болевой реакции на воспаление связывают с активирующим
воздействием на А-дельта (миелиновые) и С (немиелинизированные) ноцицепторы
посредством активации семейства Transientreceptorpotential (TRP) каналов, повышающих
проницаемость мембран для ионов кальция, калия и натрия. Доказано, что прямая
активация ноцицепторов формалином осуществляется через TRPA1-каналы. Возможно,
Панавир блокирует TRP-каналы, расположенные преимущественно на Сполимодальныхноцицепторах. Эффект же диклофенака в этой фазе связан с
ингибированием синтеза простагландинов в ответ на повреждающее действие формалина.
Торможение высокой дозой Панавира (2,5 мг/кг) второй фазы боли
свидетельствует о дозозависимом влиянии Панавира на чувствительность центральных
ноцицептивных нейронов. Влияние НПВП (диклофенак) на эту фазу боли обусловлено
повышением эффективности возвратного торможения ноцицептивных нейронов за счёт
блокирования циклооксигеназы в дорзальных рогах спинного мозга.
Таким образом, эксперименты по изучению анальгетической активности Панавира
показали его высокую эффективность на уровне периферической болевой рецепции, по
силе сравнимую с диклофенаком, но имеющую иную гистохимическую природу, а также
дозозависимое воздействие на центральные механизмы восприятия боли, природа
которого пока не установлена.
Изучение специфического воздействия Панавира на заживление экспериментальной
язвы желудка.
Оценку воздействия Панавира на процессы заживления язвы желудка проводили на
модели язвы желудка, вызванной аппликацией уксусной кислотой по методике Okabe
(1971г.)
Предложенная экспериментальная модель позволяет проводить изучение действия
лекарственных препаратов на процесс заживления «острой» и «хронической» язвы
желудка. Этиологически, данная модель не имеет ничего общего с язвенной болезнью,
однако даёт возможность динамического изучения её морфологического субстрата, т.к.
удовлетворительно воспроизводит морфологическую картину хронической язвы человека.
Удобство данной модели состоит в том, что язва возникает у 100% экспериментальных
животных и место её локализации всегда идентифицируемо. Кроме того, эта модель
позволяет изучать самые ранние (предъязвенные) изменения и наиболее адекватно
воспроизводит механизм первичного повреждения глубжележащих слоёв и вторичного
повреждения слизистой оболочки. При моделировании язвы в условиях методики
Okabeнаблюдаются как непосредственное повреждение мышечных и подслизистого слоёв
стенки желудка, так и вторичные её изменения за счёт нарушения кровообращения (стазы
и тромбозы сосудов). Поражение слизистой оболочки желудка при этом возникает позже,
чем поражение более глубоких слоёв. Аналогичная последовательность описана и на
клиническом материале. Таким образом, экспериментально формируется язва, весьма
напоминающая язву желудка человека, с характерными для неё слоями Ашкенази, что
позволяет использовать её для изучения различных методов терапии.
В эксперименте использовались крысы линии Wistar обоего пола, массой 190-210г
после двухнедельного карантина в виварии. Животных содержали в стандартных
условиях со свободным доступом к корму (стандартная диета ГОСТ Р50258-92) и воде.
В качестве эталонного препарата с выраженным заживляющим воздействием на
язву желудка был выбран лекарственный препарат солкосерил (производитель ICN, рег.
удостоверение П-8-242 №008380) в форме раствора для инъекций и ректальных
суппозиториев.
Для формирования экспериментальной язвы, у животных, под эфирным наркозом,
вскрывали переднюю брюшную стенку по белой линии живота и извлекали желудок. На
серозную оболочку передней стенки желудка в области тела накладывали специальное
кольцо с диаметром 5 мм. Внутрь кольца наносили 0,03 мл 100% уксусной кислоты. После
тридцатисекундной аппликации, место нанесения тщательно промокали фильтровальной
бумагой. Брюшную стенку зашивали послойно. За 18 часов перед операцией у животных
отнимали пищу при свободном доступе к воде. После операции животные находились на
обычном питании.
Подготовка первичных данных к статистической обработке и расчёты проводились
в среде пакета статистических программ (PSP) STATISTICA (версия 6.0) для WINDOWS.
Результаты статистической обработки показателя были представлены в виде средней
арифметической и её средней ошибки. Достоверность различий оценивалась по tкритерию Стьюдента.Различия считали достоверными при вероятности ошибки (p) менее
0,05.
В эксперименте участвовало 7 групп животных, которые были разделены на две
метагруппы по признаку пути введения препарата. В первой метагруппе препараты
(исследуемый, эталонный и контрольный) вводились животным внутривенно. Во второй –
ректально. Ректальные суппозитории расплавляли на водяной бане при t=40°C. Введение
осуществляли через зонд в толстую кишку на глубину 5-6 см.
Первое введение препаратов проводилось через 30 минут после операции.
При внутривенном введении препаратов исследовались четыре группы животных.
Первой и второй опытным группам вводился Панавир в дозе 15 мкг/кг и 30 мкг/кг
соответственно, двукратно: в день операции и через 48 часов. Третьей опытной группе
ежедневно в течение 10 суток вводился солкосерил в дозе 85 мг/кг. Контрольной группе
аналогично вводился физиологический раствор. Забой животных осуществлялся по
истечении 10 суток после операции.
При ректальном пути введения препаратов исследовались три группы животных.
Первой опытной группе вводился Панавир в дозе 500 мкг/кг ежедневно в течение 7 дней.
Второй опытной группе ежедневно в течение 7 суток вводился солкосерил в дозе 850
мг/кг. Контрольной группе аналогично вводился физиологический раствор. Забой
животных осуществлялся по истечении 7 суток после операции.
Эффективность заживляющего действия на экспериментальную язву желудка
оценивали расчётом язвенного индекса (площади повреждения, выраженной в см2).
Для внутривенного пути введения препаратов установлено, что Панавир
статистически значимо снижает язвенный индекс в 2-3 раза по сравнению с контролем,
причём более высокая доза оказывает более значимое воздействие (ЯИ = 0,060±0,006 для
дозы 15 мкг/кг и ЯИ = 0,047±0,005 для дозы 15 мкг/кг). Препарат сравнения (солкосерил)
уменьшил зону поражения 1,9 раза (ЯИ = 0,072±0,006).
Таким образом, при внутривенном пути введения Панавир показал сравнимую с
солкосериломпротивоязвенную активность уже в суточной дозе 15 мкг/кг, что в 28 тысяч
раз меньше в расчёте на 10-ти дневный курс, по сравнению с солкосерилом.
При ректальном пути введения препаратов установлено, что солкосерил не оказал
заживляющего действия, а Панавир достоверно снизил язвенный индекс в 1,8 раза по
сравнению с контролем.
Эксперимент показал, что Панавир обладает выраженным противоязвенным
действием, сравнимым по эффективности с солкосерилом. Наибольший эффект
достигается при внутривенном применении Панавира.
Митогенная активность Панавира
Под митогенной активностью веществ подразумевается их способность
генерировать митозы лимфоцитов и, следовательно, стимулировать их размножение
(пролиферацию). Известно, что от количества и биологической активности лимфоцитов
зависит иммунитет, как антительный (В-лимфоциты), так и клеточный (Т-лимфоциты).
Вот почему применение веществ, обладающих митогенной активностью, может в
значительной мере способствовать стимуляции иммунитета и противодействию организма
чужеродным инфекционным агентам.
Проявление некоторыми веществами митогенной активности invitroпозволяет их
рассматривать как представителей класса иммуномодуляторов, способных стимулировать
иммунитет invivo. В современной литературе имеются сведения о проявлении
invitroиммуномодуляторных свойстввеществами растительного происхождения (3), к
которым относится и Панавир. Кроме того, имеются данные о терапевтическом эффекте
invivoвеществ, обладающих митогенным действием при некоторых вирусных инфекциях,
в частности, при DGX-инфекции (4). Одним из лабораторных критериев
иммуномодуляторного действия веществ является исследование их митогенного действия
invitroв реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ), называемой также реакцией
стимуляции пролиферативной активности лимфоцитов.
Митогенную активность Панавира исследовали классическим методом
бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) (2). Готовили культуру селезеночных мышиных
лимфоцитов (1 млн. клеток в 1мл), которую расфасовывали в лунки многолуночных
планшет. К лимфоцитам добавляли различные концентрации Панавира. Лимфоциты
выдерживали с Панавиром при +37С в течение 48 часов. Для оценки интенсивности
синтеза ДНК в лимфоцитах, в каждую лунку вводили предшественник синтеза ДНК 3Нтимидин, и образцы инкубировали при +37С в течение 3 часов. Анализировали
радиоактивность кислото-нерастворимого материала, которую просчитывали в Вспектрометре фирмы «Бекман». Результаты учитывали по абсолютным показателям
радиоактивности или по индексу стимуляции (ИС). ИС=имп.мин стимул./имп.мин.
контроль. Исследования проводились как с цельным препаратом Панавир, так и с его
отдельными фракциями. В общей сложности проведено свыше 10 исследований. Все
исследования показали четкий и воспроизводимый эффект выраженного митогенного
действия Панавира invitro. Во всех экспериментах показано также, что в диапазоне
использованных доз (до 40 мкг/мл) Панавир не токсичен для лимфоцитов.
На рисунке показана зависимость митогенной активности Панавира от концентрации.
Результаты представлены в абсолютных показателях радиактивности (имп. / мин.)
Контроль - образцы без Панавира - 500 имп./мин.
МИТОГЕННАЯ АКТИВНОСТЬ "ПАНАВИРА"
3Н радиоактивность (имп/мин)
30000
25000
20000
15000
10000
5000
0
0
2.5
5
10
20
40
концентрация "Панавира" (мкг/мл)
Заключение.
Выраженная митогенная активность Панавира в нетоксических дозах позволяет
рассматривать данный препарат как перспективный иммуномодулятор при вирусных
инфекциях, сопровождающихся снижением иммунитета.
Литература.
1. Феннер Ф. С соавт. Биология вирусных животных (1977).
2. Фримель Г. Иммунологические методы (1987).
3. Wilasrusmee C. et. Al. In vitro immunomodulatory effects of herbal products.
Am. Surg. 2002, V. 10, P.860-864.
4. Winner D.M. Mitogens for curative therapy of HIV-1 infections, an update.
Cancer Biother.Radiopharm. 2002. V. 17, P. 175-182.