Доминант-отрицательное ингибирование Са 2 + через TRPV2 уменьшает мышечную дистрофию... ВВЕДЕНИЕ
реклама
Доминант-отрицательное ингибирование Са 2 + через TRPV2 уменьшает мышечную дистрофию у животных. ВВЕДЕНИЕ Мышечная дистрофия является гетерогенным генетическим заболеванием, которое вызывает сильную дегенерацию скелетных мышц и характеризуется слабостью волокон и фиброзом, тяжелым местным воспалением и , по крайней мере, на начальном этапе, регенерацией мышц. Подмножество мышечной дистрофии обусловлено мутацией в гене, кодирующем один из компонентов дистрофин -гликопротеинового комплекса ( ДГК) (1-3), мульти- субъединицы комплекса, который связывает сарколемму с внеклеточным матриксом и актином цитоскелета (6) . Таким образом, разрушение ДГК может существенно нарушить целостность мембраны или ее стабильность во время мышечного сокращения и расслабления и предотвратить выживание миоцитов. Повышенная восприимчивость обуславливает повреждение мышечных волокон у дистрофических животных, таких как δ - саркогликан ( SG) - дефицитных BIO14.6 хомяков и дистрофиндефицитных MDX мышей, которые являются генетическим гомологом конечностно - поясной и мышечной дистрофии Дюшенна ( МДД ), соответственно. Хотя многие исследования молекулярно характеризут гены, ответственные за гистологическую патологию дистрофических тканей, мало известно о путях, с помощью которых генетические дефекты приводят к мышечной дегенерации. Ряд исследований сообщили о хроническом повышении цитозольной концентрации Ca 2 + ( [ Ca 2 + ] я ) в цитоплазме или в других органеллах скелетных мышечных волокон, или в культивируемых мышечных трубках от дистрофин-дефицитных пациентов с МДД и MDX мышей. Повышение [ Ca2 +] может активировать Ca2 + - зависимые протеазы и способствует деградации белка и некроза клеток (7-9). Некоторые пути, ведущие к увеличению [ Са 2 + ], были предположительно вовлечены в патологии мышечной дистрофии ( 10-15 ). Мы ранее определили стрейч -активированный канал, переходный рецепторный потенциал ( ПРП ) катионного канала TRPV2 , который может функционировать в патогенезе дегенерации миоцитов, вызванной нарушениями ДГК (16). Каналы ПРП образуют большое семейство катионных каналов , которые , скорее всего, функционируют в различных процессах, таких как сенсорная сигнализация (17-19 ) . Клеточная функция TRPV2 , однако, остается не охарактеризована. Мы ранее обнаружили, что TRPV2 обычно локализуются во внутриклеточных мембранных отсеках, но транслоцируется в мембране дистрофических мышечных волокон, тем самым способствуя устойчивому увеличению [ Ca 2 + ] (16). Чтобы определить взаимосвязь между активацией TRPV2 и дегенерацией мышц , и определить потенциально предотвращает ли ингибирование TRPV2 мышечную дистрофию, мы ввели мутантный TRPV2 в дистрофические мышцы, чтобы ингибировать эндогенную TRPV2 деятельность через доминантно-негативный эффект. Здесь мы сообщаем, что трансгенная (Tg) или аденовирусная экспрессия доминантно-негативного TRPV2 улучшает мышечную патологию у MDX мышей и BIO14.6 хомяков, предотвращая ненормальное содержание Ca 2 +. РЕЗУЛЬТАТЫ Характеристика доминантных отрицательных TRPV2 мутантов. Консервативные кислотные остатки в предполагаемой области пор ПРП катионных каналов , как известно, имеют решающее значение для катионной проницаемости (20,21). Мы создали три TRPV2 мутанта, заменив два весьма консервативных остатков глутамата ( Glu594 и Glu604 ) в предполагаемом регионе пор лизином, либо по отдельности, ( E594K и E604K ) или вместе (DK). TRPV2 мутанты стабильно экспрессируются в клетках яичника китайского хомячка (СНО) , что подтверждается иммуноблотом, который показал две белковых полосы с разной степенью гликозилирования (рис. 1б) . Иммунофлюоресценция TRPV2 экспрессированая в клетках СНО показала, что в отсутствие сыворотки TRPV2 был локализован во внутриклеточных мембранных отсеках (рис. 1в) . В противоположность этому, при стимуляции с сывороткой часть TRPV2 перемещается к поверхности мембраны (рис. 1в) , как сообщалось ранее (22) . Интересно, что подобная вызванной сывороткой транслокация произошла с тремя TRPV2 мутантами (рис. 1в , данные не показаны для E594K и DK ). Далее мы оценивали TRPV2 активность путем измерения Ca2 + - индуцированной изменения [Ca2 +] по сканирования флуоресценции Fluo- 2. Как показано на рис. 1D , перфузия клеток с 2 мм раствора CaCl2 привела к быстрому и значительному росту [ Ca 2 + ] в клетках, экспрессирующих дикий тип TRPV2 по сравнению с нетрансфектированными контрольными клетками ( Дополнительный материал , рис. S1 ) . В противоположность этому, увеличение [Ca2 +] не происходит в клетках, экспрессирующих E604K (рис. 1D) или двух других мутантах (рис. 1E) , предполагая, что эти мутации отменяют Ca2 + проникновение через TRPV2. Поскольку семейство ПРП каналов, вероятно, функционирует как тетра ( 17,18 ) , что мы и предсказывали - TRPV2 мутанты будут иметь доминантно-негативный эффект на TRPV2 деятельность дикого типа. Мы временно трансфицировали зеленый флуоресцентный белок (GFP) в TRPV2 мутанты в клетки, стабильно экспрессирующие дикий тип TRPV2 и измеряли [ Ca2 +] в GFP -положительных клетках ( дополнительный материал , рис. S1) . Трансфекция мутантов резко уменьшило Ca 2 + - индуцированной рост ( рис. 1F ) , предполагая, что TRPV2 мутанты оказали сильный доминантно-негативный эффект. Подобные ингибирующие эффекты мутантов наблюдались также в НЕК293, когда увеличение [ Ca 2 + ] было вызвано высокой концентрацией Ca 2 + в растворе или агонистами TRPV канала - 2- аминоэтоксидифенил боратом ( 2- APB ) ( Дополнительный материал , рис. S2 ) . Дикий тип и мутант TRPV2 совместно локализуются в плазматических мембранах НЕК293 ( Дополнительный материал , рис. S2 ) . Кроме того, поверхность биотинилирования и коиммунопреципитация показали, что мутант TRPV2 способен образовывать олигомеры с диким типом TRPV2 на клеточной поверхности ( дополнительный материал , рис. S3). Трансгенная экспрессия доминантно-негативного TRPV2 блока с ненормальным содержанием Ca 2 + у MDX мышей. Для оценки взаимосвязи между активацией TRPV2 и дегенерацией мышц , мы проанализировали предотвращает ли экспрессия доминантно-негативного TRPV2 повреждение мышц при дефиците дистрофина у MDX мышей. Сначала генерируются трансгенные мыши ( C57/BL6J фон), экспрессирующие гемагглютинин (HA) -меченый E604K ( E604K -HA ) под контролем α -двигательного промотора актина в скелетных мышцах. Две линии мужских мышей затем скрещивали с женскими MDX мышей, в результате самцы мышей имели E604K -HA и дефицит дистрофина. Экспрессия мутантного E604K -HA была подтверждена иммуноблоттингом только у Tg и мышей MDX / Tg , хотя только половина уровня экспрессии E604K -HA была обнаружена у последних мышей , как и ожидалось от гетерозигот (рис. 2а) . Интересно, что уровень эндогенного TRPV2 был возведен примерно в 2 раза у MDX мышей по сравнению с контрольной группой, но уровни TRPV2 сократились у мышей MDX / Tg (рис. 2а). В то время как эндогенный TRPV2 был широко распространен в скелетных мышцах контрольных мышей (фиг. 2ba ), он почти исключительно локализован в сарколемме MDX мышц ( рис. 2BB ). С другой стороны, экзогенный E604K -HA в основном наблюдается во внутриклеточных мембранах, хотя небольшая часть была локализована в сарколемме (фиг. 2BG и ч). Кроме того, экспрессия E604K -HA сократила сарколемную локализацию эндогенного TRPV2 в MDX мышцах (рис. 2bc и 3AD , см. также дополнительный материал , рис. S4 ) . Мы изолировали волокна короткого сгибателя ( FDB ) от каждой мыши и подвергли их иммуному окрашиванию анти- TRPV2 антителами, показывая, что в соответствии с иммунным окрашиванием секций мышц, наибольшее количество TRPV2 локализуется в сарколемме MDX волокон ( рис. 3AB ) , но не в волокнах мышей дикого типа (фиг. 3AA ), что сарколемная локализация была значительно ниже у мышей MDX / Tg (рис. 3AD ). В соответствии с сарколемной локализацией TRPV2 в MDX волоконах 2 -APB индуцированная перфузия волокон приводила к большему и быстрому увеличению [Ca2 +] в волоконах MDX мышей, что полностью ингибируется антагонистом TRPV канала -рутением красным ( рис. 3В) . Это увеличения Ca2 + сократились в волокнах мышей MDX / Tg (рис. 3В -D и дополнительный материал , рис. S5) , предполагая, что введение E604K -HA ингибирует вход Са2 + через эндогенный TRPV2. TRPV2 является стрейч - активированым каналом, мы проанализировали влияние механических напряжений на деформации мембраны изолированных волокон. Мы заметили, что гипо- осмотический стресс (70% осмолярность ) привел к серьезным повреждениям волокон MDX мышей , но не так много в волокнах мышей MDX / Tg. Устойчивый рост [ Ca2 + ] через поверхность TRPV2 мог бы привести к различным фенотипическим изменениям в скелетных мышцах MDX мышей через активацию Са2 + - зависимых ферментов. В соответствии с этой идеей, фосфорилирование Ca2 + / кальмодулинзависимой протеинкиназы ( CAMK ) II было значительно выше в MDX скелетных мышцах по сравнению с контрольной группой ( рис. 2а). В противоположность этому фосфорилирование CaMKII заметно снижается у мышей MDX / Tg (рис. 2а), что свидетельствует о понижении [ Ca 2 + ] в мышечных волокон этих мышей. Трансгенная экспрессия доминантно-негативного TRPV2 улучшает мышечную дистрофию у MDX мышей. Чтобы определить, является ли доминантно-негативное ингибирование TRPV2 может предотвратить мышечную дистрофию , мы сначала проанализировали общие симптомы дегенерация мышц. Экспрессия E604K -HA у MDX мышей (MDX / Tg ) заметно (40-60 %) снизил уровень сывороточной креатинкиназы (CK) , маркера повреждения мышц (рис. 4а) и улучшенную производительность мышц , как оценивается тестом ( 50-70% дикого типа ) (рис. 4б) . Улучшение повреждения мышц наблюдалось у MDX / Tg мышей, полученных из двух линий Tg (I и II) . Мы проанализировали гистологические характеристики скелетных мышц. Скелетные мышцы, специфически экспрессирующие E604K –HA, не дали поразительных морфологических изменений в мышцах мышей Tg (рис. 5AB ) и мышечные волокна из MDX / Tg мышей (рис. 5AD и е). Среди нескольких аномальных морфологических показателей дистрофические мышечные волокна , как известно, проявляют большую вариацию в их площади поперечного сечения (23). Мышцы от мышей MDX / Tg показали большую однородность по сравнению с MDX мышами в отношении изменчивости размера волокна, определяемых путем усреднения стандартного отклонения площади поперечного сечения (рис. 5б) . Кроме того , выражение E604K HA снижает (снижение на 60%) количество волокон с центральными ядрами ( рис. 5 ) на 10 неделе у мышей MDX / Тg , площадь воспалительного инфильтрата (снижение более чем на 90 %) и поглощение Эванс синего красителя (EBD) ( маркер целостности мембраны , снижение до 80%) (рис. 5D ) в том же возрасте мышей , предполагая, что дегенерация мышечных волокон заметно снизилась и последующая регенерация мышц была снижена у мышей MDX / Тg . Кроме того, окрашивание трехцветным методом Массона показало, что очаги фиброза , отражали постепенное замещение мышечных волокон соединительной тканью , что часто обнаруживается у MDX мышей , но выражение E604K -HA снижает фиброза более чем на 60% ( рис. 5, д и е). Высокий уровень апоптоза видели в MDX мышцах также был снижен в MDX / Tg мышцах ( рис. 5G и H). Мы наблюдали , что экспрессия E604K -HA может быть несколько мозаична в MDX / Tg мышцах, а также мышцах Tg, как показано на Fig.2Bg и ч, что таким образом, оказывает различный доминантно-негативный эффект на индивидуальные мышечные волокна. Для того, чтобы непосредственно проверить причастность экспрессии E604K -HA , мы сравнили площадь окрашенных EBD в районе иммунного окрашиванию анти -HA или анти- TRPV2 с использованием серийных срезов ( Дополнительный материал , Рис. S6) . Волокна , окрашенные EBD, которые иногда наблюдается у мышей MDX / Т.Г., соответствовали предидущим, показывая относительно низкий уровень экспрессии E604K -HA ( Дополнительный материал , рис. S6C ) . Таким образом , высокая экспрессия на мембране эндогенного TRPV2 хорошо коррелирует с выраженным поглощением EBD . Взятые вместе, эти данные свидетельствуют о том , что ингибирование TRPV2 значительно улучшает мышечную дистрофию у MDX мышей , и TRPV2 может играть ключевую роль в возникновении дистрофических повреждений мышц . Аденовирусная экспрессия доминантно-негативного TRPV2 улучшает мышечную дистрофию у BIO14.6 хомяков. Мы рассмотрели может ли также ингибирование TRPV2 уменьшать повреждение мышц у BIO14.6 хомяков , другой модели дистрофии. Заражение культивируемых BIO14.6 мышечных трубок аденовирусом, несущим DK -HA привело к экспрессии HA- меченый TRPV2 (рис. 6а). В то время как эндогенный TRPV2 был почти исключительно локализован в сарколемме BIO14.6 мышечных трубочек (рис. 6AB ) , при экспрессии DK -HA перемещается от поверхности до внутриклеточных мембран мышечных трубочек, где эндогенные и экзогенные белки TRPV2 , казалось, были ко- локализованы (рис. 6AC ). Мы обнаружили, что Ca 2 + - индуцированное увеличение было заметно подавлено в мышечных трубках, инфицированных аденовирусом, несущим DK -HA (рис. 6б) . Кроме того, аденовирусная экспрессия DK- HA сократила стрейч –индуцированное повреждение наблюдаемое в BIO14.6 мышечных трубках ( рис. 6 ) , предполагая, что ингибирование TRPV2 является эффективным для снижения стрейч - индуцированного повреждения клеток. Следует отметить, что при инфицировании аденовирусом общий уровень экспрессии TRPV2 не увеличивается когда DK- HA успешно выражается в мышечных трубках (рис. 6а) , предполагая, что экзогенное выражение ДК -HA может ингибировать экспрессию эндогенного TRPV2 . Тем не менее, выражение DK -HA четко изменило картину распределения эндогенного TRPV2 , предполагая, что уровень экспрессии DK -HA будет достаточным, чтобы повлиять на функцию эндогенного TRPV2 . Кроме того, мы вводили аденовирус, несущий β-гал или DK-HA в четырехглавую мышцу 60-дневных хомяков BIO14.6. Лечение мышц аденовирусом, несущим DK-HA в результате экспрессии HA-меченого TRPV2 мутанта (верхняя панель на фиг. 7а) и снижение локализации TRPV2 (нижняя панель на фиг. 7A). Четырнадцать дней спустя дегенерация мышц была снижена у ДК-HA инфицированных вирусом BIO14.6 хомяков по сравнению с теми, кто инфицирован аденовирусом β-гал (рис. 7BA и б). Количество центральных ядер и изменчивость размера волокна снижается (на 40-50%) (рис. 7С), и окрашивание TUNEL дополнительно выявило заметное снижение (~ 80%) апоптоза в ДК-HA-инфицированных мышцах (рис. 7BC и D и С). ОБСУЖДЕНИЕ Аномальное содержание Ca 2 + является отличительной чертой мышечной дисфункции при мышечной дистрофии. В настоящем исследовании мы показали, что Tg или аденовирусная экспрессия мутантного TRPV2 снижает[ Ca 2 + ] и улучшает мышечную дистрофию у MDX мышей и BIO14.6 хомячков в естественных условиях и в пробирке. Мы представили доказательства того, что положительный эффект мутантного TRPV2 связан с доминантно-негативным ингибированием эндогенного TRPV2 , в результате чего подавляется Ca2 +проницаемость и снижение экспрессии. Это ингибирование вероятно происходит при олигомеризации субъединицы с эндогенными TRPV2 субъединицами при сборке TRPV2 каналов , потому что , как полагают, TRPV2 функционирует как гомо- олигомер ( 17,18,24 ). На самом деле, это подтверждается тем фактом, что внутриклеточная локализация эндогенного TRPV2 заметно пострадавших от экзогенной экспрессии мутантного TRPV2 у мышей MDX / Tg . Хотя недавнее исследование показало, что TRPV2 также может быть способен образовывать гетеро- олигомеры с TRPV1 и / или TRPV3 (25) , экспрессия TRPV1 и TRPV3 не была обнаружена при иммуноблоттинге в скелетных мышцах (Дополнительный материал , рис. S7 ). С другой стороны , семейство TRPC, как сообщалось , участвуют в аномальном содержании Ca2 + в скелетных мышцах MDX мышей (14). Тем не менее, мы наблюдали, что [ Ca 2 + ] был увеличен при использовании 2 -APB , антагониста TRPC канала (26). Кроме того, значительная разница не наблюдалось в экспрессии членов семьи TRPC ( TRPC1 , 3, 4 и 6) среди четырех видов мышей ( Дополнительный материал , рис. S7 ) . Таким образом, вовлечение TRPC каналов будет незначительным. Таким образом, наши данные, присутствующие вместе с предыдущими данными (16), убедительно показывают, что TRPV2 играет важную патологическую роль в Ca2 + индуцированной мышечной дегенерации дистрофических мышц. Наши результаты также обеспечивают убедительную проверку терапевтического потенциала TRPV2 для мышечной дистрофии. Этот белок имеет несколько преимуществ в качестве терапевтической мишени. Во-первых, большинство TRPV2 локализуется в внутриклеточных мембранах в нормальных, здоровых скелетных мышцах, но они перемещаются к поверхности мембраны при мышечной дегенерации (16), следовательно, специфические ингибиторы TRPV2, по прогнозам, действуют только на дегенеративные мышцы. Во-вторых, поверхность транслокации и последующей активации TRPV2 может происходить в широком диапазоне генетических или не генетических заболеваний мышц (16). Например, недавно мы наблюдали, что поверхностная транслокация TRPV2 также происходит в сердцах при идиопатической кардиомиопатии (неопубликованные наблюдения). Таким образом, специфические ингибиторы против TRPV2 могут быть потенциально полезными для лечения различных дегенеративных заболеваний мышц. В этом исследовании, мы представили доказательства того, что ингибирование TRPV2 способно улучшить несколько показателей, характеризующих дистрофическую патологию. Тем не менее, важно учитывать, что патология мышц с дефицитом дистрофина охватывает более широкую область, которая включает восприимчивость осуществлять поражение, окислительный стресс и нарушенная регенеративная способность. Мы наблюдали, что ингибирование TRPV2 привело к различной степени мелиорации дистрофических индексов, рассмотренных в этом исследовании, что отражает сложность этого заболевания. Например, хорошее улучшение (60-90% ) было замечено во всех дистрофических параметрах у молодых мышей MDX / Тg ( 4-10 недель), но у старых мышей (более 26 недель ) только 30-40% улучшение было замечено в изменчивости размера волокон, хотя фиброз заметно снижается даже у старых мышей. У молодых мышей MDX / Tg , вполне вероятно, что доминантно-негативный TRPV2 не уменьшает чувствительность дистрофических мышц к продолжающимся циклам дегенерации и регенерации, вызванных сокращением, в то время как у старых мышей такой цикл может быть насыщенным. Таким образом, ингибирование TRPV2, по-видимому, главным образом способствовует замедлению мышечной дистрофии. Кроме того, мы наблюдали частичное улучшение состояния ( 40-60 %) уровней сыворотки КФK , по сравнению с улучшением повреждения ткани в конечностях мышц, таких как четырехглавой. Это было бы связано с тем, что сывороточные уровни КФK отражают общее состояние всех мышц, включая диафрагму. Хотя доминантно-негативный TRPV2 не полностью предотвращает дистрофические патологии, наши нынешние данные показывают, что TRPV2 будет ключевой молекулой связывающей нарушение РСК с мышечной дегенерацией. Важным вопросом является молекулярный механизм, с помощью которого TRPV2 транслоцируется в мембране и активируется в дистрофических мышцах. В MDX и мышей MDX / Tg , вполне вероятно, что мышцы подвергают непрерывной механической нагрузке , вызванной дефицитом дистрофина . Такое механическое протяжение может улучшить секрецию различных гормонов или биологически активных веществ, которые потенциально способствуют TRPV2 транслокации через стимуляцию рецептора, потому что транслокация, как известно, происходит в ответ на различные сигналы , такие как факторы роста и пептиды хемотаксиса ( 16,22,27 ). Кроме того, выпуск гормонов, таких как IGF-1 и TGF-beta был хорошо документирован в дистрофическом патогенезе (28-30 ) . Тем не менее, неожиданно , что доминантно-негативный TRPV2 заметно тормозил сохранение в плазмолемме TRPV2 в MDX / Тg мышечных волокнах ( см. рис 2B и 3A и дополнительный материал , рис. S4 и S6 ) , предполагая, что TRPV2 активная физическая нагрузка необходима для поверхностной локализации в MDX мышцы. На самом деле, мы уже показали, что удаление внеклеточного Ca 2 + или ингибитора каналов Gd3 + и общего ингибитора TRPV рутения красного заметно содействуют интернационализации TRPV2 в дистрофических мышечных трубках (16). Вполне вероятно, что увеличение уровней локальных Ca2+, опосредованное TRPV2, вносит свой вклад в укрепление плазматической мембраны, удержание TRPV2 в дистрофических мышцах блокируя их интернализации. В связи с этим недавно исследование показало, что TRPV2 может функционировать как Ca2 + -канал выпуска эндосом , который будет контролировать синтез эндосом и / или эндоцитоз (31). Понимание молекулярного механизма утилизации TRPV2 потребует дальнейшего изучения и может ускорить развитие новых терапевтических стратегий с TRPV2. Мы наблюдали, что экспрессия доминантно-негативного TRPV2 не оказывает очевидного отрицательное воздействие на функции и гистологические характеристики мышц у мышей Tg , что указывает на незначительную физиологическую роль TRPV2 в скелетных мышцах. С другой стороны, мы представили доказательства того, что TRPV2 может обеспечить Ca 2 + бассейн , что приводит к активации CaMKII у MDX мышей. Поскольку CaMKII индуцированное фосфорилирование гистондеацетилазы вместе с кальциневрином / NFAT пути , как известно , является критическим для индуцирования ремоделирования скелетных мышц (32), TRPV2 также может играть важную физиологическую роль в Ca2 + - зависимых процессах ремоделирования во время травмы мышц. Хотя мы не исключаем такой возможной физиологической роли , настоящие результаты показывают, что активированые TRPV2 становятся основным фактором риска в дистрофических мышцах. В заключение, специфическое ингибирование TRPV2 привело к значительному улучшению мышечной патологии в дистрофических животных моделях, и этот канал является перспективной терапевтической мишенью для мышечной дистрофии. Ссылки ↵ Duclos F., Straub V., Moore S.A., Venzke D.P., Hrstka R.F., Crosbie R.H., Durbeej M., Lebakken C.S., Ettinger A.J., van der Meulen J., et al. Progressive muscular dystrophy in alpha-sarcoglycan-deficient mice. J. Cell Biol. 1998;142:1461-1471. Abstract/FREE Full Text ↵ Campbell K.P. Three muscular dystrophies: loss of cytoskeleton-extracellular matrix linkage. Cell 1995;80:675-679. CrossRef Medline Web of Science ↵ Nigro V., Okazaki Y., Belsito A., Piluso G., Matsuda Y., Politano L., Nigro G., Ventura C., Abbondanza C., Molinari A.M., et al. Identification of the Syrian hamster cardiomyopathy gene. Hum. Mol. Genet. 1997;6:601-607. Abstract/FREE Full Text ↵ Campbell K.P., Kahl S.D. Association of dystrophin and an integral membrane glycoprotein. Nature 1989;338:259262. CrossRef Medline ↵ Tinsley J.M., Blake D.J., Zuellig R.A., Davies K.E. Increasing complexity of the dystrophin-associated protein complex. Proc. Natl Acad. Sci. USA 1994;91:8307-8313. Abstract/FREE Full Text ↵ Ervasti J.M., Campbell K.P. A role for the dystrophin–glycoprotein complex as a transmembrane linker between laminin and actin. J. Cell Biol. 1993;122:809-823. Abstract/FREE Full Text ↵ Turner P.R., Westwood T., Regen C.M., Steinhardt R.A. Increased protein degradation results from elevated free calcium levels found in muscle from mdx mice. Nature 1988;335:735-738. CrossRef Medline Spencer M.J., Croall D.E., Tidball J.G. Calpains are activated in necrotic fibers from mdx dystrophic mice. J. Biol. Chem. 1995;270:10909-10914. Abstract/FREE Full Text ↵ MacLennan P.A., McArdle A., Edwards R.H. Effects of calcium on protein turnover of incubated muscles from mdx mice. Am. J. Physiol. 1991;260:E594-E598. Medline Web of Science ↵ Mallouk N., Jacquemond V., Allard B. Elevated subsarcolemmal Ca2+ in mdx mouse skeletal muscle fibers detected with Ca2+-activated K+ channels. Proc. Natl Acad. Sci. USA 2000;97:4950-4955. Abstract/FREE Full Text Robert V., Massimino M.L., Tosello V., Marsault R., Cantini M., Sorrentino V., Pozzan T. Alteration in calcium handling at the subcellular level in mdx myotubes. J. Biol. Chem. 2001;276:4647-4651. Abstract/FREE Full Text Fong P.Y., Turner P.R., Denetclaw W.F., Steinhardt R.A. Increased activity of calcium leak channels in myotubes of Duchenne human and mdx mouse origin. Science 1990;250:673-676. Abstract/FREE Full Text Nakamura T.Y., Iwata Y., Sampaolesi M., Hanada H., Saito N., Artman M., Coetzee W.A., Shigekawa M. Stretchactivated cation channels in skeletal muscle myotubes from sarcoglycan-deficient hamsters. Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2001;281:C690-C699. Abstract/FREE Full Text ↵ Vandebrouck C., Martin D., Colson-Van Schoor M., Debaix H., Gailly P. Involvement of TRPC in the abnormal calcium influx observed in dystrophic (mdx) mouse skeletal muscle fibers. J. Cell Biol. 2002;158:1089-1096. Abstract/FREE Full Text ↵ Iwata Y., Katanosaka Y., Shijun Z., Kobayashi Y., Hanada H., Shigekawa M., Wakabayashi S. Protective effects of Ca2+ handling drugs against abnormal Ca2+ homeostasis and cell damage in myopathic skeletal muscle cells. Biochem. Pharmacol. 2005;70:740-751. CrossRef Medline Web of Science ↵ Iwata Y., Katanosaka Y., Arai Y., Komamura K., Miyatake K., Shigekawa M. A novel mechanism of myocyte degeneration involving the Ca2+-permeable growth factor-regulated channel. J. Cell Biol. 2003;161:957-967. Abstract/FREE Full Text ↵ Nilius B., Owsianik G., Voets T., Peters J.A. Transient receptor potential cation channels in disease. Physiol. Rev. 2007;87:165-217. Abstract/FREE Full Text ↵ Venkatachalam K., Montell C. TRP channels. Annu. Rev. Biochem. 2007;76:387-417. CrossRef Medline Web of Science ↵ Clapham D.E., Julius D., Montell C., Schultz G. International Union of Pharmacology. XLIX. Nomenclature and structure-function relationships of transient receptor potential channels. Pharmacol. Rev. 2005;57:427-450. FREE Full Text ↵ Nilius B., Vennekens R., Prenen J., Hoenderop J.G., Droogmans G., Bindels R.J. The single pore residue Asp542 determines Ca2+ permeation and Mg2+ block of the epithelial Ca2+ channel. J. Biol. Chem. 2001;276:1020-1025. Abstract/FREE Full Text ↵ Garcia-Martinez C., Morenilla-Palao C., Planells-Cases R., Merino J.M., Ferrer-Montiel A. Identification of an aspartic residue in the P-loop of the vanilloid receptor that modulates pore properties. J. Biol. Chem. 2000;275:3255232558. Abstract/FREE Full Text ↵ Kanzaki M., Zhang Y.Q., Mashima H., Li L., Shibata H., Kojima I. Translocation of a calcium-permeable cation channel induced by insulin-like growth factor-I. Nat. Cell Biol. 1999;1:165-170. CrossRef Medline Web of Science ↵ Wehling M., Spencer M.J., Tidball J.G. A nitric oxide synthase transgene ameliorates muscular dystrophy in mdx mice. J. Cell Biol. 2001;155:123-131. Abstract/FREE Full Text ↵ Garcia-Sanz N., Fernandez-Carvajal A., Morenilla-Palao C., Planells-Cases R., Fajardo-Sanchez E., FernandezBallester G., Ferrer-Montiel A. Identification of a tetramerization domain in the C terminus of the vanilloid receptor. J. Neurosci. 2004;24:5307-5314. Abstract/FREE Full Text ↵ Hellwig N., Albrecht N., Harteneck C., Schultz G., Schaefer M. Homo- and heteromeric assembly of TRPV channel subunits. J. Cell Sci. 2005;118:917-928. Abstract/FREE Full Text ↵ Lee E.H., Kim do H., Allen P.D. Interplay between intra- and extracellular calcium ions. Mol. Cells 2006;21:315-329. Medline Web of Science ↵ Nagasawa M., Nakagawa Y., Tanaka S., Kojima I. Chemotactic peptide fMetLeuPhe induces translocation of the TRPV2 channel in macrophages. J. Cell. Physiol. 2007;210:692-702. CrossRef Medline Web of Science ↵ Iwata Y., Katanosaka Y., Hisamitsu T., Wakabayashi S. Enhanced Na+/H+ exchange activity contributes to the pathogenesis of muscular dystrophy via involvement of P2 receptors. Am. J. Pathol. 2007;171:1576-1587. CrossRef Medline Web of Science Perrone C.E., Fenwick-Smith D., Vandenburgh H.H. Collagen and stretch modulate autocrine secretion of insulin-like growth factor-1 and insulin-like growth factor binding proteins from differentiated skeletal muscle cells. J. Biol. Chem. 1995;270:2099-2106. Abstract/FREE Full Text ↵ Fadic R. Cell surface and gene expression regulation molecules in dystrophinopathy: mdx vs. Duchenne. Biol. Res. 2005;38:375-380. Medline Web of Science ↵ Saito M., Hanson P.I., Schlesinger P. Luminal chloride-dependent activation of endosome calcium channels: patch clamp study of enlarged endosomes. J. Biol. Chem. 2007;282:27327-27333. Abstract/FREE Full Text ↵ Bassel-Duby R., Olson E.N. Signaling pathways in skeletal muscle remodeling. Annu. Rev. Biochem. 2006;75:19-37. CrossRef Medline Web of Science ↵ Crawford G.E., Faulkner J.A., Crosbie R.H., Campbell K.P., Froehner S.C., Chamberlain J.S. Assembly of the dystrophin-associated protein complex does not require the dystrophin COOH-terminal domain. J. Cell Biol. 2000;150:1399-1410. Abstract/FREE Full Text ↵ Iwata Y., Pan Y., Hanada H., Yoshida T., Shigekawa M. Dystrophin–glycoprotein complex purified from hamster cardiac muscle. Comparison of the complexes from cardiac and skeletal muscles of hamster and rabbit. J. Mol. Cell. Cardiol. 1996;28:2501-2509. CrossRefMedline Web of Science ↵ Rando T.A., Blau H.M. Primary mouse myoblast purification, characterization, and transplantation for cell-mediated gene therapy. J. Cell Biol. 1994;125:1275-1287. Abstract/FREE Full Text ↵ Naruse K., Yamada T., Sokabe M. Involvement of SA channels in orienting response of cultured endothelial cells to cyclic stretch. Am. J. Physiol. 1998;274:H1532-H1538. MedlineWeb of Science ↵ Grynkiewicz G., Poenie M., Tsien R.Y. A new generation of Ca2+ indicators with greatly improved fluorescence properties. J. Biol. Chem. 1985;260:3440-3450. Abstract/FREE Full Text
