Смысловой модуль. СИСТЕМА КРОВИ Тема 1: Система крови. Функции крови. Физиология эритроцитов. 1. Теоретические вопросы к занятию. 1.1. Понятие о системе крови. 1.2. Основные функции крови и лимфы. 1.3. Состав и объем крови у человека. 1.4. Количество крови и методы её определения. 1.5. Гематокритный показатель. 1.6. Основные физиологические константы крови, механизмы их поддержания. Функциональная система, поддерживающая постоянство количества форменных элементов крови. 1.7. Эритроциты, строение, количество, свойства и функции. 1.8. Методика определения количества эритроцитов. 1.9. Гемолиз, его виды. 1.10. Понятие об эритроне, как физиологической системе; регуляция количества эритроцитов в крови. 1.11. Тестовые задания. 1.12. Тестирование по системе „Крок - 1”. 1.13. Ситуационные задания 2. Практическая работа Тема 1. Техника забора крови. Цель работы: перед практическими работами по физиологии системы крови ознакомиться с техникой забора крови, которую используют в клинической лаборатории. Оборудование: скарификатор, вата, 96% этиловый спирт, 5% спиртовый раствор йода, стерильные перчатки, марлевая маска, динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты, пипетка или стеклянный капилляр, резиновая лабораторная груша. Самостоятельная работа студентов. Одевают стерильные перчатки и марлевую маску. Ватным тампоном, смоченным 96% этиловым спиртом, протирают мякоть 3 фаланги IV пальца левой руки для праворуких или правой руки для леворуких (для дезинфекции). Сжимают мякоть пальца и быстрым коротким движением прокалывают его стерильным скарификатором. Первую каплю вытирают сухой стерильной ватой, поскольку она содержит значительное количество межклеточной жидкости. Следующую каплю крови берут на исследование при помощи пипетки и резиновой груши. *Примечание: Забор крови нужно делать быстро, учитывая время ее свертывания (5-8 мин.). После взятия крови место прокола обработают динатриевой солью етилендиаминтетрауксусной кислоты и 2% спиртовым раствором иода. Если нужно сохранить кровь в жидком состоянии надолго, ее необходимо стабилизировать. Для этого кровь смешивают с 5 % раствором цитрата натрия в соотношении 4:1 (соответственно), или с гепарином в разных разведениях. Если укол сделать правильно, тогда кровь вытекает свободно без нажатия; при нажатии полученная из пальца кровь содержит межклеточную жидкость, поэтому полученные результаты будут неверными. Тема 2. Определение количества эритроцитов в крови человека. Цель работы: усвоить методику определения количества эритроцитов согласно методике, которую используют в клинической лаборатории. Оборудование: микроскоп, счетная камера Горяева, покровное стекло, 4% раствор NaCl, мерная пробирка, пипетка от гемометра Сали или капилляр для определения СОЭ (набирать 8 кровь до метки «80»), скарификатор, 76% спирт, вата, 2% спиртовый раствор йода, стеклянная палочка, резиновая груша для забора крови. Самостоятельная работа студентов. Ознакомиться с камерой, в которой подсчитывают эритроциты под объективом микроскопа. Перед проведением работы к верхней поверхности камеры притереть чистое покровное стекло так, чтобы оно покрывало средний и оба боковых бруска. Прижать большими пальцами края стекла, притирая его к боковым брускам до появления нъютоновых колец. Камеру плотно покрыть покровным стеклом, притирая его до появления ньютоновых колец. В пробирку налить 4 мл 4% раствора NaCl. Продезинфицировать кожу мякоти IV пальца спиртом и проколоть скарификатором. Первую каплю крови снять ваткой. В пипетку (или в капилляр) набрать кровь до соответствующей метки. Потом осторожно выдуть ее на дно пробирки. Верхним слоем 4 % раствора NaCl промыть пипетку. Содержание пробирки тщательным образом размешать. Каплю смеси из пробирки стеклянной палочкой перенести под покровное стекло на счетную камеру. Камеру ставят в микроскоп под малое увеличение. В поле зрения находят левый верхний квадрат сетки, потом переводят на большое увеличение и подсчитывают эритроциты в маленьких квадратиках сетки. Для получения достоверного результата необходимо подсчитать эритроциты в 5 больших, или 80 маленьких квадратиках, передвигая камеру по диагонали от верхнего левого к правому нижнему углу сетки. При подсчете в маленьком квадратике считают эритроциты, которые расположены внутри квадратика и на двух линиях верхней и левой (правило Егорова - Бюркера). Зная объем камеры над маленьким квадратиком (1/4000 мм3) и степень разведения крови, находят количество эритроцитов в 1 мм3 крови за формулой: X=А x 4000 x 200 /1 x 5 x16, где Х - общее количество эритроцитов в 1 мм3 (1мкл) А - количество эритроцитов в 5 больших квадратах 200 - разведение крови 1/ 4000 мм3 - объем камеры над маленьким квадратиком 16 - количество маленьких квадратиков в одном большом. После подсчета эритроцитов в 1 мкл переводят данные в современную систему измерения (СИ), для чего следует пересчитать их количество на 1 литр. Примечание: на занятии рекомендуется использовать консервированную кровь в связи с контагиозными заболеваниями. Рис. 6.1. Счетная камера Горяева А – вид сверху Б – вид сбоку В – сетка Горяева Рис. 6.2. Меланжеры (смесители) для забора крови и подсчета форменных элементов крови: а – меланжер для подсчета эритроцитов б – меланжер для подсчета лейкоцитов 9 Рекомендации к оформлению результатов Результаты записать в протокол, сделать вывод о соответствии полученных результатов и нормативных показателей. _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ Тема 3. Определение гематокритного показателя. Кровь состоит из плазмы и форменных элементов: эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов. В норме кровь взрослого человека содержит 50 – 60 % плазмы и 50 – 40 % форменных элементов. Соотношение объемов плазмы и форменных элементов у человека меняется в зависимости от функционального состояния организма, а также при некоторых заболеваниях. Для определения соотношения объемов плазмы и форменных элементов кровь центрифугируют в градуированном стеклянном капилляре - гематокрите. В клинике для центрифугирования удобно пользоваться ручной микроцентрифугой. Для работы необходимы: микроцентрифуга Шкляра, скарификатор, кристаллический лимоннокислый натрий, спирт, 5% спиртовый раствор иода, вата, фильтровальная бумага, резиновая груша. Самостоятельная работа С помощью капилляра и резиновой груши взять из мякоти IV пальца кровь. По окончании забора крови к месту прокола прикладывают ватный тампон, смоченный настойкой йода. Капилляр, заполненный кровью, помещают в микроцентрифугу. Микроцентрифуга (Рис.6.3.) А Б Рис. 6.3. — микроцентрифуга Шкляра: 1 - крышка, которая открывается; 2 - насадка с гематокритом; - насадка к микроцентрифуге для крепления гематокрита и насадка с микропробирками для центрифугирования крови. Имеет корпус со съемной застекленной крышкой (Рис. 6.3.), под которой на оси центрифуги расположены насадки. Одна из них служит для закрепления гематокрита. Чтобы закрепить гематокрит, в насадке необходимо вынуть фиксирующую скобу и разжать пружинную рамку. Насадка крепится на оси центрифуги пружиной, которую следует отжать, помещая или снимая насадку на ось центрифуги. При центрифугировании ручку центрифуги вращают со скоростью 60 - 70 оборотов в 1 минуту, насадка при этом вращается со скоростью около 7000 оборотов в минуту. Набрав кровь в гематокрит, закрепляют его в насадке и помещают в центрифугу. Закрывают крышку. Центрифугируют кровь на протяжении 1 минуты и снимают насадку. Форменные элементы располагаются в периферических концах капилляра, плазма - в центре. По меткам капилляра вычисляют соотношение между объемами плазмы и форменных 10 элементов и выражают полученные данные в процентах. Рекомендации к оформлению работы: Запишите полученный результат исследования крови. _______________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ 3. Задание для самостоятельной работы и самоконтроля. 3.1. Тестирование по системе „Крок - 1”: изменятся у него показатели красной 1. У спортсмена 30 лет с массой 80 кг крови? после длительной физической нагрузки А. Увеличится количество эритроцитов объем циркулирующей крови изменился B. Уменшится количество эритроцитов с 5,6 л до 5,4 л, гематокрит составил 50%, C. Количество эритроцитов не изменится общий белок - 80 г/л. Такие показатели D. Вырастет количество гемоглобина крови стали следствием, прежде всего: E. Вырастет количество лейкоцитов A. Увеличения количества эритроцитов B. Увеличения содержания белков в плазме C. Потери воды с потом D. Увеличения объема циркулирующей крови E. Увеличения диуреза. 5. У кролика каждый день для исследования брали 15 мл крови. Как изменятся у него показатели красной крови? А. Увеличится количество эритроцитов и гемоглобина B. Все останется без изменений C. Уменьшится количество эритроцитов D. Уменьшится количество гемоглобина E. Увеличится количество эритроцитов 2. Проводят лабораторное исследование крови здоровой женщины 32 лет. Каким у неё должна быть величина гематокритного показателя? A. 30-36% B. 36-42% C. 35-45% D. 40-45% E. 40-48% 6. При обследовании студента массой 70 кг было установлено, что количество циркулирующей крови у него составляет 4,9 л, гематокрит 50%, количество эритроцитов 3,9 х 1012/л, количество гемоглобина 130 г/л, цветовой показатель 1,0. Как изменятся показатели крови у студента после 15 минут бега ? А. Показатели не изменятся B. Количество эритроцитов, гемоглобина и циркулирующей крови вырастут, а гематокрит и цветовой показатель не изменятся C. Уменьшится количество эритроцитов D. Уменьшится количество гемоглобина E. Вырастет цветовой показатель 3. Во время эксперемента у животного пережали почечную артерию. Спустя некоторое время в крови животного наблюдался эритроцитоз. Чем обусловленно изменение количества эритроцитов? А. Перераспределением крови B. Выходом крови из депо C. Увеличением выработки эритропоэтинов в почках D. Ишемией почки E. Централизацией кровообращения 7. Новорожденный ребенок имеет следующий состав крови: количество эритроцитов 6 х 1012/л, количество гемоглобина 135 г/л, гематокрит 55 %. Рассчитайте цветовой показатель крови 4. В эксперименте кролик длительное время находился в атмосфере с низким содержанием О2 . Часть его крови была перелита интактному кролику, как 11 и оцените состояние крови новорожденного ? А. 0,66 высокое напряжение регулирующих механизмов гемопоэза B. 0,33 норма C. 0,55 эритроцитоз D. 0,1 анемия E. 0,85 норма местность количество эритроцитов в крови у него увеличилось до 7 х 1012/л. В какую местность переехал этот мужчина? A. В лесистую местность. B. Возле моря. C. В долину. D. В село. E. В горную местность. 8. При исследовании у пациента было установлено что количество гемоглобина составляет 90 г/л, количество эритроцитов 2,8 х 1012/л, количество эритропоэтинов в крови на 30 % выше нормы. Что является причиной подобного явления? А. Недостаток кислорода для адекватного синтеза эритроцитов B. Низкая активность эритропоэтинов C. Высокая активность эритропоэтинов D. Низкое количество гемоглобина E. Проживание в горной местности 10. В больницу поступил больной с желудочным кровотечением. При обследовании установлено, что частота пульса равняется 98 уд./мин, артериальное давление равняется 95/60 мм. рт. ст., частота дыханий – 24 за минуту. Какая функция крови нарушена у больного ? A. Поддержание водно-электролитного баланса. B. Все ответы верны. C. Поддержание кислотно-щелочного равновесия. D. Обеспечение тканей кислородом. E. Обеспечение выведения конечных продуктов метаболизма. 9. Количество эритроцитов у мужчины на протяжении нескольких лет было около 4,8 х 1012/л. После переселения с членами своей семьи в другую 3.3. Ситуационные задачи: 1. У мужчины 70 лет при анализе крови выявлено: концентрация осмотически-активных веществ в целом – 290 мосм/л, в том числе: натрий – 125 ммоль/л, калий – 4 ммоль/л, хлориды – 90 ммоль/л, бикарбонаты – 24 ммоль/л, глюкоза – 39,9 ммоль/л, азот мочевины – 5 ммоль/л. С точки зрения нормативных показателей охарактеризуйте состояние крови пациента. _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ 2. При анализе крови у спортсмена 20 лет после тренировки выявлено: гематокритный показатель - 50 %, эритроцитов - 5,0 х 1012 /л, гемоглобина - 160 г/л, лейкоцитов - 10 х 109 /л, нейтрофилов – 64 %, базофилов - 0,5 %, эозинофилов - 0,5 %, моноцитов – 8 %, лимфоцитов – 27 %, СОЭ - 4 мм/час. А. Дайте обоснованные выводы В. Проанализируйте вероятные причины отклонений. _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ 4. Литература. Учебник под редакцией Филимонова В.И., 1995 г. – С. 138-139, 143, 145. 12 Физиология человека /Под. ред. Г.И. Косицкого- М.: Медицина, 1985. – С. 211-212, 215, 229-230. Р.С. Орлов, А. Д. Ноздрачёв Нормальная физиология Москва «ГЭОТАР-Медиа», 2005.- С. 526-527, 530-545. Учебные задания для студентов по нормальной физиологии человека (ситуационные задачи): Физиология системы крови / Под ред. Н.В. Братусь. – Винница, 1984. - 3-9 с. № 10-13, 23, 30, 38-40, 3-9, 24. Атлас по нормальной физиологии /Под ред. Н.А. Агаджаняна – М .: Высшая школа, 1986. – С. 14-36. Конспект лекций. Физиология человека. Под ред. В.М.Покровского, Г.Ф.Коротько, 1997, т.1, с.277-280. Физиология человека. Под ред. Р.Шмидта и Г.Тевса, М., Мир, т.2, 1996, с.414-422, 616-624. Тема: Внесосудистые жидкости организма, их роль в обеспечении жизнедеятельности клеток. Физиологические основы современной гемотрансфузиологии. (самостоятельная внеаудиторная работа студентов) 1. История открытия лимфатических судов и лимфатических капилляров. 2. Механизм образования лимфы: - Фильтрационная теория - Секреторная теория - Капиллярная фильтрация и резорбция - Действие изменения проницаемости кровеносных капилляров на лимфоток 3. Роль соединительной ткани в образовании лимфы. 4. Фильтрация и резорбция лимфы через серозные оболочки. 5. Особенности состава лимфы в зависимости от каких органов она будет оттекать. 6. Значение лимфотока для фунционирования отдельных органов и систем. 7. Роль лимфатической системы в процессах микроциркуляции в тканях. 8. Современная концепция переливания крови. Препараты крови. Основные способы переливания крови и ее препаратов. Понятие о вакуумном переливании крови и ее препаратов. - Прямое переливание крови, физиологические аспекты; - Обменное переливание крови, физиологические аспекты; - Аутогемотрансфузия, физиологические аспекты; - Внутривенное переливание крови, физиологические аспекты; - Внутриартериальное переливание крови, физиологические аспекты; - Внутриаортальное переливание крови, физиологические аспекты; - Внутрикостное введение трансфузионных сред, физиологические аспекты. 9. Нейрогуморальные факторы регуляции в механизме действия перелитой крови: - Механизм действия перелитой крови; - Влияние переливания крови на органо-тканевой метаболизм; 10. Система АВО, её иммуннологические факторы, их значение в практике переливания крови. - Правила определения группы крови; - Ошибки при определении групповой принадлежности крови, пути их предупреждения; - Индивидуальная серологическая проба - физиологические основы, значение; - Индивидуальная биологическая проба - физиологические основы, значение; - Понятие „Универсальный” донор и „Универсальный” реципиент. 13 11. Система резус, её иммуннологические факторы и их значение в практике переливания крови. - Основные антигены системы резус; - Механизмы резус-иммунизации и резус-сенсибилизации, пути предупреждения; - Правила резус-совместимости при переливании крови; - Индивидуальная проба на резус-совместимость; - Необоснованное использование резус-отрицательной крови и возможные последствия; - Ювенильная резус-иммунизация и резус-сенсибилизация. 12. Антигенные системы крови которые отличаются от систем АВО и резус, их значение: - Определение антигена К (K1) системы антигенов эритроцитов Kell, физиологическое обоснование; - Дополнительные антигены системы Rh-Hr: c(hr'), e(hr"), CW и других антигенных систем: Lea, Fya, Jka, S; - Определение нерегулярных антиэритроцитарных антител. 13. Нейрогуморальные факторы регуляции в патогенезе гемотрансфузионных реакций и осложнений: - Физиологические механизмы гемотрансфузионных реакций и осложнений; - Физиологические принципы профилактики и лечения гемотрансфузионных осложнений. 14. Понятие об аутотрансфузиях крови, применение в медицине: - Аутогемотрансфузии в медицинской практике; - Влияние аутогемотрансфузии на ход физиологических процессов в организме и функционирование жизненноважных органов, в частности в послеоперационном периоде. 15. Понятие об аутоплазмотрансфузии, физиологические аспекты применения в медицине. 16. Реинфузии крови, физиологические аспекты применения в медицине. - Физиологические аспекты влияния крови при реинфузии. 17. Аутотрансфузии модифицированной крови и плазмы, физиологические аспекты применения в лечебной практике: - Физиологические аспекты применения крови и ее компонентов после ультрафиолетового облучения. - Влияние очистки крови через сорбенты на ее морфо-функциональные характеристики; - Электрохимическое окисление аутокрови; 18. Кровезаменители. Определение, классификация, применение. - Гемодинамические кровезаменители; - Дезинтоксикационные кровезаменители; - Регуляторы водно-солевого и кислотно-щелочного состояния; - Препараты для парентерального питания; - Кровезаменители с функцией переноса кислорода; - Инфузионные антигипоксанты. 19. Гравитационная хирургия крови, общие понятия, физиологические аспекты: - Определение, физические аспекты применения гравитации; - Коррекция состава крови больных (гематологическая инженерия); - Аппаратура и методы гравитационной хирургии крови. 20. История изучения ликвора и ликворообращения. 21. Физиологические механизмы ликворообращения в ЦНС. 22. Механизм образования ликвора: - Путем активной секреции железистыми клетками; - Путем диализа крови через стенки кровеносных сосудов. 23. Скорость образования ликвора и факторы воздействия. 24. Возрастные изменения состава ликвора. 14 25. Состав и физиологические свойства ликвора. 26. Основные биохимические показатели ликвора в норме. 27. Понятие о химической асимметрии мозга. 2. Задание для самостоятельной работы и самоконтроля. Написать реферат по предложенной преподавателем теме. 3. Перечень рекомендуемой литературы: Барышев Б.А. Кровезаменители. Справочник для врачей . – СПб.: Изд-во „Человек”, 2001. – С. 95. Беленький Д.Н. Ошибки и опасности в практике переливания крови. – М.: „Медицина”, 1969.- С.266. Диденко Н.К., Стариков А.В., Горбин В.Ф. Аутотрансфузии крови и её компонентов.- Киев, 1997.- С. 335. Гланц Р.М. Нейро-гуморальное направление в трансфузиологии.-Л.: Изд-во, „Наука”, 1983. – С. 237. Гостищев В.К. Общая хирургия.-М.: „Медицина”, 1997. – 155-202 с. Гаврилов О.К. Гравитационная хирургия крови.- М.: „Медицина”, 1984. – С. 303. Ноздрачев А.Д., Баженов Ю.И., Баранникова И.А., Батуев А.С. Начала физиологии.- СПб.: Изд-во „Лань”, 2001.- 618 с. Русньяк И., Фельди М. , Сабо Д. Физиология и патологи лимфообращения.-Изд-во акад. наук Венгрии, 1957. – С.856 Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1939 г. Том 20. Выпуск второй. Серия А. Анатомия. Книга вторая. Гос. изд-во мед. литература Ленинградское отделение. Стр. 202 - 218. Развитие невральных влагалищ и внутриствольных сосудов плечевого сплетения человека. Ю. П. Судаков автореферат. СГМИ. 1968 г. Смоленск. Химическая асимметрия мозга. 1987 г. Наука в СССР. №1 Стр. 21 - 30. Е. И. Чазов. Н. П. Бехтерева. Г. Я. Бакалкин. Г. А. Вартанян. Основы ликворологии. 1971 г. А. П. Фридман. Ленинград. "Медицина". Тема 2: Гемоглобин, его функции. 1. Теоретические вопросы к занятию. Гемоглобин, его строение и свойства. Формы гемоглобина в онтогенезе. Соединения гемоглобина, их спектр. Факторы, влияющие на синтез и распад оксигемоглобина у человека. Количество гемоглобина, возрастные особенности. Критерии насыщения эритроцитов гемоглобином: средняя концентрация, цветовой показатель. 1.7. Тестовые задания. 1.8. Тестирование по системе „Крок - 1”. 1.10. Ситуационные задачи. 1.1. 1.2. 1.3. 1.4. 1.5. 1.6. 2. Практическая работа Тема 1. Определение количества гемоглобина калориметрическим методом (по Сали). Цель работы: усвоить методику определения количества гемоглобина в крови человека калориметрическим методом (по Сали). 15 Оборудование: дистиллированная вода, 0,1N раствор HCl, гемометр Сали, скарификатор, 76% спирт, вата, 2% спиртовый раствор йода, стеклянная палочка, резиновая груша для забора крови. Самостоятельная работа студентов. В пробирку гемометра (пробирка градуированная в г %) наливают 0,1 N раствор HCL до метки «2» (0,2 мл), и устанавливают ее между двумя стандартами (солянокислый гематин или гемин). Кровь набирают при помощи микропипетки (0,02 мл) и резиновой груши. Конец пипетки осторожно вытирают ватой, кровь выпускают в реактив на дно пробирки, а пипетку 2-3 раза промывают верхним слоем жидкости так, чтобы не образовывалось пены. Пробирку встряхивают и устанавливают в штатив гемометра. Жидкость становится прозрачной и приобретает бурый цвет. Через 5 минут к жидкости в пробирку добавляют дистиллированную воду, помешивая стеклянной палочкой жидкость, после каждого добавления воды. Когда цвет жидкости будет приближаться к цвету стандарта, воду добавляют отдельными каплями. Разведение заканчивается, когда цвет жидкости в пробирке не будет отличаться от цвета стандарта. Отмечают деления шкалы гемометра по нижнему мениску жидкости, которую разводили (цена деления гемометра – 0,2 г %). Полученный результат записать в протокол. Показатель в г % умножить на 10. Тогда количество гемоглобина будет в единицах системы СИ – г/л. При работе необходимо придерживаться времени от момента разведения до оценки результата (5 мин.), поскольку цвет гемоглобина непостоянен. Рис. 6.4. А – гемометр Сали с мерной пробиркой Б – капилляр на 20 мкл для забора крови В – пипетка для дистиллированной воды Г – стеклянная палочка для размешивания. Рекомендации к оформлению результатов Результаты записать в протокол, сделать вывод о соответствии полученных результатов и нормы. _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ Тема 2. Определение цветового показателя и среднего содержания гемоглобина в одном эритроците. Цветовой показатель характеризует соотношение количества гемоглобина и числа эритроцитов в крови и, тем самым, меру насыщенности каждого эритроцита гемоглобином. Вычисление цветового показателя выполняют по формулам, приведенным на следующей странице. 16 Рекомендации к оформлению работы: Записать полученные результаты.Сделать вывод о том, характеризует ли полученная величина цветового показателя здоровое состояние системы крови в сопоставлении с надлежащей нормой. _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ 3. Задание для самостоятельной работы и самоконтроля. 3.1. Тестирование по системе „Крок - 1”: 1. Масса обследуемого составляет 75 2. Во время обследования у пациента килограммов. Определите какое было установлено что количество количество кислорода может гемоглобина составляет 160 г/л, присоединить гемоглобин пациента если количество эритроцитов 2,5 х 1012/л, он физически здоров и количество цветовой показатель составляет 1,3. гемоглобина в его крови отвечает норме? Оцените показатели этого пациента, о А. 70 мл О2 чем это может свидетельствовать? B. 700 мл О2 А. Эритропения, гипергемоглобинемия, C. 800 мл О2 гиперхромия. Это указывает на D. 955, 7 мл О2 повышенное содержание E. 755, 2 мл О2 гемоглобина в эритроцитах. 17 B. Гипогемоглобинемия – мало эритроцитов. C. Увеличение количества эритроцитов D. Уменьшение количества гемоглобина E. Сдвиг лейкоцитарной формулы влево D. Метгемоглобина E. Карбгемоглобина 7. Врач скорой помощи констатировал у военнослужащего после боевых учений потерю сознания, нарушение дыхания и другие проявления отравления пороховыми газами. Какое соединение стало причиной нарушения дыхания? А. Карбоксигемоглобин B. Карбгемоглобин. C. Метгемоглобин. D. Дезоксигемоглобин. E. Оксигемоглобин. 3. Масса больного составляет 80 кг. Сколько грамм гемоглобина находится в крови исследуемого если содержание гемоглобина в его крови составляет 80 ЕД по Сали (стандарт Сали = 16,7 г % ) ? А. 230 г B. 500 г C. 745 г D. 400 г E. 345 г 8. Человек постоянно живёт высоко в горах. Какие изменения в показателях крови можно найти у этого человека? А. Изменений в крови не будет. В. Снижение показателей содержания гемоглобина. С. Появление в крови эритробластов. D. Снижение количества ретикулоцитов. E. Увеличение количества гемоглобина. 4. В крови пациента содержание гемоглобина составляет 120 г/л. После попадания в среду, которая содержит угарный газ было установлено, что кислородная емкость крови пациента уменьшилась на 30 %. Чему равна кислородная емкость крови у пациента ? А. 1,34 B. 11,2 C. 2,2 D. 1,9 E. 22,4 9. Во время обследования у пациента было установлено что количество гемоглобина составляет 95 г/л, количество эритроцитов 2,5 х 1012/л, цветовой показатель 1.0. Оцените эти результаты обследования, о чем это может свидетельствовать? А. Нормохромная анемия. B. Гипогемоглобинемия – мало эритроцитов. C. Увеличение количества эритроцитов D. Уменьшение количества гемоглобина E. Сдвиг лейкоцитарной формулы влево 5. Врач скорой помощи констатировал у пострадавшего жителя села потерю сознания, нарушение дыхания и другие проявления отравления угарным газом. Какое соединение стало причиной нарушения дыхания? А. Карбоксигемоглобин B. Карбгемоглобин. C. Метгемоглобин. D. Дезоксигемоглобин. E. Оксигемоглобин. 10. При обследовании студента массой 70 кг было установлено, что количество циркулирующей крови у него составляет 4,9 л, гематокрит 50 %, количество эритроцитов 3,9 х 1012/л, количество гемоглобина 130 г/л, цветовой показатель 1,0. Как изменятся показатели крови студента после 15 минут бега ? A. Показатели не изменятся B. Количество эритроцитов, гемоглобина и циркулирующей крови увеличатся, а гематокрит и цветовой показатель не изменятся C. Уменьшится количество эритроцитов 6. Во время вскрытия трупа молодого человека, найденного в автомобиле находившемся в гараже с включенным двигателем, кровь имеет ярко алый цвет. При спектральном анализе установлены 2 полосы затемнения в желто – зеленой части спектра. Образование какого соединения гемоглобина вызвало это явление ? А. Карбоксигемоглобина B. Оксигемоглобина C. Фетального гемоглобина 18 D. Уменьшится количество гемоглобина E. Уменьшится объём крови 3.3. Ситуационные задания: 1. При анализе крови у мужчины 40 лет, который злоупотреблял алкоголем, выявлено: гемоглобина - 130 г/л, эритроцитов - 3,9 х 109/л, цветовой показатель - 1,0; лейкоцитов - 4,5 х 109/л, лейкоцитарная формула без изменений, тромбоцитов - 100 х 109/л, СОЭ — 4 мм/час, время свертывания крови - 6 мин., белков плазмы крови - 60 г/л. А. Дайте обоснованные выводы В. Проанализируйте вероятные причины отклонений _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ 2. Женщина, 35 лет, обратилась к врачу с жалобами на слабость, снижение работоспособности. При анализе её крови выявлено: гемоглобина - 110 г/л, эритроцитов - 2,7 х 1012/л, цветовой показатель - 1,2, лейкоцитов - 4,2 х 109/л, лейкоцитарная формула без изменений, тромбоцитов - 120 х 109/л, общее время свертывания крови - 5 мин., время кровотечения - 4 мин, белков плазмы крови - 65 г/л, СОЭ -12мм/час. А. Проанализируйте результаты обследования. В. Определите возможные причины выявленных изменений. _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ 4. Литература. Учебник под редакцией Филимонова В.И., 1995 г. – С. 145-146. Физиология человека /Под. ред. Г.И. Косицкого- М.: Медицина, 1985. – С. 231. Р.С. Орлов, А. Д. Ноздрачёв Нормальная физиология Москва «ГЭОТАР-Медиа», 2005.- С. 537-548. Учебные задания для студентов по нормальной физиологии человека (ситуационные задачи): Физиология системы крови / Под ред. Н.В. Братусь. – Винница, 1984. - 3-9 с. № 6-8, 16, 25, 42, 1, 41. Атлас по нормальной физиологии /Под ред. Н.А. Агаджаняна – М .: Высшая школа, 1986. – С. 14-36. Конспект лекций. Физиология человека. Под ред. В.М.Покровского, Г.Ф.Коротько, 1997, т.1, с. 277-280. Физиология человека. Под ред. Р.Шмидта и Г.Тевса, М., Мир, т.2, 1996, с.616-624. Тема 3: Защитные функции крови. Физиология лейкоцитов. 1. Теоретические вопросы к занятию. 1.1. Лейкоциты, их количество, виды и свойства (И.И. Мечников). 1.2. Понятие о лейкоцитозе и лейкопении. 1.3. Лейкоцитарная формула. 1.4. Функции разных видов лейкоцитов, в том числе Т и В - лимфоцитов. 19 1.5. Понятие об иммунитете, его виды. 1.6. Регуляция количества лейкоцитов. 1.7. Принцип подсчета лейкоцитов. 1.8. Тестовые задания. 1.9. Тестирование по системе „Крок - 1”. 1.10. Ситуационные задачи. 2. Практическая работа Тема 1. Подсчет количества лейкоцитов в крови человека. Цель работы: Ознакомиться с методикой подсчета количества лейкоцитов, используемой в клинической лаборатории. Оборудование: скарификатор, вата, 76% этиловый спирт, стерильные перчатки, марлевая маска, динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты, пипетка или капилляр, резиновая лабораторная груша, микроскоп, счетная камера Горяева, покровное стекло, мерная пробирка, пипетка от гемометра Сали (набирать кровь до метки 0,02 мл) или капилляр для определения СОЭ (набирать кровь до метки «80»), стеклянная палочка, раствор для разведения крови (для разведения крови, при подсчете лейкоцитов кровь разводят 5 %-м раствором уксусной кислоты, подкрашенным метиленовым синим или другим ядерным красителем. Кислота разрушает оболочки эритроцитов, они становятся невидимыми и не препятствуют подсчету ядер лейкоцитов. Подкрашенные ядра лейкоцитов легче заметить). Самостоятельная работа. Перед проведением работы к верхней поверхности камеры притереть чистое покровное стекло так, чтобы оно покрывало средний и оба боковых бруска. Прижать большими пальцами края стекла, притирая его к боковым брускам до появления нъютоновых колец. Дезинфицировать кожу мякоти IV пальца спиртом, проколоть его скарификатором. Первую каплю крови снять ватой. Набрать кровь в смеситель до метки 0,5 (разведение в 20 раз), или до метки 1 (разведение в 10 раз). Потом в смеситель до метке 11 набрать 3% раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовым синим. Содержание смесителя перемешать: встряхивать в течение двух минут. 2-3 капли жидкости из смесителя выпустить на вату. Каплю смеси нанести под покровное стекло на камеру. Установить камеру на предметном столике микроскопа, фокусировать сетку камеры в окуляре и установить верхний левый её угол в поле зрения. Передвигать камеру последовательно и подсчитать лейкоциты в 25 больших квадратах, что соответствует 400 маленьким. Поскольку клетки крови располагаются в сетке неравномерно, то необходимо считать все клетки, которые лежат или сталкиваются с верхней и левой линиями квадрата, а также те, что находятся в середине его. Подсчет числа лейкоцитов проводить по формуле: Х=А х 4000 х 20/400, где X- число форменных элементов в 1мм3 (1 мкл); А- количество лейкоцитов в 25 больших квадратах; 20 - разведение крови; 1/4000 мм3 - объем камеры над маленьким квадратиком; 400 - количество маленьких квадратиков в 25 больших. Рекомендации к оформлению протокола практической работы. Количество лейкоцитов умножить 106. Это обеспечивает получение результата в единицах системы СИ -109 в 1 л. Сравнить с нормой у новорожденных, мужчин, женщин. Сделать вывод. Тема 2. Определение лейкоцитарной формулы Лейкоцитарная формула - это процентное соотношение разных форм лейкоцитов в мазке крови. Исследование лейкоцитарной формулы является важным лабораторным тестом, 20 дающим диагностическую информацию о характере многих заболеваний, тяжести состояния больного, эффективности проводимого лечения. В лейкоцитарной формуле определяют следующие виды лейкоцитов: Нейтрофилы. Их основная функция- защита организма от инфекции. Чаще всего количество нейтрофилов увеличивается при острых воспалительных и инфекционных заболеваниях, при некрозе тканей, интоксикациях. Эозинофилы. Эти клетки принимают участие в развитии аллергических реакций, их количество повышается, чаще всего, при аллергических состояниях и глистных инвазиях, реже - при опухолях и некоторых коллагенозах. Базофилы. Главная их функция - участие в аллергических и воспалительных реакциях. Их количество растет при каких-нибудь аллергических заболеваниях, некоторых болезнях крови, гипотиреозе и др. Лимфоциты. Это главные клетки иммунной системы, обеспечивают адекватный иммунный ответ организма при контакте с инородными факторами. Содержание лимфоцитов в крови растет при инфекционном мононуклеозе, многих других вирусных инфекциях, а также при заболеваниях лимфатической системы и крови. Моноциты. Клетки, которым принадлежит важнейшая роль в обеспечении фагоцитоза, то есть "пожирании" инородных микроорганизмов. Моноцитоз характерен для многих инфекций: туберкулеза, инфекционного мононуклеоза, сепсиса, и др.. Он встречается при заболеваниях крови, коллагенозах и др. Плазмоциты. Клетки лимфоидной ткани, продуцирующие иммунноглобулины. В норме в периферической крови отсутствуют, появляются там при вирусных инфекциях, плазмоцитоме, злокачественных опухолях, аутоиммунных заболеваниях. Цель и задание. Выучить виды лейкоцитов и уметь распознавать их на мазке крови. Усвоить методику определения лейкоцитарной формулы. Материалы и оборудование: микроскоп, мазки крови, иммерсионное масло, вата, марля, 11-клавишный счетчик для подсчета лейкоцитов. Ход работы. Подготовить к работе микроскоп. Рассмотреть мазок при малом увеличении, потом нанести каплю иммерсионного масла, установить большое увеличение (окуляр 7/10, объектив 90) и подсчитать 100 или 200 лейкоцитов, дифференцируя количество их по видам при помощи 11- клавишного счетчика. Подсчет на мазке проводят таким способом: подсчитывают лейкоциты в 3 - 4 полях зрения вдоль края мазка, потом в 3 - 4 полях зрения по направлению к средине мазка; потом считают в 3 - 4 полях зрения параллельно краю мазка и снова возвращаются к краю. Такое движение продолжают до тех пор, пока не подсчитают 50 клеток. Тогда на противоположном крае мазка так же подсчитывают еще 50 клеток (в сумме 100 клеток). Подсчет лучше производить в самом тонком месте мазка, ближе к концу, где хорошо видно структуру клеток. Рекомендации к оформлению протокола практической работы. Оформить протокол. Записать лейкоцитарную формулу. Пользуясь данными об общем количестве лейкоцитов в крови, вычислить абсолютное количество разных видов лейкоцитов. Пример: общее количество лейкоцитов в крови 7000 в 1 мкл, или 7-109/л (7,0 Г/л, гига на литр); из них лимфоцитов 30 %. Составляем пропорцию: 100 % - 7000, 30 % - Х Х = 7000 х 30/100 = 2100 в 1 мкл, или 2,1 х 109/л (2,1 Г/л). Сопоставить полученные показатели с нормальными величинами и сделать выводы относительно наличия или отсутствия отклонений. Примечание: Во время занятия могут быть использованы ситуационные задания, в которых необходимо дать оценку предложенному варианту лейкоцитарной формулы, и сделать вывод. 21 Контрольные вопросы к заданию: 1. Как определить лейкоцитарную формулу? 2. Правила подсчета лейкоцитов на мазке крови. 3. Значение лейкоцитарной формулы. 3. Задание для самостоятельной работы и самоконтроля. 3.1. Тестирование по системе „Крок-1”: С. Эритропении, тромбоцитопении, лейкоцитозе D. Гиперволюмии, тромбоцитопении, лейкоцитозе Е. Тромбоцитопении, гранулоцитопении, лимфопении 1. При анализе крови у спортсмена 23 лет после обычной успешной тренировки выявлено: эритроцитов 4,5 х 1012 /л, гемоглобина - 160 г/л, лейкоцитов – 10 х 109/л, нейтрофилов – 64 %, базофилов 0,5 %, эозинофилов - 0,5 %, моноцитов – 8 %, лимфоцитов – 27 %. Такие показатели свидетельствуют, прежде всего о: А. Миогенном эритроцитозе В. Психогенном лейкоцитозе С. Миогенный лейкоцитоз D. Миогенный лимфоцитоз Е. Миогенная эозинопения 4. Какие клетки крови являются носителями иммунологической памяти А. Моноциты. В. В-лимфоциты. С. Т-лимфоциты. D. Тромбоциты. Е. Эритроциты. 5. Когда наблюдается физиологический лейкоцитоз ? А. При инфекционных болезнях. В. У новорождённых. С. При воспалении. D. Во время сна. Е. Все ответы верны. 2. При анализе крови у девушки 18 лет выявлено: лейкоцитов – 6 х 109/л, нейтрофилов сегментоядерных – 65 %, палочкоядерных – 0 %, базофилов – 1 %, эозинофилов – 7 %, моноцитов – 8 %, лимфоцитов – 19 %. Такие показатели свидетельствуют, прежде всего, о: А. Моноцитозе В. Нейтрофилии С. Базофилии D. Эозинофилии Е. Лимфопении 6. Укажите нормальное количество лимфоцитов в периферической крови взрослого человека: А. 25 – 30 %. В. 0 – 1%. С. 1 – 5 %. D. 5 – 10 %. Е. 45 – 70 %. 3. Женщина в возрасте 21 года обратилась к врачу после острого заболевания верхних дыхательных путей с жалобами на слабость, повышение температуры тела. Анализ крови: гемоглобин - 52 г/л, гематокрит - 24 %, тромбоциты - 100 х 109/л, лейкоциты - 14 х 109/л, сегментоядерных нейтрофилов – 82 %, палочкоядерных – 3 %, лимфоцитов – 15 %. Такой анализ крови свидетельствует о: А. Лейкоцитозе, тромбоцитозе, лимфопении В. Нейтропении, эритропении, лимфопении 7. У больного бронхиальной астмой при изучении лейкоцитарной формулы крови были замечены изменения в её составе, что дало возможность подозревать аллергический характер данного состояния. Какие изменения в составе крови позволили сделать такое заключение? А. Уменьшилось количество нейтрофилов. В. Увеличилось количество эозинофилов. С. Увеличилось количество моноцитов. D. Уменьшилось количество эозинофилов. Е. Увеличилось количество лимфоцитов. 22 8. Лабораторное обследование крови рекомендуется производить натощак рано утром. Изменение количества каких элементов крови можно определить, если произвести забор крови после приёма пищи ? А. Увеличение количества белков плазмы. В. Увеличение количества эритроцитов. С. Увеличение количества лимфоцитов. D. Уменьшение количества тромбоцитов. Е. Уменьшение количества эритроцитов. изменения в анализе крови могут подтвердить наличие острого воспаления ? А. Эозинофилия. В. Эритроцитоз. С. Лейкопения. D. Эритропения. Е. Лейкоцитоз. 10. Паразитарная инфекция обычно сопровождается … A. Базофилией B. Эозинофилией C. Моноцитозом D. Тромбоцитозом E. Нейтрофилезом 9. В больницу привезли больного с диагнозом “острый живот”. Доктор заподозрил острый аппендицит и для проверки своей версии назначил немедленный анализ крови. Какие 3.3. Ситуационные задачи: 1. Как и почему может измениться количество лейкоцитов после приема пищи, мышечной работы, при беременности, сильных эмоциях? Ответ аргументируйте. _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ 2. Анализ крови: лейкоциты - 6 х 109/л, палочкоядерные - 2%, сегментоядерные - 60%, эозинофилы - 2%, базофилы - 1%, лимфоциты - 30%, моноциты - 5%. Какие изменения крови Вы можете отметить? Назовите возможные причины выявленных нарушений. _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ 5. Литература. Учебник под редакцией Филимонова В.И., 1995 г. – С. 145-151. Физиология человека /Под. ред. Г.И. Косицкого- М.: Медицина, 1985. – С. 232-237. Р.С. Орлов, А. Д. Ноздрачёв Нормальная физиология Москва «ГЭОТАР-Медиа», 2005.- С. 531-536, 550-563. Физиология системы крови / Под ред. Н.В. Братусь. – Винница, 1984. - 3-9 с. № 14, 26-29, 31, 32, 35-37. Атлас по нормальной физиологии /Под ред. Н.А. Агаджаняна – М .: Высшая школа, 1986. – С. 14-36. Конспект лекций. Физиология человека. Под ред. В.М.Покровского, Г.Ф.Коротько, 1997, т.1, с. 277-280. Физиология человека. Под ред. Р.Шмидта и Г.Тевса, М., Мир, т.2, 1996, с.616-624. 23 Тема 4: Физико-химические свойства плазмы крови. 1. Теоретические вопросы к занятию. 1.1. Плазма, ее состав. 1.2. Осмотическое давление плазмы крови, его роль. 1.3. Растворы изо-, гипо-, гипертонические. 1.4. Понятие о минимальной и максимальной осмотической резистентности эритроцитов. 1.5. Регуляция постоянства осмотического давления. 1.6. Кровезамещающие растворы. 1.7. Функциональная система, обеспечивающая постоянство осмотического давления. 1.8. Значение осмотического давления для процессов микроциркуляции. 1.9. Тестовые задания. 1.10. Тестирование по системе „Крок - 1”. 1.11. Ситуационные задачи. 2. Практическая работа Тема 3. Определение осмотической резистентности эритроцитов крови человека. Цель роботы: усвоить методику определения осмотической резистентности эритроцитов крови человека. Оборудование: штатив с пробирками, 1% раствор NaCL, дистиллированная вода, две градуированные пробирки, 96% спирт, скарификатор, стерильная вата, 2% спиртовый раствор йода, резиновая груша, капилляр от аппарата Панченкова. Самостоятельная работа студентов. Приготовить из 1% раствора NaCL и дистиллированной воды растворы следующих концентраций: 0,8%; 0,6%; 0,5%; 0,3%; 0,2%. Для этого следует: 1 пробирка: к 4 мл 1% раствора NaCl прибавить 1 мл дистиллированной воды. Получаем 5 мл 0,8% раствора; 2 пробирка: к 3 мл 1% раствора NaCl прибавить 2 мл дистиллированной воды. Получаем 5 мл 0,6% раствора; 3 пробирка: к 2,5 мл 1% раствора NaCl прибавить 2,5 мл дистиллированной воды. Получаем 5 мл 0,5% раствора; 4 пробирка: к 2 мл 1% раствора NaCl прибавить 3 мл дистиллированной воды. Получаем 5 мл 0,4% раствора; 5 пробирка: к 1,5 мл 1% раствора NaCl прибавить 3,5 мл дистиллированной воды. Получаем 5 мл 0,3% раствора; 6 пробирка: к 1 мл 1% раствора NaCl прибавить 4 мл дистиллированной воды. Получаем 5 мл 0,2% раствора; 7 пробирка: налить 5 мл дистиллированной воды. Полученные растворы разместить в порядке уменьшения концентрации. С помощью капилляра и резиновой груши взять из мякоти IV пальца кровь (70 мм3). В каждую пробирку прибавить 10 мм3 крови. Оставить пробирки в штативе на 30 минут. Отметить концентрации раствора, где произошел гемолиз всех эритроцитов (на дне пробирки нет осадка эритроцитов, раствор прозрачен, ярко алый - «лаковая кровь»). Максимальная концентрация гипотонического раствора NaCL, в котором состоялся гемолиз всех эритроцитов, отвечает максимальной осмотической резистентности эритроцитов. Отметить максимальную концентрацию гипотонического раствора NaCL, в котором начался гемолиз эритроцитов (есть осадок эритроцитов, раствор имеет розовый цвет). Максимальная концентрация гипотонического раствора NaCL, в котором начался гемолиз менее стойких эритроцитов, отвечает минимальной осмотической резистентности эритроцитов. Примечание: На занятии можно использовать консервированную кровь в связи с контагиозными заболеваниями. 24 Рекомендации к оформлению результатов. Результаты записать в протокол. Проанализировать результаты с учетом качественной характеристики процесса, который наблюдаем. _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ 3. Задание для самостоятельной работы и самоконтроля. 3.1. Тестирование по системе „Крок - 1”: 1. У женщины 40 лет при анализе крови выявлено: натрий - 115 ммоль/л, хлориды - 85 ммоль/л, калий - 4 ммоль/л, бикарбонат - 22 ммоль/л, глюкоза - 6 ммоль/л, общий белок 65 г/л. Следствием отмеченных изменений состава крови, прежде всего, станет уменьшение: A. Осмотического давления B. Онкотического давления C. Кислотно-щелочного состояния крови D. Объема циркулирующей крови E. Скорости оседания эритроцитов концентрированой. Возбуждение каких рецепторов обеспечивает высокую активность АДГ? A. Осморецепторов гипоталамуса. B. Волюморецепторов полых вен и предсердий. C. Осморецепторов печени. D. Волюморецепторов гипоталамуса. E. Барорецепторов дуги аорты. 5. За обедом человек съел солёную селёдку и картошку с солёным огурцом. Через некоторое время у него возникло ощущение жажды. Возбуждение каких рецепторов прежде всего вызвало у него это ощущение? A. Волюморецепторов гипоталамуса. B. Волюморецепторов полых вен и предсердий. C. Осморецепторов печени. D. Осморецепторов гипоталамуса. E. Барорецепторов дуги аорты. 2. В связи с кровопотерей пациенту введены 1 л раствора NaCl с концентрацией 150 ммоль/л. Вследствие этого, скорее всего, уменьшится: A. Осмотическое давление плазмы крови B. Онкотическое давление плазмы крови C. Концентрация ионов водорода D. Концентрация электролитов E. Напряжение углекислого газа крови 3. Человеку внутривенно ввели гипертонический раствор глюкозы. Это повлечет усиленное движение воды в таком направлении: A. Изменений движения воды не будет B. Из межклеточной жидкости к капиллярам C. Из межклеточной жидкости к клеткам D. Из капилляров к межклеточной жидкости E. Из клеток к межклеточной жидкости 6. Максимальная концентрация NaCl в растворе, при которой происходит полный гемолиз эритроцитов (образуется лаковая кровь), называется: A. Мин. резистентностью (0,32 – 0,34%). B. Мин. резистентностью (0,44 – 0,48%). C. Макс. резистентностью (0,32 – 0,34%). D. Макс. резистентностью (0,44 – 0,48%). E. Мин. резистентностью (0,8 – 0,9%). 7. Наибольшие отличия между плазмой крови и интерстициальной жидкостью заключаются в … A. Содержании Na+ B. Содержании К+ C. Содержании белков D. Содержании аминокислот 4. У адаптированного к высоким температурам человека в жаркую погоду усиливается потоотделение, в результате чего он теряет много воды, и внеклеточная среда становится более 25 E. Содержании жиров B. 8.5 атм C. 2.7 атм D. 7.0 атм E. 7.6 атм 8. Введение какого раствора в сосудистое русло не изменит осмотического давления плазмы крови? A. Глюкозы (0,9%) B. NaCl (0.9%) C. NaCl (0.2%) D. CaCl2 (20%) E. Сорбитола 1 % 10. Чем отличается лимфа по составу от плазмы? A. Большей концентрацией белков B. Концентрацией фосфолипидов C. Меньшей концентрацией белков D. Большим количеством форменных элементов E. Содержанием аминокислот 9. Чему равна величина осмотического давления плазмы крови? A. 4.7 атм 3.3. Ситуационные задачи: 1. Спортсменка принимает участие в марафонском забеге, во время которого теряет с потом воду и хлорид натрия, потери воды с потом она пополняет во время бега питьем дистиллированной воды. Как изменятся физико-химические показатели плазмы крови по окончании забега у спортсменки ? Аргументируйте ответ. _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ 2. Человек, 30 лет, с массой тела 70 кг, выпил 2 л дистиллированной воды. Проанализируйте: А. Возможные изменения параметров гомеостаза, их последствия. В. Нарисуйте схему контура регуляции поддержки постоянства параметров гомеостаза в этих условиях; назовите факторы и механизмы регуляции; как называется такой контур регуляции. _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ 5. Литература. Учебник под редакцией Филимонова В.И., 1995 г. – С. 138-140, 142-143. Физиология человека /Под. ред. Г.И. Косицкого- М.: Медицина, 1985. – С. 212-215. Р.С. Орлов, А. Д. Ноздрачёв Нормальная физиология Москва «ГЭОТАР-Медиа», 2005.- С. 526-528. Учебные задания для студентов по нормальной физиологии человека (ситуационные задачи): Физиология системы крови / Под ред. Н.В. Братусь. – Винница, 1984. - 3-9 с. № 10-13, 23, 30, 38-40, 3-9, 24. Атлас по нормальной физиологии /Под ред. Н.А. Агаджаняна – М .: Высшая школа, 1986. – С. 14-36. Конспект лекций. Физиология человека. Под ред. В.М.Покровского, Г.Ф.Коротько, 1997, т.1, с.277-280. Физиология человека. Под ред. Р.Шмидта и Г.Тевса, М., Мир, т.2, 1996, с.414-422, 616-624. 26 Тема 5: Белки плазмы крови. Активная реакция крови. 1. Теоретические вопросы к занятию. 1.2. Белки плазмы крови, их характеристика и функциональное значение. 1.3. Онкотическое давление плазмы крови, его роль. 1.4. Кислотно-основное состояние крови, роль буферных систем в регуляции его постоянства. 1.5. Функциональная система, которая поддерживает постоянство кислотно-основного равновесия (pH). 1.6. Буферные основы. Стандартный и актуальный бикарбонат. Ацидоз. Алкалоз. 1.7. Скорость оседания эритроцитов (СОЭ), факторы, которые влияют на нее. 1.8. Тестовые задания. 1.9. Тестирование по системе „Крок - 1”. 1.10. Ситуационные задачи. 2. Практическая работа Тема 1: Определение скорости оседания эритроцитов по методу Панченкова. Цель работы: усвоить методику определения скорости оседания эритроцитов (СОЭ) по методу Панченкова. Оборудование: прибор Панченкова, капилляры, часовое стекло, 96% спирт, скарификатор, стерильная вата, 2% спиртовый раствор йода, резиновая груша для забора крови, 5% раствор цитрата натрия (лимоннокислый натрий). Самостоятельная работа студентов. Капилляр промыть 5% раствором цитрата натрия. При помощи резиновой груши в капилляр набрать раствор цитрата натрия до метки «Р». Выдуть его на часовое стекло. Потом сделать прокол мякоти IV пальца и в тот же капилляр последовательно дважды набрать кровь до метки «К». Каждый раз выдувать кровь на часовое стекло и смешивать с раствором цитрата натрия. Полученную смесь набрать в капилляр до метки «0» и поставить капилляр в штатив. Через 1 час посмотреть, какая высота в мм. образованного вертикального столбика плазмы крови в капилляре. Число мм. плазмы является мерой скорости оседания эритроцитов (мм/час). Примечание: На занятии можно использовать консервированную кровь в связи с контагиозными заболеваниями. Рис. 6.5. Прибор Панченкова для определения СОЭ: А – общий вид; Б – капилляр; В – часовое стекло. 27 Рекомендации к оформлению результатов. Результаты записать в протокол. Сравнить их с физиологической нормой у новорожденных, мужчин, женщин и беременных женщин. Сделать вывод. _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ 3. Задание для самостоятельной работы и самоконтроля. 3.1. Тестирование по системе „Крок-1”: 1. Каков механизм ускорения СОЭ у беременных женщин? A. Увеличение концентрации фибриногена. B. Увеличение количества эритроцитов. C. Увеличение объёма крови. D. Увеличение концентрации альбуминов. E. Усиление функции костного мозга. 5. На последнем месяце беременности содержание фибриногена в плазме крови в 2 раза выше нормы. Какой величины СОЭ следует при этом ожидать? A. 3-12 мм/час B. 0-5 мм/час C. 10-15 мм/час D. 5-10 мм/час E. 40-50 мм/час 2. Как изменяется онкотическое давление, если общее содержание белка в крови остается неизменным, а количество альбуминов уменьшается? A. Повышается B. Не изменяется C. Снижается D. Может как снижаться, так и повышаться E. Снижается незначительно 6. У человека в результате хронического заболевания печени существенно нарушена её белковосинтезирующая функция. К уменьшению какого параметра гомеостаза это приведет? A. Плотности крови B. Осмотического давления C. Онкотического давления плазмы D. Уровня глюкози E. Гематокритного показателя 3. Онкотическое давление обеспечивается присутствием в крови различных белковых фракций, преимущественно A. α –глобулинами B. Альбуминами C. Фибриногеном D. -глобулином E. Протромбином 7. За счет буферных свойств белков обеспечивается A. Поддержание осмотического давления B. Снижение концентрации ионов водорода в крови C. Обмен веществ в крови D. Поддержание постоянства концентрации ионов водорода в крови E. Поддержание объема циркулирующей крови 4. При исследовании белков плазмы крови у женщины 25 лет установлено, что общий белок составляет 75 г/л, альбумино-глобулиновый коэффициент 0,9. Это всего вероятнее приведет к увеличению: A. Онкотического давления B. Осмотического давления C. Концентрации ионов водорода D. Скорости оседания эритроцитов E. Объема циркулирующей крови 8. Во время лабораторного исследования крови пациента 44 лет обнаружено, что содержание белков в плазме крови равняется 40 г/л. Как это влияет на транскапиллярный обмен воды? A. Обмен воды не изменится B. Увеличится фильтрация и резорбция C. Уменьшится фильтрация и резорбция 28 D. Увеличивается фильтрация, уменьшится резорбция E. Уменьшается фильтрация, увеличивается резорбция Е. 8,1 - 8,4 10. Проводят лабораторное исследование крови здорового мужчины 40 лет. Каким должно быть в норме содержание белков в плазме крови? A. 56-66 г/л B. 60-80 г/л C. 55-85 г/л D. 65-85 г/л E. 65-95 г/л 9. В каком диапазоне колеблется активная реакция крови (рН) в норме? A. 7,0 - 7,5 B. 7,35 - 7,45 C. 7,25 - 7,85 D. 7,9 - 8,0 3.3. Ситуационные задачи: 1. У женщины в конце беременности при исследовании белков плазмы крови выявили увеличение вдвое концентрации фибриногена и уменьшение альбумино-глобулинового коэффициента. Какая константа плазмы крови вероятнее всего при этом изменится? Аргументируйте ответ. _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ 2. У курящего снижена вентиляция легких. Изменения каких показателей (в частности pH, количество HCO3 - (ммоль/л), Р СО2 (мм.рт.ст.)) артериальной крови скорей всего будут иметь место у него? _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ 5. Задания к вопросу: "Оценка кислотно-щелочного состояния крови" : 1. Определите, какие из приведенных результатов будут иметь место у пациента через месяц после искусственной вентиляции легких рН НСО3РСО2 ммоль/л мм.рт.ст. 1. 7.65 48 45 2. 7.50 15 20 3. 7.40 24 40 4. 7.31 16 33 2. Определить, какие из приведенных результатов будут иметь место у пациента, у которого на протяжении 5 дней была рвота. Другая информация отсутствует рН НСО3РСО2 ммоль/л мм.рт.ст. 1. 2. 3. 4. 7.65 7.50 7.40 7.31 48 15 24 16 45 20 40 33 29 3. Определить, какие из приведенных результатов будут иметь место у пациента, который длительное время болеет гипофункцией бета-клеток поджелудочной железы. рН НСО3РСО2 ммоль/л мм.рт.ст. 1. 7.65 48 45 2. 7.50 15 20 3. 7.40 24 40 4. 7.31 16 33 4. Литература. Учебник под редакцией Филимонова В.И., 1995 г. – С. 139, 141-143. Физиология человека /Под. ред. Г.И. Косицкого- М.: Медицина, 1985. – С. 213-215, 232. Р.С. Орлов, А. Д. Ноздрачёв Нормальная физиология Москва «ГЭОТАР-Медиа», 2005.- С. 528-530. Учебные задания для студентов по нормальной физиологии человека (ситуационные задачи): Физиология системы крови / Под ред. Н.В. Братусь. – Винница, 1984. - 3-9 с. № 10-13, 23, 30, 38-40, 3-9, 24. Атлас по нормальной физиологии /Под ред. Н.А. Агаджаняна – М .: Высшая школа, 1986. – С. 14-36. Конспект лекций. Физиология человека. Под ред. В.М.Покровского, Г.Ф.Коротько, 1997, т.1, с.277-280. Физиология человека. Под ред. Р.Шмидта и Г.Тевса, М., Мир, т.2, 1996, с.414-422, 616-624. Тема 6: Виды и физиологические механизмы гемостаза при повреждении стенки сосудов. Физиология тромбоцитов. 1. Теоретические вопросы к занятию. 1.1. Система, регулирующая агрегатное состояние крови (РАСК). Факторы, предупреждающие свертывание крови. 1.2. Механизмы поддержания жидкого состояния крови. 1.3. Гемостаз, его виды. 1.4. Тромбоциты, их роль в организме. 1.5. Сосудисто-тромбоцитарный гемостаз, его роль. 1.6. Современные представления об основных факторах, которые принимают участие в коагуляционном гемостазе – (коагулянты). 1.7. Коагуляционный гемостаз, его фазы, механизмы, значение. 1.8. Антикоагулянты, их виды, механизмы действия, значение. 1.9. Понятие о первичных и вторичных антикоагулянтах, средства, которые предотвращают свертывание крови 1.10. Плазмины и фибринолиз, его механизмы, значение. 1.11. Роль сосудистой стенки в регуляции гемостаза и фибринолиза. 1.12. Сворачивание крови. 1.13. Регуляция свертывания крови. 1.14. Физиологические основы методов исследования состояния гемостаза. 1.15. Возрастные изменения системы гемостаза 1.16. Кроветворение и его регуляция. 1.17. Тестовые задания. 1.18. Тестирование по системе „Крок - 1”. 2. Практическая работа 30 Тема 1. Определение времени свертывания крови. Цель и задание. Определить время свертывания крови. Изучить влияние антикоагулянтных веществ на процесс свертывание. Материалы и оборудование: предметные стекла покрытые парафином, стеклянные палочки, оксалат и цитрат натрия, стерильный скарификатор, спирт 76 %, эфир, настойка йода, вата, секундомер или часы. Объект исследования: кролик. Самостоятельная работа. На три стекла, покрытые парафином, наносят по одной капле крови (диаметром 5-6 мм), взятой из ушной вены кролика. Отмечают время взятия крови. На одно стекло добавляют к крови несколько кристалликов оксалата аммония, на второе - такое же количество цитрата натрия. На третье ничего не добавляют. (Одним из способов предупреждения свертывания крови является удаление из нее ионов кальция. Ионы кальция могут быть связаны солями щавелевой кислоты, лимонной кислоты и др. При добавлении к крови указанных веществ ионы кальция связиваются в нерастворимые соли и выпадают в осадок, если была прибавлена соль щавелевой кислоты (оксалатная кровь), или если прибавили соль лимонной кислоты (цитратная кровь). Таким образом, цитратная или оксалатная кровь не способны к свертыванию). Периодически, с интервалами 30 с, перемешивают стеклянными палочками кровь на каждом стекле. Появление нитей фибрина, которые тянутся за палочкой, свидетельствует о начале свертывания крови. Время, прошедшее с момента взятия крови до появления нитей фибрина, будет отвечать времени свертывания крови. При определении описанным способом времени свертывания в норме оно равняется 4 - 6 мин. Отметить, на каком стекле произошло свертывание и за какое время; на каких стеклах не произошло свертывание и почему. Рекомендации к оформлению результатов. Описать полученные результаты. Сделать вывод. _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ Тема 2. Определение времени кровотечения по Дуке Цель: определение времени спонтанной остановки кровотечения проводят после повреждения мелких сосудов. Остановка кровотечения из мелких сосудов происходит главным образом благодаря способности тромбоцитов к агглютинации в месте повреждения сосуда. Цель работы: ознакомиться с методикой определения длительности кровотечения и оценить время свертывания крови. Оборудование: часы, полоски фильтровальной бумаги, 76% спирт, скарификатор, вата, 2% спиртовой раствор йода. Стерильным скарификатором делается прокол пальца и сразу же начинают отсчет времени. Выступающую каплю крови каждые 30 с осторожно впитывают фильтровальной бумагой, не прикасаясь к раневой поверхности. Момент, когда на фильтровальной бумаге больше не появляется кровяное пятно, отмечают как окончание кровотечения. Рекомендации к оформлению результатов. 31 В норме при определении времени кровотечения этим способом кровотечение останавливается через 2 - 3 мин. Вклеить в тетрадь фильтровальную бумагу с отпечатками капель крови. Сделать вывод. Оформить протокол. _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ Тема 3. Определение количества тромбоцитов в крови человека по методу Джавадяна. Цель работы: усвоить методику определения количества тромбоцитов в крови человека соответственно с методом определения длительности кровотечения и оценить время свертывания крови. Оборудование: микроскоп, осветлитель, счетная камера, покровное стекло, раствор для разведения крови (на 100 мл дистиллированной воды берут 3,8 г цитрата натрия, 0,57 г хлорида натрия, 0,15 г метиленовой синьки; после кипячения и фильтрации к раствору добавляют 2-3 капли концентрированого формалина), эритроцитарный меланжер, резиновая груша для взятия крови. Самостоятельная работа студентов. Ознакомиться с камерой, в которой подсчитывают тромбоциты под объективом микроскопа. Камеру плотно покрыть покровным стеклом, притирая его до появления ньютоновых колец. При помощи резиновой груши в меланжер набирают кровь к метке 0,5 и сразу разводят предварительно приготовленным раствором к метке 101 (в 200 раз). Зажав меланжер между пальцами, содержимое его тщательным образом перемешивают. Оставляют меланжер на 10-15 минут для достаточного окрашивания тромбоцитов метиленовой синькой. После повторного размешивания каплю смеси с меланжера вносят в предварительно приготовленную камеру Горяева. Подсчет ведут в 25 больших квадратах, то есть в 400 маленьких. Зная объем камеры над маленьким квадратиком (1/4000 мм3) и степень разведения крови, определить количество тромбоцитов в 1мм3 крови по формуле: X= А х 4000 х 200 /400, где: Х – общее количество тромбоцитов в 1 мм3 (1мкл), А – количество тромбоцитов в 25 больших квадратах, 200 – разведение крови, 1/ 4000 мм3 – объем камеры над маленьким квадратиком, 400 – количество маленьких квадратиков в 25 больших. Примечание: тромбоциты быстро разрушаются вне границ кровеносного русла, поэтому кровь необходимо набирать как можно быстрее, а смеситель должен быть влажным. Рекомендации к оформлению результатов. Описать полученные результаты. Сделать вывод. ________________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ 3. Задание для самостоятельной работы и самоконтроля. 3.1. Тестирование по системе „Крок-1”: 1. У больного с нарушением всасывания жиров в кишечнике увеличено время свертывания крови. Коагулограмма показала снижение протромбина (с 0,15 32 г/л до 0,05 г/л), принимающего участие во второй фазе свертывания крови – образования тромбина. Это стало следствием: A. Снижения концентрации Са++ B. Недостатка витамина В12 C. Недостатка витамина С D. Недостатка витамина К E. Снижения количества глобулина крови минут. Такие результаты свидетельствуют, прежде всего, об уменьшении скорости A. Сосудисто-тромбоцитарного гемостаза B. Коагуляционного гемостаза C. Образование прокоагулянтов D. Образование тромбина E. Образование плазминов 6. Коагулянтные и антикоагулянтные механизмы регулируются нервной системой. Как отреагирует процесс гемокоагуляции на повышение тонуса симпатической нервной системы? A. Гемокоагуляция не изменится B. Гемокоагуляция замедлится C. Гемокоагуляция усилится D. Активируется антикоагулянтная система E. Угнетается фибринолитическая система 2. После наложения жгута у исследуемого выявили точечное кровоизлияние. С нарушением функции каких клеток крови это связано? A. Тромбоцитов B. Эозинофилов C. Моноцитов D. Лимфоцитов E. Нейтрофилов 3. У человека необходимо оценить скорость развития коагуляционного гемостаза. Какой из приведенных показателей целесообразно определить для этого? A. Количество эритроцитов в крови B. Время кровотечения C. Общее время свертывания крови D. Содержание плазминов в крови E. Количество тромбоцитов в крови 7. При заболеваниях печени, сопровождающихся недостаточным поступлением желчи в кишечник, наблюдается повышение кровоточивости. Чем можно объяснить это явление? A. Дефицитом железа B. Авитаминозом К C. Тромбоцитопенией D. Гемолизом эритроцитов E. Авитаминозом С 4. В анализе крови женщины обнаружили: эритроцитов – 4 х 1012 /л, гемоглобина 130 г/л, лейкоцитов 2,5 х 109/л, лейкоцитарная формула нейтрофилов 15 %, эозинофилов – 2 %, моноцитов – 10 %, лимфоцитов – 78%, тромбоцитов – 200 х 109/л. Какой из следующих факторов гуморальной регуляции целесообразно вводить женщине для нормализации показателей крови? A. Гранулоцитоколониестимулирующий фактор B. Моноцитоколониестимулирующий фактор C. Тромбоцитопоэтин D. Эритропоэтин E. Интерлейкны 4,6 8. Недостаточное количество каких форменных элементов крови, приведет к нарушениям в адекватной остановке капиллярного кровотечения ? А. Эритроцитов B. Лейкоцитов C. Тромбоцитов D. Аранулоцитов E. Нейтрофилов 9. Какой из факторов в организме человека обеспечивает деятельность системы РАСК, в частности принимает участие в реканализации тромбированных сосудов? A. Антитромбин III B. Урокиназа C. Цитрат натрия D. Викасол E. Гирудин 5. При анализе крови мужчины 35 лет обнаружили: эритроцитов – 3,7 х 1012 /л, гемоглобина 130 г/л, тромбоцитов – 190 х 109/л, общее время свертывания крови – 8 минут, время кровотечения по Дуке – 7 33 D. Осадить ионы кальция E. Прибавить НС1 10. Каким средством можно предотвратить свертывание крови ? А. Прибавить раствор NaС1 B. Прибавить викасол C. Прибавить глюкозу 3.3. Ситуационные задачи: 1. Человек, 45 лет, пришел к врачу-стоматологу по поводу удаления корня зуба. Врач обратил внимание на кровоподтеки, которые расположены на предплечье пациента. Такие кровоподтеки, по словам пациента, в последнее время возникают у него даже при незначительных повреждениях, бывают носовые кровотечения. При обследовании ротовой полости обнаружена кровоточивость десен. При анализе крови выявлено: эритроцитов - 3.7 х 1012/л, гемоглобина – 120 г/л, лейкоцитов - 5,8 х 109/л, лейкоцитарная формула без изменений, тромбоцитов 90 х 109/л, общее время свертывания крови - 6 мин., время кровотечения - 10 минут. А. Дайте обоснованные выводы по этому анализу крови. В. Назовите вероятные причины. _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ 2. При анализе крови у мужчины, 40 лет, который злоупотреблял алкоголем, выявлено: гемоглобина - 130 г/л, эритроцитов - 3,9 х 109/л, цветовой показатель - 1,0; лейкоцитов - 4,5 х 109/л, лейкоцитарная формула без изменений, тромбоцитов - 100 х 109/л, CОЭ - 4 мм/год, время свертывания крови - 6 мин., белков плазмы крови - 60 г/л. А. Дайте обоснованные выводы по этому анализу крови. В. Назовите вероятные причины. _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ 4. Література. Учебник под редакцией Филимонова В.И., 1995 г. – С. 153-162. Физиология человека /Под. ред. Г.И. Косицкого- М.: Медицина, 1985. – С. 496-500. Р.С. Орлов, А. Д. Ноздрачёв Нормальная физиология Москва «ГЭОТАР-Медиа», 2005.- С. 563-570. Физиология системы крови / Под ред. Н.В. Братусь. – Винница, 1984. - 3-9 с. № 15, 19, 21, 33. Атлас по нормальной физиологии /Под ред. Н.А. Агаджаняна – М .: Высшая школа, 1986. – С.14-36. Конспект лекций. Физиология человека. Под ред. В.М.Покровского, Г.Ф.Коротько, 1997, т.1, с. 277-280. Физиология человека. Под ред. Р.Шмидта и Г.Тевса, М., Мир, т.2, 1996, с.616-624. 34 Тема 7. Группы крови. Резус-фактор. 1. Теоретические вопросы к занятию. 1.1. Группы крови: принципы деления на группы по системе АВО, СDE и другим. 1.2. Методы определения групп крови при помощи стандартных сывороток и цоликлонов анти-А и анти-В. 1.3. Резус-фактор, его значение в клинике. 1.4. Принцип определения резус-принадлежности крови (при помощи сыворотки антирезус). 1.5. Значение совместимости по резус-фактору в раннем онтогенезе. 1.6. Физиологические основы переливания крови. 1.7. Кровезаменители. 1.8. Тестовые задания. 1.9. Тестирование по системе „Крок-1”. 1.10. Ситуационные задания 2. Практическая работа. Тема 1. Определение групп крови по системе АВО. Цель роботы: усвоить методику определения групп крови человека (донорской) по методикам, которые используют в клинической лаборатории. Оборудование: стандартные сыворотки I, II, III, IV групп крови, пластинка с углублениями, 76% спирт, скарификатор, стерильная вата, 2% спиртовый раствор иода, резиновая груша для забора крови, два предметных стекла, пипетка, изотонический раствор хлорида натрия. Самостоятельная работа студентов. На пластинке с углублениями обозначить группы сывороток. Под каждое обозначение в углубление нанести каплю сыворотки соответствующей группы. Проколоть мякоть IY пальца руки. Углом предметного стекла перенести кровь из пальца в сыворотку I группы и тщательным образом размешать. Вторым углом - в сыворотку II группы и опять размешать т.д. Соотношение крови и сыворотки должно быть 1:10. Через 2-3 мин. наблюдают реакцию агглютинации, после чего добавляют пипеткой каплю физиологического раствора хлорида натрия. Реакция происходит в течение 5 мин. Тема 2. Определение групп крови при помощи цоликлонов анти-А и анти-В. Цель работы: усвоить методику определения групп крови при помощи цоликлонов анти-А и анти-В. Оборудование: белая пластинка с углублениями, 7 маркированных пипеток, 2 предметных стекла, стеклограф, кровь и плазма обследуемого, растворы цоликлонов анти-А и анти-В, стандартные эритроциты II (A) и III (В), изотонический раствор хлорида натрия. Самостоятельная работа студентов. - Определение антигенов исследуемой крови. На белой пластинке над двумя углублениями написать “анти-А” и “анти-В”. С помощью двух разных обозначенных пипеток внести по одной капле (0,1 мл): в углубление, где написано “анти-А” – цоликлон анти-А, в углубление, где написано “анти-В” – цоликлон анти-В. Соответствующими пипетками капли сделать плоскими. Каплю исследуемой крови поместить в отдельное углубление отдельной пипеткой. Уголком предметного стекла перенести часть крови в каплю с цоликлоном Анти-А. Кровь быстро размешать с каплей цоликлона (расцветка капли – слабо-розовая). Вторым углом предметного стекла перенести часть крови с цоликлоном Анти-В. Тоже сразу размешать. Соотношение крови и цоликлона должно быть 1:10. Осторожно покачивать пластинку на протяжении нескольких минут, но не более чем 2,5 мин. - Контроль на присутствие антител в плазме исследуемой крови. 35 С помощью двух разных обозначенных пипеток нанести в соответствующие углубления “стандарт А” и “стандарт В” по одной капле плазмы исследуемого. Каплю крови со стандартными эритроцитами группы II (А) поместить в отдельное углубление отдельной пипеткой. Надписать. Каплю крови со стандартными эритроцитами группы III (В) также поместить в отдельное углубление отдельной пипеткой. Надписать. Уголком предметного стекла перенести часть крови со стандартными эритроцитами группы II(А) в плазму, которая содержится в углублении “стандарт А”. Соотношение крови должно быть 1:10. Так же вторым уголком стекла смешать стандартные эритроциты III(В) с плазмой, что содержится в углублении “стандарт В”, перемешать. Примечание: ложная агглютинация может быть тогда, когда эритроциты собираются в монетные столбики. Если прибавить к капле крови 1-2 капли изотонического раствора хлорида натрия, тогда ложная агглютинация исчезает. Эту дополнительную реакцию проводят также, когда исследуемая кровь принадлежит к группе АВ (0). На основании таблицы (приведенной ниже) сделать вывод относительно группы крови исследуемого. Группа крови I II III IV Реакция эритроцитов цоликлоном анти-А + + анти-В + + с Реакция плазмы стандартными эритроцитами II(A) III(B) + + + + - с «+» - реакция агглютинации. Примечание: цоликлоны анти-А и анти-В являются разведенной жидкостью мышейносителей соответствующей гибридомы, в которой находятся специфические иммуноглобулины класса М (направленные против группоспецифических антигенов А и В человека); моноклональные анти-А и анти-В антитела образуются двумя разными гибридомами; цоликлоны не содержат антител другой специфичности и поэтому не вызывают неспецифической полиаглютинации эритроцитов; цоликлоны не являются продуктами клеток человека и поэтому возможность заражения препаратов вирусами гепатита и ВИЧ исключена. Ошибки при определении групп крови Отсутствие агглютинации может наблюдаться вследствие: 1. Неправильного количественного соотношения между исследуемой кровью и стандартной сывороткой; 2. Слабого титра стандартных сывороток; 3. Гемолиза эритроцитов исследуемого; 4. Определения при высокой температуре окружающего воздуха (выше 25° С) и в течение менее 5 мин. Наряду с отсутствием агглютинации в ряде случаев может наблюдаться ложная агглютинация. Краевая агглютинация наблюдается при подсыхании капель, если определение групп крови ведется больше положенного времени. Холодовая агглютинация наступает, если определение проводить при температуре ниже 15° С. При добавлении подогретого до комнатной температуры физиологического раствора холодовая аггютинация устраняется. Бактериальная агглютинация — скопление эритроцитов вокруг бактерий, может наблюдаться при работе с недоброкачественной стандартной сывороткой. 36 Тема 3: Определение резус-фактора крови человека экспресс-методом. Цель работы: усвоить методику определения резус-принадлежности крови методиками, которые используют в клинической лаборатории. Оборудование: стандартная антирезусная сыворотка, контрольная сыворотка (не содержит антирезус антител), пластинка с углублениями, 76% спирт, скарификатор, стерильная вата, 2% спиртовой раствор йода, предметное стекло, пипетка, изотонический раствор NaCL. Самостоятельная работа студентов. В одно углубление на пластинке наносят каплю контрольной сыворотки. Влево от нее во второе углубление наносят каплю антирезусной сыворотки. Исследование начинают с контрольной сыворотки. Проколоть мякоть IY пальца руки. Концом предметного стекла перенести кровь из пальца в контрольную сыворотку и тщательным образом перемешать. Вторым концом – в антирезусную сыворотку и опять размешать. Соотношение крови и сыворотки должно быть 1:2. В каждое углубление можно прибавить изотонический раствор хлорида натрия. Наблюдают за реакцией. В капле с контрольной сывороткой агглютинации не должно быть (независимо от резус-принадлежности крови). Если реакция агглютинации наблюдается в капле с антирезусной сывороткой, кровь – резус-положительная, если реакция агглютинации не наблюдается в капле с антирезусной сывороткой, кровь – резус-отрицательная. Если реакция агглютинации возникает в капле с контрольной сывороткой определение необходимо повторить, или применить другие методы. Тема 4. Определение резус-принадлежности крови человека с использованием тестреагента анти-D супер. Цель работы: усвоить методики определения резус-принадлежности крови методиками, которые используют в клинической лаборатории. Оборудование: реагент анти-D супер, белая пластинка с углублениями, 2 пипетки, предметное стекло, кровь обследуемого, эритроциты исследуемой крови, стандартные Dпозитивные и D-отрицательные эритроциты, 76% спирт, скарификатор, стерильная вата, 2% спиртовый раствор йода. Самостоятельная работа студентов. - Определение резус-принадлежности крови человека. На пластинку нанести большую каплю реагента (0,1 мл). В отдельное углубление поместить каплю исследуемой крови. Уголком предметного стекла перенести часть крови в каплю с реагентом и сразу размешать. Соотношение крови и реагента должно быть 1:10. Пластинку нужно покачать через 20-30 с. после смешивания крови с реагентом (за это время развивается реакция агглютинации в виде больших лепестков). Четкая агглютинация состоится через 30-60 с, но результат необходимо учесть через 3 мин. Если возникает реакция агглютинации, тогда кровь есть резус-положительная. - Контроль специфичности реакции агглютинации. В 2 углубления пластины пипеткой внести эритроциты исследуемой крови. В каждое углубление с эритроцитами исследуемой крови прибавить стандартные D-позитивные и Dнегативные эритроциты. Примечание: моноклональные антитела анти-D СУПЕР это неразведенная или разведеннная солевым раствором культуральная жидкость, кондиционированная клеткамипродуцентами антител. Полные моноклональные антитела относят к иммуноглобулинам класса М; - действующим началом моноклональных антител анти –D СУПЕР есть моноклональные анти-D антитела человека, которые продуцируются гетерогибридомой. Гетерогибридома 37 получена при слиянии лимфобластоидной линии человека с миеломной клеточной линией мышей; - моноклональные антитела принадлежат к одному классу иммуноглобулинов, полностью идентичных по структуре и биологической активности; - поскольку линия клеток человека, которого использовали для слияния с миэломой мышы, была получена из лимфоцитов здорового донора, исключена контаминация реагента патогенными вирусами (гепатит, ВИЧ и др.). При этом с исследуемыми образцами необходимо работать в перчатках, чтобы не было заражения патогенными вирусами, которые передаются через кровь; - Моноклональные антитела анти-D СУПЕР не содержат антител другой специфичности и поэтому могут быть использованы для определения D-антигена в эритроцитах любой группы крови. Задание для самостоятельного контроля уровня знаний. - Зарисовать возможные варианты агглютинации в предложенных таблицах. 3. Рекомендации к оформлению результатов. К теме № 1 Результаты записать в протокол. Зарисовать схему агглютинации и сделать выводы. _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ 38 _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ К теме № 2 Результаты записать в протокол. Зарисовать схему агглютинации и сделать выводы. _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ К теме № 3 Результаты записать в протокол. Зарисовать схему агглютинации и сделать выводы. _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ К теме № 4 Результаты записать в протокол. Зарисовать схему агглютинации и сделать выводы. _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ Определение индивидуальной совместимости крови. В пипетку набирают кровь из пальца в количестве 1 мл. Микропробирку центрифугируют в микроцентрифуге Шкляра до отделения сыворотки от эритроцитов. Затем на диск наносят 1-2 капли исследуемой сыворотки и добавляют в 10 раз меньшую каплю крови донора. Капли смешивают стеклянной палочкой, диск слегка покачивают и через 5 мин. оценивают результат. Отсутствие агглютинации указывает на совместимость крови донора и реципиента в отношении групп крови системы АВО. При появлении агглютинации прибавляют каплю физиологического раствора. Если агглютинация не исчезает, то кровь донора и реципиента следует считать несовместимой. 3.1. Рекомендации к оформлению результатов. Описать полученные результаты. Сделать вывод. Определить совместимость крови донора и реципиента по резус-фактору. В чашку Петри вносят три капли сыворотки реципиента (полученную по методике, описанной в задаче 3) и рядом с каждой каплей сыворотки маленькую каплю крови донора. Капли перемешивают и чашку помещают на водяную баню при 47-48°С на 10 минут. Затем определяют результаты. Наличие агглютинации указывает на то, что в сыворотке пациента находятся антитела к резус-фактору и что кровь донора и реципиента несовместима. Проба на совместимость по резус-фактору является обязательным методом, который следует производить перед переливанием крови наравне с определением групповой принадлежности и индивидуальной совместимостью крови донора и реципиента, а также с учетом биологической пробы (совместимости). 39 3.2. Рекомендации к оформлению результатов. Описать полученные результаты. Сделать вывод. _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ ОСНОВНЫЕ ПРАВИЛА ПЕРЕЛИВАНИЯ КРОВИ В каждом случае переливания крови (гемотрансфузии) следует использовать только одногруппную по системе АВО кровь. Переливание крови «универсального» донора должно применяться как исключение в экстренных случаях по жизненным показаниям. При каждой гемотрансфузии следует провести в полном объеме изосерологические реакции, пробы на совместимость. Перед каждым переливанием крови следует подбирать донорскую кровь, одноименную по резус-фактору, т. е. резус-положительному больному переливать только резус-положительную кровь, а резус-отрицательному - резус-отрицательную кровь. В тех случаях, когда больной иммунизирован при предыдущих переливаниях крови или беременности, что устанавливается при трансфузионном и акушерском анамнезе, то необходимо переливать кровь после подбора индивидуального донора. 4. Задание для самостоятельной работы и самоконтроля. 4.1. Тестирование по системе „Крок-1”: 1. Известно, что в судебно-медицинской практике факт отцовства при рождении ребенка устанавливается по ряду показателей, в том числе по факторам крови, обеспечивающим её групповую принадлежность. Какие особенности крови новорожденного необходимо при этом учитывать? A. Низкое содержание агглютиногенов в плазме крови B. Отсутствие агглютининов в плазме новорожденного C. Наличие агглютиногенов на мембране эритроцитов D. Отсутствие агглютиногенов на мембране эритроцитов E. Наличие агглютиногенов в другой системе B. C. D. E. 0 /альфа/ (l). А/бета/ (ll). АВ (lV). Rh+. 3. При определении отцовства установлено, что ребенок не может иметь таких родителей, потому что в крови матери выявлены в эритроцитах агглютиноген В, в плазме –агглютинин α, а у отца в эритроцитах аглютиноген О, в плазме - агглютинины α, β. Кровь родителей резусотрицательная. У ребенка в эритроцитах выявлено агглютиногены А и В, агглютинины - 0, кровь резусположительная. Мать по системам АВО и СDЕ имеет кровь таких групп: A. α,β (I), Rh – B. A β (II), Rh – C. B α (III), Rh – D. AB 0 (IV), Rh – E. Правильный ответ отсутствует 2. У беременной женщины определили группу крови. Реакция агглютинации эритроцитов состоялась со стандартными сыворотками груп 0 /альфа, бета/ ( 1), В /альфа/ (lll) и не состоялась со стандартной сывороткой группы А /бета/ (ll). Исследуемая кровь принадлежит к группе: A. В/альфа/ (lll). 4. Отец по системам АВО и СDЕ имеет кровь таких групп: A. α,β (I), Rh – B. A β (II), Rh – 40 C. B α (III), Rh – D. AB 0 (IV), Rh – E. Правильный ответ отсутствует подобная агглютинации. Назовите это явление. Какие будут дальнейшие действия врача? A. Псевдоагглютинация, повтор пробы с новым комплектом сывороток B. Агглютинация, указивающая на 4 группу крови. Переливание крови C. Аглютинация, указивающая на 1 группу крови. Переливание крови D. Аглютинация, указивающая на 2 группу крови. Переливание крови E. Сладж эритроцитов, добавить к каждой пробе по капле 0,9 % расствора NaCl и после 2 минут оценить реакцию. 5. Ребенок по системам АВО и CDЕ имеет кровь таких групп: A. O α,β (I), Rh + B. A β (II), Rh + C. B α (III), Rh + D. AB 0 (IV), Rh + E. правильный ответ отсутствует 6. У женщины 30 лет в конце беременности при исследовании крови выявлено: кровь группы А β(II), резусположительная, количество эритроцитов - 4,0 х 10І2/л, гемоглобин - 140 г/л, общий белок плазмы - 75 г/л, альбумино/глобулиновый коэффициент 1,0; количество тромбоцитов 200 х 109/л, фибриногена - 6 г/л, время свертывания крови 1,5 хв. У человека: A. Гипопротеинемия B. Эритроцитоз C. Тромбоцитопения D. Гипокоагуляция E. Гиперкоагуляция 9. Для переливания исспользуют консервированные компоненты крови. При визуальной оценке пакета с эритроцитарной массой внутри него наблюдаются беловатые включения и небольшие комочки. Какие будут дальнейшие действия врача? A. Подогреть пакет на водяной бане, исспользовать для дальнейшего переливания B. Открить пакет, добавить к его содержимому 5 % расствор цитрата натрия и исспользовать для дальнейшей гемотрансфузии C. Охлладить пакет, исспользовать для дальнейшего переливания D. Подержать пакет при комнатной температуре 1 час, исспользовать для дальнейшего переливания E. Содержимое пакета непригодно к дальнейшим гемотрансфузионным манипуляциям 7. Больному Р. с группой крови АВ(IV) Rh (-) необходимо повторное переливание крови. Два месяца назад ему перелили кровь донора К. Почему на этот раз пациенту нельзя переливать кровь этого же донора ? A. Уже состоялась иммунизация на группу крови донора К. B. Уже состоялась иммунизация на систему АВ0. C. Уже состоялась иммунизация на систему резус. D. Уже состоялась иммунизация на систему АВ0 и резус. E. Уже состоялась иммунизация на одну из 20 систем эритроцитов. 10. У ребенка 2 лет отсутсвует в крови фактор VIII, что приводит к значительному увеличению общего времени сворачивания крови. Какую группу крови при необходимости должен перелить врач пациенту: A. α,β (I), Rh +, цитратную кровь В. A β (II), Rh +, свежеконсервированную C. AB 0 (IV), Rh +, свежую D. Совместимую по системам АВО и СDE свежую кровь. E. B α (III), Rh +, дефибринированную 8. Мужчина 60 лет был госпитализирован в клинику по поводу кровопотери. При определении группы крови пациента при помощи стандартных сывороток во всех пробах через 3 мин. наблюдается реакция 4.3. Ситуационные задачи: 41 1. У женщины во время родов в связи с кровопотерей определили группу крови. Кровь резус-отрицательная. Реакция агглютинации эритроцитов состоялась со стандартными сыворотками групп Оαβ (І), Аβ (II), Вα (III) и не состоялась с сывороткой группы АВо(ІV). К какой группе по системе АВО принадлежит кровь? Ответ аргументируйте. _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ 2. У женщины в связи с кровопотерей перед переливанием крови определили группу крови. Реакция агглютинации эритроцитов состоялась со стандартными сыворотками групп Оαβ (І), Аβ (II) и не состоялась со стандартной сывороткой группы Вα (III). К какой группе по системе АВО принадлежит кровь? Ответ аргументируйте. _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ 5. Литература. Учебник под редакцией Филимонова В.И., 1995 г. – С. 151-153. Физиология человека /Под. ред. Г.И. Косицкого- М.: Медицина, 1985. – С. 226-229. Р.С. Орлов, А. Д. Ноздрачёв Нормальная физиология Москва «ГЭОТАР-Медиа», 2005.- С. 548-550. Физиология системы крови / Под ред. Н.В. Братусь. – Винница, 1984. - 3-9 с. № 14, 26-29, 31, 32, 35-37. Атлас по нормальной физиологии /Под ред. Н.А. Агаджаняна – М .: Высшая школа, 1986. – С. 14-36. Конспект лекций. Физиология человека. Под ред. В.М.Покровского, Г.Ф.Коротько, 1997, т.1, с. 277-280. Физиология человека. Под ред. Р.Шмидта и Г.Тевса, М., Мир, т.2, 1996, с.616-624. Тема 8. Обобщающее занятие по физиологии системы крови. 1. Главные цели занятия Трактовать понятие системы крови, механизмы ее регуляции на основе анализа параметров гомеостаза: объема, кислотно-щелочного равновесия, осмотического давления. Трактовать физиологические закономерности функций системы крови: дыхательной, транспортной, защитной. Делать выводы о состоянии физиологических функций организма, которые осуществляются при участии системы крови, на основании количественных и качественных показателей крови: гематокритного показателя, скорости оседания и осмотической резистентности эритроцитов, количества эритроцитов и гемоглобина, цветового показателя, количества тромбоцитов, времени свертывания крови, длительности кровотечения. Анализировать вековые изменения качественных и количественных показателей крови и их регуляции. Применять знание строения, функций, количества эритроцитов и гемоглобина в крови. Регуляции еритропоэза для оценки: показателей состояния красной крови; роли эритроцитов в приспособительных реакциях организма. 42 Объяснять физиологические основы методов исследования функций системы крови: количества эритроцитов и количества гемоглобина, определения группы крови по системе АВО и СDЕ, длительности кровотечения, времени свертывания крови. Применять знание строения, видов и функций лейкоцитов; регуляции лейкопоэза для оценки показателей белой крови (количество лейкоцитов, лейкоцитарная формула и функционального состояния организма). Трактовать принципы проведения всех проб перед переливанием крови. Трактовать физиологические закономерности функций поддержки жидкого состояния крови и развития гемостаза (сосудисто-тромбоцитарного и коагуляционного) при повреждении сосудов. 2. Практические навыки 1. Техника забора крови 2. Расчет цветового показателя крови. 3. Определение гематокритного показателя. 4. Определение скорости оседания эритроцитов по методу Панченкова 5. Определение осмотической резистентности эритроцитов крови человека 6. Определение количества гемоглобина колориметрическим методом (по Сали) 7. Определение количества эритроцитов в крови человека 8. Подсчет количества лейкоцитов в крови человека 9. Лейкоцитарная формула 10. Определение групп крови по системе (АВО) 11. Определение групп крови при помощи цоликлонов анти-А и анти-В 12. Определение резус-фактора крови человека экспресс-методом 13. Определение резус-принадлежности крови человека с использованием тест-реагента антиD супер 14. Определение индивидуальной совместимости крови 15. Определение совместимости крови донора и реципиента по резус-фактору 16. Правила переливания крови 17. Определение времени свертывания крови 18. Определение времени кровотечения по Дуке 19. Определение количества тромбоцитов в крови человека по методу Джавадяна 20. Решение ситуационных заданий по физиологии системы крови. Основные схемы, которые должны уметь рисовать и объяснять студенты по материалам итогового занятия. 1. Написать в виде таблицы лейкоцитарную формулу крови. 2. Схемы вариантов определения групп крови. 3. Каскадную схему гемокоагуляции. 3. Теоретические вопросы к занятию. 1. Общая характеристика системы крови. Состав и функции крови. Понятие о гомеостазе. 2. Электролиты плазмы крови. Осмотическое давление крови и его регуляция. 3. Белки плазмы крови, их функциональное значение. СОЭ. 4. Онкотическое давление плазмы крови и его значение. 5. Кислотно-щелочное состояние крови, роль буферных систем крови в его обеспечении. 6. Эритроциты, их функции. Регуляция еритропоеза. 7. Виды гемоглобина и его соединений, их физиологическая роль. 8. Лейкоциты, их функции. Регуляция лейкопоэза. Физиологические лейкоцитозы. 9. Тромбоциты, их физиологическая роль. 10. Сосудисто-тромбоцитарный гемостаз, его физиологическое значение. 43 11. Коагуляционный гемостаз, его физиологическое значение. 12. Коагулянти, антикоагулянти, факторы фибринолиза, их физиологическое значение. 13. Физиологическая характеристика системы АВО крови. Условия совместимости крови донора и реципиента. 14. Пробы, перед переливанием крови. 15. Физиологическая характеристика резус-системы крови. Значение резус-принадлежности при переливании крови и при беременности. 16. Тестовые задания. 17. Тестирование по системе „Крок - 1”. 18. Ситуационные задания 5. Литература Основная литература: Нормальная физиология / В.И.Филимонов. – Запорожье, 1995. – 376 с. Физиология человека / Под ред. Г.И.Косицкого. - М.: Медицина, 1985. – 554 с. Физиология человека / Под ред. Е.Б.Бабского. - М.: Медицина, 1972. – 656 с. Учебные задания для студентов по нормальной физиологии человека (ситуационные задачи): Физиология системи крови, дихания, кровообращения, пищеварения, обмена веществ и энергии, теплообмена, виделения, желез внутреней секреции. / Под ред. Н.В.Братусь. – Винница, 1985. – 36 с. Рекомендации для аудиторной самостоятельной работы студентов 2-го курса по нормальной физиологии / Под ред. В.М. Мороза. - Винница, 1993. – 79 с. Руководство к практическим занятиям по физиологии / Под ред. Г.И.Косицкого, В.А.Полянцева. - М.: Медицина, 1988. – 288 с. Практикум по физиологии / Под ред. К.М.Куланды. - М.: Медицина, 1970. - С.200-203. Дополнительная: Физиология человека /В 2-х томах. Т. I/ Под ред. В.М.Покровского, Г.Ф.Коротько. – М.: Медицина, 1997. – 448 с. Физиология человека /В 3-х томах. Т.1. Пер. с анг./ Под ред. Р.Шмидта и Г.Тевса. - М.: Мир, 1996. Общий курс физиологии человека и животных. В 2 кн. / Под ред. А.Д.Ноздрачёва. – М.: Высш.шк., 1991. – 512 с. Основы физиологии человека. /В 2-х томах. Т. 2/ Под ред. Б.И.Ткаченко. – СПб, 1994. – 413 с. Практикум по нормальной физиологии / Под ред. Н.А.Агаджаняна и А.В.Коробкова. - М.: Высш. шк., 1983. – 328 с. Коробков А.В., Чеснокова С.А. Атлас по нормальной физиологии / Под ред. H.А.Агаджаняна. - М.: Высшая школа, 1986. - 351 с. Физиология с основами анатомии человека: Учебное пособие /В.И. Филимонов, А.Н. Бражников.- Запорожье.- 2000.- 411 с. Гаркави Л.Х., Кваки на Е.Б., Уколова М.А. Адаптационние реакции и резистентность организма.- Ростов н/Д: Издательство Ростовського университета, 1990.-224 с. Агаджанян Н.А., Тель Л.З., Циркин В.И., Чеснокова С.А. Физиология человека.- М.: Медицинская книга, Н. Новгород: Издательство НГМА, 2001.- 526 с. Начала физиологии /А.Д. Ноздрачев, Ю.И. Баженов, И.А. Баранникова, А.С. Батуев – САНКТ-ПЕТЕРБУРГ, 2001. - 1087 с. Нормальная физиология/Р.С. Орлов, А.Д. Ноздрачёв/Москва «ГЭОТАР-Медиа» 2005.687 с. Р.В. Петров Иммунология/Москва «Медицина» 1983.- 367 с. 44 Пособие для врачей-лаборантов по методам исследования гемостаза / Росийская академия медицинских наук Гематологический Научный Центр Москва, 2001.- 93 с. 45