246 кб - Волгоградский государственный медицинский

На правах рукописи
МАЛЬКОВ ИВАН ВЛАДИМИРОВИЧ
ВЛИЯНИЕ КИСЛОТЫ АМИНОКАПРОНОВОЙ
НА ЦЕРЕБРАЛЬНУЮ ГЕМОДИНАМИКУ
ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ИНСУЛЬТЕ
14.00.25 – фармакология, клиническая фармакология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
ВОЛГОГРАД 2007
Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по
здравоохранению и социальному развитию»
Научный
руководитель
доктор медицинских наук, профессор
Официальные
оппоненты
доктор медицинских наук, профессор
ИВАШЕВ Михаил Николаевич
БАТУРИН Владимир Александрович,
Ставропольская государственная
медицинская академия
кандидат медицинских наук, доцент
БОРОДКИНА Людмила Евгеньевна,
Волгоградский государственный
медицинский университет
Ведущая
организация
Ростовский государственный медицинский университет
Защита состоится “___” _________ 20007г. в ___ часов
на заседании Диссертационного совета Д 208.008.02 при Волгоградском государственном медицинском университете по адресу: 400131,
г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1.
С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке
Волгоградского государственного медицинского университета
Автореферат разослан “___”_________ 2007г.
Ученый секретарь
диссертационного совета
доктор медицинских наук, профессор
-2-
А.Р. Бабаева
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ
Острые нарушения мозгового кровообращения представляют собой одно из наиболее распространенных патологических состояний в
неврологической практике и клинической медицине в целом. По данным Всемирной федерации неврологических обществ, ежегодно в мире регистрируется не менее 15 млн. инсультов. Причем предполагается, что эти данные явно занижены, так как в развивающихся странах
многие случаи инсульта не регистрируются или вовсе остаются без
внимания врачей по причине недоступности медицинской помощи. В
России заболеваемость инсультом составляет 3,4 на 1000 человек в
год. В абсолютных цифрах это составляет более 450 000 новых инсультов в год [Яхно Н.Н.. Виленский В.С.,2005, Bogousslavsky J.,
2005.].
Цереброваскулярная болезнь в форме мозгового апоплексического удара, или инсульта, представляет собой внезапное мозговое
нарушение кровообращения сосудистой природы. В настоящее время
в России, равно как и в большинстве других стран мира, встречаемость ишемического инсульта (ИИ) значительно превышает встречаемость геморрагического инсульта (ГИ) и составляет 70% общего
числа острых нарушений мозгового кровообращения. Согласно современным представлениям ишемический инсульт является полиэтиологическим и патогенетически разнородным клиническим синдромом. Изменения работы сердца играют ведущую роль в патогенезе
нарушений мозгового кровообращения, в первую очередь ишемического инсульта [Патологическая физиология, 2000]. В каждом случае
ИИ следует установить непосредственную причину инсульта, так как
от этого в немалой степени зависит терапевтическая тактика, а также
способы вторичной профилактики повторных инсультов [Варлоу Ч.П.,
и др. 1998., Цамулин И.В., и др.2003.].
При инсульте активируется эйкозаноидный каскад биохимических реакций, способствующий развитию воспалительной реакции.
Поэтому препарат, оптимально воздействующий на мозговой кровоток, гемореологию и воспалительный процесс, с минимальной нейробиологической токсичностью перспективен в терапии инсультов. При
этом немаловажным фактором является экономическая доступность,
отечественное производство и минимум побочных отрицательных
эффектов лекарственного средства. В качестве такого препарата представилось интересным изучение аминокапроновой кислоты. В доступной литературе данных о влиянии аминокапроновой кислоты на
показатели церебральной гемодинамики не описано.
-3-
Цель работы
Изучение терапевтических эффектов аминокапроновой кислоты
на модели ишемического и геморрагического инсульта.
Изучение влияния кислоты аминокапроновой: влияние на показатели системной гемодинамики, работу сердца, на мозговое кровообращение в условиях экспериментальной нормы.
Для достижения цели в работе определены задачи:
Задачи исследования
1. Изучить влияние кислоты аминокапроновой на мозговой кровоток и
центральную гемодинамику в условиях экспериментальной нормы.
2. Определить влияние аминокапроновой кислоты на интенсивность
мозгового кровотока в условиях экспериментального геморрагического и ишемического инсультов мозговой ткани.
3. Изучить нейропротекторное и психоактивирующее действие аминокапроновой кислоты на модели геморрагического инсульта у
крыс.
4. Определить фармакодинамические параметры аминокапроновой
кислоты при экспериментальной норме. Дать сравнительную оценку местного и системного воздействия кислоты аминокапроновой
на систему свертывания крови.
5. Определить общетоксическое действие кислоты аминокапроновой в
условиях острого и субхронического эксперимента.
Научная новизна работы
Впервые установлено, что аминокапроновая кислота значимо
увеличивает уровень мозгового кровотока при инсультах в дозе
0.8г/кг и достоверно понижает уровень мозгового кровотока в дозе
1,24г/кг.
Впервые показано, что аминокапроновая кислота у бодрствующих животных оказывает кардиопротективное действие, достоверно
повышая значения сократимости миокарда, понижает конечнодиастолическое давление при моделируемом поражении ткани мозга
(ишемическом и геморрагическом инсультах).
В условиях геморрагического инсульта (интрацеребральная посттравматическая гематома крыс) впервые определено нейропротекторное и психоактивирующее действие аминокапроновой кислоты при ее
сочетании с препаратом сравнения пирацетамом.
-4-
Практическая значимость результатов исследования
Проведенные фармакологические исследования позволили установить кардиопротекторное и церебропротекторное свойство аминокапроновой кислоты. Полученные результаты свидетельствуют о перспективности изученного объекта, о возможности расширения показаний к применению в медицинской практике и о целесообразности
дальнейших исследований в этом направлении. Проведенные исследования расширяют фармакодинамические данные о влиянии аминокапроновой кислоты на кардиогемодинамику у бодрствующих крыс в
условиях нормы и при патологических состояниях.
Основные положения, выносимые на защиту
Фармакологическое обоснование применения аминокапроновой
кислоты при экспериментальных патологических процессах.
- результаты изучения действия аминокапроновой кислоты на мозговой кровоток при геморрагическом и ишемическом инсультах у
крыс;
- результаты изучения действия аминокапроновой кислоты на показатели кардиогемодинамики у крыс в условиях экспериментальной
нормы;
- нейропротекторное и психоактивирующее действие аминокапроновой кислоты при интрацеребральной посттравматической гематоме крыс.
- результаты параклинических, биохимических, гистологических показателей экспериментальных животных in vivo;
Внедрение результатов исследования в практику
Результаты фармакологических исследований, оформленные в
виде отчетов, послужили основанием для актов внедрения (на основе
информационных писем) из Российских медицинских учреждений.
Фрагменты результатов фармакологических исследований диссертации внедрены в научно-исследовательскую работу и учебный
процесс кафедры биологии,физиологии и патологии ПятГФА.
Связь задач исследований
с проблемным планом фармацевтических наук
Поставленные задачи исследования связаны с решением основных проблем фармацевтических наук. Задачи данного исследования
позволяют определить фармакологический спектр применения лекарственного средства - аминокапроновой кислоты, а также получить результаты, помогающие объяснить механизмы того или иного воздействия препарата на организм.
Данное исследование отражает связь биологической реакции
-5-
организма в ответ на введение изучаемых соединений при патологических состояниях организма. Диссертационная работа выполнена в
Пятигорской государственной фармацевтической академии, (г. Пятигорск), в рамках проблемы “Фармация” Ученого совета МЗ РФ, секция № 38 “Фармация” и в соответствии с планом научноисследовательских работ Пятигорской государственной фармацевтической академии. Номер госрегистрации 01.9.90 002360.
Объем и структура диссертации
Работа выполнена на 149 страницах текста компьютерного набора, иллюстрирована 43 таблицами, 7 рисунками. Состоит из введения,
обзора литературы, глав собственных исследований, общих выводов,
списка литературы 182 источников: 154 отечественных и 28 зарубежных авторов.
Апробация и публикация результатов исследования
Основные положения диссертационной работы доложены на ХII
Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство", г.
Москва, 2005г., на 60-62 ежегодной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров г. Пятигорск, 2005-2007г; III съезде
фармакологов России в 2007г.. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ. В центральной печати 3 работы.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материалы и методы исследования
Дизайн исследования
Фармакологические исследования целесообразно было начать с
изучения общетоксического действия: раздражающего действия,
острой и субхронической токсичности [Г.В. Оболенцева и соавт.,
1995.]. Изучали влияние препарата на некоторые параклинические и
биохимические показатели. Затем изучали влияние на кардиогемодинамику лабораторных животных: на АД и работу сердца нормотензивных бодрствующих крыс. После этого - на церебральную гемодинамику крыс в условиях экспериментальной нормы и с моделированием ишемического и геморрагического инсульта. Изучали психоневрологический статус перенесших инсульт животных на фоне аминокапроновой кислоты: на познавательную, двигательную и эмоциональную активность крыс, на процессы памяти и обучения, на координацию движений. Все экспериментальные работы проводили согласно “Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ” (под редакцией В.П. Фисенко)
-6-
Материалы исследования
Опытные группы животных получали изучаемый препарат кислота аминокапроновая. Кислота аминокапроновая раствор для инфузий
5%. Состав: кислоты аминокапроновой 50г, натрия хлорида 9г, воды
для инъекций до 1л. В качестве контроля использовали растворитель –
физиологический раствор в эквивалентном объеме [Гацура В.В.,
1974]. Контрольной группе животных вводили в эквивалентном объеме раствор физиологический (0,9% раствор натрия хлорида), либо
раствор Рингера-Локка для теплокровных животных. В эксперименте
использовались: раствор натрия хлорида физиологический, этилового
спирта, и др. реактивы.
Лабораторные животные, клетки и ткани
Для изучения острой токсичности в эксперименте использовались белые крысы: 60 особей весом 220-250г обоего пола и мыши: 60
особей весом 22-24г обоего пола, выращенных в питомнике ПятГФА,
прошедших 2-х недельный карантин. Раздражающее действие оценивали in situ на 20 куриных эмбрионах белых кур породы Leggron возрастом 9-10 суток. Опыты in vivo проводились на 6 морских свинках,
массой 850-950г, Эксперименты по специфической активности проводили in vivo на белых половозрелых крысах обоего пола линии Wistar,
массой 22010г (36 животных) и массой 33020г (112 животных),
прошедших 2-х недельный карантин [Руководство по экспериментальному,,, Под редакцией В.П. Фисенко. 2000г]. Животные выращены в питомнике ПятГФА, (г. Пятигорск), содержались на стандартном
режиме вивария: температура окружающего воздуха 222 0С, 12часовой синхронизированный световой режим, комбинированный
корм и вода ad libitum [В.В. Гацура, 1974].




Дозы и способы введения
Однократная доза на крыс: 0,8 и 1,24 г/кг/сут или 0,08 и 0,12г на
100 г веса крысы.
5% раствора АК 1,6 мл на 100г веса крысы и 2,4мл на 100г веса
крысы соответственно.
однократно, в/в, капельно (10 капель в минуту).
курсом 28 дней (подострая токсичность)
Методы определения безопасности применения
Раздражающее действие оценивали тестом на хорионаллантоисной оболочке куриного эмбриона, НЕТ – САМ test, на
-7-
конъюнктиве морских свинок и кроликов (П. Михайлов, 1985г.).
Острую и субхроническую токсичность, ульцерогенное действие изучали согласно “Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ” (В.П. Фисенко,
2000) с атрибутом LD50. Для характеристики степени повреждающего
действия в разных дозах избрали 6-ти недельный срок наблюдения за
состоянием крыс.
Методы изучения фармакодинамических параметров
Опыты проведены с использованием методов катетерной технологии, моделированием патологических состояний головного мозга.
Объёмную скорость мозгового кровотока регистрировали методом
водородного клиренса с помощью платинного электрода, расположенного на поверхности сагиттального синуса в области стока синусов. Для создания патологического фона, на котором изучалась эффективность аминокапроновой кислоты, использовали модель ишемического инсульта эмболизацией сосудов головного мозга аутотромбами. После ишемии и реинфузии крови в артериальную систему животного осуществляли регистрацию скорости мозгового кровотока
методом клиренса водорода. Геморрагический инсульт моделировали
методом интрацеребральной посттравматической гематомы по А.Н.
Макаренко и соавт., 1990. Время свертывания цельной крови, полученной из саггитального синуса крыс, определяли методом Сухарева с
определением времени начала свертывания и конца свертывания
[В.В.Меньшиков, 1987]. Животным (крысам) вводили изучаемый раствор внутривенно (7дн и однократно). Через 60 минут после введения
препарата проводили исследование. Для этого наркотизированным
животным (хлоралгидрат 400мг/кг) вскрывали черепную коробку и в
саггитальном синусе собирали цельную кровь в объеме 50 мкл [Данилова Л.А., 1999]. Определяли начало свертывания по появлению нитей фибрина, окончание свертывания по образованию сгустка. Параллельно проводили исследование контрольных животных, получивших
физиологический раствор в эквивалентном объеме и режиме.
 Модель инсульта с использованием внутрикаротидного введения
аутотромбов;
 Модель геморрагического инсульта (интрацеребральной посттравматической гематомы) А.Н. Макаренко и соавт. (1990);
 Регистрация показателей кардиогемодинамики с помощью компьютерной программы “Bioshell” через 24 часа после операции и
окончания действия наркоза на бодрствующих крысах
-8-
ОЦЕНКА ПАРАМЕТРОВ
1. Для оценки неврологического статуса:
 определение неврологического дефицита по шкале оценки инсульта (stroke-index) McGrow в модификации И.В. Ганнушкиной (1996);
 регистрация мышечного тонуса;
 регистрация координации движений.
2. Для оценки когнитивных функций - условный рефлекс пассивного избегания в темной, светлой камере (установка Lafayette
Iпstгumепt Со., США).
3. Для оценки ориентировочно - исследовательского поведения методика открытого поля.
4. Оценка влияния препарата на выживаемость крыс после геморрагического инсульта. Регистрация гибели животных в течение 14
дней после операции.
Статистическая обработка результатов исследования
Статистическую обработку опытов проводили с использованием
t-критерия Стьюдента для независимых рядов (Р.Б. Стрелков, 1986).
Изменение исследуемых показателей считали статистически значимыми при p 0,05. Расчёты результатов проводили в пакете компьютерной программы Microsoft Excel Ver 9, 2000 (Н.В. Макарова, 2002).
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Взаимосвязь гемостаза, кардиальной и церебральной патологии
очевидна и нарушение мозгового кровотока – самая частая причина
неврологических расстройств. Учитывая тяжелые последствия инсульта, длительность и дороговизну лечения, высокую инвалидизацию в результате этого тяжелого недуга и огромный экономический
ущерб, наносимый данным заболеванием, профилактике и рациональной терапии инсультов следует уделять гораздо больше внимания.
Влияние кислоты аминокапроновой на мозговой кровоток у интактных крыс и у крыс с экспериментальным
инсультом
Объемную скорость мозгового кровотока регистрировали методом водородного клиренса с помощью платинового электрода, расположенного на поверхности сагиттального синуса в области стока синусов. Индифферентный электрод помещали на хвост крысы. Область
сагиттального синуса выделяли с помощью оперативного вмешательства на наркотизированных животных. В трахею вставляли полиэтиленовую трубочку для последующего введения водорода в легкие (во-
-9-
дород подавали на одно-два дыхательных движений). Системное артериальное давление измеряли ртутным манометром в области правой
сонной артерии.
Метод основан на скорости вымывания предварительно введенного водорода из мозговой ткани и позволяет определить объемную
скорость (ОС) мозгового кровотока (МК). Принципы метода были изложены И.Т. Демченко. Положительными сторонами метода являются
отсутствие травматичности сосудов мозга, стабильность показателей,
индифферентность используемого газа.
Кислоту аминокапроновую раствор для инфузий 5% вводили в
дозах 0,8 и 1,24г/кг массы тела однократно, внутривенно, капельно (10
капель в минуту). Результаты эксперимента представлены в таблице.
Таблица 1
Влияние кислоты аминокапроновой 5% на мозговой кровоток
крыс 0,8 г/кг, n=8.
Исходные
5 мин, % 15 мин, % 30 мин, % 45 мин, % 60 мин, %
Показатели
к исходу
к исходу
к исходу
к исходу
к исходу
Контрольные опыты в условиях экспериментальной нормы
МК 90,58,5
-1,51,2
+2,81,3
-1,41,1
-1,21,2
-1,41,2
мл/100г/мин
После введения кислоты аминокапроновой раствор для инфузий 5% (внутривенно, капельно) в условиях экспериментальной нормы
МК 80,55,4
Мл/100г/мин
15,65,5 11,73,2* 14,83,4* 3,33,1
-8,74,5
После введения кислоты аминокапроновой раствор для инфузий 5% (внутривенно, капельно) в условиях модели инсульта (геморрагический)
МК 60,85,9
2,81,4
102,4*
12,43,1* 9,42,6
11,82,8*
Мл/100г/мин
После введения кислоты аминокапроновой раствор для инфузий 5% (внутривенно, капельно) в условиях модели инсульта (ишемический)
МК 61,36,6
-3,52,6
3,82,8
13,23,2* 15,73,5* 11,42,3*
Мл/100г/мин
Примечание: * - р  0,05 (достоверные сдвиги относительно исходного уровня в %).
В проведенных исследованиях наблюдали повышение мозгового
кровотока, как в условиях экспериментальной нормы, так и в опытах с
моделью инсульта при однократном введении кислоты аминокапроновой в дозе 0,8г/кг.
В опытах с экспериментальной нормой мозговой кровоток досто-
- 10 -
верно повышался на 12 - 16%; при введении кислоты аминокапроновой раствор для инфузий 5%; в условиях модели инсульта мозговой
кровоток достоверно увеличивался на 10 - 16% как при геморрагическом, так и при ишемическом повреждении.
Таблица 2
Влияние кислоты аминокапроновой на мозговой кровоток крыс
1,24 г/кг, n=8
Исходные
5 мин, % к 15 мин, % 30 мин, % 45 мин, % 60 мин, %
Показатели
исходу
к исходу
к исходу
к исходу
к исходу
Контрольные опыты в условиях экспериментальной нормы
МК 103,29,2 -2,51,2
+1,51,2
+1,91,1
-1,61,2
-2,91,1
Мл/100г/мин
После введения кислоты аминокапроновой раствор для инфузий 5% (внутривенно, капельно) в условиях экспериментальной нормы
МК 100,36,7 -5,33,1
-2,10,9
+0,70,4
+2,60,9
+4,81,7
Мл/100г/мин
После введения кислоты аминокапроновой раствор для инфузий 5% (внутривенно, капельно) в условиях модели инсульта (геморрагический)
МК 64,311
-11,22,3* -16,23,2* -15,23,3* -10,25,8 -11,36,8
Мл/100г/мин
После введения кислоты аминокапроновой раствор для инфузий 5% (внутривенно, капельно) в условиях модели инсульта (ишемический)
МК 69,09,9
-9,42,3*
-11,73,5* -13,62,8* -13,55,8 1,31,1
Мл/100г/мин
Примечание: * - р  0,05 (достоверные сдвиги относительно исходного уровня в %).
Результаты эксперимента показали, что при введении кислоты
аминокапроновой в дозе 1,24г/кг мозговой кровоток у нормотензивных животных достоверно не изменялся на протяжении всего эксперимента.
В условиях экспериментального инсульта под влиянием инфузии
кислоты аминокапроновой кровоток в мозге существенно снижался на
5, 15 и 30 минуте эксперимента, а на 45 и 60 минутах достоверно не
отличался от исходных показателей.
Сравнивая эффекты кислоты аминокапроновой при введении в
дозе 0,8 и 1,24г/кг, можно сделать следующее заключение: при введении меньшей дозы регистрировали увеличение мозгового кровотока, а
при применении кислоты аминокапроновой в дозе 1,24 г/кг/сутки
наблюдается достоверное уменьшение объемной скорости мозгового
кровотока.
- 11 -
Влияние кислоты аминокапроновой на показатели системной и
центральной гемодинамики
Регистрация системного артериального давления и показателей
сократимости миокарда проводилась с помощью компьютерной программы “Bioshell 1.0” у нормотензивных животных.
В этой серии опытов определяли влияние препарата на систолическое артериальное давление, частоту сердечных сокращений, индексы сердца.
Предварительно за 24 - 48 часов до начала эксперимента крысам-самцам, массой 300-350г (всего 7 животных), под хлоралгидратным наркозом (300 мг/кг внутрибрюшинно) имплантировали полиэтиленовый катетер в левый желудочек сердца - для регистрации сердечных индексов, измерения систолического артериального давления
(АД) и частоты сердечных сокращений (ЧСС).
Регистрацию данных у крыс производили с использованием одноразовых датчиков СП-01 (США) и компьютерной программы “Bioshell 1.0” в реальном масштабе времени на базе персонального компьютера IBM AT 486. Длительность регистрации показателей составляла 60 минут с момента введения исследуемого вещества.
Исследуемую кислоту аминокапроновую вводили внутривенно
капельно (10 капель в минуту) в дозе 0,8г/кг и 1,24 г/кг. Результаты
представлены в таблицах.
Полученные результаты эксперимента свидетельствуют о том,
что кислота аминокапроновая раствор для инфузий 5% в дозах 0,8 и
1,24 г/кг массы тела достоверно не влияла на показатели системной
гемодинамики. Систолическое артериальное давление имело тенденцию к повышению при введении аминокапроновой кислоты, а частота
сердечных сокращений не изменялась. Регистрируемые показатели
центральной
гемодинамики
(индексы
сердца):
конечнодиастолическое давление, скорость сокращения и расслабления сердечной мышцы, расчетные величины индексов сократимости миокарда - индекс Верагута и модифицированный индекс Верагута, сердечный цикл и время выброса достоверно не изменялись. Данные представлены в таблице3.
- 12 -
Таблица 3
Влияние кислоты аминокапроновой (1,24г/кг) на параметры
системной гемодинамики и сократимости миокарда у
нормотензивных бодрствующих крыс-самцов (n=8)
Время, мин
Исходные 5 мин
15 мин 30 мин 60 мин
данные % к ис- % к ис- % к ис- % к исходу
ходу
ходу
ходу
ЧСС уд/мин
344±16,1 -0,4±1,1 0,4±1,1 0,8±0,9 -2,2±1,1
Систолическое лево- 134±18,2 22,1±14,3 11,3±10,1 13,5±10,5 13,5±11,1
жел АД мм рт.ст.
Конечное диастолич. 8±2,2
10,2+9,3 6,6+3,7 6,6+4,4 2,8+2,4
АД мм рт.ст.
Скорость сокращения 7355+96,5 7,3+5,2 9,2+8,3 2,3±2,0 3,9±3,7
миокарда (+dp/dt)
Скорость расслабле- -4799±76 14,1±11,0 14,1±7,3 11,3±10,2 21,2±14,3
ния миокарда (-dp/dt)
Индекс сократимости 212±46,3 -4,7±2,5 -14,7±10 -22,2±11 -3,0±2,8
миокарда
Модифицированный 210±14,7 -17,6±8,9 -5,7±4,4 -15,0±9,5 -14,4±8,1
индекс Верагута
Dp/dt/pd
Сердечный цикл
170,0±3,1 1,3±1,2 0,8±1,1 2,2±1,7 2,3±1,3
Время выброса млсек 79,6±2,4 8,8±6,9 -10,1±7,5 -4,5±3,3 9,6±5,1
Примечание - *-Р.<0,05- в сравнении с исходом, в %.
Влияние кислоты аминокапроновой на показатели центральной
гемодинамики у животных с экспериментальным инсультом
Аминокапроновую вводили внутривенно капельно (10 капель в
минуту) в дозе 0,8г/кг и 1,24 г/кг через 24 часа после создания патологии – ишемического и геморрагического инсульта мозга. Результаты
представлены в таблицах 4,5.
Аминокапроновая кислота в дозе 0,8 г/кг массы тела экспериментальных животных не оказывала достоверного влияния на показатели
системной и центральной гемодинамики на протяжении всего исследования как при геморрагическом, так и при ишемическом инсультах
головного мозга.
- 13 -
Таблица 4
Влияние кислоты аминокапроновой (1,24г/кг) на параметры
центральной гемодинамики у крыс с геморрагическим инсультом
(n=8)
Время, мин
Исходные 5 мин
15 мин 30 мин 60 мин
данные % к ис- % к ис- % к ис- % к исходу
ходу
ходу
ходу
ЧСС уд/мин
312±8,2 7,4±3,9 6,6±4,5 7,8±6,7 4,9±3,1
Систолическое лево- 175±9,3 -0,6±0,5 -5,4±3,7 -7,5±6,3
жел АД мм рт.ст.
Конечное диастолич. 19±2,8
-3,1±2,1 -10±3,1* -21±4,3*
АД мм рт.ст.
Скорость сокращения 6435±111 1,6±1,3 -7,4±3,8 1,4±0,8
миокарда (+dp/dt)
Скорость расслабле- 2,4±1,5 4,1±3,4 6,1±3,8
ния миокарда (-dp/dt) 4984±188
Индекс сократимости 150±12,5 2,3±1,5 1,3±1,0 10±2,5*
миокарда
Модифицированный 147±12,6 4±2,3
6,2±1,4* 15±2,4*
индекс Dp/dt/pd
Сердечный цикл
190±7,5 -2,2±1,5 -7,5±4,2 -12±1,7*
Время выброса млсек 94,5±1,6 -2,4±1,2 -12±2,2* -10±3,1*
Примечание - *-Р<0,05- в сравнении с исходом.
5,4±5,1
-25±6,1*
-3,2±1,9
7,3±5,5
11±5,6
5,9±4,2
-13±2,4*
-8,0±1,1*
Препарат кислота аминокапроновая в дозе 1,24г/кг оказывал существенное влияние на некоторые показатели центральной гемодинамики при сосудистом поражении мозга.
Так, при геморрагическом инсульте достоверно понижалось конечно-диастолическое давление на 10-25%; повышался уровень сократимости миокарда на 6-15%; существенно снижалось время сердечного цикла и время выброса. Такое влияние аминокапроновой кислоты следует признать положительным эффектом при моделируемом
поражении ткани мозга.
Эффекты аминокапроновой кислоты в дозе 1,24 г/кг массы тела
были выражены менее значительно (таблица 5). Достоверно понижался показатель конечно-диастолического давления и существенно
уменьшалась скорость расслабления сердечной мышцы у экспериментальных животных при моделируемом ишемическом инсульте мозговой ткани с использованием методики аутотромбов.
- 14 -
Таблица 5
Влияние кислоты аминокапроновой 1,24г/кг на параметры
центральной гемодинамики у крыс с ишемическим инсультом (n=8).
Время, мин
Исходные 5 мин
15 мин 30 мин 60 мин
данные % к ис- % к ис- % к ис- % к исходу
ходу
ходу
ходу
ЧСС уд/мин
320±7,6 3,3±3,1 4,6±4,0 7,9±6,4 6,1±4,2
Систолическое лево- 164±6,5
жел АД мм рт.ст.
Конечное диастолич. 17±3,1
АД мм рт.ст.
Скорость сокращения 7825±122
миокарда (+dp/dt)
Скорость расслабле- ния миокарда (-dp/dt) 5121±242
Индекс сократимости 171±16,1
миокарда
Модифицированный 158±13,2
индекс Dp/dt/pd
Сердечный цикл (Pe- 186±4,9
riod)
Время выброса млсек 93,2±1,3
-1,9±1,6 4,6±3,6
-9±4,4
8,8±7,5 12,1±5,3
-14±4,6* -19,5±5* -28±7*
-6,3±1,2* -9,7±5,7 -11,5±4,9 -13±6,7
-28±4,3* -24,4±5* -30±7,4* -8,8±4,4
-25±9,9 10,8±10 14,4±10
22±15,6
-15±9,2 14,9±10 4,5±2,1
5,1±3,6
-2,5±1,1 -2,8±1,3 -3,3±1,3 -4,4±1,2
-3,0±2,2 -0,2±0,2 -9,3±6,1 -10±7,1
Примечание - *-Р<0,05- в сравнении с исходом.
Важно отметить, что препарат ингибитор фибринолиза, кислота
аминокапроновая достоверно уменьшает конечное диастолическое
давление, как при ишемическом, так и при геморрагическом инсульте
что, несомненно, является положительным эффектом. При геморрагическом инсульте кислота аминокапроновая достоверно повышала индексы сократимости миокарда, укорачивала сердечный цикл и время
выброса.
Изучение биологической активности кислоты аминокапроновой
показало наличие у данного препарата: уменьшение энергетических
затрат миокарда у бодрствующих животных с экспериментальным инсультом (снижение конечного диастолического давления).
Таким образом, кислота аминокапроновая раствор для инфузий
5% при внутривенном капельном введении улучшает некоторые показатели работы мышцы сердца у крыс с экспериментальным инсультом
мозга.
- 15 -
Влияние аминокапроновой кислоты на показатели
неврологического дефицита
Показатели неврологического дефицита оценивали по
шкале McGrow после инсульта. Показано, что почти у всех
(90-100%) животных после ГИ наблюдались неврологические
нарушения в виде вялости и замедленности движений, тогда
как у ложно оперированных крыс эти нарушения были отмечены у 40% особей. Выраженных неврологических нарушений, проявляющихся в виде манежных движений по кругу и
параличей конечностей, в группе ложно оперированных животных не наблюдалось, а у животных с ГИ они были отмечены в 30-40% случаев.
Таблица 6
Влияние аминокапроновой кислоты на неврологический
дефицит по шкале Strokeiпdех McGrow
Неврологический
симптом
Вялость, замедленность движений
Слабость конечностей (начальная)
Манежные движения
Парез 1-4 конечностей
Паралич 1-4 конечностей
Группы животных
Ложноиноперировансульт
ные животные
40
100
Инсульт
+АК
90
Инсульт
+ пирацетам
65*
Инсульт +
АК + пирацетам
50*
30
90
60*
45*
40*
0
40
30
18
0*
0
30
30
30
30
0
30
15*
7,5*
0*
Примечание: приведено количество животных с различной неврологической
симптоматикой (%) в 1-е сутки после операции
* - достоверность отличий от инсультных крыс при р0,05 (х2)
Аминокапроновая кислота и ее комбинация с пирацетамом после 2-кратного введения в дозе 100 мг/кг/сут достоверно снижала выраженность неврологических нарушений у
крыс через сутки после геморрагического инсульта (таблица
6).
- 16 -
Влияние аминокапроновой кислоты на мышечный
тонус
Регистрация мышечного тонуса после инсульта в тесте
подтягивания на горизонтальной перекладине у крыс с ГИ
показала, что на 3-и сутки после инсульта ослабление мышечного тонуса отмечалось в среднем у 50%, а на 7 -14-е
сутки - у 36-38% животных. У крыс, получавших аминокапроновую кислоту и ее сочетание с пирацетамом, на 1-е-3-и
сутки ослабление мышечного тонуса наблюдалось у 30-45%
особей.
Таблица 7
Влияние аминокапроновой кислоты на мышечный тонус крыс в
тесте горизонтальной перекладины, n=20
Группа животных
Количество животных, не подтянувшихся на перекладине (n,
N) %
1 сутки
3 сутки
7 сутки
14 сутки
n/N
%
n/N
%
n/N
%
n/N
%
0(10)
0
0(10)
0
0(10)
0
0(10)
0
2(20)
10
4(20)
20
5(20)
25
4(20)
20
Интактные
Ложнооперированные
Инсульт
13(20) 65*
9(18)
50* 5(13)
38* 4(11)
Инсульт +АК
9(20)
45*
7(20)
35
3(19)
16
3(18)
Инсульт + пи10(20) 50*
6(19)
31# 3(17)
18
2(17)
рацетам
Инсульт + АК + 8(20)
40#* 6(20)
30# 5(20)
25
3(20)
пирацетам
Примечание: N – общее количество выживших животных в группе,
n – количество животных, не подтянувшихся на перекладине
* - по сравнению с ложно-оперированными животными при р0,05 (х2)
# - по сравнению с инсультными животными при р0,05 (х2)
36*
16#*
11#*
15#
На 7 -е сутки после введения изучаемого препарата
ослабление мышечного тонуса наблюдалось у 15-25% крыс, а
к 14-м суткам этот показатель снижался до 15-16%, так что
различия были статистически значимыми по сравнению с
аналогичными показателями у инсультных животных.
- 17 -
Влияние аминокапроновой кислоты на координацию
движений
Исследование динамики нарушений координации движений у
крыс с ГИ показала, что на 1-е-3-и сутки после инсульта нарушение
координации движений отмечалось у 48-50% животных, а на 7 -14-е
сутки - у 38-45% выживших животных. Влияние аминокапроновой
кислоты и ее сочетания с пирацетамом на координацию движений
крыс с посттравматической интрацеребральной гематомой показало
следующие результаты. Препарат ослаблял нарушения координации
движений у крыс. Выраженные и статистически значимые результаты
лечения были получены на 7 -14-е сутки после инсульта. В тесте вращающегося стержня со скоростью 3 об/мин количество животных,
удержавшихся на стержне в течение 2 минут из общего числа испытуемых наибольшим было в группе ложно-оперированных животных и в
группе животных, получавших сочетание АК с пирацетамом.
Таблица 8
Влияние аминокапроновой кислоты на координацию движений
крыс на вращающемся стержне
Группа животных
Количество животных, не удержавшихся на стержне (n, N) %
1 сутки
3 сутки
7 сутки
14 сутки
n/N
%
n/N
%
n/N
%
n/N
%
0(10)
0
0(10)
0
0(10)
0
0(10)
0
4(20)
20
6(20)
30
2(20)
10
2(20)
10
Интактные
Ложнооперированные
Инсульт
11(20) 55*
9(18)
50*
6(13)
46* 4(11)
Инсульт +АК
9(20)
45*
6(20)
30
2(19)
10
2(18)
Инсульт + пи10(20) 50*
7(19)
36#
3(17)
17
1(17)
рацетам
Инсульт + АК + 7(20)
35#* 6(20)
30#
3(20)
15
0(20)
пирацетам
Примечание: N – общее количество выживших животных в группе,
n – количество животных, не удержавшихся на стержне
* - по сравнению с ложно-оперированными животными при р0,05 (х2)
# - по сравнению с инсультными животными при р0,05 (х2)
36*
11#*
5#*
0#
Таким образом, в результате проведенных исследований показано, что по сравнению с ложно оперированными животными у крыс с
геморрагическим инсультом (интрацеребральной посттравматической
гематомой) наблюдаются: выраженный неврологический дефицит,
нарушение координации движений, ослабление процессов обучения и
памяти и повышение показателей гибели животных. При этом отме-
- 18 -
чалось углубление патологической симптоматики к 14-му дню
наблюдения. Аминокапроновая кислота в сочетании с пирацетамом
через 5 ч после операции, а затем ежедневно в течение 7 дней вызывает значительное уменьшение выраженности постинсультных нарушений. Препарат улучшает показатели неврологического дефицита по
шкале McGrow уже через сутки после инсульта, а при курсовом применении повышает мышечный тонус и улучшает координацию движений на 7-е и 14-е сутки после инсульта. Аминокапроновая кислота
при повторном применении восстанавливает нарушенную в результате инсульта память, улучшая воспроизведение условного рефлекса
пассивного избегания на 7-е и 14-е сутки после инсульта. Наиболее
ярким эффектом аминокапроновой кислоты в сочетании с пирацетамом является его способность полностью предупреждать гибель животных с геморрагическим инсультом. В данном случае, по всей вероятности проявляется фармакологическое взаимодействие препаратов
из разных групп, а именно потенцированный синергизм.
Изучение общетоксического и специфического действия
аминокапроновой кислоты
При изучении острой и субхронической токсичности результаты
проведенных исследований показали, что согласно табуляции классов
токсичности кислота аминокапроновая является практически нетоксичным лекарственным средством. Препарат кислоты аминокапроновой раствор для инфузий 5%, не обладает раздражающим действием
на слизистые оболочки млекопитающих.
Ежедневное введение кислоты аминокапроновой в течение 28
дней не выявили достоверных изменений в функционировании внутренних органов животных. Результаты патологоанатомических и гистологических исследований кислоты аминокапроновой и физиологического раствора также показали отсутствие изменений во внутренних
органах животных.
Результаты исследований по влиянию аминокапроновой кислоты,
подтвердили ранее установленные данные о том, что аминокапроновая кислота обладает гемостатическим эффектом. Препарат обладает
выраженным влиянием на время свертывания крови, полученной из
саггитального синуса, уменьшая длительность кровотечения, а именно
на стадии фибринолиза. Результат выражен как при применении препарата длительно внутривенно, так и однократно внутривенно и местно на раневую поверхность.
- 19 -
1.
2.
3.
4.
5.
ВЫВОДЫ
Кислота аминокапроновая достоверно не изменяет мозговой кровоток у нормотензивных животных; увеличивает интенсивность мозгового кровотока в условиях экспериментального ишемического и
геморрагического инсультов мозговой ткани в дозе 0,8г/кг и
уменьшает уровень мозгового кровотока в дозе 1,24г/кг.
Установлено, что аминокапроновая кислота увеличивает индексы
сократимости миокарда, уменьшает конечно-диастолическое давление, оптимизируя работу миокарда при сосудистом поражении
центральной нервной системы.
Установлен нейропротекторный и психоактивирующий эффект
аминокапроновой кислоты в сочетании с пирацетамом при геморрагическом инсульте крыс.
Аминокапроновая кислота проявляет антиоксидантный, противовоспалительный и гемостатический эффекты.
Длительное профилактическое введение аминокапроновой кислоты
не влияет на двигательную и исследовательскую активность, координацию движений у интактных животных, возрастает обучающая
способность животных (избегание раздражающего действия).
- 20 -
ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. И.В. Мальков, М.Н. Ивашев Поиск микроциркулятоных церебропротекторов среди фибринолитиков /Экология и здоровье: Сборник
научных трудов - Ессентуки: Ассоциация мед.центров ЮНЕСКО,
2005. - Вып.9 – 212-222. 222 (Англ).
2. Мальков, И.В. Изучение острой токсичности аминокапроновой
кислоты / И.В. Мальков, М.Н.Ивашев // Фармация и здоровье: Материалы международной научно-практической конференции / Пермь.2005.- С.177 – 178.
3. Мальков, И.В. Возможность применения кислоты аминокапроновой как микроциркуляторного церебропротектора / И.В. Мальков,
М.Н.Ивашев // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сб.науч.тр./ПятГФА, Вып.61 – Пятигорск.2006.- С. 367 – 369.
4. Мальков, И.В. Доклинические исследования биологически активных соединений синтетического и природного происхождения /
А.В.Арльт, Н.С. Ляхова, М.К. Таниб и др.// Человек и лекарство:
Тез.докл. 13 Рос. нац. конгр. 03-07 апр.2006г.- М., 2006.- С.530.
5. Мальков, И.В. Аминокапроновая кислота – противовоспалительное
средство без иммунотоксического побочного эффекта / И.В. Мальков,
А.В.Сергиенко, М.Н.Ивашев // Аллергология и иммунология.- 2006.т.7.- №3.- С. 437.
6. И.В. Мальков Аминокапроновая кислота – низкомолекулярный
микроциркулятоный церебропротектор/ Экология и здоровье: Сборник научных трудов - Ессентуки: Ассоциация мед.центров ЮНЕСКО,
2006. - Вып.10 – 78-83. 83 (Англ).
7. Мальков, И.В. Исследование биологических свойств химических
веществ синтетического и растительного происхождения /
М.Н.Ивашев, А.В.Сергиенко, А.В.,Арльт и др.// Фармакология – практическому здравоохранению: Тез.докл. III съезда фармакологов России 23-77 сентября 2007г.- М., 2007.- С.330.
- 21 -
Резюме
Влияние кислоты аминокапроновой на церебральную гемодинамику при экспериментальном инсульте
Ключевые слова: кислота аминокапроновая, постгеморрагическая гематома, эксперимент, воспаление, сократимость миокарда, церебропротектор, пирацетам.
Объект исследования: аминокапроновая кислота, пирацетам,
экспериментальные животные: мыши, крысы, куриные эмбрионы.
Предмет исследования: фармакологические и токсикологические свойства аминокапроновой кислоты.
Цель работы: изучение влияния кислоты аминокапроновой: на
показатели системной гемодинамики, работу сердца, на мозговое кровообращение в экспериментальной норме. Изучение терапевтических
эффектов аминокапроновой кислоты на модели ишемического и геморрагического инсульта.
Методы исследования: фармакологические, физиологические,
биохимические, гистологические, токсикологические, параклинические, статистические.
Полученные результаты и их новизна: кислота аминокапроновая достоверно не изменяет мозговой кровоток у нормотензивных животных; увеличивает интенсивность мозгового кровотока в условиях
экспериментального ишемического и геморрагического инсультов
мозговой ткани в дозе 0,8г/кг и уменьшает уровень мозгового кровотока в дозе 1,24г/кг. Впервые показано, что аминокапроновая кислота
у бодрствующих животных оказывает кардиопротективное действие,
достоверно уменьшая конечно-диастолическое давление у бодрствующих крыс в условиях экспериментального инсульта. В условиях геморрагического инсульта (интрацеребральная посттравматическая гематома крыс) впервые определено нейропротекторное и психоактивирующее действие аминокапроновой кислоты при ее сочетании с пирацетамом.
Область применения: экспериментальная фармакология, клиническая фармакология, терапия.
- 22 -
Список сокращений
АК – аминокапроновая кислота
d – диаметр
m – масса
mg (мг) – миллиграмм
ml (мл) – миллилитры
t0 - температура
АК – аминокапроновая кислота
в/в - внутривенно
г/хл – гидрохлорид
ГИ – геморрагический инсульт
ДАД – диастолическое артериальное
давление
ед – единицы
кг – килограмм
л - литры
МК – мозговой кровоток
р/сут – раз в сутки
САД – систолическое артериальное
давление
сут – сутки
ТБК – тиобарбитуровая кислота
ЦНС – центральная нервная система
ВЛИЯНИЕ КИСЛОТЫ АМИНОКАПРОНОВОЙ НА
ЦЕРЕБРАЛЬНУЮ ГЕМОДИНАМИКУ
ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ИНСУЛЬТЕ
МАЛЬКОВ Иван Владимирович
- 23 -
МАЛЬКОВ ИВАН ВЛАДИМИРОВИЧ
ВЛИЯНИЕ КИСЛОТЫ АМИНОКАПРОНОВОЙ НА
ЦЕРЕБРАЛЬНУЮ ГЕМОДИНАМИКУ
ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ИНСУЛЬТЕ
автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
ВОЛГОГРАД – 2007
Подписано в печать 8.11.2007
формат 60х84/16
бумага писчая
Печать офсетная. Гарнитура “Times”.
Усл. печ.л. 1,0. уч-изд.л. 1,0.
Тираж 100 экз. Заказ ____
- 24 -