Лекарственные грибы как источник противоопухолевых и иммуномодулирующих полисахаридов S.P. Wasser
реклама
Лекарственные грибы как источник противоопухолевых и иммуномодулирующих полисахаридов S.P. Wasser Получено: 2 мая 2002 / Исправлено: 17 июня 2002 / Одобрено: 20 июня 2002 / Опубликовано онлайн: 10 сентября 2002 © Springer-Verlag (издательство) 2002 Краткий обзор На земле насчитывается порядка 140,000 видов грибов и лишь 10% из них изучены, (примерно 14,000 названных видов). Грибы составляют обширный, но пока, в значительной степени, неиспользуемый источник новых сильнодействующих фармацевтических продуктов. Для современной медицины они представляют собой безграничный источник полисахаридов, обладающих противоопухолевыми и иммуностимулирующими свойствами. В плодовых телах, культивированных мицелиях и культурных жидкостях многих, если не всех, Базидиальных грибов содержатся биологически активные полисахариды. Данные по грибным полисахаридам были собраны у 651 видов и 7 внутривидовых таксонов (видов) у 182 родов высших Гетеро- и Гомо базидиальных грибов. Эти полисахариды различны по своему химическому состав -глюканам, обладающим которые отвечают за их противоопухолевое воздействие. Глюканы с высоким молекулярным весом более эффективны, чем глюканы с небольшим молекулярным весом. Для усиления противоопухолевого воздействия полисахаридов, а также, усиления их клинических свойств (в основном растворимость в воде) часто проводится химическая модификация. Основные методики, использующиеся для химического улучшения это: расщепление по Смиту (оксидоредакто-гидролиз), формолиз и карбоксиметилирование. В основном, противоопухолевое воздействие коммерческих полисахаридов таких как лентинан, ПСК (крестин) и шизофиллан, было клинически доказано, но полисахариды, извлеченные из других многообещающих лекарственных грибов, также показали хорошие результаты. Их воздействие особенно клинически эффективно, когда они используются в качестве вспомогательного средства совместно с химиотерапией. Грибные полисахариды предотвращают онкогенез, оказывают прямое противоопухолевое воздействие на различные аллогенные и сингенные опухоли, а также предотвращают образование опухолевых метастаз. Полисахариды, извлеченные из грибов, не воздействуют на раковые клетки напрямую, а оказывают противоопухолевое воздействие, активизируя различные иммунные реакции у больного. Противоопухолевое воздействие полисахаридов требует нетронутый компонент Т-клетки, их воздействие происходит посредством тимусзависимого иммунного механизма. Практическое применение зависит не только от биологических свойств, но и от биотехнологической пригодности. Данная статья анализирует особенности полисахаридов, извлеченных из плодовых тел, и культивированных мицелий (в настоящее время два основных метода биотехнологического производства) в отобранных образцах лекарственных грибов. Введение На протяжении столетий человечество ценило грибы в качестве источника пищи и лекарственных препаратов. Во многих видах грибов было идентифицировано множество биоактивных молекул, включая противоопухолевые вещества. Полисахариды – наиболее хорошо изученные сильнодействующие вещества, извлеченные из грибов, обладающих противоопухолевыми и иммуномодулирующими свойствами. (Mizuno 1996, 1999a, b, 2002; Lorenzen and Anke 1998; Borchers et al. 1999; Ooi and Liu 1999; Wasser and Weis 1999; Tzianabos 2000; Reshetnikov et al. 2001). В основном, полисахариды использовались в качестве лекарств на Дальнем Востоке, где изначально и зародилась наука о грибах и их применении (Hobbs 1995, 2000). Такие грибы как Ganoderma lucidum (Reishi), Lentinus edodes (Shiitake), Inonotus obliquus (Chaga) и многие другие на протяжении сотен лет собирались и использовались в Корее, Китае, Японии и восточной России. Эти практики до сих пор формируют базу современных научных учений грибковых медицинских свойств, особенно в области рака желудка, простаты и легких. Примечательно и поразительно, насколько надежны факты, собранные традиционной восточной медициной для изучения лекарственных грибов (Ying et al. 1987; Hobbs 1995, 2000; Wasser and Weis 1997a, b, 1999; Stamets 2000). Ikekawa et al. (1969) опубликовал один из первых научных докладов по противоопухолевому воздействию эссенций, полученных из плодовых тел грибов, принадлежащих семейству Polyporaceae (трутовики) (Aphyllophoromycetideae) и некоторых других семейств, и доказал их воздействие на трансплантированный рак, такой как Саркома 180 у животных (Ikekawa et al. 1982, 1992; Ikekawa 2001). Вскоре после этого были разработаны три основных лекарства из гр глюканами: крестин из культивированной плесневой биомассы Trametes versicolor (Turkwey Tail), лентинан из плодовых тел L. Edodes и шизофиллан из жидкого культивированного продукта Schizophyllum commune (Split Gill). На протяжении практически 40 лет, лекарственные грибы активно изучались для выявления их лекарственного воздействия в моделях in vivo и in vitro. Были идентифицированы и применены многие новые противоопухолевые и иммуномодулирующие полисахариды (Mizuno 1996, 1999a; Wasser and Weis 1999; Ikekawa 2001). Биологически активные полисахариды широко распространены среди высших Базидиальных грибов. Большинство из них обладают уникальным строением у различных видов. Более того, различные штаммы одного вида Базидиального гриба могут производить полисахариды, обладающие различными свойствами. Например, протеоглюкан крестин был разработан в Японии из штамма Trametes (Coriolus) versicolor CM-101, в то время как полисахарид-пептид (ПСП) в Китае был разработан в глубинной культуре штамма Cov-1 того же самого вида. Оба протеоглюкана имеют одинаковый полисахаридный компонент, но с различными протеиновыми молекулами, связанными с полисахаридом (Hiroshi and Takeda 1993). В данной статье анализируются противоопухолевые и иммуномодулирующие полисахариды, извлеченные из высших Базидиальных грибов. Больше внимания уделено их общим свойствам, чем характерным для каждого вида особенностям. Статья резюмирует общее состояние знаний в области биологической вариативности грибов и полисахаридов, извлеченных из них; химическое строение полисахаридов и его связь с их противоопухолевым воздействием, включая возможные способы химической модификации; результаты экспериментального исследования и клинического использования противоопухолевых и иммуностимулирующих полисахаридов; возможные механизмы их биологического действия; и в заключение, различие в составе полисахаридной фракции в плодовых телах и очищенных культивированных мицелиях в отобранных образцах изученных лекарственных грибов. Обширное количество и разнообразие грибов с противоопухолевыми полисахаридами В настоящий момент общее количество описанных грибов различных видов составляет, по меньшей мере, 80060 видов. Цифра основана на выводе, подведенном из дополнения количества видов в каждом роде, приведенном в последнем издании Dictionary of the Fungi (Словарь грибов) (Kirk et al. 2001). Эта цифра включает в себя все организмы, традиционно изучаемые микологами: слизевики, хромисты, грибы chytridiaceous, лишай-формирующие грибы, мицелиальные грибы, плесневые грибы дрожжевые грибки. Под термином «грибы» обычно понимается определение, данное Chang and Miles (1992): макрогриб с различимым плодовым телом, которое может расти под землей или над землей, который достаточно велик, чтобы быть увиденным невооруженным взглядом и собранным рукой». Количество волокнистых грибов, которые соответствуют этому определению, установлено Dictionary of the Fungi (Словарем Грибов) и оно составляет, по меньшей мере, 14,000 или, возможно, даже 22,000 (Hawksworth 2001). Тем не менее, реальное количество таких видов на земле, несомненно, намного больше. Две основные причины того, что реальное количество значительно выше, следующие: (1) существует большое количество еще неописанных видов и (2) многие морфологически определенные «виды» грибов оказываются семейством (скоплением) нескольких биологических видов (Hawksworth 2001). Большинство новых грибов открывают в тропиках, в особенности это те виды, которые растут на местных деревьях. Доказано, что в различных тропических областях 22–55% видов грибов (в некоторых случаях вплоть до 73%) неописаны (Hawksworth 2001). Анализ местностей, в которых были обнаружены новые грибы ранее неизвестные науке за 10 лет, с 1990 до 1999 годы, был описан и занесен в Index of Fungi (Каталог грибов). Этот анализ показал, что примерно 60% всех недавно описанных грибов родом из тропиков (Hawksworth 1993, 2001), хотя новые виды продолжают открывать и в Европе, и в Северной Америке. Исследование совместимости и молекулярных последовательностей между грибами, которые ранее считались одним видом, основываясь на морфологических основах, выявило «криптические виды», т.е. популяции, функционирующие как отдельные биологические виды, но имеющие одно научное название. Один морфологически определенный вид может состоять из 20 и более биологических видов (Hawksworth 2001). Принимая все это во внимание, последние оценки количества грибов на земле варьируется от 500000 до 9.9 миллионов видов, из которых только 80060 названы. Общепринята рабочая цифра 1.5 миллиона видов, новые данные говорят о том, что это разумно. Количество грибов на земле оценено в 140000, из которых лишь 10% могут быть известны. Тем временем, считается, что примерно 50% из этих 14000 видов, которые нам сегодня знакомы, в различной степени съедобны и безопасны, более 2000 видов и, примерно 700 видов, обладают значительными фармакологическими свойствами (Chang 1999; Wasser and Weis 1999; Reshetnikov et al. 2001). Таким образом, очевидно, что грибы представляют собой большой, но еще почти совершенно неиспользуемый источник новых мощных фармацевтических продуктов. Высшие Базидиальных грибы представляют собой бесконечный источник противоопухолевых и иммуностимулирующих полисахаридов. Все основные таксономические группы грибов были исследованы на наличие биологически активных полисахаридов, и было выявлено, что большинство из них ими обладают. По меньшей мере 651 вид и 7 внутривидовых таксонов (видов), представляющих 182 рода Гетеро- и Гомо базидиальных грибов, содержат противоопухолевые и иммуностимулирующие полисахариды, что отражено в таблице 1 (адаптировано у Reshetnikov et al. 2001). Собранные естественным образом или выращенные в искусственных условиях плодовые тела, очищенные культивированные мицелии и фильтрат культуры (культурные жидкости) содержат биологически активные полисахариды. Методика очищения полисахарида После 20 лет интенсивных исследований лекарственных грибов Mizuno и его коллеги в Японии разработали надежную методику успешного извлечения, разделения на фракции и очищения полисахаридов из плодовых тел и культивированных мицелий. В общем, эта схема включает в себя извлечение из грибов веществ с небольшим молекулярным весом с помощью 80% этанола, после чего следуют три последовательных извлечения с водой (100°C, 3 часа), 2% аммоний оксалатом (100°C, 6 часов), и 5% каустической содой (80°C, 6 часов) (Mizuno 1996, 1999a). Продуктом первого извлечения являются растворимые в воде полисахариды, двух последующих – нерастворимые в воде полисахариды. Извлеченные полисахариды далее очищаются при помощи комбинации нескольких техник, таких как, концентрация этанола, фракционное осаждение, кислотное осаждение с уксусной кислотой, ионообменная хроматография, гелевая фильтрация, хроматография по родству. В основном, ионообменная хроматография посредством диэтиламиноэтил-целлюлозных колонн отделяет нейтральные -глюканы (не адсорбированные фракции) при помощи гелевой фильтрации и хроматографии по родству. Та же самая процедура производится с кислотными полисахаридами (после элюирования с 1 M NaCl), выработка очищенных полисахаридов (Mizuno 1999a). Общие схемы фракционного приготовления полисахаридов из грибов схематически показана на рисунке 1. Должно быть отмечено, что схема разделения на фракции в каждом случае зависит от полисахаридного строения извлеченного материала. Структурное строение противоопухолевых полисахаридов в грибах Полисахариды принадлежат к структурно разнообразному классу макромолекул, полимеров осадка моносахаридов, соединенных друг с другом глюкоцидными соединениями. Необходимо упомянуть, что в сравнении с другими биополимерами, такими как протеины и нуклеиновые кислоты, полисахариды обладают большей способностью переносить биологическую информацию, потому что они имеют больший потенциал для структурной изменчивости. Нуклеотиды в нуклеиновых кислотах и аминокислоты в протеинах могут соединяться только односторонне, в то время как моносахаридные элементы и полисахариды могут соединяться в нескольких точках, формируя широкое разнообразие разветвленных или линейных структур (Sharon and Lis 1993). Эта огромная потенциальная изменчивость полисахаридной структуры дает необходимую гибкость для точных регуляционных механизмов различных межклеточных соединений в высших организмах. Грибные полисахариды, в основном, представлены как глюканы с различными видами глюкоцидных связей, таких как(13), (16)- -глюканы и (13)--глюканы, но некоторые являются настоящими гетероглюканами. Другие, в основном, связаны с протеиновыми осадками, такими как соединения PSP (PSPC; Gorin and Barreto-Berger 1983). Основным источником противоопухолевых полисахаридов являются стены грибковых клеток, которые состоят из полисахаридов. Тем не менее, хитин и хитозан (грибковый хитин) не обладают противоопухолевым воздействием (Mizuno et al. 1995b). -D-глюкан – это полисахаридный осадок. (Mizuno 1996, 1999a). Что касается структуры третичной формы шизофиллана, активный -D-глюкан обладает трёхрядной правокрыльной структурой (Marchessault et al. 1977). Было выявлено, что кислотный глюкуроноксиломаннан, изолированный из плодового тела Tremella fuciformis was also обладает левой, тройной спиралевидной основной (Yui et al. 1995). -глюканов, было описано множество биологически активных глюканов с другими структурами. В основной цепи эти сцепленных глюкозных элементов, содержащие ответвления, скрепленные различными способами. Гетероглюканные ответвления содержат глюкуроновую кислоту, ксилозу, галактозу, маннозу, арабинозу или рибозу в качестве основного компонента или в различных комбинациях. В общем, гликаны – это полисахариды в основной цепи не содержащие глюкозу. По индивидуальным сахарным компонентам в основной цепи они классифицируются как галактаны, фуканы, ксиланы и маннаны. Гетероглюканные ответвления содержат арабинозу, маннозу, фукозу, галактозу, ксилозу, глюкуроновую кислоту и глюкозу в качестве основного компонента или в различных комбинациях. Было исследовано множество противоопухолевых и иммуностимулирующих полисахаридов, извлеченных из Базидиальных грибов с различным химическим строением; основные типы представлены в Таблице 2. Количество активных противоопухолевых фракций в плодовых телах грибов необыкновенно велико. Например, это можно увидеть, посмотрев на анализ полисахаридов плодовых тел Pleurotus pulmonarius (= P. sajor-caju): 16 полисахаридных фракций из 21 извлечения продемонстрировали различную степень противоопухолевого воздействия (Zhuang et al. 1993, Table 3). Самые активные противоопухолевые, растворимые в воде фракции P. pulmonarius– это протеин Fio-а, содержащий ксилоглюкан с маннозой: галактозой: ксилозой: глюканом в полисахариде в молярном отношении 2:12:42:42, и протеин FA-2, манногалактан, состоящий из ксилозы: маннозы: галактозы (молярное соотношение 9:35:56). Самые активные противоопухолевые нерастворимые в воде полисахариды - это протеин FII-1, содержащий ксилан; протеин FIII-1а, содержащий глюкоксилана, состоящий из глюкана: ксилана (молярное соотношение 40:44), и протеин FIII-2a содержащий ксилоглюкан, состоящий из ксилана: глюкана (молярное соотношение 36:62). Взаимосвязь структуры и противоопухолевого воздействия грибных полисахаридов Полисахариды, проявляющие противоопухолевую активность, сильно различаются по своему химическому составу, конфигурации и физическим свойствам. Противоопухолевое воздействие проявляется у разнообразных гликанов, начиная с гомополимеров, заканчивая высоко сложными гетерополимерами. (Ooi and Liu 1999). Различие в воздействии может быть связано с растворимостью в воде, размером молекул, степенью разветвленности и формой. Хотя взаимосвязь между структурой и противоопухолевым воздействием сложных полисахаридов установить сложно, некоторая связь все же имеется. -glucans дают меньшой активностью. Глюканы с высоким молекулярным весом обладают большим воздействием, чем глюканы с небольшим молекулярным весом (Mizuno 1996, 1999a, b). Тем не менее, у противоопухолевых полисахаридов также были замечены явные вариации. Противоопухолевые полисахариды могут иметь и другие химические структуры, например, гетеро- -глюканы (Mizuno et al. 1995b), гетероглюкан (Gao et al. 1996b -глюкан-протеин (Kawagishi et al -манно- -глюкан (Mizuno et al. 1995b -глюкан-протеин (Mizuno et al. 1995b) и гетероглюканпротеиновые соединения (Zhuang et al. 1993; Mizuno et al. 1996). -глюканов важна для иммуностимулирующего воздействия. Когда лентинан был денатурирован с диметилсульфоксидом, мочевиной или каустической содой, в то время как первичная структура не была затронута, третичная структура была потеряна и свойство тормозить рост опухоли снизилось с последовательным денатурированием (Maeda et al. 1988). Аналогичные результаты, подтверждающие взаимосвязь между противоопухолевым воздействием и тройной спиральной структурой, были получены во время исследования шизофиллана (Yanaki et al. 1983, 1986). -глюканы проявляют различную биологическую и иммунофармакологическую активность. Такая активность как синтез макрофага и окиси азота и активизация лимулуса фактора G, зависит от тройной спиральной формы, в то время как другая активность, такая как синтез стимулирующего фактора колонии интерферон-янд and), не зависят от этой формы (Yadomae 2000). Это показывает, что структура основной -маннан более важна, чем третичная структура молекулы. -глюканов с лечебными свойствами, которые сильно зависимы от высокого молекулярного веса, варьирующегося от 500 до 2,000 kDa (Mizuno глюкуроноксиломаннаны, являющиеся характерным компонентом Гелиевых грибов, не сильно зависят от молекулярного веса. Таким образом, Gao и его сотрудники (1996a) объявили, что кислотные гидролизат фракции плодовых тел T. fuciformis содержат глюкуроноксиломаннаны с молекулярным весом от 53 до 1 кДa, стимулирующие человеческие моноциты на производство интерлейкина-6 также действенно, как и не гидролизованный гетерополисахарид. Это означает, что типичная структура основной цепи -(1 -маннан стимулирует это действие; различие в молекулярном весе не оказывает явного влияния на действие гетероглюканов (Gao et al. 1996b). Активация грибных полисахаридов посредством химической модификации В литературе описаны различные подходы усиления противоопухолевого воздействия грибных полисахаридов посредством химической модификации. Самые успешные схемы химического совершенствования грибных полисахаридов были разработаны для Ganoderma lucidum, Grifola frondosa и Leucopaxillus giganteus (= Tricholoma gigantea). Эти схемы состоят из двух основных процедур: модификации грибных полисахаридов с помощью расщепления по Смиту (оксидо-редукто-гедролиз) и активизации методом формолиза (Mizuno 1996, 1999a; Mizuno et al. 1996). Из пяти полисахаридных фракций, ранее полученных из жидкой культуральной среды G. Frondosa, были приготовлены пять полиальдегидов и десять полиспиртов методом расщепления по Смиту. Первоначальные полисахаридные растворы были сначала окислены 0.1 M NaIO4 в темноте до полиальдегидов, потом преобразованы в полиспирты путем преобразования NaBH4 в щелочной среде, в которой с помощью 2 M NaOH был установлен pH 8, а потом гидролизованы 1 M H2SO4 при комнатной температуре (Zhuang et al. 1994b). Химическая активация грибных полисахаридов методом формолиза включает в себя деградацию полисахаридов муравьиной кислотой в 99% HCOOH растворе; после этого раствор, полученный в ходе этой реакции, осаждается с помощью 99% EtOH, и одна половина осадка лиофилизируется после диализа, в то время как другая часть растворяется в горячей воде и дополнительных фракциях, полученных путем спиртового осаждения (Zhuang et al. 1994b). С помощью данного метода были приготовлены четыре формилированных полисахаридов и четыре полисахаридных продукта формолиза из четырех фракций полисахаридов, полученных из жидкой культуральной среды G. frondosa. Хотя, у двух исходных полисахаридов не наблюдалось активности, их формилированный полиальдегид полиол и производные формолиза проявляли значительную активность. Полиальдегиды и полиол-полисахариды, приготовленные из полисахаридов с низкой противоопухолевой активностью, проявляли большую активность, чем исходные полисахариды (Zhuang et al. 1994b). Так как все исходные полисахаридные фракции, проявляющие повышенный уровень активности химической модификации были -глюканы или ксилоглюканы, было сделано предположение, что сахарная цепь была изменена или устранена при обработке, что привело к улучшенной растворимости и активности (Mizuno 1999a). Карбоксиметилирование – это еще один химический метод, использующийся для трансформирования -глюканов в растворимую в воде форму. Например, целые плодовые тела Pleurotus ostreatus или их полоски гомогенизируются при обработке 0.15 М раствором каустической соды при температуре 95°C в течение двух часов. Собранный осадок был промыт водой до нейтрального, помещен в 0.06% раствор хлорита натрия, после чего с помощью уксусной кислоты был установлен pH 4.5, и в заключении он перемешивался в течение шести часов при температуре 60°C. Полученный полисахарид связанным глюканом, с каждым четвертым глюкопираносиловым осадком, замененным при 0–6 отдельными D- глюкопираносиловыми группами. Гетерогенная эферизация частицы глюкана с монохлороуксусной кислотой (C2H3ClO2) в щелочной среде давала натриевую соль растворимого в воде O-(карбоксиметил) производного глюкана (Kuniak et al. 1993; Karácsonyi and Kuniak 1994). Карбоксиметилированный глюкан из P. ostreatus (плеуран) проявлял иммуномодулирующее воздействие, особенно повышенную активность фагоцитов (Paulik et al. 1996). -глюкан, полученный из плодовых тел Amanita muscaria и Agrocybe aegerita, проявлял небольшое, или вообще не проявлял, противоопухолевое воздействие, в то время как его карбоксиметилированные продукты показывали сильную противоопухолевую активность (Kiho et al. 1994; Yoshida et al. 1996). Химическая модификация разветвленных грибных полисахаридов, приводящая к изменению боковой цепи, может быть развита не только с помощью расщепления по Смиту, -D-глюкозные элементы молекулярного веса 500–10,000 кДа был развит после последовательного энзиматического воздействия глубинной культурной жидкостью вместе с амилазой, целлюлазой и протеазой (Kosuna 1998). -глюканы с низким молекулярным весом были получены после энзиматического изменения боковых цепей и белкового компонента (активные гексоза взаимосвязанные составляющие – АГВС (AHCC), обладают иммуномодулирующими и противораковыми свойствами (Ghoneum et al. 1995; Matsushita et al. 1998)). В 1992 году в Японии было проведено исследование с целью оценить предотвращающий эффект АГВС на повторное появление гепатоклеточной карциномы после хирургической резекции (Kidd 2000). Сульфатированные гомо- и гетерополисахариды, обладающие антивирусным воздействием, широко распространены в водорослях, особенно в морских (Schaeffer and Krylov 2000), но в естественном виде в Базиадиальных грибах не содержатся. Химически -глюкана, произведенным Schizophyllum commune (Itoh et al. 1990; Hirata et al. 1994). Было сделано предположение, что серное содержание в шизофиллане оказывает более сильное воздействие на торможение развития вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), чем молекулярный вес или природа сахарного компонента (Itoh et al. 1990; Hobbs 1995). Медицинские тесты указывают на то, что сульфатированный шизофиллан с 5% серным содержанием может быть полезным как анти-ВИЧ агент в лечении гемофиликов, пораженных ВИЧ (Hirata et al. 1994; Hobbs 1995). Очень важно осознавать, что химическая модификация необходима во многих случаях. Не только для улучшения противоопухолевой активности грибных полисахаридов, но и улучшения их клинических свойств, в основном растворимость в воде и способность проникать в стенки желудка после орального употребления. Тестирование противоопухолевой и иммуномодулирующей активности грибных полисахаридов Первоначальные данные противоопухолевой активности грибных экстрактов были случайными и на в коем случае не основательными и надежными. Тем не менее, много косвенных данных, тщательно собранных и обработанных, давали веские основания предполагать, что грибы оказывают целебное воздействие на здоровье людей. Очень хорошим примером этого может послужить эпидемиологическое исследование в Nagano Prefecture, Япония, в котором активность прослеживалась десятилетиями. Исследователи продемонстрировали, что уровень смертности от рака фермеров, чьим основным занятием было производство Flammulina velutipes (хорошо известный лекарственный гриб в Японии) был значительно меньше, чем у обычного населения Prefecture (Ikekawa 1995, 2001). Еще одно похожее наблюдение в Бразилии привело к всестороннему изучению и популярности Agaricus blazei (см. ниже). Я хотел бы подчеркнуть главные моменты противоопухолевого и иммуномодулирующего воздействия грибных полисахаридов. Самые важные из них это: (1) предотвращение онкогенеза посредством орального употребления грибов или препаратов из них; (2) прямая противоопухолевая активность против различных аллогенных и сингенных опухолей; (3) иммунопотенцирующая активность опухоли в комбинации с химиотерапией; (4) предотвращающий эффект опухолевого метастаза. Хорошим примером предотвращающего воздействия служит японское исследование популярного в Японии съедобного лекарственного гриба Hypsizygus marmoreus (Ikekawa 2001). Мыши контрольной группы были выращены на обычном питании, а мыши экспериментальной группы на 5% сушеным плодовом теле H. marmoreus. Всем мышам была введена инъекция канцерогена и метил-холантрена внутрибрюшинно, после этого был исследован канцерогенез. В конце 76 недельных наблюдений, у 21 из 36 мышей контрольной группы образовалась опухоль, а в экспериментальной группе опухоль была только у 3 из 36 мышей. Авторы пришли к выводу, что механизм торможения рака и предотвращающее рак воздействие съедобных грибов были следствием иммунопотенцирования (Ikekawa 2001). Из клинической практики хорошо известно, что грибные полисахариды наилучшим образом действуют совместно с другими формами «жесткой» химиотерапией и хирургическим вмешательством, которые, к сожалению, является очень агрессивными способами лечения и имеют множество побочных эффектов. В данном отношении лучше всего изучен лентинан, как на животных моделях, так и в человеческой клинической практике. В одном исследовании 275 пациентов с рецидивным раком желудка или раком желудка на поздней стадии, проходили два вида химиотерапии (митомицин C с 5фторурацил или тегафур) самостоятельно или в комбинации с инъекциями лентинана. Лучшие результаты были получены, когда лентинан вводился до химиотерапии и у пациентов с первичным поражением, которые не проходили химиотерапию ранее. Результаты были оценены по следующим критериям: продолжительность жизни, регрессия опухоли или повреждения и улучшение иммунной реакции (Hamuro and Chihara 1985; Hobbs 1995; Wasser and Weis 1997a). Метастаз – это очень серьезная и важная проблема в раковой терапии. Предотвращающий эффект грибных экстрактов на раковый метастаз изучался множеством групп, особенно в Национальном Раковом Исследовательском Институте в Японии. В успешной серии экспериментов карцинома легких Льюиса была подкожно пересажена в подушечки лапок мышей и ВEA6 или EA6-PII (полисахариды, извлеченные из Flammulina velutipes) вводились орально в течение 10 дней. Продолжительность жизни экспериментальной группы, которой вводился EA6-PII значительно выросла (Ikekawa 2001). Следующее исследование проводилось с использованием фибросаркомы: через 7 дней после того, как в брюшную полость мышам женского пола BALB/c была пересажена опухоль, солидные опухоли этих мышей были хирургически удалены. Через 7 дней после операции была осуществлена вторая попытка с использованием опухоли того же вида. Фибросаркома Meth-A была пересажена подкожно в другую часть брюшной полости и наблюдался повторный рост опухоли. Эти результаты показывают, что предварительное лечение с использованием EA6 слегка притормозило рост повторных опухолей, а пост-лечение оказалось значительно более эффективным в торможении роста опухоли в дозировке 10 мг/кг (Ikekawa 2001). В клиниках проводилось множество тестов на животных моделях над особыми препаратами из отдельных лекарственных грибов. После того как в 1969 году Chihara отделил лентинан от Lentinus edodes, большинство экспериментальных противоопухолевых тестирований проводилось именно с использованием этого полисахарида. Его «родитель» Chihara был одним из первых исследователей, который объявил о противоопухолевых свойствах лентинана. Первоначально его эффект был протестирован с использованием Саркомы 180 над мышами семейства CD-1/ICD (Chihara et al. 1969, 1970). Позже, лентинан проявлял противоопухолевый эффект не только в случаях с аллогенными опухолями, но, также, и с различными видами синергических и аутохтонных опухолей (Hamuro and Chihara 1985). Инъекции лентинана мышам приводили к 80% сокращению размера опухоли или полной регрессии у большинства тестируемых животных (Chihara 1981). За этим последовало множество клинических испытаний. Среди первых из них было «случайное» контрольное исследование над пациентами на третьей фазе с рецидивным раком желудка или раком желудка на поздней стадии (Wasser and Weis 1999; Ikekawa 2001). Лентинановая терапия показала очень хорошие результаты, увеличивая продолжительность жизни пациентов и не выявляя никаких побочных воздействий. Похожие результаты были получены при колоректальном раке и раке молочных желез. С этого времени лентинан стал широко использующимся лекарством и пищевой добавкой в Японии и других дальневосточных странах, а позже в Соединенных Штатах и Европе. ПСК (коммерческое название крестин) обладает значительным иммуноусиливающим воздействием и широкой антибластомной областью действия. Было доказано, что он продлевает уровень выживаемости облученных мышей, стимулирует фагоцитную активность макрофагов и улучшает функции ретикулоэндотелиальной системы (Zhu 1987). Что касается его противоопухолевых свойств, можно сказать, что он действует как напрямую на опухолевые клетки, так и не напрямую на «хозяина», улучшая клеточный иммунитет (Hobbs 1995; Stamets 2000). Он выявлял противоопухолевое воздействие у животных с аденосаркомой, фибросаркомой, мастоцитомой плазмацитомой, меланомой, саркомой, карциномой и раком молочных желез, легких и кишечника. Интересной особенностью является то, что инъекция ПСК в одном месте опухоли тормозит рост опухоли в других местах, помогая, таким образом, тормозить образование метастаз (Sugimachi et al. 1997). В клинической медицине ПСК использовался как орально, так и внутривенно. Он проявил эффективность против многих типов рака (Hobbs 1995; Stamets 2000), но удовлетворительные результаты были достигнуты редко, если он принимался самостоятельно. Полисахарид шизофиллан проявляет противоопухолевое воздействие как на солидные, так и асцитные формы Саркомы 180, а также на солидную форму Саркомы 37, саркомы Эрлиха, Йошида и карциномы легких Льюиса (Hobbs 1995). Шизофиллан также увеличивает клеточный иммунитет, восстанавливая активность клеток-киллеров до нормального уровня у мышей с опухолями (Borchers et al. 1999). Лучшие результаты против вреда, оказанного облучением, были выявлены, когда шизофиллан вводился через некоторое время после или одновременно с облучением. Шизофиллан восстанавливал митоз клеток костного мозга, ранее подавленного противораковыми лекарствами (Zhu 1987). Клинические исследования на людях доказали благотворное воздействие лечения с использованием шизофиллана у пациентов с рецидивным или неоперабельным раком желудка, цервикальным раком на второй стадии и цервикальной карциномой на поздней стадии (Hobbs 1995). Механизмы противоопухолевого и иммуномодулирующего воздействий грибных полисахаридов Грибные полисахариды оказывают противоопухолевое воздействие в основном посредством активизации иммунной реакции организма «хозяина». Такие вещества называются модификаторами биологической реакции ( МБР(BRMs); Wasser and Weis 1999). По существу это означает, что: (1) они не оказывают вреда и дополнительного стресса на организм; (2) они помогают организму адаптироваться к различным биологическим стрессам и стрессам, вызванным окружающей средой; и (3) они оказывают неспецифическое воздействие на организм, оказывая поддержку всем или главным системам, включая нервную, гормональную и иммунную системы, а также регулятивные функции (Brekhman 1980). Иммуномодулирующее воздействие грибных полисахаридов особенно ценно в качестве профилактики, мягкой и неагрессивной формы лечения, а также в предотвращении метастаза опухолей и т.д., как было описано выше. Полисахариды, извлеченные из грибов, не воздействуют на раковые клетки напрямую, а оказывают противоопухолевое воздействие, активизирую различные иммунные реакции «хозяина». Это было подтверждено многими экспериментами, такими как потеря противоопухолевого эффекта полисахаридов у новорожденных мышей с тимэктомией или после приема антилимфоцитарной сыворотки (Ooi and Liu 1999). Эти результаты позволяют предположить, что для оказания полисахаридами противоопухолевого воздействия, требуется нетронутый компонент Тклеток и то, что это воздействие происходит посредством тимусзависимого иммунного механизма. Также противоопухолевое воздействие лентинана и других полисахаридов тормозится предварительным лечением с использованием антимакрофаговых агентов (таких как каррагеенан (ирландский или жемчужный мох)). Таким образом, проявление полисахаридами разнообразного воздействия является результатом усиления ответной реакции предшественников Т-клеток и макрофагов на цитокины, произведенные лимфоцитами после специфического распознавания опухолевых клеток (Hamuro and Chihara 1985). В добавление к этому, полисахариды стимулируют заметное увеличение количества CSF(клетка,процидирующая колониестимулирующий фактор), ИЛ-1, и ИЛ-3, что приводит к созреванию, дифференциации и пролиферации иммунокомпетентных клеток, отвечающих за механизмы защиты «хозяина» (Hamuro and Chihara 1985). Известно, что грибные полисахариды стимулируют производство природных клеток-киллеров, Т-клеток и базофильного инсулоцита (Б-клеток), а также усиливают деятельность макрофагзависимых реакций иммунной системы. Также известно, что лентинан восстанавливает подавленную деятельность хелперных Тклеток у носителя опухоли до нормального состояния, приводя к полному восстановлению гуморальных иммунных ответных реакций (Ooi and Liu 1999). Такой же эффект наблюдается у ПСК, в то время как у него не наблюдается существенного воздействия на иммунные реакции «хозяина» в нормальных условиях. Инфильтрация эозинофилов, нейтрофилов и гранулоцитов вокруг целевых тканей также усиливается лентинаном. Он активизирует секрецию активного кислорода и производство цитокинов в перитонеальных макрофагах. Лентинан также увеличивает перитонеальную макрофаг-цитоксичность против метастатических опухолей; он может активизировать нормальные или альтернативные пути системы комплемента и может разделять C3 на C3a и C3b, усиливая активацию макрофага (Aoki 1984; Wasser and Weis 1997a; Hobbs 2000). Способность лентинана активизировать иммунную систему может быть связано с его способностью модулировать гормональные факторы, которые, как известно, играют роль в росте опухоли. Aoki (1984) продемонстрировал, что противоопухолевое воздействие лентинана сильно уменьшается путем приема тироксина или гидрокортизона. Лентинан также восстанавливает опухолеспецифическую, антиген-обращенную гиперчувствительность замедленного типа. Шизофиллан активизирует макрофаги (in vitro и in vivo), что приводит к усилению активности Т-клеток и увеличению чувствительности цитотоксичных клеток ЛАК и ПК (природных киллеров) к ИЛ-2 (Mizuno 1996). Хотя по структуре шизофиллан относится к лентинану, он не напрямую активизирует Т-клетки (Hobbs 1995). Возможные пути такого воздействия у лентинана было резюмировано Chihara (1981) и Hamuro and Chihara (1985), рассмотрено еще раз Wasser и Weis -D-глюканов МБР (Mizuno 2002) показаны на рисунках 2 и 3. Выборочные примеры важных лекарственных грибов с противоопухолевыми полисахаридами в плодовых телах и культивированных мицелиях Нашей группой была проведена оценка одного из наиважнейших съедобных и лекарственных биотехнологических видов, известного как A. blazei. Анализ данных по культивированному грибу, происходящему из Бразилии, и изучение сведений о A. blazei Murrill показали сильные различия между ними. На основе существующих различий, было предложено правильное название широко культивируемого научного вида гриба – Agaricus brasiliensis S. Wasser et al. A. blazei – это североамериканский эндемический некультивируемый вид, произрастающий только в трех местах: одно во Флориде, два других в Южной Каролине (Wasser et al. 2002). Гриб Agaricus blazei (the Royal Sun Agaricus, ABM, Himematsutake, Cogmelo de Dues) – это один из недавно открытых лекарственных грибов. Родиной этого вкусного съедобного гриба является очень небольшая область в горах Бразилии, рядом с городом Сан-Пауло. Эпидемиологи, изучающие местное население этой области, обнаружили, что у него очень маленький процент различных заболеваний, включая рак, а также вирусные заболевания и заболевания, вызванные бактериями, и при этом непропорционально высокое количество долгожителей. В конечном итоге это было соотнесено с постоянным употреблением в пищу A. blazei. В течение1980ых и 1990ых годов было продемонстрировано, что A. blazei является стимулятором иммунной системы, который улучшает естественные защитные механизмы организма, для борьбы с целым рядом инфекционных агентов и состояний, включая рак. Иммуностимулирующая деятельность и противоопухолевое воздействие экстрактов A. blazei были исследованы в различных лабораторных моделях, включая исследования на мышах, носителях Саркомы 180 и (Meth-A) фибросаркомы (Kawagishi et al. 1989, 1990; Mizuno et al. 1990b, 1998; Mizuno 2002; Itoh et al. 1994; Ebina and Fujimiya 1998; Fujimiya et al. 1998a, 2000; Stamets 2000). Из 17 полисахаридных фракций, извлеченных их плодовых тел A. blazei (Mizuno et al. 1990a; Mizuno 2002), 7 проявили противоопухолевое воздействие. Анализы физико-химических свойств растворимых в воде фракций, обладающих противоопухолевым - -глюкан, - - -глюкан (Mizuno et al. 1990a). A. blazei был первым из описанных грибов, содержащим противоопухолевый глюкан -глюканов. Противоопухолевый протеоглюкан HM3-G, извлеченный из плодовых тел A. Blazei, который являлся посредником активизации природных клеток-киллеров и апоптоза, обладает молекулярной массой 380 кДа -разветвлением, при соотношении примерно 4:1 (Fujimiya et al. 1998b). Интересно отметить то, что LM-3,фракция с низким молекулярным весом (средний вес – 20 кДа), -разветвления также продемонстрировала опухолеспецифический цитоцидальный (убивающий клетки) и иммунностимулирующий эффект (Fujimiya et al. 1999), в то время как чистый глюкан, полученный из -глюкан-протеин, изолированного от нерастворимого в воде осадка плодовых тел A. blazei не проявил сильной активности (Kawagishi et al. 1990). Три иммуностимулирующих гетероглюкана (AG-2, -3, и -6) были извлечены с 0.9% хлоридом натрия и горячей водой из плодовых тел A. blazei из шести полученных полисахаридов (Cho et al. 1999). AG-2 и AG-3 состояли из глюкозы, галактозы и маннозы при молярном отношении 74.0:15.3:10.7 и 63.6:17.6:12.7соответственно; а AG-6 состоял из глюкозы и рибозы при молярном отношении 81.4:12.6. Ксилоглюкан (Ксил:Глюк, молярное отношение =2:10), содержащий 9% белок, полученный разделением на фракции и очищением экстрактов A. blazei проявил значительную активность против Саркомы 180 у мышей (Mizuno 2002). Источником противоопухолевых полисахаридов являются не только плодовые тела A. blazei, но также и культивированные мицелии. Противоопухолевое органическое вещество, называемое ATOM, было разработано из A. blazei (штамм Iwade 101), которое является PSPC (Ito et al. 1997). Еще один PSPC, 0041, был получен из глубинной культурной мицелии; основными компонентами полисахарида являются глюкоза и манноза (Hikichi et al. 1999). Недавно из жидкой культивированной мицелии A. blazei был получен еще один противоопухолевый полисахарид, действенный против Саркомы 180 – - глюкоманнан (Tsuchida et al. 2001). Этот полисахарид полностью отличен от противоопухолевых полисахаридов, извлеченных из плодовых тел A. blazei (Mizuno et al. 1999b). Жидкий фильтрат среды, извлеченный из мицелии после глубинного культивирования A. blazei, содержал соединение маннан-протеин (AB-FP) с молекулярным весом 105–107 Да и небольшим количеством глюкозы, галактозы и рибозы. Количество выработанного AB-FP – 575 мг/1 жидкий фильтрат среды. Он обладал значительным противоопухолевой активностью(Mizuno 2002). Таким образом, полисахариды, исследованные в плодовых телах A. blazei, культурных мицелиях или произведенных внеклеточно в среде культивирования обладают различным химическим строением. Полисахариды из плодовых тел представляют глюканы с различным типом соединения глюкозных элементов или гетероглюканами; культурные мицелии, содержат глюкоманнаны; а соединение маннан-протеин, было произведено в культурной среде при глубинной культивации. Ganoderma tsugae – это другой лекарственный гриб, у которого полисахариды были хорошо исследованы как в плодовых телах, так и в мицелиях. Из 14 растворимых в воде и 15 нерастворимых в воде фракций, извлеченных из плодовых тел G. Tsugae, было получено 7 гликанов с сильным противоопухолевым воздействием (Wang et al. 1993). Растворимыми в воде фракциями были глюкогалактаны, содержащие белок, связанный с маннозой и фукозой, а нерастворимые в воде фракции представляли сод -глюканы с различным белковым содержанием. Из мицелии G. tsugae было извлечено 16 растворимых в воде полисахаридов, которые были исследованы на противоопухолевое воздействие против Саркомы 180 у мышей (Zhang et al. 1994b). Три полученных активных полисахарида были: соединение глюкан-протеин, содержащее 9.3% белка с гетерополисахаридом, состоящим из маннозы и ксилозы; соединение глюкан-протеин, содержащее 25.8% белка; и глюкан-протеин с глюкозой в качестве основного компонента, соединенный с арабинозой, маннозой, ксилозой и галактозой. Сравнение активных растворимых в воде полисахаридов, полученных из плодового тела и мицелии показали, что полисахариды из плодового тела были глюкогалактанпротеиновыми соединениями, а полисахариды из мицелии были гомоглюканпротеиновыми соединениями или гетерогликаном, состоящим из маннозы и ксилозы. Grifola frondosa – это один из самых популярных лекарственных грибов. Плодовые тела - -D-глюкан (Mizuno et al. 1986; Jong and Birmingham 1990; Wasser and Weis 1999), а растворимые в воде полисахаридные - -глюкан (Nanba et al. 1987) Нерастворимые в воде фракции включают в себя кислотный ксилоглюкан с молярным соотношением Глюк:Ксил – 100:82 и 16.5% глюкуроновой кислоты; кислотный гетероглюкан, содержащий 3.8% белка, сложные сахара Глюк:Ксил:Ман:Фук (100:58:34:14); и три кислотных гликопротеина с молекулярной массой 20–100 кДа. Основной сложный сахар это глюкоза, в то время как фукоза, ксилоза, манноза и галактоза – это второстепенные компоненты (Mizuno et al. 1986). Таким образом, все полисахариды, обнаруженные в G. Frondosa, это -глюканы с различной структурой цепи, гетероглюканы или глюкопротеины. В отличие от состава полисахаридов плодовых тел, среди активных противоопухолевых фракций, полученных из культурной мицелии (выращеной на фильтровальной бумаге Whatman, пропитанной жидкой питательной средой), которая была собрана до инициации -глюканов (Mizuno and Zhuang 1995). В растворимых в воде фракциях были обнаружены: фукогалактоманнан-протеиновое соединение, фукогалактоманнан, манногалактофукан и галактоглюкоманнофукан-протеиновое соединение. В нерастворимых в воде фракциях были обнаружены: маннофукоглюкоксилан, манноглюкофукоксилан-протеиновое соединение, маннофукоглюкоксилан-протеиновое соединение и глюкоманнофукоксилан-протеиновое соединение (Zhuang et al. 1994a). Таким образом, полисахариды, извлеченные из G. Frondosa, это: гетероманнаны, гетерофуканы и гетероксиланы или их соединения с протеином, т.е виды полисахаридов, которые не были обнаружены в плодовых телах этого гриба. Необходимо отметить, что структура полисахарида в культурной мицелии, может зависеть от состава питательной среды, использующийся для культивирования. Таким образом, Ohno и его коллеги (1985, 1986) сделали вывод, что противоопухолевый глюкан грифолан, извлеченный из культурной мицелии G. Frondoza – - -глюкан, такой же как и в плодовом теле гриба. В этом эксперименте, чистая культура росла в культурной среде в неизменной культуре или со взбалтыванием. Полученная мицелия была дополнительно культивирована в течение трех дней в буфере, содержащем глюкозу (5%) лимонную кислоту, pH -(1 - -глюканы были получены как путем выделения мицелии, выращенной в питательной среде, так и путем алкогольного осаждения буферного осадка на поверхности (Adachi et al. 2002). Количество полисахаридов, извлеченных из плодовых тел или культурных мицелий, одного и того же вида сильно зависит от использованного способа деления на фракции, но в общем, общее количество полисахаридов в плодовых телах выше (Таблица 4). Количество фракций, указанных в Таблице 4, в некоторых случаях, включает в себя не только итоговые очищенные полисахариды, но также и некоторые промежуточные фракции, которые тестировались на противоопухолевую активность. Пропорция биологически активных полисахаридных фракций в плодовых телах и культурных мицелиях очень велика. Таким образом, 20 из 29 полисахаридных фракций, полученных из плодового тела G. Frondosa, проявляло противоопухолевую активность различной степени (Mizuno et al. 1986), а 24 из 28 полисахаридных фракций, полученных из культурной мицелии этого гриба, проявляли противоопухолевую активность (Zhuang et al. 1994a). В общем, общее количество полисахаридов, извлеченных из плодового тела выше, чем полисахаридов, извлеченных из культурной мицелии. Например, общее количество растворимых и нерастворимых в воде полисахаридов, извлеченных из I. obliquus sclerotium в 2–3 раза выше, чем растворимых и нерастворимых в воде полисахаридов, извлеченных из культурной мицелии (Таблица 5). Выводы На настоящий момент высшие Базидиальные грибы все еще не тщательно изучены; даже перечень известных видов неполный и предположительно содержит только10% от реального числа существующих видов (Hawksworth 2001; Kirk et al. 2001). Количество грибов с изученными фармакологическими свойствами еще намного меньше. Тем не менее, виды, изученные до настоящего момента, уже представляют широкий источник противораковых и иммуностимулирующих полисахаридов. Многие, если не все, Базидиальные грибы содержат биологически активные полисахариды. Подавляющая часть 651 вида и 7 infraspecific taxa from 182 genera высших гетеро- и гомобазидиальных грибов в своих плодовых телах, культурных мицелиях или культурных жидкостях содержат фармакологически активные полисахариды (Reshetnikov et al. 2001). Грибные полисахариды различны по своему химическому составу, в основном они пр -глюканов (Mizuno 1999a, 2000). Противоопухолевые полисахариды из различных грибов охарактеризовываются по молекулярному весу, степени разветвленности и высшей (третичной) структуре. Очевидно, что такие структурные -глюканы, молекулярным весом оказываются более эффективными, чем глюканы с низким молекулярным весом (Mizuno 1996, 1999a, b глюкуроноксиломанны, которые являются особенностью желеобразных грибов, не сильно зависят от молекулярного веса. Существуют различные подходы для усиления противоопухолевого воздействия грибных полисахаридов путем химической модификации, которая также необходима для улучшения их химических свойств, растворимости в воде и способности всасываться в стенки желудка после орального потребления. Для химического усовершенствования существуют две основные процедуры: модификация грибных полисахаридов путем расщепления по Смиту (оксидо-редактогидролиз) и активизация методом формолиза. Самые успешные схемы этих методов были разработаны для Ganoderma lucidum, Grifola frondosa и Leucopaxillus giganteus (= Tricholoma gigantea). Карбоксиметилирование – это еще один химический метод -глюканов в водорастворимую форму Большое количество экспериментально и клининически доказанных сведений демонстрируют положительный эффект грибных полисахаридов, используемых для следующих целей: (1) предотвращение онкогенеза посредством орального употребления грибов или препаратов из них; (2) прямая противоопухолевая активность против различных аллогенных и сингенных опухолей; (3) иммунопотенцирующая активность опухоли в комбинации с химиотерапией; (4) предотвращающий эффект опухолевого метастаза. Большая часть клинических сведений имеются о коммерческих полисахаридах лентинане, ПСК (крестин) и шизофиллане, но существуют также впечатляющие новые данные о полисахаридах, извлеченных из Phellinus linteus, Flammulina velutipes, Hypsizygus marmoreus, A. blazei и других грибов. Биохимические механизмы, посредством которых осуществляется биологическая активность полисахаридов, все еще не совсем поняты. Полисахариды, извлеченные из грибов, не воздействуют на раковые клетки напрямую, а оказывают противоопухолевое воздействие, активизирую различные иммунные реакции «хозяина». Для оказания полисахаридами противоопухолевого воздействия, требуется нетронутый компонент Тклеток и то, что это воздействие происходит посредством тимусзависимого иммунного механизма. (Borchers et al. 1999). Известно, что грибные полисахариды стимулируют производство природных клеток-киллеров, Т-клеток и базофильного инсулоцита (Б-клеток), а также усиливают деятельность макрофагзависимых реакций иммунной системы. Иммуномодулирующее воздействие грибных полисахаридов особенно ценно в качестве профилактики, мягкой и неагрессивной формы лечения, а также в предотвращении метастаза опухолей, а также в качестве вспомогательного средства совместно с химиотерапией. Среди высших Базидиальных грибов было выявлено большое количество биологически активных полисахаридов. Их практическое применение зависит не только от их уникальных свойств, но и от доступа к биотехнологиям. Выделение и очищение полисахаридов из грибов может быть осуществлено достаточно просто и с минимальными усилиями. (Mizuno 1996, 1999a). У мицелий, образованных путем выращивания чистых культур в погруженных условиях, структура постоянна. Метод нижнего брожения – это лучшая техника для получения безопасных грибных продуктов (Wasser et al. 2000; Reshetnikov et al. 2001).
