Ягоды Годжи. Научные исследования

Годжи
ягоды
Goji berry
Lycium barbarum
Научные исследования
1
Lycium barbarum увеличивает калорийность расходы и уменьшает окружность талии у здоровых
полных мужчин и женщин: пилотное исследование.
Фон:
Lycium barbarum (Л. barbarum), традиционной азиатской лекарственной терапии для лечения
диабета и других условиях, было показано, что увеличение скорости обмена веществ и снижения
массы тела, прирост в моделях грызунов, а также производить клиническое улучшение общего
чувства благополучия, в том числе и уровень энергии.
Цель:
Чтобы исследовать влияние л. barbarum потребление на (1) калорийность расходов и (2) изменения
в морфометрических показателей (окружность талии) у здоровых взрослых человека. Метод: два
отдельных рандомизированных, двойных слепых, плацебо-контролируемых, небольшие клинические
исследования проводились с использованием стандартизированной л. barbarum фруктовый сок, Гочи,
и оценивает его воздействие на (1) скорости метаболизма в состоянии покоя (RMR) после приема
пищи и расхода энергии (PPEE), измеренные с помощью непрямой калориметрии после одногоболюсная доза 3 дозы л. barbarum (30, 60 и 120 мл) и плацебо; и (2) окружность талии и другие
морфометрические изменения в 14-дневный intervention trial (120 мл суточная доза) в субъектах
(Возраст = 34 лет, Индекс Массы тела = 29 кг/м(2)).
Результаты:
(1) один болюс л. barbarum увеличения потребления PPEE 1 через 4 часа postintake над базовым
уровнем является дозозависимым и была значительно выше, чем в контрольной группе на 10% на 1
час postintake 120 мл (p < 0,05). (2) в 14-дневный вмешательства суда, л. barbarum оказалась
значительно уменьшить окружность талии на 5,5 ± 0,8 см (n = 15) по сравнению с preintervention
измерений, так и в группе плацебо, в postintervention день 15 (p < 0,01). Напротив, изменения в
группе плацебо (n = 14), из preinterventions составил 0,9 ± 0,8 см, которое не было статистически
значимым.
Выводы:
Эти результаты показывают, что л. barbarum потребление увеличивает скорость обмена веществ и
уменьшает окружность талии, по отношению к плацебо лечение пациенты контрольной.
J Am Coll Nutr. 2011 Oct;30(5):304-9.
Lycium barbarum increases caloric expenditure and decreases waist circumference in healthy
overweight men and women: pilot study.
Amagase H1, Nance DM.
Lycium barbarum (L. barbarum), a traditional Asian medicinal therapy for diabetes and other conditions,
has been shown to increase metabolic rate and to reduce body-weight gains in rodent models, as well as to
produce clinical improvements in general feelings of well-being including energy level.
OBJECTIVE:
To investigate the impact of L. barbarum consumption on (1) caloric expenditure and (2) changes in
morphometric parameters (waist circumference) in healthy human adults. Method: Two separate
randomized, double-blind, placebo-controlled, small clinical studies were conducted using a standardized L.
barbarum fruit juice, GoChi, and assessing its effects on (1) resting metabolic rate (RMR) and postprandial
energy expenditure (PPEE) as measured by indirect calorimetry after single-bolus intake of 3 doses of L.
barbarum (30, 60, and 120 ml) and placebo; and (2) waist circumference and other morphometric changes
in a 14-day intervention trial (120-ml daily intake) in the subjects (age = 34 years, body mass index = 29
kg/m(2)).
RESULTS:
(1) A single bolus of L. barbarum intake increased PPEE 1 through 4 hours postintake over the baseline
level in a dose-dependent manner and was significantly higher than the placebo group by 10% at 1 hour
postintake of 120 ml (p < 0.05). (2) In a 14-day intervention trial, L. barbarum was found to significantly
decrease waist circumference by 5.5 ± 0.8 cm (n = 15) compared with the preintervention measurements
and placebo group at postintervention day 15 (p < 0.01). By contrast, the changes in the placebo group (n =
14) from preinterventions was 0.9 ± 0.8 cm, which was not statistically significant.
CONCLUSIONS:
These results show that L. barbarum consumption increases metabolic rate and reduces the waist
2
circumference, relative to placebo treated control subjects.
Разворот Каспаз-зависимого апоптоза Цитотоксичность пути, по Таурина от Lycium barbarum (Goji
Berry) в Пигментного эпителия сетчатки клетки: потенциальная выгода при диабетической
Ретинопатии
Реферат
Диабетическая ретинопатия является предотвратимой микрососудистых диабетических
осложнений и ведущей причиной потери зрения. Ретинального пигментного эпителия апоптоз клеток
является ранним событием при диабетической ретинопатии. Таурин, как сообщается, выгодно
диабетической ретинопатии и обильные плоды Lycium barbarum (LB). Мы исследовали эффект чистого
таурин и экстракт LB богаты таурином на модели диабетической ретинопатии сетчатки ARPE-19
клеточной линии воздействию высоких глюкозы. Мы показываем впервые, что LB экстракт и
активного лиганда, таурин, доза зависимо повысить жизнеспособность клеток после высокой
глюкозы лечение в ARPE-19 сетчатки эпителиальной клеточной линии. Это цитопротекторный эффект
был связан с затуханием высокой гликемии-индуцированного апоптоза, который был показан
характерный морфологический окрашивание и Зависимое от дозы уменьшение количества
апоптотических клеток определяли методом проточной цитометрии. Более того, мы показали, что LB
экстракт и таурин в дозе зависимо downregulate каспазы-3 выражение белка и ферментативной
активности каспазы-3. Мы заключаем, что таурин, основным компонентом LB, LB, экстракт оказывают
цитопротекторный эффект от воздействия глюкозы в человеческом отслоение эпителиальных клеток
линии и могут дать полезные подходы для задержки прогрессирования диабетической ретинопатии.
1. Введение
Диабетическая ретинопатия (др) является одним из наиболее распространенных микрососудистых
осложнений диабета и остается главной причиной предотвратимой слепоты во всем мире [1].
Сахарный диабет повреждает все основные клеток сетчатки и пигментного эпителия клеток [2]. Это
приводит к увеличению кровотока и диаметр капилляра, распространение внеклеточного матрикса и
утолщение базальной мембраны, измененных клеток (апоптоз, пролиферация)и распределение
крови ретинального барьера [3].
Апоптоз или запрограммированная гибель клеток может быть вызвана различными сигналами, и
характеризуется четко определенными морфологическими изменениями, в том числе конденсации
хроматина и фрагментация, и формирование апоптотических тел [4]. Сетчатки микрососудистой
клетки потеряны выборочно через апоптоз перед другими гистопатология обнаруживаемая при
диабете [5]. Более того, недавние исследования показали, что апоптоз, эпизоды клеток сетчатки при
начальной стадии диабета играют важную роль в ранней стадии потери зрения [6]. Таким образом,
апоптоз является важным в развитии и патогенезе DR [7].
Ретинального пигментного эпителия (РПЭ) клетки образуют монослой между neuroretina и
choriocapillaris, которые являются непременным составляющим внешнего крови ретинального
барьера (BRB), которая поддерживает физиологический и структурный баланс в сетчатке глаза [8].
ООО НПП клетки особенно чувствительны к окислительному стрессу из-за высокого потребления
кислорода фоторецепторов [9]. Более того, недавние исследования показали, что клетки РПЭ пройти
окислительного стресса и УФ-индуцированного апоптоза [10, 11]. Хотя несколько исследований
показали, что РПЭ вырождается в ранней стадии сахарного диабета [12, 13], механизмы высокого
глюкозы-индуцированный апоптоз клеток РПЭ моделей DR, полностью не поняты.
Высокая глюкоза вызывает активацию ряда белков, участвующих в апоптотической гибели клеток, в
том числе членов каспазы семьи [14]. Хорошо известно, что каспаз вовлечены в инициацию и
выполнение апоптоза [15]. Кроме того, широко изученный каспазы-3 играет важную роль в диабете
[16].
Недавние исследования показали, что лиганд-активировать PPAR-γ контроль апоптоза, способствуя
защиты тканей [17]. Действительно, было показано, что PPAR-γ агонист росиглитазон защищает от
окислительного стресса-индуцированного апоптоза через регуляция антиапоптотических Bcl-2
семейство белков [18]. Troglitazone показал цитопротекторную активность от окислительный стрессиндуцированного апоптоза в ARPE-19 клеток [19]. Кроме того, исследование показало, что природный
лиганд, 15-дезокси-Дельта-12,14-простагландин J2 (15d-PGJ2), помогает клеток РПЭ для поддержания
3
целостности митохондриальной по профилактике цитохрома с (cyt c) высвобождение из митохондрий
и активацию апоптоза пути [20].
Из фруктов Lycium barbarum L. (LB) в семейства Пасленовых являются хорошо известной
традиционной китайской медицины, которая имеет сахароснижающей активности и антиапоптозной
активностью [21]. Растет объем фактических данных о том, что LB доза повышает в плазме натощак
зеаксантин уровнях, полезно для поддержания плотность пигмента в макуле при возрастной
макулярной дегенерации [22]. Кроме того, полисахариды фунт (LBP) увеличение антиапоптотических
белков Bcl-2 уровня в объектив эпителиальных клеток [23]. LB содержит 18 видов аминокислот, в том
числе таурин, ненужные свободных аминокислот, которая является одним из химических
компонентов, наиболее распространенных в LB [24, 25]. Таурин был рекомендован в качестве
дополнительного терапевтического агента для профилактики диабетических осложнений при
сахарном диабете II типа [26]. Кроме того, было показано, что таурин ингибирует активацию каспазы3 в ишемизированных кардиомиоцитов [27]. Таурин также было установлено, чтобы предотвратить
высокое-глюкоза-опосредованный апоптоз эндотелиальных клеток через его антиоксидантные
свойства [28]. Недавно мы показали, что LB экстракт и чистый таурин, важный компонент в LB,
экстракт активации PPAR-γ по люциферазный репортерный ген анализ и мРНК и вестерн-блоттинга
измерения в пигментного эпителия сетчатки клетки. В то же время, как фунт экстракт и чистый таурин
ингибирует различные PPAR-γзависимые от нижестоящих эффекторов в клетки сетчатки [29]. Однако,
эти пути, благотворно отразится LB и его активный компонент таурин на DR путем модуляции
высокого глюкозы-индуцированного апоптоза через PPAR-γ-опосредованных каспазой-3 путь не
исследованы. Таким образом, целью данного исследования является изучение цитопротекторный
эффект чистого таурин и экстракт LB богаты таурином против воздействия глюкозы в человеческом
отслоение эпителиальных клеток линии как модель д-р
2. Материалы и методы
2.1. Подготовка LB экстракт
Сушеные фунт был куплен в сыром виде порошка (batch no. 53101: DeDu Holdings, Уэст-Райд,
Австралия). Приготовление экстракта LB проводили, как описано ранее [29, 30] с модификациями.
Кратко, 250 мг изобразительных LB порошок экстрагировали 2.5 мл метанола путем разрушения
ультразвуком при комнатной температуре в течение 15 мин с последующим центрифугированием в
течение 5 мин. Этот шаг был повторен четыре раза. Растворитель затем выпаривают при
пониженном давлении ниже 50°C, а оставшиеся твердые были собраны. Идентификация и
количественное определение таурина в LB экстракт проводились методом тонкослойной
хроматографии (ТСХ-анализ), как описано ранее [29].
2.2.
Культура тканей и лечение
Человеческой сетчатки эпителиальной клеточной линии, ARPE-19, был предоставлен д-ром Weiyong
Shen (сохранить зрение институт, Сидней, Австралия). Клетки культивировали, как описано ранее [31].
Кратко, клетки культивировали в увлажненный инкубатор при 37°C в 5% CO2 в 10% фетальной
сыворотки крупного рогатого скота-определяется минимально необходимых среднего (FBS-DMEM)F12 medium), содержащую 5,5 мм D-глюкозы, дополненной 100 U/мл пенициллина G и 100 μг/мл
стрептомицина. Культуральная среда заменялась свежей среды каждый второй день. После слияния
культур были passaged путем диссоциации 0,05% (w/v), трипсина (Gibco-Life Technologies, Roseville,
штат Мэриленд, США) в фосфатно-буферный солевой раствор (PBS), рН 7,4. Для высокого глюкозыиндуцированных функциональных исследований, клетки культивировали в свежей среде,
содержащей 1% FBS, 2 ч до использования в экспериментах. Клетки были затем предварительно
обработанные образцы, росиглитазон (RG), 15-дезокси-Дельта (12, 14)-простагландин J2 (PG), или
автомобиль (на 0,5% ДМСО) в течение 6 ч с последующим выдержкой в нормальных (5.5 мм) или
высокой (33.3 мм) D-глюкозы в течение 48 ч. Клетки инкубировали в 27.5 мм маннита (м) служил в
качестве осмотического контроля [32].
2.3. Жизнеспособность клеток MTS Assay
Пролиферацию клеток оценивали по 3-(4,5-dimethylthiazol-2-ил)-5-(3-carboxymethoxy фенил)-2-(4sulfophenyl)-2H-tetrazolium (МТС) анализа с использованием клеток титр 96 Aqueous One Solution Cell
Proliferation Assay Kit (Promega, Madison, WI, USA), как описано ранее, с некоторыми модификациями
[33]. Кратко, ARPE-19 клеток культивировали в 96-луночных планшетов (3 × 104/мл). После слияния
4
клетки были обработаны автомобиля (0.05% ДМСО), RG, колхицина (Colch), или образцы для 24 ч, 48
ч и 72 ч. Для высокого глюкозы цитотоксичность экспериментов, в среду заменяют свежей средой,
содержащей 1% FBS, 2 ч до использования в экспериментах. Клетки были затем preincubated с
лечением образцы, RG, PG, или транспортного средства (на 0,5% ДМСО) в течение 6 ч с последующей
выдержкой в нормальных (5.5 мм) или высокой (33.3 мм) D-глюкозы еще на 48 ч. На день
proliferation assay, 20 μL МТС добавляли раствор каждой из 96 лунок, и инкубировали при 37°C в
течение 1 ч в увлажненных (5% CO2) среды. Поглощение при 490 нм было прочитать в
микропланшетный ридер (Bio-Rad Laboratories, Inc., CA). Процент пролиферации клеток рассчитывали
как (OD обработанных проб/OD неочищенных контроля) × 100.
2.4. Выявление Апоптотических клеток
Клетки происходит апоптоз определяли с помощью Hoechst 33342 окрашивание и Аннексина V
проточной цитометрии анализа, как описано ранее, с модификациями [4]. Кратко, клетки
фиксировали в 4% формальдегиде в течение 10 мин и окрашивали красителем Hoechst 10 мин.
Клетки были визуализированы под инвертированный люминесцентный микроскоп (возбуждения при
365 нм и эмиссии на 480 нм, используя УФ-фильтра). Не менее 300 клеток в каждой покровным
стеклом, из шести случайно выбранных полей, были подсчитаны, и апоптотических клеток были
выражены в процентах от общего объема клеток графов.
2.5. Количественное определение Апоптотических клеток
Апоптотические клетки были количественно методом проточной цитометрии с использованием
FITC Аннексин V apoptosis detection kit (BD Biosciences, San Jose, USA), как описано ранее [34]. Кратко,
после соответствующего лечения, 1 × 105 клеток/100 μL были собраны, и 5 μЛ FITC Аннексина V и 5
μЛ пропидия (PI) были добавлены. Клетки инкубировали в темноте при 25°C. после 15 мин, 400 μЛ 1x
привязки буфер был добавлен к клеткам. На Аннексин V-положительный (+)/PI-отрицательный (-)
клеток, указывая на ранних апоптотических клеток, и Аннексин V-положительный (+)/PIположительный (+), указывая на поздних апоптотических клеток, были обнаружены FACSCalibur (BD
Biosciences, San Jose, USA). Результаты были проанализированы, используя WINDI 2.5 программное
обеспечение. Аннексин V-FITC конъюгатов были обнаружены в канале FL1, и PI был прочитан FL3
канала.
2.6. Каспазы-3 Анализа Деятельности
Каспазы-3 активность измерялась с помощью каспазы-3 флюориметрического анализа системы (BD
Biosciences, San Jose, USA), как описано ранее [35] с модификациями. Ненадолго, всего от 1 × 106
клетки собирали и ресуспендировали в холодном помещении лизис-буфера (10 мм Трис-HCL, 10 мм
NaH2PO4/NaHPO4 (pH7.5), 130 мм NaCl, 1% Triton-X-100 и 10 мм пирофосфат натрия (Наппи)) за 30
мин на льду. Лизат клеток концентрации белков определяли по ДСС (bicinchoninic кислоты) анализа
(Thermo, США) согласно инструкции производителя. Равные количества белка были добавлены в
каждую лунку в 96-луночный планшет, содержащий 200 μЛ HEPES буфер и 5 μL эффективных
субстрата, DEVD-AMC (7-амино-4-methylcoumarin), и инкубировали 1 ч при 37°С. расщепление
субстрата активной каспазы-3 привело к увеличению флуоресценции (возбуждение = 380 нм и
эмиссии = 460 нм), измеренные в 96-луночный планшет флуорометр (FLUOstar OPTIMA), и выражен
как единица на миллиграмм белка.
2.7. Извлечения белка и Полуколичественного анализа вестерн-Блоттинга
Immunoblots были проведены, как описано ранее [36]. Белки из клеток были подготовлены с
использованием рипа лизис буфера (25 мм Трис-буфера (pH 7,6), 150 мм NaCl, 1% NP-40, 1%
дезоксихолатом натрия и 0,1% SDS). В лизированных клеток центрифугировали со скоростью 12000
об / мин (Micromax РФ центрифуга Thermo IEC, MA, USA) в течение 10 мин и supernatants решены с
помощью SDS-PAGE, 4-12% (Invitrogen, Австралия). Белка была передана целлюлозы мембраны в
передаче буфера (Tris base 25 мм, глицин 192 мм, рН 8,3) и блокировали в 5% обезжиренного сухого
молока (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) на ночь. Первичные антитела (Santa Cruz Biotechnology, США)
были anticaspase-3 кролик поликлональных первичных антител (1 : 500 разбавления). После
инкубации с первичными антителами в течение 1 ч при комнатной температуре, мембрану
промывают и далее инкубировали с пероксидазой хрена-конъюгированных анти-мышь вторичных
антител (1 : 6000 разбавления; Santa Cruz Biotechnology, США). Связанные антитела были обнаружены
5
с помощью усиленной хемилюминесценции с Lumi-свет вестерн-Блоттинга субстрата (Roche).
Мембраны подвергались рентгеновская пленка (Kodak, США) и разработана с помощью SRX-101A Xray developer (Konica, Тайвань). Результирующая фильмы были количественно определены методом
сканирующей денситометрии с помощью ImageJ (National Institutes of Health, Bethesda, MD).
Экспрессия белков была определена количественно с помощью нормализации, чтобы α-тубулина.
Мембраны были reprobed с Анти-α-тубулина первичных антител (1 : 10,000 разбавления; Santa Cruz
Biotechnology, США) после зачистки и ночь блоттинга с 5% обезжиренным молоком. Мембраны были
reincubated пероксидазой хрена)-конъюгированных анти-мышь вторичного антитела и выявляют с
помощью той же процедуры, как описано выше. Лизат клеток концентрации белков определяли по
ДСС (bicinchoninic кислоты) анализа (Thermo, США) согласно инструкции производителя.
2.8. Химикаты
Росиглитазон (RG) был приобретен у Alexis Biochemicals (San Diego, CA, USA). Чистый таурин
соединение, 15-дезокси-Дельта (12, 14)-простагландин J2(PG), и другие химические вещества были
приобретены у Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA), если не указано иное.
2.9. Статистический Анализ
Все результаты выражены как средство ± SEM данные были проанализированы 1 дисперсионного
анализа (ANOVA). Если статистически значимый эффект был найден, Newman-Keuls тест был
проведен, чтобы изолировать разницы между группами. P значения меньше 0,05 (P < 0.05) были, как
считается, указывают на значимость.
3. Результаты
3.1. Влияние Таурина и LB выписки на жизнеспособность клеток в ARPE-19 клетки
Культивировали в глюкоза в норме состояние
Чтобы определить, является ли LB экстракт и компонент таурин повлияли на жизнеспособность в
глюкоза в норме-лечить ARPE-19 клеток, МТС анализа была выполнена в течение 24 ч, 48 ч и 72 ч
инкубации. Инкубация LB экстракт 0.001, 0.01, 0.1, 0.5, 1 и мг/мл, глюкоза в норме-лечить APRE-19
клеток в течение 24 ч и 48 ч было мало, или нет цитотоксичности (>90% жизнеспособность остался).
На 5 мг/мл, LB экстракт цитотоксических на всех инкубации раз (Рис. 1(а)).
3.2. Цитопротективные эффекты Таурина и LB экстракт в ARPE-19 клеток, подвергающихся
высоким глюкозы
Как установлено, что гипергликемия индуцирует клеточную гибель эпителиальных клеток сетчатки
[37], ARPE-19 клетки были обработаны 33.3 мм глюкозы 48 ч в присутствии LB экстракт (0.1, 0.5 и 0.75
мг/мл) или таурин (0.001, 0.1, 1 и мм), и их цитопротекторный эффект был осмотрен МТС анализа.
Поскольку высокий уровень глюкозы увеличивается осмолярность, ARPE-19 клеток были также
подвержены осмотическое управления (27.5 мм маннитол + 5.5 мм глюкозы). Жизнеспособность
клеток в 33,3 мм глюкозы достоверно уменьшился на 59,9%; потери жизнеспособности и было
отменено, добавив LB экстракт доза-зависимым образом (на 67,9, 74.4,, 81,0%, соответственно.) (Рис.
2.). Также жизнеспособность клеток в 33,3 мм глюкозы условие было отменено путем добавления
таурина в зависимости от дозы образом (69.4, 82.6, и на 89,3%, соответственно.) (Рис. 2.). Потеря
жизнеспособности клеток в высокой глюкозы культуры было аналогично восстанавливаются путем
добавления положительного контроля RG (на 73,8%) и PG (89.1%). Осмотическое контроль не выявил
значительное снижение жизнеспособности клеток.
3.3. Влияние Таурина и LB выписки на Апоптоз клеток в высокой глюкозы-лечение ARPE-19 клеток
Для исследования того, цитопротективные эффекты LB экстракт и таурин были из-за ослабления
высокого глюкозы-индуцированного апоптоза, характерный морфологический окрашивание
проводили с помощью Hoechst 33342 и проточной цитометрии с Аннексин V/PI двойное окрашивание
для выявления и количественной оценки апоптоза клеток.
Инкубации с высокой гликемии в течение 48 h индуцирует значительное увеличение количества
апоптотических клеток (26,8% от общей клетки), как это определено окрашивание Hoechst, по
сравнению с нормальной глюкозы культуры (Рис. 3(a)). Ингибиторный эффект LB и экстракт таурина на
высокой глюкозы-индуцированного апоптоза была продемонстрирована в характерных
морфологических окрашивание (Рис. 3(б)). Лечение с LB экстракт (0.1, 0.5 и 0.75 мг/мл) доза
зависимо уменьшилось количество апоптотических клеток на 18,3, 15.0 и 8,7% общего объема клетки,
соответственно, по сравнению с высоким контролем уровня глюкозы в крови, достигая значений,
6
сопоставимых с таковыми в контрольной культур (5.2% общего объема клетки) (Рис. 3(a)). Таурин
(0.001, 0.1, 1 и мм) доза зависимо уменьшилось количество апоптотических клеток, 14,0, 12.0, и 8,6%
общего объема клетки, соответственно, по сравнению с высоким контролем уровня глюкозы в крови,
приближаясь к значениям в контрольной культур (5.2% общего объема клетки) (Рис. 3(a)). Количество
апоптотических клеток, как это определено окрашивание Hoechst в высокого глюкозы состояние было
аналогично снизились на положительные элементы управления RG (9,4%) и PG (7.6%).
Чтобы определить, является ли LB и экстракт таурина сократился апоптоза в высоком глюкозоиндуцированной ARPE-19 клеток, апоптоз измеряется как Аннексин V обязательными для позитивных
клеток и количественно методом проточной цитометрии, как Аннексин V привязке специально для
PS, позволяя дискриминации между жизнеспособным и апоптотических клеток [38]. Представитель
dotplots контроля и лечить высокое-глюкозо-индуцированной ARPE-19 клеток окрашивали Аннексина
V и PI используется для определения уровня апоптоза представлены в Рис. 4(б). LB экстракт (0.1, 0.5 и
0.75 мг/мл) доза зависимо уменьшилось количество Аннексин-V позитивных клеток (14.8, 10.2, и
6,4% - контроль) (Рис. 4(а)). Таурин в дозе зависимо уменьшилось количество Аннексин Vположительных клеток (14.8, 9.3, и 6.0% в контроле) (Рис. 4(а)). Количество апоптотических клеток в
высокой глюкозы культуры была уменьшена путем добавления положительного контроля, RG (на
10,0%) и PG (6.1%). Осмотическое управления не повышение апоптотической гибели клеток,
исключающие участие осмотического влияния высокой концентрации глюкозы.
Таурин (0.001, 0.1, 1 и мм) дозы в зависимости от указанных каспазы-3 экспрессии белка (на 7,0-,
5.2-и 3,3 раза, соответственно.) (Рис. 5(б)).
Уровни протеина каспазы-3 в high-глюкоза-обработанных клетках были снижены путем добавления
положительного контроля, RG (в 4,4 раза) и PG (в 4,3 раза). Осмотическое управления не повысить
активность каспазы-3 уровня белка, исключающие участие осмотического влияния высокой
концентрации глюкозы.
3.5. Влияние Таурина и LB выписки на Каспазу-3 деятельность в высшей глюкозоИндуцированной ARPE-19 клеток
Для подтверждения выводов downregulating эффект LB и экстракт таурина на апоптоза, активации
каспазы-3 в апоптотических клеток определяли с помощью флюориметрического исследования
ферментов. LB экстракт (0.1, 0.5 и 0.75 мг/мл) дозы в зависимости от указанных каспазы-3 активность
(на 5,0-, в 4,2 и 3,9 раза, соответственно.) (Рис. 6.).
Таурин (0.001, 0.1, 1 и мм) дозы в зависимости от указанных каспазы-3 активность (на 5,7-, в 4,2 и
3,1 раза, соответственно.) (Рис. 6.).
Активированную каспазу-3, уровни высокого глюкозы состоянии были отменены путем добавления
положительного контроля, RG (в 2,8 раза) и PG (в 3.1 раза). Повышением осмотического управления
не повысить активность каспазы-3 деятельности, исключающие участие осмотического влияния
высокой концентрации глюкозы.
4. Обсуждение
Диабетическая ретинопатия (др) является предотвратимой микрососудистых диабетических
осложнений, и гипергликемия считается основным фактором в ее развитии [39]. Хотя различные
гипергликемия-индуцированных метаболических нарушений причастны DR [40]это было трудно точно
определить патогенный механизм, таким образом, делая обоснование терапевтической мишенью
сложно. Результаты многочисленных исследований показывают, что апоптоз-это важная часть
патологии DR [4, 6]. Апоптотической гибели клеток сетчатки в регионах, скорее всего, будет стимулом
для повышенной экспрессии молекул, которые усиливают распад крови ретинального барьера (BRB)
и привести к сосудистой пролиферации [41]. Действительно, высокая-глюкозо-индуцированной
апоптотической эпизоды показали, патология сетчатки, потенциальных визуальных изменений, и
появление первых сосудистых изменений
РПЭ является существенным для neuroretina выживания и, следовательно, для зрительной функции
[43]. В ответ на повреждения, вызванные гипергликемического состояния, НПП клетки мигрируют и
пролиферируют, ведущих к нарушению адгезии между РПЭ и хориоидальных капилляров, затем BRB
пробоя, ставя под угрозу кровоток в пределах слоя РПЭ и привело в конечном итоге отека сетчатки
[37]. Кроме того, исследования показали, что нарушения в обеих структурных и секреторную функции
клеток РПЭ, затем следуют зрительные рецепторы апоптоза находятся в DR [43, 44].
7
Целью данного исследования явилось изучение экстракт Годжи и ее главным активным
компонентом защиты сетчатки эпителиальных клеток против глюкозо-индуцированной
цитотоксичности в качестве модели диабетической ретинопатии. Диабет результатов в различных
метаболических и биохимических нарушений в сетчатке, в том числе повышенного окислительного
стресса, который, как было показано, индуцируют экспрессию проапоптотических молекул, ведущих к
апоптозу. Отдельных членов каспазы семья участвует в инициации и выполнения этапов апоптоза
[45]. Среди них каспазы-3 является “палач” каспазы, как известно, играет важную роль в
протеолитического каскада при апоптозе [46]. Кроме того, обнаружение активации каспазы-3
является очень надежным инструментом для выявления клеток суждено умереть от апоптоза [47].
Наши предыдущие работы, установлено, что Гоги Берри и ее компонент таурин активировать PPARγ [29]. PPAR-γ - линолеумов, выраженные в глаз млекопитающих, представлять в сетчатки
пигментированного эпителия, наружных сегментов фоторецепторов, и choriocapillaris [48]. Недавнее
исследование показало, что сетчатки экспрессии PPAR-γ было подавлено в экспериментальных
моделях диабета и в эндотелиальных клетках, обработанных с высокой глюкозы [49]. Более того,
недавние исследования показали, что PPAR-γ лиганды, в том числе 15d-PGJ2 (PG) и росиглитазон (RG),
контроль апоптоза, способствуя защиты тканей [50, 51]. Кроме того, экран FDA-APPROVED
соединений, выявленных RG, как роман антиапоптотическим агентом клеток сетчатки обоих in vivo и
in vitro [52]. Действительно, недавние исследования показали, что RG защищает окислительный
стресс-индуцированного апоптоза через регуляция Bcl-2 и модуляции каспазы-3 активации [17].
Мы исследовали потенциал Lycium barbarum (LB) как природное лекарство для управления
диабетической ретинопатии. LB-это традиционная китайская медицина используется на протяжении
веков на востоке и считается полезным для глаз, связанные с патологией [53]. Разные биологические
виды деятельности LB были продемонстрированы, в том числе antiaging и cytoprotection [54].
Последние исследования показали, что водный экстракт LB экспонатов нейропротекторный эффект в
отношении β-амилоидного пептида-индуцированного апоптоза в культивируемых нейронов путем
смягчения каспаза-3-как деятельность [55]. Кроме того, было высказано предположение, что фунт
полисахариды (LBPs) эффективно защищать сетчатку от смерти нейронов и апоптоз путем
ингибирования этих сигнальных путей, таких как c-Jun N-terminal protein kinase (JNK), дсрнк-зависимой
протеинкиназы (PKR)и каспазы-3 активность сетчатки, ишемии/реперфузионного повреждения,
подтверждающие нейропротекторной роли в глазных заболеваний [56]. Кроме того, исследование
показало, анти-апоптотической активности LBP в культивируемых эпителия семенных против
гипертермия-индуцированных повреждений в результате ингибирования супероксидиндуцированной cyt c [57].
Параллельно с учебой на LB экстракт, мы исследовали влияние таурина на индукции
цитотоксичности пути в ARPE-19 клеток. Таурин является одной из важнейших составляющих в LB
присутствует в сетчатке в изобилии, когда это имеет существенное значение для поддержания
сетчатки, структура и функции [25]. Различные исследования показали, что в плазме и тканевой
уровни таурина уменьшается при диабете [58-60]. Действительно, исследования показали
благотворное действие таурин, добавка в предотвращении или разрешении гипергликемияиндуцированных дефектов сетчатки [58, 59]. Более того, недавние исследования показали, что диабет
или высокое-глюкозо-индуцированной сетчатки апоптоз глиальных клеток ингибируется таурин,
показывать эффективной профилактики против DR [61]. Антиапоптотическим действием таурина
также было показано, что происходят за счет подавления Ca2+-зависимой митохондриальной
проницаемости перехода (mPT) для предотвращения митохондриальной дисфункции и блок
активации cyt c/каспазы-3 апоптотических путей, в крысу ганглиозных клеток сетчатки [62]. Кроме
того, таурин оказывает нейропротекторное воздействие через антиапоптотическим действием за счет
повышения Bcl-2 уровня, с уменьшением вах и каспазы-3 уровня [15].
В предыдущей работе, которая формируется на фоне ведущих настоящего исследования, мы
определили, что LB экстракт и чистый таурин, важный компонент в LB, экстракт активации PPAR-γ по
люциферазный репортерный ген анализ и мРНК и вестерн-блоттинга измерения в пигментного
эпителия сетчатки клетки. В то же время, как фунт экстракт и чистый таурин ингибирует различные
PPAR-γзависимые от нижестоящих эффекторов в клетки сетчатки [29]. В настоящем исследовании мы
предположили, что таурин и LB экстракт может иметь модулирующим действием на высокой
8
глюкозы-индуцированного апоптоза через PPAR-γ-опосредованных каспазой-3 пути, отвечать за их
последствия в доктора, чтобы проверить эту гипотезу, мы впервые исследовали влияние таурина и LB
выписки на модулирующий жизнеспособность клеток и, следовательно, апоптоз высокого глюкозылечение ARPE-19 клеток. Наши результаты показали, что метаноловый экстракт LB дозы зависимо
преодолел снижение жизнеспособности клеток в высокой глюкозы-лечение ARPE-19 клеток (Рис. 2.).
Таурин был подобный эффект на преодоление снизилась жизнеспособность клеток (Рис. 2.). В
цитопротекторный эффект таурина был связан с затуханием высокого глюкозы-индуцированного
апоптоза, который был показан характерный морфологический окрашивание (Рис. 3(б)) и Аннексин
V/PI двойное окрашивание (Рис. 4(б)), и в зависимости от дозы уменьшение количества
апоптотических клеток (рис 3(a) и 4(a)). Кроме того, результаты показали, что таурин и LB экстракт
доза-зависимо указанных каспазы-3 белка выражение (цифры 5(a) и 5(b)) и ингибируют
ферментативную активность каспазы-3 (Рис. 6.). Поэтому цитопротекторный эффект LB экстракт
parallels глубокое подавление высокого глюкозы-индуцированного апоптоза в месте каспазы-3
регулирования. Эффекты таурина точно имитирует эффекты methanolic LB извлечь, так как они
наступают при концентрации 0.001-1.00 мм, который мы показали ранее [29] присутствовали в
диапазоне methanolic экстракт применяют в лечении (от 0.1 до 0.75 мг/мл). Однако, мы не можем
исключить возможность того, что другие компоненты могут также способствовать и
цитопротективные эффекты LB.
В резюме, в этом исследовании было показано впервые, что традиционная китайская медицина
Lycium barbarum это цитопротективного против высокого глюкозы цитотоксичность в ретинальных
пигментных эпителиальных клеток, по крайней мере частично, регулирующих апоптоз, в результате
каспазы-3 модуляции. Это может произойти через начальную PPAR-γ активации, найденных в
предыдущих исследованиях [29]. Эффекты экстракта тесно повторено таурин в концентрации
присутствующих в экстрактах. Этот путь и демонстрация его основных активных компонента
предоставить обоснование терапевтического применения таурина и ценным лекарственным
растением, LB для профилактики доктор однако дальнейшее расследование их конкретные
механизмы требуют, чтобы собрать доказательства эффективности и безопасности, таурин и LB для
защиты от DR в различных доклинических и клинических параметров.
Reversal of the Caspase-Dependent Apoptotic Cytotoxicity Pathway by Taurine from Lycium barbarum
(Goji Berry) in Human Retinal Pigment Epithelial Cells: Potential Benefit in Diabetic Retinopathy
M. K. Song, B. D. Roufogalis, and T. H. W. Huang
Abstract
Diabetic retinopathy is a preventable microvascular diabetic complication and a leading cause of vision
loss. Retinal pigment epithelial cell apoptosis is an early event in diabetic retinopathy. Taurine is reportedly
beneficial for diabetic retinopathy and is abundant in the fruit of Lycium barbarum (LB). We have
investigated the effect of pure taurine and an extract of LB rich in taurine on a model of diabetic retinopathy,
the retinal ARPE-19 cell line exposed to high glucose. We demonstrate for the first time that LB extract and
the active ligand, taurine, dose dependently enhance cell viability following high glucose treatment in the
ARPE-19 retinal epithelial cell line. This cytoprotective effect was associated with the attenuation of high
glucose-induced apoptosis, which was shown by characteristic morphological staining and the dosedependent decrease in the number of apoptotic cells, determined by flow cytometry. Moreover, we have
shown that LB extract and taurine dose dependently downregulate caspase-3 protein expression and the
enzymatic activity of caspase-3. We conclude that taurine, a major component of LB, and the LB extract,
have a cytoprotective effect against glucose exposure in a human retinal epithelial cell line and may provide
useful approaches to delaying diabetic retinopathy progression.
1. Introduction
Diabetic retinopathy (DR) is one of the most common microvascular complications of diabetes and
remains a major cause of preventable blindness worldwide [1]. Diabetes damages all the major cells of the
retina and pigment epithelial cells [2]. This results in increased blood flow and capillary diameter,
proliferation of the extracellular matrix and thickening of basal membranes, altered cell turnover (apoptosis,
proliferation), and breakdown of the blood retinal barrier [3].
Apoptosis or programmed cell death can be triggered by various signals and is characterized by welldefined morphologic changes, including chromatin condensation and fragmentation, and formation of
9
apoptotic bodies [4]. Retinal microvascular cells are lost selectively via apoptosis before other
histopathology is detectable in diabetes [5]. Moreover, recent findings have suggested that apoptotic
episodes in retinal cells during the initial stage of diabetes play an integral role in the early stage of vision
loss [6]. Therefore, apoptosis is important in the progression and pathogenesis of DR [7].
Retinal pigment epithelial (RPE) cells form a monolayer between the neuroretina and the choriocapillaris,
which are the essential components of the outer blood retinal barrier (BRB) that maintains physiological and
structural balance within the retina [8]. RPE cells are particularly susceptible to oxidative stress because of
high oxygen consumption by photoreceptors [9]. Moreover, recent studies have shown that RPE cells
undergo oxidative stress and UV-light induced apoptosis [10, 11]. Although several studies have shown that
RPE degenerates in the early stage of diabetes [12, 13], the mechanisms of high-glucose-induced apoptosis
in RPE cell models of DR are not fully understood.
High glucose causes activation of several proteins involved in apoptotic cell death, including members of
the caspase family [14]. It is well known that caspases are involved in the initiation and execution of
apoptosis [15]. Moreover, the widely studied caspase-3 plays an important role in diabetes [16].
Recent studies have suggested that ligand-activated PPAR-γ controls apoptosis, contributing to tissue
protection [17]. Indeed, it has been shown that the PPAR-γ agonist rosiglitazone protects against oxidative
stress-induced apoptosis through upregulation of antiapoptotic Bcl-2 family proteins [18]. Troglitazone
showed a cytoprotective activity from oxidative stress-induced apoptosis in ARPE-19 cells [19]. Moreover,
the study has shown that a natural ligand, 15-deoxy-delta-12,14-prostaglandin J2 (15d-PGJ2), helps RPE cells
to maintain mitochondrial integrity by prevention of cytochrome c (cyt c) release from mitochondria and
subsequent activation of the apoptosis pathway [20].
Fruits from Lycium barbarum L. (LB) in the family Solanaceae are a well-known traditional Chinese
medicine which has glucose-lowering activity and antiapoptotic activity [21]. There is a growing body of
evidence indicating that LB intake increases the fasting plasma zeaxanthin levels, beneficial for maintaining
macular pigment density in age-related macular degeneration [22]. Moreover, polysaccharides of LB (LBP)
increase antiapoptotic protein Bcl-2 levels in lens epithelial cells [23]. LB contains 18 types of amino acids,
including taurine, a nonessential free amino acid, which is one of the chemical components most abundant
in LB [24, 25]. Taurine has been recommended as a complementary therapeutic agent for the prevention of
diabetic complications in type II diabetes [26]. Moreover, it has been shown that taurine inhibits the
activation of caspase-3 in ischemic cardiomyocytes [27]. Taurine has also been found to prevent highglucose-mediated endothelial cell apoptosis through its antioxidant property [28]. Recently, we have shown
that LB extract and pure taurine, a major component in the LB extract, activated PPAR-γ by luciferase
reporter gene analysis and by mRNA and western blotting measurement in human retinal pigment epithelial
cells. At the same time, both LB extract and pure taurine inhibited a variety of PPAR-γ-dependent
downstream effectors in the retinal cells [29]. However, the pathways of the beneficial effect of LB and its
taurine active component on DR by modulation of high-glucose-induced apoptosis through the PPAR-γmediated caspase-3 pathway have not been investigated. Therefore, the aim of this study is to investigate
the cytoprotective effect of pure taurine and an extract of LB rich in taurine against glucose exposure in a
human retinal epithelial cell line as a model of DR.
2. Materials and Methods
2.1. Preparation of LB Extract
Dried LB was purchased in raw powder form (batch no. 53101: DeDu Holdings, West Ryde, Australia). The
preparation of an extract of LB was performed as previously described [29, 30] with modifications. Briefly,
250 mg of fine LB powder was extracted with 2.5 mL of methanol by sonication at room temperature for
15 min followed by centrifugation for 5 min. This step was repeated four times. The solvent was then
evaporated under reduced pressure below 50°C, and the remaining solid was collected. The identification
and quantification of taurine in the LB extract were undertaken by thin layer chromatography (TLC) analysis
as previously described [29].
2.2.
Tissue Culture and Treatment
The human retinal epithelial cell line, ARPE-19, was provided by Dr. Weiyong Shen (Save Sight Institute,
Sydney, Australia). Cells were cultured as previously described [31]. Briefly, the cells were cultured in a
humidified incubator at 37°C in 5% CO2 in 10% fetal bovine serum-defined minimal essential medium (FBSDMEM)-F12 medium) containing 5.5 mM D-glucose, supplemented with 100 U/mL penicillin G and 100
10
μg/mL streptomycin. The culture medium was replaced with fresh medium every second day. Upon
confluence, cultures were passaged by dissociation in 0.05% (w/v) trypsin (Gibco-Life Technologies,
Roseville, MD, USA) in phosphate-buffered saline (PBS) pH 7.4. For high-glucose-induced functional studies,
cells were maintained in fresh medium containing 1% FBS for 2 h prior to use in the experiments. Cells were
then pretreated with samples, rosiglitazone (RG), 15-deoxy-delta (12, 14)-prostaglandin J2 (PG), or vehicle
(0.5% DMSO) for 6 h followed by further exposure to normal (5.5 mM) or high (33.3 mM) D-glucose for 48
h. Cells incubated in 27.5 mM mannitol (M) served as osmotic control [32].
2.3. Cell Viability by MTS Assay
Cell proliferation was assessed by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxy phenyl)-2-(4sulfophenyl)-2H-tetrazolium (MTS) assay using the Cell Titer 96 Aqueous One Solution Cell Proliferation
Assay Kit (Promega, Madison, WI, USA), as previously described with some modifications [33]. Briefly, ARPE19 cells were cultured in 96-well plates (3 × 104/mL). Upon confluence, cells were treated with vehicle
(0.05% DMSO), RG, colchicine (Colch), or samples for 24 h, 48 h, and 72 h. For high-glucose cytotoxicity
experiments, the medium was replaced with fresh medium containing 1% FBS for 2 h prior to use in the
experiments. Cells were then preincubated with treatment samples, RG, PG, or vehicle (0.5% DMSO) for 6 h
followed by exposure to normal (5.5 mM) or high (33.3 mM) D-glucose for a further 48 h. On the day of
the proliferation assay, 20 μL of the MTS solution was added to each of the 96 wells and incubated at 37°C
for 1 h in a humidified (5% CO2) environment. The absorbance at 490 nm was read in a microplate reader
(Bio-Rad Laboratories, Inc, CA). The percentage of cell proliferation was calculated as (OD of treated
samples/OD of untreated control) × 100.
2.4. Detection of Apoptotic Cells
Cells undergoing apoptosis were determined by Hoechst 33342 staining and Annexin V flow cytometry
analysis, as previously described with modifications [4]. Briefly, cells were fixed in 4% formaldehyde for 10
min and stained with Hoechst dye for 10 min. Cells were visualized under an inverted fluorescence
microscope (excitation at 365 nm and emission at 480 nm, using a UV filter). A minimum of 300 cells in
each cover slip, from six randomly selected fields, were counted, and apoptotic cells were expressed as
percentage of total cells counts.
2.5. Quantification of Apoptotic Cells
Apoptotic cells were quantified by flow cytometry using FITC Annexin V apoptosis detection kit (BD
Biosciences, San Jose, USA), as previously described [34]. Briefly, after appropriate treatments, 1 × 105
cells/100 μL were collected, and 5 μL of FITC Annexin V and 5 μL of propidium iodide (PI) were added. Cells
were incubated in the dark at 25°C. After 15 min, 400 μL of 1x binding buffer was added to the cells. The
Annexin V-positive (+)/PI-negative (−) cells, indicating early apoptotic cells, and the Annexin V-positive
(+)/PI-positive (+), indicating late apoptotic cells, were detected by FACSCalibur (BD Biosciences, San Jose,
USA). The results were analysed using the WINDI 2.5 software. Annexin V-FITC conjugates were detected at
the FL1 channel, and PI was read on the FL3 channel.
2.6. Caspase-3 Activity Assay
Caspase-3 activity was measured by the caspase-3 fluorometric assay system (BD Biosciences, San Jose,
USA), as previously described [35] with modifications. Briefly, a total of 1 × 106 cells were harvested and
resuspended in cold cell lysis buffer (10 mM Tris-HCL, 10 mM NaH2PO4/NaHPO4 (pH7.5), 130 mM NaCl,
1% Triton-X-100, and 10 mM sodium pyrophosphate (NaPPi)) for 30 min on ice. Cell lysate protein
concentrations were determined by the BCA (bicinchoninic acid) assay (Thermo, USA) according to the
manufacturer's instructions. Equal amounts of protein were added to each well in a 96-well plate containing
200 μL of HEPES buffer and 5 μL of the fluorogenic substrate, DEVD-AMC (7-amino-4-methylcoumarin), and
incubated for 1 h at 37°C. Cleavage of the substrate by active caspase-3 resulted in an increase of
fluorescence (excitation = 380 nm and emission = 460 nm), measured in a 96-well plate fluorometer
(FLUOstar OPTIMA), and expressed as unit per milligram protein.
2.7. Protein Extraction and Semiquantitative Western Blotting Analysis
Immunoblots were conducted as described previously [36]. The proteins from the cells were prepared
using the Ripa lysis buffer (25 mM Tris buffer (pH 7.6), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 1% sodium deoxycholate,
and 0.1% SDS). The lysed cells were centrifuged at 12,000 rpm (Micromax RF centrifuge, Thermo IEC, MA,
USA) for 10 min and supernatants resolved by SDS-PAGE, 4–12% (Invitrogen, Australia). Protein was
11
transferred to cellulose membrane in transfer buffer (Tris base 25 mM, glycine 192 mM, pH 8.3) and
blocked in 5% skim milk powder (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) overnight. The primary antibodies
(Santa Cruz Biotechnology, USA) were anticaspase-3 rabbit polyclonal primary antibodies (1 : 500 dilution).
After incubation with the primary antibody for 1 hr at room temperature, the membrane was washed and
further incubated with horseradish peroxidase-conjugated anti-mouse secondary antibodies (1 : 6000
dilution; Santa Cruz Biotechnology, USA). Bound antibodies were detected using enhanced
chemiluminescence with Lumi-Light Western Blotting Substrate (Roche). The membranes were exposed to
X-ray film (Kodak, USA) and developed using the SRX-101A X-ray developer (Konica, Taiwan). The resultant
films were quantified by scanning densitometry using ImageJ (National Institutes of Health, Bethesda, MD).
Protein expression was quantified by normalization to α-tubulin. The membranes were reprobed with antiα-tubulin primary antibody (1 : 10,000 dilution; Santa Cruz Biotechnology, USA) after stripping and
overnight blotting with 5% skim milk. The membranes were reincubated with horseradish peroxidaseconjugated anti-mouse secondary antibody and detected using the same procedure as described above. Cell
lysate protein concentrations were determined by the BCA (bicinchoninic acid) assay (Thermo, USA)
according to the manufacturer's instructions.
2.8. Chemicals
Rosiglitazone (RG) was purchased from Alexis Biochemicals (San Diego, CA, USA). Pure taurine compound,
15-deoxy-delta (12, 14)-prostaglandin J2(PG), and other chemicals were purchased from Sigma-Aldrich (St.
Louis, MO, USA), unless otherwise indicated.
2.9. Statistical Analysis
All results are expressed as means ± SEM Data were analysed by 1-factor analysis of variance (ANOVA). If a
statistically significant effect was found, the Newman-Keuls test was performed to isolate the difference
between the groups. P values less than 0.05 (P < 0.05) were considered to indicate significance.
3. Results
3.1. Effect of Taurine and LB Extract on Cell Viability in ARPE-19 Cells Cultured in Normal Glucose
Condition
To determine whether LB extract and taurine component influenced viability in normal glucose-treated
ARPE-19 cells, MTS assay was performed for 24 h, 48 h, and 72 h of incubation. Incubation of LB extract at
0.001, 0.01, 0.1, 0.5, and 1 mg/mL in normal glucose-treated APRE-19 cells for 24 h and 48 h had little or
no cytotoxicity (>90% viability remained). At 5 mg/mL, LB extract was cytotoxic at all incubation times
(Figure 1(a)).
Incubation of APRE-19 cells with taurine for 24 h, 48 h, and 72 h had little or no effect on cytotoxicity
(>90% viability remaining). At 5 and 10 mM, taurine was slightly cytotoxic (approximately 80% viability
remaining) at all incubation times (Figure 1(b)).
3.2. Cytoprotective Effects of Taurine and LB Extract in ARPE-19 Cells Exposed to High Glucose
As it is well established that hyperglycemia induces cell death in retinal epithelial cells [37], ARPE-19 cells
were treated with 33.3 mM glucose for 48 h in the presence of LB extract (0.1, 0.5, and 0.75 mg/mL) or
taurine (0.001, 0.1, and 1 mM), and their cytoprotective effect was examined by MTS assay. Since high
glucose increases osmolarity, ARPE-19 cells were also exposed to an osmotic control (27.5 mM mannitol +
5.5 mM glucose). Cell viability in 33.3 mM glucose was significantly decreased by 59.9%; the loss of viability
was reversed by adding LB extract dose dependently (by 67.9, 74.4, and 81.0%, resp.) (Figure 2). Likewise
cell viability in 33.3 mM glucose condition was reversed by adding taurine in a dose-dependent manner
(69.4, 82.6, and 89.3%, resp.) (Figure 2). Loss of cell viability in high-glucose culture was similarly reversed
by adding the positive controls RG (by 73.8%) and PG (by 89.1%). The osmotic control did not show a
significant reduction in cell viability.
3.3. Effect of Taurine and LB Extract on Cell Apoptosis in High-Glucose-Treated ARPE-19 Cells
To investigate whether the cytoprotective effects of LB extract and taurine were due to the attenuation of
high-glucose-induced apoptosis, characteristic morphological staining was performed using Hoechst 33342
and flow cytometry with Annexin V/PI double staining to identify and quantify the apoptotic cells.
Incubation with high glucose for 48 h induced a significant increase in the number of apoptotic cells
(26.8% of total cells), as identified by Hoechst staining, compared with normal glucose culture (Figure 3(a)).
The inhibitory effect of LB extract and taurine on high-glucose-induced apoptosis was demonstrated in
characteristic morphological staining (Figure 3(b)). Treatment with LB extract (0.1, 0.5, and 0.75 mg/mL)
12
dose dependently decreased the number of apoptotic cells by 18.3, 15.0, and 8.7% of total cells,
respectively, compared to the high-glucose control, reaching values comparable to those in the control
cultures (5.2% of total cells) (Figure 3(a)). Taurine (0.001, 0.1, and 1 mM) dose dependently decreased the
number of apoptotic cells, by 14.0, 12.0, and 8.6% of total cells, respectively, compared to the high-glucose
control, approaching values in the control cultures (5.2% of total cells) (Figure 3(a)). The number of
apoptotic cells as identified by Hoechst staining in high-glucose condition was similarly decreased by the
positive controls RG (9.4%) and PG (7.6%).
To further determine whether LB extract and taurine decreased apoptosis in high-glucose-induced ARPE19 cells, apoptosis was measured as Annexin V binding to positive cells and quantified by flow cytometry, as
Annexin V binds specifically to PS, allowing the discrimination between viable and apoptotic cells [38].
Representative dotplots of control and treated high-glucose-induced ARPE-19 cells stained with Annexin V
and PI used for quantitation of apoptosis are shown in Figure 4(b). LB extract (0.1, 0.5, and 0.75 mg/mL)
dose dependently decreased the number of Annexin V positive cells (14.8, 10.2, and 6.4% of the control)
(Figure 4(a)). Taurine dose dependently decreased the number of Annexin V-positive cells (14.8, 9.3, and
6.0% of the control) (Figure 4(a)). The number of apoptotic cells in high-glucose culture was decreased by
adding the positive controls, RG (by 10.0%) and PG (6.1%). The osmotic control did not enhance apoptotic
cell death, excluding the involvement of osmotic effects of high-glucose concentrations.
3.4. Effect of Taurine and LB Extract on Caspase-3 Protein Expression in High-Glucose-Treated ARPE-19
Cells
To explore the mechanisms of the anti-apoptotic effect of LB extract, protein levels of active caspase-3
were examined by western blot analysis. LB extract (0.1, 0.5, and 0.75 mg/mL) dose dependently
downregulated caspase-3 protein expression (by 6.6-, 4.7-, and 2.7-fold, resp.) (Figure 5(a)).
Taurine (0.001, 0.1, and 1 mM) dose dependently downregulated caspase-3 protein expression (by 7.0-,
5.2-, and 3.3-fold, resp.) (Figure 5(b)).
The protein levels of caspase-3 in high-glucose-treated cells were decreased by adding the positive
controls, RG (4.4-fold) and PG (4.3-fold). The osmotic control did not enhance active caspase-3 protein level,
excluding the involvement of osmotic effects of high-glucose concentrations.
3.5. Effect of Taurine and LB Extract on Caspase-3 Activity in High-Glucose-Induced ARPE-19 Cells
To confirm the findings of the downregulating effect of LB extract and taurine on apoptosis, activated
caspase-3 in apoptotic cells was determined by fluorometric enzyme assay. LB extract (0.1, 0.5, and 0.75
mg/mL) dose dependently downregulated caspase-3 activity (by 5.0-, 4.2-, and 3.9-fold, resp.) (Figure
6).Taurine (0.001, 0.1, and 1 mM) dose dependently downregulated caspase-3 activity (by 5.7-, 4.2-, and
3.1-fold, resp.) (Figure 6).
The activated caspase-3 levels in high-glucose condition were reversed by adding the positive controls, RG
(2.8-fold) and PG (3.1-fold). The increased osmotic control did not enhance active caspase-3 activity,
excluding the involvement of osmotic effects of high-glucose concentrations.
4. Discussion
Diabetic retinopathy (DR) is a preventable microvascular diabetic complication, and hyperglycemia is
considered a major factor in its development [39]. Although various hyperglycemia-induced metabolic
abnormalities are implicated in DR [40], it has been difficult to pinpoint the exact pathogenic mechanism,
thus making the rationale for a therapeutic target difficult. The results of numerous studies demonstrate
that apoptosis is a critical part of the pathology of DR [4, 6]. Apoptotic cell death in retinal regions is a likely
stimulus for the increased expression of molecules that enhance the breakdown of the blood retinal barrier
(BRB) and lead to vascular proliferation [41]. Indeed, high-glucose-induced apoptotic episodes have been
demonstrated by retinal abnormalities, potential visual changes, and the onset of the first vascular change
[42].
RPE is essential for neuroretina survival and, consequently, for visual function [43]. In response to damage
caused by hyperglycemic condition, RPE cells migrate and proliferate, leading to a breakdown in adhesion
between the RPE and the choroidal capillaries, followed by BRB breakdown, compromising blood flow
within the RPE layer and leading to eventual retinal edema [37]. In addition, studies have shown that
abnormalities in both the structural and secretory functions of RPE cells, followed by photoreceptor
apoptosis are found in DR [43, 44].
An objective of the current study was to examine an extract of Goji berry and its major active component
13
on protection of retinal epithelial cell against glucose-induced cytotoxicity as a model of diabetic
retinopathy. Diabetes results in various metabolic and biochemical abnormalities in the retina, including
increased oxidative stress, which has been shown to induce the expression of the proapoptotic molecules
leading to apoptosis. Distinct members of the caspase family are involved in both the initiation and
execution phases of apoptosis [45]. Among them, caspase-3 is the “executioner” caspase known to play an
important role in the proteolytic cascade during apoptosis [46]. Moreover, the detection of activated
caspase-3 is a very reliable tool to identify cells destined to die by apoptosis [47].
Our previous work has established that Gogi berry and its taurine component activate PPAR-γ [29]. PPAR-γ
is heterogeneously expressed in the mammalian eye, prominently present in the retinal pigmented
epithelium, photoreceptor outer segments, and choriocapillaris [48]. A recent study has shown that retinal
expression of PPAR-γ was suppressed in experimental models of diabetes and in endothelial cells treated
with high glucose [49]. Moreover, recent studies have suggested that PPAR-γ ligands, including 15d-PGJ2
(PG) and rosiglitazone (RG), control apoptosis, contributing to tissue protection [50, 51]. Moreover, a screen
of FDA-approved compounds identified RG as a novel anti-apoptotic agent in retinal cells both in vivo and in
vitro [52]. Indeed, one recent study has shown that RG protects oxidative stress-induced apoptosis through
upregulation of Bcl-2 and modulation of caspase-3 activation [17].
We have investigated the potential of Lycium barbarum (LB) as a natural medicine for management of
diabetic retinopathy. LB is a traditional Chinese medicine used for centuries in the east and is believed to be
beneficial for eye-related pathology [53]. Different biological activities of LB have been demonstrated,
including antiaging and cytoprotection [54]. A recent study has shown that the aqueous extract of LB
exhibits neuroprotective effects against β-amyloid peptide-induced apoptosis in cultured neurons by
attenuating the caspase-3-like activity [55]. Moreover, it has been suggested that LB polysaccharides (LBPs)
effectively protected the retina from neuronal death and apoptosis by inhibiting proapoptotic signaling
pathways, such as c-Jun N-terminal protein kinase (JNK), dsRNA-dependent protein kinase (PKR), and
caspase-3 activity in retinal ischemia/reperfusion injury, confirming a neuroprotective role in ocular diseases
[56]. In addition, the study showed anti-apoptotic activity of LBP in cultured seminiferous epithelium against
hyperthermia-induced damage through the inhibition of superoxide-induced cyt c [57].
In parallel with the studies on LB extract, we have investigated the effect of taurine on apoptotic
cytotoxicity pathways in ARPE-19 cells. Taurine is one of the major components in LB present in retina in
abundance, where it is essential for sustaining retinal structure and function [25]. Various studies have
shown that plasma and tissue levels of taurine are reduced in diabetes [58–60]. Indeed, studies have shown
the beneficial effect of taurine supplementation in preventing or ameliorating hyperglycemia-induced
retinal defects [58, 59]. Moreover, recent studies have shown that diabetes or high-glucose-induced retinal
glial cell apoptosis is inhibited by taurine, exhibiting effective prevention against DR [61]. Anti-apoptotic
action of taurine has also been shown to occur by suppressing the Ca2+-dependent mitochondrial
permeability transition (mPT) to prevent mitochondrial dysfunction and block activation of the cyt
c/caspase-3 apoptotic pathway in rat retinal ganglion cells [62]. In addition, taurine exerts neuroprotective
effects through an anti-apoptotic effect by increasing Bcl-2 levels, with a decrease in Bax and caspase-3
levels [15].
In previous work which formed the background leading to the present studies, we determined that LB
extract and pure taurine, a major component in the LB extract, activated PPAR-γ by luciferase reporter gene
analysis and by mRNA and western blotting measurement in human retinal pigment epithelial cells. At the
same time, both LB extract and pure taurine inhibited a variety of PPAR-γ-dependent downstream effectors
in the retinal cells [29]. In the present study, we hypothesised that taurine and the LB extract may have a
modulating effect on high-glucose-induced apoptosis through PPAR-γ-mediated caspase-3 pathway,
responsible for their effects in DR. In order to test this hypothesis, we first investigated the effect of taurine
and LB extract on modulating cell viability and therefore apoptosis in high-glucose-treated ARPE-19 cells.
Our results demonstrated that a methanol extract of LB dose dependently overcame the decreased cell
viability in high-glucose-treated ARPE-19 cells (Figure 2). Taurine had a similar effect on overcoming
decreased cell viability (Figure 2). The cytoprotective effect of taurine was associated with the attenuation
of high-glucose-induced apoptosis, which was shown by characteristic morphological staining (Figure 3(b))
and Annexin V/PI double staining (Figure 4(b)), and a dose dependent decrease in the number of apoptotic
cells (Figures 3(a) and 4(a)). Moreover, the results have shown that taurine and the LB extract dose14
dependently downregulated caspase-3 protein expression (Figures 5(a) and 5(b)) and inhibited the
enzymatic activity of caspase-3 (Figure 6). Therefore, the cytoprotective effect of LB extract parallels the
profound suppression of high-glucose-induced apoptosis at the site of caspase-3 regulation. The effects of
taurine closely mimicked the effects of the methanolic LB extract, since they occurred at concentrations
0.001–1.00 mM which we showed previously [29] were present in the range of methanolic extract used in
the treatments (0.1 to 0.75 mg/mL). However, we cannot exclude the possibility that other components
may also contribute to the cytoprotective effects of LB.
In summary, this study has demonstrated for the first time that the traditional Chinese medicine Lycium
barbarum is cytoprotective against high-glucose cytotoxicity in retinal pigment epithelial cells, at least in
part by regulating apoptosis as a result of caspase-3 modulation. This may occur through the initial PPAR-γ
activation found in previous studies [29]. The effects of the extract are closely mimicked by taurine at
concentrations present in the extracts. This pathway and demonstration of its major active component
provide a rationale for the therapeutic use of taurine and the valuable medicinal herb LB for the prevention
of DR. However, further investigation into their specific mechanisms is warranted to gather proof of efficacy
and safety of taurine and LB for protection against DR in various preclinical and clinical settings.
Содержание Полифенольных, антиоксидантным и антимикробным деятельности Lycium
barbarum Л. и Lycium chinense Mill. Оставляет.
Данное исследование было проведено для оценки in vitro антиоксидантной и антимикробной
деятельности и содержание полифенольных Lycium barbarum L. и L. chinense Mill. оставляет.
Различные оставьте экстракты содержат важные суммы флавоноидов (43.73 ± 1,43, а 61.65 ± 0,95 мг/г,
соответственно) и показал соответствующие антиоксидантной активностью, о чем свидетельствует
цитирует методы. Качественный и количественный анализ целевых фенольных соединений были
получены с помощью ВЭЖХ-УФ-мс метод. Рутин был доминирующий флавоноид в обоих
проанализированных видов, наибольшее количество было зарегистрировано для L. chinense.
Значительное количество хлорогеновой кислоты определяли в L. chinense И Л. barbarum экстракты,
находясь более чем в два раза выше в L. chinense, чем в л. barbarum. Гентизиновая и кофейной кислот
были выявлены только в л. barbarum, в то время как кемпферол была обнаружена только в L.
chinense. Антиоксидантную активность оценивали по ДФПГ, TEAC, гемоглобин аскорбат пероксидазы
активность ингибирования (HAPX) и ингибирования перекисного окисления, катализируемые
цитохромом c анализов выявление лучшего антиоксидантной активности L. chinense экстракт.
Результаты, полученные в антимикробной тесты показали, что L. chinense экстракт был более
активным, чем л. barbarum в отношении грамположительных и грамотрицательных штаммов
бактерий. Эти результаты предполагают, что эти виды являются ценными источниками флавоноидов с
соответствующими антиоксидантным и антимикробным деятельности.
Molecules. 2014 Jul 10;19(7):10056-73. doi: 10.3390/molecules190710056.
Polyphenolic Content, Antioxidant and Antimicrobial Activities of Lycium barbarum L. and Lycium
chinense Mill. Leaves.
Mocan A1, Vlase L2, Vodnar DC3, Bischin C4, Hanganu D5, Gheldiu AM6, Oprean R7, Silaghi-Dumitrescu
R8, Crișan G9.
Abstract
This study was performed to evaluate the in vitro antioxidant and antimicrobial activities and the
polyphenolic content of Lycium barbarum L. and L. chinense Mill. leaves. The different leave extracts contain
important amounts of flavonoids (43.73 ± 1.43 and 61.65 ± 0.95 mg/g, respectively) and showed relevant
antioxidant activity, as witnessed by the quoted methods. Qualitative and quantitative analyses of target
phenolic compounds were achieved using a HPLC-UV-MS method. Rutin was the dominant flavonoid in both
analysed species, the highest amount being registered for L. chinense. An important amount of chlorogenic
acid was determined in L. chinense and L. barbarum extracts, being more than twice as high in L. chinense
than in L. barbarum. Gentisic and caffeic acids were identified only in L. barbarum, whereas kaempferol was
only detected in L. chinense. The antioxidant activity was evaluated by DPPH, TEAC, hemoglobin ascorbate
15
peroxidase activity inhibition (HAPX) and inhibition of lipid peroxidation catalyzed by cytochrome c assays
revealing a better antioxidant activity for the L. chinense extract. Results obtained in the antimicrobial tests
revealed that L. chinense extract was more active than L. barbarum against both Gram-positive and Gramnegative bacterial strains. The results suggest that these species are valuable sources of flavonoids with
relevant antioxidant and antimicrobial activities.
Сырой выписки из Lycium barbarum Подавить SREBP-1c выражение и предотвратить диета
вызванных жировой дистрофии печени путем активации AMPK.
Lycium barbarum полисахарида (LBP) хорошо известен в традиционной китайской травяной
медицины, которые, благотворно влияет. Предыдущие исследования сообщали, что LBP снижение
уровня глюкозы в крови и липидов сыворотки крови. Тем не менее, базовый LBP-регулирующие
механизмы остаются во многом неизвестными. Основной целью данного исследования было
выяснить, насколько LBP предотвратить ожирение печени путем активации аденозинмонофосфатактивируемой протеин киназы (AMPK) и подавления стерина нормативно-element-binding protein-1С
(SREBP-1c). Самцов мышей линии C57BL/6J мышей кормили с низким содержанием жиров, высоким
содержанием жиров, или 100 мг/кг LBP-лечение диета в течение 24 недель. HepG2 клетки были
обработаны LBP в присутствии пальмитиновой кислоты. В нашем исследовании, LBP можете
улучшения композиции тела и липидного обмена профилей с высоким содержанием жиров кормили
мышей. Oil Red O окрашивание in vivo и in vitro показали, что LBP печени значительно снижается
внутриклеточное накопление триглицеридов. H&E окрашивание также показал, что в LBP можно
ослабить стеатоз печени. Печеночный профили экспрессии генов показал, что LBP можете
активировать фосфорилирования AMPK, подавить ядерную экспрессию SREBP-1c, и уменьшение
белка и экспрессии мРНК lipogenic генов in vivo или in vitro. Кроме того, LBP значительно повышен
отцепов белка-1 (UCP1) и пероксисом пролифератор-активирующие рецепторы-γ коактиватор-1α
(PGC-1α) выражение бурой жировой ткани. В резюме, LBP обладает потенциалом для романа лечения
в предотвращении диета вызванных жировой дистрофии печени.
На модели мышей с высоким содержанием жира диета вызванных жировой дистрофии печени
считалась хорошей моделью для изучения метаболического синдрома [16, 17]. В нашем
исследовании, HFD-кормили мышей, очевидно, были увеличены тела и печени, веса, концентрации в
сыворотке крови тг, Даг, ТК, ХС ЛПНП, НЕФА, AST и ALT, и печени концентрации тг и Даг. Наоборот, LBP
значительно снизилась тела и веса печени, а также в сыворотке и в печени концентрации липидов.
LBP также ослабляется развитие HFD-индуцированной жировой дистрофии печени, который
оценивает гистохимический анализ. Эти данные продемонстрировали, что LBP обладает
биологической активности для регулирования липидного обмена и развитию жировой дистрофии
печени печени.
Хотя молекулярный механизм, вызывающий развитие жировой дистрофии печени в патогенезе
неалкогольной жировой болезни печени (НАЖБП) представляет собой сложный процесс, в животных
моделях было показано, что модулирующее важных ферментов, таких как асс и ФАС, для синтеза
жирных кислот в печени может быть ключевым для лечения НАЖБП [18-20]. Недавние исследования,
у людей и грызунов показали, что увеличение de novo печеночный липогенез играет ключевую роль в
HFD-индуцированной чрезмерное печени накопление жира [21, 22]. В in vivo и in vitro эксперимент
показал, гиперэкспрессия HFD-индуцированной акк и ФАС была существенно подавлена LBP.
Печеночная экспрессию SREBP-1c, который играет важную роль в жировой дистрофии печени,
отвечает за этих генов в печени [20, 23-25] и влияет на накопление липидов, индуцированного
высоким содержанием жира диета [26, 27]. Наши исследования показали, что HFD-ФРС или
пальмитат-предочистки печени мышей стимулирует экспрессию SREBP-1c на белок и мРНК уровней in
vivo и in vitro. Однако, SREBP-1c регулируется несколькими факторами, в том числе инсулина [28],
AMPK [10, 28, 29], и х-рецепторам печени (LXR) [20, 29]. Показано, что AMPK активаторов, в том числе
и Альфа-липоевая кислота [30] и метформина [31], ингибируют SREBP-1c выражение и предотвратить
развитие жировой дистрофии печени. Наши результаты подтверждают такой механизм, показывая,
что подавление SREBP-1c выражение LBP опосредуется через стимуляцию активности AMPK. Взятые
вместе, LBP регулирует печеночных генов, ответственных за de novo синтез жирных кислот через
модуляцию AMPK/SREBP-1c пути и уменьшает HFD-индуцированной жировая дистрофия печени.
16
CPT-1α является основным ферментом, который катализирует жирные кислоты β-окисления [32], в
то время как CD36 способствует сочетание липидов хранения и липогенеза [23, 33]. HFDиндуцированной жировой дистрофии печени усугубляется жирные кислоты β-окисление системы и
нарушение баланса липидного обмена [34]. Наши исследования показали, что в печени β-окисление,
действительно свелась в HFD группы. В отличие от лечения LBP увеличилось CPT-1α уровень мРНК и
снизился CD36 уровня мРНК. Эти результаты позволяют предположить, что благоприятные эффекты
LBP в лечении жировой дистрофии печени может быть отчасти из-за улучшения жирные кислоты βокисление в печени.
Белой жировой ткани (WAT), увеличивает производство и выпуск жирных кислот и, в свою очередь,
приводит к жировой дистрофии печени [35]. В отличие от Ват, бурой жировой ткани (BAT),
существенный компонент расхода энергии, тратит энергии на производство тепла через отцепление
белка-1 (UCP-1) и пероксисом пролифератор-активирующие рецепторы-γ коактиватор-1α (PGC-1α) в
митохондриях [36]. Это изменение HFD-индуцированное подавление ОГП-1 и PGC-1α в бурых
адипоцитов вызывает морфологические и метаболические преобразования в белых адипоцитов [35,
37, 38]. Как и ожидалось, LBP значительно вспять HFD-индуцированное подавление ОГП-1 и PGC-1α из
бурой жировой ткани. Поэтому, вполне возможно, что LBP активации или подъемные выражение
ОГП-1 и PGC-1α будет иметь решающее влияние на увеличение расхода энергии, в конечном счете,
предотвращения жировой инфильтрации печени, что, в свою очередь, защищает функцию печени.
В заключение, наши нынешние результаты, впервые продемонстрировать, что LBP улучшает HFDиндуцированной жировой дистрофии печени in vivo и in vitro, модуляция, которая печеночной
AMPK/SREBP-1c пути играет центральную роль. Наша Находка может обеспечить лучшее понимание
LBP и связанных с ними химических веществ и лекарственных трав в лечении заболеваний печени,
особенно неалкогольной жировой болезни печени.
Biomed Res Int. 2014;2014:196198. doi: 10.1155/2014/196198. Epub 2014 Jun 10.
Crude Extracts from Lycium barbarum Suppress SREBP-1c Expression and Prevent Diet-Induced Fatty
Liver through AMPK Activation.
Li W1, Li Y1, Wang Q1, Yang Y2.
Lycium barbarum polysaccharide (LBP) is well known in traditional Chinese herbal medicine that, has
beneficial effects. Previous study reported that LBP reduced blood glucose and serum lipids. However, the
underlying LBP-regulating mechanisms remain largely unknown. The main purpose of this study was to
investigate whether LBP prevented fatty liver through activation of adenosine monophosphate-activated
protein kinase (AMPK) and suppression of sterol regulatory element-binding protein-1c (SREBP-1c). Male
C57BL/6J mice were fed a low-fat diet, high-fat diet, or 100 mg/kg LBP-treatment diet for 24 weeks. HepG2
cells were treated with LBP in the presence of palmitic acid. In our study, LBP can improve body
compositions and lipid metabolic profiles in high-fat diet-fed mice. Oil Red O staining in vivo and in vitro
showed that LBP significantly reduced hepatic intracellular triacylglycerol accumulation. H&E staining also
showed that LBP can attenuate liver steatosis. Hepatic genes expression profiles demonstrated that LBP can
activate the phosphorylation of AMPK, suppress nuclear expression of SREBP-1c, and decrease protein and
mRNA expression of lipogenic genes in vivo or in vitro. Moreover, LBP significantly elevated uncoupling
protein-1 (UCP1) and peroxisome proliferator-activated receptor-γ coactivator-1α (PGC-1α) expression of
brown adipose tissue. In summary, LBP possesses a potential novel treatment in preventing diet-induced
fatty liver.
Lycium barbarum полисахариды терапевтически улучшения функции печени в неалкогольного
стеатогепатита у крыс и клеточный жировой гепатоз модель
Это исследование с целью изучить возможные терапевтические эффекты и активных компонентов
Lycium barbarum полисахариды (LBP) on a high fat diet-induced Нэш крысиной модели. Мы
индуцированных Нэш в крысиной модели за счет добровольных кормление с высоким содержанием
жира диета ad libitum в течение 8 недель. После 8 недель, 1 мг/кг LBP принимал перорально в
течение еще 4 недель с высоким содержанием жиров. Когда по сравнению с NASH крыс, получавших
в течение 12 недель, терапевтический LBP лечения 4 недели в течение 12 недель Нэш индукции
показал, мелиоративное влияние на: (1) увеличение тела и мокрого веса печени; (2) сопротивление
инсулина и глюкозы метаболические нарушения; (3) повышенный уровень сывороточных
17
аминотрансфераз; (4) накопление жира в печени и увеличение содержания в сыворотке крови
свободных жирных кислот (FFA) уровне; (5) фиброз печени; (6) печеночная окислительного стресса;
(7) печени воспалительной реакции; и (8) печени апоптоз. Эти улучшения были частично посредством
модуляции фактора транскрипции NF-κB, MAPK пути и autophagic процесса. В кислоты пальмитатиндуцированной крыса стеатоз гепатоцитов ячеечная модель, мы также показали, что l-арабинозы и
β-каротин частично учтены положительные эффекты LBP на гепатоциты. В заключение LBP
обладающего множеством гепато-защитные свойства, которые делают его мощным дополнительного
терапевтического агента против Нэша в будущих клинических испытаниях.
Неалкогольная жировая болезнь печени (НЖБП) является одним из наиболее распространенных
заболеваний печени в мире, особенно в богатых районах. Это не только связано с другими
нарушениями обмена веществ (например. диабет типа 2), но оно также способствует поздней стадии
заболеваний печени, включая цирроз печени и гепатоцеллюлярную карциному (ГЦК)1. При
воспалительных и фиброзных ответы активируется в печени НАЖБП развивается до неалкогольного
стеатогепатита (НАСГ), который также может вызывать тяжелые клеточного окислительного стресса,
некроза и апоптоза2. На сегодняшний день, подробная патологические механизмы развития Нэш попрежнему плохо понимал. В последнее время, “несколько параллель-хит” теория была предложена в
котором dysregulated липидного обмена и инсулинорезистентность являются первым ударом по
печени, а затем “второй-хит” или “multi-хитов”, таких как оксидативный стресс, воспаления, апоптоза
и фиброза3. В настоящее время существует две основных стратегии лечения НАЖБП/НАСГ: (1)
изменение образа жизни (в том числе снижение веса, изменение питания и физических упражнений)
и (2) фармацевтической терапии. Однако, успешное управление основано на соответствующую
комбинацию этих двух методов в зависимости от личных вариации конкретного пациента4.
В течение последних десятилетий, применяя натуральные продукты для лечения Нэш получил
широкий резонанс, поскольку некоторые из них показывают эффективные результаты
контролируемых побочных эффектов, в том числе кофе5, чеснок6,7зеленый чай8расторопши9 и
ресвератрол10. Полисахаридная часть из дерезы (Lycium barbarum полисахариды, LBP) - это новая
лекарственная травяная производной, который доложил обладают положительными эффектами в
питательный печени и поддержания здоровья глаз11. Он также играет защитную роль в гепатомы
линии клеток рака12 и нейронная система13. Недавно, мы сообщали, что LBP охраняемых грызуна из
печени четыреххлористым углеродом, индуцированного острого повреждения печени14 и high-fat
diet-induced Нэш15. Хотя мы показали, что совместное введение с LBP явно ослабленной печени
стеатоз, фиброз, окислительный стресс, воспаление и апоптоз в нашом крыс, мы еще не знаем (1) не
является ли LBP мог бы сыграть терапевтическую роль против развития NASH; и (2) каковы удельной
эффективной мономеров, которые учитывают печеночной благотворное влияние LBP15? В текущем
исследовании мы сосредоточились в основном на терапевтические эффекты и механизмы LBP на уже
установленном Нэш крысиной модели. Кроме того, мы также применили к in vitro жировой гепатоз
ячеечная модель в нормальном крыса гепатоцитов линии BRL-3A и изучалось возможное защитное
действие двух LBP компоненты, такие как l-арабинозы и β-каротин.
Методы
Реагенты и антитела
Все клеточные культуры расходные материалы и реагенты были приобретены у либо Corning
Incorporated, Corning, NY) или Gibco (Carlsbad, CA). Антитела против фосфорилированного SMAD2 в
Ser467, общее SMAD2, общее SMAD4, и β-актина были куплены от Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz,
CA). Фосфорилированные SMAD4 в Thr277 антител был приобретен у Abnova (Тайбэй, Тайвань).
Резистина антитело было заказать из Abcam (Кембридж, Великобритания). Антитела nitrotyrosine,
фосфорилированные IRS-1 в Ser307, общее IRS-1, фосфорилированные GSK3α на Ser21, общее GSK3α,
фосфорилированные p38 MAPK на Thr180/Tyr182, общее p38 MAPK, фосфорилированные JNK в
Thr183/Tyr185, общее JNK, фосфорилированного ERK1/2 в Thr202/Tyr204, общее ERK1/2, IκBα,
расщепляется каспазой-3, цитохром с, р62, beclin-1, Atg5, фосфорилированные mTOR в Ser2448, и
общее mTOR были приобретены от клеточной сигнализации (Beverly, MA). Synaptophysin антител был
18
куплен от DAKO (Glostrup, Дания).
Эксперименты на животных
Здоровых взрослых самок Sprague-Dawley (SD) у крыс с массой тела в диапазоне от 180-200 г,
полученных из лабораторных животных на единицу (Лау), The University of Hong Kong. Крысы были
сохранены и уход в соответствии с требованиями университета Гонконга и Национального института
здоровья руководящих принципов. Все экспериментальные процедуры были проведены согласно
протоколам, утвержденным комитетом использования животных для научных исследований и
преподавания в университете Гонконга. Лабораторного животного единица гонконгский университет
полностью аккредитован Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care
International (AAALAC International).
Животные были разделены на шесть групп (n = 6 в каждой группе), а именно: (1) контрольная
группа (крыс кормили очередная мышиная диета и водопроводной воде в течение 12 недель); (2)
автомобиль-LBP группы (1 мг/кг LBP в 1 × PBS; устные желудочный зонд для кормления, один раз в
сутки в течение всего экспериментального Продолжительность); (3) транспортного средства-лечебные
LBP группы (1 мг/кг LBP в 1 × PBS; устные желудочный зонд для кормления, один раз в день из 9 ой
недели до 12ой неделю); (4) Нэш группы (крыс кормили высоким содержанием жиров в течение 12
недель); (5) Нэш + LBP группы (высокое содержание жира в рацион кормления с 1 мг/кг LBP в 1 × PBS;
устные желудочный зонд для кормления, один раз в сутки в течение всего экспериментального
Продолжительность); и (6), Нэш + терапевтический LBP группы (высокое содержание жира в рацион
кормления с 1 мг/кг LBP в 1 × PBS; устные желудочный зонд для кормления, один раз в день из 9 ой
недели до 12ой неделю). Весь экспериментальный Продолжительность 12 недель. Открытая биопсия
печени была выполнена на 8ой неделю под внутрибрюшинного введения анестезии (Кетамин и
Xylazine). Развитие НАСГ у крыс, включая рецепт и подготовка протоколов диеты, была осуществлена
на основании ранее описанных добровольное кормление НАЖБП животной модели15,16. Диета
состоит из 9,3 г-Айн-93MX (Dyets регистрации, Bethlehem, PA), 2,6 г-Айн-93VX (Dyets), 0,5 г холина
bitatrate (Dyets), 1,1 г DL-methione (био-serv, Frenchtown, NJ), 57.5 г lactalbulmine гидролизат (био-serv),
117.5 г декстроза (Dyets), 36.6 мл рыбьего жира (Sigma)и 4,5 г суспендирующий агент K (био-serv) в
расчете на 1000 мл объем. Регулярные чау для крысы (PicoLab® грызунов диета 20) был приобретен у
LabDiet (LabDiet, Брентвуд, MO). Калории регулярно чау были предоставлены на 25% из белка, 13% из
жиров, и 62% из углеводов, а калорий, высокое содержание жира в диете были представлены на 35%
из белка, 30% жира и 35% - из углеводов. Выбор LBP-доза на основе наших предыдущих
исследованиях на острые и хронические заболевания печени моделей14,15. После двенадцати
недель, крысы были убиты передозировки наркоза (150 мг/кг pentobarbital, внутрибрюшинное
введение) согласно протоколам, утвержденным комитетом использования животных для научных
исследований и преподавания в университете Гонконга после 12 ч голодания. Крови и печени были
взяты образцы для дальнейшего анализа.
Переработка донорской крови и образцов тканей
Сыворотки собирали путем центрифугирования из образца цельной крови на 1000 × g в течение 10
мин при 4°C и хранят при -80°C. образцы ткани печени фиксировали в 10% - фосфат-забуференном
растворе формалина, обработанные для гистологии и внедренные в парафиновые блоки. Пятьмикрометр ткани, срезы и окрашивали гематоксилином и эозином (H&E), Sirius red и synaptophysin
(DAKO, Дания) для гистологического анализа с использованием LEICA Qwin Image Analyser (Leica
Microsystems Ltd., Милтон Кейнс, Великобритания). В НАЖБП балл активности (NAS) каждой группы
был рассчитан, как описано ранее17.
Сыворотке крови АЛТ и АСТ анализа
Для оценки поражения печени при ферментативной уровень в сыворотке, АЛТ и АСТ уровни были
измерены с помощью ALT (SGPT) и АСТ (SGOT) и реагентов (наборов) (Teco diagnostics, Anaheim, CA) в
соответствии с инструкциями производителя.
Свободные жирные кислоты (FFA) анализа
Для изучения влияния LBP на метаболизм липидов в сыворотке FFA на каждом уровне крыс
измеряли с помощью Cayman свободных жирных кислот assay kit (Cayman chemical, Ann Arbor, MI), а
19
окончательные результаты были выражены в виде мкм в сыворотке крови.
Измерение мда уровне
Уровень конечного продукта перекисного окисления липидов (малонового диальдегида, мда) в
ткани печени образцов были определены с помощью Bioxytech пол-586™ kit (Oxis исследования,
Portland, or). Продукт реакции регистрировали спектрофотометрически при 586 нм. Стандартные
кривые были построены с помощью 1,1,3,3-tetraethoxypropane в качестве стандарта. Мда уровни
были нормализованы с соответствующего белка суммы определяется Bio-Rad Protein Assay Kit (BioRad, Hercules, CA) и выражали в процентах от контроля уровня.
Инсулин-толерантный тест (ИТТ) и глюкозо-толерантный тест (ГТТ)
Измерения ITT и ГТТ проводили, как описано ранее18 с изменениями в соответствии с
Вандербильта рекомендации по оценке гомеостаза глюкозы19. Кратко, после 12-недельного НАЖБП
индукции, крысы были помещены в чистые клетки при голодании государства, но с подачей воды в
течение 6 часов. Затем у крыс, подвергнутых ITT или ГТТ анализы были внутрибрюшинно (В / Б.)
инъекции рекомбинантного инсулина (фиксированная болюс 0,17 ме, R&D systems, Minneapolis, MN)
или D-глюкозы (фиксированная болюс 350 мг, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), соответственно. Мы
используем фиксированный болюсного инсулина или глюкозы, потому что мышечной массы тела
(например. мышцы, печень, мозг) был основной сайт утилизацию глюкозы, даже если ожирение
вызвано в основном за счет увеличения жировой массы. Администрирование глюкозы на единицу
веса тела основе будет повышение глюкозы в дозе непропорционально в отношении основных
глюкоз-использовать ткани19. 0, 20, 40, 60, 80 и 100 мин после инсулина/глюкозы для инъекций, хвост
забор крови из вены каждой крысы были протестированы на уровень глюкозы непосредственно с
помощью ACCU-CHEK blood glucose monitoring system (Roche Diagnostic, Базель, Швейцария). Уровни
инсулина в сыворотке крови уровней были количественно с использованием коммерческих ИФАнаборы от антител и Иммуноферментный служб университета Гонконга (Гонконг, Китай). Базальных
концентраций глюкозы в плазме крови наблюдались также для нормализации результатов ГТТ19.
ИФА
ELISA измерений TNF-α, IL-1β, и MCP1 были выполнены с помощью соответствующих ELISA
development kits от PeproTech (PeproTech Inc., Rocky Hill, NJ) в соответствии с инструкциями по
эксплуатации. ЦОГ-2 ИФА было проведено с комплекта от EIAab (Wuhan EIAab науки, Ухань, Китай).
TGF-β1 и α-SMA ИФА-наборы были от eBioscience (San Diego, CA) и MyBioSource (San Diego, CA),
соответственно.
Вестерн-блот анализ ткани печени экстрактов проводили, как описано6. Отношение оптической
плотности белковых продукта для внутреннего контроля (β-актин), были получены и были выражены
в виде коэффициента или в процентах от контрольных значений в цифрах.
NF-κB деятельности
Активность фактора транскрипции NF-κB p65 измеряли с NF-κB/p65 ActivELISA комплект из IMGENEX
Corporation (San Diego, CA) согласно инструкции пользователя.
Культура клеток и процедуры
Крыса гепатоцитов BRL-3A клеточной линии был поставлен банка клеток типа культуры коллекцией
китайской Академии наук в Шанхае (КНР) и культивировали в RPMI-1640 с 10% (v/v) FBS при 37°C и 5%
CO2 с помощью мобильного инкубатор. Когда клетки достигли слияния 60-70%, они были разделены
на 8 групп (n = 5), в том числе: (1) контрольная группа (с PBS, который был растворитель для LBP); (2)
жировой гепатоз группы [получавших пальмитат кислоты (PA)]; (3) транспортного средства-LBP группы
(получавших LBP); (4) жировой гепатоз + LBP группы (получавших па и LBP); (5) транспортного
средства-арабинозы группы (получавших 3 мм l-арабинозы); (6) стеатоз + арабинозы группы
(получавших па и 3 мм l-арабинозы); (7) транспортного средства-каротин группы (получавших 2 мкм
β-каротина); и (8) стеатоз + каротин группы (получавших па и 2 мкм β-каротин). Продолжительность
лечения составила 24 часов. Липидные накопления в каждой группе было обнаружено, что масло
красного O окрашивание. От подбора дозы l-арабинозы20 и β-каротин21 была основана на
предыдущих in vitro отчеты.
МТТ-теста
20
Жизнеспособность клеток оценивали по конверсии 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5diphenyltetrazolium бромида (МТТ, Sigma-Aldrich) в фиолетовый цвет продукта с помощью клеточных
митохондрий. После медикаментозного лечения, клетки из каждой группы были промыты
стерильным PBS 3 раза, а затем инкубировали с 5 мг/мл МТТ в течение 3 часов, и впоследствии,
растворенного в диметилсульфоксиде (ДМСО). Абсорбция МТТ измеряли при 570 нм.
Производство глюкозы анализа
После обработки клетки промывали стерильным PBS 3 раза, чтобы удалить глюкозы, а затем
инкубируют в течение 16 часов в производство глюкозы среднего (глюкоза и феноловый красныйбесплатный DMEM, содержащей gluconeogenic субстратов, 20 мм лактата натрия, 2 мм пирувата
натрия) в присутствии 1 нм инсулина (R&D systems) в течение последних 4 часов. Концентрацию
глюкозы измеряли с помощью коммерческого набора от Sigma. Концентрация глюкозы
нормализовался с соответствующими клеточными концентрации белка.
Количественное определение апоптотических клеток
После медикаментозного лечения, Hoechst 33342 (5 мкг/мл) и йодистый пропидий (5 мкг/мл)
добавляли в каждую лунку, чтобы не испачкать живых клеток. Результаты были выражены как
процент апоптоза (па): па = апоптотических клеток число/общее число ячейки × 100%22.
Деятельность каспазы - 3/7
Деятельность каспаз-3 и -7 от печени лизаты тканей и клеточные лизаты были измерены с
использованием Каспазы-Glo 3/7 Assay систем (Promega, Madison, WI) в соответствии с руководством
пользователя. Свечение было прочитать в люминометр Glomax (Promega) и выражены как стадо
изменения в каспазы 3/7 деятельности от контроля.
Выделения РНК и количественной ПЦР
Общей РНК из каждой крысы выделяли из печени образца или клеточных лизатов с помощью
illustra™ RNAspin mini kit (GE healthcare, Великобритания). Подготовка first-strand cDNA было
проведено в соответствии с поручением SuperScript™ First-Strand Synthesis System (Invitrogen, Calsbad,
CA). Уровни экспрессии мРНК генов-мишеней, измеряемой Takara SYBR премикс Taq количественный
ПЦР-тест системы (Takara Bio Inc, Shiga, Япония) с использованием MyiQ2 ПЦР в реальном времени
машина (Bio-Rad). Праймер последовательности и температур отжига, используемые в этих real-time
PCR реакции перечислены в Suppl. Таблица S1. Параллельное усиление глицеральдегид-3фосфатдегидрогеназы (ГАФД) был использован в качестве внутреннего контроля. Относительной
квантификации было сделано с помощью 2-ΔΔCt метод. Относительная экспрессия определенного
Гена внутреннего контроля, были получены и тогда, выраженная как процент от контрольных
значений в цифрах. Все ПЦР в режиме реального времени процедур, в том числе дизайн праймеров,
проверка ПЦР среды и методы количественной оценки проводились по MIQE руководящего23.
Статистический анализ
Данные из каждой группы были выражены, а значит, ± SEMs. Трапециевидное правило,
использовалась для определения площади под Кривой (AUC). Статистические сравнения между
группами проводились с использованием тест Крускала-Уоллиса, с последующим Dunn's post hoc тест
для выявления различий во всех группах. В p < 0,05 считалось статистически значимым (Prism 5.0,
Graphpad software, Inc., Сан-Диего, CA, США).
Результаты
Подтверждение Нэш индуцированная 8-недельного максимума-жировой рацион кормления
Чтобы убедиться в успешном создании Нэш очагов в печени крыс, биопсия печени с высоким
содержанием жиров кормили крыс была совершена в конце 8ой неделю, до начала
“терапевтического” администрация LBP. Показано, что высокое содержание жира диетой очевидно,
печеночной гистопатологические изменения в печени, жирового накопления, очаги воспалительных
клеток и некроз (Доп.. рисунки 1А и 1Б). NAS оценка печени с высоким содержанием жиров кормили
крыс была значительно выше, чем у обычных крыс, получавших с регулярной животных чау кормить
(Доп. рис. 1С).
LBP процедуры мелиорированных крысы ожирение и инсулинорезистентность
Восемь недель, высокое потребление жиров и вызывала достоверное увеличение массы тела крыс,
когда по сравнению с крысами контрольной группы, которую кормили обычной крысы диета (365.0 ±
21
9,8 г, против 326.3 ± 11,6 г в 8 недель, p < 0.05). Администрация 1 мг/кг LBP значительно снижается
масса тела Нэш крыс из 3rd недели до 12ой неделю (340.2 ± 13.4 г [LBP-лечение] против 401.7 ± 10,7 г
[NASH-лечение] в 12ой неделю, p < 0.05). Для терапевтического лечения LBP, которая началась с 9ой
12ой неделю, также значительно уменьшается вес тела с высоким содержанием жиров кормили крыс
(352.1 ± 14,0 г [LBP-лечение] против 401.7 ± 10,7 г [NASH-лечение] в 12ой неделю, p < 0.05) (Рис. 1A).
Администрация LBP в обоих LBP-группах, получавших (NASH-LBP 12 недель и Нэш-LBP 9-12week) не
влияют на вес тела, когда по сравнению с крысами контрольной группы (данные не показаны).
Результаты мокрого веса печени также подтвердили против ожирения эффект LBP. Влажный вес
печени NASH крыс была значительно выше, чем у контрольных крыс (13.4 ± 0,1 г по сравнению с 11,5
± 0,3 г, p < 0.05). Оба LBP-группах, получавших снизили вес печени NASH крыс сравнимого уровня
контроля (Рисунок 1Б). Интересно, что для большинства недель, администрация LBP не влияют на
аппетит Нэш крыс. Не было никакого существенного различия в дневной прием пищи объем между
LBP-лечение Нэш крыс и Нэш крыс без LBP кроме недель с 3, 4 и 11 (Рис. 1С).
В нашом крыс, инъекции рекомбинантного инсулина обусловлено нарушениями обмен
инсулина/оформления, когда по сравнению с контролем и автомобиля-LBP крыс (Доп. рис. 2B).
Процедуры с LBP существенно повысили клиренс инсулина обесценение индуцированных Нэш (Доп.
рис. 2B). Кроме того, из результатов уровня глюкозы в крови и AUC районах, LBP процедуры
эффективного повышения резистентности к инсулину (Рис. 1E и 1F). Аналогично, после нормализации
с базального уровня глюкозы в крови, мы обнаружили, что dysregulated метаболизм глюкозы в нашом
крыс было также очевидно, что исправлено LBP администрации в обеих группах, получавших (Рис. 1G
и 1H, Доп. рисунок 2а). Для дальнейшего исследования путей, вовлеченных в улучшении инсулина и
метаболизм глюкозы, мы измерили изменение резистина и IRS-1/GSK3α путей во всех группах. Было
обнаружено, что высокое содержание жира в диете значительно возросло белка уровнем резистина и
фосфорилирования уровень GSK3α. Он также снизилась фосфорилирование IRS-1. LBP
администрации, либо совместного лечения или задержки-лечение, counter-действовал влияние
высокожировой диете, на эти пути, не влияя на общий уровень белка IRS-1 и GSK3α
LBP процедуры улучшение поражения печени
Печеночная H&E окрашивание результаты показали, что 12-недельный администрации высоким
содержанием жиров, причиненного типичные Нэш патологических фенотипов печени крыс, в том
числе большое количество липидных капель, накопление, инфильтрация воспалительных клеток и
некроз гепатоцитов (Рис. 2A). Все моменты времени в LBP лечения (с недели 1 по неделю 12)
значительно улучшилась, гистопатология печени после 12 недель, и выставлены сотовой архитектуры,
сопоставимый с тем контролем. Интересно, что лечебные LBP лечения от недели 9 на 12 неделе также
значительно улучшены тяжести отложение липидов и снижение воспалительных очагов и клеточного
некроза в печени. Не было никакой статистической разницы между NAS оценка двух групп LBP
процедуры (NASH-LBP 12 недель и Нэш-LBP 9-12week; Рис. 2C). Сириус красное окрашивание
установлено, что образование коллагена в печени Нэш крыс было значительно больше, чем у
контрольных крыс. Как лечение групп LBP эффективно снижается образование коллагена, приводя к
затуханию фиброз печени (Рисунки 2B и 2D). Последовательно, Нэш крыс выставлены высоким
уровнем АЛТ в сыворотке крови на уровне, который был значительно сокращен обеих групп LBP
лечения (Рис. 2E). Для АСТ уровне, не было никаких существенных различий среди всех групп крыс
(Рис. 2F).
LBP процедуры смягчили фиброз печени
Дальнейшее изучение молекулярных механизмов, лежащих в основе снижения печеночной фиброз
LBP, экспрессивные изменения TGF-SMAD путь был, во-первых, оценить. Белка выражение и TGF-β1 и
α-SMA был регулируются индукции Нэш (Рис. 3A и 3B). Вестерн-блот-анализа также показали, что
фосфорилирование уровень как SMAD2 и SMAD4, был увеличен в NASH group (На рис. 3В). Процедуры
с LBP, либо с NASH-LBP 12 недель или терапевтически (NASH-LBP 9-12 недель), значительно снижается
уровень фосфорилированной этих белков, не влияя на их базальных уровней. Кроме того, поскольку
формирование фиброз печени тесно связана с активацией звездчатых клеток печени (HSCs), мы затем
количественно число активированных ГСК в каждой группе, окрашивание synaptophysin, роман
маркер для активации ГСК в печени24. Количество synaptophysin-положительных в NASH группе была
22
значительно выше, чем в других пяти групп, преимущественно вокруг centrolobular вен местах
(Рисунок 3D). Обе группы LBP лечения (NASH-LBP 12 недель и Нэш-LBP 9-12 недель) снижение
количества активированных ГСК сопоставимый уровень контроля (Рис. 3E). LBP не показали
очевидное влияние на фиброзные изменения здоровых крыс, за исключением небольшого снижения
α-SMA уровнем протеина (Рисунок 3Б).
Печеночная накопление липидов и оксидативного стресса ослабляется LBP
Для исследования базовых механизмов для ослабленной печени липидов, накопление в обеих
группах LBP лечения (NASH-LBP 12 недель и Нэш-LBP 9-12 недель), экспрессивные изменения lipogenic
генов (SREBP-1c и PPARγ2) и липолитический генов (ATGL и адипонектина) были измерены. Индукция
Нэш, значительно возросли печеночной экспрессии мРНК SREBP-1c и PPARγ2, в то время как снижение
экспрессии мРНК ATGL и адипонектина, ведущих чистое увеличение в сыворотке FFA уровне (Фигуры
4A-4E). В соответствии с ослабленной жировой гепатоз в печени, влияние Нэш по липидного обмена
генов был упразднен в обеих группах LBP лечения (Фигуры 4A-4D). Таким образом, уровень в
сыворотке крови СЖК была регламентирована до здоровой крысы уровне (Рис. 4E). LBP процедуры не
влияют на крыс без Нэш развития (Фигуры 4A-4E).
Перекисного окисления липидов, индуцированного окислительного стресса являются общими
последствиями стеатоза печени и инсулинорезистентность при прогрессировании НАСГ25. Чтобы
проверить возможные антиоксидантное свойство LBP, мРНК уровень эндогенных антиоксидантных
ферментов, кот и GPx были оценены во-первых. В нашом крыс, печеночной уровень этих ферментов
была значительно вниз регулируется, показывать нарушениями обороны против печеночная и
окислительный стресс (Цифры 4F и 4G). Администрация LBP, либо вместе с или после установления
Нэш индукции, эффективно восстановлены уровни обоих антиоксидантных ферментов. Затем мы
измеряли содержание продуктов перекисного окисления липидов (печени содержание мда) и оксида
азота пути (печеночная nitrotyrosine образование) во всех группах крыс. Нэш крыс показали
повышенное содержание обоих мда и nitrotyrosine, свидетельствуя о повышенном состояние печени,
перекисного окисления липидов и окислительного стресса. Обе группы LBP лечения значительно
уменьшены или даже отменены такие высоты маркеров окислительного стресса (Цифры 4H 4I и).
Процедуры с LBP ослабленной печени, воспаления и апоптоза через NF-κB
Основные патологические расхождение между стеатоза и НАСГ является возникновение
воспаления печени. Для решения противовоспалительное действие LBP, мы выбрали три промаркеров воспаления (ФНО-α, ил-1β и ЦОГ-2) и один хемокиновых маркер (MCP-1) во всех группах
крыс для ИФА. Как и следовало ожидать, выражения этих белков были существенно повышены по
НЭШУ индукции, которые были либо отменены, либо значительно ослаблены посредством
совместного лечения или задержки обращения с LBP (Фигуры 5А-5D). Последовательно, печеночной
уровень расщепляется каспазой-3, прямой маркер апоптоза, был увеличен в NASH крыс, указывая на
возникновение печеночной апоптоза. Администраций LBP эффективно снизить его уровень (Рис. 5G).
Для дальнейшего изучения механизма, мы протестировали экспрессивные изменения внутреннего
пути апоптоза. Мы обнаружили, что при прогрессировании НАСГ увеличился уровень белка
цитохрома c и уровня мРНК про-молекулы апоптоза Bax, а меньшая в мРНК уровень антиапоптотических молекулы Bcl-2. Обе группы LBP лечения показали значительно сторно таких
последствий (Цифры 5G-5I). С фактором транскрипции NF-κB является основным регулятором как
воспалительных, так и апоптотической реакции, затем мы измерили активность его субъединицы p65
в ядерный белок. Активность Р65 Нэш в группе был достоверно выше, чем контрольной группы (Рис.
5F), с указанием активированного состояния NF-κB. Это сопровождалось низким уровнем IκBα,
цитозольной ингибитор NF-κB (Рис. 5E). Добавление LBP заметно снижается NF-κB деятельности и
восстановил уровень IκBα.
LBP процедуры усиленной аутофагии и регулируемая MAPK пути
Поскольку аутофагии является выгодным для задержки прогрессирования НАСГ7мы измеряли
несколько ключевых autophagic маркеры у всех крыс. Показано, что Нэш индукции в печени крыс дорегулируемой экспрессии autophagic маркеры, в том числе и Atg5 LC3-II, с вниз-регулирование
autophagic негативных регуляторов, в том числе фосфорилированных mTOR и p62. Влияние NASH на
beclin-1 выражение не было столь очевидным (Рис. 5J). В обеих группах LBP лечения (NASH-LBP 12
недель и Нэш-LBP 9-12 недель), клеточной аутофагии было дальше потенцируется, когда
23
сравниваются их выражения в NASH group (Рис. 5J). Автомобиль-LBP процедуры не, конечно, влияет
на autophagic маркеры в здоровых крыс.
Чтобы далее исследовать лечебные свойства LBP, мы измерили три ключевых члена (p38 MAPK, JNK
и ERK1/2) MAPK семьи. В NASH group, фосфорилирование уровни как p38 MAPK и JNK были повышены,
но затем снизилась до уровня контроля со стороны администрации LBP (Рис. 5к). Фосфорилирование
ERK1/2, напротив, вниз-регулируется Нэш индукции. Обе группы LBP лечения наблюдалось
дальнейшее снижение ее фосфорилирования на уровне, не влияя на его общий уровень (Рис. 5к).
L-арабинозы и β-каротин частично учтены для печени лечебные эффекты LBP
Для демонстрации активного мономера (- ов) счета (- ов) для печени лечебные свойства LBP против
Нэша развития, мы применили к in vitro клеточный жировой гепатоз модели с использованием натрия
пальмитат (SP) в качестве индуктора в крысиных гепатоцитов клеток линии BRL-3A26. После 24часовой инкубации было установлено, что SP очевидно, вызвано накоплением жира, снижение
жизнеспособности клеток в зависимости от дозы образом (Доп. Рис. 3.). Учитывая баланс между
очевидным и накопление жира приемлемым жизнеспособность клеток, мы выбрали 0,35 мм SP как
оптимальная доза в следующих in vitro исследования. Как показано в Рис. 6Б применение SP
значительно снижается жизнеспособность клеток от ~100% ~72%. Совместное обращение с LBP
восстановили жизнеспособность клеток, сравнимого с уровнем управления (~95%). Хотя и не столь
мощный, как LBP, лечение l-арабинозы или β-каротин также значительно восстановленные клетки
статус ~84% или ~85%, соответственно. Кроме того, инкубация с SP также причиной накопления жира
в культивируемых BRL-3A клетки, в которых было значительно ослабляется совместного лечения с LBP,
либо с l-арабинозы или β-каротин (Фигуры 6а и 6В). Эти процедуры сами по себе не влияют на
нормальные клетки (Фигуры 6а-6с).
Для дальнейшего описания полезных ролей l-арабинозы и β-каротин, мы оценивали, инсулина и
глюкозы путей метаболизма клетки. Экспозиция BRL-3A клеток SP усиленной глюконеогенеза,
который был уменьшен на LBP-или β-каротин лечения (Рис. 6D). Результаты вестерн-блот резистина и
фосфорилированных IRS-1 также подтвердил, что SP инкубации существенно индуцирует upрегуляции резистина и обесценение IRS-1 сигнализации. Добавление LBP, l-арабинозы или β-каротин
частично counter-действуют эти эффекты. Уровень общего белка IRS-1 не влияют на эти процедуры
(Рис. 6E). Кроме того, SP инкубации вызвал повышенный уровень GSK3α фосфорилирования, который
был частично уменьшен co-лечение LBP-или β-каротина, не влияя на его общий уровень белка (Рис.
6E). Эти данные показали, что SP инкубации индуцированной нарушениями инсулина и метаболизм
глюкозы в BRL-3A клеток. LBP, l-арабинозы и β-каротин, частично компенсированы такие нарушения.
Аналогичные результаты от животной модели, инкубации с SP значительно снижается экспрессия
CAT и повышение уровня ФНО-α и клеточного апоптоза. Изменения клеточных каспаз-3/7
деятельности в дальнейшем подтвердили эти выводы (Фигуры 7а-7D). LBP, l-арабинозы или β-каротин
лечения либо отменены, либо значительно противодействует эффектам SP, хотя в большинстве
случаев, LBP, показали лучшие alleviative эффектов, чем у других двух мономеров (Фигуры 7а-7D).
Обсуждение
С момента инициации и прогрессирования НАЖБП/НАСГ-это медленный и прогрессивный процесс,
с помощью соответствующего лечения, которые могут подключаться к большинству своих основных
патологических явлений (например. инсулинорезистентность, липидный осаждения, фиброза и
воспаления) и в сочетании с конкретным планом учений, теоретически должны вспять или замедлить
процесс жировой дистрофии печени почти здоровом состоянии4,27. Здесь мы показали, что LBP мог
терапевтически ослабления спектра Нэш фенотипов, от up-stream инсулин сопротивление downstream печеночной апоптоза в обеих in vivo и in vitro систем.
Инсулинорезистентность и метаболизм глюкозы обесценение находятся в большинстве
НАЖБП/НАСГ у пациентов. Она характеризуется инсулина снижают чувствительность во всем теле,
печени и жировой ткани. В печени, его, в основном, вызывает избыток жиров в питании, усиленной
доставки свободных жирных кислот к печени, уменьшается окисление жирных кислот и увеличение
de novo липогенез28,29. В этом исследовании, от ГТТ (с обеих нормированного уровня глюкозы и
инсулина в крови) и ITT показания обеих групп LBP администрации (NASH-LBP × 12 недель и после
Нэша/LBP × 4 недель) мощно повышение чувствительности к инсулину и метаболизм глюкозы в NASH
24
крыс (Рис. 1. и Доп. Рис. 2.). Терапевтический LBP лечения выставлены сопоставимых мелиоративного
эффекты как и в случае с LBP co крыс. В нашом крыс, то, помимо вышеуказанных изменений, это
сопровождается нарушениями функции печени сигнализации IRS-1 и активируется сигнализация
GSK3α, ключевых молекул, резистентности к инсулину и метаболизм глюкозы, соответственно30,31.
Кроме того, чрезмерное печени и накопление жира в сыворотке FFA повышения были значительно
ослабляется LBP процедуры. Молекулярные маркеры для жирных кислот, биосинтеза и утилизации,
также выявили изменение баланса метаболизм липидов LBP (Инжир. 2 и 4).4). Эти результаты
согласуются с нашими предыдущими выводами15 и других отчетов, показывающих благотворное
влияние LBP на жировой гепатоз32,33.
Фиброз является одной из главных особенностей жировой болезни печени. Активация печени и
следующие PI3K/Akt/FoxO1 пути способствует инициации фиброза, с хорошо изученными TGF-β/SMAD
пути34,35. Мы обнаружили, что высокое содержание жира в диете значительно усиливается
образование коллагена в печени (Рис. 2.), что сопровождалось повышенным уровнем TGF-β/SMAD
пути и ГСК активации (Рис. 3.). Когда LBP вводили вместе с или после установления Нэш, видимо,
значительно улучшил формирование печеночной коллагена путем ингибирования этих сигнальных
путей. Таким образом, LBP могут быть похожие механистического пути с другими гепато-защитные
травяные производные, такие как зеленый чай, ослабление фиброзных8.
Хорошо известно, что NF-κB является основным датчиком и регулятором окислительного стресса,
воспаления и апоптоза36,37. Активация NF-κB опирается на разложение его цитозольной ингибитор
IκBα. В текущем исследовании, high-fat диетой Нэш крыс показали увеличение активности Р65 и
способствовали деградации IκBα, указывая на активированном состоянии NF-κB, сопровождается
возникновением окислительного стресса, воспаления и апоптоза в печени (Рис. 4 и and5).5). Аналог с
наших предыдущих исследованиях с использованием чеснока, экстракт зеленого чая, и сама
LBP6,8,15, добавок LBP, либо покровительственно или терапевтически, значительно смягчили
печеночной окислительного стресса, воспалительного ответа и апоптоза при Нэш развития частично
через NF-κB торможения. Поскольку dysregulated липидного обмена могут индуцировать перекисное
окисление липидов, непосредственно ведущих к развитию окислительного стресса, воспаления и
апоптоза, полезные функции LBP на липидный обмен также может частично объяснить, ослабленный
поражения печени путем LBP лечение38.
В последние годы, полезное свойство аутофагии в НАЖБП/НАСГ развития привлек большое
внимание, поскольку она противодействует влияние апоптоза, а также гепато-защитный препарат,
лечение, как правило, усиливает активность аутофагии, как мы показали, в чесночной исследования7.
В своей недавней статье, используя ULK1 нокаутных мышей также указал, что нарушение autophagic
сигнализации существенно повлияли лечебные эффекты ресвератрола на НАЖБП мышей39. В
соответствии с этими исследованиями, наши два подхода к LBP лечение также повысить autophagic
пути деятельности (в том числе beclin 1, Atg 5 и LC3II) посредством разложения mTOR, когда по
сравнению с NASH крыса группы. Кроме того, уровень экспрессии autophagic субстрата р62 был внизрегулируется Нэш развития и дальнейшего снизился на процедуры с LBP, с указанием усиленной
аутофагии в печени из другой аспект40.
Так же как традиционная китайская медицина рецепты, LBP-это смесь нескольких мономеров, в том
числе глюкозы, арабинозы, галактозы, маннозы, ксилозы, rhamnose и/или фукозу41,42. Он также
содержит другие антиоксиданты, такие как зеаксантин dipalmitate, β-cryptoxanthin пальмитат,
зеаксантин monopalmitate, и β-каротин43,44. В предыдущих исследованиях широко изучались
полезные свойства LBP на опухоль, нейронные системы и печени. Однако ни одна из них
характеризуется эффективными компонентами LBP. В текущем исследовании, во-первых, мы
обнаружили, что l-арабинозы и β-каротин частично представлены активные функциональные
компоненты LBP липидов, инсулина и метаболизм глюкозы, окислительный стресс, воспаление и
апоптоз в кислоты пальмитат-индуцированной клеточной гепатоз модель (Цифры 6 и and7).7). Хотя
LBP показал более надежную защиту, чем l-арабинозы или β-каротин, наши текущие результаты
показали активных полезных функций его компонентов для возможного лечения заболеваний
25
печени, таких как НАЖБП и НАСГ.
Взятые вместе, наши результаты показали, мощным терапевтическим и гепато-защитный эффект
LBP в улучшении спектра Нэш индуцированной печеночной патологиями, в том числе : 1) увеличение
тела и веса печени; (2) печеночная инсулинорезистентность и метаболизм глюкозы дисфункции; (3)
повышенный уровень сывороточных аминотрансфераз; (4) накопление жира в печени и увеличение
содержания в сыворотке крови FFA уровне; (5) фиброз печени; (6) печеночная окислительного
стресса; (7) печени воспалительной реакции; и (8) печеночной апоптоза. Эти улучшения были
частично посредством модуляции фактора транскрипции NF-κB, MAPK пути и autophagic процессов.
Главное, LBP не только смягчить поражения печени при приеме внутрь вместе с индукцией Нэш, но
также терапевтически восстановлены функции печени на установленном Нэш состоянии. In vitro
исследования выставлены полезные свойства LBP частично приписываются функции из l-арабинозы и
β-каротин. Таким образом, ежедневное потребление LBP следует рассматривать как перспективный
способ предотвращения и замедления инициации и прогрессировании НАСГ.
Sci Rep. 2014 Jul 7;4:5587. doi: 10.1038/srep05587.
Lycium barbarum polysaccharides therapeutically improve hepatic functions in non-alcoholic
steatohepatitis rats and cellular steatosis model.
Xiao J1, Xing F2, Huo J2, Fung ML3, Liong EC4, Ching YP4, Xu A5, Chang RC6, So KF7, Tipoe GL6.
This study aimed to investigate the possible therapeutic effects and active components of Lycium
barbarum polysaccharides (LBP) on a high fat diet-induced NASH rat model. We induced NASH in a rat
model by voluntary oral feeding with a high-fat diet ad libitum for 8 weeks. After 8 weeks, 1 mg/kg LBP was
orally administered for another 4 weeks with a high-fat diet. When compared with NASH rats treated for 12
weeks, therapeutic LBP treatment for 4 weeks during 12 weeks of NASH induction showed ameliorative
effects on: (1) increased body and wet liver weights; (2) insulin resistance and glucose metabolic
dysfunction; (3) elevated level of serum aminotransferases; (4) fat accumulation in the liver and increased
serum free fatty acid (FFA) level; (5) hepatic fibrosis; (6) hepatic oxidative stress; (7) hepatic inflammatory
response; and (8) hepatic apoptosis. These improvements were partially through the modulation of
transcription factor NF-κB, MAPK pathways and the autophagic process. In a palmitate acid-induced rat
hepatocyte steatosis cell-based model, we also demonstrated that l-arabinose and β-carotene partially
accounted for the beneficial effects of LBP on the hepatocytes. In conclusion, LBP possesses a variety of
hepato-protective properties which make it a potent supplementary therapeutic agent against NASH in
future clinical trials.
Lycium barbarum полисахарид, ослабляет действие спиртных клеточные повреждения через
TXNIP-NLRP3 inflammasome пути.
Lycium barbarum был использован в качестве традиционной китайской медицины, чтобы питать
печень, почки и глаза. Однако глубинные механизмы его печени-защитные свойства остаются
неопределенными. В этом исследовании мы стремились выяснить, насколько thioredoxin-interacting
protein (TXNIP) и NOD-подобный рецептор 3 (NLRP3) inflammasome опосредованной затухание этанолиндуцированного поражения печени путем Lycium barbarum полисахарида (LBP). Крыса нормальных
гепатоцитов линии BRL-3А была предварительно обработана LBP до этанола инкубации. Печеночная
убытки, включая апоптоз, воспаление и окислительный стресс, было измерено. Затем ингибирование
эндогенного TXNIP выражении был достигнут с помощью его специфических мирнк для проверки его
возможной причастности к травме затухания. Мы обнаружили, что 50 мг/мл LBP предварительной
обработки значительно смягчили 24-h этанол экспозиции-индуцированного белка TXNIP, увеличение
клеточного апоптоза, секрецию воспалительных цитокинов, активацией NLRP3 inflammasome,
производства ROS, и снижение антиоксидантного фермента выражение. Молчание TXNIP подавил
активированный NLRP3 inflammasome, увеличение окислительного стресса и ухудшению апоптоза в
клетках. Дальнейшее добавление LBP не влиял на эффекты TXNIP торможения на клетки. В
заключение торможения печеночной TXNIP по LBP способствует снижению клеточного апоптоза и
окислительного стресса и NLRP3 inflammasome-опосредованного воспаления.
Int J Biol Macromol. 2014 May 22;69C:73-78. doi: 10.1016/j.ijbiomac.2014.05.034. [Epub ahead of print]
Lycium barbarum polysaccharide attenuates alcoholic cellular injury through TXNIP-NLRP3
26
inflammasome pathway.
Xiao J1, Zhu Y2, Liu Y3, Tipoe GL4, Xing F5, So KF6.
Lycium barbarum has been used as a traditional Chinese medicine to nourish liver, kidneys and the eyes.
However, the underlying mechanisms of its hepatic-protective properties remain uncertain. In this study, we
aimed to investigate whether thioredoxin-interacting protein (TXNIP) and NOD-like receptor 3 (NLRP3)
inflammasome mediated the attenuation of ethanol-induced hepatic injury by Lycium barbarum
polysaccharide (LBP). Rat normal hepatocyte line BRL-3A was pre-treated with LBP prior to ethanol
incubation. Hepatic damages, including apoptosis, inflammation, and oxidative stress, were measured. Then
the inhibition of endogenous TXNIP expression was achieved by using its specific siRNA to test its possible
involvement in the injury attenuation. We found that 50μg/ml LBP pre-treatment significantly alleviated 24h ethanol exposure-induced overexpression of TXNIP, increased cellular apoptosis, secretion of
inflammatory cytokines, activation of NLRP3 inflammasome, production of ROS, and reduced antioxidant
enzyme expression. Silence of TXNIP suppressed the activated NLRP3 inflammasome, increased oxidative
stress and worsened apoptosis in the cells. Further addition of LBP did not influence the effects of TXNIP
inhibition on the cells. In conclusion, inhibition of hepatic TXNIP by LBP contributes to the reduction of
cellular apoptosis, oxidative stress and NLRP3 inflammasome-mediated inflammation.
Эффект Lycium barbarum полисахариды на самцов крыс‫ ׳‬половой системы и сперматогенеза
апоптоз клеток воздействию малых доз ионизирующего облучения.
Ethnopharmacological актуальность: Lycium barbarum, Пасленовых уничтоженной древеснокустарниковой растительности, использовался как разновидность традиционных китайских травяных
лекарств в течение тысяч лет. Lycium barbarum полисахарида (LBP) - основной биоактивный
компонент Lycium barbarum. Целью данного исследования было изучение радиорезистентные эффект
LBP на повреждение самцов крыс репродуктивного системы и интерстициальных клеток, вызванных
низкой дозы (60)Co-γ-излучение. Материалы и методы: самец крысы были случайным образом
разделены на 7 групп и лечение с облучением и/или LBP: нормальной контрольной группой,
облучение контрольной группе 1, облучение контрольной группе 2, облучение контрольной группе 3,
LBP + облучение группы 1, LBP + облучение группы 2 и LBP + облучение группы 3. Результаты:
установлено, что спаривание функции и яичка орган коэффициент в LBP + облучение групп были
значительно выше, чем соответствующий облучение контрольных групп. LBP значительно дорегулирует экспрессию Bcl-2, а down-регуляции экспрессии Bax. И LBP также играет важную роль в
профилактике снижение митохондриального мембранного потенциала. Кроме того, LBP можете
существенно снизить интерстициальных клеток и апоптоз. Вывод: LBP имеет очевидный защитный
эффект на мужскую крыс репродуктивной функции и дисфункции сперматогенеза индуцированных
облучением.
J Ethnopharmacol. 2014 May 28;154(1):249-58. doi: 10.1016/j.jep.2014.04.013. Epub 2014 Apr 16.
The effect of Lycium barbarum polysaccharides on the male rats‫ ׳‬reproductive system and
spermatogenic cell apoptosis exposed to low-dose ionizing irradiation.
Luo Q1, Li J2, Cui X2, Yan J2, Zhao Q2, Xiang C2.
Ethnopharmacological relevance: Lycium barbarum, a Solanaceous defoliated shrubbery, has been used as
a kind of traditional Chinese herbal medicines for thousands of years. Lycium barbarum polysaccharide (LBP)
is the main bioactive component of Lycium barbarum. The aim of this study was to investigate the
radioresistant effect of LBP on the damage of male rats' reproductive system and spermatogenic cells
caused by low-dose (60)Co-γ irradiation. Materials and methods: Male rats were randomly divided into 7
groups and treated with irradiation and/or LBP: normal control group, irradiation control group 1, irradiation
control group 2, irradiation control group 3, LBP + irradiation group 1, LBP + irradiation group 2, and LBP +
irradiation group 3. Results: It is found that mating function and testis organ coefficient in LBP + irradiation
groups were significantly better than that of the corresponding irradiation control groups. LBP significantly
up-regulates the expression of Bcl-2 while down-regulating the expression of Bax. And LBP also plays an
important role in prevention mitochondrial membrane potential decrease. In addition, LBP can significantly
reduce spermatogenic cells apoptosis. Conclusion: LBP has obvious protective effect on the male rats'
reproductive function and spermatogenic dysfunction induced by irradiation.
27
Lycium barbarum полисахарид, предотвращает фокального ишемического повреждения за счет
ингибирования апоптоза нейронов у мышей.
Для расследования нейропротективный эффект Lycium barbarum полисахарида (LBP) на Фокусное
церебрального ишемического повреждения миокарда у мышей и исследовать его возможные
механизмы.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ:
Самцов мышей ICR были использованы, чтобы сделать модель средней мозговой артерии (СМА)
(MCAO) после внутрижелудочного введения с LBP (10, 20 и 40 мг/кг) и Нимодипин (0,4 мг/кг) в
течение семи дней подряд. После 24 ч реперфузии, неврологические показатели были оценены и
инфаркт объемы измерялись 2, 3, 5-triphenyltetrazolium хлорид (ТТС), окрашивание.
Морфологические изменения при ишемической мозги были выполнены для затвердевает-эозином
(он) окрашивание. Количество апоптотических нейронов был обнаружен TUNEL окрашивания. В Bax,
Bcl-2 белка выражение и CytC, Каспазы-3, -9 и расщепляется PARP-1 активации были исследованы
методом иммунофлюоресценции и вестерн-блот анализа.
Результаты:
LBP (10, 20 и 40 мг/кг) группах лечения значительно снижается infract объем и неврологический
дефицит баллов. LBP также облегчение нейронов морфологических повреждений и ослабленных
апоптоза нейронов. LBP в дозе 40 мг/кг существенно подавляется избыточная экспрессия Bax, CytC,
Каспазы-3, -9 и расщепляется PARP-1 и сдержала снижение экспрессии Bcl-2.
Выводы:
Основываясь на этих результатах, мы полагаем, что LBP защищает от очаговых церебральных
ишемических повреждений смягчающих митохондриального пути апоптоза.
В этом исследовании лечение MCAO мышей с LBP может заметно уменьшить неврологический
дефицит баллы и infract объем ишемизированного мозга. Морфологические изменения
апоптотических клеток, индуцированных MCAO были заторможены в LBP лечения групп,
соответственно. LBP, также показали существенное влияние на снижение количества апоптотических
нейронов. Чтобы исследовать его возможные анти-апоптотического механизма, мы измерили
некоторые апоптоза, связанные с белками, особенно митохондриального пути апоптоза-связанных
белков. Активность каспазы-3 в ишемическом мозге MCAO мышей было заметно ослабляется после
лечения 40 мг/кг LBP. Результаты иммунофлюоресценции и вестерн-блот анализ показал, что LBP в
дозе 40 мг/кг может значительно подавить белка Bax, CytC, Каспазы-3, -9 и расщепляется PARP-1 и
продвижения Bcl-2 выражение в ишемизированных коры головного мозга мышей.
Эти результаты в настоящем исследовании, отметили, что LBP имел нейропротекторный эффект в
фокальной церебрального ишемического повреждения миокарда у мышей. И защиты церебрального
ишемического мышей от MCAO-индуцированного апоптоза LBP связан с митохондриями пути
апоптоза.
В данном исследовании мышей очаговых церебральных ишемических травма была вызвана 2 часа
MCAO и реперфузии в течение 24 часов. Оптимальная Продолжительность лечения и оптимальной
терапевтической дозы LBP фоне церебрального ишемического повреждения были не полностью
выяснены. Кроме митохондрий, апоптоз пути, есть другие основные пути апоптоза, внешняя тропа,
которая берет свое начало от активации клеточной поверхности рецепторы смерти, поэтому он
нуждается в дальнейшем изучении в будущем исследование, чтобы исследовать лучшие варианты
лечения LBP в церебрального ишемического повреждения миокарда.
PLoS One. 2014 Mar 3;9(3):e90780. doi: 10.1371/journal.pone.0090780. eCollection 2014.
Lycium barbarum polysaccharide prevents focal cerebral ischemic injury by inhibiting neuronal
apoptosis in mice.
Wang T1, Li Y2, Wang Y1, Zhou R1, Ma L3, Hao Y1, Jin S1, Du J1, Zhao C4, Sun T3, Yu J5.
To investigate the neuroprotective effect of Lycium barbarum polysaccharide (LBP) on focal cerebral
ischemic injury in mice and to explore its possible mechanism.
MATERIALS AND METHODS:
Male ICR mice were used to make the model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) after intragastric
administration with LBP (10, 20 and 40 mg/kg) and Nimodipine (0.4 mg/kg) for seven successive days. After
28
24 h of reperfusion, neurological scores were estimated and infarct volumes were measured by 2, 3, 5triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining. Morphological changes in ischemic brains were performed for
hematoxylin-eosin (HE) staining. The number of apoptotic neurons was detected by TUNEL staining. The
Bax, Bcl-2 protein expression and CytC, Caspase-3, -9 and cleaved PARP-1 activation were investigated by
immunofluorescence and western-blot analysis.
Ингибиторный эффект Lycium barbarum полисахариды на клеточный апоптоз и старение-это
потенциально опосредована р53 сигнальный путь.
Lycium barbarum (Л. barbarum) фрукты или экстракт рассматривать как улучшенный-сорт китайской
медицине используется, чтобы модулировать иммунитет организма и замедляет процесс старения
целей. Однако, лежащие в основе молекулярные механизмы, ответственные за эти эффекты остаются
неясными. В настоящем исследовании л. barbarum полисахариды (LBPs), который считается основным
источником л. barbarum эффекты, были использованы для выяснения его механизма действия и
фенотипической и старения, связанных β-галактозидазы (SA-β-gal) - анализы, оценка выживаемости в
условиях in vivo и определения профилей экспрессии генов, связанных с р53 сигнальный путь в
модели " зебрафиш. Эмбрионы рыбок данио были постоянно подвергается влиянию различных
концентраций LBPs (1.0, 2.0, 3.0 и 4.0 мг/мл) в течение 3 дней. Результаты флуоресцентного
акридинового оранжевого и SA-β-gal окрашивание показали, что клеточный апоптоз и старение в
основном возникают в голове в 24 часа после оплодотворения (hpf) и 72 hpf. Кроме того, устойчивость
к репликативное старение наблюдается при малых доз LBPs, особенно на 3.0 мг/мл концентрации.
Кроме того, уровень экспрессии генов, которые связаны со старением, таких как р53, р21 и Bax,
снизилась, в то время как Mdm2 и трет генов увеличилась после лечения с LBPs. Результаты показали,
что эффекты LBPs на клеточный апоптоз и старение может быть опосредована р53-опосредованного
пути.
Mol Med Rep. 2014 Apr;9(4):1237-41. doi: 10.3892/mmr.2014.1964. Epub 2014 Feb 19.
Inhibitory effect of Lycium barbarum polysaccharides on cell apoptosis and senescence is potentially
mediated by the p53 signaling pathway.
Xia G1, Xin N2, Liu W1, Yao H1, Hou Y2, Qi J2.
Lycium barbarum (L. barbarum) fruit or extract has been regarded as a superior-grade Chinese medicine,
used to modulate body immunity and for anti-aging purposes. However, the underlying molecular
mechanisms behind these effects remain unclear. In the present study, L. barbarum polysaccharides (LBPs),
considered a major contributor of L. barbarum effects, were used to elucidate its mechanism of action by
phenotypic and senescence associated-β-galactosidase (SA-β-gal) assays, evaluation of survival rates in vivo
and expression profiling of genes related to the p53 signaling pathway in a zebrafish model. Zebrafish
embryos were continuously exposed to various concentrations of LBPs (1.0, 2.0, 3.0 and 4.0 mg/ml) for 3
days. The results of fluorescent acridine orange and SA-β-gal staining indicated that cell apoptosis and
senescence mainly occur in the head at 24 hours post fertilization (hpf) and 72 hpf. In addition, resistance to
replicative senescence was observed at low doses of LBPs, especially at the 3.0 mg/ml concentration.
Furthermore, the expression of genes that relate to aging, such as p53, p21 and Bax, was decreased, while
that of Mdm2 and TERT genes was increased after treatment with LBPs. The results demonstrated that the
effects of LBPs on cell apoptosis and aging might be mediated by the p53-mediated pathway.
In vivo и in vitro исследование полисахаридов из двух-трава формула на язвенный колит и
потенциальным механизмом действия.
ETHNOPHARMACOLOGICAL АКТУАЛЬНОСТЬ:
Lycium barbarum и Астрагала перепончатого два традиционных лекарственных трав широко
используются в Китае для питания инь и усиления ци. Целью исследования было изучение
профилактического и лечебного действия сырой полисахариды (QHPS), извлеченная из двух-трава
формула, состоящая из Lycium barbarum и Астрагала перепончатого в соотношении 2:3 при колитах
крыс, и дальнейшее выявление потенциальных механизм действия в эпителиальной пролиферации
in vitro.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ:
Уксусной кислоты (AA)-индуцированной язвенный колит крыса модель была применена в
29
исследовании. Два независимых протоколов были использованы для оценки профилактического и
лечебного действия QHPS, соответственно, в которых крысы были либо предварительно
обрабатывают QHPS (0.18g/кг) в течение 14 дней до индукции АА, или пост-обработанные с QHPS в
течение 7 дней после индукции АА. На консистенцию стула и потеря веса были использованы для
оценки активности заболевания. Морфологические изменения в слизистой оболочке кишечника в
конце экспериментов наблюдались. Сыворотке крови уровня эндотоксина (EDT), - диамин-оксидазы
(DAO) и d-лактата (DLA), важных биохимических маркеров для оценки слизистой оболочки кишечника
структуру и функцию, измеряли. В in vitro кинетические исследования, крыса, эпителий кишечника
(IEC-6) были использованы для доступа к регенерации эпителия.
Результаты:
Внутри Толстой инстилляции AA язвенного колита, индуцированного у крыс, как указано диарея,
потеря веса, и повреждение слизистой оболочки толстой кишки. Как профилактических, так и
лечебных процедур эффективно снижается потеря веса и понос и ослабленных повреждение
слизистой оболочки толстой кишки, связанные с адаптивной колит. Значительное увеличение в
сыворотке крови уровня DAO, DLA и EDT был наведен АА и тормозится QHPS лечения. Кроме того,
QHPS может существенно стимулировать IEC-6 пролиферации в зависимости от дозы образом
(p<0,05).
Вывод:
Настоящего исследования, свидетельствует о впервые, что полисахариды, извлеченные из этих
двух-трава формула может защитить от экспериментального язвенного колита, предположительно по
обеспечению восстановления кишечного барьера.
J Ethnopharmacol. 2014 Apr 11;153(1):151-9. doi: 10.1016/j.jep.2014.02.008. Epub 2014 Feb 16.
The in vivo and in vitro study of polysaccharides from a two-herb formula on ulcerative colitis and
potential mechanism of action.
Zhao L1, Wu H2, Zhao A3, Lu H2, Sun W4, Ma C4, Yang Y4, Xin X2, Zou H2, Qiu M5, Jia W3.
Lycium barbarum and Astragalus membranaceus are two traditional medicinal herbs widely used in China
for nourishing Yin and reinforcing Qi. The purpose of the study was to investigate the prophylactic and
curative effects of crude polysaccharides (QHPS) extracted from a two-herb formula composed of Lycium
barbarum and Astragalus membranaceus at a ratio of 2:3 in colitis rats, and to further elucidate the
potential mechanism of action in epithelial cell proliferation in vitro.
MATERIALS AND METHODS:
An acetic acid (AA)-induced ulcerative colitis rat model was applied in the study. Two independent
protocols were used to assess the prophylactic and curative effects of QHPS, respectively, in which rats were
either pre-treated with QHPS (0.18g/kg) for 14 days prior to AA induction, or post-treated with QHPS for 7
days after AA induction. The stool consistency and weight loss were used to evaluate disease activity. The
morphological changes in intestinal mucosa at the end of the experiments were observed. The serum levels
of endotoxin (EDT), diamine oxidase (DAO) and d-lactate (DLA), important biochemical markers for
evaluating intestinal mucosal structure and function, were measured. In the in vitro mechanistic studies, rat
intestinal epithelial cells (IEC-6) were used to access for epithelium regeneration.
RESULTS:
The intra-colonic instillation of AA induced ulcerative colitis in rat, as indicated by diarrhea, weight loss,
and colonic mucosal damage. Both prophylactic and curative treatments effectively reduced the weight loss
and diarrhea and attenuated the colonic mucosal damage associated with inducible colitis. The significant
increase in serum levels of DAO, DLA and EDT was induced by AA and inhibited by QHPS treatment.
Moreover, QHPS could significantly stimulate IEC-6 proliferation in a dose-dependent manner (p<0.05).
CONCLUSION:
The present study indicated for the first time that polysaccharides extracted from this two-herb formula
can protect against experimental ulcerative colitis, presumably by promoting the recovery of the intestinal
barrier.
Иммунная деятельность, сравнение и полисахарид полисахарид-белковый комплекс из Lycium
barbarum Л.
Lycium barbarum Л., известный как wolfberry, является важным китайской травяной медицины. В
30
исследовании, мы очищенной воды-растворимый полисахарид-белковый комплекс (LBPF4) и
полисахарида (LBPF4-OL) из плодовых тел L. barbarum Л. моносахарид и аминокислотный состав
LBPF4 и LBPF4-OL была установлена с дробными кислоты hydrolization, ГХ/МС и ЯМР методами. LBPF4OL молекулярной массы 181 кда, что определяется высокой производительности гель-проникающей
хроматографии (HPGPC). In vitro, мы обнаружили, что LBPF4 индуцированной splenocyte разрастаний
зависел как B-клетки и T-клетки, но LBPF4-OL индуцированной splenocyte разрастаний зависел
главным образом от B-клеток. Результаты ИФА показали, что оба LBPF4 и LBPF4-OL значительно
индуцированной TNF-α, IL-1β и никакого производства на макрофаг. Мы также обнаружили, что оба
LBPF4 и LBPF4-ол может повысить макрофагального фагоцитоза. Кроме того, электрофоретической
подвижности shift assay (EMSA) исследования показывают, что LBPF4 100 мкг/мл лечение может более
эффективно увеличить NF-κB деятельности, чем LBPF4-Ола. Взятые вместе, наши результаты
показывают, что LBPF4 может повысить T, B-клеток и макрофагов функции, но LBPF4-OL могут только
усилить B-клеток и макрофагов функций. Отчасти это объясняется LBPF4 будучи в состоянии
значительно повысить лимфоциты NF-κB деятельности.
Int J Biol Macromol. 2014 Apr;65:441-5. doi: 10.1016/j.ijbiomac.2014.01.020. Epub 2014 Feb 11.
Immune activities comparison of polysaccharide and polysaccharide-protein complex from Lycium
barbarum L.
Zhang X1, Li Y1, Cheng J1, Liu G1, Qi C1, Zhou W2, Zhang Y3.
Lycium barbarum L., known as wolfberry, is an important Chinese herbal medicine. In the research, we
purified water-soluble polysaccharide-protein complex (LBPF4) and polysaccharide (LBPF4-OL) from the
fruiting bodies of L. barbarum L. The monosaccharide and amino acid composition of LBPF4 and LBPF4-OL
was elucidated with fractional acid hydrolization, GC/MC and NMR techniques. LBPF4-OL molecular weight
was 181 kDa, as determined by high-performance gel-permeation chromatography (HPGPC). In vitro assay,
we found that LBPF4 induced splenocyte proliferations depended on both B cells and T cells, but LBPF4-OL
induced splenocyte proliferations mainly depended on B cells. ELISA results showed that both LBPF4 and
LBPF4-OL significantly induced TNF-α, IL-1β and NO production on macrophage. We also found that both
LBPF4 and LBPF4-OL can enhance macrophage phagocytosis. Furthermore, electrophoretic mobility shift
assay (EMSA) studies suggest that LBPF4 100 μg/ml treatment can more effectively increase NF-κB activity
than LBPF4-OL. Taken together, our results demonstrate that LBPF4 can enhance T, B cells and macrophages
functions, but LBPF4-OL can only enhance B cells and macrophage functions. This is partly due to LBPF4
being able to more significantly enhance lymphocytes NF-κB activity.
Lycium barbarum полисахариды предотвращают памяти и нарушения нейрогенеза в скополамин
крыс.
Lycium barbarum используется как пищевая добавка и в качестве лекарственного растения во
многих странах, и л. barbarum полисахариды (LBPs), основных клеточных компонентов, сообщается
имеют широкий спектр полезных эффектов, в том числе нейропротекция, анти-старение и
противораковыми свойствами, и модуляции иммунитета. Последствия LBPs на нейрональные
функции, нейрогенез и лекарственно-индуцированных обучения и памяти дефициты не были
оценены. Мы сообщаем о терапевтических эффектах LBPs на обучение и память и нейрогенеза в
скополамин (ШОС)крыс. LBPs вводили через желудочный перфузии за 2 недели до начала подкожной
ШОС лечение еще на 4 недели. Как и ожидалось, ШОС пониженными показателями романа объекта и
места расположения объекта, задач распознавания, и в водном лабиринте Морриса. Однако,
двойной ШОС и LBP крыс, получавших потратил значительно больше времени, исследуя роман
объект или место в задачи по распознаванию и оказали существенное короче побег задержки в
водном лабиринте. ШОС администрации привело к снижению Ki67 - или DCX-иммунореактивного
клеток в зубчатой извилине и повреждения дендритных развитие новых нейронов; LBP предотвратить
эти ШОС-индуцированного сокращения в клеточной пролиферации и neuroblast дифференциации.
LBP также охраняемых ШОС-индуцированной потери нейрональных процессов в DCXиммунореактивного нейронов. Биохимические исследования показали, что LBP снизилась ШОСиндуцированного окислительного стресса в гиппокампе и отменил соотношение Bax/Bcl-2, которые
выставлены после увеличения ШОС лечения. Однако снижение BDNF и увеличению боли,
индуцированной ШОС показал, нет ответа на LBP администрации. Эти результаты позволяют
31
предположить, что LBPs может предотвратить ШОС-индуцированной когнитивными дефицитами и
снижение клеточной пролиферации и neuroblast дифференциации. Подавление оксидативного
стресса и апоптоза могут быть вовлечены в выше эффекты LBPs, что может быть перспективным
кандидатом для восстановления функций памяти и нейрогенеза.
Состав плодов Lycium barbarum включает в себя полисахариды, каротиноиды и флавоноиды.
Полисахариды (LBP) - это высокое содержание, что составляет приблизительно 40% по массе сухого
вещества и представляют собой количественно наиболее важная группа веществ (согласно обзору
Potterat [41]). В LBP, используемые в этом исследовании, были, как правило, экстрагируют кипящей
воде, после чего путем осаждения этанолом, гидролиз белков, диализа и фракционирования с DEAESepharose CL-6B столбца, как в предыдущем описании [9], [42]. Этот метод приводит LBP, как правило,
состоящий из шести моносахариды (галактоза, глюкоза, rhamnose, арабинозы, маннозы, ксилозы), что
главным образом, связано с биологической активностью. Люди всегда забора Lycium barbarum в
питьевую коммерческих фруктовый сок или кипящий суп, поскольку он обычно используется в
качестве пищевой добавки, а также лекарственные травы. Это хроническое и долгосрочные
процедуру, чтобы включить их биологическую активность функционировать в различных органах.
Клинические испытания, проведенные компанией Amagase et al. разработан полностью 30-дневного
приема период Lycium barbarum сок 30 дней [3]. Поэтому LBP в это исследование проведено на
длительный период. Для координации хронических администрации LBP мы выбрали подкожной
хронических администрации ШОС через осмотические насосы. Хотя эта модель используется редко,
доклады и наши результаты позволяют предположить, что хроническое введение ШОС на самом деле
вызвано не только повреждение гиппокампа [43], [44] но и когнитивными дефицитами
(представления данных).
Гиппокамп является важным регионом на холинергические системы мозга человека и других
млекопитающих и играет решающую роль в пространственной навигации и консолидации
долговременной памяти. Существует непрерывной регенерации в течение всей жизни новых
нейронов в гиппокампе, и DG отображает нейрогенеза в зрелом возрасте [45]-[47]. Недавно
пролиферирующих клеток в subgranular зоны (SGZ) DG мигрируют в гранулы слоя клеток, зрелых в
новых нейронов, аксонов для отправки CA3 региона в виде мшистых волокон и проектирование
дендритов в наружный молекулярный слой, получая входные данные от entorhinal коры головного
мозга, и в конечном итоге образуют функциональные синаптические связи с гиппокампа схемы [48][50]. У взрослых эти процессы, как полагают, играют ключевую роль в создании и поддержании
следов памяти и пространственной навигации [51], [52].
ШОС полагают, оказывают различные токсические свойства нервной системы. В данном
исследовании она выставлена на токсичность населения и дендритных развития новорожденного
незрелых нейронов и зернистых клеток в ГД, что напрямую влияет на повреждение гиппокампа
цепей, которые могут преимущественно отвечает за когнитивными дефицитами. Насколько
гиппокампа и цепи были разрушены нуждается в дальнейшей оценки с помощью
электрофизиологических meseaures в следующих расследования. Ингибирование мускариновые
ацетилхолинового рецептора ШОС также способствует характерными когнитивными дефицитами
болезни Альцгеймера (AD) [33], [44], а также холинергические антагонисты рецепторов [43], [53].
Наши результаты вместе с другими отчетами [38], [39] указывают, что активность Ахэ в гиппокампе
была увеличена после того, как ШОС лечение, которое частично опосредованное ШОСиндуцированной нейрогенеза обесценение в гиппокампе. Окислительный стресс является мысль
принять участие в патогенезе деменции и возрастных нейродегенеративных расстройств, активных
форм кислорода (АФК) участвуют в возрастных когнитивных нарушений и AD развития [54]-[57].
Окислительный стресс является еще одним токсичных реактивности, индуцированной острой или
хронической ШОС лечения. Наши исследования и отчеты от других [58], [59] показал, что ШОС
лечения значительно способствовало окислительного стресса, такие, как уменьшение активностью
СОД, ГП, каталазы (кат) и увеличение мда уровней, которые в дальнейшем могут способствовать
программирования апоптоза [58], [60], снижение пролиферации клеток и потеря дендритов
новорожденных нейронов. В этом исследовании мы обнаружили, что ШОС также вниз-регулируется
гиппокампа критический фактор BDNF выражение, что согласуется с предыдущими отчетами [44],
[61]. Эти механизмы, более или менее, несут ответственность за ШОС-индуцированной дисфункции
32
памяти и пространственной навигации и даже нейрогенеза обесценения.
Настоящее исследование показало, LBP администрации не только усиленной пролиферации клеток
и предотвратить neuroblast дифференциации от ШОС токсичность в ГД, но и значительно улучшил
познавательной и функцией памяти. В свете тесных взаимоотношений между гиппокампом и
обучение и пространственной навигации, он приходит к заключению, что увеличение нейрогенеза в
гиппокампе, индуцированный LBP администрации могут лежать в основе улучшения обучения и
памяти задачи. Механизмы, лежащие в основе нейропротективных эффектов LBP на пролиферацию
клеток и neuroblast дифференциация еще не известны. Выявить способ действия LBP, мы обнаружили
серийный биологических факторов, связанных с ШОС или LBP в гиппокампе. Хотя ШОС раздражения,
оказываемого несколько токсическое воздействие на гиппокамп, LBP лечение только спас
нейрогенеза и neuroblast дифференциации и подлежат восстановлению окислительного стресса и
апоптоза, но не влияет на ШОС-индуцированного рельефа боли активности, снижение BDNF.
Результаты также намекнул, что анти-окислительные и антиапоптозных эффектов, лежащих в основе
нейропротективных эффектов LBP гиппокампа на структуру и функции.
Антиоксидантная деятельность LBPs широко изучаются in vitro и in vivo. LBPs сообщается об
эффективных поглотителей о свободных супероксид-радикалов и анионов, и посмотреть зависящей
от концентрации ингибирование ДФПГ- и ABTS·+ свободные радикалы [62]-[64]. LBP лечения, как
сообщается, оказывают защитное действие в условиях, в которых окислительный стресс считается
играть центральную роль, в том числе ишемии/реперфузионного повреждения, высоким
содержанием жира диета (HFD) грудью, интенсивные физические упражнения, и старение [10], [65][69]. Антиоксидантные эффекты LBP в теле человека также был осмотрен Amagase et al. [3]. Пятьдесят
китайский здоровых взрослых в возрасте 55-72 лет были исследованы в 30-дневный
рандомизированное, двойное слепое, плацебо-контролируемого клинического исследования. LBP
лечения достоверно увеличение содержания в сыворотке крови уровней СОД (+8,4%) и GSH-Px
(+9.9%), и уменьшением сывороточного содержания мда (-8.7%). Эти отчеты в сочетании с наших
результатов можно предположить, что защитный эффект LBP главным образом опосредовано
изменения антиоксидантных ферментов и снижение окислительного стресса. Окислительный стресс
непосредственно opta последовательные реакции апоптоза. Наши результаты показали, что ШОС
действительно индуцированной апоптотической реакции в гиппокампе, который согласуется с
другими сообщениями [58], [60]. Соотношение Bax/Bcl2, апоптотического индекса, было заметно
вниз-регулируется ШОС, в то время как LBP администрации отменил отношение. Сообщается, что
бакс-опосредованной программированной клеточной гибели взрослых-образованных нейронов
происходит во время ранней фазы дифференциации, который еще раз продемонстрировал, что proапоптоз ШОС выступает посредником уничтожить третичных отраслей новорожденных нейронов и
анти-апоптоз LBP предотвращает травмы ветвей от токсикоза. Поэтому предполагается, что защитный
эффект LBPs против ШОС-индуцированных нарушений опосредуется ингибированием повреждений,
вызванных свободными радикалами и последующего апоптоза после ШОС администрации.
В заключение, наши результаты показывают, что LBP администрация может предотвратить
когнитивные и пространственной навигации и гиппокампа нейрогенеза от повреждения ШОС и
механизмы, лежащие в основе нейропротекторных свойств LBPs входят антиокислительные и антиапоптоз. Таким образом, существует широкий интерес в использовании LBP качестве антиоксиданта
стимулировать гиппокампа нейрогенеза и выживанию нейронов при старении или
нейродегенеративных расстройств.
PLoS One. 2014 Feb 5;9(2):e88076. doi: 10.1371/journal.pone.0088076. eCollection 2014.
Lycium barbarum polysaccharides prevent memory and neurogenesis impairments in scopolaminetreated rats.
Chen W1, Cheng X2, Chen J3, Yi X2, Nie D4, Sun X5, Qin J2, Tian M2, Jin G2, Zhang X2.
Lycium barbarum is used both as a food additive and as a medicinal herb in many countries, and L.
barbarum polysaccharides (LBPs), a major cell component, are reported to have a wide range of beneficial
effects including neuroprotection, anti-aging and anticancer properties, and immune modulation. The
effects of LBPs on neuronal function, neurogenesis, and drug-induced learning and memory deficits have
not been assessed. We report the therapeutic effects of LBPs on learning and memory and neurogenesis in
scopolamine (SCO)-treated rats. LBPs were administered via gastric perfusion for 2 weeks before the onset
33
of subcutaneous SCO treatment for a further 4 weeks. As expected, SCO impaired performance in novel
object and object location recognition tasks, and Morris water maze. However, dual SCO- and LBP-treated
rats spent significantly more time exploring the novel object or location in the recognition tasks and had
significant shorter escape latency in the water maze. SCO administration led to a decrease in Ki67- or DCXimmunoreactive cells in the dentate gyrus and damage of dendritic development of the new neurons; LBP
prevented these SCO-induced reductions in cell proliferation and neuroblast differentiation. LBP also
protected SCO-induced loss of neuronal processes in DCX-immunoreactive neurons. Biochemical
investigation indicated that LBP decreased the SCO-induced oxidative stress in hippocampus and reversed
the ratio Bax/Bcl-2 that exhibited increase after SCO treatment. However, decrease of BDNF and increase of
AChE induced by SCO showed no response to LBP administration. These results suggest that LBPs can
prevent SCO-induced cognitive and memory deficits and reductions in cell proliferation and neuroblast
differentiation. Suppression of oxidative stress and apoptosis may be involved in the above effects of LBPs
that may be a promising candidate to restore memory functions and neurogenesis.
Lycium barbarum полисахарид LBPF4-ол может быть новый Толл-подобный рецептор 4/MD2-MAPK
сигнального пути активатор и индуктором.
Признание эффективности традиционной китайской медицины Lycium barbarum Л. постепенно
возрастает, в Европе и Америке. Многие иммунорегуляции и противоопухолевый эффекты. л.
barbarum полисахариды (LBP) были сообщены, но его молекулярный механизм, пока не ясно. В
данном исследовании мы сообщали, что активность полисахаридных LBPF4-ол, который был очищен
от LBP, тесно связанные с TLR4-MAPK сигнального пути. Мы обнаружили, что LBPF4-OL можете
существенно побудить TNF-α и IL-1β производства в перитонеальные макрофаги, изолированные от
дикого типа (C3H/HeN), но не TLR4-дефицитных мышей (C3H/HeJ). Мы также определили, что
распространение LBPF4-OL-стимулированных лимфоцитов от C3H/HeJ мышей значительно слабее,
чем лимфоциты C3H/HeN мышей. Кроме того, через био-слой интерферометрии анализа, мы
обнаружили, что LPS, но не LBPF4-OL можете напрямую связать с TLR4/MD2 молекулярного комплекса.
Проточной цитометрии анализа показали, что LBPF4-OL заметно upregulates TLR4/MD2 выражения в
обоих перитонеальных макрофагов и Raw264.7 клетки. А механизм его действия, LBPF4-OL
увеличивает фосфорилирование p38-MAPK и ингибирует фосфорилирование JNK и ERK1/2, Как это уже
наблюдалось через вестерн-блот-анализ. Эти данные позволяют предположить, что л. barbarum
полисахарид LBPF4-OL-это новый Толл-подобный рецептор 4/MD2-MAPK сигнального пути активатор и
индуктором.
Int Immunopharmacol. 2014 Mar;19(1):132-41. doi: 10.1016/j.intimp.2014.01.010. Epub 2014 Jan 23.
Lycium barbarum polysaccharide LBPF4-OL may be a new Toll-like receptor 4/MD2-MAPK signaling
pathway activator and inducer.
Zhang XR1, Qi CH1, Cheng JP1, Liu G1, Huang LJ2, Wang ZF2, Zhou WX3, Zhang YX4.
Recognition of the utility of the traditional Chinese medicine Lycium barbarum L. has been gradually
increasing in Europe and the Americas. Many immunoregulation and antitumor effects of L. barbarum
polysaccharides (LBP) have been reported, but its molecular mechanism is not yet clear. In this study, we
reported that the activity of the polysaccharide LBPF4-OL, which was purified from LBP, is closely associated
with the TLR4-MAPK signaling pathway. We found that LBPF4-OL can significantly induce TNF-α and IL-1β
production in peritoneal macrophages isolated from wild-type (C3H/HeN) but not TLR4-deficient mice
(C3H/HeJ). We also determined that the proliferation of LBPF4-OL-stimulated lymphocytes from C3H/HeJ
mice is significantly weaker than that of lymphocytes from C3H/HeN mice. Furthermore, through a bio-layer
interferometry assay, we found that LPS but not LBPF4-OL can directly associate with the TLR4/MD2
molecular complex. Flow cytometry analysis indicated that LBPF4-OL markedly upregulates TLR4/MD2
expression in both peritoneal macrophages and Raw264.7 cells. As its mechanism of action, LBPF4-OL
increases the phosphorylation of p38-MAPK and inhibits the phosphorylation of JNK and ERK1/2, as was
observed through Western blot analysis. These data suggest that the L. barbarum polysaccharide LBPF4-OL
is a new Toll-like receptor 4/MD2-MAPK signaling pathway activator and inducer.
34
[Эффект lycium barbarum полисахариды на сетчатки ультраструктура streptozocinиндуцированных диабетических крыс].
Для изучения ультраструктуры сетчатки streptozocin (STZ)-индуцированных диабетических крыс и
вмешательство эффект Lycium Barbarum Полисахариды (LBP).
Методы:
В STZ-индуцированных диабетических SD крыса модель была создана. LBP отдавался в группе
лечения по gastrogavage. Изменения массы тела, глюкозы в крови, и ультраструктуры сетчатки в 24
недели наблюдалось.
Результаты:
Ранние изменения сетчатки покрыта митохондрии изменения, дегенерация клеток и апоптоз
нейронов сетчатки и neuroglia клеток в диабетических крыс. Никаких изменений массы тела, либо
уровень глюкозы в крови наблюдается между LBP группы и диабетической модель группы (P > 0,05).
На ультраструктурные изменения были явно обрадованная LBP, и ограничен внутренний ядерный
слой.
Выводы:
LBP, естественно, может снять патологические изменения митохондрий, препятствуют нейронных
клеток и апоптоз. Его эффект не может быть достигнут путем снижения уровня глюкозы в крови.
Ожидается, что она будет использоваться в профилактике и лечении ранних сетчатки, диабетическая
невропатия
Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 2013 Oct;33(10):1404-7.
[Effect of lycium barbarum polysaccharides on the retinal ultrastructure of streptozocin-induced
diabetic rats].
[Article in Chinese]
Guo J, Xu GX, Hou ZJ, Xu JB, Huang LY.
To study the retinal ultrastructure of streptozocin (STZ)-induced diabetic rats and the intervention effect
of Lycium Barbarum Polysaccharides (LBP).
METHODS:
The STZ-induced diabetic SD rat model was established. LBP was given to those in the treatment group by
gastrogavage. Changes of body weight, blood glucose, and retinal ultrastructure at 24-week were observed.
RESULTS:
Early retinal changes covered mitochondrion changes, cell degeneration and apoptosis of retinal neurons
and neuroglia cells in the diabetic rats. No change of body weight or blood glucose was observed between
the LBP group and the diabetic model group (P > 0.05). The ultrastructural changes were obviously relieved
by LBP, and limited to the inner nuclear layer.
CONCLUSIONS:
LBP could obviously relieve pathological changes of mitochondrion, hinder neural cell apoptosis. Its effect
might not be achieved by lowering blood glucose. It was expected to be used in preventing and treating
early diabetic retinal neuropathy.
Сравнительная эффективность экстрактов из Lycium barbarum кора и плоды на рецептор
эстрогена положительный рак молочной железы человека MCF-7 клеток.
Химио-гормональной терапии эстрогена рецептор позитивный (ER(+)) рак молочной железы
экспонатов приобретенной резистентности опухоли. Травяные лекарственные средства обеспечения
интегративной поддержки для больных раком молочной железы. Настоящее исследование, в
котором сравнивали эффективность водных извлечений из Lycium barbarum кора (LBB) и Lycium
barbarum фрукты (LBF) в ER(+) клетками MCF-7. Клеточный рост и 17ß-эстрадиол (E2) метаболизм
количественно эффективность. MCF-7 клетки сохраняли в сыворотке обедненного средний+ E2
отмечалась повышенная anchorage-dependent и анкоридж-независимого роста. LBB проявили
большую эффективность, чем LBF (95% снижение IC50). LBB, произведенных в 6,8 раза и растет на 40%
снижение, и в 3,7 раза увеличить в 2-hydroxyestrone (2-OHE1), 16α-hydroxyestrone (16α-OHE1)и эстриол
(Е3) образование. Соответствующие значения для LBF были 3.9, 33, и 10.5. LBB произведенных a16.3
раза и двукратное увеличение в 2-OHE1:16α-OHE1 и E3:16α-OHE1 коэффициенты, в то время как фунт
произведенного в шесть раз и 2,9-кратное увеличение. Эффективность LBB связано с увеличением 235
OHE1 формирования, в то время как фунт-сила-это из-за ускоренного преобразования 16α-OHE1 на
E3. Конкретные ингибирующее рост профили LBB и LBF может быть благодаря их различных по
химическому составу и их взаимодополняющего действия на E2 метаболизм. Это исследование
подтверждает, механистический подход к определению эффективных растительных экстрактов для
клинической ER(+) раком молочной железы.
Nutr Cancer. 2014;66(2):278-84. doi: 10.1080/01635581.2014.864776. Epub 2013 Dec 30.
Comparative efficacy of extracts from Lycium barbarum bark and fruit on estrogen receptor positive
human mammary carcinoma MCF-7 cells.
Telang N1, Li G, Sepkovic D, Bradlow HL, Wong GY.
Chemo-endocrine therapy for estrogen receptor positive (ER(+)) breast cancer exhibits acquired tumor
resistance. Herbal medicines provide integrative support for breast cancer patients. Present study compared
the efficacy of aqueous extracts from Lycium barbarum bark (LBB) and Lycium barbarum fruit (LBF) on ER(+)
MCF-7 cells. Cellular growth and 17ß-estradiol (E2) metabolism quantified the efficacy. MCF-7 cells
maintained in serum depleted medium+ E2 exhibited increased anchorage-dependent and anchorageindependent growth. LBB exhibited greater potency than LBF (95% reduction in IC50). LBB produced a 6.8fold increase, 40% decrease, and a 3.7-fold increase in 2-hydroxyestrone (2-OHE1), 16α-hydroxyestrone
(16α-OHE1), and estriol (E3) formation. The corresponding values for LBF were 3.9, 33, and 10.5. LBB
produced a16.3-fold and a twofold increase in 2-OHE1:16α-OHE1 and E3:16α-OHE1 ratios, whereas LBF
produced a sixfold and a 2.9-fold increase. The efficacy of LBB is due to increased 2-OHE1 formation,
whereas that of LBF is due to accelerated conversion of 16α-OHE1 to E3. Specific growth inhibitory profiles
of LBB and LBF may be due to their distinct chemical composition and their complementary actions on E2
metabolism. This study validates a mechanistic approach to identify efficacious herbal extracts for clinical
ER(+) breast cancer.
Нейропротективных эффектов LBP на мозг ишемического реперфузионного нейродегенерации.
Настоящее исследование проводилось с целью выяснить, насколько LBP оказала защитное
действие на церебральные ишемические повреждения миокарда и определить возможные
механизмы.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ:
Мужчина Куньмин (км) мышей были использованы для создания модели мозговой артерии
(СМА)/реперфузии (MCAO/R). Поведенческий тест использовался для оценки неврологического
дефицита баллов для оценки ишемического реперфузионного повреждения головного мозга.
Изменение электроэнцефалографа (ЭЭГ), контролируются модель SMUP-E био-электрической
обработки сигналов системы. В зону инфаркта мозга оценивалась в срезами мозга с 2% раствором
2,3,5-трифенил tetrazolium chloride (TTC). Спектрофотометрический анализ был использован для
определения деятельности супероксиддисмутаза (СОД), глутатионпероксидазы (GSH-Px), каталазы
(кат) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ), содержание малонового диальдегида (мда) и аденозинтрифосфат
(АТФ) мозга.
Результаты:
Результаты показали, что LBP в дозах 20 и 40 мг/кг заметно уменьшился неврологический дефицит
очков и зоны инфаркта в MCAO/R мышей. В то же время, LBP значительно уменьшилось содержание
мда и увеличение СОД, GSH-Px, кошка, ЛДГ деятельности при ишемической реперфузии головного
мозга.
Выводы:
Они показывают, что LBP может выступать в качестве потенциального нейропротектора против
церебральной реперфузии-индуцированного поражения мозга, путем снижения уровня перекисей
липидов, очистки свободных радикалов и улучшения энергетического метаболизма.
Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2013 Oct;17(20):2760-5.
Neuroprotective effects of LBP on brain ischemic reperfusion neurodegeneration.
Wang HB1, Li YX, Hao YJ, Wang TF, Lei Z, Wu Y, Zhao QP, Ang H, Ma L, Liu J, Zhao CJ, Jiang YX, Wang YR,
Dai XY, Zhang WN, Sun T, Yu JQ.
The present study was conducted to investigate whether LBP had a protective effect on cerebral ischemic
reperfusion injury and to determine the possible mechanisms.
36
MATERIALS AND METHODS:
Male Kunming (KM) mice were used to make the model cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAO/R).
The behavioral test was used to measure neurological deficit scores for evaluation of ischemic reperfusion
damage of brain. The change of electroencephalograph (EEG) was monitored by Model SMUP-E Bio-electric
Signals Processing System. The infarction area of brain was assessed in brain slices with 2% solution of 2,3,5triphenyl tetrazolium chloride (TTC). Spectrophotometric assay was used to determine the activities of
superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GSH-Px), catalase (CAT) and lactate dehydrogenase
(LDH), contents of malondialdehyde (MDA) and adenosine triphosphate (ATP) of the brain.
RESULTS:
The results showed that LBP at doses of 20 and 40 mg/kg markedly decreased the neurological deficit
scores and the infarction area in MCAO/R mice. At the same time, LBP significantly decreased MDA content,
and increased SOD, GSH-Px, CAT, LDH activities in ischemic reperfusion brain.
CONCLUSIONS:
These suggest that LBP might act as a potential neuroprotective agent against the cerebral reperfusioninduced injury in the brain through reducing lipid peroxides, scavenging free radicals, and improving the
energy metabolism.
Грудной аорты vasoreactivity у крыс в условиях тяжелых физических упражнений: эффекты
Lycium barbarum полисахариды пищевых добавок.
Снижение артериального соответствии ассоциируется с повышенной частотой заболеваемости и
смертности при сердечно-сосудистых заболеваниях. Упражнение полезно для взломанных
артериальной соответствия. Тем не менее, положительные эффекты тренировки будут потеряны и
истощения. Lycium barbarum Л. используется в Китае на протяжении веков для поддержания
хорошего здоровья. В связи с этим, основной целью данного исследования было охарактеризовать
влияние полисахаридов из Lycium barbarum (LBPs) по артериальной соблюдения во время тяжелых
физических упражнений.
Методы:
Четыре недели-плавательный программа упражнений была разработана для крыс, и уровень
содержания в крови малонового диальдегида (мда), супер оксид дисмутаза (SOD), оксида азота(NO) и
белок теплового шока 70(HSP70), не было обнаружено. Натяжение кольца аорты измеряли для
оценки реакции крыс на норадреналин (NA)-индуцированных сокращений.
Результаты:
Крысам вводят LBPs показал дольше, плавательный время, вплоть до истощения, чем в
контрольной группе крыс. Упражнение-индуцированного мда возвышения был репрессирован по
LBPs добавок. В LBPs дополняется крыс показала значительное увеличение СОД, нет, HSP70, чем
курение дополняется крыс. Кроме того, LBPs значительно до-регулируемой экспрессии eNOS и
улучшение эндотелий-зависимая вазодилатация аорты кольцо.
Вывод:
Наши исследования доказали, что LBPs администрации значительно ингибирует окислительный
стресс, а также улучшение артериальной соответствия.
J Int Soc Sports Nutr. 2013 Oct 24;10(1):47. doi: 10.1186/1550-2783-10-47.
Thoracic aorta vasoreactivity in rats under exhaustive exercise: effects of Lycium barbarum
polysaccharides supplementation.
Zhao Z, Luo Y, Li G1, Zhu L, Wang Y, Zhang X.
Reduced arterial compliance is associated with an increased rate of morbidity and mortality in
cardiovascular disease. Exercise is beneficial for compromised arterial compliance. However, the beneficial
effects of exercise are lost with exhaustion. Lycium barbarum L. has been used in China for centuries to
maintain good health. In this regard, the primary purpose of this study was to characterize the effects of the
polysaccharides from Lycium barbarum (LBPs) on arterial compliance during exhaustive exercise.
METHODS:
A four-week swimming exercise program was designed for rats, and the blood levels of malondialdehyde
(MDA), super oxide dismutase (SOD), nitric oxide(NO) and heat shock protein 70(HSP70) were detected. The
tension of aorta rings was measured to evaluate the response of rats on noradrenaline (NA)-induced
37
contractions.
RESULTS:
The rats administered LBPs showed longer swimming time until exhaustion than the control group of rats.
Exercise-induced MDA elevation was repressed by LBPs supplementation. The LBPs-supplemented rats
displayed a significant increase of SOD, NO, HSP70 than the non-supplemented rats. Additionally, LBPs
significantly up-regulated the expression of eNOS and improved the endothelium-dependent vasodilatation
of the aorta ring.
CONCLUSION:
Our study proved that LBPs administration significantly inhibited the oxidative stress, and improved the
arterial compliance.
Лечение d-галактозы индуцированного старения с помощью мыши Lycium barbarum
полисахариды и механизма его изучения.
Мы оценили воздействие Lycium barbarum полисахариды LBP) на D-галактозы модели старения
мышь, а также изучены ее возможный механизм. Куньмин мыши были случайным образом
разделены на контрольную группу, группу моделей, высокие дозы LBP группы, и низкие дозы LBP
группы. Кроме контрольной группе, D-галактоза, была использована для моделирования. Препарат
назначали при моделировании. Мышь поведения, обучения и памяти изменений не наблюдалось, а
содержание перекисного окисления липидов (пол), липофусцина (ЛФ) и моноаминоксидазы B (MAOB) в ткани мозга мыши и вес иммунные органы были измерены после 6 недель. По сравнению с
контрольной группой, мышь веса в модели группы значительно снижены. По сравнению с моделью
группы, после мышей пили LBP, времена электрическим током была меньше, чем в старых мышей
(высокие дозы LBP группы, P<0,05), и электрическим током инкубационный период было больше
(P<0,01). На день 45 после моделирования и медикаментов, содержание продуктов пол, LF и Мао-B в
ткани мозга мыши в модели группы значительно увеличилась, в то время как те в ЛС администрации
группы значительно уменьшились. Тимуса индекс в модели старения группе значительно снизился,
индекс тимуса и селезенки индекс в высоких дозах LBP группы и низкой дозы LBP группа
восстановилась значительно (P<0.01). Мы пришли к выводу, что LBP имеет антивозрастной эффект на
D-галактоза-индуцированного старения модели мыши, и механизм могут быть связаны с нищетой
глюкозы, нарушения обмена веществ и устойчивость генерации перекиси липидов и других веществ,
которые повреждают клеточные мембраны липидов.
Afr J Tradit Complement Altern Med. 2013 May 16;10(4):12-7. eCollection 2013.
Treatment of d-galactose induced mouse aging with Lycium barbarum polysaccharides and its
mechanism study.
Tang T1, He B.
We evaluated the effects of Lycium barbarum polysaccharides LBP) on D-galactose aging model mouse,
and explored its possible mechanism. Kunming mice were randomly divided into the control group, the
model group, the high-dose LBP group, and the low-dose LBP group. Except the control group, D-galactose
was used for modelling. The drug was administrated when modelling. Mouse behavioural, learning and
memory changes were observed, and the contents of lipid peroxidation (LPO), lipofuscin (LF) and
monoamine oxidase B (MAO-B) in mouse brain tissue and the weight of immune organs were measured
after 6 weeks. Compared with the control group, mouse weight gain in the model group reduced
significantly. Compared with model group, after mice drank LBP, the times of electric shock was less than
aging mice (in which, the high-dose LBP group, P<0.05), and electric shock incubation period was longer
(P<0.01). On Day 45 after modelling and drug administration, the contents of LPO, LF and MAO-B in mouse
brain tissue in the model group increased significantly, while those in the drug administration groups
decreased significantly. The thymus index in the aging model group decreased significantly; the thymus
index and the spleen index in the high-dose LBP group and the low-dose LBP group rebounded significantly
(P<0.01). We concluded that LBP has an anti-aging effect on D-galactose induced aging model mouse, and its
mechanism may be related with the alleviation of glucose metabolism disorder and the resistance of the
generation of lipid peroxide and other substances, which damage cell membrane lipid.
Характеристика и гипогликемический эффект полисахарида, выделенного из плодов Lycium
38
barbarum Л.
Сахарный диабет-это группа сложных метаболических расстройств характеризуется высокий
уровень глюкозы в крови и несоответствующей секреции инсулина мощности из-за снижения
метаболизма глюкозы и панкреатических β-клеточной массы или дисфункция β-клеток. Таким
образом, улучшение метаболизма глюкозы и сохранение β-клеточной массы и функции может быть
полезна для лечения сахарного диабета. В этом исследовании, роман кислых полисахаридов LBP-s-1,
извлеченные из Lycium barbarum Л., был получен путем очистки с использованием макропористой
смолы и ионный обмен столбца. Моносахарид анализ состава показали, что LBP-s-1 состоял из
rhamnose, арабинозы, ксилозы, маннозы, глюкозы, галактозы, галактуроновой кислоты в мольном
соотношении 1,00:8.34:1.25:1.26:1.91:7.05:15.28. Предварительная структура особенности LBP-s-1
были исследованы методом FT-IR, (1)H ЯМР и 13 C ЯМР. In vitro и in vivo гипогликемических
эксперименты показали, что LBP-s-1 имели значительные гипогликемическое действие инсулина и
повышает чувствительность активности путем увеличения метаболизма глюкозы и секрецию
инсулина и повышать панкреатических β-клеточной пролиферации. Предварительные механизмы
были также выяснены.
Carbohydr Polym. 2013 Oct 15;98(1):8-16. doi: 10.1016/j.carbpol.2013.04.057. Epub 2013 Apr 28.
Characterization and hypoglycemic effect of a polysaccharide extracted from the fruit of Lycium
barbarum L.
Zhu J1, Liu W, Yu J, Zou S, Wang J, Yao W, Gao X.
Diabetes mellitus is a group of complicated metabolic disorders characterized by high blood glucose level
and inappropriate insulin secreting capacity due to decreased glucose metabolism and pancreatic β cell
mass or dysfunction of β cells. Thus, improving glucose metabolism and preserving β cell mass and function
might be useful for the treatment of diabetes. In this study, a novel acidic polysaccharide LBP-s-1 extracted
from Lycium barbarum L. was obtained by purification using macroporous resin and ion-exchanged column.
Monosaccharide composition analysis indicated that LBP-s-1 was comprised of rhamnose, arabinose, xylose,
mannose, glucose, galactose, galacturonic acid in the molar ratio of 1.00:8.34:1.25:1.26:1.91:7.05:15.28.
The preliminary structure features of LBP-s-1 were investigated by FT-IR, (1)H NMR and (13)C NMR. In vitro
and in vivo hypoglycemic experiments showed that LBP-s-1 had significant hypoglycemic effects and insulinsensitizing activity through increasing glucose metabolism and insulin secretion and promoting pancreatic β
cell proliferation. Preliminary mechanisms were also elucidated.
Lycium barbarum полисахариды защиты печени крыс от неалкогольного стеатогепатитаиндуцированного повреждения.
Фон:Lycium barbarum полисахариды (LBPs) антиоксидантной и нейропротекторной производные от
Wolfberry. Однако, будь LBP имеет защитный эффект в неалкогольном стеатогепатите (НАСГ)индуцированные поражения печени еще unknown.Objective:мы, направленные на изучение
возможных гепатопротекторный эффекты и механизмы LBP на диете-индуцированной Нэш крыса
model.Methods и дизайн:в этом исследовании самок крыс кормили высоким содержанием жиров,
чтобы побудить Нэш с или без устного 1 мг / кг(-1) LBP кормления ежедневно в течение 8 недель.
После 8 недель, сыворотке крови и печеночных проб от каждой крысы были подвергнуты
гистологическому анализу, биохимических и молекулярно-measurements.Results:по сравнению с
крысами контрольной группы, Нэш крыс показали типичные Нэш функций, в том числе увеличение
повреждения печени, содержание липидов, фиброз, окислительный стресс, воспаление и апоптоз. В
отличие от этого, Нэш+LBP-co-крыс показал (1) улучшение гистологии и свободные жирные кислоты в
крови; (2) re-баланс липидного обмена; (3) снижение profibrogenic фактора TGF-β/SMAD пути; (4)
улучшение окислительного стресса через цитохрома P450 2E1-зависимого пути; (5) снижение в
печени про-воспалительных медиаторов и хемокинов производства; и (6) улучшение печеночной
апоптоза через р53-зависимого внутреннего и внешнего путей. Профилактические эффекты LBP были
частично модулированных через PI3K/Akt/FoxO1, LKB1/AMPK, JNK/c-Jun и MEK/ERK пути и снижение
экспрессии факторов транскрипции в печени, например, ядерного фактора-κB и активатора протеина1.Conclusion:LBP-роман гепатопротекторное средство против Нэша, вызванных аномальной печенью
метаболических функций.
Nutr Diabetes. 2013 Jul 22;3:e81. doi: 10.1038/nutd.2013.22.
39
Lycium barbarum polysaccharides protect rat liver from non-alcoholic steatohepatitis-induced injury.
Xiao J1, Liong EC, Ching YP, Chang RC, Fung ML, Xu AM, So KF, Tipoe GL.
Background:Lycium barbarum polysaccharides (LBPs) are antioxidant and neuroprotective derivative from
Wolfberry. However, whether LBP has a protective effect in non-alcoholic steatohepatitis (NASH)-induced
hepatic injury is still unknown.Objective:We aimed to study the possible hepatoprotective effects and
mechanisms of LBP on a diet-induced NASH rat model.Methods and Design:In this study, female rats were
fed a high-fat diet to induce NASH with or without an oral 1 mg kg(-1) LBP feeding daily for 8 weeks. After 8
weeks, blood serum and liver samples from each rat were subjected to histological analysis, biochemical and
molecular measurements.Results:Compared with control rats, NASH rats showed typical NASH features
including an increase in liver injury, lipid content, fibrosis, oxidative stress, inflammation and apoptosis. In
contrast, NASH+LBP-co-treated rats showed (1) improved histology and free fatty acid levels; (2) re-balance
of lipid metabolism; (3) reduction in profibrogenic factors through the TGF-β/SMAD pathway; (4) improved
oxidative stress through cytochrome P450 2E1-dependent pathway; (5) reduction in hepatic proinflammatory mediators and chemokines production; and (6) amelioration of hepatic apoptosis through the
p53-dependent intrinsic and extrinsic pathways. The preventive effects of LBP were partly modulated
through the PI3K/Akt/FoxO1, LKB1/AMPK, JNK/c-Jun and MEK/ERK pathways and the downregulation of
transcription factors in the liver, such as nuclear factor-κB and activator protein-1.Conclusion:LBP is a novel
hepatoprotective agent against NASH caused by abnormal liver metabolic functions.
Достижения в исследованиях по использованию традиционной китайской медицины для
нейропротекции при глаукоме.
Прогрессирующая потеря ганглиозных клеток сетчатки (РСК) и их аксонов является основным
звеном патогенеза глаукомы. Причины глаукомы до конца не понял, но нейродегенерации глаукомы
включает в себя множество механизмов, таких как окислительного стресса, глутаматной токсичности
и ишемии/реперфузии оскорбление. В целях выявления этих механизмов, несколько
нейропротекторное вмешательства были исследованы, чтобы предотвратить смерть РСК. Следует
отметить некоторые тоник из трав традиционной китайской медицины (ткм), фармакопеи, которые
показали, нейропротективные эффекты при глаукоме. TCM отличается от западной медицины в том,
что TCM экспонатов сложных биологически активных компонентов, запуск многочисленных
сигнальных путей и обширные действия на жизненно важные органы. Современные научные
подходы продемонстрировали некоторые из лежащих в их основе механизмов. В этом обзоре мы
использовали Lycium barbarum и гинкго билоба в качестве примеров разработать характеристики TCM
и их потенциального применения в нейропротекции при глаукоме.
J Integr Med. 2013 Jul;11(4):233-40. doi: 10.3736/jintegrmed2013037.
Research advances on the usage of traditional Chinese medicine for neuroprotection in glaucoma.
Mi XS1, Zhong JX, Chang RC, So KF.
Progressive loss of retinal ganglion cells (RGCs) and their axons is the main pathogenesis of glaucoma. The
cause of glaucoma is not fully understood, but the neurodegeneration of glaucoma involves many
mechanisms such as oxidative stress, glutamate toxicity and ischemia/reperfusion insult. In order to target
these mechanisms, multiple neuroprotective interventions have been investigated to prevent the death of
RGCs. Of note are some tonic herbs from the traditional Chinese medicine (TCM) pharmacopeia that have
shown neuroprotective effects in glaucoma. TCM differs from Western medicine in that TCM exhibits
complicated bioactive components, triggering many signaling pathways and extensive actions on vital
organs. Modern scientific approaches have demonstrated some of their underlying mechanisms. In this
review, we used Lycium barbarum and Ginkgo biloba as examples to elaborate the characteristics of TCM
and their potential applications in neuroprotection in glaucoma.
Lycium barbarum полисахариды в качестве адъюванта для рекомбинантных вакцин, благодаря
усилению гуморального иммунитета путем активации Tfh (ячеек.
Lycium barbarum полисахариды (LBP), было показано, поиграть в различные иммуномодулирующих функций, которые включают активацию т-и в-клеток. Фолликулярная helper T (Tfh
(ячеек) сейчас признан подмножество вспомогательные т-клетки, которые регулируют в несколько
этапов созревания в-клеток и функции. В текущем исследовании, мы обнаружили, что LBP смогли
40
активировать CXCR5+PD-1+ Tfh (клетки и индуцировать IL-21 секреции. В то же время LBP также
способствовало формированию зародышевых центров (GC) и производство GL-7+B220+GC B-клеток.
LBP как адъювант может увеличить выработку rAd5VP1-индуцированной Tfh (ячеек. Наши результаты
показывают, что LBP может повысить т-клеток, зависимых от Ab ответы, действуя в качестве
адъюванта для генерации Tfh (ячеек. Будущая вакцина конструкций, поэтому могут быть нацелены,
чтобы вызвать сильный антиген-специфических Tfh (ответы, чтобы повысить его защитные свойства.
Vet Immunol Immunopathol. 2014 Mar 15;158(1-2):98-104. doi: 0.1016/j.vetimm.2013.05.006. Epub 2013
May 10.
Lycium barbarum polysaccharides as an adjuvant for recombinant vaccine through enhancement of
humoral immunity by activating Tfh cells.
Su CX1, Duan XG2, Liang LJ3, Feng-Wang4, Zheng J4, Fu XY5, Yan YM6, Ling-Huang4, Wang NP4.
Lycium barbarum polysaccharides (LBP) have been shown to play a variety of immune-modulatory
functions which include activation of T and B cells. Follicular helper T (Tfh) cells are now recognized as a
subset of helper T cells which regulate the multiple stages of B cell maturation and function. In our current
study, we found that LBP were able to activate CXCR5+PD-1+ Tfh cells and induce IL-21 secretion. At the
same time LBP also promoted the formation of germinal centers (GC) and production of GL-7+B220+GC B
cells. LBP as an adjuvant could increase generation of rAd5VP1-induced Tfh cells. Our results indicate that
LBP might enhance T cell-dependent Ab responses by acting as an adjuvant for the generation of Tfh cells.
Future vaccine designs might therefore be targeted to induce strong antigen-specific Tfh responses in order
to boost its protective effects.
Lycium barbarum полисахариды снижают кишечной ишемии/реперфузионного повреждения у
крыс.
Воспаления и окислительного стресса оказывают важную роль в кишечной ишемии-реперфузии
(IRI). Lycium barbarum полисахариды (LBPs), показали, эффективных антиоксидантных и
иммуномодулирующих функций в разных моделях. Целью настоящего исследования было оценить
эффекты и возможные механизмы LBPs в кишечной IRI. Несколько свободных радикал-генерирующих
и перекисного окисления липидов модели были использованы для оценки антиоксидантной
деятельности LBPs in vitro. Общий IRI модель была использована, чтобы вызвать кишечные травмы с
помощью зажима и разжимания верхней брыжеечной артерии у крыс. Изменения в малонового
диальдегида (мда), фактор некроза опухоли (TNF)-α, активации ядерного фактора (NF)-κB,
внутриклеточные молекулы адгезии (ICAM)-1, E-селектина, и связанных антиоксидантного фермента
уровнях, полиморфноядерных нейтрофилов (ПМН) накопление, кишечную проницаемость и
кишечную гистологии были рассмотрены. Мы обнаружили, что LBPs выставлены помечено
ингибирующее действие против свободных радикалов и перекисного окисления липидов in vitro. LBPs
повышают уровень антиоксидантных ферментов и снижение кишечной окислительного повреждения
в животных моделях кишечных IRI. Кроме того, LBPs подавлял ПМН накопления и ICAM-1 выражение
и совершенствуется изменения в уровень ФНО-α, NF-κB активации кишечной проницаемости и
гистологии. Наши результаты показывают, что LBPs лечение может защитить от IRI-индуцированного
поражения кишечника, возможно, путем ингибирования IRI-индуцированного окислительного
стресса и воспаления.
Chem Biol Interact. 2013 Aug 25;204(3):166-72. doi: 10.1016/j.cbi.2013.05.010. Epub 2013 Jun 3.
Lycium barbarum polysaccharides reduce intestinal ischemia/reperfusion injuries in rats.
Yang X1, Bai H, Cai W, Li J, Zhou Q, Wang Y, Han J, Zhu X, Dong M, Hu D.
Inflammation and oxidative stress exert important roles in intestinal ischemia-reperfusion injury (IRI).
Lycium barbarum polysaccharides (LBPs) have shown effective antioxidative and immunomodulatory
functions in different models. The purpose of the present study was to assess the effects and potential
mechanisms of LBPs in intestinal IRI. Several free radical-generating and lipid peroxidation models were used
to assess the antioxidant activities of LBPs in vitro. A common IRI model was used to induce intestinal injury
by clamping and unclamping the superior mesenteric artery in rats. Changes in the malondialdehyde (MDA),
tumor necrosis factor (TNF)-α, activated nuclear factor (NF)-κB, intracellular adhesion molecule (ICAM)-1, Eselectin, and related antioxidant enzyme levels, polymorphonuclear neutrophil (PMN) accumulation,
intestinal permeability, and intestinal histology were examined. We found that LBPs exhibited marked
41
inhibitory action against free radicals and lipid peroxidation in vitro. LBPs increased the levels of antioxidant
enzymes and reduced intestinal oxidative injury in animal models of intestinal IRI. In addition, LBPs inhibited
PMN accumulation and ICAM-1 expression and ameliorated changes in the TNF-α level, NF-κB activation,
intestinal permeability, and histology. Our results indicate that LBPs treatment may protect against IRIinduced intestinal damage, possibly by inhibiting IRI-induced oxidative stress and inflammation.
Последствия Gouqi экстракты на лабиринт Морриса обучения в APP/PS1 двойной трансгенной
мышиной модели болезни Альцгеймера.
В настоящем исследовании изучали эффект Gouqi (Lycium barbarum) на обучение и память,
способности APP/PS1 двойной трансгенной мышиной модели болезни Альцгеймера. Мы
использовали Morris water maze для изучения пространственной памяти у мышей этой линии с или
без Gouqi экстракты лечения. Мы определили, что 2 недели перорального введения Gouqi экстракты в
10 мг/кг улучшена производительность APP/PS1 мышей в обучении и памяти извлечение фазы
лабиринт Морриса. В связи с этим, уровни Aβ(1-42) в ткани гиппокампа были уменьшены на Gouqi
лечения. Мы заключаем, что Фармакологическое лечение с Gouqi экстракты, положительно влияет на
поздних стадиях болезни Альцгеймера.
В настоящем исследовании изучали эффект Gouqi выписки на обучение и память, способность в
трансгенной мышиной модели болезни Альцгеймера. Результаты показали, что Фармакологическое
лечение с Gouqi экстрактов улучшает обучения, поведения и стабилизирует памяти в этих старых
мышей с генетическими дефектами. Механизм может включать подавление Aβ(1-42) накопление в
мозге.
APP/PS1 мыши линии широко принята в качестве модели мыши для AD. В возрасте животное
демонстрирует значительные потери поведения, обучения и памяти, а также синаптической
изменения в ряде областей мозга, в том числе в гиппокампе, коре и мозжечке (15-17). Кроме того,
имеются находки внесения изменений в сосудисто-нервных функций, а также neuroinflammatory
изменения, связанные с поведенческими изменениями (в17,18).
Существует несколько возможных причин, лежащих в основе этого улучшение обучаемости
поведение. Оно ранее было выявлено, что Gouqi экстракты оказывают противовоспалительное
действие на нервную систему и downregulate циркулирующих провоспалительных молекул (1,4,7,19).
В мышиной модели болезни Альцгеймера neuroinflammation рассматривается как потенциальный
фактор, способствующий потере памяти и цепи дисфункции. Таким образом, подавление
воспалительных сигнализации внутри мозга может объяснить положительные эффекты, которые
наблюдались. Другая возможность состоит в прямой регуляции синаптической передачи и
нейронные функции цепи (1). Aβ(1-42) непосредственно снижает синаптическую передачу, особенно
в гиппокампальных синапсах. В текущем исследовании, мы определили, что Gouqi лечения
уменьшается Aβ(1-42) содержание в гиппокампе. Это говорит о том, уменьшилось бляшек и лучше
сохранившихся нейронных цепей. Gouqi экстракты содержат ряд различных молекул и мы еще не
изолировать био-активных компонентов для будущих исследований.
С точки зрения AD профилактики, Gouqi экстракты оказывают нейропротекторный эффект на
различные типы нейронов (11,20). Администрация Gouqi выписки на ранней стадии ад или в стадии
риск, в том числе в легкие когнитивные дисфункции, может быть полезным. Мы ожидаем, что для
проведения дальнейших исследований с использованием молодых мышей.
Exp Ther Med. 2013 May;5(5):1528-1530. Epub 2013 Mar 14.
The effects of Gouqi extracts on Morris maze learning in the APP/PS1 double transgenic mouse model
of Alzheimer's disease.
Zhang Q1, DU X, Xu Y, Dang L, Xiang L, Zhang J.
The present study examined the effects of Gouqi (Lycium barbarum) on the learning and memory abilities
of an APP/PS1 double transgenic mouse model of Alzheimer's disease. We employed a Morris water maze to
examine the spatial memory in this mice line with or without Gouqi extracts treatment. We identified that 2
weeks of oral administration of Gouqi extracts at 10 mg/kg improved the performance of the APP/PS1 mice
in the learning and the memory retrieval phases of the Morris maze. In correlation with this, the levels of
Aβ(1-42) in hippocampal tissue were reduced by the Gouqi treatment. We conclude that pharmacological
treatment with Gouqi extracts is beneficial at the later stages of Alzheimer's disease.
42
Нейропротективных эффектов Lycium barbarum полисахариды в липополисахаридиндуцированной BV2 клеток микроглии.
Полисахариды, извлеченные из Lycium barbarum (LBPs), имеет широкий спектр биологической
активности. Однако, их нейропротективные эффекты еще не были полностью выяснены. Целью
настоящего исследования было изучение ингибирующего влияния LBPs на производство
липополисахарида (ЛПС-индуцированной провоспалительных медиаторов в BV2 микроглии. BV2
мышь микроглии клетки культивировали и МТТ-теста было проведено, чтобы определить, является ли
LBPs имела влияние на апоптоз LPS-стимулированной BV2 клеток. Наши данные показали, что ЛПСиндуцированную активацию ядерного фактора-κB (NF-κB) и вышестоящим белка каспазы 3,
upregulated выражение дополнительного апоптоз-индуцирующий фактор, белок теплового шока 60
(HSP60), в BV2 клеток микроглии и увеличение высвобождения TNF-α и HSP60 в культуре средств
массовой информации. После лечения LBPs, активированный NF-κB и каспазы 3 были значительно
подавлены. Кроме того, усиленная экспрессия HSP60 было уменьшено и LPS-индуцированного
высвобождения TNF-α и HSP60 были заторможены. Эти результаты позволяют предположить, что LBPs
может иметь терапевтический потенциал для лечения нейродегенеративных заболеваний, которые
сопровождаются активацией микроглии.
Mol Med Rep. 2013 Jun;7(6):1977-81. doi: 10.3892/mmr.2013.1442. Epub 2013 Apr 25.
Neuroprotective effects of Lycium barbarum polysaccharides in lipopolysaccharide-induced BV2
microglial cells.
Teng P1, Li Y, Cheng W, Zhou L, Shen Y, Wang Y.
Polysaccharides extracted from Lycium barbarum (LBPs) possess a wide variety of biological activities.
However, their neuroprotective effects have not yet been fully elucidated. The aim of the present study was
to investigate the inhibitory effects of LBPs on the production of lipopolysaccharide (LPS)-induced
proinflammatory mediators in BV2 microglia. BV2 mouse microglial cells were cultured and an MTT assay
was performed to determine whether LBPs had an effect on the apoptosis of LPS-stimulated BV2 cells. Our
data showed that LPS induced the activation of nuclear factor-κB (NF-κB) and its upstream protein caspase
3, upregulated the expression of an additional apoptosis-inducing factor, heat shock protein 60 (HSP60), in
BV2 microglial cells and increased the release of TNF-α and HSP60 in the culture media. Following treatment
with LBPs, the activated NF-κB and caspase 3 were significantly suppressed. Furthermore, the enhanced
expression of HSP60 was reduced and the LPS-induced release of TNF-α and HSP60 were inhibited. These
results suggest that LBPs may have therapeutic potential for the treatment of neurodegenerative diseases
that are accompanied by microglial activation.
Эффект Lycium barbarum на травмы спинного мозга, в частности его отношения с М1 и м2
макрофагов у крыс.
Наши последние исследования предположили, что л. barbarum экспонаты прямое
нейропротекторное и иммунную регуляторные эффекты на центральную нервную систему, которые
имеют непосредственное отношение к событиям, участвующих в травмы спинного мозга, но
исследования не проводились. Иммунные реакции играют важную роль в развитии патологии после
вторичного повреждения, в частности, M1 и M2 типов макрофагов, на котором особое внимание
было уделено в этом исследовании.
Методы:
В наших предыдущих исследованиях л. barbarum назначали перорально 7 дней до травмы, чтобы
обеспечить стабилизированный концентрации в крови. Для клинического применения, л. barbarum
может назначаться только после травмы. Поэтому, как и до травмы и после травмы
администрирования протоколы были сравнены. In vivo и in vitro исследования были проведены и
проанализированы immunohistochemically, в том числе и вестерн-блоттинга.
Результаты:
Размер повреждения в предварительной группе, получавшей был намного больше, чем в постгруппе, получавшей. Чтобы объяснить эту разницу, мы впервые исследовали влияние л. barbarum на
астроциты, которая формирует глиальных рубцов, окружающих новообразование. Л. barbarum
существенно не влияют на астроциты. Затем мы исследовали влияние л. barbarum на
43
микроглии/макрофагов, в частности, M1 и M2 поляризации. После травмы спинного мозга вредное
M1 клетки доминирующего раннего периода, в то время как полезные м2 клетки доминируют позже.
Мы обнаружили, что в предварительной группе, получавшей L. barbarum значительно повышена
экспрессия M1 клеток и подавлены, что M2 клеток, в то время как в пост-группе, получавшей LBP
заметно способствовало активности клеток м2. Этим объясняется разница между пред - и постгруппах, получавших.
Выводы:
Lycium barbarum была дико принято иметь положительное воздействие при различных
заболевания центральной нервной системы. Наш вывод вредное воздействие LBP назначают в
раннем периоде травмы спинного мозга, указывает на то, что для его применения следует избегать.
Существенный положительный эффект LBP при приеме на поздней стадии имеет важные последствия
для клинического применения.
BMC Complement Altern Med. 2013 Mar 22;13:67. doi: 10.1186/1472-6882-13-67.
The effect of Lycium barbarum on spinal cord injury, particularly its relationship with M1 and M2
macrophage in rats.
Zhang YK1, Wang J, Liu L, Chang RC, So KF, Ju G.
Our past researches suggested that L. barbarum exhibits direct neuroprotective and immune regulatory
effects on the central nervous system, which are highly related to the events involved in the spinal cord
injury, but not yet been investigated. Immune responses play an important role in the development of the
pathology after secondary injury, particularly the M1 and M2 types of macrophage, on which special
emphasis was laid in this study.
METHODS:
In our previous studies L. barbarum was administrated orally from 7 days before the injury to ensure a
stabilized concentration in the blood. For clinical application, L. barbarum can only be administered after the
injury. Therefore, both pre-injury and post-injury administration protocols were compared. In vivo and in
vitro studies were conducted and analyzed immunohistochemically, including Western blotting.
RESULTS:
The lesion size in the pre-treated group was much larger than that in the post-treated group. To explain
this difference, we first studied the effect of L. barbarum on astrocytes, which forms the glial scar encircling
the lesion. L. barbarum did not significantly affect the astrocytes. Then we studied the effect of L. barbarum
on microglia/macrophages, particularly the M1 and M2 polarization. After spinal cord injury, the deleterious
M1 cells dominant the early period, whereas the beneficial M2 cells dominate later. We found that in the
pre-treated group L. barbarum significantly enhanced the expression of M1 cells and suppressed that of M2
cells, while in the post-treated group LBP markedly promoted the activity of M2 cells. This explained the
difference between the pre- and post-treated groups.
CONCLUSIONS:
Lycium barbarum has been wildly accepted to have beneficial effects in various central nervous system
diseases. Our finding of deleterious effect of LBP administered at early period of spinal cord injury, indicates
that its application should be avoided. The substantial beneficial effect of LBP when administered at later
stage has an important impact for clinical application.
Биологической деятельности и потенциальные выгоды для здоровья эффекты полисахаридов,
изолированные от Lycium barbarum Л.
Недавно, изоляция и исследование новых ингредиентов и биологической деятельности и пользы
для здоровья эффектов от природных ресурсов, привлекли большое внимание. Плод Lycium barbarum
Л., известный китайский травяной медицины, а также ценный питательный тоник, был традиционно
используется как жаропонижающее, противовоспалительное и анти -- старческое агента в течение
тысяч лет. Современные Фармакологические эксперименты доказали, что полисахарид является
одним из основных ингредиентов в ответе за тех, биологической деятельности в. л. barbarum.
Показано, что л. barbarum полисахариды имели различные биологически важных мероприятий, таких
как антиоксидантные, иммуномодулирующие, противоопухолевые, нейропротекция, радиационной
защиты, анти-диабет, hepatoprotection, против остеопороза и antifatigue. Целью настоящего обзора
является обобщение предыдущей и текущей ссылки, касающиеся биологических видов деятельности,
44
а также потенциальные преимущества для здоровья л. barbarum полисахаридов.
Int J Biol Macromol. 2013 Mar;54:16-23. doi: 10.1016/j.ijbiomac.2012.11.023. Epub 2012 Nov 28.
Biological activities and potential health benefit effects of polysaccharides isolated from Lycium
barbarum L.
Jin M1, Huang Q, Zhao K, Shang P.
Recently, isolation and investigation of novel ingredients with biological activities and health benefit
effects from natural resources have attracted a great deal of attention. The fruit of Lycium barbarum L., a
well-known Chinese herbal medicine as well as valuable nourishing tonic, has been used historically as
antipyretic, anti-inflammation and anti-senile agent for thousands of years. Modern pharmacological
experiments have proved that polysaccharide is one of the major ingredients responsible for those biological
activities in L. barbarum. It has been demonstrated that L. barbarum polysaccharides had various important
biological activities, such as antioxidant, immunomodulation, antitumor, neuroprotection, radioprotection,
anti-diabetes, hepatoprotection, anti-osteoporosis and antifatigue. The purpose of the present review is to
summarize previous and current references regarding biological activities as well as potential health benefits
of L. barbarum polysaccharides.
[Эффект экстракта Lycium barbarum Л на взрослого человека ретинальных нервных клеток].
Чтобы изучить возможное защитное действие экстракта Lycium barbarum Л. М. О культуре
человеческих нервных клеток сетчатки.
Методы:
Сетчатки нервные клетки были ко-культивированных с экстрактом Lycium barbarum Л. и 24 часа и 72
часа спустя, сетчатки нервные клетки были соответственно использованы для оценки клеточной
пролиферации с МТТ проб; наблюдать за тем, ultracellular структурных чередовании с
просвечивающей электронной микроскопии (Пэм) и оценки митохондриальных мембранных
потенциалов (ММП) клетками с конфокальной микроскопии. Пики ММП между экспериментом
группы и контрольной группы сравнивали с помощью одностороннего дисперсионного анализа.
Результаты:
Co, культивируемых нервных клеток сетчатки с экстрактом были показаны выживания под TEM
включая сегменты фоторецепторных оставшиеся хорошо, обилие митохондрий во внутренних
сегментах и распределение хроматина в фоторецепторных ядра (F = 124.110, P < 0,05). Добавлением
экстракта способствовало выживаемость взрослых нейронов сетчатки, существенно зависящей от
концентрации образом, с сильным эффектом в 20 г/л клеточной выживаемости (24 ч и 72 ч); (223.23 ±
12.13)% и (252.35 ± 13.24)%. Пик ММЗ увеличил 848% после первого добавления экстракта (р = 0,000)
и 1152% после второго добавления экстракта (р = 0,000). Он показал, что экстракт может усиливать
ММП значительно волнообразное собственности.
Выводы:
Экстракт Lycium barbarum Л. показала защитное действие на культуре клеток и могут быть
использованы в лечении некоторых заболеваний сетчатки в будущем.
Zhonghua Yan Ke Za Zhi. 2012 Sep;48(9):824-8.
[Effect of extract of Lycium barbarum L. on adult human retinal nerve cells].
[Article in Chinese]
Shen ZJ1, Wang JJ, Li GL.
To study possible protective effects of extract of Lycium barbarum L. on the cultured human retinal nerve
cells.
METHODS:
Retinal nerve cells were co-cultured with the extract of Lycium barbarum L. and 24 hours and 72 hours
later, retinal nerve cells were respectively used to evaluate cell proliferation with MTT assays; to observe
ultracellular structural alternation with transmission electron microscopy (TEM) and to evaluate
mitochondrial membrane potentials (MMP) of cells with confocal microscopy. The peaks of MMP between
experiment group and control group were compared using one-way analysis of variance.
RESULTS:
Co-cultured retinal nerve cells with the extract were shown survival well under the TEM including
photoreceptor segments remaining well, abundant mitochondria in inner segments and well-distributed
45
chromatin in photoreceptor nucleus (F = 124.110, P < 0.05). The addition of the extract promoted survival of
adult retinal neurons significantly in concentration-dependent manner with the strongest effect in 20 g/L.
Cell survival rate (24 h and 72 h); (223.23 ± 12.13)% and (252.35 ± 13.24)%. The peak of MMP increased
848% after the first adding of the extract (P = 0.000) and 1152% after the second adding of the extract (P =
0.000). It showed that the extract could enhance the MMP significantly with undulatory property.
CONCLUSIONS:
The extract of Lycium barbarum L. showed protective effects on cultured cells and could be used in
treatment of some retinal diseases in future.
Lycium barbarum полисахарид стимулирует пролиферацию клеток MCF-7 с помощью ERK пути.
Целью данного исследования было изучение анти-пролиферативный эффект Lycium barbarum
полисахарида (LBP) на MCF-7 клеток.
ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ:
MCF-7 клетки были обработаны 0, 10, 30, 100 и 300 мкг/мл LBP в течение 24 ч. Клеточный цикл
распределения анализировали методом проточной цитометрии. Ингибитор MEK, U1206 также был
добавлен в MCF-7 клеток, чтобы справиться с LBP (300 мкг/мл) при различных временах(0, 2, 4, 6, 8,
16, 24 h). Вестерн-блотинга был использован, чтобы указать на изменения в уровнях ERK (extracellular
signal-регулируемой киназы протеина) и фосфорилирование ERK (p-ERK), чтобы сравнить отношения
между ЭРК деятельности и LBP. Выражения р53, р-р53 и р21 наблюдались с помощью вестернблоттинга анализ взаимосвязи между р53 и ЭРК, который находился под лечение LBP.
ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ:
MCF-7 клеток цикла был арестован в S-фазе с лечением LBP. В LBP может также активировать ЭРК,
которые могут быть связаны с р53 пути. Там был дозо-зависимое увеличение соотношения между
степенью активации ERK и LBP.
Значение:
LBP индуцирует анти-пролиферация клеток MCF-7 с помощью активации ERK.
Life Sci. 2012 Sep 24;91(9-10):353-7. doi: 10.1016/j.lfs.2012.08.012. Epub 2012 Aug 15.
Lycium barbarum polysaccharide stimulates proliferation of MCF-7 cells by the ERK pathway.
Shen L1, Du G.
The aim of this study was to investigate the anti-proliferative effect of Lycium barbarum polysaccharide
(LBP) on MCF-7 cells.
MAIN METHODS:
MCF-7 cells were treated with 0, 10, 30, 100, and 300 μg/ml LBP for 24 h. The cell cycle distribution was
analyzed by flow cytometry. MEK inhibitor, U1206 also was added in MCF-7 cells to deal with LBP (300
μg/ml) for different times (0, 2, 4, 6, 8, 16, 24 h). Western blotting was used to indicate changes in the levels
of ERK (extracellular signal-regulated protein kinase) and phosphorylation-ERK (p-ERK) to compare the
relationship between ERK activity and LBP. The expressions of p53, p-p53 and p21 were observed by western
blotting to analyze the relationship between p53 and ERK which was under the treatment of LBP.
KEY FINDINGS:
The MCF-7 cell cycle was arrested in S phase with the treatment of LBP. The LBP can also activate ERK,
which may be associated with p53 pathway. There was a dose-dependent increase in the relation between
the degree of ERK activation and LBP.
SIGNIFICANCE:
LBP induces the anti-proliferation of MCF-7 cells by activating ERK.
Мета-анализ клинических улучшения общего самочувствия по стандартизованной Lycium
barbarum.
Четыре рандомизированных слепых плацебо-контролируемых клинических исследований были
объединены для изучения общие эффекты перорального потребления Lycium barbarum в 120 мл в
день, как стандартизированная сок, Гочи(®) (FreeLife International, Phoenix, AZ, USA). Анкету,
состоящую из симптомов градуированных 0-5 было уделено участникам. Для каждого вопроса,
оценка изменения в анкете между пре - и postintervention подвел стандартизированная средняя
разница и связанные SE для выполнения Мета-анализа. Изменение характеризовалось также в
46
двоичный результат, улучшилось или не для того, чтобы извлечь отношение шансов (or) и связанные
SE, полученный двоичный результат с помощью Mantel-Haenszel метод. Мета-анализ и
неоднородность оценивали с R-программы с помощью rmeta пакет. Статистическая значимость была
определена в 5%. В общей сложности 161 участника (18-72 лет) были включены в Мета-анализ. По
сравнению с группой плацебо (n=80), активная группа (n=81), показали значительное улучшение в
слабость, стресс, острота ума, легкость пробуждения, одышка, сосредоточиться на активности,
качество сна, дремоты, и общего ощущения здоровья и благополучия в рамках модели случайных
эффектов. Фиксированными эффектами модель показала, дополнительные улучшения в усталости,
депрессии, обращения и спокойствие. Или указано значительно более высокий шанс улучшить
усталость, головокружение, и качество сна. Три исследования были статистически значимой
гетерогенности в оттяжке, жесткость плеча, энергии и спокойствия. Настоящий Мета-анализ
подтвердил, различные последствия для здоровья л. barbarum полисахариды-стандартизированные
л. barbarum потребление, найденные в предыдущих рандомизированных, двойных слепых, плацебоконтролируемых клинических испытаниях и открыл это привело к статистически значимые улучшения
в неврологическом/психологическая работоспособность и общее чувство здоровья и благополучия по
сравнению с группой плацебо в группе, оба фиксированных и случайных эффектов, моделей R
программы.
J Med Food. 2012 Nov;15(11):1006-14. doi: 10.1089/jmf.2012.0013. Epub 2012 Aug 16.
A meta-analysis of clinical improvements of general well-being by a standardized Lycium barbarum.
Paul Hsu CH1, Nance DM, Amagase H.
Four randomized, blind, placebo-controlled clinical trials were pooled to study the general effects of oral
consumption of Lycium barbarum at 120 mL/day, as a standardized juice, GoChi(®) (FreeLife International,
Phoenix, AZ, USA). A questionnaire consisting of symptoms graded 0-5 was given to the participants. For
each question, the score changes in the questionnaire between pre- and postintervention were summarized
by the standardized mean difference and associated SE to perform the meta-analysis. The change was also
characterized into a binary outcome, improved or not, to derive odds ratio (OR) and associated SE derived
by a binary outcome using the Mantel-Haenszel method. The meta-analysis and heterogeneity were
evaluated with the R program using the rmeta package. Statistical significance was set at 5%. In total, 161
participants (18-72 years old) were included in the meta-analysis. Compared with the placebo group (n=80),
the active group (n=81) showed significant improvements in weakness, stress, mental acuity, ease of
awakening, shortness of breath, focus on activity, sleep quality, daydreaming, and overall feelings of health
and well-being under a random effects model. A fixed effects model showed additional improvements in
fatigue, depression, circulation, and calmness. The OR indicated significantly higher chance to improve
fatigue, dizziness, and sleep quality. Three studies had statistically significant heterogeneity in
procrastination, shoulder stiffness, energy, and calmness. The present meta-analysis confirmed the various
health effects of L. barbarum polysaccharides-standardized L. barbarum intake found in the previous
randomized, double-blind, placebo-controlled human clinical trials and revealed it resulted in statistically
significant improvements in neurological/psychological performance and overall feelings of health and wellbeing compared with the placebo group under both the fixed and the random effects models of the R
program.
Анти-воспалительные и анти-ангиогенных эффектов флавоноидов, изолированные от Lycium
barbarum Линней на эндотелиальных клетках пупочной вены человека.
Анти-воспалительные и анти-ангиогенных эффектов флавоноидов, изолированные от Lycium
barbarum фрукты, традиционной китайской медицины, на эндотелиальных клетках пупочной вены
человека (HUVECs) были исследованы. Изначально, флавоноиды экстрагировали 80% этанола и
разделены с использованием Cosmosil 140 C18-OPN колонка, с кислой фракции элюировать с
деионизированной воды, в состав которых входят хлорогеновая кислота, caffeoyl хинная кислоты,
кофейной кислоты и р-кумаровая кислоты и нейтральной фракции, используя в качестве элюента
метанол в составе кверцетин-diglycoside, рутин и кемпферол-O-rutinoside. Флавоноид экстракта
эффективное подавление экспрессии межклеточной молекулы адгезии-1 (ICAM-1) и сосудистой
молекулы клеточной адгезии (VCAM-1), индуцированной TNF-α в HUVECs. РТ-ПЦР анализ показал, что
ICAM-1 мРНК, вызванных ФНО-α был тормозится флавоноид экстракта. Флавоноид экстракта
47
ослабляется, TNF-α-индуцированных IκB фосфорилирования, а также NF-κB, p65 и Р50 транслокацию
из цитозоле ядра, через подавление ФНО-α и H(2)O(2)-индуцированных внутриклеточных активных
форм кислорода (АФК) производства. Для анти-ангиогенных исследования, флавоноидов экстракт
ингибирует фактор роста эндотелия сосудов (VEGF)-индуцированной пролиферации и миграции в
HUVECs, а также ангиогенеза. Однако, флавоноид экстракта не ингибирует VEGF-сигнального пути.
Удивительно, HUVECs адгезии и внеклеточного матрикса была скомпрометирована и адгезияиндуцированных сигнальных был задержан благодаря флавоноид экстракта.
Food Funct. 2012 Oct;3(10):1068-81. Epub 2012 Jul 3.
Anti-inflammatory and anti-angiogenic effects of flavonoids isolated from Lycium barbarum Linnaeus
on human umbilical vein endothelial cells.
Wu WB1, Hung DK, Chang FW, Ong ET, Chen BH.
Anti-inflammatory and anti-angiogenic effects of flavonoids isolated from Lycium barbarum fruits, a
traditional Chinese medicine, on human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were investigated. Initially,
flavonoids were extracted with 80% ethanol and separated using a Cosmosil 140 C18-OPN column, with the
acidic fraction eluted with deionized water being composed of chlorogenic acid, caffeoyl quinic acid, caffeic
acid and p-coumaric acid and the neutral fraction eluted with methanol composed of quercetin-diglycoside,
rutin and kaempferol-O-rutinoside. Flavonoid extract was effective in inhibiting expression of intercellular
adhesion molecule-1 (ICAM-1) and vascular cell adhesion molecule (VCAM-1) induced by TNF-α in HUVECs.
The RT-PCR analysis indicated that ICAM-1 mRNA induced by TNF-α was inhibited by flavonoid extract. The
flavonoid extract attenuated TNF-α-induced IκB phosphorylation as well as NF-κB, p65 and p50 translocation
from cytosol to nucleus, through inhibition on TNF-α- and H(2)O(2)-induced intracellular reactive oxygen
species (ROS) production. For the anti-angiogenic study, the flavonoid extract inhibited vascular endothelial
growth factor (VEGF)-induced cell proliferation and migration in HUVECs, as well as angiogenesis. However,
the flavonoid extract did not inhibit VEGF signaling. Surprisingly, HUVECs adhesion to the extracellular
matrix was compromised and adhesion-induced signaling was retarded by the flavonoid extract.
Lycium barbarum полисахарид ингибирует пролиферацию клеток HeLa путем индукции апоптоза.
Lycium barbarum полисахарида (LBP), изолированных кипятком от знаменитых китайских
лекарственных трав Lycium barbarum фрукты, является одной из важнейших функциональных
составляющих в Lycium barbarum. В этом исследовании влияния LBP на пролиферацию клеток,
клеточный цикл и апоптоз клеток карциномы шейки матки человека (HeLa клеток) были исследованы.
Результаты:
LBP может ингибировать пролиферацию клеток HeLa, изменяя распределение клеточного цикла и
индукции апоптоза. Кроме того, потеря митохондриального трансмембранного потенциала (Δψ(m) )
наблюдалась методом проточной цитометрии и увеличению внутриклеточного Ca(2+) концентрация
была обнаружена с помощью лазерного сканирующего конфокального микроскопа в апоптотических
клеток. В то же время, содержание оксида азота, оксида азота синтазы и индуцируемая No-синтаза
деятельности также были увеличены.
Вывод:
Ингибиторный эффект LBP на пролиферацию клеток HeLa была вызвана индуцирует апоптоз через
митохондриальный путь. Результаты показали, что LBP могут быть разработаны в качестве
потенциального химиотерапевтический агент кандидата против карциномы шейки матки человека.
J Sci Food Agric. 2012 Jun 13. doi: 10.1002/jsfa.5743. [Epub ahead of print]
Lycium barbarum polysaccharide inhibits the proliferation of HeLa cells by inducing apoptosis.
Zhu CP1, Zhang SH.
Lycium barbarum polysaccharide (LBP), isolated with boiling water from the famous Chinese medicinal
herb Lycium barbarum fruits, is one of the most important functional constituents in Lycium barbarum. In
this study the effects of LBP on cell proliferation, cell cycle and apoptosis in human cervical carcinoma cells
(HeLa cells) were investigated.
RESULTS:
LBP could inhibit the proliferation of HeLa cells by changing cell cycle distribution and inducing apoptosis.
In addition, the loss of mitochondrial transmembrane potential (Δψ(m) ) was observed by flow cytometry
and the increase of intracellular Ca(2+) concentration was detected by laser scanning confocal microscope in
48
apoptotic cells. At the same time, the nitric oxide content, nitric oxide synthase and inducible nitric oxide
synthase activities were also increased.
CONCLUSION:
The inhibitory effect of LBP on the proliferation of HeLa cells was caused by inducing apoptosis through
the mitochondrial pathway. The results showed that LBP can be developed as a potential chemotherapeutic
agent candidate against human cervical cancer. Copyright © 2012 Society of Chemical Industry.
Полисахариды из Lycium barbarum листья: выделение, характеристика и splenocyte
пролиферативную активность.
Полисахаридов из плодов Lycium barbarum получили значительное внимание в предыдущей
публикации, но полисахаридов из листьев редко сообщается. В настоящей работе, четыре
водорастворимых полисахаридных фракций: LBP-я, LBP-II, LBP-III и LBP-IV изолированы от л. barbarum
листья были очищены с помощью DEAE-Сефадексе а-25. LBP-II и LBP-IV соответственно показал один
симметричный пик на HPGPC со средней молекулярной массой 9,39 × 10⁴ да и 4.18 × 10⁵ да. УФ-и ИКанализа двух фракций показал, характеристики кислых полисахаридов в сочетании с полипептиды
или белки. ГЖХ анализ показал, LBP-IV был, в основном, рамноза, арабиноза, ксилозы, галактозы и
глюкозы с молярной соотношением 1.61:3.82:3.44:7.54:1.00, и уроновые кислоты содержание было
47.68% (w/w) определяется серной кислоты-карбазол метод. 1H и 13C ЯМР спектры LBP-IV также
показал наличие углерода карбоксильной и пять аномерный угли, и предложил там, может быть, как
α - и β-аномерный конфигураций в этой фракции. Кроме того, splenocyte пролиферативную
активность анализ показал, что LBP-IV значительно усиливают пролиферацию splenocyte,
стимулированных Кона или LPS, с указанием дробь имеет благотворное влияние на
иммуностимулирующей активностью
Int J Biol Macromol. 2012 Nov;51(4):417-22. doi: 10.1016/j.ijbiomac.2012.05.025. Epub 2012 May 28.
Polysaccharides from Lycium barbarum leaves: isolation, characterization and splenocyte proliferation
activity.
Liu H1, Fan Y, Wang W, Liu N, Zhang H, Zhu Z, Liu A.
The polysaccharides from the fruits of Lycium barbarum have received considerable attention in previous
publication, but the polysaccharides from the leaves were rarely reported. In the present work, four watersoluble polysaccharide fractions: LBP-I, LBP-II, LBP-III and LBP-IV isolated from L. barbarum leaves were
purified through DEAE-Sephadex A-25. LBP-II and LBP-IV respectively showed one symmetrical peak on
HPGPC with average molecular weight of 9.39 × 10⁴ Da and 4.18 × 10⁵ Da. UV and IR analysis of the two
fractions showed the characteristics of acidic polysaccharides combined with polypeptides or proteins. GC
analysis showed LBP-IV was mainly composed of rhamnose, arabinose, xylose, glucose and galactose with
molar ratio of 1.61:3.82:3.44:7.54:1.00, and the uronic acid content was 47.68% (w/w) determined by
sulfuric acid-carbazole method. ¹H and ¹³C NMR spectra of LBP-IV also showed the presence of carboxyl
carbon and five anomeric carbons, and suggested there may be both α- and β-anomeric configurations in
this fraction. Moreover, splenocyte proliferation activity assay showed that LBP-IV significantly enhanced the
proliferation of splenocyte stimulated by ConA or LPS, indicating the fraction has the beneficial effect on
immunostimulating activity.
Индуцибельных эффект LBP на созревание дендритных клеток и связанных с иммунной
сигнальных путей в гепатоцеллюлярной карциномы (ГЦК).
Цель: изучить влияние LBP на дифференцировку и созревание здоровых периферической крови
человека, полученных дендритные клетки культивировали в различных опухоли микроокружения in
vitro, и обсудить молекулярных и иммунологических механизмов LBP в лечении опухоли. Методы: в
этом исследовании, мы закупаемых периферической крови, полученных дендритные клетки, клеткипредшественницы с помощью градиента плотности центрифугировании, и использовал опухолевых
клеток супернатанта подготовить кондиционером среднего. GM-CSF и IL-4 индуцированной DCs
предшественником клеточной дифференцировки ДК, TNF-α повышен незрелых DCs разработана для
зрелой DCs. Таким образом, мы выявили влияние LBP на выражения поверхностных молекул DCs
культивируемых в разных условиях, и особенно о роли, связанные иммунитет и NF-κB деятельности.
Результаты: в LBP группе, получавшей молекулярный фенотип DCs, его способностью стимулировать
49
аллогенные пролиферацию лимфоцитов, а уровень IL-12p70 и IFN-γ секреции были выше, чем
контрольной группы (p < 0,05), со статистической значимостью. Между тем экспрессии NF-κB
контроллеры домена в среде, обработанной LBP была выше, чем контрольной группы (p < 0,05,), а
также статистической значимости. Между двумя разными опухоли микроокружения групп, ядро
клетки белка NF-κB выражение, очевидно, отличается, hepG2.2.15 группы было выше, чем hepG2
группы. Вывод: LBP может повышение экспрессии фенотипа DCs, секреции IL-12p70 и IFN-γ в MLR, и
повышения NF-κB выражение, особенно в связанных с вирусами группы, предполагая, LBP играет
противоопухолевый роль сильнее, связанных с вирусами, окружающей среды, и это явление
коррелирует с NF-κB сигнального пути.
Curr Drug Deliv. 2012 Jul;9(4):414-20.
The inducible effect of LBP on maturation of dendritic cells and the related immune signaling pathways
in hepatocellular carcinoma (HCC).
Chen JR1, Li EQ, Dai CQ, Yu B, Wu XL, Huang CR, Chen XY.
Objective: To investigate the effect of LBP on differentiation and maturation of healthy human peripheral
blood-derived dendritic cells cultured in different tumor microenvironment in vitro, and discuss the
molecular and immunological mechanisms of LBP in treatment of tumor. Methods: In this study, we
procured the peripheral blood-derived dendritic cells precursor cell by the Density gradient centrifugation
method, and used the tumor-cell supernatant to prepare conditioned medium. The GM-CSF and IL-4
induced DCs precursor cell differentiation to DCs, the TNF-α promoted the immature DCs developed to
mature DCs. In this way, we detected the influence of LBP on the expressions of surface molecules of DCs
cultured in different environments, and especially on the role of related-immunity and NF-κB activity.
Results: In LBP-treated group, the molecular phenotype of DCs, its capacity to stimulate allogeneic
lymphocyte proliferation, and the levels of IL-12p70 and IFN-γ secretion were higher than the untreated
group (p < 0.05), with statistical significance. Meanwhile the expression of NF-κB of the DCs in the medium
treated by the LBP was higher than the untreated group (p < 0.05), also with statistical significance. Between
the two different tumor microenvironment groups, the cell nucleus protein NF-κB expression is obviously
different, the hepG2.2.15 group higher than the hepG2 group. Conclusion: LBP could increase the
expression of the phenotype of DCs, the secretion of IL-12p70 and IFN-γ in MLR, and enhance the NF-κB
expression, especially in the virus-related group, suggesting LBP plays the anti-tumor role stronger in the
virus-related environment and this phenomenon correlates with the NF-κB signaling pathway.
[Обсуждение защитный механизм лицея barbarum полисахариды на ткани яичников самок крыс
старческого].
Изучение защитного механизма лицея barbarum полисахариды (LBP) на ткани яичников в женском
старческого крыса.
Методы:
Старческое крыс на 14 месяцев, были разделены случайным образом в группы моделей,
положительной группы препаратов, LBP низкая дозировка группы, LBP средних терапевтических дозах
группы и LBP высоких дозах группы. SD самок крыс 4 месяцев формируется Молодежная группа. 30
дней после приема,в крови крыс было принято, радиоиммунологического анализа был использован
для определения уровней эстрона и прогестерона и иммуноферментного анализа был использован
для определения уровня IGF-I. затем ткани яичника было принято определять уровни IGFBP-1 и IGFR.
Результаты:
Ежедневная пероральная LBP(60,40,20 мг/кг массы тела) в течение 30 дней значительно
восстановился атрофия матки и восстановленной сыворотки IGF-I уровень эстрона и прогестерона,
которые были снижены в старших крыс, снижение выражения IGFBP-1 в ткани яичника, которые были
увеличены в старших крыс.
Вывод:
LBP обладает заметным защиты на крыса яичниковой системы.
Zhong Yao Cai. 2011 Dec;34(12):1915-8.
[Discussion of protective mechanism of Lyceum barbarum polysaccharides on ovarian tissue in female
senile rats].
[Article in Chinese]
50
Wei M1, Zheng SZ, Ma H, Lv Y.
To study the protective mechanism of Lyceum barbarum polysaccharides (LBP) on ovarian tissue in female
senile rat.
METHODS:
Senile rats of 14 months old were divided randomly into model group, positive drug group, LBP low
dosage group, LBP medium dosage group and LBP high dosage group. SD female rats of 4 months old
formed a youth group. 30 days after administration,rat blood was taken, radioimmunoassay was employed
to determine the levels of estrone and progesterone and enzyme immunoassay was used to determine the
levels of IGF-I. Then ovarian tissue was taken to determine the levels of IGFBP-1 and IGFR.
RESULTS:
Daily oral LBP(60,40,20 mg/kg body weight) for 30 days significantly recovered uterine atrophy and
restored serum IGF-I level, estrone and progesterone levels that were decreased in elder rats, reduced the
expressing of IGFBP-1 in ovarian tissue that were increased in elder rats.
CONCLUSION:
LBP has a notable protection on rat ovarian system.
Lycium barbarum экстракты защищают мозг через гематоэнцефалический барьер нарушения и
отек мозга в экспериментальных инсульта.
Ишемический инсульт является разрушительной цереброваскулярным заболеванием и основной
причиной смерти. Но, нет идеала нейропротективные агенты доступны, оставив профилактики
привлекательной альтернативой. Экстракты из плодов Lycium barbarum (LBP), китайский anti-aging
медицины и пищевых добавок, показали, нейропротекторной функции сетчатки при данной
профилактически. Мы стремимся, чтобы оценить защитный эффект LBP предварительной обработки в
экспериментальной тактные модели.
Методы:
C57BL/6N самцов мышей были сначала кормил либо транспортного средства (PBS) или LBP (1 или 10
мг/кг) ежедневно в течение 7 дней. Мыши были затем подвергнуты 2 часа переходных средней
мозговой артерии (СМА) (MCAO) путем внутрипросветного методом с последующим 22-часовой
реперфузии после удаления нити. Мышей оценивали неврологический дефицит, просто перед
жертвоприношением. Мозги были собраны для оценки размеров инфаркта, измерений содержания
воды, иммуногистохимический анализ, и вестерн-блот-экспериментов. Evans blue (EB) транссудации
была определена для оценки гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) нарушение после MCAO.
Результаты:
LBP предварительного лечения значительно улучшилось неврологического дефицита, а также
уменьшать Размер инфаркта, полушарный отек, и содержание воды. Меньшее количество
апоптотических клеток были выявлены в LBP-лечить мозги, TUNEL анализа. Снижение EB
транссудации, меньше IgG-дырявый судов и регулирования occludin выражение наблюдались также в
LBP-лечить мозги. Кроме того, иммунореактивность для аквапорин-4 и glial fibrillary acidic protein
значительно сократились в LBP-лечить мозги.
Выводы:
Семь дней устной LBP предварительной обработки эффективного повышения неврологическим
дефицитом, сократилось определение размера инфаркта и отека головного мозга, а также
охраняемых мозг от BBB нарушение, аквапорин-4 до-регулирование и глиальных активации.
Настоящее исследование предполагает, что LBP может быть использован в качестве
профилактического neuroprotectant у больных с высоким риском ишемического инсульта.
Обсуждение
Плод Lycium barbarum (Gouqizi, Wolfberry, Fructus Lycii широко применяется в качестве
традиционного лекарственного вещества и пищевые добавки в Китае на протяжении десятилетий.
Кроме того, она становится все более популярным в западных странах как средство против старения
[29]. До сих пор никаких побочных эффектов или токсичности были зарегистрированы [29]. Последние
исследования Lycium barbarum были сосредоточены на своей ценных компонентов, известных как
Lycium barbarum полисахариды (LBP), что составляет более 40% фруктовый экстракт. Основные
компоненты в LBP включают глюкозы, арабинозы, галактуроновой кислоты, галактозы и [19]. Мы
51
показали в этом исследовании, что LBP экстракты оказывал существенное нейропротекция при
данной профилактически. Это может быть один положительный эффект для пациентов с высоким
риском ишемического инсульта.
Кроме LBP, другие полисахаридные экстракты, также было показано, обладают нейропротективным
эффектами в церебральных ишемических повреждений. Например, полисахариды из Hyriopsis
cumingii выставлены нейропротекторной функции через анти-апоптотических и анти-окислительной
деятельности в крысу церебральной ишемии/реперфузии [30]; Ganoderma lucidum полисахариды
могут защитить от крыс ишемии головного мозга путем ингибирования апоптоза и возможные
механизмы могут быть связаны с модуляцией Bcl-2 и каспазы-3 пути [31]; Кактус полисахаридов
может снизить нейрональный апоптоз и окислительный стресс при ишемии головного мозга крыс, а
также [32]. Здесь мы говорим о впервые, что LBP может облегчить BBB нарушения и отек мозга, в
результате чего резко нейропротекции после ишемического инсульта.
Острый эксайтотоксичности, окислительного стресса и воспаления на три основных механизмов,
участвующих в клеточной гибели во время ишемического инсульта. Они заметно повредить
сосудисто-нервный блок, который включает в себя нейроны, глия и сосудистого компонентов. [9].
Гибель клеток в пределах инфаркт ядро может быть необратимыми без ранней реперфузии, однако,
перспективные нейропротекторы, которая может предотвратить повреждение нейронов принести
надежду на спасение умирающих клеток в penumbral области. Наши предыдущие исследования
показали, что предварительная обработка LBP мог защитить ганглиозных клеток сетчатки от апоптоза
в сетчатке модели [20]. В настоящем исследовании, улучшение неврологического дефицита и
меньший размер инфаркта наблюдались в LBP-мышей. Кроме того, мы отметили меньшее количество
апоптотических клеток в penumbral области TUNEL анализа, который был похож на наши результаты в
сетчатке. Дальнейшие наблюдения на nitrosative стресса и перекисного окисления липидов (NT и
номинальной) предположил, что на антиоксидантный эффекты LBP может содействовать меньше
миокарда и лучше неврологический исход. Мы также подтвердили нейропротективных эффектов LBP
предварительной обработки на культивируемых нейронов и предположил, что возможным
механизмом может быть его ингибиторных эффектов в JNK и ERK сигнального пути [18], [33].
Церебральной ишемии и реперфузии запускает каскад клеточных событий, включая гибель клеток,
окислительный стресс и воспаление, которые способствуют расщеплению BBB [9]. BBB нарушения,
усугубляет либо vasogenic отек или геморрагическая трансформация, которая приводит к тяжелым
неврологическим дефицитом [1]. В нашем исследовании мы исследовали целостности ВВВ, Evans blue
анализа и IgG иммуногистохимии, которые, как показало снижение проницаемости ГЭБ после LBP
предварительной обработки. Кроме того, меньше нарушается узкие переходы, указанном выше
выражение occludin в LBP-лечить мозги поддерживаются текущие данные. Эти результаты согласуются
с нашими предыдущими данных, которые показали, LBP предварительной обработки может защитить
крови-ретинального барьера, нарушению сетчатки после ишемии/реперфузии [20]. Общепризнано,
что матриксные металлопротеиназы (ММП) играют главные ферменты положительно, связанного с
нарушением BBB после ишемического повреждения. Повышенные ММП-9 экспрессия наблюдалась в
течение первых трех дней после ишемического инсульта, и она выставлена тесной связи со степенью
BBB пробоя [34]. В соответствии с предыдущими исследованиями [35], [36] повышенный уровень
ММП-9 иммунореактивности отмечалось, в автомобиле-лечить мозги через 24 часа после ишемии
головного мозга в ходе нашего расследования. Как и ожидалось, ММП-9 выражение было, в
основном, расположены в эндотелиальных клетках вдоль сосудов в penumbral районах. С 7-день LBP
предварительной обработки, повышенная экспрессия ММП-9 была заметно ослабляется, указывая,
что защитные эффекты LBP на ВВВ нарушение может частично относящихся к down-регуляции ММП-9.
Отек мозга-это вредно есть после ишемического инсульта, и одним из факторов результативности
клинического ухудшения состояния в течение первых 24 часов после начала инсульта [37]. Отек,
вызванный отек приносит вредного воздействия на соседние номера-ишемизированных тканей, изза фиксированного объема черепа и дальше влияет на прогноз пациентов [4], [38]. Здесь мы
отметили, что предварительная обработка LBP снижением мозгового отека и содержание воды в
травмированном полушарии, предполагая, что LBP полезно, чтобы уменьшить отек мозга после
MCAO. Помимо этих выводов, мы в дальнейшем было изучено влияние LBP на AQP4. AQP4 является
принципиальным водовода белка, отвечающего за движение воды в паренхиму мозга.
52
Многочисленные исследования показали, что уровень экспрессии AQP4 до регулируемых после
церебральных ишемических повреждений [10], [28], [39]. В последнее время, AQP4 стала
потенциальной терапевтической мишени для лечения отека головного мозга при ишемическом
инсульте [39]. Наше исследование показало, Нижний иммунологическую AQP4 в LBP-лечить мозги,
показывая, что противоотечный эффекты LBP частично может действовать через его модуляции
экспрессии AQP4.
Следует отметить, что относительная CBF измерения в данном исследовании указывается только
кровь потоком данных, полученных в результате пятно в центре средней мозговой артерии
территории, т.е. ишемическое ядро. В действительности, существует вероятность того, что кровоток в
полутени изменяется на LBP предварительной обработки. Однако, на данный момент, существует не
достаточно свидетельств в текущем исследовании, показывают, что поток крови в полутени
изменяется на LBP предварительной обработки. Дальнейшее исследование необходимо, чтобы
исследовать эффекты LBP улучшения мозгового кровообращения после инсульта.
Взятые вместе, нейропротективных эффектов LBP предварительной обработки на ишемического
инсульта включают в себя анти-апоптоз, сохранения BBB целостности и снижения отека головного
мозга. На основе текущих результатов, эти защитные эффекты могут действовать через антиокисления и вниз-регулирование ММП-9. Настоящее исследование ясно показывает, что
благотворное профилактическое воздействие LBP против ишемического повреждения и отека
головного мозга в мышиных экспериментального инсульта модели. Хотя активные ингредиенты LBP в
защите ишемического инсульта остается неизвестным, LBP pre-тактный режим дозирования и может
иметь потенциал в переводе на клинических ситуациях для больных высокого риска.
PLoS One. 2012;7(3):e33596. doi: 10.1371/journal.pone.0033596. Epub 2012 Mar 16.
Lycium barbarum extracts protect the brain from blood-brain barrier disruption and cerebral edema in
experimental stroke.
Yang D1, Li SY, Yeung CM, Chang RC, So KF, Wong D, Lo AC.
Ischemic stroke is a destructive cerebrovascular disease and a leading cause of death. Yet, no ideal
neuroprotective agents are available, leaving prevention an attractive alternative. The extracts from the
fruits of Lycium barbarum (LBP), a Chinese anti-aging medicine and food supplement, showed
neuroprotective function in the retina when given prophylactically. We aim to evaluate the protective
effects of LBP pre-treatment in an experimental stroke model.
METHODS:
C57BL/6N male mice were first fed with either vehicle (PBS) or LBP (1 or 10 mg/kg) daily for 7 days. Mice
were then subjected to 2-hour transient middle cerebral artery occlusion (MCAO) by the intraluminal
method followed by 22-hour reperfusion upon filament removal. Mice were evaluated for neurological
deficits just before sacrifice. Brains were harvested for infarct size estimation, water content measurement,
immunohistochemical analysis, and Western blot experiments. Evans blue (EB) extravasation was
determined to assess blood-brain barrier (BBB) disruption after MCAO.
RESULTS:
LBP pre-treatment significantly improved neurological deficits as well as decreased infarct size,
hemispheric swelling, and water content. Fewer apoptotic cells were identified in LBP-treated brains by
TUNEL assay. Reduced EB extravasation, fewer IgG-leaky vessels, and up-regulation of occludin expression
were also observed in LBP-treated brains. Moreover, immunoreactivity for aquaporin-4 and glial fibrillary
acidic protein were significantly decreased in LBP-treated brains.
CONCLUSIONS:
Seven-day oral LBP pre-treatment effectively improved neurological deficits, decreased infarct size and
cerebral edema as well as protected the brain from BBB disruption, aquaporin-4 up-regulation, and glial
activation. The present study suggests that LBP may be used as a prophylactic neuroprotectant in patients at
high risk for ischemic stroke.
[Защитный эффект Lycium barbarum экстракт против MPP(+) -индуцированной нейротоксичности
в Caenorhabditis elegans и PC12 клеток].
Для расследования нейропротективных эффектов Lycium barbarum экстракт против MPP(+) индуцированной нейротоксичности в Caenorhabditis elegans и PC12 клетки и ее механизм. Методы:
53
предварительно обработанные MPP(+) -индуцированной nearotoxicity в C. elegans и PC12 клеток с
Lycium barbarum в разных дозах. Жизнеспособность и да нейродегенерации был оценен в C. elegans
выборочно, экспрессирующих зеленый флуоресцентный белок (GFP) в DA нейронов. PC12
повреждения клеток измеряли с помощью МТТ и ядерной морфологии. Внутриклеточных активных
форм кислорода (АФК), митохондриального мембранного потенциала и общей ГШ были оценены.
Результаты:
Lycium barbarum экстракт защищены от MPP(+) -индуцированной потере жизнеспособности и да
нейродегенерации в C. elegans в дозо-зависимой манере. Похожие нейропротекция была
воспроизведена в MPP + PC12 клетки модели. Lycium barbarum экстракт ослабляется MPP(+) индуцированных внутриклеточных АФК накопления, потеря митохондриального мембранного
потенциала и восстановленных всего ГШ уровней в PCl2 клеток.
Выводы:
Lycium barbarum экстракт защищает от MPP(+) -индуцированной нейротоксичности в C. elegans и
PC12 клетки и ее механизм может быть связан с их антиоксидантные свойства и восстановление
общего уровня GSH.
Zhong Yao Cai. 2011 Aug;34(8):1241-6.
[Protective effects of Lycium barbarum extract against MPP(+) -induced neurotoxicity in Caenorhabditis
elegans and PC12 cells].
[Article in Chinese]
Yao XL1, Wu WL, Zheng MY, Li W, Ye CH, Lu XL.
To investigate the neuroprotective effects of Lycium barbarum extract against MPP(+) -induced
neurotoxicity in Caenorhabditis elegans and PC12 cells and its mechanism. Methods: Pretreated MPP(+) induced nearotoxicity in C. elegans and PC12 cells with Lycium barbarum at different dosages. The viability
and DA neurodegeneration was assessed in C. elegans selectively expressing green fluorescent protein (GFP)
in DA neurons. PC12 cell damage was measured using MTT and nuclear morphology. Intracellular reactive
oxygen species (ROS), mitochondrial membrane potential and total GSH were assessed.
RESULTS:
Lycium barbarum extract protected against MPP(+) -induced loss of viability and DA neurodegeneration in
C. elegans in a dose-dependent manner. Similar neuroprotection was replicated in MPP + PC12 cell model.
Lycium barbarum extract attenuated MPP(+) -induced intracellular ROS accumulation, loss of mitochondrial
membrane potential and restored total GSH levels in PCl2 cells.
CONCLUSIONS:
Lycium barbarum extract protects against MPP(+) -induced neurotoxicity in C. elegans and PC12 cells and
its machanism may be related to its antioxidative property and restoration of total GSH level.
Обзор противоопухолевых и иммуномодулирующих эффектов Lycium barbarum фруктовые.
Противоопухолевый эффекты традиционной китайской медицины (ткм), привлекли внимание
общественности vis-à-vis существующих методов лечения рака с различными побочными эффектами.
Lycium barbarum фрукты, широко известный как Gou Qi Zi в Китае, является потенциальным
противораковым агентом/адъювант. Свои главные активные ингредиенты, л. barbarum полисахариды
(LBP), scopoletin и 2-O-β-D-глюкопиранозил-L-аскорбиновая кислота (AA-2βG), у которых выявлены
апоптоза и антипролиферативное действие на раковые клеточные линии. Кроме того, LBP, также
способствует развитию организма, иммуномодулирующим действием и усиливает действие других
методов лечения рака. Не известно, имеются ли какие-либо нежелательные эффекты. Дальнейшие
исследования его фармакологических механизмов и токсикологии, могли бы способствовать
безопасному пользованию этой TCM травы.
Inflammopharmacology. 2012 Dec;20(6):307-14. doi: 10.1007/s10787-011-0107-3. Epub 2011 Dec 22.
A review of the anticancer and immunomodulatory effects of Lycium barbarum fruit.
Tang WM1, Chan E, Kwok CY, Lee YK, Wu JH, Wan CW, Chan RY, Yu PH, Chan SW.
The anticancer effects of traditional Chinese medicine (TCM) have attracted the attention of the public visà-vis existing cancer therapies with various side effects. Lycium barbarum fruit, commonly known as Gou Qi
Zi in China, is a potential anticancer agent/adjuvant. Its major active ingredients, L. barbarum
polysaccharides (LBP), scopoletin and 2-O-β-D-glucopyranosyl-L-ascorbic acid (AA-2βG), are found to have
54
apoptotic and antiproliferative effects on cancer cell lines. Moreover, LBP also contributes to body's
immunomodulatory effects and enhances effects of other cancer therapies. It is not known whether there
are any undesirable effects. Further studies on its pharmacological mechanisms and toxicology could
facilitate a safe usage of this TCM herb.
Защитный эффект Lycium barbarum полисахариды против доксорубицин-индуцированного
тестикулярной токсичности у крыс.
Настоящее исследование с целью выяснить, возможно ли Lycium barbarum полисахариды (LBP)
будет защищать от доксорубицин (DOX)-индуцированной тестикулярной токсичности. У самцов
Sprague-Dawley крысы получали дистиллированную воду (4 мл/кг) или LBP (200 мг/кг p.o.) ежедневно
в течение 10 дней и затем физиологическим раствором (0.9 %, 10 мл/кг) или DOX (10 мг/кг)
внутривенно на 7 день. Предварительная обработка LBP мелиорированных DOX-индуцированное
сокращение яичек веса, концентрации сперматозоидов и процент подвижных спермиев, а также
увеличение аномальной спермы ценам. LBP администрации DOX крыс, получавших успешно отменил
изменения в мда и СГС-Px уровнях. По сравнению с контролем, установлено, что LBP значительно
увеличивается плазменный уровень тестостерона в LBP + DOX группы. В гистопатология экзамены
также подтвердил, что LBP эффективно ослабляется DOX-индуцированного тяжелыми
дистрофическими изменениями канальцев. Это исследование иллюстрирует возможности LBP в
смягчении яичка окислительный стресс и защита яичка-специфическая токсичность в DOX облученных
крыс.
Phytother Res. 2012 May;26(5):716-21. doi: 10.1002/ptr.3633. Epub 2011 Oct 20.
Protective effect of Lycium barbarum polysaccharides against doxorubicin-induced testicular toxicity in
rats.
Xin YF1, You ZQ, Gao HY, Zhou GL, Chen YX, Yu J, Xuan YX.
The present study aimed to investigate whether Lycium barbarum polysaccharides (LBP) would protect
against doxorubicin (DOX)-induced testicular toxicity. Male Sprague-Dawley rats were treated with distilled
water (4 mL/kg) or LBP (200 mg/kg, p.o.) daily for 10 days and followed by saline (0.9 %, 10 mL/kg) or DOX
(10 mg/kg) intravenous injection at day 7. Pretreatment with LBP ameliorated DOX-induced reduction in the
testicular weights, sperm concentrations and percentage of motile sperms, as well as the increase in
abnormal sperm rate. LBP administration to DOX-treated rats successfully reversed the changes in MDA and
GHS-Px levels. Compared with the control, pretreatment with LBP significantly increased the plasma
testosterone level in the LBP + DOX group. The histopathology examinations further confirmed that LBP
effectively attenuated DOX-induced severe degenerative changes of seminiferous tubules. This study
illustrated the capability of LBP in attenuating testicular oxidative stress and protecting testis-specific toxicity
in DOX-exposed rats.
Эффект Годжи (Lycium barbarum) на экспрессию генов, связанных с развитием выживания клетки.
В этом исследовании изучали взаимосвязь между Lycium barbarum (годжи) и экспрессию генов в
селезенки мыши. Oligomicroarray технология использовалась, чтобы изучить исчерпывающий ответ
экспрессии генов и экран кандидата маркерных генов в селезенки мышей кормили годжи подвеска.
Годжи был микронизированный СМИ фрезерования и затем используются для оценки эффекта
измельчения. Средний диаметр nano/submicrometer годжи был около 100 нм, которые проявили
никакой цитотоксичности для клеток линий IEC-6 (крыса нормальная небольшая кишечных клеток
линии) и Caco-2 (аденокарциномы толстой кишки человека линии клеток). Было обнаружено, что три
Гена, TNF, Nfkb1, и Bcl-2, которые были регламентированы, и два Гена, APAF-1 и каспазой-3, внизрегулируется годжи. Этот феномен может быть полезным для cytoprotection, когда клетки
подвергаются стрессу или ущерб, который индуцирует апоптоз пути. Измельчение в
nano/submicrometer масштаба усиленной биологической активностью.
J Agric Food Chem. 2011 Sep 28;59(18):10088-96. doi: 10.1021/jf2021754. Epub 2011 Aug 25.
Effect of Goji (Lycium barbarum) on expression of genes related to cell survival.
Lin NC1, Lin JC, Chen SH, Ho CT, Yeh AI.
This study investigated the interrelationship between Lycium barbarum (goji) and gene expression in
mouse spleen. Oligomicroarray technology was employed to explore the comprehensive response of gene
55
expression and to screen candidate marker genes in the spleens of mice fed a goji suspension. Goji was
micronized by media milling and then used to evaluate the effect of size reduction. The average diameter of
nano/submicrometer goji was about 100 nm, which exhibited no cytotoxicity to cell lines IEC-6 (rat normal
small intestinal cell line) and Caco-2 (human colon adenocarcinoma cell line). It was found that three genes,
TNF, Nfkb1, and Bcl-2, were up-regulated and two genes, APAF-1 and caspase-3, were down-regulated by
goji. This phenomenon could be helpful for cytoprotection when cells undergo stress or damage that
induces the apoptotic pathway. Size reduction into nano/submicrometer scale enhanced bioactivity.
Сравнительная оценка антиоксидантных эффектов натуральный витамин C аналоговый 2-O-β-Dглюкопиранозил-L-аскорбиновая кислота, изолированные от ягоды Годжи фруктовый.
2-O-β-D-Глюкопиранозил-L-аскорбиновая кислота (AA-2βG) является естественным производным
витамина C (Lascorbic кислотой, AA), изолированные из ягоды Годжи (Lycium barbarum L.) плоды. Мы
оценили деятельность антиоксидантов AA-2βG и AA с помощью in vitro и in vivo модели систем. In vitro
антирадикальное анализы показали, что АА-βG был способен очистки 1,1-дифенил-2-picryl-hydrazyl и
гидроксила, перекись водорода и ингибирования H(2)O(2)-индуцированный гемолиз лучше, чем АА.
АА-2βG и АА были подобные гидроксильных антирадикальное возможности, но АА-2βG был
неспособен очистки супероксид-анион радикала и его мощность, чтобы убрать мусор, нитриты (NO(2)
(-)) была ниже, чем в АА. Общая in vitro возможностью уменьшения AA-2βG была также значительно
ниже, чем в АА. Более того, исследования in vivo показали, что АА-2βG был способен защищать
печени четыреххлористым углеродом-индуцированного острого повреждения печени у мышей. Эти
результаты позволяют предположить, что АА-2βG является важным антиоксидантным компонентом
фрукты ягоды Годжи, которые также могут быть похожие, но антиоксидантом механистические
свойства с АА. Данное исследование углубляет наше понимание механизмов ягоды Годжи фруктовый
фармакологической активности на antiaging и противоопухолевые свойства, а традиционная
медицина и пищевые добавки.
Arch Pharm Res. 2011 May;34(5):801-10. doi: 10.1007/s12272-011-0514-4. Epub 2011 Jun 9.
Comparative evaluation of the antioxidant effects of the natural vitamin C analog 2-O-β-Dglucopyranosyl-L-ascorbic acid isolated from Goji berry fruit.
Zhang Z1, Liu X, Zhang X, Liu J, Hao Y, Yang X, Wang Y.
2-O-β-D-Glucopyranosyl-L-ascorbic acid (AA-2βG) is a natural derivative of vitamin C (Lascorbic acid, AA)
isolated from Goji berry (Lycium barbarum L.) fruit. We evaluated the antioxidant activities of AA-2βG and
AA using in vitro and in vivo model systems. In vitro radical scavenging assays demonstrated that AA-βG was
capable of scavenging 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl and hydroxyl peroxide and inhibiting H(2)O(2)-induced
hemolysis better than AA. AA-2βG and AA had similar hydroxyl radical scavenging capabilities, but AA-2βG
was incapable of scavenging superoxide anion radicals, and its capacity to scavenge nitrite (NO(2) (-)) was
lower than that of AA. The overall in vitro reduction capability of AA-2βG was also significantly lower than
that of AA. Moreover, in vivo studies demonstrated that AA-2βG was capable of protecting the liver against
carbon tetrachloride-induced acute liver injury in mice. These results suggest that AA-2βG is an important
antioxidant component of Goji berry fruit, which may share similar but distinct antioxidant mechanistic
properties with AA. This study furthers our understanding of the mechanisms of Goji berry fruit
pharmacological activities on antiaging and antitumor properties as a traditional medicine and dietary
supplement.
Макрофаги, нежели т-и в-клеток являются главными иммуностимулирующее клетки-мишени
Lycium barbarum Л. полисахарид LBPF4-Ола.
Lycium barbarum Л. - это известный Инь укрепление агента в традиционной китайской медицине.
Lycium barbarum Л. полисахарид-белковый комплекс, хорошо известный своей иммунорегуляторных
и противоопухолевое действие. LBPF4-OL-glycan часть Lycium barbarum Л. полисахарид-белковый
комплекс), фракция 4 (LBPF4). LBPF4-OL активный вклад в LBPF4 по-прежнему пуст. В исследовании,
мы обогащаем полисахаридной части Lycium barbarum Л. полисахарид-белковый комплекс, и
расследовать его иммуностимулирующее действие на мышь, селезенки-клетки, T-клетки, B-клетки и
макрофаги.
56
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ:
Мышей Balb/C были использованы in vitro и in vivo. В опытах in vitro, в-лимфоцитов, пролифераций
были проанализированы с (3)H-TdR метод включения. Miltenyi Микросфер использовались в
очищении лимфоцитов. Активацию т-и в-клетки анализировали методом проточной цитометрии. Для
получения перитонеальных макрофагов мышей инъецировали В / Б. с 1мл натрия среды за 3 дня до
убийства. Клетки селезенки стимулировали с LBPF4-OL и концентрации цитокинов в supernatants были
определены методом мультиплексной бисера анализа. В опытах in vivo исследования, мышей
инъецировали В / Б. с 1 мл физиологического раствора или 100 мкг/мл LBPF4-OL ежедневно в течение
6 дней. Перитонеальных макрофагов функции были проанализированы с помощью твердофазного
иммуноферментного анализа и проточной цитометрии анализа.
Результаты:
Клетками селезенки и пролиферацию лимфоцитов анализа показали, что LBPF4-OL заметно
индуцированной пролиферации клеток селезенки, но не могли индуцировать пролиферацию
очищенный т-и в-лимфоцитов. Дальнейшие исследования показали, что B-клеточной пролиферации
состоялось в присутствии активированных макрофагов или LPS. Мультиплекс бисера анализ показал,
что LBPF4-OL, очевидно, могут индуцировать IL-6, IL-8, IL-10 и TNF-α производства селезенки клеток в
концентрации-зависимым способом. Flow cytometric analysis показал, что LBPF4-OL (И.П.) подсказки
CD86 и MHC-II молекул выражение на макрофаги. ИФА показал, что LBPF4-ол может значительно
укрепить макрофагов высвобождение TNF-α и IL-1β.
Вывод:
Эти результаты позволяют предположить, что glycan LBPF4-OL играет важную роль в деятельности
иммунофармакологических Lycium barbarum Л. полисахарид-белкового комплекса и первичных
мышиных макрофагов, нежели т-и в-клеток, основные клетки-мишени.
J Ethnopharmacol. 2011 Jul 14;136(3):465-72. doi: 10.1016/j.jep.2011.04.054. Epub 2011 Apr 28.
Macrophages, rather than T and B cells are principal immunostimulatory target cells of Lycium
barbarum L. polysaccharide LBPF4-OL.
Zhang XR1, Zhou WX, Zhang YX, Qi CH, Yan H, Wang ZF, Wang B.
Lycium barbarum L. is a renowned Yin strengthening agent in traditional Chinese medicine. Lycium
barbarum L. polysaccharide-protein complex is well-known for its immunoregulatory and antitumor effects.
LBPF4-OL is the glycan part of Lycium barbarum L. polysaccharide-protein complex fraction 4 (LBPF4).
LBPF4-OL's active contribution in LBPF4 is still blank. In the study, we enrich the polysaccharide part of
Lycium barbarum L. polysaccharide-protein complex, and investigate its immunostimulatory effects on
mouse spleen cells, T cells, B cells and macrophages.
MATERIALS AND METHODS:
Balb/C mice were used in vitro and in vivo studies. In in vitro study, lymphocyte proliferations were
analyzed with (3)H-TdR incorporation method. Miltenyi MicroBeads were used in the purification of
lymphocytes. Activation of T and B cells was analyzed by flow cytometry. In order to obtain the peritoneal
macrophages, mice were injected i.p. with 1mL of sodium thioglycollate 3 days prior to killing. Spleen cells
were stimulated with LBPF4-OL and cytokine concentrations in the supernatants were determined by
multiplex bead analysis. In in vivo study, mice were injected i.p. with 1 mL of normal saline or 100 μg/mL
LBPF4-OL daily for 6 days. Peritoneal macrophage functions were analyzed by enzyme-linked
immunosorbent assay and flow cytometry assay.
RESULTS:
Spleen cells and lymphocyte proliferation assay indicated that LBPF4-OL markedly induced the spleen cell
proliferation, but could not induce proliferation of purified T and B lymphocytes. Further research revealed
that B cell proliferation took place in the presence of activated macrophages or LPS. Multiplex bead analysis
showed that LBPF4-OL can obviously induce IL-6, IL-8, IL-10 and TNF-α production of the spleen cells in a
concentration-dependent manner. Flow cytometric analysis showed that LBPF4-OL (i.p.) prompts CD86 and
MHC-II molecules expression on macrophages. ELISA assay showed that LBPF4-OL can greatly strengthen
macrophage releasing of TNF-α and IL-1β.
CONCLUSION:
These results suggested that glycan LBPF4-OL plays an important role in the immunopharmacological
activity of Lycium barbarum L. polysaccharide-protein complex, and primary mouse macrophages, rather
57
than T and B cells, are the principal target cells of it.
[Эффекты lycium barbarum полисахарид, на формирование травматическая неврома и боль
после перерезки седалищного нерва у крыс].
Чтобы исследовать эффекты lycium barbarum полисахарида (LBP) на формирование травматическая
неврома и боль после перерезки седалищного нерва у крыс.
Методы:
Сорок Sprague-Dawley (SD) крыс, весом 200-220 г, половина мужчин и половина женщин, были
распределены на 2 группы случайным образом: LBP группы и группы контроля (n = 20 в каждой
группе). Правый седалищный нервы были перерезаны и 2 см седалищного нерва были удалены у
всех крыс 2 группы. LBP были внутрибрюшинно вводят в объеме 10 мг/(kgd) в LBP группы, в то время
как тот же объем физиологического раствора (NS), в контрольной группе на 28 дней. Дефицит ноготь
на пальце ноги и носок были наблюдать, чтобы оценить аутофагии на оперированную конечность.
Световой микроскоп и просвечивающего электронного микроскопа были использованы, чтобы
наблюдать формирование травматическая неврома после перерезки седалищного нерва.
Результаты:
Аутофагия наблюдалась в 5 крыс (25%) LBP группы и у 12 крыс (60%) контрольной группы на 4
недели, показывая значительную разницу (P < 0,05). Невриномы формируются в 8 крыс (40%) LBP
группы и у 16 крыс (80%) контрольной группы, показывая значительную разницу (P < 0,05).
Соблюдение светового микроскопа показали, что существует неорганизованного роста клеток
невриномы, проникли мышечных клеток, регенерацию аксонов и клеток выстилки носа в виде
мелких исправлений и фуникулер структуры в контрольной группе, в то время как в LBP группы было
меньше пролиферация нервных волокон с правильным расположением. Просвечивающего
электронного микроскопа показали, что там было много аксонов нерва опухоли, более fusoid
фибробластов, больше коллагеновых волокон, гиперплазия и выродились миелиновой оболочки в
контрольной группе, в то время как в LBP группы было меньше миелиновой оболочки в
проксимальном конце травмируя нервы, меньше, Шванновские клетки и фибробласты, и sparsed
коллагеновых волокон.
Вывод:
LBP может препятствовать аутофагии и формирование травматическая неврома после перерезки
седалищного нерва у крыс.
Zhongguo Xiu Fu Chong Jian Wai Ke Za Zhi. 2010 Nov;24(11):1298-301.
[Effects of lycium barbarum polysaccharide on formation of traumatic neuroma and pain after
transection of sciatic nerve in rats].
[Article in Chinese]
Fan H1, Deng C, Fu J, Ding L, Yin G, Ma Y.
To investigate the effects of lycium barbarum polysaccharide (LBP) on the formation of traumatic
neuroma and pain after transection of sciatic nerve in rats.
METHODS:
Forty Sprague-Dawley (SD) rats, weighing 200-220 g, half male and half female, were allocated into 2
groups randomly: LBP group and control group (n = 20 per group). The right sciatic nerves were transected
and 2 cm sciatic nerve were removed in all rats of the 2 groups. LBP were intraperitoneally injected in a
volume of 10 mg/(kgd) in the LBP group, while the same volume normal saline (NS) in the control group for
28 days. The deficiency of toenail and toe were observed to estimate the autophagy of the operated limb.
Light microscope and transmission electron microscope were used to observe the formation of traumatic
neuroma after transection of sciatic nerve.
RESULTS:
Autophagy was observed in 5 rats (25%) of LBP group and in 12 rats (60%) of control group at 4 weeks,
showing significant difference (P < 0.05). Neuroma formed in 8 rats (40%) of LBP group and in 16 rats (80%)
of control group, showing significant difference (P < 0.05). The observation of light microscope showed that
there were unorganized growth cells in the neuroma, infiltrated muscle cells, the regeneration of axons and
ensheathing cells to form small patch and funicular structure in the control group, while in the LBP group
there were less proliferation of nerve fibers with a regular arrangement. Transmission electron microscope
58
showed that there were lots of axons in nerve tumour, more fusoid fibroblasts, more collagen fiber, and
hyperplasia and degenerated myelin sheath in the control group, while in the LBP group there were less
myelin sheath in the proximal end of injuring nerves, less Schwann cells and fibroblasts, and sparsed
collagen fibers.
CONCLUSION:
LBP can inhibit autophagy and the formation of traumatic neuroma after transection of sciatic nerve in
rats.
Ягоды Годжи воздействия на макулярную характеристики и уровень антиоксидантов в плазме.
Ягоды Годжи (Lycium barbarum Л.) якобы благо зрение из-за его высокой антиоксидантной
(особенно зеаксантин) контент, хотя этот эффект не был продемонстрирован в качественных
клинических исследованиях. Целью данного исследования было оценить последствия ежедневных
добавок, с собственной молочной основе формулирование ягоды годжи, Лакто-Wolfberry (LWB), на
макулярного характеристики и зеаксантина в плазме и антиоксидантной способностью уровней в
пожилых предметам.
Методы:
Это был двойном слепом, рандомизированном, плацебо-контролируемом исследовании в
здоровых пожилых предметам (в диапазоне от 65 до 70 лет), получающих 13,7 g/d LWB (n = 75) или
плацебо (n = 75) в течение 90 дней. Пациенты получали прямые офтальмологический осмотр для
оценки пигментации и мягкие друзы рассчитывать в макуле и забор крови для измерения
зеаксантина в плазме уровня и общей антиоксидантной емкости.
Результаты:
Из группы плацебо, показали, гипопигментация и мягкие друзы накопления в макуле, а LWB группы
оставалась стабильной. Как в плазме, зеаксантин уровня и антиоксидантной способностью,
значительно возросло в LWB группы, на 26% и 57%, соответственно, но не изменились в группе
плацебо. Не связанные с продуктом неблагоприятные события были отмечены в обеих группах.
Выводы:
В целом, ежедневно добавки с годжи в течение 90 дней повышает в плазме зеаксантин и
антиоксидантов, а также защищает от гипопигментация и мягкие друзы накопления в макуле
пожилых предметам. Однако, механизм действия неясен, учитывая отсутствие взаимосвязи между
изменениями в плазме зеаксантин и изменения в макулярной характеристики.
Optom Vis Sci. 2011 Feb;88(2):257-62. doi: 10.1097/OPX.0b013e318205a18f.
Goji berry effects on macular characteristics and plasma antioxidant levels.
Bucheli P1, Vidal K, Shen L, Gu Z, Zhang C, Miller LE, Wang J.
Goji berry (Lycium barbarum L.) is purported to benefit vision because of its high antioxidant (especially
zeaxanthin) content, although this effect has not been demonstrated in high-quality human studies. The
purpose of this study was to evaluate the effects of daily supplementation with a proprietary milk-based
formulation of goji berry, Lacto-Wolfberry (LWB), on macular characteristics and plasma zeaxanthin and
antioxidant capacity levels in elderly subjects.
METHODS:
This was a double-masked, randomized, placebo-controlled trial in healthy elderly subjects (range, 65 to
70 years) receiving 13.7 g/d of LWB (n = 75) or placebo (n = 75) for 90 days. Subjects underwent direct
ophthalmic examination to assess pigmentation and soft drusen count in the macula and a blood draw to
measure plasma zeaxanthin level and total antioxidant capacity.
RESULTS:
The placebo group demonstrated hypopigmentation and soft drusen accumulation in the macula,
whereas the LWB group remained stable. Both plasma zeaxanthin level and antioxidant capacity increased
significantly in the LWB group, by 26% and 57%, respectively, but did not change in the placebo group. No
product-related adverse events were reported in either group.
CONCLUSIONS:
Overall, daily dietary supplementation with goji berry for 90 days increases plasma zeaxanthin and
antioxidant levels as well as protects from hypopigmentation and soft drusen accumulation in the macula of
elderly subjects. However, the mechanism of action is unclear, given the lack of relationship between
59
change in plasma zeaxanthin and change in macular characteristics.
Селективное подавление рака шейки матки Hela клеток by-2-O-β-D-глюкопиранозил-Lаскорбиновая кислота, изолированные из плодов Lycium barbarum
Lycium barbarum плод был использован в качестве традиционной китайской медицины и БАД в
течение веков. 2-O-β-D-Глюкопиранозил-L-аскорбиновая кислота (AA-2βG), роман стабильный
витамин C аналоговый, является одним из основных биологически активных компонентов фруктовых.
В настоящем отчете, нами было изучено цитотоксическое и антипролиферативное действие AA-2βG
против раковых клеток in vitro и идентифицированных белков с существенно дифференциальным
выражением в рак шейки матки клеток (Hela) культивировали в присутствии АА-2βG протеомный
анализ. Наши результаты показали, что цитотоксическое и антипролиферативное деятельности АА2βG на клеточных линий рака были в ячейке Тип-, время-и дозо-зависимый характер. Похожие на
витамин C, AA-2βG выборочно индуцированной гибели клеток репрессированных пролиферацию
клеток Hela на механизм клеточного апоптоза и клеточного цикла, индуцированного AA-2βG через
механизм стабилизации белка р53. Однако, биологическая активность ингибирования пролиферации
клеток, в других опухолевых клеточных линий рака или первичные клетки были разнообразны, как
показывает либо умеренное ингибирование или незначительное продвижение после лечения АА2βG. Сравнительный анализ протеомных профилей и иммуноблот анализа были определены 15
белки, связанные с подавляя апоптоз клеток и/или стимулируя пролиферацию клеток Hela клетки,
указанных в присутствии АА-2βG или витамин C. Эти данные указывают, что механизм AA-2βG и
витамин C опосредованной противоопухолевой активности downregulating экспрессии белков,
вовлеченных в клеточный апоптоз и пролиферацию, и, следовательно, индуцируя апоптоз клеток Hela
и арест клеточного цикла, предполагая, что АА-2βG и витамина C могут поделиться сходным
механизмом индуцируя апоптоз клеток Hela. Эти результаты также свидетельствуют, что л. barbarum
фрукты могут быть потенциальными БАД и противоопухолевого агента, направленные на
профилактику и лечение рака шейки матки.
Cell Biol Toxicol. 2011 Apr;27(2):107-21. doi: 10.1007/s10565-010-9174-2. Epub 2010 Aug 19.
Selective suppression of cervical cancer Hela cells by 2-O-β-D-glucopyranosyl-L-ascorbic acid isolated
from the fruit of Lycium barbarum L.
Zhang Z1, Liu X, Wu T, Liu J, Zhang X, Yang X, Goodheart MJ, Engelhardt JF, Wang Y.
Lycium barbarum fruit has been used as a Chinese traditional medicine and dietary supplement for
centuries. 2-O-β-D-Glucopyranosyl-L-ascorbic acid (AA-2βG), a novel stable vitamin C analog, is one of the
main biologically active components of the fruit. In this report, we investigated the cytotoxic and
antiproliferative effect of AA-2βG against cancer cells in vitro and identified the proteins with significantly
differential expression in the cervical cancer cells (Hela) cultured in the presence of AA-2βG proteomic
analysis. Our results demonstrated that the cytotoxic and antiproliferative activity of AA-2βG on cancer cell
lines were in a cell type-, time-, and dose-dependent manner. Similar to vitamin C, the AA-2βG selectively
induced cell death repressed the proliferation of Hela cells by the mechanism of cell apoptosis and cell cycle
arrest induced by AA-2βG through a mechanism of stabilizing p53 protein. However, the biological activity of
inhibition of cell proliferation in other malignant cancer cell lines or primary cells were varied, as
demonstrated by either moderate inhibition or slight promotion following treatment with AA-2βG.
Comparative analysis of the proteomic profiles and immunoblot analysis identified 15 proteins associated
with repressing cell apoptosis and/or stimulating cell proliferation in Hela cells that were downregulated in
the presence of AA-2βG or vitamin C. These data indicate that a mechanism of the AA-2βG and vitamin C
mediated antitumor activity by downregulating the expression of proteins involved in cell apoptosis and
proliferation and consequently inducing Hela cell apoptosis and cell cycle arrest, suggesting that AA-2βG and
vitamin C may share a similar mechanism of inducing Hela cell apoptosis. These results also suggest that the
L. barbarum fruit may be a potential dietary supplement and anticancer agent aimed at the prevention and
treatment of cervical cancer.
Нейропротективные эффекты полисахаридов из боярышника, плоды Lycium barbarumпротив
гомоцистеин-индуцированной токсичности у крыс корковых нейронов.
Предыдущие клинические и эпидемиологические исследования показали, что уровень
60
плазменного гомоцистеина (Hcy) увеличение уровня риска Alzheime s disease (AD). Хотя основные
механизмы его токсичности, - неуловимый, было показано, что Hcy повреждения нейронов путем
индуцирования апоптоза фрагментация ДНК, и Тау hyperphosphorylation. Wolfberry (Lycium barbarum)это фрукт, который известен своими глаз-защитные и омолаживающие свойства в азиатских странах.
Предыдущие исследования нашей лаборатории показали, что полисахариды, производные от
wolfberry (LBA), обладающие способностью защищать нейроны от бета-амилоида (Abeta)
нейротоксичность пептидов. Мы предполагаем, что нейропротективное действие wolfberry не
ограничивается Abeta и может также обеспечить защиту от других рекламных факторов риска. В
данном исследовании мы хотим прояснить и нейропротективных эффектов wolfberry против Hcyиндуцированного повреждения нейронов. Наши данные показали, что LBA лечения значительно
ослабляется Hcy-индуцированной гибели нервных клеток и апоптоза в первичных корковых
нейронов, как показал ЛДГ и каспазы-3, как и анализа деятельности. LBA также значительно
сократилось Hcy-индуцированного фосфорилирования Тау на Тау-1 (Ser198/199/202), pS396 (Ser396), и
pS214 (Ser214) эпитопов, а также расщепление Тау. В то же время, мы также обнаружили, что уровень
фосфорилирования р-GSK3beta (Ser9/тир 216) оставались неизменными среди разных групп лечения
на всех обнаруженных точек времени. LBA лечения подавлено высоты обоих p-ERK и p-JNK. В целом,
наши данные показали, что LBA оказывало нейропротективное действие на нейроны коры головного
мозга крыс, подвергшихся Hcy. Поэтому, LBA имеет потенциал, чтобы быть diseasemodifying средство
для профилактики объявлений.
J Alzheimers Dis. 2010;19(3):813-27. doi: 10.3233/JAD-2010-1280.
Neuroprotective effects of polysaccharides from wolfberry, the fruits of Lycium barbarum, against
homocysteine-induced toxicity in rat cortical neurons.
Ho YS1, Yu MS, Yang XF, So KF, Yuen WH, Chang RC.
Previous clinical and epidemiological studies have suggested that elevated plasma homocysteine (Hcy)
levels increased the risk of Alzheime's disease (AD). Although the underlying mechanisms of its toxicity are
elusive, it has been shown that Hcy damages neurons by inducing apoptosis, DNA fragmentation, and tau
hyperphosphorylation. Wolfberry (Lycium barbarum) is a fruit that is known for its eye-protective and antiaging properties in Asian countries. Previous studies from our laboratory have demonstrated that
polysaccharides derived from wolfberry (LBA) have the ability to protect neurons from amyloid-beta (Abeta)
peptide neurotoxicity. We hypothesize that the neuroprotective effects of wolfberry is not limited to Abeta
and can also provide protection against other AD risk factors. In this study, we aim to elucidate the
neuroprotective effects of wolfberry against Hcy-induced neuronal damage. Our data showed that LBA
treatment significantly attenuated Hcy-induced neuronal cell death and apoptosis in primary cortical
neurons as demonstrated by LDH and caspase-3 like activity assay. LBA also significantly reduced Hcyinduced tau phosphorylation at tau-1 (Ser198/199/202), pS396 (Ser396), and pS214 (Ser214) epitopes as
well as cleavage of tau. At the same time, we also found that the phosphorylation level of p-GSK3beta
(Ser9/Tyr 216) remained unchanged among different treatment groups at all detected time points. LBA
treatment suppressed elevation of both p-ERK and p-JNK. In summary, our data demonstrated that LBA
exerted neuroprotective effects on cortical neurons exposed to Hcy. Therefore, LBA has the potential to be a
diseasemodifying agent for the prevention of AD.
Противораковый эффект Lycium barbarum полисахариды на клетки рака кишечника включает в
G0/G1 фазе ареста.
Колоректальный рак является одним из наиболее распространенных раковых заболеваний в мире.
Противоопухолевый эффект Wolfberry (Lycium barbarum) полисахарида (LBP) на клетки рака
кишечника в значительной степени неизвестно. Чтобы исследовать эффект от увеличения LBP на
клетки рака толстой кишки человека и его возможные механизмы, человеческого рака толстой кишки
SW480 и Caco-2 клетки были обработаны 100-1,000 мг/л LBP для 1-8 дней. Рост клеток измерялась с
помощью МТТ-теста и кристаллический фиолетовый анализа. Распределение клеточного цикла, были
проанализированы с помощью проточной цитометрии. Вестерн-блотинга был использован, чтобы
указать на изменения в уровне cyclins и циклин-зависимых киназ (CDKs). LBP лечения
приостанавливают обеих клеточных линий рака толстой кишки в зависимости от дозы образом. В
концентрации от 400 до 1000 мг/л, LBP значительно ингибирует рост клеток SW480 (400 мг/л, P < 0,01;
61
800 и 1000 мг/л, P < 0,001); в то время как при концентрациях от 200 до 1000 мг/л, LBP значительно
ингибирует рост Caco-2 клетки (200 мг/л, P < 0,05; 400-1,000 мг/л, P < 0,001). Кристаллический
фиолетовый анализа показали, что LBP имел длительный анти-пролиферативный эффект. Что более
важно, клетки были арестованы в G0/G1 фазе. Изменения клеточного цикла-associated protein, cyclins,
и CDKs были приведены в соответствие с изменениями клеточного цикла распределения. Это одно из
первых исследований, фокус на LBP-индуцированного прерывания клеточного цикла в клетках
карциномы толстой кишки человека. Результаты показывают, что LBP-кандидат противораковым
агентом.
Med Oncol. 2011 Mar;28(1):121-6. doi: 10.1007/s12032-009-9415-5. Epub 2010 Jan 12.
Anticancer effect of Lycium barbarum polysaccharides on colon cancer cells involves G0/G1 phase
arrest.
Mao F1, Xiao B, Jiang Z, Zhao J, Huang X, Guo J.
Colorectal cancer is one of the most common cancers worldwide. The anticancer effect of Wolfberry
(Lycium barbarum) polysaccharide (LBP) on colon cancer cells is largely unknown. To investigate the growth
effect of LBP on human colon cancer cell and its possible mechanisms, human colon cancer SW480 and
Caco-2 cells were treated with 100-1,000 mg/l LBP for 1-8 days. Cell growth was measured by MTT assay
and crystal violet assay. Distribution of the cell cycle was analyzed by flow cytometry. Western blotting was
used to indicate changes in the level of cyclins and cyclin-dependent kinases (CDKs). LBP treatment inhibited
both colon cancer cell lines in a dose-dependent manner. At concentrations from 400 to 1,000 mg/l, LBP
significantly inhibited the growth of SW480 cells (400 mg/l, P < 0.01; 800 and 1,000 mg/l, P < 0.001); while
at concentrations from 200 to 1,000 mg/l, LBP significantly inhibited the growth of Caco-2 cells (200 mg/l, P
< 0.05; 400-1,000 mg/l, P < 0.001). Crystal violet assay showed that LBP had a long-term anti-proliferative
effect. More importantly, cells were arrested at the G0/G1 phase. The changes in cell-cycle-associated
protein, cyclins, and CDKs were consistent with the changes in cell-cycle distribution. This is one of the first
studies to focus on LBP-induced interruption of the cell cycle in human colon carcinoma cells. The results
suggest that LBP is a candidate anticancer agent.
Lycium barbarum полисахарид ингибирует инфекционность вируса ньюкаслской болезни вирус
фибробластов куриного эмбриона.
Lycium barbarum полисахарид (LBPS) было добыто вода, отвар и этанола осадков. После очистки,
четыре сульфатированные lycium barbarum полисахариды (sLBPSs), sLBPS(0.7), sLBPS(1.1), sLBPS(1.5) и
sLBPS(1.9), были подготовлены chlorosulfonic кислота-пиридин метод, соответственно, на четыре
разработана модификация условий. Четыре sLBPSs в 5 концентрациях, в безопасной концентрации
рамки, и Newcastle disease virus (НДВ) были добавлены в выращивании система фибробластов
куриных эмбрионов (CEF), соответственно в трех режимах пре - и пост-добавление полисахарида и
одновременное добавление полисахарида и вирус после смешивания. Последствия sLBPSs на
клеточном инфекционности НДВ были проанализированы МТТ методе с немодифицированными
LBPS в качестве контроля. Результаты показали, что sLBPS(1.5), sLBPS(1.9) и sLBPS(1.1) в трех образцовдобавление режима, sLBPS(0.7) при одновременном добавлении после смешивания может
значительно подавлять инфекционность НДВ для CEF. Вирусная тормозящее скорость sLBPS(1.5) в
пред - и одновременное добавление и sLBPS(1.9) в пост-добавление было наивысшим.
Немодифицированных LBPS не представляют значительный эффект в любом образце-режим
добавления. Эти результаты показали, что сульфатированные модификация может существенно
повысить противовирусную активность LBPS, которые коррелировали со степенью сульфатация (DS)
sLBPS. sLBPS(1.5) и sLBPS(1.9) обладали повышенной активностью и будут как композиции
противовирусных рецепт.
Int J Biol Macromol. 2010 Mar 1;46(2):212-6. doi: 10.1016/j.ijbiomac.2009.11.011. Epub 2009 Dec 3.
Lycium barbarum polysaccharide inhibits the infectivity of Newcastle disease virus to chicken embryo
fibroblast.
Wang J1, Hu Y, Wang D, Zhang F, Zhao X, Abula S, Fan Y, Guo L.
Lycium barbarum polysaccharide (LBPS) was extracted by water decoction and ethanol precipitation. After
purification, four sulfated lycium barbarum polysaccharides (sLBPSs), sLBPS(0.7), sLBPS(1.1), sLBPS(1.5) and
sLBPS(1.9), were prepared by chlorosulfonic acid-pyridine method respectively at four designed modification
62
conditions. Four sLBPSs at 5 concentrations, within the safety concentration scope, and Newcastle disease
virus (NDV) were added into cultivating system of chick embryo fibroblast (CEF) respectively in three modes,
pre- and post-adding polysaccharide and simultaneous adding polysaccharide and virus after being mixed.
The effects of sLBPSs on cellular infectivity of NDV were assayed by MTT method taking the non-modified
LBPS as control. The results showed that sLBPS(1.5), sLBPS(1.9) and sLBPS(1.1) in three sample-adding
modes, sLBPS(0.7) in simultaneous adding after being mixed could significantly inhibit the infectivity of NDV
to CEF. The viral inhibitory rate of sLBPS(1.5) in pre- and simultaneous adding and sLBPS(1.9) in post-adding
was the highest. Non-modified LBPS did not present significant effect in any sample-adding mode. These
results indicated that sulfated modification could significantly enhance the antiviral activity of LBPS, which
was correlated with the degree of sulfation (DS) of sLBPS. sLBPS(1.5) and sLBPS(1.9) possessed better
activity and would be as the compositions of antiviral prescription.
Иммуномодулирующее действие основывается на следующих принципах : Lycium barbarum сок
фруктовый в китайской пожилых здоровых испытуемых.
Lycium barbarum традиционно используется в сочетании с несколькими травами лечебными
свойствами, но систематическое современной клинической оценки как единого трава не сообщается.
Изучение систематического воздействия л. barbarum на функцию иммунной системы, общего
самочувствия и безопасности, мы изучали воздействие стандартизированного л. barbarum фруктовый
сок (Гочи, FreeLife International, Phoenix, AZ, USA) в 120 мл/сут, что эквивалентно, как минимум, 150 г
свежих фруктов, сумма традиционно используется, или плацебо, в течение 30 дней в
рандомизированном, двойном слепом, плацебо-контролируемом клиническом исследовании, в 60
пожилых здоровых взрослых (55-72 лет). У Гочи группы показали статистически достоверное
увеличение числа лимфоцитов и уровни интерлейкина-2 и иммуноглобулина G по сравнению с до
вмешательства и плацебо, в то время как количество CD4, CD8), натуральных киллеров или уровней
интерлейкина-4 и иммуноглобулинов были изменены незначительно. Из группы плацебо, показали
отсутствие существенных изменений в иммунной меры. А Гочи группы показали значительное
увеличение общего чувства благополучия, такие как усталость и сон, и показал тенденция к
увеличению кратковременной памяти и фокуса между до и после вмешательства, в группе плацебо,
показали отсутствие существенных положительных изменений в этих мероприятиях. Никаких
побочных реакций, аномальные симптомы или изменения массы тела, артериального давления,
пульса, остроты зрения, мочи, кала, крови или биохимия были замечены ни в одной группе. В
заключение, ежедневное потребление Гочи значительно увеличилось в несколько иммунологические
реакции и субъективные ощущения общего благополучия, без каких-либо побочных реакций.
J Med Food. 2009 Oct;12(5):1159-65. doi: 10.1089/jmf.2008.0300.
Immunomodulatory effects of a standardized Lycium barbarum fruit juice in Chinese older healthy
human subjects.
Amagase H1, Sun B, Nance DM.
Lycium barbarum has been traditionally used in combination with several herbs for medicinal properties,
but systematic modern clinical evaluation as a single herb has not been reported. To examine the systematic
effects of L. barbarum on immune function, general well-being, and safety, we tested the effects of a
standardized L. barbarum fruit juice (GoChi, FreeLife International, Phoenix, AZ, USA) at 120 mL/day,
equivalent to at least 150 g of fresh fruit, the amount traditionally used, or placebo for 30 days in a
randomized, double-blind, placebo-controlled clinical study in 60 older healthy adults (55-72 years old). The
GoChi group showed a statistically significant increase in the number of lymphocytes and levels of
interleukin-2 and immunoglobulin G compared to pre-intervention and the placebo group, whereas the
number of CD4, CD8, and natural killer cells or levels of interleukin-4 and immunoglobulin A were not
significantly altered. The placebo group showed no significant changes in any immune measures. Whereas
the GoChi group showed a significant increase in general feelings of well-being, such as fatigue and sleep,
and showed a tendency for increased short-term memory and focus between pre- and post-intervention,
the placebo group showed no significant positive changes in these measures. No adverse reactions,
abnormal symptoms, or changes in body weight, blood pressure, pulse, visual acuity, urine, stool, or blood
biochemistry were seen in either group. In conclusion, daily consumption of GoChi significantly increased
several immunological responses and subjective feelings of general well-being without any adverse
63
reactions.
Годжи (Lycium barbarum и L. chinense): Фитохимии, фармакологии и безопасности с точки зрения
традиционной и использует последние популярности.
С начала этого века, Goji ягоды и соки продаются как продукты здорового питания в западных
странах и хвалили в рекламе и в СМИ, благополучия и как средство против старения. Популярность
Годжи продукции резко вырос за последние годы, благодаря успешной маркетинговой стратегии.
Годжи-это относительно новое имя, которое дается Lycium barbarum и L. chinense, двух близких видов
с давними традициями использования в качестве лекарственных и пищевых растений в Восточной
Азии, в частности в Китае. Пока только L. barbarum - лекарственного, плоды (fructus Lycii) и корень,
кора (cortex Lycii radicis) обоих видов используются в народной медицине. Здесь мы расскажем о
составляющих, фармакологии, безопасности, и использует л. barbarum и L. chinense с учетом
различных частях растения. Исследования плода сосредоточились на протеогликанов, известный как "
Lycium barbarum полисахариды", который показал, антиоксидантные свойства, а также некоторые
интересные фармакологической деятельности в контексте связанных с возрастом заболеваний, таких
как атеросклероз и диабет. Как в корень коры, несколько соединений показали, гепатопротекторное
действие, а также ингибирующее влияние на ренин/ангиотензин системы, которая может
поддерживать традиционное использование для лечения гипертонической болезни. Пока нет
никаких признаков токсичности этого растения, в двух случаях возможного взаимодействия с
варфарином точки потенциального риска лекарственного взаимодействия. С учетом имеющихся
фармакологических данных и давние традиции использования в традиционной китайской медицине,
л. barbarum и L. chinense, безусловно, заслуживают дальнейшего исследования. Однако клинические
доказательства и строгие процедуры контроля качества незаменимы прежде, чем любые
рекомендации могут быть использованы для Годжи продукции.
Planta Med. 2010 Jan;76(1):7-19. doi: 10.1055/s-0029-1186218. Epub 2009 Oct 20.
Goji (Lycium barbarum and L. chinense): Phytochemistry, pharmacology and safety in the perspective of
traditional uses and recent popularity.
Potterat O.
Since the beginning of this century, Goji berries and juice are being sold as health food products in
western countries and praised in advertisements and in the media for well-being and as an anti-aging
remedy. The popularity of Goji products has rapidly grown over the last years thanks to efficient marketing
strategies. Goji is a relatively new name given to Lycium barbarum and L. chinense, two close species with a
long tradition of use as medicinal and food plants in East Asia, in particular in China. While only L. barbarum
is officinal, the fruit (fructus Lycii) and the root bark (cortex Lycii radicis) of both species are used in the folk
medicine. We review here the constituents, pharmacology, safety, and uses of L. barbarum and L. chinense
with consideration to the different parts of the plant. Investigations of the fruit have focused on
proteoglycans, known as " Lycium barbarum polysaccharides", which showed antioxidative properties and
some interesting pharmacological activities in the context of age related diseases such as atherosclerosis
and diabetes. As to the root bark, several compounds have demonstrated a hepatoprotective action as well
as inhibitory effects on the rennin/angiotensin system which may support the traditional use for the
treatment of hypertension. While there are no signs of toxicity of this plant, two cases of possible
interaction with warfarin point to a potential risk of drug interaction. In view of the available
pharmacological data and the long tradition of use in the traditional Chinese medicine, L. barbarum and L.
chinense certainly deserve further investigation. However, clinical evidences and rigorous procedures for
quality control are indispensable before any recommendation of use can be made for Goji products.
Lycium barbarum полисахариды индуцировать апоптоз в человеческих раковых клеток простаты и
тормозит рак простаты рост ксенотрансплантат мышь модель человеческого рака предстательной
железы.
Lycium barbarum полисахариды (LBPs) важных функциональных составляющих в красный цвет
плодов L. barbarum (Guo Qi Zi, хорошо известных традиционных китайских лекарственных растений,
широко известный как ягоды Годжи или wolfberry). Влияние LBP на человеческие клетки рака
простаты, были систематически исследованы in vitro и in vivo. In vitro действие LBP на двух клеточных
64
линиях (ПК-3 и DU-145) были исследованы с помощью исключения трипановым синим
окрашиванием, single-cell гель-электрофореза, проточной цитометрии, терминал dUTP nick-end
labeling анализа, и иммуногистохимическим (оценка Bcl-2 и Bax выражение). In vivo эффект LBP на PC3 клетки была оценена в обнаженном виде мыши ксенотрансплантат опухоли модели. In vitro
показали, что LBP может дозы и времени не зависимо подавляют рост и ПК-3 и DU-145 клеток. LBP
причиной обрыва нитей ДНК, ПК-3 и DU-145 клетки; хвостовой частота и длина хвоста были
значительно выше, чем у контрольных клеток. LBP заметно также индуцированной ПК-3 и DU-145
апоптоза клеток, с высоким апоптоза цены на 41.5% и 35,5%, соответственно. Отношение Bcl-2/Bax
экспрессии белков следующих LBP процедуры значительно сократилось-с взаимосвязи доза-эффект,
который предположил, что LBP может регулировать экспрессию Bcl-2 и Bax, индуцировать апоптоз ПК3 и DU-145 клеток. In vivo экспериментальные результаты указывают на то, что LBP может
существенно тормозят ПК-3 рост опухолей у мышей nude. Обе опухоли объем и вес LBP лечения
группы были значительно ниже, чем в контрольной группе.
J Med Food. 2009 Aug;12(4):695-703. doi: 10.1089/jmf.2008.1232.
Lycium barbarum polysaccharides induce apoptosis in human prostate cancer cells and inhibits prostate
cancer growth in a xenograft mouse model of human prostate cancer.
Luo Q1, Li Z, Yan J, Zhu F, Xu RJ, Cai YZ.
Lycium barbarum polysaccharides (LBPs) are important functional constituents in red-colored fruits of L.
barbarum (Guo Qi Zi, a well-known traditional Chinese medicinal plant commonly known as Goji berry or
wolfberry). The influence of LBP on human prostate cancer cells was systematically investigated in vitro and
in vivo. The in vitro effects of LBP on two cell lines (PC-3 and DU-145) were examined by using trypan blue
exclusion staining, single-cell gel electrophoresis, flow cytometry, terminal dUTP nick-end labeling assay, and
immunohistochemical assay (assessment of Bcl-2 and Bax expression). The in vivo effect of LBP on PC-3 cells
was assessed in the nude mouse xenograft tumor model. The in vitro results showed that LBP can dose- and
time-dependently inhibit the growth of both PC-3 and DU-145 cells. LBP caused the breakage of DNA
strands of PC-3 and DU-145 cells; the tail frequency and tail length were significantly higher than that of
control cells. LBP also markedly induced PC-3 and DU-145 cell apoptosis, with the highest apoptosis rates at
41.5% and 35.5%, respectively. The ratio of Bcl-2/Bax protein expression following LBP treatments decreased
significantly with a dose-effect relationship, which suggested that LBP can regulate the expression of Bcl-2
and Bax to induce apoptosis of PC-3 and DU-145 cells. The in vivo experimental results indicate that LBP
might significantly inhibit PC-3 tumor growth in nude mice. Both the tumor volume and weight of the LBP
treatment group were significantly lower than those of the control group.
Торможение роста и клеточного цикла, арест человеческих клеток рака желудка Lycium barbarum
полисахарид.
Lycium barbarum полисахарида (LBP) извлекается из традиционных китайских трав Lycium barbarum
и обладает потенциальной противоопухолевой активностью. Однако детальные механизмы в
значительной степени неизвестны. Целью настоящего исследования было оценить
противоопухолевый эффект LBP человека рак желудка, и его возможные механизмы. Человека рак
желудка MGC-803 и SGC-7901 клетки были обработаны различные концентрации LBP в течение 1-5
дней, и рост клеток измеряли с помощью 3-(4,5-dimethylthiazol-2-ил)-2,5-дифенил tetrazolium bromide
анализа. Распределение клеточного цикла, были проанализированы с помощью проточной
цитометрии. Вестерн-блотинга был использован, чтобы указать на изменения в уровне cyclins и
циклин-зависимых киназ (CDKs). LBP лечения приостанавливают рост MGC-803 и SGC-7901 клеток,
клеточного цикла, арест в G0/G1 и S-фазы, соответственно. Мы считаем, что это первое исследование,
которое показывает, что LBP арестован различных клеточных линий из одного и того же вида рака на
различных стадиях. Изменения клеточного цикла-associated protein, cyclins, и CDKs были приведены в
соответствие с изменениями клеточного цикла распределения. Это исследование свидетельствует о
том, что индукция клеточного цикла, арест участвует в противоопухолевой активности LBP желудка
раковые клетки.
Med Oncol. 2010 Sep;27(3):785-90. doi: 10.1007/s12032-009-9286-9. Epub 2009 Aug 11.
65
Growth inhibition and cell-cycle arrest of human gastric cancer cells by Lycium barbarum
polysaccharide.
Miao Y1, Xiao B, Jiang Z, Guo Y, Mao F, Zhao J, Huang X, Guo J.
Lycium barbarum polysaccharide (LBP) is extracted from the traditional Chinese herb Lycium barbarum,
and has potential anticancer activity. However, the detailed mechanisms are largely unknown. The purpose
of this study was to observe the anticancer effect of LBP on human gastric cancer, and its possible
mechanisms. Human gastric cancer MGC-803 and SGC-7901 cells were treated with various concentrations
of LBP for 1-5 days, and cell growth was measured by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium
bromide assay. Distribution of the cell cycle was analyzed by flow cytometry. Western blotting was used to
indicate changes in the level of cyclins and cyclin-dependent kinases (CDKs). LBP treatment inhibited growth
of MGC-803 and SGC-7901 cells, with cell-cycle arrest at the G0/G1 and S phase, respectively. We believe
that this is the first study to show that LBP arrested different cell lines from the same types of cancer at
different phases. The changes in cell-cycle-associated protein, cyclins, and CDKs were consistent with the
changes in cell-cycle distribution. This study suggests that induction of cell-cycle arrest participates in the
anticancer activity of LBP on gastric cancer cells.
Lycium barbarum подавляет рост эстроген-рецептор позитивных клеток рака молочной железы
человека путем благоприятно изменяя метаболизм эстрадиола.
Селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов представляют принято терапии эстроген
рецептор позитивный (Эр+) раком молочной железы, проявляют побочные эффекты и сократить
соблюдение пациентом. Использование фитоэстрогенов, содержащих растительных лекарственных
средств ограничено из-за эффективности и безопасности. ER+ MCF-7 рассмотрены модели роста
ингибирующего влияния лекарственного трава Lycium barbarum (LB) и определены механистической
ведет за его эффективность. MCF-7 клетки сохраняли в 0.7% сыворотки (17 (- эстрадиола, E2 < 1 нм)
выставлены 11%-87% увеличение роста после лечения с 1 нм до 20 нм E2. Рост акции с 20 нм E2
выставлены в 5,2 раза увеличилась эстрон (E1), на 35,7% увеличилось в 2 hydroxyestrone (2-OHE1), что
на 15,4% увеличилось 16alpha-hydroxyestrone (16alpha-OHE1), и в восемь раз увеличилось эстриол (Е3)
образование. Лечение E2 стимулировал клетки с LB выставлены Зависимое от дозы ингибирование
роста на 9,5%-42.8% на 3 дня и 33,9%-83,9% в день 7. 3-день ингибирующее ответ на 1% фунтов (в
максимальной концентрации цитостатика) выставил 84.8% увеличена E1, в 3,6 раза увеличилась в 2OHE1, на 33,3% уменьшилось 16alpha-OHE1, и 9,2 раза увеличилась E3 формирования. Таким образом,
MCF-7 клетки сохраняют их митогенной и метаболический ответ E2 и LB downregulates E2-стимулирует
рост через формирование антипролиферативного 2-OHE1 и ускоренное преобразование митогенной
16alpha-OHE1, чтобы antimitogenic E3.
Nutr Cancer. 2009;61(3):408-14. doi: 10.1080/01635580802585952.
Lycium barbarum inhibits growth of estrogen receptor positive human breast cancer cells by favorably
altering estradiol metabolism.
Li G1, Sepkovic DW, Bradlow HL, Telang NT, Wong GY.
Selective estrogen receptor modulators represent accepted therapy for estrogen receptor positive (ER+)
breast cancer, exhibit adverse side effects, and reduce patient compliance. The use of phytoestrogen
containing herbal medicines is limited because of efficacy and safety concerns. The ER+ MCF-7 model
examined growth inhibitory effects of the medicinal herb Lycium barbarum (LB) and identified mechanistic
leads for its efficacy. The MCF-7 cells maintained in 0.7% serum (17beta-estradiol, E2 < 1 nM) exhibited 11%87% increased growth after treatment with 1nM to 20 nM E2. Growth promotion with 20 nM E2 exhibited
5.2-fold increased estrone (E1), 35.7% increased 2-hydroxyestrone (2-OHE1), 15.4% increased 16alphahydroxyestrone (16alpha-OHE1), and eightfold increased estriol (E3) formation. Treatment of E2 stimulated
cells with LB exhibited a dose-dependent growth inhibition of 9.5%-42.8% at Day 3 and 33.9%-83.9% at Day
7. The 3-day inhibitory response to 1% LB (maximum cytostatic concentration) exhibited 84.8% increased E1,
3.6-fold increased 2-OHE1, 33.3% decreased 16alpha-OHE1, and 9.2-fold increased E3 formation. Thus, MCF7 cells retain their mitogenic and metabolic response to E2 and LB downregulates E2-stimulated growth via
the formation of antiproliferative 2-OHE1 and accelerated conversion of mitogenic 16alpha-OHE1 to
antimitogenic E3.
66
Полисахарид-белковый комплекс из Lycium barbarum Л. - это роман стимул дендритных клеток
иммуногенность.
Дендритные клетки (DC) иммуногенность коррелирует с его созревания, в результате токсичные
продукты жизнедеятельности микробов, такие как LPS. В этом исследовании сообщается, что
нетоксичных полисахарид-белковый комплекс, выделенный из китайских целебных трав, Lycium
barbarum (LBP), индуцирует фенотипическое и функциональное созревание DCs с сильной
иммуногенностью. LBP-постоянного тока регулируется экспрессия CD40, CD80, CD86, и MHC класса II
молекул; вниз-регулируемого источника постоянного поглощения Ag; enhanced DC allostimulatory
деятельности; и индуцированной IL-12p40 и p70 производства. Все пять фракций были активными.
LBP разработана усовершенствованная Th1 ответ, и LBP-лечение DCs усиленной Th1 и Th2 ответов in
vitro и in vivo. Наше исследование предоставляет доказательства и обоснование по использованию
LBP в различных клинических условиях для повышения иммунитета хозяина и предлагает LBP
мощным адъювантом для проектирования DC-вакцинами.
J Immunol. 2009 Mar 15;182(6):3503-9. doi: 10.4049/jimmunol.0802567.
Polysaccharide-protein complex from Lycium barbarum L. is a novel stimulus of dendritic cell
immunogenicity.
Chen Z1, Lu J, Srinivasan N, Tan BK, Chan SH.
Dendritic cell (DC) immunogenicity correlates with its maturation, which can be induced by toxic microbial
products such as LPS. In this study, we report that a nontoxic polysaccharide-protein complex isolated from
a Chinese medicinal herb, Lycium barbarum (LBP), induces phenotypic and functional maturation of DCs
with strong immunogenicity. LBP up-regulated DC expression of CD40, CD80, CD86, and MHC class II
molecules; down-regulated DC uptake of Ag; enhanced DC allostimulatory activity; and induced IL-12p40
and p70 production. All of its five fractions were active. LBP developed enhanced Th1 response, and LBPtreated DCs enhanced Th1 and Th2 responses in vitro and in vivo. Our study provides evidence and rationale
on using LBP in various clinical conditions to enhance host immunity and suggests LBP as a potent adjuvant
for the design of DC-based vaccines.
Активация макрофагов путем полисахарид-белковый комплекс из Lycium barbarum
Макрофаги играют ключевую роль в врожденный иммунитет. Эта газета сообщает, что
полисахарид-белковый комплекс, изолированный от Lycium barbarum (LBP) способен активировать
макрофаги. LBP был изолирован от Lycium barbarum фрукты и разделены на пять однородных
фракций, места LBPF1, LBPF2, LBPF3, LBPF4 и LBPF5. Было установлено, что LBP (50 мг/кг, в / б.)
заметно upregulated выражения CD40, CD80, CD86 и MHC класса II молекул на перитонеальные
макрофаги. Исследования In vitro показали, что LBP и LBPF1-5 активации факторов транскрипции NFkappaB и AP-1 макрофагов RAW264.7 клетки, индуцированной TNF-alpha, IL-1beta, IL-12p40 экспрессии
мРНК, и за повышение ФНО-Альфа производства в дозо-зависимой манере. Кроме того, LBP (50 мг/кг,
в / б.) значительно повышена макрофагов эндоцитозного и фагоцитарного потенциала in vivo. Эти
результаты указывают на то, что LBP усиливает врожденный иммунитет путем активации макрофагов.
Механизм может быть за счет активации факторов транскрипции NF-kappaB и AP-1 индуцировать
ФНО-Альфа производства и регуляция MHC класса II костимулирующих молекул.
Phytother Res. 2009 Aug;23(8):1116-22. doi: 10.1002/ptr.2757.
Activation of macrophages by polysaccharide-protein complex from Lycium barbarum L.
Chen Z1, Soo MY, Srinivasan N, Tan BK, Chan SH.
Macrophages play crucial roles in innate immunity. This paper reports that a polysaccharide-protein
complex isolated from Lycium barbarum (LBP) is able to activate macrophages. LBP was isolated from Lycium
barbarum fruit and separated to five homogenous fractions, designated LBPF1, LBPF2, LBPF3, LBPF4 and
LBPF5. It was found that LBP (50 mg/kg, i.p.) markedly upregulated the expressions of CD40, CD80, CD86
and MHC class II molecules on peritoneal macrophages. In vitro studies showed that LBP and LBPF1-5
activated transcription factors NF-kappaB and AP-1 by RAW264.7 macrophage cells, induced TNF-alpha, IL1beta, IL-12p40 mRNA expression, and enhanced TNF-alpha production in a dose-dependent manner.
Furthermore, LBP (50 mg/kg, i.p.) significantly enhanced macrophage endocytic and phagocytic capacities in
vivo. These results indicate that LBP enhances innate immunity by activating macrophages. The mechanism
may be through activation of transcription factors NF-kappaB and AP-1 to induce TNF-alpha production and
67
upregulation of MHC class II costimulatory molecules.
Оценка гипогликемической активности полисахаридов, извлеченных из Lycium barbarum.
Было проведено исследование для оценки гипогликемической активности полисахарида,
выделенного из Lycium barbarum (LBP). Различных исследуемых параметров, включенных массы тела
(bw), уровень глюкозы крови натощак (FBG), общего холестерина (охс) и триглицеридов (тг), сахарным
диабетом и здоровых мышей. LBP лечения (20, 40 мг/ кг массы тела) в течение 28 дней приводило к
значительному снижению концентрации FBG, ТК и тг у больных сахарным диабетом мышей. Кроме
того, LBP значительно увеличивается вес тела. Данные продемонстрировали LBP в дозе 40 мг/кг веса
тела выставлены, тем лучше эффект.
Сахарный диабет-это серьезное хроническое заболевание. Хотя пероральные антигипергликемический препараты и инсулин часто успешно в лечение диабета, они обладают сильными
побочными эффектами и не в состоянии существенно изменить ход диабетических осложнений.
Эффективный контроль уровня глюкозы в крови является ключевым шагом в предотвращении или
ликвидации диабетических осложнений и улучшение качества жизни в обеих типа 1 и типа 2
диабетических пациентов (Chen et al., 2008). Настоящее исследование показывает, что alloxanиндуцированных диабетических мышей, представленные очевидно, гипергликемический симптомы,
но LBP производит значительные antihyperglycemic эффект при пероральном приеме в alloxanдиабетических мышей. Дозе 40 мг/кг был более эффективен, чем 20 мг/кг.
Диабет также связан с гиперлипидемией. Сыворотка ТК и тг существенно снизились в
диабетических мышей после LBP добавок. Эти эффекты могут быть из-за низкой активности
ферментов биосинтеза холестерина и / или низкий уровень липолиза, которые находятся под
контролем инсулина (Sharma et al., 2003). Lycium barbarum были использованы для лечения диабета в
народной традиции долгое время. Из этого исследования, мы можем заключить, LBP обладает
гипогликемическим эффектами и в дозе 40 мг/кг bw представляет собой оптимальный уровень для
осуществления положительного диабетической ответа у мышей. Данные о токсичности уже доказали,
что LBP не показывают каких-либо токсических реакций. Так что, можно сказать, что Lycium barbarum
хороший природный материал, является потенциальным средством для лечения диабета, может
быть эффективной составляющей является полисахарид.
Afr J Tradit Complement Altern Med. 2009 Jul 3;6(4):579-84.
Evaluation of hypoglycemic activity of the polysaccharides extracted from Lycium barbarum.
Jing L1, Cui G, Feng Q, Xiao Y.
A study was undertaken to evaluate the hypoglycemic activity of polysaccharide extracted from Lycium
barbarum (LBP). The various parameters studied included body weight (bw), fasting blood glucose levels
(FBG), total cholesterol (TC) and triglyceride (TG) in diabetic and normal mice. LBP treatment (20, 40 mg/ kg
body weight) for 28 days resulted in a significant decrease in the concentration of FBG, TC and TG in
diabetes mellitus mice. Furthermore, LBP significantly increased body weight. The data demonstrated LBP at
the dose of 40 mg/kg bw exhibited the better effect.
Активация Т-лимфоцитов путем полисахарид-белковый комплекс из Lycium barbarum Л.
Т-лимфоциты играют важную роль в адаптивном иммунитете. Lycium barbarum Л. (Л. barbarum),
также известный как wolfberry, китайской травяной медицины с различных биологических видов
деятельности, таких как повышение иммунитета, защита печени, и снижения побочных эффектов
химио-и радиотерапии. Здесь мы сообщаем, что полисахарид-белковый комплекс), с. л. barbarum
(LBP) способен активировать т-клетки. LBP был изолирован от л. barbarum и разделены на пять
однородных фракций, места LBPF1, LBPF2, LBPF3, LBPF4, и LBPF5. Мы обнаружили, что LBP, LBPF4, и
LBPF5 значительно стимулировало мышь splenocyte распространения. Распространение оказался тклеток, но не B-клеток. Клеточного цикла профиля анализ показал, что LBP, LBPF4, и LBPF5 заметно
снижается sub-G1 клеток. LBP, LBPF4, и LBPF5 активации фактора транскрипции NFAT и AP-1, строке
CD25 выражение, и индуцировать IL-2 и IFN-gamma транскрипцию генов и секреции белка. LBP (В / Б.
или p.o.) значительно индуцированных т-клеточной пролиферации. Наши результаты показывают, что
активация Т-лимфоцитов путем LBP может внести свой вклад в одно из его иммуно-расширение
функций.
68
Int Immunopharmacol. 2008 Dec 10;8(12):1663-71. doi: 10.1016/j.intimp.2008.07.019. Epub 2008 Aug 26.
Activation of T lymphocytes by polysaccharide-protein complex from Lycium barbarum L.
Chen Z1, Kwong Huat Tan B, Chan SH.
T lymphocytes play central roles in adaptive immunity. Lycium barbarum L. (L. barbarum), also known as
wolfberry, is a Chinese herbal medicine with various biological activities, such as enhancing immunity,
protecting liver damage, and reducing the side effects of chemotherapy and radiotherapy. Here, we report
that polysaccharide-protein complex from L. barbarum (LBP) is able to activate T cells. LBP was isolated from
L. barbarum and separated to five homogenous fractions, designated LBPF1, LBPF2, LBPF3, LBPF4, and
LBPF5. We found that LBP, LBPF4, and LBPF5 significantly stimulated mouse splenocyte proliferation. The
proliferation proved to be of T cells, but not B cells. Cell cycle profile analysis indicated that LBP, LBPF4, and
LBPF5 markedly reduced sub-G1 cells. LBP, LBPF4, and LBPF5 could activate transcription factors NFAT and
AP-1, prompt CD25 expression, and induce IL-2 and IFN-gamma gene transcription and protein secretion.
LBP (i.p. or p.o.) significantly induced T cell proliferation. Our results suggest that activation of T
lymphocytes by LBP may contribute to one of its immuno-enhancement functions.
Разворот апоптотических сопротивление Lycium barbarum гликопептид 3 в возрасте от т-клеток.
Учиться ли Lycium barbarum гликопептид 3 (LBGP3) влияет апоптоза т-клеток у старых мышей.
Методы:
LBGP3 очищали с DEAE целлюлозой и колонки с Сефадексом. Апоптотические "sub-G1 пик" был
обнаружен методом проточной цитометрии ДНК и лестница была решена путем гель-электрофореза
в агарозе. Уровни IFN-gamma и IL-10 были измерены с конкретными комплекты и экспрессии мРНК
была обнаружена методом от-ПЦР. Апоптоз белков, связанных со флип, FasL, Bcl-2 определяли с
помощью вестерн-блоттинга.
Результаты:
LBGP3 очищали от Fructus Lycii водные экстракты и идентифицируется как 41 kD гликопептид.
Лечение с 200 микрогр/мл LBGP3 увеличил скорость апоптоза т-клеток от мышей в возрасте и схожая
ДНК лестницы, что в " молодых т-клеток. Разворот апоптотических сопротивление, был вовлечен в
down-регуляции экспрессии Bcl-2 и флип, и up-регуляции экспрессии FasL.
Вывод:
Lycium barbarum гликопептид 3 меняет апоптоза сопротивление в возрасте т-клеток путем
модуляции экспрессии апоптоз-связанных молекул.
Biomed Environ Sci. 2008 Jun;21(3):212-7. doi: 10.1016/S0895-3988(08)60031-8.
Reversal of apoptotic resistance by Lycium barbarum glycopeptide 3 in aged T cells.
Yuan LG1, Deng HB, Chen LH, Li DD, He QY.
To study whether Lycium barbarum glycopeptide 3 (LBGP3) affects T cell apoptosis in aged mice.
METHODS:
LBGP3 was purified with DEAE cellulose and Sephadex columns. Apoptotic "sub-G1 peak" was detected by
flow cytometry and DNA ladder was resolved by agarose gel electrophoresis. Levels of IFN-gamma and IL-10
were measured with specific kits and mRNA expression was detected by RT-PCR. Apoptosis-related proteins
of FLIP, FasL, and Bcl-2 were determined by Western blotting.
RESULTS:
LBGP3 was purified from Fructus Lycii water extracts and identified as a 41 kD glycopeptide. Treatment
with 200 microg/mL LBGP3 increased the apoptotic rate of T cells from aged mice and showed a similar DNA
ladder pattern to that in young T cells. The reversal of apoptotic resistance was involved in down-regulating
the expression of Bcl-2 and FLIP, and up-regulating the expression of FasL.
CONCLUSION:
Lycium barbarum glycopeptide 3 reverses apoptotic resistance of aged T cells by modulating the
expression of apoptosis-related molecules.
Использование анти-старения, фитотерапия, Lycium barbarumпротив старения-ассоциированных
заболеваний. Что мы знаем до сих пор?
Lycium barbarum (Gouqizi, Fructus Lycii, Wolfberry) хорошо известен питательный печени, и, в свою
очередь, улучшению зрения. Однако, многие люди забыли его омолаживающие свойства. Ценные
69
компоненты. л. barbarum не ограничиваясь его цветные составляющие, содержащие лютеин и
каротин, но также включают в себя полисахариды и малых молекул, таких как бетаин, cerebroside,
бета-ситостерин, p-кумаровая, и различные витамины. Несмотря на то, что л. barbarum был
использован на протяжении веков, ее благотворное воздействие на наши органы не были
всесторонне изучены с современными технологиями, чтобы разгадать его лечебного воздействия на
биохимическом уровне. Недавно в нашей лаборатории, показал его нейропротективные эффекты для
counter потерю нейронов при нейродегенеративных заболеваниях. Полисахариды, извлеченные из л.
barbarum может защитить нейроны от бета-амилоидного пептида токсичность в нейрональных
культурах клеток и ганглиозных клеток сетчатки в экспериментальной моделью глаукомы. Мы даже
изолированные активный компонент полисахарид, который можно ослабить стресс-киназ и проапоптотических сигнальных путей. Мы накопили научных доказательств своим омолаживающим
эффектов, которые должны быть выделены для современной профилактической медицины. Этот
обзор должен содержать справочную информацию, и новое направление обучения за
омолаживающих свойств. л. barbarum. Мы надеемся, что новые находки для л. barbarum проложит
новый путь использования китайской медицины в современной доказательной медицины.
Cell Mol Neurobiol. 2008 Aug;28(5):643-52. Epub 2007 Aug 21.
Use of anti-aging herbal medicine, Lycium barbarum, against aging-associated diseases. What do we
know so far?
Chang RC1, So KF.
Lycium barbarum (Gouqizi, Fructus Lycii, Wolfberry) is well known for nourishing the liver, and in turn,
improving the eyesight. However, many people have forgotten its anti-aging properties. Valuable
components of L. barbarum are not limited to its colored components containing zeaxanthin and carotene,
but include the polysaccharides and small molecules such as betaine, cerebroside, beta-sitosterol, pcoumaric, and various vitamins. Despite the fact that L. barbarum has been used for centuries, its beneficial
effects to our bodies have not been comprehensively studied with modern technology to unravel its
therapeutic effects at the biochemical level. Recently, our laboratory has demonstrated its neuroprotective
effects to counter neuronal loss in neurodegenerative diseases. Polysaccharides extracted from L. barbarum
can protect neurons against beta-amyloid peptide toxicity in neuronal cell cultures, and retinal ganglion cells
in an experimental model of glaucoma. We have even isolated the active component of polysaccharide
which can attenuate stress kinases and pro-apoptotic signaling pathways. We have accumulated scientific
evidence for its anti-aging effects that should be highlighted for modern preventive medicine. This review is
to provide background information and a new direction of study for the anti-aging properties of L.
barbarum. We hope that new findings for L. barbarum will pave a new avenue for the use of Chinese
medicine in modern evidence-based medicine.
Характеризуя нейропротекторное действие щелочной экстракт Lycium barbarum на бетаамилоидного пептида нейротоксичности.
Lycium barbarum в восточном-лекарственная трава, которая уже давно используется для антистарения и клеточной защитные свойства. Предыдущие исследования показали, что водные
экстракты из L. barbarum экспонат нейропротекция с помощью ингибирования про-апоптотических
сигнальных путей. Другие активные компоненты могут также быть достигнуто с помощью новых
щелочной экстракции метод, который может давать различные профили водорастворимых
компонентов. Мы предполагаем, что другой активный компонент, полученный путем щелочной
экстракции метод оказывает различные биологические механизмы защиты нейронов. В данном
исследовании мы ставим целью изучения нейропротективных эффектов от щелочной экстракт L.
barbarum, а именно LBB, для ослабления бета-амилоида (Abeta) нейротоксичность пептидов.
Первичные корковые нейроны подвергались Abeta-пептидов, индуцирующих апоптоз и гибель
нейрональных клеток. Предобработка LBB значительно снижается уровень лактатдегидрогеназы
(ЛДГ) высвобождение и активность каспазы-3 вызваны Abeta. "Wash-out" процедуры не снижают его
нейропротективные эффекты, предполагая, что LBB не может связать непосредственно Abeta. Мы
имеем далее выделяют три подфракций от LBB, а именно LBB-0, LBB-я и LBB-II. LBB-я и LBB-II показал
дифференцированное нейропротекторный эффект. Вестерн-блот анализ показал, что LBB-я и LBB-II
заметно усиливается фосфорилирование Akt. Взятые вместе, наши результаты позволяют
70
предположить, что glycoconjugate изолированы от романа щелочной экстракции метод можно
открыть новое направление поиска лекарственных препаратов в развитии нейродегенеративных
заболеваний.
Brain Res. 2007 Jul 16;1158:123-34. Epub 2007 May 6.
Characterizing the neuroprotective effects of alkaline extract of Lycium barbarum on beta-amyloid
peptide neurotoxicity.
Ho YS1, Yu MS, Lai CS, So KF, Yuen WH, Chang RC.
Lycium barbarum is an oriental medicinal herb that has long been used for its anti-aging and cellprotective properties. Previous studies have shown that aqueous extracts from L. barbarum exhibit
neuroprotection via inhibiting pro-apoptotic signaling pathways. Other active components can also be
accomplished by novel alkaline extraction method, which may give different profiles of water-soluble
components. We hypothesize that another active component obtained by alkaline extraction method exerts
different biological mechanisms to protect neurons. In this study, we aim to examine the neuroprotective
effects from the alkaline extract of L. barbarum, namely LBB, to attenuate beta-amyloid (Abeta) peptide
neurotoxicity. Primary cortical neurons were exposed to Abeta-peptides inducing apoptosis and neuronal
cell death. Pretreatment of LBB significantly reduced the level of lactate dehydrogenase (LDH) release and
the activity of caspase-3 triggered by Abeta. "Wash-out" procedures did not reduce its neuroprotective
effects, suggesting that LBB may not bind directly to Abeta. We have further isolated three subfractions from
LBB, namely LBB-0, LBB-I and LBB-II. LBB-I and LBB-II showed differential neuroprotective effects. Western
blot analysis demonstrated that LBB-I and LBB-II markedly enhanced the phosphorylation of Akt. Taken
together, our results suggested that the glycoconjugate isolated from novel alkaline extraction method can
open up a new avenue for drug discovery in neurodegenerative diseases.
Горячей воды извлечены Lycium barbarum и Rehmannia glutinosa ингибировать пролиферацию и
индуцировать апоптоз гепатоцеллюлярной карциномы клеток.
Исследование влияния горячей воды извлечены Lycium barbarum (LBE) и Rehmannia glutinosa (RGE)
на клеточную пролиферацию и апоптоз в крысу и/или человеческой гепатоцеллюлярной карциномы
(ГЦК) клеток.
Методы:
Крыса (H-4-II-E) и человека ГЦК (HA22T/VGH) линии клеток инкубировали с различными
концентрациями (0-10 г/л) горячей воды извлечены LBE и RGE. После 6-24 ч инкубации клеточной
пролиферации (n = 6) измерялась колориметрическим методом. В апоптотических клеток (n = 6) были
выявлены с помощью проточной цитометрии. Экспрессия белка р53 (n = 3) определяли с помощью
SDS-PAGE и вестерн-блоттинга.
Результаты:
Сырой LBE (2-5 г/л) и RGE (2-10 г/л) доза-зависимо ингибирует пролиферацию H-4-II-E клетки на 11%
(P < 0,05) до 85% (P < 0,01) 6-24 ч после лечения. Сырой LBE в дозе 5 г/л подавлял пролиферацию
клеток H-4-II-E клетки более эффективно, чем сырой RGE 6-24 ч после инкубации (P < 0,01). Сырой LBE
(2-10 г/л) и RGE (2-5 г/л) также доза-зависимо ингибирует пролиферацию HA22T/VGH клеток на 14%43% (P < 0,01), через 24 ч. Сырой LBE в дозе 10 г/л ингибировал пролиферацию HA22T/VGH клеток
более эффективно, чем сырой RGE (56.8% +/- 1.6% против 70.3% +/- 3.1% от контроля, P = 0,0003 <
0.01). В апоптотических клеток значительно увеличивается в H-4-II-E клеток после 24 ч лечения более
высокими дозами сырой LBE (2-5 г/л) и RGE (5-10 г/л) (P < 0,01). Экспрессия белка р53 в ч-4-II-E клеток
составил 119% и 143% контрольной группы по сравнению с LBE-лечение (2, 5 г/л) групп, и 110% и 132%
контрольной группы по сравнению с RGE обработанная (5, 10 г/л) группах через 24 ч.
Вывод:
Горячая вода-добытой сырой LBE (2-5 г/л) и RGE (5-10 г/л) ингибируют пролиферацию и стимулирует
р53-опосредованного апоптоза в ГЦК ячеек.
World J Gastroenterol. 2006 Jul 28;12(28):4478-84.
Hot water-extracted Lycium barbarum and Rehmannia glutinosa inhibit proliferation and induce
apoptosis of hepatocellular carcinoma cells.
Chao JC1, Chiang SW, Wang CC, Tsai YH, Wu MS.
To investigate the effect of hot water-extracted Lycium barbarum (LBE) and Rehmannia glutinosa (RGE) on
71
cell proliferation and apoptosis in rat and/or human hepatocellular carcinoma (HCC) cells.
METHODS:
Rat (H-4-II-E) and human HCC (HA22T/VGH) cell lines were incubated with various concentrations (0-10
g/L) of hot water-extracted LBE and RGE. After 6-24 h incubation, cell proliferation (n = 6) was measured by
a colorimetric method. The apoptotic cells (n = 6) were detected by flow cytometry. The expression of p53
protein (n = 3) was determined by SDS-PAGE and Western blotting.
RESULTS:
Crude LBE (2-5 g/L) and RGE (2-10 g/L) dose-dependently inhibited proliferation of H-4-II-E cells by 11% (P
< 0.05) to 85% (P < 0.01) after 6-24 h treatment. Crude LBE at a dose of 5 g/L suppressed cell proliferation of
H-4-II-E cells more effectively than crude RGE after 6-24 h incubation (P < 0.01). Crude LBE (2-10 g/L) and
RGE (2-5 g/L) also dose-dependently inhibited proliferation of HA22T/VGH cells by 14%-43% (P < 0.01) after
24 h. Crude LBE at a dose of 10 g/L inhibited the proliferation of HA22T/VGH cells more effectively than
crude RGE (56.8% +/- 1.6% vs 70.3% +/- 3.1% of control, P = 0.0003 < 0.01). The apoptotic cells significantly
increased in H-4-II-E cells after 24 h treatment with higher doses of crude LBE (2-5 g/L) and RGE (5-10 g/L) (P
< 0.01). The expression of p53 protein in H-4-II-E cells was 119% and 143% of the control group compared
with the LBE-treated (2, 5 g/L) groups, and 110% and 132% of the control group compared with the RGE treated (5, 10 g/L) groups after 24 h.
CONCLUSION:
Hot water-extracted crude LBE (2-5 g/L) and RGE (5-10 g/L) inhibit proliferation and stimulate p53mediated apoptosis in HCC cells.
Повышенную биодоступность зеаксантина в молочной основе формулирование дерезы (Gou Qi
Zi; Fructus barbarum Л.).
Каротиноид лютеин, сосредоточен в макуле. Увеличение макулярного зеаксантин предлагается
снизить риск возрастной макулярной дегенерации. Маленьких красных ягод, боярышника (Fructus
barbarum Л.; Gou Qi Zi и Kei-цзы), является одним из самых богатых природных источников
зеаксантин. Однако, каротиноидов биодоступность низкая, и на основе пищевых продуктов,
продуктов с повышенной биологической ценностью, представляют интерес. В настоящем
исследовании изучали зеаксантин биодоступность из трех wolfberry формулировки. Ягоды были, но
не в горячей (80 градусов с) водой, теплой (40 градусов C) обезжиренного молока и горячей (80
градусов С), сухое обезжиренное молоко, с сублимационной сушки каждого препарата в
порошкообразном виде. В зеаксантин-стандартизированные дозы (15 мг) каждого был израсходован
в рандомизированных того, вместе со стандартным завтрак-шведский стол в двенадцать здоровых,
согласие субъектов в кросс-триал, с 3-5-недельного периода вымывания между процедурами. Были
взяты пробы крови через венозные канюли непосредственно перед (натощак) и 2, 4, 6, 7, 8 и 10 ч
после приема внутрь. Зеаксантин концентрация в триацилглицерол-богатой фракции липопротеинов
в плазме измеряли с помощью ВЭЖХ. Результаты показали, что триацилглицерол-богатых
липопротеинов зеаксантин достиг 6 ч после проглатывания для всех составов. Зеаксантин
биодоступность из горячего молока, формулировка была значительно выше (P < 0,001), чем от других.
Средняя площадь под Кривой (n 12) результаты были 9.73 (sem 2.45), 3.24 (sem 0.72) и 3.14 (sem 1.09)
нмоль х ч/л горячего молока, теплого молока и горячей воды формулировки, соответственно.
Результаты наглядно показали, что гомогенизацию wolfberry в горячее обезжиренное молоко
приводит формулировку, которая имеет в 3 раза повышенную биодоступность зеаксантина по
сравнению с " классическими " горячей воды и теплого обезжиренного молока лечение ягод.
Br J Nutr. 2006 Jul;96(1):154-60.
Enhanced bioavailability of zeaxanthin in a milk-based formulation of wolfberry (Gou Qi Zi; Fructus
barbarum L.).
Benzie IF1, Chung WY, Wang J, Richelle M, Bucheli P.
The carotenoid zeaxanthin is concentrated within the macula. Increased macular zeaxanthin is suggested
to lower the risk of age-related macular degeneration. The small red berry, wolfberry (Fructus barbarum L.;
Gou Qi Zi and Kei Tze), is one of the richest natural sources of zeaxanthin. However, carotenoid
bioavailability is low, and food-based products with enhanced bioavailability are of interest. The present
study investigated zeaxanthin bioavailability from three wolfberry formulations. Berries were homogenised
72
in hot (80 degrees C) water, warm (40 degrees C) skimmed milk and hot (80 degrees C) skimmed milk, with
freeze drying of each preparation into a powdered form. A zeaxanthin-standardised dose (15 mg) of each
was consumed, in randomised order, together with a standardised breakfast by twelve healthy, consenting
subjects in a cross-over trial, with a 3-5-week washout period between treatments. Blood samples were
taken via a venous cannula immediately before (fasting) and 2, 4, 6, 7, 8 and 10 h post-ingestion. Zeaxanthin
concentration in the triacylglycerol-rich lipoprotein fraction of plasma was measured by HPLC. Results
showed that triacylglycerol-rich lipoprotein zeaxanthin peaked at 6 h post-ingestion for all formulations.
Zeaxanthin bioavailability from the hot milk formulation was significantly higher (P < 0.001) than from the
others. Mean area under the curve (n 12) results were 9.73 (sem 2.45), 3.24 (sem 0.72) and 3.14 (sem 1.09)
nmol x h/l for the hot milk, warm milk and hot water formulations, respectively. Results showed clearly that
homogenisation of wolfberry in hot skimmed milk results in a formulation that has a 3-fold enhanced
bioavailability of zeaxanthin compared with both the 'classical' hot water and warm skimmed milk treatment
of the berries.
Эффект Lycium barbarum полисахарид, на улучшение антиоксидантной способности и
повреждение ДНК в ИНСД крыс.
Влияние полисахарида, выделенного из Lycium barbarum (LBP) на уровень глюкозы в крови,
окислительного стресса и повреждения ДНК у крыс с инсулиннезависимым сахарным диабетом
(ИНСД) были изучены. Результаты показывают, что LBP лечения (10 мг/kg.d) в течение 4 недель
привело к снижению уровня глюкозы в крови, малонового диальдегида (мда) и оксида азота (NO) в
сыворотке крови натощак крыс; и увеличение содержания в сыворотке крови уровня
супероксиддисмутазы (СОД). Кроме того, LBP мог снижения клеточного повреждения ДНК в
лимфоцитах периферической ИНСД крыс. Повреждение ДНК определяли с помощью single cell gel
(комета) анализа с помощью щелочного электрофореза и была определена количественно путем
измерения длины хвоста и хвост момент. Эти результаты позволяют предположить, что LBP можете
контролировать уровень глюкозы в крови и регулировать метаболизм глюкозы, что приводит к
значительному улучшению маркеров окислительного стресса (СОД, мда) у крыс с ИНСД. И что, LBP
уменьшает повреждение ДНК, возможно, за счет снижения окислительного стресса уровнях. В
заключение, LBP в качестве биологически активной добавки могут предотвратить развитие
осложнений или даже склонность к канцерогенез у крыс с ИНСД.
Yakugaku Zasshi. 2006 May;126(5):365-71.
Effect of Lycium barbarum polysaccharide on the improvement of antioxidant ability and DNA damage
in NIDDM rats.
Wu H1, Guo H, Zhao R.
The effects of polysaccharide extracted from Lycium barbarum (LBP) on blood glucose, oxidative stress
and DNA damage in rats with non-insulin dependent diabetes mellitus (NIDDM) were studied. The results
show that LBP treatment (10 mg/kg.d) for 4 weeks led to decreased levels of blood glucose,
malondialdehyde (MDA) and nitric oxide (NO) in serum of fasting rats; and to increased serum level of
superoxidedismutase (SOD). Furthermore, LBP could reduce cellular DNA damage in peripheral lymphocytes
of NIDDM rats. The DNA damage was determined by using the single cell gel (comet) assay with alkaline
electrophoresis and was quantified by measuring tail length and tail moment. These results suggest that LBP
can control blood glucose and modulate the metabolism of glucose, leading to significant improvement of
oxidative stress markers (SOD, MDA) in rats with NIDDM. And that, LBP decreases DNA damage possibly via
a decrease in oxidative stress levels. In conclusion, LBP as a dietary supplement may prevent the
development of complications or even tendency to carcinogenesis in NIDDM rats.
Эффект Lycium barbarum полисахарид, по улучшению инсулинорезистентности у крыс с ИНСД.
Lycium barbarum является одним из традиционных восточных лекарственных препаратов. Это, как
сообщается, снижающие уровень глюкозы в крови. В этом исследовании эффект Lycium barbarum
полисахарида (LBP) по повышению резистентности к инсулину и липидный профиль изучали на
крысах, модель для инсулиннезависимого сахарного диабета (ИНСД). Крысы были разделены на три
группы: контроль, ИНСД-контроль, и ИНСД+LBP. Диабет модель группы выступили кормления с
высоким содержанием жиров и привлечения к / б. streptozotocin (50 мг/кг). LBP лечение в течение 3
73
недель привело к значительному снижению концентрации триглицеридов плазмы и вес в ИНСД крыс.
Кроме того, LBP заметно уменьшились в плазме уровень холестерина и уровень инсулина в плазме
натощак и постпрандиального уровня глюкозы через 30 минут во время орального теста на
толерантность к глюкозе и значительно повышается инсулин-чувствительных индекс в ИНСД крыс. В
настоящем исследовании Мы проверили, что LBP можете уменьшить инсулинорезистентность и
эффект LBP связано с растущим на поверхности клеток уровень глюкозы transporter 4 (GLUT4 в
скелетной мышце крыс с ИНСД. Под инсулин стимул, GLUT4 содержание в плазматической мембраны
в ИНСД с крысами контрольной группы был значительно ниже, чем на контроле (p<0.01), и GLUT4
содержание в плазме мембраны в ИНСД+LBP крыс была выше, чем ИНСД с крысами контрольной
группы (p<0,01). В заключение LBP может улучшить сопротивление инсулина, и механизм могут быть
вовлечены в увеличение поверхности клетки уровень GLUT4, улучшение GLUT4 людьми и
внутриклеточной сигнализации инсулина.
Yakugaku Zasshi. 2005 Dec;125(12):981-8.
Effect of Lycium barbarum polysaccharide on the improvement of insulin resistance in NIDDM rats.
Zhao R1, Li Q, Xiao B.
Lycium barbarum is one of the traditional oriental medicines. It has been reported to reduce blood
glucose levels. In this study, the effect of Lycium barbarum polysaccharide (LBP) on the improvement of
insulin resistance and lipid profile was studied in rats, a model for non-insulin dependent diabetes mellitus
(NIDDM). The rats were divided into three groups: control, NIDDM control, and NIDDM+LBP. Diabetes model
groups were made by feeding high-fat diet and subjecting to i.p. streptozotocin (50 mg/kg). LBP treatment
for 3 weeks resulted in a significant decrease in the concentration of plasma triglyceride and weight in
NIDDM rats. Furthermore, LBP markedly decreased the plasma cholesterol levels and fasting plasma insulin
levels, and the postprandial glucose level at 30 min during oral glucose tolerance test and significantly
increased the Insulin Sensitive Index in NIDDM rats. In the present study, we have tested that LBP can
alleviate insulin resistance and the effect of LBP is associated with increasing cell-surface level of glucose
transporter 4 (GLUT4) in skeletal muscle of NIDDM rats. Under insulin stimulus, GLUT4 content in plasma
membrane in NIDDM control rats was significantly lower than that of control (p<0.01), and GLUT4 content in
the plasma membrane in NIDDM+LBP rats was higher than that of NIDDM control rats (p<0.01). In
conclusion, LBP can ameliorate insulin resistance, and the mechanism may be involved in increasing cellsurface level of GLUT4, improving GLUT4 trafficking and intracellular insulin signaling.
Нейропротекторный эффект анти-старения восточной медицины Lycium barbarum против бетаамилоидного пептида нейротоксичности.
Как пожилых людей резко возрастает в эти десятилетия, усилия должны быть направлены на
вмешательство для лечения ассоциированных с возрастом нейродегенеративных заболеваний, таких
как болезнь Альцгеймера (AD). Натуральные растительные экстракты Lycium barbarum хорошо
известно, вызывают анти-старения. Поэтому мы предположили, что они проявляют
нейропротекторные эффекты от токсинов в возрастные нейродегенеративные заболевания. В этом
исследовании мы стремились выяснить, насколько выдержки из л. barbarum у нейропротекторный
эффект в отношении токсичности фибриллярный Abeta(1-42) и Abeta(25-35) фрагменты. Первичные
нейроны коры головного мозга крыс, подвергшихся Abeta пептидов в результате апоптоза и некроза.
Предварительной очистки с экстрактом изолированы от л. barbarum значительно снижается
высвобождение лактатдегидрогеназы (ЛДГ). Кроме того, она ослабляется, Abeta пептид активации
каспаз-3-подобную активность. Экстракт вызвало, типичная доза-зависимые нейропротективный
эффект. Эффективную дозировку этот экстракт был более широким, чем известные западные
нейропротекторное медицины хлорида лития (LiCl). Мы должны продолжать изучать глубинные
механизмы нейропротекторных эффектов. В согласии с другими лабораториями, Abeta пептиды
вызывают быструю активацию c-Jun N-терминальной киназы (JNK) путем фосфорилирования.
Предварительной обработки водного экстракта заметно снижается фосфорилирование JNK-1
(Thr183/Tyr185) и его субстратов c-Jun-я (Ser 73) и c-Jun-II (Ser 63). Взятые вместе, мы доказали нашу
гипотезу, показывая нейропротективные эффекты экстракта из L. barbarum. Исследование на antiaging фитотерапия, как л. barbarum может открыть новые терапевтические " окна " для профилактики
объявлений.
74
Exp Gerontol. 2005 Aug-Sep;40(8-9):716-27.
Neuroprotective effects of anti-aging oriental medicine Lycium barbarum against beta-amyloid peptide
neurotoxicity.
Yu MS1, Leung SK, Lai SW, Che CM, Zee SY, So KF, Yuen WH, Chang RC.
As aged population dramatically increases in these decades, efforts should be made on the intervention
for curing age-associated neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease (AD). Natural plant
extracts of Lycium barbarum are well-known to exhibit anti-aging effects. We therefore hypothesized that
they exhibit neuroprotective effects against toxins in aging-related neurodegenerative diseases. In this study,
we aimed to investigate whether extracts from L. barbarum have neuroprotective effects against toxicity of
fibrillar Abeta(1-42) and Abeta(25-35) fragments. Primary rat cortical neurons exposed to Abeta peptides
resulted in apoptosis and necrosis. Pre-treatment with extract isolated from L. barbarum significantly
reduced the release of lactate dehydrogenase (LDH). In addition, it attenuated Abeta peptide-activated
caspases-3-like activity. The extract elicited a typical dose-dependent neuroprotective effect. Effective
dosage of this extract was wider than that of a well-known western neuroprotective medicine lithium
chloride (LiCl). We have further examined the underlying mechanisms of the neuroprotective effects. In
agreement with other laboratories, Abeta peptides induce a rapid activation of c-Jun N-terminal kinase (JNK)
by phosphorylation. Pre-treatment of aqueous extract markedly reduced the phosphorylation of JNK-1
(Thr183/Tyr185) and its substrates c-Jun-I (Ser 73) and c-Jun-II (Ser 63). Taken together, we have proved our
hypothesis by showing neuroprotective effects of the extract from L. barbarum. Study on anti-aging herbal
medicine like L. barbarum may open a new therapeutic window for the prevention of AD.
Лечебные эффекты Lycium barbarum полисахарида (LBP) и при облучении или химиотерапии
индуцированных myelosuppressive мышей.
Целью данного исследования было изучение влияния Lycium barbarum полисахарида (LBP) и при
облучении или химиотерапии индуцированных myelosuppressive мышей и культивированных
мононуклеарных клеток периферической крови (Рвмс).
Методы:
В in vivo эксперименте мышей, облученных в сублетальных доз 550 сгр X-ray или внутрибрюшинно
(В / Б.) вводят карбоплатин (CB) 125 мг/кг для производства тяжелой миелосупрессии. От четырех до 6
часов после облучения или инъекций, белых мышей подкожно (s.c.) вводят с LBP (50, 100 и 200 мг/кг)
ежедневно в день от 0 до 6 дня. Образцы крови собирали из хвостовой вены мышей в разные
моменты времени, и периферических лейкоцитов (WBC), эритроцитов (RBC)и тромбоцитов (PLT),
насчитывает мониторинг. В in vitro эксперименте, человеческих Рвмс инкубировали с LBP в различных
концентрациях в сочетании с phytohemagglutinin (PHA), производство гранулоцитарный
колониестимулирующий фактор (G-CSF), была испытана.
Результаты:
По сравнению с контролем, 50 мг/кг LBP (LBP-L) значительно улучшены снижение периферического
WBC облученных myelosuppressive мышей на 13-й день, 100 мг/кг LBP (LBP-м) сделали то же самое в
дни, 17 и 21. Все дозировки LBP значительно улучшены снижение периферического РБК облученных
myelosuppressive мышей в дни, 17 и 25. Двести мг/кг LBP (LBP-H) и LBP-м значительно расширенные
периферические PLT насчитывает облученных myelosuppressive мышей на дней 10, 13, 17, 21, как LBPL на 13 дней и 17. Все дозировки LBP расширение периферических WBC графов химиотерапии
индуцированных myelosuppressive мышей в какой-то степени, но не было статистических различий
при сравнении с контролем. LBP-H значительно улучшены снижение периферического РБК
химиотерапии индуцированных myelosuppressive мышей в дни, 13, 15, 17, и 20, и LBP-м и LBP-L сделал
то же самое на дней 15 и 17. Все дозировки LBP значительно расширенные периферические PLT
насчитывает химиотерапии индуцированных myelosuppressive мышей на 7 дней, а 10, как это сделал
LBP-х на 13 дней, 15, и 17, и LBP-м на 13 дней и 15. Также, LBP, естественно, может стимулировать
человеческие Рвмс, чтобы произвести G-CSF.
Выводы:
LBP способствовало периферической крови для восстановления облучения или химиотерапии
индуцированных myelosuppressive мышей, и эффекты могут быть результатом стимуляции PBMCs
произвести G-CSF.
75
Therapeutic effects of Lycium barbarum polysaccharide (LBP) on irradiation or chemotherapy-induced
myelosuppressive mice.
Gong H1, Shen P, Jin L, Xing C, Tang F.
The aim of this study was to investigate the effects of Lycium barbarum polysaccharide (LBP) on
irradiation- or chemotherapy-induced myelosuppressive mice and cultured peripheral blood mononuclear
cells (PBMCs).
METHODS:
In an in vivo experiment, mice were irradiated with a sublethal dose of 550 cGy X-ray or intraperitoneally
(i.p.) injected with carboplatin (CB) 125 mg/kg to produce severe myelosuppression. Four to 6 hours after
the irradiation or injection, mice were subcutaneously (s.c.) injected with LBP (50, 100, and 200 mg/kg) daily
from day 0 to day 6. Blood samples were collected from the tail veins of mice at different time points, and
peripheral white blood cells (WBC), red blood cells (RBC), and platelet (PLT) counts were monitored. In an in
vitro experiment, human PBMCs were incubated with LBP at different concentrations in combination with
phytohemagglutinin (PHA), and the production of granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) was tested.
RESULTS:
Compared to the control, 50 mg/kg LBP (LBP-L) significantly ameliorated the decrease of peripheral WBC
of irradiated myelosuppressive mice on day 13, and 100 mg/kg LBP (LBP-M) did the same on days 17 and 21.
All dosages of LBP significantly ameliorated the decrease of peripheral RBC of irradiated myelosuppressive
mice on days 17 and 25. Two-hundred mg/kg LBP (LBP-H) and LBP-M significantly enhanced peripheral PLT
counts of irradiated myelosuppressive mice on days 10, 13, 17, and 21, as did LBP-L on days 13 and 17. All
dosages of LBP increased peripheral WBC counts of chemotherapy-induced myelosuppressive mice to some
extent, but there was no statistic difference when compared to the control. LBP-H significantly ameliorated
the decrease of peripheral RBC of chemotherapy-induced myelosuppressive mice on days 13, 15, 17, and 20,
and LBP-M and LBP-L did the same on days 15 and 17. All dosages of LBP significantly enhanced peripheral
PLT counts of chemotherapy-induced myelosuppressive mice on days 7 and 10, as did LBP-H on days 13, 15,
and 17, and LBP-M on days 13 and 15. Also, LBP could obviously stimulate human PBMCs to produce G-CSF.
CONCLUSIONS:
LBP promoted the peripheral blood recovery of irradiation or chemotherapy-induced myelosuppressive
mice, and the effects may be the result of the stimulation of PBMCs to produce G-CSF.
Эффект lycium barbarum полисахарид, на человеческой гепатомы QGY7703 клеток:
ингибирование пролиферации и индукции апоптоза.
Lycium barbarum полисахарида (LBP), извлеченные из Lycium barbarum что это разновидность
традиционных китайских трав, обнаружено, обладающие противораковой активностью. В этом
исследовании эффект LBP на скорость размножения, распределение клеточного цикла и апоптоза в
человеческой гепатомы QGY7703 линии клеток были исследованы. Эффекты этого соединения были
проверены на концентрацию кальция в клетках. LBP лечение вызывает ингибирование QGY7703 рост
клеток с цикла ареста в S-фазе и индукции апоптоза. Количество РНК в клетках и концентрации
внутриклеточного Са2+ были увеличены. Более того, распределение кальция в клетках был изменен.
Вместе взятые, эти исследования позволили предположить, что индукция клеточного цикла и
увеличению внутриклеточного кальция в апоптотической системы могут участвовать в
антипролиферативные активности LBP в QGY7703 клеток.
Life Sci. 2005 Mar 18;76(18):2115-24.
Effect of lycium barbarum polysaccharide on human hepatoma QGY7703 cells: inhibition of
proliferation and induction of apoptosis.
Zhang M1, Chen H, Huang J, Li Z, Zhu C, Zhang S.
Lycium barbarum polysaccharide (LBP), extracted from Lycium barbarum that is a kind of traditional
Chinese herb, is found to have anticancer activity. In this study, the effect of LBP on the proliferation rate,
cell cycle distribution and apoptosis in the human hepatoma QGY7703 cell line were investigated. The
effects of this compound were also tested on the concentration of calcium in cells. LBP treatment caused
inhibition of QGY7703 cell growth with cycle arrest in S phase and apoptosis induction. The amount of RNA
in cells and the concentration of intracellular Ca2+ were increased. Moreover, the distribution of calcium in
cells was changed. Taken together, the study suggests that the induction of cell cycle arrest and the increase
of intracellular calcium in apoptotic system may participate in the antiproliferative activity of LBP in
76
QGY7703 cells.
В плазме натощак зеаксантин ответ на Fructus barbarum Л. (wolfberry; Kei-цзы) в пищевых
добавок на основе человеческого суда.
Возрастная макулярная дегенерация (вмд) является распространенным заболеванием, которое
вызывает необратимую потерю центрального зрения. Увеличение употребления продуктов,
содержащих зеаксантин может быть эффективным в предотвращении AMD, поскольку макула
накапливается зеаксантин и лютеин, кислородсодержащие каротиноиды-антиоксиданты и синий
свет-поглощающие свойства. Lycium barbarum Л. - это небольшая красная ягода, известная как Fructus
lycii и wolfberry на Западе, и Kei Tze и Gou Qi Zi в Азии. Wolfberry богат зеаксантин dipalmitate, и
ценится в китайской культуре за хорошее зрение. Целью данного исследования, которое было
одного-слепом, плацебо-контролируемом, человеческое вмешательство суда параллельной
разработки, было предоставить данные о том, зеаксантина в плазме натощак концентрация
изменяется в результате пищевых добавок в целом wolfberries. Пост собиралась кровь от здоровых,
согласие субъектов; четырнадцать испытуемых приняли 15 g/d wolfberry (по оценкам, содержат почти
3 мг зеаксантина) для 28 d. Повторите анализ крови натощак был собран на 29 дня. Возраста и пола и
группы контроля (n 13) не принимал wolfberry. Ответы в двух группах сравнивали с помощью MannWhitney test. После добавки, зеаксантина в плазме увеличилось в 2,5 раза. средние значения на 1
день и 29 были 0.038 (sem 0,003) и 0.096 (sem 0.009) micromol/л (P<0,01), соответственно, за хранение,
комплектование группы; и 0.038 (sem 0,003) и 0.043 (sem 0.003) micromol/л (р>0,05), соответственно,
для контрольной группы. Этого человека добавок суда показывает, что зеаксантин в целом wolfberries
является биодоступным и, что потребление скромное ежедневное количество заметно увеличивается
в плазме натощак зеаксантин уровнях. Эти новые данные будут поддерживать дальнейшее изучение
диетических стратегий поддерживать плотность макулярного пигмента.
Br J Nutr. 2005 Jan;93(1):123-30.
Fasting plasma zeaxanthin response to Fructus barbarum L. (wolfberry; Kei Tze) in a food-based human
supplementation trial.
Cheng CY1, Chung WY, Szeto YT, Benzie IF.
Age-related macular degeneration (AMD) is a common disorder that causes irreversible loss of central
vision. Increased intake of foods containing zeaxanthin may be effective in preventing AMD because the
macula accumulates zeaxanthin and lutein, oxygenated carotenoids with antioxidant and blue lightabsorbing properties. Lycium barbarum L. is a small red berry known as Fructus lycii and wolfberry in the
West, and Kei Tze and Gou Qi Zi in Asia. Wolfberry is rich in zeaxanthin dipalmitate, and is valued in Chinese
culture for being good for vision. The aim of this study, which was a single-blinded, placebo-controlled,
human intervention trial of parallel design, was to provide data on how fasting plasma zeaxanthin
concentration changes as a result of dietary supplementation with whole wolfberries. Fasting blood was
collected from healthy, consenting subjects; fourteen subjects took 15 g/d wolfberry (estimated to contain
almost 3 mg zeaxanthin) for 28 d. Repeat fasting blood was collected on day 29. Age- and sex-matched
controls (n 13) took no wolfberry. Responses in the two groups were compared using the Mann-Whitney
test. After supplementation, plasma zeaxanthin increased 2.5-fold: mean values on day 1 and 29 were 0.038
(sem 0.003) and 0.096 (sem 0.009) micromol/l (P<0.01), respectively, for the supplementation group; and
0.038 (sem 0.003) and 0.043 (sem 0.003) micromol/l (P>0.05), respectively, for the control group. This
human supplementation trial shows that zeaxanthin in whole wolfberries is bioavailable and that intake of a
modest daily amount markedly increases fasting plasma zeaxanthin levels. These new data will support
further study of dietary strategies to maintain macular pigment density.
Lycium barbarum гликоконъюгатов: воздействие на кожу человека и культивируемых дермальных
фибробластов.
Lycium barbarum L. (Solanaceae) гликоконъюгатов (LbGp) показать интересные массив
антиапоптозных и антиоксидантными свойствами, которые могут быть полезны для кожи человека.
Поэтому мы задались целью определить влияние LbGp в полной толщины кожи человека, и в
дермальных фибробластов. Было установлено, что LbGp снизился уровень ММП (матриксной
металлопротеиназы)-1 значительно, но не то, что ММП-3 или -13, в целом кожа человека системы,
77
без ущерба для жизнеспособности кожи. Последовательно, LbGp тормозится расширение под кожу
механические напряжения, которые в этой модели зависит от активности ММП-1. Мы обнаружили,
что один из L. barbarum гликоконъюгатов, LbGp5, способствовал выживанию человеческих
фибробластов, культивируемых в субоптимальных условиях. Кроме того, в присутствии LbGp5, эти
культуры содержат более высокие уровни ММП-1 субстрат--коллаген типа I. вместе, эти результаты
свидетельствуют о том, что л. barbarum гликоконъюгатов в целом, и LbGp5 в частности, может иметь
важное кожи-защитные свойства.
Phytomedicine. 2005 Jan;12(1-2):131-7.
Lycium barbarum glycoconjugates: effect on human skin and cultured dermal fibroblasts.
Zhao H1, Alexeev A, Chang E, Greenburg G, Bojanowski K.
Lycium barbarum L. (Solanaceae) glycoconjugates (LbGp) display an interesting array of anti-apoptotic and
antioxidant properties, which may be beneficial for human skin. We therefore set out to determine the
effects of LbGp in full-thickness human skin, and in dermal fibroblasts. It was found that LbGp decreased the
level of MMP (matrix metalloproteinase)-1 significantly, but not that of MMP-3 or -13, in the whole human
skin system, without compromising the viability of the skin. Consistently, LbGp inhibited skin expansion
under mechanical stress, which in this model depends on the activity of MMP-1. We found that one of L.
barbarum glycoconjugates, the LbGp5, promoted the survival of human fibroblasts cultured in suboptimal
conditions. Furthermore, in the presence of LbGp5, these cultures also contained higher levels of the MMP1 substrate--collagen type I. Together these results suggest that L. barbarum glycoconjugates in general, and
LbGp5 in particular, may have important skin-protective properties.
Гипогликемические и гиполипидемические эффекты и антиоксидантная активность экстрактов
фруктов из Lycium barbarum.
Гипогликемическое и гиполипидемическое воздействие Lycium barbarum фрукты вода, отвар, сырой
полисахаридных экстрактов (сырой LBP)и очищенных полисахаридных фракций (LBP-X) В alloxanиндуцированной диабетической или hyperlipidemic кролики были исследованы через разработаны
последовательные испытания и измерения уровня глюкозы в крови и липидов сыворотки
параметров. Общая антиоксидантная активность была также оценена с помощью trolox эквивалент
антиоксидантной емкости (TEAC) и oxygen Radical absorbance capacity (ORAC) анализа. Было
установлено, что трое Lycium barbarum фруктовые экстракты/фракций может значительно снизить
уровень глюкозы в крови и сыворотке крови общего холестерина (охс) и триглицеридов (тг)
концентрации и в то же время заметно увеличение холестерина липопротеинов высокой плотности
(HDL-c) уровни после 10 дней лечения в обследованных кроликов, указывая, что имелись
существенные гипогликемическим и гиполипидемическим эффектами. Гипогликемический эффект
LBP-х был более значительным, чем вода, отвар и сырой LBP, но его гиполипидемическое действие,
казалось, слабее. Общая антиоксидантная активность анализ показал, что все три Lycium barbarum
выдержки/фракции обладали антиоксидантной активностью. Однако, воды и methanolc экстракты
фруктов и сырых полисахаридных экстрактов выставлены сильнее антиоксидантной активностью, чем
очищенные полисахаридные фракции, потому что сырой экстракты были определены, чтобы быть
богатым антиоксидантами (напр., каротиноиды, рибофлавин, аскорбиновая кислота, тиамин,
никотиновая кислота). Lycium barbarum полисахариды (glycocojugates), состоящих из нескольких
моносахаридов и 17 аминокислот, и были основные биологически активные компоненты
гипогликемического эффекта. Как полисахариды и антиоксиданты витамин С Lycium barbarum фрукты
были возможны активных принципов гиполипидемическое действие.
Life Sci. 2004 Nov 26;76(2):137-49.
Hypoglycemic and hypolipidemic effects and antioxidant activity of fruit extracts from Lycium
barbarum.
Luo Q1, Cai Y, Yan J, Sun M, Corke H.
The hypoglycemic and hypolipidemic effects of Lycium barbarum fruit water decoction, crude
polysaccharide extracts (crude LBP), and purified polysaccharide fractions (LBP-X) in alloxan-induced
diabetic or hyperlipidemic rabbits were investigated through designed sequential trials and by measuring
blood glucose and serum lipid parameters. Total antioxidant capacity was also assessed using trolox
equivalent antioxidant capacity (TEAC) and oxygen radical absorbance capacity (ORAC) assay. It was found
78
that the three Lycium barbarum fruit extracts/fractions could significantly reduce blood glucose levels and
serum total cholesterol (TC) and triglyceride (TG) concentrations and at same time markedly increase high
density lipoprotein cholesterol (HDL-c) levels after 10 days treatment in tested rabbits, indicating that there
were substantial hypoglycemic and hypolipidemic effects. Hypoglycemic effect of LBP-X was more significant
than those of water decoction and crude LBP, but its hypolipidemic effect seemed to be weaker. Total
antioxidant capacity assay showed that all three Lycium barbarum extracts/fractions possessed antioxidant
activity. However, water and methanolc fruit extracts and crude polysaccharide extracts exhibited stronger
antioxidant activity than purified polysaccharide fractions because crude extracts were identified to be rich
in antioxidants (e.g., carotenoids, riboflavin, ascorbic acid, thiamine, nicotinic acid). Lycium barbarum
polysaccharides (glycocojugates), containing several monosaccharides and 17 amino acids, were major
bioactive constituents of hypoglycemic effect. Both polysaccharides and vitamin antioxidants from Lycium
barbarum fruits were possible active principles of hypolipidemic effect.
Иммуномодулирующей и противоопухолевой активностью, путем полисахарид-белковый
комплекс из Lycium barbarum.
Модуляция полисахарид-белковый комплекс из Lycium barbarum (LBP3p) на иммунную систему, в
С180-подшипник мышей была изучена. У мышей, привитых с С180 суспензию клеток обрабатывали
перорально. с LBP3p (5, 10 и 20 мг/кг) в течение 10 дней. Последствия LBP3p на перевиваемых
опухолей и макрофагального фагоцитоза, количественные гемолиза эритроцитов барана (QHS),
пролиферацию лимфоцитов, активность цитотоксических Т-лимфоцитов (CTL), интерлейкин-2 (IL-2)
генной экспрессии и перекисного окисления липидов в исследуемых группах. LBP3p может
значительно ингибировать рост перевивных сарком С180 и увеличение макрофагов фагоцитоз, форма
антител, секретируемых клетками селезенки, селезенка пролиферацию лимфоцитов, активность CTL,
IL-2 и экспрессии мРНК уровня и снижает перекисное окисление липидов в С180-подшипник мышей.
Эффект не зависит от дозы линейно. Общая доза 10 мг/кг более эффективен, чем 5 и 20 мг/кг дозах.
Это говорит о том, что LBP3p на 10 мг/кг оказывает весьма существенное влияние на опухолевые вес и
улучшает иммунную систему.
Int Immunopharmacol. 2004 Apr;4(4):563-9.
Immunomodulation and antitumor activity by a polysaccharide-protein complex from Lycium
barbarum.
Gan L1, Hua Zhang S, Liang Yang X, Bi Xu H.
The modulation of a polysaccharide-protein complex from Lycium barbarum (LBP3p) on the immune
system in S180-bearing mice was investigated. The mice inoculated with S180 cell suspension were treated
p.o. with LBP3p (5, 10 and 20 mg/kg) for 10 days. The effects of LBP3p on transplantable tumors and
macrophage phagocytosis, quantitative hemolysis of sheep red blood cells (QHS), lymphocyte proliferation,
the activity of cytotoxic T lymphocyte (CTL), interleukin-2 (IL-2) gene expression and lipid peroxidation were
studied. LBP3p could significantly inhibit the growth of transplantable sarcoma S180 and increase
macrophage phagocytosis, the form of antibody secreted by spleen cells, spleen lymphocyte proliferation,
CTL activity, IL-2 mRNA expression level and reduce the lipid peroxidation in S180-bearing mice. The effect is
not dose-dependent in a linear fashion. A total of 10 mg/kg dose is more effective than 5 and 20 mg/kg
doses. This suggests that LBP3p at 10 mg/kg has a highly significant effect on tumor weight and improves
the immune system.
Полисахарид-белковый комплекс из Lycium barbarum upregulates цитокиновой экспрессии в
человеческих мононуклеарных клеток периферической крови.
Производство цитокин является ключевым событием в инициации и регуляции иммунного ответа.
Многие препараты теперь используется в повседневной модулировать продукцию цитокинов, и,
следовательно, иммунный ответ, в широкий спектр заболеваний, таких как рак. Интерлейкин-2 и
фактор некроза опухоли-Альфа два важных цитокинов в противоопухолевом иммунитете. В этом
исследовании, последствия Lycium barbarum полисахарид-белковый комплекс (LBP(3p)) на
экспрессию интерлейкина-2 и фактора некроза опухоли-Альфа в человеческих мононуклеарных
клеток периферической крови были исследованы методом обратной транскрипции полимеразной
цепной реакции (RT-PCR) и биопроб. Администрация LBP(3p) повышенная экспрессия интерлейкина-2
и фактора некроза опухоли-Альфа в обеих мРНК и белка в дозо-зависимой манере. Результаты
79
показывают, что LBP(3p) может индуцировать иммунные реакции и обладают потенциальной
терапевтической эффективности в борьбе с раком.
Eur J Pharmacol. 2003 Jun 27;471(3):217-22.
A polysaccharide-protein complex from Lycium barbarum upregulates cytokine expression in human
peripheral blood mononuclear cells.
Gan L1, Zhang SH, Liu Q, Xu HB.
The production of cytokine is a key event in the initiation and regulation of an immune response. Many
compounds are now used routinely to modulate cytokine production, and therefore the immune response,
in a wide range of diseases, such as cancer. Interleukin-2 and tumor necrosis factor-alpha are two important
cytokines in antitumor immunity. In this study, the effects of Lycium barbarum polysaccharide-protein
complex (LBP(3p)) on the expression of interleukin-2 and tumor necrosis factor-alpha in human peripheral
blood mononuclear cells were investigated by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and
bioassay. Administration of LBP(3p) increased the expression of interleukin-2 and tumor necrosis factoralpha at both mRNA and protein levels in a dose-dependent manner. The results suggest that LBP(3p) may
induce immune responses and possess potential therapeutic efficacy in cancer.
[Ингибирование роста клеток лейкемии человека Lycium barbarum полисахарид].
Эффект и механизм Lycium barbarum полисахарида (LBP-X), подавляя рост лейкемии человека HL-60
клеток были исследованы. LBP-X(20, 100, 500, 1000 мг/л) может подавлять рост HL-60 клеток
дозозависимым и уменьшить текучесть мембраны клетки. Агарозный гель-электрофорез ДНК из
клеток, обработанных LBP-х выявило "DNA ladder" и положительный тест TUNEL. Результаты показали,
что апоптоз HL-60 клеток, индуцированных LBP-X может быть важным механизмом по борьбе с
tumorgenesis.
Wei Sheng Yan Jiu. 2001 Nov;30(6):333-5.
[Inhibition the growth of human leukemia cells by Lycium barbarum polysaccharide].
[Article in Chinese]
Gan L1, Wang J, Zhang S.
The effect and the mechanism of Lycium barbarum polysaccharide (LBP-X) on inhibiting the growth of
human leukemia HL-60 cells were examined. LBP-X(20, 100, 500, 1000 mg/L) could inhibit the growth of HL60 cells in dose-dependent manner and decrease the membrane fluidity of the cell. Agarose gel
electrophoresis of DNA from the cells treated with LBP-X revealed a "DNA ladder" and positive TUNEL test.
The results showed that the apoptosis of HL-60 cells induced by LBP-X maybe its important mechanism on
anti-tumorgenesis.
[Извлечение и выделение активного компонента для ингибирования PC3 пролиферации клеток
in vitro из плодов Lycium barbarum L].
Для извлечения и изолировать активный компонент ингибирующих PC3 пролиферации клеток in
vitro из плодов Lycium barbarum.
Метод:
Активные компоненты : плоды L. barbarum были извлечены воды, 95% этанол, 50% этанола
соответственно. Затем, этанол, экстракт экстрагировали ацетоном и н-бутанола и изолирован SiO2
столбца и очищали с помощью ТСХ для получения активного компонента. Химическая структура
активного компонента был определен с помощью спектрального анализа. МТТ-теста был
использован для сравнения ингибирование активности(IC50) PC3 пролиферации клеток всех
экстрактов.
Результат:
Согласно IC50, самый активный компонент среди всех экстрактов, изолированные из плодов L.
barbarum isscopoletin.
Вывод:
Scopoletin является активным компонентом фруктовых л. barbarum для ингибирования PC3
клеточной пролиферации.
Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 2000 Aug;25(8):481-3.
[Extraction and isolation of active component for inhibiting PC3 cell proliferation in vitro from the fruit
80
of Lycium barbarum L].
Liu XL1, Sun JY, Li HY, Zhang L, Qian BC.
To extract and isolate the active component inhibiting PC3 cell proliferation in vitro from the fruit of
Lycium barbarum.
METHOD:
The active components of the fruit of L. barbarum were extracted by water, 95% ethanol, 50% ethanol
respectively. Then, ethanol extract was extracted with acetone and n-butanol and isolated by SiO2 column
and purified by TLC to obtain the active component. The chemical structure of active component was
identified by the spectral analysis. MTT assay was used to compare the inhibition activity(IC50) of PC3 cells
proliferation of the all extracts.
RESULT:
According IC50, the most active component among all extracts isolated from the fruit of L. barbarum
isscopoletin.
CONCLUSION:
Scopoletin is the active component of the fruit of L. barbarum for inhibiting PC3 cell proliferation.
J Nutr. 2014 февраль;144(2):224-9. doi: 10.3945/jn.113.183566. Epub Dec 2013 11.
Диетическое wolfberry добавок усиливает защитный эффект вакцины против гриппа против
гриппа вызов в старых мышей.
Текущие вакцины от гриппа не в полной мере защищать в возрасте в отношении гриппозной
инфекции. Хотя wolfberry (годжи Берри) была показана для улучшения иммунного ответа, включая
повышение выработки антител после вакцинации в возрасте, это не известно, если этот эффект
приведет к более эффективной защите после гриппозной инфекции, не является его основной
механизм хорошо понимают. Чтобы решить эти вопросы, мы провели исследование с
использованием 2 × 2, в разработке которого в возрасте самцов мышей (20-22 mo) - кормили
управления или 5% wolfberry диета для 30 d, затем прививки с вакциной против гриппа или
физиологический раствор (контроль) на дней 31 и 52 диетического вмешательства, и, наконец,
столкнулся с вирусом гриппа A/Puerto Rico/8/34 вирус. Мышей кормили wolfberry имели высшее
гриппа титры антител и улучшение симптомов (менее postinfection потери веса) по сравнению с
мышей вакциной в одиночку. Кроме того, in vitro механистическое исследование показало, что
wolfberry усилило созревание и активность антигенпрезентирующих дендритных клеток (DC) в
возрасте от мышей, как указано фенотипические изменения в экспрессии DC активации маркеров
главного комплекса гистосовместимости класса II, кластеров дифференцировки (CD) 40, CD80 и CD86,
и функциональные изменения в DC продукция цитокинов интерлейкина-12 и фактора некроза
опухоли-α, а также DC эндоцитоза. Кроме того, приемные передачи wolfberry-лечение костного мозга
DCs (загружается с овальбумин(323-339)-пептид) способствовали антиген-специфичных т-клеточной
пролиферации, а также интерлейкин-4 и интерферон-γ производства в CD4(+) т-клеток. В целом, наши
данные показывают, что пищевые wolfberry повышает эффективность вакцинации против гриппа, в
результате чего улучшится узла защиты для предотвращения последующего заражения гриппом; этот
эффект может быть частично связан с повышением DC функция.
J Nutr. 2014 Feb;144(2):224-9. doi: 10.3945/jn.113.183566. Epub 2013 Dec 11.
Dietary wolfberry supplementation enhances the protective effect of flu vaccine against influenza
challenge in aged mice.
Du X1, Wang J, Niu X, Smith D, Wu D, Meydani SN.
Current vaccines for influenza do not fully protect the aged against influenza infection. Although
wolfberry (goji berry) has been shown to improve immune response, including enhanced antibody
production, after vaccination in the aged, it is not known if this effect would translate to better protection
after influenza infection, nor is its underlying mechanism well understood. To address these issues, we
conducted a study using a 2 × 2 design in which aged male mice (20-22 mo) were fed a control or a 5%
wolfberry diet for 30 d, then immunized with an influenza vaccine or saline (control) on days 31 and 52 of
the dietary intervention, and finally challenged with influenza A/Puerto Rico/8/34 virus. Mice fed wolfberry
had higher influenza antibody titers and improved symptoms (less postinfection weight loss) compared with
the mice treated by vaccine alone. Furthermore, an in vitro mechanistic study showed that wolfberry
81
supplementation enhanced maturation and activity of antigen-presenting dendritic cells (DCs) in aged mice,
as indicated by phenotypic change in expression of DC activation markers major histocompatibility complex
class II, cluster of differentiation (CD) 40, CD80, and CD86, and functional change in DC production of
cytokines interleukin-12 and tumor necrosis factor-α as well as DC endocytosis. Also, adoptive transfer of
wolfberry-treated bone marrow DCs (loaded with ovalbumin(323-339)-peptide) promoted antigen-specific T
cell proliferation as well as interleukin-4 and interferon-γ production in CD4(+) T cells. In summary, our data
indicate that dietary wolfberry enhances the efficacy of influenza vaccination, resulting in better host
protection to prevent subsequent influenza infection; this effect may be partly attributed to improved DC
function.
Возможного взаимодействия между Lycium barbarum (Годжи) и Варфарин.
Lycium barbarum (также называется годжи Берри), китайская трава, используется в качестве добавки
для здоровья, является традиционно употребляются китайцами в виде чая. Годжи сок, широко
доступного напитка в Соединенных Штатах, также содержит это растение. Мы расскажем, 71-летний
Эквадорцы-американская женщина, которая принимала варфарин и был госпитализирован на
заметно повышен, индетерминантный международное нормализованное отношение (мно)
(протромбиновое время > 120 сек) после употребления годжи сок. Она уже перенесла операцию на
колене, примерно на 3 месяца раньше, во время которого варфарин терапия была начата. Она
сообщила, никаких изменений в питании или образе жизни другой, кроме как пить годжи сок за 4 дня
до госпитализации. На презентации в отделение неотложной помощи, она описала симптомы
носовые кровотечения, синяки и ректальные кровотечения. После прекращения годжи сок и
варфарин, пациент лечился с фитонадаион, и ее мно снизился до 2.6 в течение 2 дней. Приложение
Наранхо побочные реакции вероятность шкалой, указанной вероятной связь (оценка 6) между
пациентом надземных INR, связанные с кровотечением и ее одновременное применение L. barbarum
и варфарин. Две другие опубликованные отчеты описали подобные взаимодействия между
варфарином и чай, содержащие L. barbarum. Пациенты должны быть информированы о том, как
избегать популярны травяные напитки, такие как годжи соки, которые содержат L. barbarum в то
время как они принимают варфарин. Кроме того, клиницистам следует расспрашивать пациентов об
их использовании фитотерапии и такой документ использовать в своих медицинских записей прежде,
чем назначать препараты, такие как варфарин.
Pharmacotherapy. 2012 Jan 31. doi: 10.1002/PHAR.1018. [Epub ahead of print]
Probable Interaction Between Lycium barbarum (Goji) and Warfarin.
Rivera CA1, Ferro CL, Bursua AJ, Gerber BS.
Lycium barbarum (also called goji berry), a Chinese herb used as a supplement for health benefits, is
traditionally consumed by the Chinese in the form of a tea. Goji juice, a widely available beverage in the
United States, also contains this herb. We describe a 71-year-old Ecuadorean-American woman who was
taking warfarin and was hospitalized for a markedly elevated, indeterminate international normalized ratio
(INR) (prothrombin time > 120 sec) after consumption of goji juice. She had undergone knee surgery
approximately 3 months earlier at which time warfarin therapy was started. She reported no changes in
dietary habits or lifestyle other than drinking goji juice for 4 days before hospitalization. On presentation to
the emergency department, she described symptoms of epistaxis, bruising, and rectal bleeding. After
discontinuation of the goji juice and warfarin, the patient was treated with phytonadione, and her INR
decreased to 2.6 over 2 days. Application of the Naranjo adverse drug reaction probability scale indicated a
probable relationship (score of 6) between the patient's elevated INR with associated bleeding and her
concomitant use of L. barbarum and warfarin. Two other published reports have described similar
interactions between warfarin and a tea containing L. barbarum. Patients should be educated about
avoiding popular herbal drinks, such as goji juice, that contain L. barbarum while they are taking warfarin. In
addition, clinicians should question patients about their use of herbal therapies and document such use in
their medical records before prescribing drugs such as warfarin.
82
Ягоды: композиционные элементы, биохимической активности, и влияние их потребления на
здоровье человека, производительность и болезни.
Огромное число исследований, теперь твердо установлено, что поступление с пищей ягод
оказывает позитивное и глубокое воздействие на здоровье человека, производительность и болезни.
Плоды ягоды, которые в промышленных масштабах культивируется и широко употребляются в
свежем и переработанном форм в Северной Америке, включают ежевика ( Rubus spp.), малины
черной ( Rubus occidentalis), голубики ( Vaccinium corymbosum), клюква (т.е., американская клюква
(Vaccinium macrocarpon, в отличие от европейских клюква, V. oxycoccus), красная малина ( Rubus
idaeus) и земляники ( Fragaria x ananassa). Других ягод, которые являются менее известных, но,
потребляемой в традиционном рационе североамериканских племен, общин, включают черемухи
виргинской ( Prunus virginiana), плодах калины ( Viburnum trilobum), сервисберри ( Amelanchier
alnifolia), и серебро buffaloberry ( Shepherdia argentea). Кроме того, ягод, таких как арктический
брамбл ( Rubus xxxxxxxxxx), черника ( Vaccinuim myrtillus; также известен как болото голубика), черная
смородина ( Ribes nigrum), boysenberries ( Rubus spp.), морошка ( Rubus chamaemorus), crowberries (
Empetrum nigrum), E. hermaphroditum), elderberries ( Sambucus spp.), крыжовник ( Ribes uva-crispa),
брусника ( Vaccinium vitis-idaea), loganberry ( Rubus loganobaccus), marionberries ( Rubus spp.), Ягоды
рябины ( Sorbus spp.), и масло облепихи ( Hippophae rhamnoides), также в народе потребляется в
других частях мира. В последнее время наблюдается всплеск потребления экзотических "ягода-типа"
фрукты, такие как гранат ( Punica granatum), ягоды годжи ( Lycium barbarum; также известен как
wolfberry), мангостина ( Garcinia mangostana), бразильский açaí Берри ( Euterpe oleraceae)и Чилийское
maqui Берри ( Aristotelia chilensis). С учетом широкого потребления ягод и их потенциального
воздействия на здоровье человека и болезни, конференциях и симпозиумах, что цель последних
научных исследований (и, равны по значимости, распространения этой информации среди широкой
общественности), по химии и биологических и физиологических функций эти "суперпродукты"
необходимы.
J Agric Food Chem. 2008 Feb 13;56(3):627-9. doi: 10.1021/jf071988k. Epub 2008 Jan 23.
Berry fruits: compositional elements, biochemical activities, and the impact of their intake on human
health, performance, and disease.
Seeram NP.
An overwhelming body of research has now firmly established that the dietary intake of berry fruits has a
positive and profound impact on human health, performance, and disease. Berry fruits, which are
commercially cultivated and commonly consumed in fresh and processed forms in North America, include
blackberry ( Rubus spp.), black raspberry ( Rubus occidentalis), blueberry ( Vaccinium corymbosum),
cranberry (i.e., the American cranberry, Vaccinium macrocarpon, distinct from the European cranberry, V.
oxycoccus), red raspberry ( Rubus idaeus) and strawberry ( Fragaria x ananassa). Other berry fruits, which
are lesser known but consumed in the traditional diets of North American tribal communities, include
chokecherry ( Prunus virginiana), highbush cranberry ( Viburnum trilobum), serviceberry ( Amelanchier
alnifolia), and silver buffaloberry ( Shepherdia argentea). In addition, berry fruits such as arctic bramble (
Rubus articus), bilberries ( Vaccinuim myrtillus; also known as bog whortleberries), black currant ( Ribes
nigrum), boysenberries ( Rubus spp.), cloudberries ( Rubus chamaemorus), crowberries ( Empetrum nigrum,
E. hermaphroditum), elderberries ( Sambucus spp.), gooseberry ( Ribes uva-crispa), lingonberries (
Vaccinium vitis-idaea), loganberry ( Rubus loganobaccus), marionberries ( Rubus spp.), Rowan berries (
Sorbus spp.), and sea buckthorn ( Hippophae rhamnoides), are also popularly consumed in other parts of
the world. Recently, there has also been a surge in the consumption of exotic "berry-type" fruits such as the
pomegranate ( Punica granatum), goji berries ( Lycium barbarum; also known as wolfberry), mangosteen (
Garcinia mangostana), the Brazilian açaí berry ( Euterpe oleraceae), and the Chilean maqui berry (
Aristotelia chilensis). Given the wide consumption of berry fruits and their potential impact on human
health and disease, conferences and symposia that target the latest scientific research (and, of equal
importance, the dissemination of this information to the general public), on the chemistry and biological
and physiological functions of these "superfoods" are necessary.
83
84