микра 1 итог

1. Определение предмета микробиологии, отрасли, задачи медицинской микробиологии.
Микробиология (от греч. micros – малый, bios – жизнь, logos – учение) – наука о мельчайших невидимых невооруженным
взглядом живых объектах – микроорганизмах, закономерностях их развития и тех изменениях, которые они вызывают в
среде обитания и в окружающей среде.
Медицинская микробиология изучает патогенные и условно патогенные для человека микроорганизмы, их экологию и
распространение, методы их выявления и индефикации, а так же вопросы эпидемиалогии, специфической терапии, и
профилактики вызываемых ими заболеваний.
РАЗДЕЛЫ:
Так сформировались общая, техническая, с\х, ветеринарная, медицинская, санитарная, морская, космическая микробиология.
ОБЩАЯ микробиология изучает наиболее общие закономерности, свойственные каждой группе перечисленных
микроорганизмов: структуру, метаболизм, генетику, экологию и т.д.
Основной задачей ТЕХНИЧЕСКОЙ (промышленной) микробиологии является разработка биотехнологии синтеза
микроорганизмами биологически активных веществ: белков, витаминов, ферметов, спиртов, органических кислот,
антибиотиков и др.
СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ микробиология занимается изучением микроорганизмов, которые участвуют в круговороте
веществ, используются для изготовления удобрений, вызывают заболевания растений, и другими проблемами.
ВЕТЕРИНАРНАЯ микробиоллгия изучает возбудителей заболеваний животных, разрабатывает методы их биологической
диагностики, спецйифической профилактики и этиотропного лечения, направленного на уничтожение микробов-возбудителей
в организме больного животного.
Задачи медицинской микробиологии: 1. Изучение биологии патогенных (болезнетворных) и нормальных для человека
микробов. 2. Изучение роли микробов в возникновении, развитии инфекционных (заразных) болезней и формировании
иммунного ответа макроорганизма (" хозяина"). 3. Разработка методов микробиологической диагностики (распознавания),
специфического лечения и профилактики (предупреждения) инфекционных болезней человека
2. Методы исследования в микробиологии.
1.Микроскопический - изучение микробов в окрашенном и неокрашенном (нативном) состоянии с помощью различных типов
микроскопов. Метод позволяет определить форму, размеры, расположение, структурны элементы и отношение к окраске
микробов. Иногда по характерным морфологическим особенностям можно определить вид микроба (грибов, простейших,
некоторых бактерий).
Микробиологический - (бактериологический, культурный) - посев материала на питательные среды для выделения чистой
культуры и определения ее вида (идентификации). Культурой в микробиологии называют совокупность микроорганизмов.
Чистая культура - скопление микробов одною вида, выращенных на питательной среде. Штамм - чистая культура, выделенная
из конкретного источника в определенное время, (например, штамм Shigella flexneri №8, выделенный от больного К. 20
сентября). Клон - генетически однородная чистая культура, полученная в результате бесполого размножения I клетки
(используется при изучении микробных популяций, в генетических экспериментах).
Экспериментальный (биологический) - заражение микробами лабораторных животных. Метод позволяет:
выделить чистую культуру микробов, плохо растущих на питательных средах;
изучить болезнетворные свойства микроба;
получать иммунобиологические препараты для специфической профилактики, диагностики и лечения.
4. Иммунологический (в диагностике инфекций) - изучение ответных специфических реакций макроорганизма на контакт с
микробами.
3. Значение микробиологии в работе провизора.
Основной целью изучения микробиологии и иммунологии в подготовке провизоров явл. приобретение студентами знаний,
умений и навыков, кот. позволят им на современном уровне, в соответствии с квалификационной характеристикой, выполнять
проф. обязанности в части, касающейся микробиологических и иммунологических аспектов их деят. Будущий провизор
должен располагать знаниями: о биологических св-вах микробов, их роли в природе и в жизни чела, о распр. в биосфере; о
влиянии микробов на процесс изготовления лек-в, о применении бактерий и вирусов в биотехнологии; значении микробов в
инфекц и неинфекц патологии чела; об иммунной сис-ме и особенностях ее функционирования; о препаратах,
обеспечивающих специф. Диаг., терапию и профил. Инфекц. и неинфекц заб, о способах иммунокоррекции. Наряду со сввами микроорганизмов - возбуд инфекц болезней, предусматривается изучение вопросов, касающихся путей заражения и
механизмов распр. Инфекц. болезней, патогенеза и клинич. проявлений, мер специф. и неспециф. Профил. и противоэпидем
мероприятий при инфекц болезнях. Важное место в профес. деят провизора занимают вопросы асептики, антисептики и
стерилизации, хранения и контроля лекарственного сырья и готовых л с, соблюдение правил санитарно-гигиенического и
противоэпидемического режима и техники безопасности при работе с микроорганизмами.
4. Основные этапы развития микробиологии.
Выделяют 5 исторических периода развития и становления микробиологии как науки.
I. Эвристический период.
Многие тысячелетия человечество пользовалось плодами жизнедеятельности микроорганизмов, не подозревая об их
существовании. Хотя мысль о наличии в природе невидимых живых существ возникала у многих исследователей. Гиппократ,
Парацельс (VI век до н.э.) высказывали предположение о том, что «миазмы», обитающие в болотах, вызывают различные
болезни у человека, попадая в его организм через рот. В наиболее законченной форме идею сформулировал Джироламо
Фракосторо в труде «О контагиях, контагиозных болезнях и лечении» (1546 г.): заражение человека может происходить
тремя путями – при непосредственном соприкосновении, опосредованно (через предмет) и на расстоянии, но при
обязательном участии контагий («зародышей болезней»). Однако это были гипотезы, доказательств которых у них не было.
II.
Описательный период (морфологический) – охватывает вторую половину XVIII века и продолжается до
середины XIX века. Связан с созданием микроскопа и открытием микроскопических существ, невидимых
глазом человека. Первый микроскоп был создан в 1590 г. Гансом и Захарием Янсенами, но у него было
увеличение всего лишь в 32 раза. Голландский натуралист Антоний Левенгук (1632-1723 гг.) сконструировал
микроскоп с увеличением в 160-300 раз, при помощи которого ему удалось обнаружить мельчайших «живых
зверьков» (анималькусов) в дождевой воде, зубном налете и других материалах. Зарисованные им формы
микроорганизмов были удивительно правдивы.
В этот же период в 1771 г. выдающийся русский врач Данило Самойлович (1744-1805 гг.) в опыте самозаражения гноем
больных чумой доказал роль микроорганизмов в этиологии чумы и возможность предохранения людей от чумы с помощью
прививок. Д.С. Самойлович был убежденным сторонником живой природы возбудителя чумы и за 100 с лишним лет до
открытия этого микроба пытался обнаружить его. Лишь несовершенство микроскопов того времени помешало ему сделать
это. Он предположил возможность искусственного создания невосприимчивости к инфекционному агенту и даже предпринял
попытку создания противочумной вакцины. Эти исследования предшествовали работам Э. Дженнера. Работы Д.С.
Самойловича внесли большой вклад в разработку мероприятий по борьбе с чумой.
В 1796 г. Эдвард Дженнер (1749-1823 гг.) создал и успешно применил вакцину для профилактики натуральной оспы, взяв
материал от доярки, больной коровьей оспой.
III.
Физиологический период (Пастеровский) (вторая половина XIX века) – «золотой век» микробиологии.
С момента обнаружения микроорганизмов, возник вопрос не только об их роли в патологии человека, но и об
их устройстве, биологических свойствах, процессах жизнедеятельности, экологии и т.д. Поэтому с середины
XIX века началось интенсивное изучение физиологии бактерий.
Л. Пастер (1822-1895 гг.) – основатель французской школы микробиологии (химик по образованию, талантливый
экспериментатор, сделал ряд фундаментальных открытий во многих областях науки, в том числе и в микробиологии), его
основные достижения:

открытие бактериальной природы брожения и гниения при изучение болезней вина и
пива;

предложение мягкого метода стерилизации – пастеризации;

доказательство
невозможности самопроизвольного
зарождения
жизни (если
стерильный бульон оставить в открытой колбе, то он прорастет, но если стерильный бульон поместить в колбу,
сообщающуюся с воздухом через спиральную трубку, то бульон не прорастет, т.к бактерии осядут на изогнутых частях
трубки);
создание основ вакцинного дела;
разработка и получение вакцины против бешенства, сибирской язвы у животных и куриной холеры;
открытие
возбудителей сибирской
язвы (Bacillus
anthracis),
родовой
горячки
(стрептококки), фурункулеза (стафилококки).
Иммунологический период (конец XIX – начало XX веков), связан с работами И.И. Мечникова и П.
Эрлиха.
И.И. Мечников (1845-1916 гг.) – один из основоположников иммунологии, описал явление фагоцитоза (клеточная теория
иммунитета).
Пауль Эрлих (1854-1915 гг.) сформулировал теорию гуморального иммунитета, объяснив происхождение антител и их
взаимодействие с антигенами.
В 1908 г. И.И. Мечникову и П. Эрлиху была присуждена Нобелевская премия за работы в области иммунологии.
Конец XIX ознаменовался эпохальным открытием царства вирусов.
Д.И. Ивановский (1864-1920 гг.) – первооткрыватель вирусов. Будучи сотрудником кафедры ботаники Петербургского
университета в 1892 г. при изучении мозаичной болезни табака пришел он к выводу, что заболевание вызвано
фильтрующимся агентом, впоследствии названным вирусом.
1928 г. – А. Флеминг, изучая явления микробного антагонизма, получил нестабильный пенициллин.
А в 1940 г. – Г. Флори и Э. Чейн получили стабильную форму пенициллина.
Отечественный пенициллин был разработан в 40-е годы прошлого столетия ленинградским микробиологом З.В. Ермольевой.
V.
Современный период (начался в середине XX века) связан с научно-технической революцией в
естествознании.
1944 г. – О. Эвери, К. Мак-Леод, К. Мак-Карти доказали роль ДНК в передаче наследственной информации.
1953 г. – Д. Уотсон и Ф. Крик расшифровали структуру ДНК.
В 60-70 гг. появились работы по генетике бактерий, становление генной инженерии.
1958 г. – П. Медавар и Гашек описали явление иммунологической толерантности. 1959 г. – Р. Портер и Д. Эдельман
смоделировали молекулу иммуноглобулина.
1982 г. – Р. Галло, 1883 г. Л. Монтанье открыли ВИЧ.
5. Луи Пастер, его открытия в области микробиологии.
Л. Пастер (1822-1895 гг.) – основатель французской школы микробиологии (химик по образованию, талантливый
экспериментатор, сделал ряд фундаментальных открытий во многих областях науки, в том числе и в микробиологии), его
основные достижения:
открытие бактериальной природы брожения и гниения при изучение болезней вина и
IV.
пива;
предложение мягкого метода стерилизации – пастеризации;
доказательство невозможности самопроизвольного
зарождения
жизни (если
стерильный бульон оставить в открытой колбе, то он прорастет, но если стерильный бульон поместить в колбу,
сообщающуюся с воздухом через спиральную трубку, то бульон не прорастет, т.к бактерии осядут на изогнутых частях
трубки);
создание основ вакцинного дела;
разработка и получение вакцины против бешенства, сибирской язвы у животных и куриной холеры;
открытие
возбудителей сибирской
язвы (Bacillus
anthracis),
родовой
горячки
(стрептококки), фурункулеза (стафилококки).
6. Работы Роберта Коха, их значение в области микробиологии.
Р. Кох (1843-1910 гг.) – основатель школы немецких микробиологов, его достижения:
внедрение в практику микробиологии анилиновых красителей, иммерсионной системы, плотных питательных сред;
открытие возбудителей туберкулеза и холеры у человека;
сформулирована триаду критериев, по которым можно было установить связь инфекционного заболевания с
определенным микроорганизмом (триада Генле-Коха – эти принципы до Коха выдвигал Генле, а Кох сформулировал
и развил):
1) микроб, предполагаемый в качестве возбудителя болезни, всегда должен обнаруживаться только при данном
заболевании, не выделяясь при других болезнях и от здоровых людей;
2) данный микроб должен быть выделен в чистой культуре;
3) чистая культура этого микроба должна вызывать у экспериментального животного заболевание с клинической и
паталогоанатомической картиной, свойственной заболеванию человека.
Сейчас эта триада имеет относительное значение, установление роли микроорганизма в развитии инфекционного заболевания
не всегда укладывается в рамки триады.
7. Роль отечественных ученых в развитии микробиологии
Отечественным ученым принадлежит немало крупных достижений и открытий, внесших существенный вклад в развитие
микробиологии.
В ранний период развития микробиологии большое значение имели работы русских исследователей М.М. Тереховского (17401796 гг.) и Д.С. Самойловича. Работы М.М. Тереховского были посвящены изучению влияния на микроорганизмы различных
физических и химических воздействий, первым разработал подходы к термическому обеззараживанию различных объектов.
К сожалению, его работы были мало известны в то время.
Русский ботаник Л.С. Ценковский (1822-1887 гг.), отнесший бактерии к растениям, разработал вакцину против сибирской
язвы, которую успешно применял для вакцинации скота; описал 43 новых вида микроорганизмов; начал читать лекции о
бактериях в Петербургском университете в середине 50-х годов XIX века.
Г.Н. Минх (1836-1896 гг.) и О.О. Мочутковский (1845-1903 гг.) в опытах самозаражения доказали инфекционную природу
возбудителя возвратного сыпного тифа.
Д.К. Заболотный (1866-1929 гг.) – крупнейший организатор борьбы с чумой, доказал природную очаговость чумы, установил
пути передачи инфекции от животных, тем самым заложив основы отечественной эпидемиологии. В 1898 г. создал 1-ю
кафедру микробиологии в Петербургском женском медицинском институте.
Г.Н. Габричевский (1860-1907 гг.) – первый русский бактериолог, открыл на частной основе Бактериологический институт
при Московском университете в 1896 г., автор «Руководства к клинической бактериологии для врачей и студентов» и
учебника «Медицинская бактериология». Имеет много работ по лечению и профилактике скарлатины, малярии и возвратного
тифа. В 1894 г. получил первую противочумную сыворотку, которую сначала испытывал на себе.
Н.Ф. Гамалея (1859-1949 гг.) – выдающийся русский микробиолог, ученик Пастера, автор многих работ, посвященных
проблемам бешенства, холеры и др., разработал основы получения химических вакцин, в 1886 г. организовал и открыл в
Одессе первую в России и вторую в мире Пастеровскую станцию, где проводились прививки против бешенства.
Л.А. Зильбер (1894-1966 гг.) выделил вирус клещевого энцефалита и исследовал эпидемиологию этого заболевания, получил
первую вакцину для специфической профилактики клещевого энцефалита. Является автором вирусно-генетической теории
происхождения опухолей.
П.Ф. Здродовский – иммунолог и микробиолог, известный фундаментальными работами по физиологии иммунитета и
риккетсиологии.
В.М. Жданов – крупнейший вирусолог, один из организаторов ликвидации натуральной оспы на Земле, основоположник
молекулярной вирусологии и генной инженерии.
В.Д. Тимаков – известен трудами по L-формам бактерий.
М.П. Чумаков – вирусолог, организатор Института полиомиелита и вирусных энцефалитов (сейчас носит его имя), автор
многих противовирусных вакцин, в том числе полиомиелитной пероральной вакцины.
А.А. Смородинцев – автор гриппозной, коревой и полиомиелитной вакцин.
8. Место микроорганизмов среди других живых существ, основные группы микроорганизмов.
8. Место микроорганизмов среди других живых существ, основные группы микроорганизмов.
К микроорганизмам относятся живые существа, вследствие своих малых размеров недоступные зрению человека.
Человеческий глаз видит объекты величиной около 0,1 нм, а различает детали в объектах размером более 1 мм. Поэтому мир
микроорганизмов объединяет живые существа, разные по своей природе, строению, свойствам. Четко различаются три
царства: эукариоты, прокариоты, вирусы.
Эукариоты (греч. eu - хорошо, karyon - ядро) - высшие микроорганизмы. Клетка эукариот имеет истинное ядро (лат. - nucleus),
отделенное от цитоплазмы ядерной мембраной, и содержащее двойной набор хромосом. Клетки эукариотов делятся как по
типу митоза, так по типу мейоза, в цитоплазме имеется эндоплазматическая сеть, митохондрии или хлоропласты. В
цитоплазме эукариотов содержатся 80S-рибосомы (S - константа седиментации, характеризующая размер частиц). Все
эукариоты - аэробы.
Прокариоты не имеют истинного ядра, у них нуклеоид, содержащий ДНК, не отделен от цитоплазмы ядерной мембраной и
располагается свободно в цитоплазме. Деление прокариотических клеток происходит по типу амитоза. Цитоплазма содержит
70S-рибосомы, которые меньше по размеру, чем рибосомы в цитоплазме эукариотов. Строение клеточных мембран и
жгутиков у прокариотов иное, а клеточная стенка содержит полимерное соединение - пептидогликан, которого нет у
эукариотов. Среди прокариотов есть аэробы и анаэробы.
Выделяют мир микроорганизмов, который подразделяют на 3 царства:
1. Эукариоты (Eucaryotae): отделы – грибы (Fungi или Mycota) и простейшие (Protozoa).
2. Прокариоты (Procaryotae) : отделы – цианобактерии (сине-зеленые водоросли) и бактерии (35 групп по
Берджи, в том числе бактерии, актиномицеты, спирохеты, риккетсии, хламидии и микоплазмы).
3. Вирусы (Vira) – ДНК- и РНК-содержащие.
Существуют две неклассифицированные формы микроорганизмов – вироиды (инфекционные ДНК/РНК) и прионы
(инфекционные белки).
9. Световой микроскоп с иммерсионным объективом, правила работы с ним.
Иммерсионная микроскопия (от лат. immersio — погружение) — метод микроскопического исслед малых объектов с
помощью погружения объектива светового микроскопа в среду с высоким коэффициентом преломления, расположенную
между микроскопическим препаратом и объективом. Для проведения исследований испол спец иммерсионные объективы
(объективы для масляной иммерсии имеют чёрную полосу на оправе, вблизи от фронтальной линзы; объективы для водной
иммерсии — белую полосу).
1. Настроить освещение микроскопа, используя вогнутое зеркало и объектив x8. Первоначально освещение настраивают при
боковом осмотре верхней линзы конденсора. После этого при наблюдении в окуляр, изменяя положение зеркала, настраивают
равномерную освещённость поля зрения.
2. На приготовленный и окрашенный мазок на предметном стекле нанести каплю иммерсионного масла и поместить его на
предметный столик, укрепив зажимами. Иммерсионное масло можно наносить только на сухой мазок.
3. При помощи револьверного устройства установить иммерсионный объектив с увеличением 90.
4. Осторожно опустить тубус микроскопа до погружения объектива в каплю масла.
5. Установить ориентировочный фокус при помощи макрометрического винта.
6. Провести окончательную фокусировку препарата микрометрическим винтом, вращая его в пределах только одного оборота.
Нельзя допускать соприкосновения объектива с препаратом, так как это может повлечь повреждение стекла или фронтальной
линзы объектива (свободное расстояние иммерсионного объектива 0,1-1 мм).
7. По окончанию работы с микроскопом необходимо вытереть масло с иммерсионного объектива и перевести револьверное
устройство на объектив с малым увеличением (x8).
Благодаря иммерсионному маслу лучи света, проходя через однородную оптическую среду (стекло и масло), не меняют
своего направления.
10. Микроскопия в тёмном поле зрения.
Темнопольный микроскоп представляет собой микроскоп с принципом отраженного или проходящего света с темнопольным
конденсором. Принцип работы темного поля используется для получения полноценного изображения прозрачных, не
поглощающих и поэтому не видимых не окрашенных объектов при наблюдении в светлом поле.
Темнопольная микроскопия основана на рассеивании света микроскопическими объектами, в т ч теми, размеры кот меньше
предела разрешения светового микроскопа.
Свет от осветителя и зеркала проходит через специальный темнопольный
конденсор, кот формирует световой пучок в виде полого конуса и направляет его на объект наблюдения. Роль темнопольного
конденсора в отраженном свете выполняет эллиптическое зеркало, одетое на оправу объектива. По выходе из конденсора
основная часть лучей проходит мимо объектива (кот находится внутри этого конуса). Изображение в микроскопе
формируется при помощи лишь небольшой части лучей, рассеянных микрочастицами объекта наблюдения внутрь конуса и
прошедшими через объектив. Т о, в поле зрения на тёмном фоне видны светлые изображения элементов структуры объекта,
отличающиеся от окр среды показателем преломления.
Метод темного поля в отраженном свете чаще всего примен
для изучения непрозрачных образцов, кот невозможно увидеть с помощью светлопольной микроскопии, например шлифы
металлов. Кроме того, метод идеально подходит для контроля мелких дефектов на полупроводниковых пластинах, кот на
изображении имеют вид ярких «вспышек».
11. Люминесцентная микроскопия.
Люминесцентная (флюоресцентная) микроскопия основана на способности некоторых в-в люминесцировать, т. е. светиться
при освещении невидимым ультрафиолетовым или синим светом.
Цвет люминесценции смещен в более длинноволновую
часть спектра по сравнению с возбуждающим ее светом (правило Стокса). При возбуждении люминесценции синим светом
цвет ее м б от зеленого до красного, если люминесценция возбуждается ультрафиолетовым излучением, то свечение м б в
любой части видимого спектра. Эта особенность люминесценции позволяет, используя спец светофильтры, поглощающие
возбуждающий свет, наблюдать сравнительно слабое люминесцентное свечение.
Устройство люминесцентного
микроскопа и правила работы с ним отличаются от обычного светового микроскопа в основном след: Наличие мощного
источника света в осветителе, изучающего преимущественно в коротковолновой (ультрафиолетовой, синей) части спектра
(ртутно-кварцевая лампа сверхвысокого давления или галогенная кварцевая лампа). Наличие системы светофильтров:
возбуждающие светофильтры пропускают только ту часть спектра, кот возбуждает люминесценцию; *теплозащитный
светофильтр защищает от перегрева другие светофильтры, препарат и оптику люминесцентного микроскопа. «запирающие»
светофильтры расположены между окуляром. Эти светофильтры поглощают возбуждающее излучение и пропускают свет
люминесценции от препарата к глазу наблюдателя.
препарат освещают светом, падающим на него через объектив.
Благодаря этому освещенность увелич при испол объектов, имеющих большую числовую апертуру, т. е. тех, кот испол для
изучения микроорганизмов. Важную роль при этом способе освещения играет спец интерференционная светоделительная
пластинка, направляющая свет в объектив. Она предст собой полупрозрачное зеркало, кот избирательно отражает и
направляет в объектив часть спектра, кот возбуждает люминесценцию, а пропускает в окуляр свет люминесценции. Оптика
объективов люминесцентного микроскопа изготавливается из нелюминесцирующих сортов оптического стекла и склеивается
спец нелюминесцирующим клеем. При работе с объективами масляной иммерсии испол нелюминесцирующее иммерсионное
масло. Поскольку большинство микроорганизмов не обладают собственной люминесценцией существует несколько способов
их обработки для наблюдения в люминесцентном микроскопе. Прежде всего это флюорохромирование - окрашивание сильно
разведенными (до нескольких микрограмм/мл) р-рами флюоресцирующих красителей (флюорохромов).
12. Фазово-контрастная микроскопия.
Фазово-контрастная микроскопия в наст вр позволяет изучать живые организмы, объекты, кот попросту неразличимы для
визуализации с применением обычного оптического (светового) микроскопа. когда необходимо исслед живого объекта,
фазово-контрастная микроскопия явл неотъемлемой частью исслед. У фазово-контрастного микроскопа самый обыкновенный
конденсор меняется на конденсор с кольцевой диафрагмой, а объектив представлен линзами с фазовой пластиной. Когда
происходит сдвиг фаз волны, имеющей название электромагнитной, переходит в контраст интенсивности. Принцип фазово
контрастной микроскопии: Свет от его источника проходит через исследуемые объекты, расположенные на предметном
столике, рассеивается на 2 части: преломленный и непреломленный свет.
Не преломленный свет данная фазовая
пластина ослабляет, снижается его интенсивность. Преломленный же свет и вовсе не попадает на нее.
Благодаря этому
невидимые, неконтрастные микроорганизмы, незаметные при обычном микроскопировании в световом микроскопе,
становятся высоко контрастными, и прекрасно визуализируются. Они могут наблюдаться темными на фоне светлого цвета,
так называемый, позитивный фазовый контраст, а также, наоборот, негативный контраст, когда исследуемый объект выглядит
светлым на темном фоне.
13. Электронная микроскопия.
В электронном микроскопе вместо света для построения изображения используют поток электронов в вакууме.
В качестве «линз», фокусирующих электроны, служит электромагнитное поле, создаваемое электромагнитными катушками.
Изображение в электронном микроскопе наблюдают на флюоресцирующем экране и фотографируют. Объекты при
электронной микроскопии находятся в глубоком вакууме, поэтому подвергаются фиксации и специальной обработке.
Кроме того, они д б очень тонкими, т к поток электронов сильно поглощается объектом. В связи с этим в качестве объектов
используют ультратонкие срезы толщиной 20—50нм, помещенные на тончайшие пленки. Разрешающая микроскопов
значительно выше чем световых и достигает 1,5А (0,15 нм), что позволяет получить полезное увеличение в миллионы раз.
Наиболее широко применяются просвечивающая (трансмиссивная) и сканирующая электронная микроскопия.
Просвечивающая электронная микроскопия применяется для изучения ультратонких срезов микробов, тканей, а также
строения мелких объектов (вирусов, жгутиков. и др.), контрастированных фосфорно-вольфрамовой кислотой,
уранилацетатом, напылением металлов в вакууме и др.
Сканирующая электронная микроскопия применяется для
изучения поверхности объектов.
14. Морфология бактерий. Место их среди микроорганизмов, основные формы, размеры.
Морфология бактерий – это раздел микробиологии, изучающий форму, размеры, строение бактерий и их взаимное
расположение относительно друг друга.
Размеры бактерий измеряются в мкм и колеблются от 0,1 до 10 мкм; размеры отдельных клеточных структур – в нм.
Существуют 4
основные
формы бактерий
–
шаровидные, палочковидные,
извитые,
ветвящиеся.
Шаровидные бактерии – кокки (coccus – зерно) имеют правильно сферическую или эллипсовидную форму, по
расположению в мазке различают:
микрококки (от греч. micros – малый) распределяются в мазке беспорядочно, по одному;
диплококки (от греч. diplos – двойной ) – попарно;
тетракокки – по 4;
сарцины (от греч. sarcina – связка, тюк) – «пакетами» по 8, 16, 32 и более;
стафилококки (от греч. staphyle – гроздь винограда) – в виде гроздьев винограда;
стрептококки (от греч. streptos – цепочка) – в виде цепочки кокков.
Характер расположения в мазках зависит от особенностей деления бактериальных клеток в процессе размножения и наличием
капсулы.
Палочковидные формы подразделяются на:
бактерии (не образуют спор);
бациллы (аэробные спорообразующие микроорганизмы);
клостридии (спорообразующие анаэробы).
Палочки бывают короткими, длинными с закругленными и заостренными концами. По расположению в мазках выделяют:
диплобактерии;
стрептобактерии;
располагающиеся беспорядочно.
Извитые бактерии делятся на:
вибрионы – изогнутость тела не превышает четверти оборота спирали (холерный вибрион);
спириллы и спирохеты – имеют по одному или несколько оборотов (например, возбудитель сифилиса), спирохеты
отличаются от спирилл подвижностью.
Нитевидные формы (ветвящиеся) – это палочки с разветвлениями на одном или обоих концах (например, актиномицета).
Но размеры и форма бактерий могут изменяться под влиянием окружающей среды (состав питательной среды, ее pH,
температура, лекарственные препараты и др.), а также в зависимости от возраста культуры.
Ультраструктура бактериальной клетки.
Бактерии относятся к прокариотам, устроенным более примитивно, чем эукариоты (растительные и животные клетки).
Сходства в строении клеток эукариот и прокариот:
Клеточное строение;
Наличие цитоплазматической мембраны;
Наличие цитоплазмы;
Единая форма наследственности – ДНК.
Различия в строении клеток эукариот и прокариот:
Эукариоты
Прокариоты
Дифференцированное ядро (ядерная мембрана,
Недифференцированное
ядро (нуклеоид,
ядрышки, гистонные белки)
неотделенный от цитоплазмы
мембраной, не содержат гистоны)
Диплоидный набор хромосом
Линейная ДНК
Размножение путем митоза
Мембранные органеллы
(ЭПС,
аппарат Гольджи, лизосомы, митохондрии)
Рибосомы
2-х
видов: 80S
–
Гаплоидный набор хромосом
Циркулярная ДНК
Бинарное деление
Не имеют мембранных органелл
в
Только 70S рибосомы
цитоплазме и 70S – в органеллах
Клеточная
стенка не
содержит
пептидогликан
Внехромосомные
факторы
наследственности
(ДНК) содержатся
митохондриях и хлоропластах
Клеточная
стенка содержит
пептидогликан
в
Внехромосомные
факторы наследственности
(плазмиды) содержатся в
цитоплазме
15. Приготовление и окраска препаратов-мазков.
Приготовление состоит из нескольких последовательных операций: подготовка мазка, высушивание, фиксация и окраска.
Исследуемый материал наносят на чистое обезжиренное предметное стекло. Для взятия бактериальной культуры: - нагревают
до покраснения бактериальную петлю в пламени горелки;
- берут пробирку с исследуемой культурой в левую руку так,
чтобы видеть поверхность среды; вращательным движением вынимают пробку из пробирки, прижимая ее мизинцем и
безымянным пальцами правой руки к ладони; - обжигают край пробирки, осторожно вводят петлю и берут исследуемый
материал;
- вынимают петлю, обжигают край пробирки и закрывают пробкой. - взятый материал осторожно
распределяют по предметному стеклу тонким слоем, после чего бактериальную петлю стерилизуют в пламени спиртовки;
- если препарат готовят из бактериальной культуры, выращенной на плотной среде, то на предметное стекло предварительно
наносят каплю стерильного физиологического раствора
- мазки высушивают на воздухе при комнатной температуре
или в токе теплого воздуха, держа предметное стекло высоко над пламенем горелки. Нельзя допускать закипания материала,
т.к. при этом может нарушиться структура микроорганизмов. - фиксация препарата: высушенные мазки подвергают
термической (предметное стекло (мазком вверх) проводят несколько раз через пламя горелки) или химической (фиксирующие
растворы: формалин, спирты, глутаральдегид, жидкость Карнау, ацетон, пары осмиевой кислоты) обработке, в результате
которой бактерии погибают и плотно прикрепляются к поверхности стекла.
Методы окраски
Простые методы (ориентировочные) Сложные методы (дифференцирующие)
1. Применяют для изучения морфологии микроорганизмов. 2. Окрашивают одним красителем анилино-вого ряда
(основным или кислым): кислый фуксин, метиленовый синий, эозин, генциановый фиолетовый.
1. Применяют для
изучения структуры клеток, дифференциации микроорганизмов.
2. Используют несколько красителей. Окраска по
методу: Грама, Циля-Нильсена, Ожешко, Романовского-Гимза, Нейссера Гинса-Бурри и др.
Преимущественно для окраски микроорганизмов используют основные красители. Краситель наливают на поверхность мазка
на определенное время, затем мазок промывают до тех пор, пока струи воды не станут бесцветными, осторожно высушивают
фильтровальной бумагой. Если мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения абсолютно прозрачно, а клетки микробов
интенсивно окрашены.
Окраска по Граму. Сущность метода Метод основан на способности микроорганизмов удерживать образующийся при
окраске комплекс генцианового фиолетового и йода. Это связано с особенностями строения и химического состава
грамположительных и грамотрицательных бактерий. У грамположительных бактерий на поверхности клеток есть магниевые
соли рибонуклеиновой кислоты, которые прочно связывают комплекс генцианового фиолетового с йодом и препятствуют его
вымыванию спиртом. Кроме того, грамположительные бактерии имеют более выраженный пептидогликановый слой, в
котором после обработки спиртом сужаются поры, что также делает невозможным вымывание красителя. В результате
грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет.
У грамотрицательных бактерий отсутствуют магниевые
соли рибонуклеиновой кислоты, пептидогликановый слой значительно тоньше, а размеры пор шире. Поэтому при обработке
спиртом краситель легко вымывается, бактерии обесцвечиваются и при использовании дополнительного красного красителя
грамотрицательные бактерии окрашиваются в красный цвет.
Методика окраски по Граму (этапы окраски по Граму представлены на стенде).
На фиксированный мазок наносят
карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового на 1-2 минуты, затем краситель сливают.
Наносят раствор
Люголя на 1 мин.
Обесцвечивают препарат этиловым спиртом в течение 30-60 секунд до прекращения
отхождения фиолетовых струек красителя.
Препарат промывают водой.
Мазок докрашивают водным
раствором фуксина в течение 1-2 минут, промывают водой и высушивают фильтровальной бумагой.
Окраска по Цилю-Нильсену Применяют для дифференциации кислотоустойчивых и некислотоустойчивых
микроорганизмов. Кислотоустойчивость бактерий обусловлена повышенным содержанием в клеточной стенке и цитоплазме
липидов, воска и оксикислот. Принцип основан на том, что кислотоустойчивые бактерии за счет содержания указанных
веществ прочно связывают карболовый фуксин при нагревании (т.е. окрашиваются в красный цвет) и не обесцвечиваются
кислотой. Некислотоустойчивые бактерии обесцвечиваются серной кислотой и при использовании дополнительного
красителя - метиленового синего – окрашиваются в синий свет.
Методика окраски по Цилю-Нильсену:
На
фиксированный препарат – мазок нанести карболовый раствор фуксина через полоску фильтровальной бумаги и подогреть до
появления паров в течение 3-5 мин.
Снять бумагу, промыть мазок водой. Нанести 5 % раствор серной кислоты на 1-2
мин до обесцвечивания.
Промыть водой.
Докрасить мазок водным раствором метиленового синего в течение 3-5
мин. Промыть водой, высушить, микроскопировать.
Окраска по Ожешко Метод основан на принципе окраски кислотоустойчивых бактерий. Отличие заключается в
предварительной обработке микроорганизмов 0,5 % раствором соляной кислотой, что облегчает окраску спор карболовым
фуксином. Споры кислотоустойчивы, поэтому красятся в красный цвет.
Методика окраски по Ожешко:
На нефиксированный мазок нанести 0,5 % раствор соляной кислотой и подогреть на пламени в течение 2-3 мин.
Кислоту слить, препарат промыть водой, просушить и фиксировать над пламенем. Затем окрасить по Цилю-Нильсену. Споры
бактерий приобретают красный цвет, а вегетативные формы - синий.
Окраска по Романовскому-Гимзе
Методика окраски по Романовскому-Гимзе: Краска Романовского-Гимзе состоит из метиленового синего, эозина и азура.
На мазок наносят рабочий раствор красителя (2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды) на 10-20 мин.
Препарат промывают водой и высушивают на воздухе.
Трепонемы окрашиваются в бледно-розовый цвет, боррелии - в
фиолетовый цвет, лептоспиры - в розовый цвет. Сапрофитные (непатогенные) формы окрашиваются в синий цвет.
Морфологию спирохет изучают также в живом состоянии в фазово-контрастном или темнопольном микроскопе. Хорошим
методом выявления спирохет является серебрение по Морозову.
16. Принцип и метод окраски по Граму в модификации Синёва.
Окрашивание бактерий по Граму – метод окраски, позволяющий разделить данную группу прокариотичеких
микроорганизмов на грамотрицательные бактерии и грамположительные бактерии[2].
Грамотрицательные и грамположительные бактерии отличаются строением клеточной стенки. Метод окрашивания бактерий
по Граму был предложен в 1884 году датским ученым Х. Грамом[2]. К грамотрицательным бактериям, в частности, относятся
кишечные палочки, сальмонеллы, бруцеллы, возбудители дизентерии, холеры, уксуснокислые бактерии, семейство
Псевдомонадовые (Pseudomonadaceae).
Основы и сущность метода
Метод окрашивания бактерий по Граму основан на различной способности
микроорганизмов удерживать в клетке красители трифенилметанового ряда – кристаллический фиолетовый или генциановый
фиолетовый. Сущность метода основана на различии в химическом составе и строении клеточной стенки бактерий[2][1].
Как уже было указано, все бактерии по этому признаку делят на две группы:
грамположительные – красящиеся по Граму;
грамотрицательные – не красящиеся по Граму[1].
Техника окрашивания бактерий по Граму
1. На фиксированный препарат наносят 2-3 капли воды и кладут полоску фильтрованной бумаги, пропитанной краской
генцианвиолет. Окрашивают 1-2 минуты.
2. Снимают бумажку, сливают краску и, не промывая водой, наливают на препарат раствор Люголя на 1 минуту.
3. Сливают раствор Люголя и наливают на препарат спирт с йодом на 30 секунд. Промывают водой.
4. После этого окрашивают мазок водным фуксином в течение 1 минуты.
5. Промывают водой, высушивают препарат фильтрованной бумагой, микроскопируют. В результате окраски
грамположительные микробы окрашиваются в фиолетовый цвет, грамотрицательные – в красный.
17. Отношение бактерий к окраске по Граму. Различия между ними по строению клеточной стенки и по
чувствительности к антибактериальным веществам.
Все бактерии по отношению к окраске по Граму делятся на грамположительные - темно-фиолетового цвета
и грамотрицательные - красного. Способность окрашиваться в тот или иной цвет зависит от строения их клеточной стенки и
коррелирует со многими другими свойствами бактерий. У грамположительных бактерий в клеточной стенке отсутствуют
ароматические и серосодержащие аминокислоты, отмечается низкое содержание липидов, у грамотрицательных, напротив,
эти вещества содержатся в большом количестве. Кроме того, у грамположительных бактерий имеется магниевая соль
рибонуклеиновой кислоты, отсутствующая у грамотрицательных. Она и образует прочный химический комплекс с белком,
генцианвиолетом и йодом, который не разрушается при кратковременном действии спирта. У грамотрицательных такой
комплекс не образуется. Они легко обесцвечиваются под действием спирта. Фуксин докрашивает грамотрицательные
микроорганизмы в красный цвет.
Клеточные стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий резко различаются по химическому составу и по
ультраструктуре.
У грамположительных бактерий клеточная стенка толще (от 20 до80 нм), чем у грамотрицательных, и пептидогликан
(синонимы муреин, мукопептид) составляет основную массу ее вещества (от 40 до 90 %). Под электронным микроскопом она
выглядит как гомогенный электронно-плотный слой.
Пептидогликан представлен параллельно расположенными молекулами гликана, состоящего из остатков Nацетилглюкозамина и N-ацетилмурамовой кислоты, соединенных гликозидной связью (цв. вклейка,рис. III).
Гликановые молекулы связаны поперечной пептидной связью. Отсюда название этого полимера - пептидогликан. Основу
пептидной связи составляют тетрапептиды, состоящие из чередующихся L- и D-аминокислот, например L-аланин - Dглутаминовая кислота - мезодиами-нопимелиновая кислота - D-аланин. В пептидогликане грамположительных бактерий
вместо мезодиаминопимелиновой кислоты часто содержится L-диаминопимелиновая кислота или лизин. Элементы гликана
(ацетилглюкозамин и ацетилмурамовая кислота) и аминокислоты тетрапептида (мезодиаминопимелиновая и D-глутаминовая кислоты, Dаланин) являются отличительной особенностью бактерии, поскольку отсутствуют у животных и человека.
В клеточной стенке грамположительных бактерий содержится небольшое количество полисахаридов, липидов и белков.
Входящие в состав клеточной стенки полисахариды, липиды могут ковалентно связываться с ее макромолекулами в
отличие от белков, которые формируют на ее внешней поверхности отдельный слой.
Таким образом, основными компонентами клеточной стенки грамположительных бактерий являются три типа
макромолекул: пептидогликаны, тейхоевые кислоты и полисахариды, которые, ковалентно связываясь, образуют сложную
структуру с весьма упорядоченной пространственной организацией.
Строение клеточной стенки у грамотрицательных бактерий намного сложнее. У них обнаружена многослойная
клеточная стенка. В ее состав входит гораздо большее число макромолекул разного химического типа (рис. 4). Пептидогликан
образует только внутренний слой клеточной стенки, неплотно прилегая к цитоплазматической мембране. Для разных видов
грамотрицательных бактерий его содержание колеблется в широких пределах и существенно меньше ( 5 - 1 0 %), чем у
грамположительных бактерий. Химическая структура пептидогликана грамотрицательных бактерий в основном сходна со
структурой пептидогликана грамположительных бактерий. Снаружи от пептидогликана располагается дополнительный слой
клеточной стенки - наружная мембрана. Она состоит из фосфолипидов, типичных для элементарных мембран, белков,
липопротеина и липосахарида.
18. Принципы и метод окраски по Цилю-Нильсену.
Кислотоустойчивые бактерии, из-за наличия в их клетках липидов, восков и оксикислот, после окраски их раствором фуксина
Циля при нагревании прочно связывают фуксин, прокрашиваются в красный цвет и не обесцвечиваются кислотным
раствором спирта. Все остальные окрашенные микроорганизмы обесцвечиваются и дополнительно окрашиваются раствором
метиленового
синего в синий цвет.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
1. На фиксированный мазок наложить кусочек фильтровальной бумаги по размер препарата. Нанести небольшой избыток
раствор фуксина Циля.
2. Внести предметное стекло с препаратом в небольшое пламя горелки и греть до появления паров. Стекло вынуть из пламени
и дать слегка остыть.
3. Процедуру по Пункту 2. повторить еще 2 раза. Важно, процедуру прогрева проводить так, что бы к концу 3 раза
фильтровальная бумага оставалась влажной!
4. Подогретый мазок оставить остывать на 5 минут для более полного окрашивания клеточной системы бактерий.
5. Снять фильтровальную бумагу и осторожно с обратной стороны стекла промыть водой до полного окончания отхождения
фуксина.
6. Мазок поместить в солянокислый спирт или налить на поверхность стекла для обесцвечивания. Обесцвечивать до полного
удаление краски (около 3 минут). Тщательно промыть дистиллированной водой.
7. Докрасить препарат путем нанесения на препарат раствора метиленового синего. Важно не перекрасить! Время окраски
может занимать от 30 секунд до 1 минуты.
8. Стекло с препаратом промыть дистиллированной водой.
9. Высушить на открытом воздухе при комнатной температуре. Микроскопировать под масляной иммерсией.
19. Структурные элементы бактериальной клетки. Какие из них зависят от условий существования бактерий.
Обязательными структурными элементами бактерий являются: цитоплазма с нуклеоидом и рибосомами,
цитоплазматическая мембрана (ЦПМ), клеточная стенка.
Цитоплазма прокариотов в отличие от эукариотов не содержит митохондрий и хлоропластов, аппарата Гольджи, лизосом,
эндоплазматической сети. Нуклеоид выполняет в клетке бактерий функцию ядра, т.е. является носителем генетической
информации, однако, в отличие от ядра эукариотической клетки, он не имеет ядерной мембраны, не делится митозом.
Нуклеоид состоит из замкнутой в кольцо нити ДНК. В генетическом отношении ДНК нуклеоида является единственной
бактериальной хромосомой. В связи с этим бактерии имеют гаплоидный набор генов, контролирующих все их жизненно
важные функции. Органеллы цитоплазмы выявляются при электронной микроскопии.
Цитоплазматическая мембрана ограничивает снаружи цитоплазму и состоит из тонкого слоя фосфолипидов и белка. Функции
ЦПМ: получение энергии в результате биологического окисления, участие в питании посредством активного транспорта
веществ, участие в биосинтезе веществ, делении клетки. В состав ЦПМ входят окислительные ферменты, пермеазы,
различные биосинтетические ферменты. ЦПМ выявляют при электронной микроскопии.
Клеточная стенка у Гр+ бактерии, как правило, содержит многослойный пептидокликан, который придает клеточной стенке
прочность.
Клеточная стенка определяет форму бактерий, служит для механической защиты, участвует в питании за счет диффузии и
осмоса. У Гр- бактерий клеточная стенка представлена тонким слоем пептидогликана, покрытого наружной мембраной, в
состав которой входят белки, фосфолипиды и липополисахариды (ЛПС). Наружная мембрана клеточной стенки патогенных
микробов во многом определяет специфичность их взаимодействия с организмом хозяина и помогает в распознавании
близкородственных микробов. По компонентам и структуре клеточной стенки, биохимическим механизмам ее синтеза
бактерии коренным образом отличаются от животных и растений. Поэтому лекарственные препараты, специфически
воздействующие, например, на бактериальные стенки, безвредны для высших организмов. Клеточную стенку бактерий
выявляют при электронной микроскопии, специальным окрашиванием или в опыте плазмолиза.
Необязательные (непостоянные) структурные элементы.
К ним относят: капсулу, спору, включения, жгутики, пили.
Капсула представляет собой поверхностно расположенное слизистое образование, которое по химической природе чаще
является полисахаридом. Капсула выполняет защитную функцию, предохраняя клетку во внешней среде от высыхания и
других неблагоприятных факторов, а в организме хозяина - от фагоцитоза, бактериолизиса и других реакций, лекарственных
препаратов. Бактерии, образующие капсулу в организме и на питательных средах, называют капсульными (например,
клебсиеллы пневмонии). Некоторые бактерии образуют макрокапсулу только в организме (золотистый стафилококк,
стрептококк пневмонии, палочка сибирской язвы, возбудитель чумы, туляремии и др.). Многие бактерии образуют
микрокапсулу: возбудитель коклюша, патогенные энтеробактерии и др. Капсулу выявляют методом Бурри-Гинса: бактерии
смешивают с каплей туши, распределяют их по стеклу виде тонкого мазка и фиксируют. После окрашивания разведенным
карболовым фуксином в световом микроскопе на серо-коричневом (тушевом) фоне препарата видны красные тела бактерий,
окруженные бесцветными зонами капсул.
Споры являются формой существования, предназначенной для сохранения бактерий во внешней среде. В одной
бактериальной клетке в течение 12-18 часов формируется 1 спора, которая при благоприятных условиях за 4-6 часов
прорастает в 1 вегетативную клетку. Спорообразующими являются, как правило, Гр+ палочковидные бактерии: те, у которых
диаметр споры не превышает поперечный размер клетки, называют бациллами, те, у которых диаметр больше клостридиями. Устойчивость спор к неблагоприятным физико-химическим воздействиям связана с наличием многослойной
оболочки, повышенным содержанием липидов, ионов кальция, магния, вода в связанном состоянии. Жизнеспособность спор
при обычных условиях может сохраняться в течение десятилетий и столетий. Для уничтожения спор применяют методы
стерилизации (пар под давлением, горячий воздух и др.). Споры окрашиваются плохо. Для выявления используют сложные
методы окраски (по Циль-Нильсону, Ожешке и др.)
Включения. В клетках прокариотов можно обнаружить включения (скопления полисахаридов, липидов, полифосфатов, серы).
У дифтерийной палочки и некоторых других бактерий в цитоплазме обнаруживаются зёрна волютина (полифосфаты),
выполняющие функцию запасного вещества (источника фосфора и энергии). Включения и цитоплазма по-разному
окрашиваются одними и теми же красителями. Например, при окраске уксусно-кислым генцианвиолетом цитоплазма у
дифтерийной палочки окрашивается в бледно-фиолетовый цвет, а расположенные по полюсам зерна волютина - в темнофиолетовый. Обнаружение зёрен волютина имеет диагностическое значение.
Жгутики - являются поверхностными придатками бактериальной клетки, состоят из белка флагеллина и выполняет функцию
движения. Наиболее подвижки микробы с 1 жгутиком - монотрихи (холерный вибрион) менее подвижны микробы с пучком
жгутиков на одном из полюсов –лофотрихи (синегнойная палочка) или имеющие жгутики на обоих полюсах - амфитрихи;
наименее подвижны перитрихи, у которых жгутики расположены по бокам или по, всей поверхности (многие
энтеробактерии). В световом микроскопе жгутики не видны. Для их выявления используют прямые методы: электронную
микроскопию или специальное окрашивание, позволяющие увеличить размеры жгутиков, например, за счет наслоения солей
тяжелых металлов. С целью косвенного выявления жгутиков изучают подвижность микробных клеток. Для этого готовят
нативные препараты (раздавленная или висячая капля), которые микроскопируют в затемненном поле зрения, темнопольном
или фазовоконтрастном микроскопах.
+Пили также являются поверхностными придатками бактериальной клетки и представляют собой тончайшие нити (тоньше и
короче жгутиков), состоят из белка пилина. Функцией пилей являются прикрепление к субстрату; они также способствуют
контакту клетки – донора с клеткой - реципиентом при конъюгации. Наличие пилей у патогенных микробов во многом
определяет их способность вызывать заболевание, т.к. они необходимы для осуществления адгезии (прилипания). Прямое
выявление пилей возможно только при электронной микроскопии.
20. Клеточная стенка, её строение, биологическая роль, способы обнаружения.
В клеточной стенки грамположительных бактерий содержится небольшое количество полисахаридов, липидов, белков.
Основным компонентом клеточной стенки этих бактерий является многослойный пептидогликан (муреин, мукопептид),
составляющий 40—90% массы клеточной стенки. С пептидогликаном клеточной стенки грамположительных бактерий
ковалентно связаны тейхоевые кислоты (от греч. teichos — стенка).
В состав клеточной стенки грамотрицательных бактерий входит наружная мембрана, связанная посредством липопротеина с
подлежащим слоем пептидогликана. На ультратонких срезах бактерий наружная мембрана имеет вид волнообразной
трехслойной структуры, сходной с внутренней мембраной, которую называют цитоплазматической. Основным компонентом
этих мембран является бимолекулярный (двойной) слой липидов. Внутренний слой наружной мембраны представлен
фосфолипидами, а в наружном слое расположен липополисахарид (ЛПС). Липополисахарид наружной мембраны состоит из
трех фрагментов: липида А - консервативной структуры, практически одинаковой у грамотрицательных бактерий; ядра, или
стержневой, коровой части (лат. core — ядро), относительно консервативной олигосахаридной структуры (наиболее
постоянной частью ядра ЛПС является кетодезоксиоктоновая кислота); высоковариабельнои О-специфической цепи
полисахарида, образованной повторяющимися идентичными олигосахаридными последовательностями (О-антиген). Белки
матрикса наружной мембраны пронизывают ее таким образом, что молекулы белка, называемые поринами, окаймляют
гидрофильные поры, через которые проходят вода и мелкие гидрофильные молекулы.
При нарушении синтеза клеточной стенки бактерий под влиянием лизоцима, пенициллина, защитных факторов организма
образуются клетки с измененной (часто шаровидной) формой: протопласты — бактерии, полностью лишенные клеточной
стенки; сферопласты - бактерии с частично сохранившейся клеточной стенкой. Бактерии сферо- или протопластного типа,
утратившие способность к синтезу пептидогликана под влиянием антибиотиков или других факторов и способные
размножаться, называются L-формами.
Они представляют собой осмотически чувствительные, шаровидные, колбовидные клетки различной величины, в том числе и
проходящие через бактериальные фильтры. Некоторые L-формы (нестабильные) при удалении фактора, приведшего к
изменениям бактерий, могут реверсировать, «возвращаясь» в исходную бактериальную клетку.
Между наружной и цитоплазматической мембранами находится периплазматическое пространство, или периплазма,
содержащая ферменты (протеазы, липазы, фосфатазы, нуклеазы, бета-лактомазы) и компоненты транспортных систем.
21. Цитоплазматическая мембрана, её строение, биологическая роль. Мезосомы.
Наружная цитоплазматическая мембрана представляет собой тончайшую пленку. Ее толщина - порядка 7-10 нм.
Просматривается пленка только в электронный микроскоп
Структура Какой состав имеет цитоплазматическая мембрана? Строение пленки достаточно разнообразно. В соответствии с
химической организацией, она представляет собой комплекс белков и липидов. Цитоплазматическая мембрана клетки
включает в себя бислой. Он выступает в качестве основы. Кроме этого, цитоплазматическая мембрана содержит холестерол и
гликолипиды. Этим веществам свойственна амфипатричность. Другими словами, в них присутствуют гидрофобные
("боящиеся влаги") и гидрофильные ("любящие воду") концы. Последние (фосфатная группа) направлены наружу от
мембраны, вторые (остатки от жирных кислот) ориентированы друг к другу. За счет этого и формируется липидный
биполярный слой. Липидные молекулы обладают подвижностью. Они способны перемещаться в собственном монослое либо
(что редко) из одного в другой.
Липидный слой может иметь состояние твердого или жидкого кристалла. Монослои отличаются асимметричностью. Это
значит, что в них различен состав липидов. За счет этого свойства цитоплазматические мембраны обладают специфичностью
даже в рамках одной клетки. Ко второму обязательному компоненту пленки относят белки. Многие из этих соединений могут
перемещаться в мембранной плоскости либо совершать вращения вокруг собственной оси. При этом они не способны
переходить из одной части бислоя в другую. Защита внутренней среды – основная задача, которую выполняет
цитоплазматическая мембрана. Строение пленки, кроме этого, обеспечивает течение различных процессов. За выполнение тех
или иных задач отвечают белки. Благодаря липидам обеспечиваются структурные особенности пленки.
Функции Барьерная. Защитная пленка обеспечивает активный, пассивный, избирательный, регулируемый обмен
соединений с внешней средой. За счет избирательной проницаемости осуществляется отделение клетки и ее компартментов и
снабжение их нужными веществами.
Транспортная. Сквозь пленку осуществляется переход соединений от клетки к клетке. Благодаря этому доставляются
питательные соединения, удаляются конечные продукты обмена, происходит секреция разных веществ. Кроме этого,
формируются ионные градиенты, на оптимальном уровне поддерживаются ионная концентрация и рН. Они необходимы для
активной деятельности ферментов клетки.
Вспомогательные задачи
Матричная. Эта функция обеспечивает определенную ориентацию и взаиморасположение белков мембраны, а также
оптимальное их взаимодействие. Механическая. За счет нее обеспечивается автономность клетки, внутренних структур.
Также осуществляется соединение элемента с прочими аналогичными. Энергетическая. На фоне фотосинтеза в хлоропластах
и при осуществлении клеточного дыхания в мембранах активны системы энергетического переноса. В них также участвуют и
белковые соединения.
Рецепторная. Ряд белков, которые присутствуют в мембране, обеспечивает восприятие различных сигналов. К примеру,
циркулирующие в крови стероиды оказывают воздействие только на те клетки-мишени, которые обладают
соответствующими гормонам рецепторами. Химические соединения, обеспечивающие проведение импульсов
(нейромедиаторы), также связываются с помощью особых белков клеток-мишеней.
Мезосомы — складки цитоплазматической мембраны бактерий, образующиеся при использовании химических методов
фиксации во время подготовки образцов к электронной микроскопии. Хотя в 1960-е годы предполагалось естественное
происхождение этих структур, они были признаны артефактами к концу 1970-х годов и в настоящее время не считаются
частью нормальной структуры бактериальных клеток.
22. Споры бактерий, их биологическая роль, условия и время, необходимые для их образования и для прорастания
спор в вегетативные формы. Способы обнаружения спор. Бактерии, образующие споры.
Clostridium histolyticum
Clostridium novyi
Clostridium septicum
Bacillus anthracis
Споры – форма покоящихся грамположительных бактерий. Споры образуются при неблагоприятных условиях существования
бактерий (высушивание, дефицит питательных веществ и др.). При этом внутри одной бактерии образуется одна спора.
Образование спор способствует сохранению вида и не является способом размножения. Спорообразующие палочковидные
аэробные бактерии, у которых размер споры не превышает диаметр клетки, называются бациллами. Спорообразующие
палочковидные анаэробные бактерии, у которых размер споры превышает размер бактериальной клетки, называются
клостридиями.
Процесс спорообразования (споруляция) проходит ряд стадий. Вначале на одном из полюсов бактериальной клетки
происходит конденсация нуклеоида и отделение его за счет образования септы. Затем ЦПМ начинает обрастать
образовавшийся протопласт споры и возникает складка, состоящая из двух слоев ЦПМ, позднее они сливаются, в результате
образовавшаяся предспора оказывается окруженной двойной оболочкой. Между обращенными друг к другу мембранами
образуется зародышевая стенка, кортекс, а также расположенные снаружи от мембран наружная и внутренняя оболочки.
Протопласт споры содержит ЦПМ, цитоплазму, хромосому, все компоненты белоксинтезирующей системы и анаэробной
энергообразующей системы. Стенка споры непосредственно окружает внутреннюю мембрану и представлена
пептидогликаном, из которого формируется клеточная стенка прорастающей клетки. Кортекс – самый толстый слой оболочки
споры, чувствительный к лизоциму. Оболочка споры построена из кератиноподобного белка. Плохая проницаемость ее
определяет высокую устойчивость споры к действию различных химических веществ. Экзоспорий – липопротеиновая
оболочка, содержащая немного углеводов. В состав споры входит дипиколиновая кислота, обусловливающая
термоустойчивость споры. Затем вегетативная часть клетки отмирает, и спора сохраняется во внешней среде в течение
длительных сроков.
Clostridium tetani. Способность ряда патогенных бактерий образовывать длительно сохраняющиеся во внешней среде споры,
обладающие высокой термоустойчивостью, обусловлена низким содержанием воды, повышенной концентрацией кальция,
структурой и химическим составом ее оболочки.
В благоприятных условиях споры прорастают, проходя три последовательные стадии: активацию, инициацию, прорастание.
При этом из одной споры образуется одна бактерия. Прорастание споры происходит в течение 4-5 ч, в то время как
образование споры продолжается 18-20 ч.
Спорообразование, форма и расположение спор в клетке (вегетативной) является видовым свойством бактерии, что позволяет
отличать их друг от друга. Форма спор может быть овальной, шаровидной, расположение в клетке – терминальное, т.е. на
конце палочки (возбудитель столбняка), субтерминальное – ближе к концу палочки (возбудитель ботулизма) и центральное
(сибиреязвенная бацилла).
Споры можно выявить при обычном окрашивании бактериальной клетки в виде не окрашенной области внутри
бактериальной клетки и по методу Ожешко.
23. Капсула бактерий, её биологическая роль, способы обнаружения. Бактерии, образующие капсулы.
Капсульные:
Klebsiella pneumonia
Klibsiella rhinosaeromatis
Klebsiella ozaenae
Staphylococcus aureus
Капсулообразующие бактерии:
Streptococcus pneumoniae
Clostridium perfrigens
Bacillus anthracis
Yersinia pestis
Francisella tularensis
Brucella abortus
Капсула бактерии — слизистая структура толщиной более 0,2 мкм, прочно связанная с клеточной стенкой бактерий и
имеющая чётко очерченные внешние границы. Капсула различима в мазках-отпечатках из патологического материала. В
чистых культурах бактерий капсула образуется реже. Она выявляется при специальных методах окраски по Бурри-Гинсу,
создающих негативное контрастирование веществ капсулы: тушь создаёт тёмный фон вокруг капсулы.Макрокапсула не
является обязательным структурным элементом микробной клетки. Ее образование зависит от среды, в которой находятся
бактерии, и от свойств микроба, сформировавшихся в процессе эволюционного развития микроорганизма. Благодаря тому,
что капсула на 98% состоит из воды, она служит как бы защитным осмотическим барьером против притока большого
количества жидкости и против высушивания. Капсула защищает бактерии от фагоцитоза, антител, бактериофагов, является
фактором патогенности.Капсула может быть утрачена клеткой без потери ее жизнеспособности, хотя роль ее в защите
бактерий очень существенна.Бактерии, образующие капсулу внутри макроорганизма, при выделении в окружающую среду,
спустя два часа прекращают ее продуцировать.
Окраска по Романовскому-Гимзе. Фиксированный мазок кладут в чашку Петри мазком вниз на подставки из стеклянной
соломки или спичек и наливают рабочий раствор краски Романовского-Гимза (15—20 капель на 10 мл воды). Через 15—20
мин препарат промывают водой и высушивают на воздухе. Бактерии окрашиваются в тёмно-синий цвет, капсулы — в
розовый.
Окраска по Михину. На фиксированный мазок наливают метиленовую синь Леффлера (30 мл насыщенного спиртового
раствора метиленовой сини растворяют в 100 мл воды, добавляют 1 мл 1 % раствора NaOH и выдерживают в термостате
месяц) при лёгком нагревании выдерживают 3—5 мин, быстро промывают водой и высушивают. Бактерии окрашиваются в
синий цвет, капсулы — в розовый.
Метод Бурри-Гинса используется для окраски капсульных бактерий и основан на том, что капсула не воспринимает
красители. Капсулу выявляют негативным контрастированием фона по Бури. Для этого черную тушь смешивают в культурой
и высушивают. После этого проводят фиксацию в пламени горелки, окрашивают тела микробных клеток по Гинсу - водным
фуксином в течение 1 минуты и промывают водой 5-10 секунд. В результате на темном фоне хорошо видна бесцветная
капсула и красные тела микробов.
Капсульные бактерии. К ним относятся клебсиеллы - это группа грамотрицательных неспорообразующих и неподвижных
палочек, которые обладают обычными капсулами и на питательных средах образуют слизь.
Основными видами этого рода являются палочка склеромы (риносклеромы), палочка озены и диплобациллы Фридлендера,
вызывающие пневмонию. Капсульные бактерии обнаруживаются в слизи носа и зева больных склеромой и озеной, в мокроте
и в тканях легких больных фридлендеровской пневмонией, при инфекциях мочевых путей и в испражнениях человека, а
также в объектах внешней среды.
24. Включения бактериальной клетки, их биологическая роль, способы обнаружения. Практическое значение.
Внутрицитоплазматические включения подразделяются на активно функционирующие структуры и продукты клеточного
метаболизма,не выделяющиеся наружу, а откладывающиеся внутри клетки. К первой группе внутриплазматических
включений относятся газовые вакуоли, или аэросомы, обнаруженные у бактерий, обитающих в воде. Аэросомы снижают
удельную массу бактериальной клетки и благодаря этому поддерживают ее во взвешенном состоянии в водоеме. Аэросома
представляет собой скопление газовых пузырьков (везикул), Которые имеют веретенообразную форму. Их оболочка состоит
только из белка, т. е. устроена не так, как обычная мембрана.
Белковые молекулы ориентированы таким образом, что внутренняя сторона оказывается гидрофобной, а наружная –
гидрофильной. К первой группе включений относятся также хлоросомы зеленых бактерий и фикобилисомы цианобактерий. В
этих структурах локализованы пигменты, поглощающие кванты света и передающие энергию возбуждения на
фотореакционные центры, т. е. они принимают непосредственное участие в фотосинтезе. Это эллипсовидные образования,
окруженные тонкой белковой оболочкой (толщиной 2,5– 3,0 нм), которая состоит из отдельных глобул. Карбоксисомы, или
полиэдрические тела, содержатся в клетках некоторых автотрофных бактерий. Они имеют форму многогранника диаметром
90–100 нм, окруженного однослойной белковой оболочкой. В карбоксисомах содержится рибулозо-1,5-дифосфаткарбоксилаза
– ключевой фермент, катализирующий фиксацию СО2 в цикле Кальвина в процессе фото- и хемосинтеза. Магнитосомы
содержатся в водных бактериях, способных ориентироваться в магнитном поле и перемещаться в направлении линий
магнитного поля. В их состав входит 0,4 % железа (по сухому веществу). Магнитосомы располагаются в клетках вблизи мест
прикрепления жгутиков. Ко второй группе включений (продуктам клеточного метаболизма) относятся запасные вещества –
полифосфаты, полисахариды, жиры, сера. Эти вещества накапливаются, если в питательной среде находятся
соответствующие исходные соединения, но вместе с тем рост бактерий ограничен или вообще невозможен из-за недостатка
каких-то отдельных компонентов питания или же присутствия ингибиторов. Запасные вещества содержатся в клетках в
осмотически инертной форме, т. е. не растворимы в воде. В условиях, благоприятных для роста, когда в этих веществах
возникает потребность, они снова включаются в метаболизм.
25. Жгутики бактерий, их биологическая роль, число и расположение, способы обнаружения.
. В их состав входит белок флагелин, кот-ый по своей структуре относится к сократительным белкам типа миозина. Жгутики
прикрепляются к базальному телу, состоящему из сис-мы нескольких дисков, вмонтированных в цитоплазматическую мем-ну
и КС. Кол-во и расположение жгутиков у разных бактерий неодинаково. Монотрихи имеют на одном из полюсов клетки тлько
один жгутик, лофотрихи — пучок жгутиков, у амфитрихов жгутики расположены на обоих полюсах клетки, а у перитрихов —
по всей ее поверхности. Активная подвижность бактерий обусловлена вращательными движениями жгутиков, подобно
корабельному винту, либо пропеллеру (монотрихи, лофотрихи). Наряду с беспорядочным движением бактерии могут
передвигаться направленно путем хемотаксиса, аэротаксиса, обусловленного разной конц-цией кислорода, и фототаксиса.
Скорость движения бактерий связана с расположением жгутиков, составом и св-вами пит-ой среды.Жгутики обладают
антигенными св-вами. Грамположительные бактерии имеют 2 диска, грамотриц-е — 4 диска. Жгутики выявляются:
электронная микроскопия, по Лефлеру. 2. Метод Циля—Нильсена в модификации Мюллера. Мюллер, модифицировав
известный метод Циля—Нильсена, применяемый обычно для выявления кислотоустойчивости бактерий (дифференциальной
окраски микобактерий и некоторых близких к ним микроорганизмов), снизанной с особенностями химического состава их
оболочки, предложил использовать его для окраски спор бактерий. 3. Метод Пешкова. На фиксированный в пламени препарат
наливают метиленовый синий Леффлера, доводят его до кипения и кипятят 15—20 с, держа стекло над пламенем. Мазок
промывают водой и докрашивают в течение 30 с 0,5%-ным водным раствором нейтрального красного. Еще раз промывают,
подсушивают и далее исследуют препарат с масляной иммерсией объектива. Споры окрашиваются в голубой или синий
цвета, цитоплазма — в розовый. Для исследования спор удобными объектами могут служить Bacillus mesentericus или Bacillus
mycoides в возрасте 4 сут. Реактивы для окрашивания спор бактерий. 1. Карболовый фуксин Циля. 2. Метиленовый синий
Леффлера. 3. Насыщенный водный раствор метиленового синего 2 г красителя и 100 мл дистиллированной воды. 4. Хромовая
кислота, 5%-ный раствор. 5. Соляная (или серная) кислота, 1%-ный раствор.
26. Пили (ворсинки, фимбрии), локализация, типы, биологическая роль, способ обнаружения.
Ворсинки или пили (фимбрии) тонкие полые нити белковой природы, более тонкие и короткие (3-10 нм х 0,3-10 мкм), чем
жгутики. Пили отходят от поверхности клетки и состоят из белка пилина. Пили 1-го типа, или общего типа – common pili –
пили, ответственные за адгезию, т.е. за прикрепление бактерий к поражаемой клетке. Они начинаются на цитоплазматической
мембране и пронизывают клеточную стенку. Их количество велико – от нескольких сотен до нескольких тысяч на одну
бактериальную клетку. Пили 2 типа (половые, F-пили, конъюгативные – sex pili) участвуют в конъюгации бактерий,
обеспечивающей перенос части генетического материала от донорской клетке к реципиентной. Они имеются только у
бактерий-доноров в ограниченном количестве (1-4 на клетку), более длинные (0,5-10 мкм). Отличительной особенностью
половых пилей является взаимодействие с особыми «мужскими» сферическими бактериофагами, которые интенсивно
адсорбируются на половых пилях.
27. Микроскопические грибы: положение среди микроорганизмов, строение, способы размножения, группы грибов,
имеющих практическое значение.
Apspergillus
Penicillium
Condida
Claviceps purperea
Pneumocystis airoveci
Blastomyces dermatitidis
Cardiola albicans
Микроскопические (плесневые) грибы - Это обширная группа микроорганизмов, обладающих различными свойствами. Все
они используют кислород воздуха, поэтому развиваются на поверхности продукта, давая паутинообразные разрастания.
Многие из этих организмов имеют промышленное значение и используются для получения ферментных препаратов,
органических кислот, антибиотиков. Отдельные виды плесневых грибов вызывают порчу пищевых продуктов и некоторых
товаров, и заболевания растений, человека и животных.
Строение микроскопических грибов. Тело гриба называется грибницей (мицелием) и состоит из тонких разветвленных нитей гиф, которые переплетены в виде войлока. Клетки мицелия имеют оболочку, цитоплазму с различными включениями, ядра и
ядрышки. От мицелия поднимаются воздушные гифы. Плесневые грибы часто являются многоклеточными организмами и
видны невооруженным глазом. В этом случае гифы их разделены перегородками на отдельные клетки (септированы). Грибы с
несептированными гифами являются одноклеточными. Плесневые грибы могут расти не только на твердых, но и на жидких
средах при достаточной аэрации в питательной среде или на ее поверхности. Растут грибы концами разветвлений.
В природе микроскопические грибы очень распространены и обитают в почве, воде, на растениях, животных. Находят их и на
пищевых продуктах при длительном хранении.
Размножение микроскопических грибов. Характерной особенностью грибов является разнообразие способов размножения,
среди которых можно выделить две большие группы: бесполое (вегетативное) и половое (воспроизведение).
Вегетативное размножение осуществляется обрывками мицелия и воздушных гиф или путем спорообразования. В этом
случае споры образуются внутри особых вздутий на концах гиф - спорангиях (эндоспоры) или снаружи на особых гифах конидиеносцах - (экзоспоры, или конидии).
При половом размножении плесневых грибов сливаются две клетки, дифференцированные в половом отношении. Далее
процесс размножения протекает различно, и по его характеру грибы относят к тому или иному классу. У одних грибов
образуется клетка с толстой оболочкой и двойным набором хромосом - зигота. После периода покоя она прорастает в новый
мицелий. У других грибов после слияния двух клеток образуется многоклеточное плодовое тело различной величины и
формы. Внутри него развиваются сумки (аски) со спорами. После их созревания сумка разрывается, споры высыпаются из нее
и прорастают в новый мицелий. У некоторых грибов базидиомицетов споры образуются не в сумках, а вне клетки на
специальных выростах базидиях.
Созревшие и осыпавшиеся базидии также прорастают в новый мицелий.
28. Дрожжеподобные грибы рода Candida.
C.albicans/ C. glabrata/ C. crusei/ C. parapsilosis, tropicalis
Candida Albicans - Они имеют овальную форму, делятся почкованием, образуют псевдогифы( псевдомицелий) в виде цепочек
из удлинённых клеток, иногда образуют гифы.
Отличительной особенностью C.albicans является также образование хламидоконидий (споры с двойной плотной оболочкой)
на концах или на коротких боковых отростках гиф. Хламидоспоры служат C.albicans для переживания неблагоприятных
условий.
Говорят, что почти 80 процентов населения Земли борются с этим патогенным дрожжеподобным грибком, который вызывает
разные воспаления в организме. Кандида, как и все дрожжи, одноклеточный организм, который быстро размножается при
наличии большого количества сахара в рационе. Этот грибок лишает организм многих питательных веществ, в том числе
железа и других минералов, делая кровь кислой. На фоне сладкого рациона кандида активизируется еще больше. Если этот
процесс вовремя не остановить, то вредные дрожжи практически уничтожат пищеварительную и иммунную системы, лишат
жизненных сил. А взамен вызовут частые головные боли, экземы, перхоть, дерматиты, гормональные расстройства,
вагинальные инфекции, болезни желудка и спутанность сознания.
29. Актиномицеты, их положение среди микроорганизмов, строение, значение в жизни человека.
Mycobacterium leprae,
Mycobacterium tuberculosis
Actinomyces bovis
Actinomyces israelii
Corynebacterium diphtheria
Nocordia asteroides
Положение актиномицетов среди микроорганизмов
Актиномицеты АКТИНОМИЦЕТЫ (Actinomycetes; греч. aktis — луч + mykes — гриб; лучистые грибки) — микроорганизмы,
относящиеся к порядку Actinomycetales, семейству Actinomycetaceae; занимают промежуточное положение между бактериями
и грибками.
Актиномицеты Общее с бактериями: содержат ядро типа нуклеоида состоят из одной клетки покрытой оболочкой отсутствие
в стенке хитина или целлюлозы грамположительны
Общее с грибами: они имеют форму ветвящейся нити образуют мицелий размножаются спорами
• В отличие от грибов, актиномицеты не содержат в клеточной стенке хитина или целлюлозы; они не способны к фотосинтезу,
а образуемый ими мицелий достаточно примитивен. Также они резистентны к противогрибковым средствам.
 Актиномицеты относят к бактериям в связи с отсутствием чётко выраженного ядра, по строению клеточной
стенки, а также чувствительности к бактериофагам и антибиотикам.
• Отличие от бактерий - в составе пептидогликана клеточной стенки, имеют арбинозу, галактозу, ксилозу и мадурозу
Ветвящиеся нитевидные или палочковидные грамположительные бактерии. Способны образовывать споры. Родственными им
считают микобактерии, нокардии, коринебактерии – палочковидные, неправильной формы бактерии. Характерна
кислотоустойчивость – окрашиваются по Цилю-Нильсену в красный цвет. У здоровых людей актиномицеты обнаруживают в
ротовой полости, зубном налете, в зубном камне, лакунах миндалин, на слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта.
Патогенные актиномицеты вызывают актиномикоз, коринебактерии — дифтерию, микобактерии — туберкулез, нокардии —
нокардиоз. Актиномицеты - формы бактерий, имеющие истинный, не имеющий перегородок мицелий. Мицелиальный (в виде
ветвящихся нитей) рост этих грамположительных бактерий придает им внешнее сходство с грибами. Это сходство
усиливается вследствие наличия у высших форм актиномицетов наружных неполовых спор, которые называются конидиями.
Размножаются актиномицеты или обрывками мицелия (вегетативный способ), или бесполыми спорами – основной способ.
Образование спор у высших актиномицетов происходит на специальных гифах - спороносцах, они имеют разные формы: прямую; - волнистую; - собраны в пучки; - спираль.
Форма спороносца индивидуальна для каждого вида актиномицетов. Этот признак используется для их идентификации. На
спороносцах споры образуются экзогенным способом и называются конидиями.
Существует несколько способов образования спор 1. Отчленение от конца спороносца кончика гифа поперечной
перегородкой с последующим формированием в спору (под первой образуется вторая и т.д.) р. Micromonospora.
2. Одновременно в спороносце образовываются поперечные перегородки по всей длине, происходит утолщение стенок и
деление на 30-100 спор.
Выделяют 4 группы спор актиномицетов: 1) гладкие; 2) споры с бородавчатой поверхностью; 3) с шиповидными выростами;
4) с волосовидными выростами.
Споры могут долгое время находиться в состоянии анабиоза и выдерживать неблагоприятные условия, т.е. низкую влажность
среды, повышенную или пониженную температуру.
Значение актиномицетов. служат источником многих необходимых человеку химических веществ: гормонов кортизона и
преднизолона, протеолитических ферментов, кератиназы, витамина B12, биотина, пантотеновой и никотиновой кислоты,
ауксинов, фитотоксинов, веществ, обладающих антибиотическим воздействием.
Биологически активные соединения, что производят лучистые грибки, используют в животноводстве и медицине, пищевой
промышленности и сельском хозяйстве для защиты растений от насекомых-вредителей. Также актиномицеты играют
громадную роль в процессах почвообразования и создания плодородия. Они трансформируют и свободно разрушают
сложные органические соединения: целлюлозу, гумус, хитин, лигнин и другие, что недоступно многим микроорганизмам.
30. Спирохеты, их положение среди микроорганизмов, строение. Патогенные представители.
Borrelia recurrentis
Leptospira interrogans
Treponema pallidum
Спирохеты выделены в самостоятельный порядок Spirochaetales, который включает два семейства: Spirochaetaceae и
Leptospiraceae. В семейство Spirochaetaceae входят 7 родов, из них наибольший интерес представляют патогенные для
человека роды Borrelia и Treponema.
Спирохеты (spira – завиток, chaite – волос) – тонкие, длинные, извитые подвижные бактерии спиралевидной формы. Они
состоят из наружной мембраны (клеточной стенки), которая окружает протоплазматический цилиндр с цитоплазматической
мембраной и аксиальной нитью (аксостиль). Аксиальная нить находится под наружной мембраной и как бы закручивается
вокруг протоплазматического цилиндра спирохеты, при этом образуются первичные завитки, что придает бактерии
винтообразную форму. Аксиальная нить состоит из фибрилл – аналогов жгутиков бактерий, в состав которых входит
сократительный белок флагеллин. Они прикреплены к концам клетки и направлены навстречу друг другу, другой конец
фибрилл свободен. Число и расположение фибрилл варьирует у различных спирохет (от 1 до 100). Фибриллы участвуют в
передвижении спирохет и придают клеткам вращательное, сгибательное, поступательное движение. При этом спирохеты
образуют петли, завитки, изгибы, которые получили название вторичных завитков.
Патогенные виды относятся к трем родам: Treponema, Borrelia, Leptospira, отличающимся друг от друга структурными
особенностями, количеством завитков, типом движения и другими признаками. В структурном отношении клетки спирохет
представляют собой цитоплазматические цилиндры, отграниченные цитоплазматической мембраной (ЦМ) от тонкой и
эластичной клеточной стенки (КС), которая состоит из наружной мембраны и пептидогликанового слоя. Между ЦМ и
цитоплазматическим цилиндром спирохет расположены фибриллы, состоящие, так же как и жгутики бактерий, из белка
флагеллина. У трепонем и боррелий имеется два пучка фибрилл, прикрепленных к дисковидным образованиям блефаропластам, расположенным на обоих концах цилиндра и направленных навстречу друг другу. У лептоспир единичные
фибриллы прикреплены на концах клетки к блефаропластам. Фибриллы обеспечивают разные типы движения спирохет:
поступательное, вращательное и сгибательное. В процессе движения спирохеты образуют петли, завитки, изгибы, которые
получили название вторичных завитков.
Окраска. Спирохеты, особенно трепонемы, в отличие от других бактерий плохо воспринимают анилиновые красители. Их, так
же как простейших, окрашивают краской Романовского – Гимза или серебрением. Все спирохеты - грамотрицательные
микроорганизмы. Однако лучше всего наблюдать спирохеты в живом виде при фазовоконтрастной микроскопии или в
темном поле.
Патогенность. Патогенными для людей являются немногие. Различные виды - анаэробы, факультативные анаэробы и аэробы.
Большая часть спирохет - свободно живущие микроорганизмы, обитают как сапрофиты и в организме человека. Патогенные
для человека спирохеты являются представителями трех родов семейства Spirochaetaceae: В род Treponema входят мелкие
тонкие спирохеты с неглубокими завитками (в количестве 8—12). Эти спирохеты очень подвижны (возбудитель сифилиса - Т.
pallidum, возбудитель фрамбезии - Т. раllidum subsp. tenue, возбудитель пинты-Т. carateum); Borrelia (возбудитель
эпидемического возвратного тифа - В. recurrentis, возбудители клещевого возвратного тифа - В. persica, В. hispanisa и др.)
Спирохеты этого рода длиннее, имеют 3—8 крупных завитков с большей амплитудой. Среди спирохет рода Leptospira (от
leptos — малый, spiera — завиток) около 40 патогенных видов и большое количество сапрофитических форм, живущих в
пресных водоемах. Лептоспиры имеют длину до 4—8 мкм и своеобразную структуру: завитки очень неглубокие и частые
(напоминают под микроскопом веревку), концы изогнуты в виде крючков и имеют пуговчатые утолщения. Образуя
вторичные завитки при движении, лептоспиры приобретают вид букв S или С. L. interrogans вызывают у человека
инфекционную желтуху. Род Leptospira семейства Leptospiraceae (возбудитель лептоспироза - L. interrogans).
Морфологию спирохет изучают в световом микроскопе в окрашенных препаратах, в живом состоянии в фазово-контрастном
или темнопольном микроскопе. Спирохеты различаются по способности окрашиваться: одни хорошо окрашиваются
обычными анилиновыми красителями - фуксином (боррелии – грамотрицательные), другие требуют специальных методов
окраски (чаще всего по Романовскому-Гимзе).
Род
Число и характер завитков
Характер движения
Окраска по методу РомановскогоГимзе
Borellia
3-6, крупные,
неравномерные
толчкообразное, сгибательнопоступательное
сине-фиолетовая
Treponema
8-10, мелкие, равномерные
плавное, сгибательно-поступательное
бледно-розовая
Leptospira
16-20 мелкие
очень активное, вращательнопоступательное
розово-сиреневая
31. Простейшие, их положение среди микроорганизмов. Патогенные представители. Способ окраски.
Lamblia intestinalis
Toxoplasma gondii
Trichomonas vaginalis
Plasmodium vivax
Babesia bovis
Cryptosporidium parvum
Balantidium coli
Trichomonas hominis
Plasmodium ovale
Plasmodium falciparum
Naegleria fowleri
Leshmania donovani
ПРОСТЕЙШИЕ- микроорганизмы, состоящие из одной клетки. Относятся к царству Эукариот.В отличие от бактерий и
вирусов, у простейших есть одно или несколько ядер. Простейшие населяют всю поверхность Земли: от глубоководных
желобов до горных вершин. Больше всего простейших встречается в почве и пресных водах.
К подцарству Простейшие относятся одноклеточные животные. Некоторые виды образуют колонии.
Клетка простейших имеет такую же схему строения как клетка многоклеточного животного: ограничена оболочкой,
внутреннее пространство заполнено цитоплазмой, в которой находятся ядро (ядра), органоиды и включения.
Тип Sarcomastigophora.Подтип Mastigophora(жгутиконосцы) включает следующих патогенных представителей: трипаносому
— возбудителя африканского трипаносомоза (сонная болезнь); лейшмании — возбудителей кожной и висцеральной форм
лейшманиозов; трихомонады, передающиеся половым путем и паразитирующие в толстой кишке человека; лямблию —
возбудителя лямблиоза. Эти простейшие характеризуются наличием жгутиков: один — у лейшмании, четыре свободных
жгутика и короткая ундулирующая мембрана — у трихомонад.
К подтипу Sarcodina(саркодовые) относится дизентерийная амеба — возбудитель амебной дизентерии человека.
Морфологически сходна с ней непатогенная кишечная амеба. Эти простейшие передвигаются путем образования
псевдоподий. Питательные вещества захватываются и погружаются в цитоплазму клеток. Половой путь размножения у амеб
отсутствует. При неблагоприятных условиях они образуют цисту.
Тип Apicomplexa. В классе Sporozoa(споровики) патогенными представителями являются возбудители токсоплазмоза,
кокцидиоза, саркоцистоза и малярии. Жизненный цикл возбудителей малярии характеризуется чередованием полового
размножения (в организме комаров Anopheles) и бесполого (в клетках тканей и эритроцитах человека они размножаются
путем множественного деления). Токсоплазмы имеют форму полулуний. Токсоплазмозом человек заражается от животных.
Токсоплазмы могут передаваться через плаценту и поражать центральную нервную систему и глаза плода.
Тип Ciliophora. Патогенный представитель — возбудитель балантидиаза — поражает толстый кишечник человека.
Балантидии имеют многочисленные реснички и поэтому подвижны.
Тип Microspora включает микроспоридии — маленькие (0,5—10 мкм) облигатные внутриклеточные паразиты, широко
распространенные среди животных и вызывающие у ослабленных людей диарею и гнойно-воспалительные заболевания.
32. Микоплазмы, их положение среди микроорганизмов, строение, сходство с L-формами и отличие.
Mycoplasma hominis
Mycoplasma pneumoniae
Mycoplasma incognitis
Mycoplasma genitalium
Ureaplasma urealyticum
Микоплазмы - микроорганизмы, занимающие промежуточное положение между бактериями, грибами и вирусами. Это самые
мелкие из существующих в природе организмов отличающиеся от бактерий малыми размерами и отсутствием истинной
клеточной оболочки, способных самостоятельно жить и размножаться.
Согласно современной классификации, они относятся к семейству Мycoplasmataceae. Представители группы микоплазм
(класс Mollicutes) - самые мелкие прокариоты, способные самостоятельно размножаться. Т.к. протопласт снаружи ограничен
только плазматической мембраной, клетки осмотически чрезвычайно лабильны. У большинства микоплазм геном в 4 раза
меньше, чем у Escherichia coli, таким образом, среди прокариот, способных к самостоятельной репродукции, они обладают
самым малым геномом. Порядок Mycoplasmatales
выделили в отдельный класс бактерий, подчеркивая
филогенетическое отличие микоплазм от всех остальных
бактерий.
Возникновение, распространение и пути преодоления
лекарственной устойчивости бактерий
Помимо того, что антибиотики оказывают
неблагоприятное побочное влияние на микроорганизм,
они могут вызвать нежелательные для человека
изменения самих микроорганизмов.
I.
Группа - появление атипичных форм
микроорганизмов. У микробов могут изменяться
морфологические, биохимические и другие свойства.
II.
Группа - формирование
антибиотикоустойчивости. В отличие от врожденной,
или видовой, устойчивости к антибиотикам, присущей
бактериям от «рождения», приобретенная устойчивость
формируется у них в результате антибиотикотерапии:
пенициллин не действует на микоплазмы, обладающие к
нему врожденной резистентностью, так как у них нет
мишени, на которую этот антибиотик влияет, пептидогликана. Когда в популяции микробов
появляются особи, которые переносят более высокую концентрацию антибиотика, чем остальные, говорят о
формировании приобретенной устойчивости.
Сходство и различия с L-формами
33. Риккетсии, положение среди микроорганизмов, морфологические типы, патогенные представители.
Rickettsia sibirica
Rickettsia prowazekii
Rickettsia typhi
Rickettsia caucasica
Rickettsia persila
Риккетсии занимают промежуточное положение между вирусами и бактериями. Как и вирусы, риккетсии являются
внутриклеточными паразитами. На питательных средах риккетсии не культивируются. Подобно бактериям, они содержат 2
вида нуклеиновых кислот (ДНК и РНК), имеют многослойную клеточную оболочку и цитоплазматические включения.
Обладают специфическими антигенными свойствами. Наука, занимающаяся изучением риккетсий, называется
риккетсиологией. Патогенные риккетсии вызывают заболевания, известные под названием риккетсиозы. Риккетсиозы - это
группа трансмиссивных заболеваний, протекающих с лихорадкой (39,5-40ОС), сыпью и головной болью. Эти
микроорганизмы названы риккетсиями в 1916 г. в честь американского исследователя Х.Т. Риккетса (рисунок 1), открывшего
возбудителя лихорадки Скалистых гор.
Таксономическое положение Риккетсии относятся к типу Proteobacteria, классу Alphaproteobacteria, порядку Rickettsiales,
который включает 2 семейства: семейство Rickettsiaceae и семейство Anaplasmataceae. Семейство Rickettsiaceae включает
роды Rickettsia и Orientia. Семейство Anaplasmataceae включает роды Ehrlichia, Anaplasma, Neorickettsia и Wolbachia.
Род Rickettsia в настоящее время объединяет более 25 видов. По генетическим особенностям виды распределяются на 3
группы: - группа клещевой пятнистой лихорадки включает 4 подгруппы: R. rickettsii, R. massiliae, R. akari, R. helvetica;
- группа сыпного тифа включает одну подгруппу R. prowazekii;
- предковая группа включает одну подгруппу R. canadensis.
Патогенные для человека виды риккетсий входят в состав риккетсий группы сыпного тифа (Rickettsia prowazekii, Rickettsia
typhi) и риккетсий группы клещевых риккетсиозов (Rickettsia rickettsii, Rickettsia conorii, Rickettsia australis, Rickettsia acari,
Rickettsia sibirica и др.). Болезни группы сыпного тифа передаются вшами и блохами, а болезни группы клещевых
риккетсиозов передаются клещами.
Дифференциация риккетсий от вирусов и прокариотных микроорганизмов
Риккетсии схожи как с вирусами, так и с бактериями, но существует ряд отличительных особенностей.
Сходство с прокариотными микроорганизмами:
 риккетсии имеют трехслойную клеточную стенку;
 содержат два типа нуклеиновых кислот, рибосомы и систему дыхания сходную с прокариотами;
 окрашиваются анилиновыми красителями;
 чувствительны к антибиотикам тетрациклинового ряда, сульфаниламидам, а некоторые виды (N. hilminthoeca) к
широкому спектру антибиотиков.
Сходство с вирусами:
 риккетсии облигатные внутриклеточные паразиты;
 самые мелкие формы риккетсий обладают фильтруемостью через бактериальные фильтры;
 риккетсии способны культивироваться только в живой клетке (РКЭ, КК, организме лабораторных животных);
 риккетсии обладают тканевым тропизмом;
 для риккетсий характерно отсутствие строгой хозяиноспецифичности.
 рикетсии стимулируют выработку интерферона
Таким образом для микроорганизмов порядка Rickettsiales свойственны:
 плеоморфизм;
 неподвижность;
 грамотрицательное окрашивание;
 патогенность для многих видов сельскохозяйственных животных, человека и членистоногих;
 невысокая устойчивость во внешней среде (кроме C. burnetii);
 особая чувствительность к антибиотикам тетрациклинового ряда.
Основной отличительной особенностью от прокариотных микроорганизмов и вирусов является наличие в цикле развития
риккетсий членистоногих (вшей, клещей, блох).
Они относятся к плеоморфным бактериям – микроорганизмам, обладающим морфологической изменчивостью. Внешние
условия способны оказывать большое влияние не только на размеры, но и на форму бактерий.
При благоприятных условиях риккетсии соизмеримы с крупными вирусами и имеют характерную палочкообразную форму
(риккетсии Бернета) с размерами: · ширина в среднем 0,5 мкм; · длина от 0,4 до 2,0 мкм.
Различают 2 морфологические формы: -Вегетативная – крупный размер, размножаются внутри клетки, активна.
-Покоящаяся – меньше по размерам, не размножается.
Напр, после перенесённого сыпного тифа покоящиеся формы могут долго находиться в организме человека, но при опред
условиях они переходят в вегетативные формы, начинают размножаться, вызываю болезнь Брилля (хрон сыпн тиф).
Размножаются простым поперечным делением. Выделяют 2 типа деления:
· обычное деление a– (кокковидных, по Здродовскому) и b– (палочковидных двузернистых) форм с образованием гомогенных
популяций
· размножение мицелия дроблением нитевидных d–форм с последующим образованием популяций, состоящих из клеток a- и
b-типов.
· Тип С занимает промежуточное положение между a-, b- и d-формами, – это удлинённые или изогнутые двузернистые
палочки.
Основные способы окраски.
По Граму риккетсий окрашиваются отрицательно. Для их дифференциации чаще применяется предложенная П.Ф.
Здродовским облегченная модификация способа, Пиля – Нельсена: окраска водным фуксином (5 мин) С последующей
обработкой мазка 0,01 % раствором соляной кислоты (1 – 3 с) и докрашиванием 0,5 % метиленовым синим (10 с). Обладая
относительной кислотоустойчивостью, риккетсий при этом окрашиваются в рубиново – красный цвет и легко
обнаруживаются на фоне голубой цитоплазмы или синего ядра клеток. По Романовскому – Гимзе риккетсии окрашиваются в
сиреневый цвет; при внеклеточном расположении часто имеют вид биполярных палочек или гантелек. Спор, капсул и
жгутиков не образуют.
34. Хламидии, их положение среди микроорганизмов, особенности морфологии, патогенные представители.
Chlamydia trachomatis
Chlamydophila psittaci
Chlamydophila pneumoniae
Из-за своих размеров( первичный 0,3 мм, но может увеличиться до 1 мм) паразиты находятся между бактериями и вирусами,
т.к. имеют некоторые признаки как у бактерий( чувствительны к антибиотикам) так и у вирусов( не могут выжить вне клетки).
Таким образом, хламидии относятся и к бактериальным и к вирусным микроорганизмам.
Хламидии представляют собой облигатные внутриклеточные паразиты кокковидной формы, размножаются только в
цитоплазме клеток позвоночных. Метаболическая активность у них понижена, культивируются при 33—41° С в желточном
мешке куриного эмбриона, грамотрицательны, У птиц они вызывают респираторные болезни с генерализацией процесса, у
млекопитающих поражают дыхательные пути, плаценту, суставы, кишечный тракт
Представители семейства Chlamydiaceae (хламидии) являются патогенными облигатными внутриклеточными бактериями,
паразитирующими в чувствительных клетках теплокровных (млекопитающих, птиц, человека и др.)
Они близки по структуре и химическому составу к классическим бактериям. Для них характерно сохранение
морфологической сущности на протяжении всего жизненного цикла, деление вегетативных форм, наличие клеточной стенки,
содержание ДНК и РНК, энзиматическая активность, чувствительность к антибиотикам широкого спектра, наличие общего
родоспецифического антигена.
В то же время хламидии по размерам меньше классических бактерий, имеют небольшой геном, являются облигатными
внутриклеточными паразитами с уникальным циклом развития. Они не способны синтезировать высокоэнергетические
соединения и обеспечивать собственные энергетические потребности (энергозависимые паразиты), что и определяет их
облигатный паразитизм.
С учетом своих особенностей хламидии занимают самостоятельное (особое) положение среди других микроорганизмов —
прокариот. Для человека имеют значение преимущественно представители двух родов — Chlamydia и Chlamydophila.
Наибольшее значение имеют три вида.
Морфологические особенности.
Клеточный цикл развития хламидий имеет две основных формы — элементарные тельца (ЭТ) — инфекционная форма и
ретикулярные тельца (РТ) — вегетативная форма. Сферические ЭТ значительно меньше размерами (менее 300 нм в
диаметре), имеют более жестную электронно- плотную структуру, метаболически мало активны, адаптированы к
кратковременному внеклеточному существованию.
+Цикл развития хламидий осущесвляется в цитоплазматическом включении — фагосоме (вакуоле), куда ЭТ попадают путем
стимулирования эндоцитоза. В процессе адсорбции и эндоцитоза участвуют термолабильные эффекторные белковые
поверхностные антигены хламидий. ЭТ подавляют фагосомо — лизосомальное слияние и преобразуются при участии
главного поверхностного протеина в РТ, которые обладают активным метаболизмом, более крупными размерами и активным
бинарным делением. Цикл размножения заканчивается обратным переходом РТ в ЭТ, разрывом мембран включения и
ограничивающих мембран клетки хозяина, выходом ЭТ из клеток, далее ЭТ инфицируют новые клетки. Тельца включений
выявляются в клетках при помощи световой и иммунолюминесцентной микроскопии.
Кроме того, хламидии способны образовывать L — формы, персистентные формы
Окраска по Граму. Сущность метода
Метод основан на способности микроорганизмов удерживать образующийся при окраске комплекс генцианового фиолетового
и йода. Это связано с особенностями строения и химического состава грамположительных и грамотрицательных бактерий. У
грамположительных бактерий на поверхности клеток есть магниевые соли рибонуклеиновой кислоты, которые прочно
связывают комплекс генцианового фиолетового с йодом и препятствуют его вымыванию спиртом. Кроме того,
грамположительные бактерии имеют более выраженный пептидогликановый слой, в котором после обработки спиртом
сужаются поры, что также делает невозможным вымывание красителя. В результате грамположительные бактерии
окрашиваются в фиолетовый цвет.
У грамотрицательных бактерий отсутствуют магниевые соли рибонуклеиновой кислоты, пептидогликановый слой
значительно тоньше, а размеры пор шире. Поэтому при обработке спиртом краситель легко вымывается, бактерии
обесцвечиваются и при использовании дополнительного красного красителя грамотрицательные бактерии окрашиваются в
красный цвет.
Методика окраски по Граму (этапы окраски по Граму представлены на стенде).
1.
На фиксированный мазок наносят карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового на 1-2 минуты, затем
краситель сливают.
2.
Наносят раствор Люголя на 1 мин.
3.
Обесцвечивают препарат этиловым спиртом в течение 30-60 секунд до прекращения отхождения фиолетовых струек
красителя.
4.
Препарат промывают водой.
5.
Мазок докрашивают водным раствором фуксина в течение 1-2 минут, промывают водой и высушивают
фильтровальной бумагой.
Окраска по Цилю-Нильсену
Применяют для дифференциации кислотоустойчивых и некислотоустойчивых микроорганизмов. Кислотоустойчивость
бактерий обусловлена повышенным содержанием в клеточной стенке и цитоплазме липидов, воска и оксикислот. Принцип
основан на том, что кислотоустойчивые бактерии за счет содержания указанных веществ прочно связывают карболовый
фуксин при нагревании (т.е. окрашиваются в красный цвет) и не обесцвечиваются кислотой. Некислотоустойчивые бактерии
обесцвечиваются серной кислотой и при использовании дополнительного красителя - метиленового синего – окрашиваются в
синий свет.
Методика окраски по Цилю-Нильсену:
1.
На фиксированный препарат – мазок нанести карболовый раствор фуксина через полоску фильтровальной бумаги и
подогреть до появления паров в течение 3-5 мин.
2.
Снять бумагу, промыть мазок водой.
3.
Нанести 5 % раствор серной кислоты на 1-2 мин до обесцвечивания.
4.
Промыть водой.
5.
Докрасить мазок водным раствором метиленового синего в течение 3-5 мин.
6.
Промыть водой, высушить, микроскопировать.
Окраска по Ожешко
Метод основан на принципе окраски кислотоустойчивых бактерий. Отличие заключается в предварительной обработке
микроорганизмов 0,5 % раствором соляной кислотой, что облегчает окраску спор карболовым фуксином. Споры
кислотоустойчивы, поэтому красятся в красный цвет.
Методика окраски по Ожешко:
1.
На нефиксированный мазок нанести 0,5 % раствор соляной кислотой и подогреть на пламени в течение 2-3 мин.
2.
Кислоту слить, препарат промыть водой, просушить и фиксировать над пламенем. Затем окрасить по Цилю-Нильсену.
Споры бактерий приобретают красный цвет, а вегетативные формы - синий.
Окраска по Романовскому-Гимзе
Методика окраски по Романовскому-Гимзе:
Краска Романовского-Гимзе состоит из метиленового синего, эозина и азура.
3.
На мазок наносят рабочий раствор красителя (2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды) на 10-20 мин.
4.
Препарат промывают водой и высушивают на воздухе.
+Трепонемы окрашиваются в бледно-розовый цвет, боррелии - в фиолетовый цвет, лептоспиры - в розовый цвет.
Сапрофитные (непатогенные) формы окрашиваются в синий цвет. Морфологию спирохет изучают также в живом состоянии в
фазово-контрастном или темнопольном микроскопе. Хорошим методом выявления спирохет является серебрение по
Морозову.
Окраска по Романовскому-Гимзе. Фиксированный мазок кладут в чашку Петри мазком вниз на подставки из стеклянной
соломки или спичек и наливают рабочий раствор краски Романовского-Гимза (15—20 капель на 10 мл воды). Через 15—20
мин препарат промывают водой и высушивают на воздухе. Бактерии окрашиваются в тёмно-синий цвет, капсулы — в
розовый.
Окраска по Михину. На фиксированный мазок наливают метиленовую синь Леффлера (30 мл насыщенного спиртового
раствора метиленовой сини растворяют в 100 мл воды, добавляют 1 мл 1 % раствора NaOH и выдерживают в термостате
месяц) при лёгком нагревании выдерживают 3—5 мин, быстро промывают водой и высушивают. Бактерии окрашиваются в
синий цвет, капсулы — в розовый.
Метод Бурри-Гинса используется для окраски капсульных бактерий и основан на том, что капсула не воспринимает
красители. Капсулу выявляют негативным контрастированием фона по Бури. Для этого черную тушь смешивают в культурой
и высушивают. После этого проводят фиксацию в пламени горелки, окрашивают тела микробных клеток по Гинсу - водным
фуксином в течение 1 минуты и промывают водой 5-10 секунд. В результате на темном фоне хорошо видна бесцветная
капсула и красные тела микробов.