Тема занятия: Эксфолиативная цитология и ее биосубстраты. Пункционная цитология. Метод эксфолиативной цитологии или цитологии «слущивания», биологический материал, получаемый этим методом. Применение метода и способы получения материала в гинекологии, ур ологии, пульмонологии, гастроэнтерологии, дерматологии. Техника приготовления мазков. Метод пункционной (тонкоигловой) аспирационной биопсии. Область применения. Инструментарий. Пункция инфильтрата, опухоли, приготовление мазка. Пункция кистозной полости , этапы приготовление мазка. Эксфолиати вная цитология (exfoliative c y tology) – метод диагностирования патологических изменений клеток, например, при раке. Для этого клетки срезаются или соскребаются с поверхности тела. Р анняя клиническая цитология предс тавлена также преимущественно эксфолиативной цитологией: исследование жидкостей экссудаты, промывные воды; выделений мокрота, моча Цитологический метод технически прост, быстр, сравнительно дешев, малотравматичен. Эксфолиативная цитология включает в се бя исследование вагинальных мазков, мокроты . Эксфолиативная цитология основана на физиологическом «слущивании» клеток со слизистой оболочки (folium лист, ех отпадать). Цель занятия: Изучение основных принципов эксфолиативной цитологии и пункционной ( тонк оигловой) аспирационной биопсии, способов получения клеточного материала этими методами. Знать: основы получения материала при цитологии «слущивания»; характеристику получения биоматериала методом пункционной (тонкоигловой) аспирационной биопсии ; - применение данных методов в разных сферах медицины. Уметь: оценить правильность получения материала для эксфолиативной цитологии; характеризовать методы пункционной биопсии, технику приготовления мазка. Эксфолиативная цитология это также исследова ние материала, полученного при гинекологическом осмотре. Сюда относят профилактические осмотры (онкоцитология), т.е. микроскопическое исследование на а тип ические клетки и полный анализ с исследованием патогенной флоры и диагностические исследования: соск обы с шейки матки и цервикального канала; аспираты из полости матки, транссудаты, экссудаты, секреты и экскреты; соскобы и отделяемо е с поверхности эрозий язв, ран , свищей; исследование мокроты; цитологические исследования при эндоскопических обследованиях ; цитологическое исследование материала, полученного во время проведения операций. Методы получения клеток для исследования различны. При эксфолиативном методе изучают клетки, полученные в результате естественного отслаивания в нормальных жидкостях организ ма (например, кровь) или в пат ологически отделяемом (например, мокрота) либо искусственного их отделения путём смывания, механического слущивания. В др угих случаях материал получают при пункции через тонкую иглу (пункционный метод). Внедрение в клиническую практику эндоскопии обусловило распространение биопсионной цитологической диагностики , при которой материал для исследования берут путём биопсии. Для цитологического исследования препараты готовят на предметных стеклах. В зависимости от целей исследования применяют микроскопию нативных или фиксированных и окрашенных с помощью стандартных методов окраски препаратов, фазово контрастную, ультрафиолетовую и флуоресцентную (с использованием флуорохромов для окраски препаратов) микроскопию. Практическое применен ие получили специфические цитохимические методы. В научных исследованиях используют также специальные методы авторадиографию, иммуноцитохимию, цитоспектрофото и цитофлуориметрию, электронную микроскопию, метод тканевой культуры. Эксфолиативная цитология основана на общем свойстве эпителиальных, особенно опухолевых, клеток постоянно отторгаться с поверхности ткани. Но опухолевая ткань часто покрыта некротическим налетом, фибринозными наслоениями или слизью, что тормозит выделение отторгнувшихся клеток и з атрудняет их поиск. Ц итологическое исследование считается полноценным, если материал получен в достаточном количестве. Однако при ранних формах рака взятие полноценного материала без вспомогательных приборов и методик не всегда возможно. По этим причинам п оиск и изучение новых методик остаются актуальными. Рисунок 1 Влагалищный мазок. Плоскоклеточный ороговевающий рак шейки матки. Окраска по Папенгейму, 400 Получение материала в гинекологии Подготовка пациентки и взятие биологического материал а В течени е 24 часов перед исследованием не следует проводить спринцевание, а так же необходимо исключить применение интравагинальной терапии. Нельзя брать материал во время менструации. Для цитологических исследований взятие материала проводит врач гинеко лог. Для получения материала для исследования используют специальные гинекологические инструменты, которые должны быть стерильными и сухими. Влагалищная часть шейки матки, наружный зев, цервикальный канал Для получения оптимальных результатов необходимо от дельно собирать эктоцервикальные и эндоцервикальные образцы. Взятие материала осуществляется до бимануального исследования. Шейку матки при помощи зеркал тщательно осматривают, затем без предварительной обработки слегка соскабливают поверхность патологичес ки измененного участка или всей влагалищной части шейки вокруг наружного зева. Из полученного соскоба делают один тонкий равномерный мазок во всю длину предметного стекла. При взятии материала шпателем Эйра возможно получить материал одновременно с поверхн ости шейки матки, из зева и нижней трети цервикального канала. Шпатель Эйра имеет на одном конце неравные тупые кончики. Один, более длинный и узкий, вставляется в наружный зев цервикального канала, другой, более низкий и широкий, прилегает к поверхности ш ейки матки. Вращательными движениями при легком надавливании получают соскоб. Далее, этим же шпателем с полученным материалом делают тонкие мазки, получая на одном стекле сразу две полоски: в одной материал из нижней трети цервикального канала и наружного зева, в другой – с поверхности шейки матки. Далее мазки должны быть зафиксированы посредством высушивания на воздухе. Специальная конструкция для взятия эндоцервикальных мазков, скринет является обязательным дополнением к шпателю Эйра при проведении скрини нга рака шейки матки. Скринет позволяет получить богатый клетками, хорошо сохраняющийся материал, что гарантирует улучшение качества получаемых мазков и показателей скрининга онкологической патологии. Будучи доступным в двух размерах, скринет может быть ле гко введен в любой цервикальный канал, в частности женщин постменопаузного периода. Скринет обеспечивает абсолютно безвредный доступ к зоне перехода эпителия влагалища в призматический эпителий цервикального канала, что особенно важно при ее высоком распол ожении. Для взятия биологического материала скринет плавно вводится в цервикальный канал. Далее, для получения мазка необходимо сделать только одно вращение (слишком большое количество оборотов может отрицательно сказаться на целостности клеток). После взя тия биологического материала скринет, без совершения дополнительных вращательных движений, плавно выводится из шейки матки. Взятый биологический материал наносится на чистое обезжиренное стекло одним вращательным движением (по анологии с получением материа ла) и затем высушивается на воздухе. При взятии биологического материала с помощью спиретте возможно проведение экто и эндоцервикальной аспирации. После введения инструмента в шейку матки его дистальный конец подводится к месту, откуда необходимо взять об разец ткани (эндо или эктоцервикс). Аспирационный эффект достигается передвижением внутреннего поршня. После взятия образца биологического материала спиретте извлекается из шейки матки. Затем обратным движением поршня полученный образец биологического мат ериала наносится на предметное стекло и фиксируется, высушиванием на воздухе. Кроме того, слущенные клетки можно получить с помощью мазков отпечатков со слизистой оболочки влагалища и шейки матки. В этом случае мазки готовят из соскобов шпателем, содержимо е которых наносятся на предметное стекло в виде отпечатков. Материал отдельно из цервикального канала можно получить при помощи гинекологического пинцета, желобоватого зонда, ложечки Фолькмана и др. или путем аспирации содержимого цервикального канала. Взя тие материала из цервикального канала проводят только после удаления цервикальной слизистой пробки. Исследуемый материал, нанесенный на сухое, обезжиренное предметное стекло должен быть обязательно высушен на воздухе. Подсушенное стекло (мазок) маркируется . К каждому стеклу должен прилагаться бланк направление на цитологическое исследов ание, номер которого должен соот ветствовать номеру (маркировке) мазка. В бланке указывается: учреждение, проводившее взятие биологического материала и дата его взятия; фамили я, имя, отчество обследуемой женщины; ее возраст, дата последней менструации, место взятия биологического материала, клинический диагноз; при отсутствии патологии необходимо указать, что шейка матки без изменений. Влагалище Взятие образцов проводится путем аспирации содержимого заднего свода или соскоба со слизистой оболочки. Аспирация содержимого из заднего свода должна проводиться под визуальным контролем при исследовании зеркалами, при этом необходимо использовать несмазанные зеркала и получать материал до пальцевого исследования. При осмотре с использованием влагалищных зеркал вводят свободный конец канюли до заднего свода, содержимое насасывают в канюлю резиновой грушей, аспират выдувают на сухое обезжиренное предметное стекло и делают тонкий мазок крае м шлифованного стекла. Содержимое заднего свода представляет собой случайно накопленный пул из разных отделов генитального тракта, поэтому его исследование целесообразно проводить только как ориентировочное. При патологических находках необходимо тщательно е исследование материала из отдельных мест. Материал из заднего свода может быть использован также для оценки микробиоценоза влагалища. Образцы материала из влагалища берут до манипуляций в шейке. Соскабливание проводится сверху вниз в передней, задней и б оковых стенках влагалища. При наличии опухоли в стенке влагалища производят пункцию тонкой иглой. Эндометрий Используемый инструмент – эндобраш. Перед взятием мазков эндометрия необходимо исключить возможность наличия беременности, вагинита или цервицита. Все манипуляции на эндометрии могут проводиться только при условии полного излечения инфекций слизистой влагалища и шейки матки. При обследовании ряда женщин менопаузного периода, использование эндобраш может оказаться неоправданным, ввиду наличия стенотич еских изменений цервикального канала. После наложения зеркал и обработки шейки матки антисептическим раствором мандрен эндобраш вытягивается так, чтобы его щетка полностью исчезла внутри внешней части инструмента, а его колпачо к, расположенный на дистально м конце закрыл дистальную часть внешнего контура эндобр а ш. Затем, инструмент плавно вводится в полость матки до тех пор, пока дистальный колпач о к не достигнет дна матки (нанесенные на инструменте метки помогают определить размеры полости матки). Перед нача лом взятия мазков наружная часть инструмента смещается вниз, освобождая находящуюся внутри щетку. Далее делается одно или два вращательных движения мандреном вправо или влево для получения соскобов со стенок матки. После этого, наружная часть инструмента с мещается в исходное положение для сохранения полученного биологического материала и эндобраш полностью извлекается из полости матки. Полученный материал наносится на предметное стекло и фиксируется на воздухе. Вульва С вульвы материал берут при подозрении на рак. Область поражения тщательно обрабатывают изотоническим раствором хлорида натрия или слабым дезинфицирующим раствором для удаления элементов воспаления и некротических масс. Промокают салфеткой и делают соскоб шпателем или каким либо другим инструме нтом с несколько заостренными краями. Получение материала в урологии Для цитологического исследования чаще всего используют осадок мочи, собранной за сутки. Полученный материал помещают тонким слоем на предметное стекло. Мазок фиксируют смесью Никифорова и окрашивают по Романовскому. При микроскопии препаратов возможно обнаружение клеточных элементов из почки, мочевого пузыря или предстательной железы с признаками бластоматозных изменений. При опухолях мочевого пузыря более точные данные получают при исслед овании материала, полученного путем аспирации из полости мочевого пузыря. Аспирацию производят путем плавного отсасывания мочи сухим шприцем по катетеру из опорожненного мочевого пузыря. Полученный материал помещают в пробирку на 2 ч, после чего из осадка готовят препарат по описанной выше методике. Материал для цитологического исследования можно получить и путем аспирации из опухоли мочевого пузыря. Для этого через катетеризационный цистоскоп вплотную к опухоли подводят кончик мочеточникового катетера и пр оизводят аспирацию с помощью шприца, постепенно удаляя катетер. Присосавшиеся к кончику катетера отторгшиеся кусочки опухолевой ткани подвергают исследованию. Для диагностики опухолей предстательной железы может быть использовано цитологическое исследовани е ее секрета, полученного путем массажа железы. Однако большую ценность имеет исследование пунктата из нескольких участков ткани предстательной железы. Получение материала в пульмонологии Сбор мокроты Сбор мокроты желательно осуществлять утром (так как она накапливается ночью) и до еды. Анализ мокроты будет достоверней, если пациент предварительно почистил зубы щёткой и прополоскал рот кипячёной водой, что позволяет уменьшить бактериальную обсеменённость полости рта. Анализ мокроты следует проводить под готовленному и обученному пациенту: 1. мокрота лучше отходит и её образуется больше, если накануне исследования пациент употреблял больше жидкости; 2. сбор мокроты проходит эффективней, если пациент предварительно выполняет три глубоких вдоха с последующим энерг ичным откашливанием. Необходимо подчеркнуть, что важно получить именно мокроту, а не слюну. Сбор мокроты выполняют в стерильный разовый герметичный флакон (контейнер) из ударостойкого материала с навинчивающимся колпачком или плотно закрывающейся крышкой. Флакон должен иметь ёмкость 20 50 мл и широкое отверстие (не менее 35 мм в диаметре), чтобы пациент мог легко сплёвывать мокроту внутрь флакона. Для возможности оценки количества и качества собранной пробы флакон должен быть изготовлен из прозрачного матер иала. Если сбор мокроты проходит в присутствии медицинского работ ника, то последнему необходимо на деть перчатки (взятие материала и его отправку следует осуществлять в перчатках). Учитывая, что при энергичном кашле мокрота в виде капель может разбрызгиват ься, с профилактической целью следует на деть маску, а при необходимости закрыть глаза очками или сразу всё лицо защитным щитком. Лучше вообще находиться за спиной пациента, выбирая свое положение таким образом, чтобы направление движения воздуха было от ме дработника к пациенту. Для провокации кашля, а также, если мокрота отделяется плохо , пациенту проводят в течение 10 15 минут ингаляцию 30 60 мл подогретого до 42 45 градусов Цельсия раствора (в 1 л стерильной дистиллированной воды растворяют 150 г хлорида натрия и 10 г бикарбоната натрия). Вдыхаемый во время ингаляции солевой раствор вначале вызывает усиленное образование слюны, потом появляется кашель и отделяется мокрота. Поэтому прежде, чем осуществлять сбор мокроты, пациент должен сплюнуть слюну в специ ально приготовленную плевательницу с дезраствором. У большинства пациентов после подобной ингаляции ещё в течение нескольких часов наблюдается остаточная гиперсекреция бронхиального содержимого. Для исследования достаточно 3 5 мл мокроты, но анализ можно п роводить и при меньших объёмов. Анализ мокроты необходимо проводить не позднее, чем через 2 часа после сбора. Если собранная мокрота подлежит транспортировке в другое учреждение, то до момента отправки в лабораторию герметично закрытые флаконы с материалом хранятся в холодильнике не более 2 3 суток. При более длительном хранении необходимо применить консервирующие средства. Во время транспортировки мокрота должна быть защищена от воздействия прямых солнечных лучей и тепла. Факторы, влияющие на результат ис следования а) Неправильный сбор мокроты. б) Мокрота несвоевременно отправлена в лабораторию. В несвежей мокроте размножается сапрофитная флора, разрушаются форменные элементы. в) Анализ мокроты проведён уже после назначения антибактериальных, противогельминтных сре дств. Получение материала в гастроэнтерологии . Наиболее распространенными заболеваниями желудка являются гастрит, язва, полипоз и рак. Для диагностики этих заболеваний используются не только методы определения секреторной функции желудка, но и цитологичес кое исследование. Материалом для цитологического исследования может служить содержимое желудка, полученное во время зондирования, промывные воды желудка, собранные различными способами (по А. Я. Альтгаузену, балонным методом, целенаправленным отсасыванием по Н. Н. Шиллер Волковой), мазки отпечатки с кусочков слизистой оболочки желудка, полученных с помощью биопсийных щипцов при гастрофиброскопии под контролем зрения. Слущивание эпителиоцитов усиливается при применении механического раздражителя зонда балл она. При заболеваниях желудка его слизистая оболочка нередко покрыта толстым слоем слизи, которая препятствует процессу слущивания клеток. Путем предварительного введения в желудок муколитического фермента папаина или альфа химотрипсина можно вызвать раств орение слизистого барьера и таким образом создать благоприятные условия для максимального слущивания клеток эпителия слизистой оболочки желудка. В желудочном содержимом под влиянием кислой реакции за счет соляной и летучих (молочной, масляной и др.) кислот при застойных явлениях эпителиоциты видоизменяются и даже разрушаются. Особенно легко разрушаются животе) придают наиболее удобное для исследования положение. После установки оливы на желаемом уровне присасывающими движениями шприца отсасы вают жидкость и собирают ее в пробирку. При прекращении поступления жидкости через зонд вводят 20 мл подогретого изотонического раствора натрия хлорида, который тут же отсасывают. Промывание повторяют 3 5 раз, массируя переднюю брюшную стенку в месте распо ложения оливы. В лаборатории промывную жидкость разливают тонким слоем по чашкам Петри для просмотра невооруженным глазом или через специальную лупу. Для микроскопического исследования отбирают наиболее плотные частицы, участки с прожилками крови. Отобрать и исследовать необходимо по возможности весь материал (10 12 процентов). В нативных и окрашенных препаратах, приготовленных из промывных вод желудка, обнаруживаются различное количество лейкоцитов, эпителиоциты желудка, а при злокачественной опухоли ати пичные клетки. Данные микроскопического исследования в комплексе с результатами функциональных и клинических исследований позволяют установить характер патологического процесса. Для диагностики заболеваний желудка используют также материал, полученный приц ельно при гастрофиброскопии. Проводят в основном гистологическое исследование, цитологическую диагностику применяют при получении очень маленького кусочка слизистой оболочки желудка, непригодного для приготовления гистологического препарата, а также в тех случаях, если биоптат состоит из слизи, фибрина, детрита и разрозненных клеток эпителия. Сразу после выведения щипцов чашечек, применяемых для биопсии, из канала гастрофиброскопа полученный материал с помощью иглы помещают на предметное стекло, готовят маз ки отпечатки, а затем опускают оставшийся кусочек ткани в формалин и направляют на гистологическое исследование. При значительном поражении поверхности слизистой оболочки желудка рекомендуется брать материал для цитологического исследования путем соскоба с помощью нейлоновой щетки, однако недостатком этого способа является то, что основная масса клеток в полученном материале разрушена. Цитограммы материала, полученного путем гастрофибробиопсии, отличаются от цитограмм промывных вод желудка. В мазках выявляю тся в основном клетки поверхностного эпителия, желез желудка и небольшое количество клеток из вышележащих отделов пищеварительного канала. Клетки собственных желез желудка располагаются в виде трубочек или округлых структур. Главные клетки округлой формы, средней величины, с центрально расположенным круглым ядром, в цитоплазме их базофильная зернистость. Париетальные клетки обнаруживаются, как правило, среди главных, крупнее последних, содержат почти центрально расположенное небольшое круглое ядро и широкую оксифильную цитоплазму. Мукоциты небольшой величины, морфологически сходны с цилиндрическим эпителием, поэтому цитологически дифференцировать их трудно. Клетки эпителия кардиальных и пилорических желез небольшой величины, округлой формы, с центрально рас положенным небольшим гиперхромным ядром и широкой вакуолизированной (пенистой) цитоплазмой. Лейкоциты, которые создают фон мазка, приготовленного из осадка промывных вод желудка, и эритроциты в цитограммах биоптата диагностического значения не имеют.
