Калий Калий – основной внутриклеточный катион. Во внеклеточной жидкости находится менее 2% общего количества калия организма. В организме человека около 98% калия находится внутри клеток тканей. Главный резервуар калия – мышцы и печень. Для всех тканей характерно определённое соотношение концентраций между калием и натрием, который содержится преимущественно во внеклеточной среде. Общее содержание калия в организме человека составляет 160 – 250 г. Суточная потребность взрослого человека в калии составляет 2 – 3 г в сутки, а для ребёнка – 16 – 30 мг на 1 кг массы тела. Из-за отсутствия способности к депонированию значительные колебания содержания калия в организме человека сразу сказываются на внутриклеточном состоянии. Функции калия: -поддержание осмотического давления и кислотно-щелочного равновесия; -участие в работе нервных и мышечных клеток (влияет на работу сердца); -участие в ферментативных реакциях, т.е. необходим для синтеза протеинов (на 1 г синтезированного протеина требуется 20 мг К+), АТФ, гликогена; -участие в формировании потенциала покоя, действия, вызывает конформационные перестройки протеинов, способствуя активации ферментов; - вместе с натрием участвует в создании электрохимического потенциала. Концентрация калия в плазме и его запасы в организме регулируются почками. Большая часть калия, профильтрованного в почечных клубочках, реабсорбируется в проксимальных канальцах. В дистальных канальцах калий подвергается секреции в мочу в обмен на активно реабсорбирующийся натрий. Калийно-натриевый обмен стимулируется альдостероном (который усиливает выделение с мочой) и инсулином (который способствует переходу К+ в клетки), а ингибируется натрий-уретическим фактором. В норме содержание калия составляет: Сыворотка: 3,5 – 5,0 ммоль/л; плазма 3,4 – 5,3 ммоль/л Моча: Взрослые: 25-100 ммоль/сутки (или 1,5 – 2 г/сутки) Дети до 6 месяцев 0 – 25 ммоль/сутки 7 – 12 месяцев 15 – 40 ммоль/сутки 1 – 3 лет 20 – 50 ммоль/сутки 4 – 6 лет 20 – 60 ммоль/сутки Материал для исследования: Сыворотка (плазма) – венозную или артериальную кровь следует собрать в пробирку с гепарином. Кровь следует брать, не пережимая сосуды. После свёртывания крови следует отделить сыворотку, чтобы предотвратить освобождение калия из клеток. Любой гемолиз исключает выполнение анализа. Суточная моча. Примечание: Практикуемое перед взятием крови накладывание жгута на область предплечья приводит к местному застою крови и тканевой гипоксии. Вследствие этого калий выходит из эритроцитов, и его уровень в плазме повышается. Если же больному в целях увеличения кровенаполнения области предплечья повторно сжать кулак, то происходит дополнительное выделение калия из сокращающихся мышц кисти и предплечья. Поэтому после прокола вены жгут следует немедленно снять, мышцы рук расслабить, а кровь брать через несколько минут – после полного восстановления кровотока. Содержание калия в сыворотке крови может повышаться за счёт его выхода из эритроцитов сгустка при длительном промежутке времени от момента взятия крови до исследования сыворотки. Поэтому кровь для анализа лучше брать в пробирку, содержащую каплю гепарина, и сразу же отделять плазму центрифугированием. Определение концентрации калия в сыворотке и плазме крови нефелометрическим методом без депротеинизации. (набор Ольвекс диагностикум) Принцип метода: Ионы калия введенные в реакционную смесь, образуют стабильную суспензию. Мутность суспензии пропорциональна концентрации ионов калия. Исследуемый материал: свежая сыворотка или плазма крови без следов гемолиза. Состав набора: Реагент 1. NaOH-500ммоль/л; тетрафенилборат-260ммоль/л; детергенты, стабилизаторы. Реагент 2 (калибратор) . Калий -5,0ммоль/л, Аналитические характеристики: Набор обеспечивает линейность определения с отклонением не более 10% в диапазоне концентраций 2-10 ммоль/л. опыт Калибровочная Холостая проба проба образец 0,05 Бидистиллир. вода 0,05 калибратор 0,05 Реагент 1 2,0 2,0 2,0 Пробы перемешать и инкубировать 5 мин при 18-25С. Тщательно перемешать и немедленно фотометрировать при длине волны :578нм(ФЭК -590нм) в кювете с длиной оптического пути 10мм против холостой пробы. Расчет концентрации проводить по формуле: С=Аоп/Акал*Скал, где: Аоп-адсорбция опытной пробы Акал- адсорбция калибровочной пробы Скал-концентрация калия в калибраторе Клинико-диагностическое значение: Гиперкалиемия — увеличение концентрации калия в сыворотке свыше 5,5 ммоль/л. Данное состояние представляет угрозу для жизни больного и гораздо серьезнее, чем гипокалиемия. Повышенное поступление (быстрое или длительное введение); Перераспределение калия из клеток — повреждение тканей (ожоги, травмы, некроз), гемолиз при неправильном взятии крови, тромбоцитоз (1000·109), острое голодание, метаболический ацидоз (повышенный К+, Na+-обмен через клеточную мембрану и снижение почечной экскреции, увеличение на 1 ммоль/л), гиперкинезы; состояния, связанные с потерей натрия, ацидозом и клеточной гипогидратацией; Уменьшение объема внеклеточной жидкости; Уменьшение почечной экскреции — острая почечная недостаточность, терминальная стадия хронической почечной недостаточности с олигурией, адиссонова болезнь, недостаточность ренин-ангиотензин-альдостероновой системы. Причины: -Уменьшение объёма внеклеточной жидкости: обезвоживание, ожоги. -Чрезмерное высвобождение калия из клеток: Повреждение тканей (размозжение, обширный некроз, внутрисосудистый гемолиз, повышенный распад клеток и тканей, злокачественные опухоли); Усиленный распад белка и гликогена (голодание, некомпенсированный сахарный диабет); Тканевая гипоксия; Гемолитическая анемия; Метаболический или дыхательный ацидоз -Уменьшение почечного выведения: Острая почечная недостаточность (сопровождающий её метаболический ацидоз усугубляет гиперкалемию); Недостаточность коры надпочечников (болезнь Аддисона); Анафилактический шок ; Лечение индометацином, каптоприлом. Гиперкалиемия нередко сочетается с гипокальциемией, гипермагнийемией, гиперазотемией. Гипокалиемия — уменьшение концентрации калия в сыворотке ниже 2,0-3,5 ммоль/л. Необходимо учитывать, что истощение запасов калия в организме плохо коррелирует с уменьшением его концентрации в крови, что объясняется способностью пула внутриклеточного калия к восполнению экстраклеточного дефицита. Сниженное поступление — хроническое голодание, разведение внеклеточного калия при длительном введении растворов с малым содержанием элемента; Потери калия — неукротимая рвота, профузные поносы, полиурия в результате применения мочегонных средств или при гормональных заболеваниях, гипервентиляция, почечные потери — снижение реабсорбции в почках. Нехватка магния снижает активность Na,K-АТФазы и ухудшает перемещение калия из вне- во внутриклеточное пространство, что способствует потере калия с мочой; Перераспределение в клетки — глюкозо- и инсулинотерапия, введение больших количеств белка. Причины: -Недостаточное содержание калия в дневном рационе -Недостаточное поступление калия, чаще всего у больных после хирургического вмешательства, получающих питание через зонд -Применение калийистощающих мочегонных средств -Потеря калия через жкт: длительная рвота, понос, свищи кишечника и желудка. -Потеря калия через почки: метаболический алкалоз и ацидоз (чаще при сахарном диабете), после введения инсулина, особенно при диабетическом ацидозе; первичный и вторичный гиперальдостеронизм; повышенная функция передней доли гипофиза и коры надпочечников, усиленная секреция антидиуретического гормона, применение кортикостероидов; синдром Франкони (нарушенная функция проксимальных канальцев нефрона). Лечение тестостероном. Повышенный синтез белков. Между выделением с мочой калия и натрия существует антагонистическая зависимость: повышение выделения калия ведёт к задержке натрия, и наоборот. Повышенное выделение калия с мочой – гиперкалиурия -Действие стероидных гормонов -Приём АКТГ, гидрокортизона, кортизона -Гиперфункция коры надпочечника (синдром Иценко-Кушинга) -Первичный и вторичный гиперальдостеронизм -Болезни почек: полиурическая стадия острой почечной недостаточности, синдром Франкони, врождённая тубулопатия Диуретики: -Препараты ртути, тиазиды, фуросемид -Метаболический ацидоз (сахарный диабет) -Голодание: повышенный распад клеток -Длительные инфузии физиологическим раствором Пониженное выделение калия с мочой – гипокалиурия -Болезни почек (пиелонефрит, нефросклероз) -Сердечная недостаточность с олигурией -Недостаточность коры надпочечников (болезнь Аддисона) и гипофиза -Хронический дефицит калия (длительный понос) Внимание: При интерпретации результатов определения калия в плазме, эритроцитах крови и моче следует учитывать ритмичность суточных колебаний концентрации этого электролита в биологических жидкостях. У здоровых людей в возрасте 20-27 лет отмечено более высокое содержание калия в плазме днём, а в эритроцитах вечером при минимальной экскреции электролита с мочой в ночные часы. У здоровых людей в возрасте 36-76 лет уровень калия плазмы ночью ниже, рано утром. Псевдо-гиперкалемия отмечается в случае: -Гемолиза эритроцитов даже в минимальных количествах -Взятия крови после предварительной работы рукой при наложенном жгуте -Длительного хранения цельной крови. Натрий Натрий – основной внеклеточный катион (это гидрофобный катион). Натрий широко распространён во всех органах, тканях и биологических жидкостях организма человека, большая часть которого находится во внеклеточных жидкостях – около 50%, в костях и хрящах – около 40% и внутри клеток менее 10%. Содержание натрия в клетках не превышает 2,5% от общего его количества, содержащегося в организме. Постоянство натрия в плазме является результатом гормональной регуляции почечного выведения натрия и воды. Главные гормоны, отвечающие за состояние водно-натриевого обмена – система ренин-ангиотензин-альдостерон, вазопрессин и натрийуретический фактор. В течение суток с пищей поступает 4 – 6 г натрия, практически такое же количество выводится почками, суточная потребность составляет 1 г. Реабсорбция натрия в почечных канальцах – это активный процесс, требующий затраты АТФ и сопровождающийся секрецией калия и протонов в мочу. Функции натрия: -играет важную роль в процессе внутриклеточного и межклеточного обмена; обеспечивает постоянство осмотического давлении; -участвует в химической регуляции кислотно-щелочного равновесия (при реабсорбции натрия в мочу секретируются протоны, т.е. удаляются кислые продукты метаболизма) – натрий обменивается на ионы водорода; -влияет на состояние мышечной и сердечно-сосудистой систем; -участвует в процессах мембранного транспорта глюкозы, аминокислот; -участвует в возникновении и поддержании электрохимического потенциала на плазматических мембранах клеток; -играет роль в механизме кратковременной памяти. - Ионы натрия и хлора участвуют в секреции соляной кислоты, а вместе с калием участвует в возникновении нервного импульса. -При недостатке ионов натрия в организме выведение кислых продуктов из организма нарушается, и возникает возможность развития ацидоза. В состоянии водно-натриевого равновесия организма суточное выведение натрия с мочой приблизительно соответствует суточному поступлению натрия с пищей. Основной путь выведения натрия – почечный (почки фильтруют около 25000 молей натрия за сутки и основное количество его реабсорбируется в канальцах): с мочой за сутки выделяется 160 – 260 ммоль (или 2 – 4 г/сутки), с потом – 0,8, с калом – 7 – 8 ммоль.. Поэтому даже частичная почечная недостаточность ведёт к нарушению гомеостаза натрия. Увеличение выведения натрия с мочой при отёках рассматривается как положительный момент, свидетельствующий о рассасывании отёков. В норме содержание натрия составляет: Сыворотка (плазма) – 135-156 ммоль/л. Суточная моча – 150-250 ммоль/сутки Материал для исследования: Сыворотка (плазма) – венозную кровь берут в пробирку с гепарином (соль лития или аммония). Примечание: частой причиной лабораторных ошибок в определении электролитов является использование в качестве антикоагулянта цитрат натрия. Суточная моча. Определение концентрации натрия в сыворотке или плазме крови колориметрическим методом. (набор Ольвекс диагностикум) Принцип метода: Содержащийся в образце натрий осаждается уранилацетатом магния. Уранилионы, оставшиеся в растворе образуют окрашенный комплекс с тиогликолятом. Концентрация натрия пропорциональна разности между контрольной (без преципитации) и опытной пробами. Исследуемый материал: сыворотка или плазма крови. Состав набора: Реагент1. Уранилацетат магния Реагент2. Тиогликолят аммония Реагент3. Калибратор 150ммоль/л Опытная проба Калибровочная проба 1,0 0,02 - Контрольная проба Реагент1, мл 1,0 1,0 Образец, мл 0,02 Реагент3, мл Бидистиллир. 0,02 Вода, мл Пробы перемешать и инкубировать 5мин при температуре 18-25С, затем снова перемешать (не менее 30 с) и инкубировать 30мин в темноте. Центрифугировать пробы при 900g 10 мин. Далее использовать супернатант (прозрачную надосадочную жидкость). Смешать 0,02 мл опытной, калибровочной, контрольной пробы с 2 мл реагента 2и через 5 мин измерить оптическую плотность контрольной, калибровочной и опытной проб против воды при длине волны 365 нм или 405 нм. Окраска стабильна 25 мин после инкубации. Интенсивность окраски обратно пропорциональна концентрации натрия в образце. Расчет концентрации и натрия проводить по формуле: С = (Еконтр. – Еоп. ) / (Еконтр. –Екалиб.) *150ммоль/л, где Е контр. – оптическая плотность контрольной пробы , Еоп. – оптическая плотность опытной пробы, Е калибр. – оптическая плотность калибровочной пробы. Клинико-диагностическое значение: Повышение концентрации натрия в крови (сыворотке) более 164 ммоль/л – гипернатриемия (в плазме - гипернатриплазмия) – сопровождается тяжёлым общим состоянием больных, повышением температуры тела, тахикардией. Причины: -Гипертоническая дегидратация: Снижение поступления воды в организм Потеря воды через почки (нарушение функций почечных канальцев, некомпенсированный сахарный диабет, осмотический диурез) Потеря воды через кожу (обильная потливость), лёгкие (гипервентиляция), жкт (понос (особенно у младенцев)). -Избыток натрия в организме: Повышенное поступление натрия в организм (чрезмерное введение физиологического раствора, приём больших количеств солёной пищи) Пониженное выведение натрия: почечная недостаточность; снижение клубочковой фильтрации; первичный и вторичный гиперальдостеронизм (правожелудочковая сердечная недостаточность, нефротический синдром, цирроз печени, сужение почечной артерии); гиперкортикоцизм. Снижение концентрации натрия в крови (сыворотке) ниже 134 ммоль/л – гипонатриемия (в плазме – гипонатриплазмия) – характеризуется проявлением апатии, потерей аппетита, тошнотой, нарушением рефлексов, тахикардией, анурией, психозами и гипотензией с потерей сознания. -Гипотоническая гипергидратация (относительная гипонатриемия): Повышенное парентеральное давление Уменьшенное выведение воды (почечная недостаточность, дефицит кортизона (гипокортицизм) и альдостерона (гипоальдостеронизм), повышенная секреция вазопрессина, лекарственные препараты (диуретики), стимулирующие секрецию вазопрессина) -Недостаток натрия в организме (абсолютная гипонатриемия): Потеря натрия через почки (полиурическая фаза острой почечной недостаточности, лечение диуретиками, недостаточность коры надпочечников) Потеря натрия через кожу (обильное потоотделение с обильным питьём, ожоги), через жкт (рвота, понос, свищи) Пониженное поступление натрия, бессолевая диета. Повышенное выделение натрия с мочой – гипернатриурия Чрезмерное поступление натрия с пищей Первичная и вторичная гипофункция коры надпочечника Лечение диуретиками Пониженная секреция вазопрессина (повышенное выведение натрия при имеющейся гипонатремии) Рассасывание отёков, экссудатов, транссудатов Снижение выделения натрия с мочой – гипонатриурия Внепочечная потеря натрия (через кожу (повышенная потливость), рвота, понос) При экссудатах, транссудатах, отёках Послеоперационные состояния (первые двое суток, повышенное образование гормонов надпочечника) Первичный и вторичный гиперальдостеронизм; приём стероидных гормонов Почечная недостаточность (хронический нефрит) В поту уровень натрия возрастает при муковисцидозе, аддисоновой болезни, гипопаратириозе, несахарном диабете; снижается при гиперкортицизме. В слюне повышается при ревматоидном артрите, муковисцидозе; снижается при сердечной недостаточности и гиперфункции надпочечников. В кале повышается при поносе. Внимание: при интерпретации результатов определения натрия в плазме, эритроцитах крови и моче следует учитывать ритмичность суточных колебаний концентрации этого электролита в биологических жидкостях. У здоровых людей в возрасте 20-27 лет экскреция натрия с мочой минимальна в ночные часы. В зрелом, среднем и пожилом возрасте (36-76 лет) колебания уровня натрия в плазме не существенны. Отмечено снижение концентрации натрия в эритроцитах в дневные и вечерние часы по сравнению с таковой в ночное и утреннее время. Концентрация натрия в сыворотке или плазме является основой для вычисления осмолярности плазмы по формуле: Осмолярность =2*(Na) + (глюкоза) +(мочевина), м моль/л. В физиологических условиях рассчитанная осмолярность плазмы сравнима с измеренной осмометром. Разница между измеренной и рассчитанной величиной (анионный пробел) составляет до 10 ммоль/л. Анионный пробел будет повышен, когда в плазме присутствуют осмоактивные вещества, при лечении манитоллом,декстранами и др., при отравлении этанолом, этиленгликолем, содержание воды в плазме снижено при значительной гиперлипидемии, гиперпротеинемии. Хлориды Хлорид-ион – основной внеклеточный анион, компенсирующий влияние катионов, в первую очередь натрия, во внеклеточной жидкости. В физиологических условиях изменения концентрации хлора вторичны к изменениям других электролитов и направлены в первую очередь на создание электронейтральности среды: если повышается содержание бикарбоната, то уменьшается хлор. Хлор находится в организме в основном в ионизированной форме: в виде солей натрия, калия, кальция и магния. Основным депо хлора является кожа, способная откладывать в себе до 30-60% введенного хлора. Хлориды из организма выводятся в основном с мочой (90%), а также с потом и калом. Выведение хлоридов с мочой варьирует в зависимости от количества хлора, поступающего с пищей, а на диете, бедной хлором, значительно уменьшается. Это обеспечивает поддержание нормального уровня хлора в депо крови. Функции хлоридов: -участвуют в поддержании кислотно-щелочного равновесия и баланса воды, -в регуляции осмолярности жидкостей организма. В норме содержание хлоридов составляет: Сыворотка (плазма) 95 – 110 ммоль/л Спинномозговая жидкость 115 – 130 ммоль/л Пот – 0 – 35 ммоль/л Слюна 5 – 20 ммоль/л Кал – 2 ммоль/сутки Дуоденальное содержимое 60 – 130 ммоль/л Суточная моча – 150 – 250 ммоль/сутки Уровень в моче у новорождённых ниже, чем у взрослых и равен 2 – 10 ммоль/сутки. Материал для исследования: Сыворотка (плазма) – венозную кровь берут в пробирку с гепарином (соль лития или аммония). Суточная моча Определение концентрации хлоридов в биологических жидкостях колориметрическим методом без депротеинизации. Принцип метода: В присутствие ионов хлора в кислой среде тиоционат ртути образует тиоционат – ионы, образующие окрашенный комплекс с Fe+3.. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации хлорид - ионов в пробе. Исследуемый материал: негемолизированная сыворотка или гепаринизированная плазма крови. Моча, разведенная в 2 раза дистиллир. водой (результат анализа умножить на 2). Состав набора: 1. Монореагент: Hg(SCN ) 2 …………2ммоль/л Fe(NO3)3 ...................30ммоль/л HNO3 ……………….4ммоль/л 2. Калибратор ( хлорид – ионы)…. (100ммоль\л) Подготовка реагентов к процедуре анализа и их стабильность: реагенты готовы к работе. Реагенты стабильны не менее 1 года при 18-25 °С в темноте. Плотно закрывать флаконы после каждого использования. Схема анализа. Моно Калиб Н2О д реагент ратор опыт 0,01 2,0 --- 20-25° Λ= 460- ---- --- 2,0 0,01 ---- контроль --- 2,0 --- 0,01 Перемешивание Стандарт ФЭК 490нм 5' расчет норма 97-108 По S формуле Ход работы Ммоль/л К=5мм Дети : Против Контрол я 95-112 Ммоль/л Расчет концентрации хлоридов в исследуемом материале проводят по формуле: В сыворотке (плазме ) крови: С = Еоп/Ест * 100(ммоль\л) , В суточной моче: С = Еоп/Екал * 100*2*К (ммоль\л), Где: Еоп-экстинкция опытной пробы, Екал-экстинкция калибровочной пробы 2-фактор разведения мочи, К-количество суточной мочи 100ммоль\л – концентрация хлоридов в калибраторе. Внимание! Основным источником ошибок являются загрязнение посуды и кювет. Рекомендуется использовать одноразовую посуду. Клинико-диагностическое значение: - Концентрация хлоридов в поте и слюне резко возрастает при муковисцидозе. Повышение концентрации хлоридов в крови (сыворотке), свыше 110 ммоль/л – гиперхлоридемия (гиперхлоремия). Причины: -Обезвоживание, дегидратации -Лечение минералокортикоидами, стероидами -Избыточное внекишечное введение NaCl; почки удаляют излишек натрия, но полностью не могут устранить излишек хлора -Гипофункция коры надпочечников -Первичный гиперпаратиреоз -Несахарный диабет -Нарушение мочеотделения при заболеваниях почек или закупорке мочеточников: нефрит, нефротический синдром, нефросклероз, острая почечная недостаточность -Респираторный алкалоз -Гиперхлоремический ацидоз -Артериальная гипертензия -Сердечная недостаточность -Травма головы (повреждение гипоталамуса) Снижение концентрации хлоридов в крови (сыворотке), ниже 95 ммоль/л – гипохлоридемия (гипохлоремия). Причины: -Избыточное потоотделение -Длительная рвота -Профузный понос -Желудочная гиперсекреция (при содержании хлора в желудочном секрете свыше 140 мэкв/л и объёме секреции свыше 2 л происходит потеря хлора из организма) -Потеря содержимого тонкой кишки через фистулу -Метаболический и респираторный ацидоз -Ожоговая болезнь -Формирование отёков и экссудатов -Синдром Иценко-Кушинга -Диабетический кетоацидоз (накапливающиеся сильные органические кислоты замещают ионы хлора и бикарбоната) -Лактоацидоз -Почечная недостаточность (накапливающиеся анионы фосфатов и сульфатов вытесняют анион хлора) -Заболевания надпочечников (надпочечники продуцируют гормоны, которые контролируют баланс жидкости и электролитов). Оба гипо- и гиперадренализм сопряжены со снижением концентрации хлора в сыворотке). -Инфекционные заболевания (токсическая дифтерия, колиты) -Приём диуретиков Около 90% хлоридов, поступающих с пищей, выводится с мочой. Поэтому их мало в моче грудных детей, а увеличивается количество при переходе к смешанному кормлению. Повышенное выделение хлоридов с мочой – гиперхлоридурия (гиперхлорурия) -Гиперхлоремия Рассасывание отёков, экссудатов, транссудатов -Понижение обратного всасывания в канальцах почек -Гипофункция надпочечников -Тяжёлые поражения паренхимы почек -Болезнь Аддисона -Применение диуретиков Снижение выделения хлоридов с мочой – гипохлоридурия (гипохлорурия) -Гипохлоремические состояния -Острые лихорадочные заболевания (потеря хлоридов с потом) -Рвота и понос -При отёках, экссудатах, транссудатах -Бронхопневмония и пневмония -Болезнь Иценко-Кушинга -Уменьшение количества клубочкового фильтрата (хронический нефрит) -Увеличение обратного всасывания в канальцах почек: -Гиперфункция надпочечников (гиперальдостеронизм, лечение кортикостероидами) и передней доли гипофиза -Гипофункция задней доли гипофиза Кальций Кальций – это внеклеточный катион, играющий важную роль в жизнедеятельности организма. Функции кальция: -участие в свёртывании крови (важный фактор свёртывания крови), -мышечном сокращении, -проведении нервного импульса (внутриклеточный посредник ряда гормонов), секреторной активности железистый клеток; -влияет на проницаемость биологических мембран (обеспечивает целостность мембран), -выполняет опорную функцию, является основным компонентом костного скелета, -является активатором ряда ферментов и гормонов. Ежедневно с пищей должно поступать 0,8–1,1 г кальция. Основная часть кальция выводится из организма с калом (500 – 800 мг/сутки) и мочой (100 – 300 мг/сутки). Содержание кальция в организме взрослого человека составляет 1-1,5 кг (или 20 г/кг массы тела), а у новорождённого – 9 г/кг; 90-99% кальция содержится в костях и хрящевой тканях, где вместе с фосфатами образуют кристаллы гидроксилапатита (неорганический структурный компонент скелета), а остальная часть – внутри клеток мягких тканей и во внеклеточной жидкости. Кальций в плазме находится в ионизированном виде (около 50%) и в связанном с альбумином (около 5%). В повышенном количестве кальция нуждаются: Дети (до 1,4 г в сутки) Беременные женщины (до 1,5 г в сутки) Кормящие матери (1,8 – 2,0 г в сутки) Уровень кальция в плазме крови является результатом равновесия процессов всасывания кальция в кишечнике, обмена в костях, реабсорбции и выведения в почках. Эти процессы контролируются паратиреоидным, кальцитонином и гормонально активной формой витамина Д (кальцитриол). Они обеспечивают стабильность кальция в плазме. Физиологические колебания у отдельных индивидуумов не превышают 3% от общего его содержания. В случае изменения концентрации связывающих кальций факторов (чаще всего альбумина) и рН изменяется также уровень общего кальция, независимо от ионизированного кальция. Регуляция кальция: 1. Состояние костной ткани-все факторы, ускоряющие рассасывание костей, увеличивают содержание кальция в крови за счет деминерализации скелета. Все факторы, способствующие образованию костной ткани, уменьшают его за счет минерализации. 2. Витамин Д3 и его аналоги способствуют всасыванию кальция в кишечнике и препятствуют выведению с мочой. 3. Паратгормон стимулирует мобилизацию кальция из костей, на уровне почек усиливает реабсорбцию кальция и повышает содержание кальция в плазме. 4. Кальцитонин способствует минерализации костей, снижает содержание ионов кальция в плазме. Скорость секреции кальцитонина зависит от уровня эстрогенов. При недостатке эстрогенов секреция кальцитонина снижается. Это вызывает ускорение мобилизации кальция из костной ткани, что приводит к развитию остеопороза. 5. Нарушения КОС. Ацидоз приводит к рассасыванию костей (содержание кальция возрастает), алкалоз – к их минерализации (уменьшается концентрация ионов кальция в плазме) В норме содержание кальция составляет: в плазме крови составляет 2 – 2,8 ммоль/л. кальций ионизированный (кровь) – 0,98 – 1,15 ммоль/л. в суточной моче – 0,1 – 0,3 г/сутки. Материал для исследования: Сыворотка и гепаринизированная плазма (другие антикоагулянты: цитрат, оксалат, ЭДТА – непригодны), свободные от следов гемолиза (незначительный гемолиз может вызвать повышение результатов). Кровь (для определения ионизированного кальция) – артериальную или венозную кровь следует собрать шприцем с гепарином (соль лития или аммония). Не допускать контакта пробы с воздухом. Суточная моча – точное определение содержания кальция в моче может проводиться только после полного растворения осадка солей мочи перед исследованием, для чего к суточному объёму мочи добавляют 15 мл концентрированной соляной кислоты либо нагревают мочу при 56°С в течение 15 мин, что способствует растворению осадка. Примечание: При взятии крови лучше, если пациент будет находиться в положении лёжа; брать кровь следует без жгута (если это возможно). Применение жгута и вертикальное положение пациента могут повысить содержание кальция на 0,15 ммоль/л. Сыворотку следует отделять от сгустка как можно быстрее, поскольку эритроциты могут адсорбировать кальций, причём сыворотка с содержанием заметного осадка не должна анализироваться. Значительная липемия может вызвать ложнозавышенные результаты. Стеклянную лабораторную посуду для удаления следов кальция нужно прополаскивать раствором соляной кислоты и дистиллированной водой. Можно применять пластмассовые пробирки. Определение концентрации кальция в сыворотке и плазме унифицированным колориметрическим методом. Принцип метода: Кальций в щелочной среде образует окрашенный комплекс с Окрезолфталеин комплексоном. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации кальция в пробе. Исследуемый материал: свежая сыворотка или гепаринизированная плазма крови. Не использовать в качестве антикоагулянтов оксалат натрия и ЭДТА Состав набора: 1. Буферный р-р, рН -10,7 (боратный буфер, глицин) 2. Хромоген ( О-крезолфталеин комплексон. 8-гидроксихинолин) 3. Калибратор (р-р кальция) - 2,5 ммоль/л. Подготовка реагентов к процедуре анализа и их стабильность: все реагенты полностью готовы к употреблению и стабильны в течение 6 месяцев при комнатной температуре в плотно закрытой посуде в темноте. СХЕМА АНАЛИЗА. --- 1,0 1,0 --- Калибр --проба ---- 1,0 1,0 0,05 Конт 0,05 1,0 1,0 20- ФЭК 23° ---- роль Перемешиавание --- Калибра тор Λ=540590нм К-5мм 5' Против Контроля расч ет По формуле №2 0,05 Реаген т ме ва №1 опыт Н2О дис ши Реаген т S ние Ход работы норма 2,022,60ммоль/л 8,1-10,4мг% Формула расчета : Сса = Еоп/Екал. *2,5 ммоль/л Окраска стабильна не менее часа. Если концентрация превышает 3,75 ммоль/л развести образец бидистиллированной водой в 2 раза, повторить анализ, результат умножить на 2. Клинико-диагностическое значение: Повышение уровня кальция в крови – гиперкальциемия встречается при: -Гипертиреозе, гиперфункции паращитовидных желёз, -Опухолях паращитовидных желёз, -Переломах костей, -Метастазах злокачественных новообразований в кости, множественных миеломах, лимфомах, лимфосаркомах, -Гипервитаминозе Д, -Передозировке кальция, -Желтухе, -Перитоните, -Гангрене (задержка кальция в повреждённых тканях). Понижение уровня кальция в крови – гипокальциемия встречается при: -Гипопаратиреозе (гипофункции паращитовидных желёз), -Дефиците витамина Д (рахит, остеомаляция), -Беременности, Экземе, экссудативных диатезах, -Лечении кортизоном, -Гипонатриемии, -Почечной недостаточности, -Гипопротеинемии (гипоальбуминемия), -Синдроме мальабсорбции, -Тяжёлом течение панкреатита. Выделение кальция с мочой колеблется в значительных пределах и зависит не только от содержания кальция в пище, но и от его усвоения организмом. Наиболее точные данные получают после 6-дневной диеты с содержанием в суточном рационе 100 мг кальция и 400 мг фосфора. При этих условиях выделение кальция с мочой не должно превышать 0,3 г/сутки. Повышенное выделение кальция с мочой – гиперкальциурия отмечается при: -Значительном увеличении его содержания в пище, -Передозировке витамина Д, -Распаде костной ткани, костные опухоли. -Остеопороз, -Гиперпаратиреозе, -Миеломной болезни. Пониженное выделение кальция с мочой – гипокальциурия отмечается при: -Нефрите, -Гипопаратиреозе и гипотиреозе, -Рахите, остеомаляции. -Гиперкальцемия/гипокальцеурия семейная Внимание! При интерпретации результатов определения общего кальция следует учесть концентрацию альбумина в сыворотке, рН крови и концентрацию фосфатов, цитрата и других связывающих кальций анионов. Если концентрация альбумина (г/л) в сыворотке отличается от нормы, показатель концентрации общего кальция (ммоль/) следует скорректировать в зависимости от концентрации альбумина по формуле: Са (скорректир) = Са (измеренный)+0,02 х (40 - альбумин) Если рН крови отличается от нормальных значений, показатель концентрации общего кальция (ммоль/л) следует скорректировать с измеренным рН крови по формуле: Са (скорректир)= Са (измеренный) + 0,05 х (7,40 – рН актуальн). Железо Железо – важнейший микроэлемент, принимающий участие в дыхании, кроветворении, иммунобиологических и окислительно-восстановительных реакциях, входит в состав более 100 ферментов и является незаменимой составной частью гемоглобина и миогемоглобина. В организме взрослого человека содержится около 4 г, из которых около 2,5 г составляет железо гемоглобина. Основная часть железа находится в связанной с белками форме, а другая часть железа депонируется в печени, селезёнке, костном мозге. Связывание может быть функционально активным, как это происходит в случае гемоглобина и железосодержащих ферментов (цитохромы и каталаза), или в виде неактивных транспортных форм. Железо сыворотки крови находится в связанном состоянии, так как образует комплексы с β-1-глобулинами и трансферрином. Небольшая оставшаяся часть катиона связана электростатическими силами взаимодействия с аминокислотами. Суточная потребность человека в железе составляет 10–30 мг с учётом того, что всасывание железа из продуктов питания составляет около 10%. Железо всасывается из пищи в кишечник в виде Fe2+, причём из животной пищи лучше, чем из растительной в присутствии аскорбиновой кислоты в количестве 1 мг в сутки. В слизистой кишечника соединяется с белком апоферритином, превращая его в ферритин, который переносит железо в плазму крови. Транспорт железа в виде Fe3+ осуществляет белок плазмы крови трансферрин. Печень способна депонировать около 700 мг железа в основном в виде ферритина и небольшого количества гемосидерина. Трансферрин переносит железо в ткани, где оно используется при синтезе железосодержащих белков (гемоглобина, миоглобина, каталазы, цитохромов, железосерных белков, пероксидазы). Таким образом, концентрация железа в сыворотке зависит от резорбции в желудочнокишечном тракте, накопления в кишечнике, селезёнке и костном мозге, от синтеза и распада гемоглобина и его потери организмом. Средние показатели железа ниже у женщин, чем у мужчин, примерно на 10 мг/дл, но у тех и у других с возрастом показатель железа падает. Концентрация железа имеет суточный ритм, а у женщин – связь с менструальным циклом. При беременности содержание железа в организме уменьшается, особенно во второй половине беременности. Определение общей и ненасыщенной способности сыворотки крови Трансферрин – это металл-связывающий транспортный белок, является β-1глобулином. Трансферрин синтезируется в клетках печени и в небольших количествах в лимфоидной ткани, молочной железе, тестикулах и яичниках. Он состоит из одной полипептидной цепи и двух боковых углеводородных участков. Нормальная концентрация в сыворотке составляет примерно 2-4 г/л, что соответствует приблизительно 4% общего белка плазмы. Помимо сыворотки крови в физиологических условиях трансферрин определяется в лимфе и тканевой жидкости, а при патологических условиях также в моче и выпотной жидкости. В сосудистом русле находится примерно половина трансферрина, вторая половина находится экстраваскулярно (вне сосудов). Время полураспада трансферрина в сыворотке составляет 8-10 дней. Функции трансферрина: транспортировка и препятствие накопления в плазме (сыворотке) крови свободных токсических ионов железа. В норме трансферрин насыщен железом примерно на 30% от максимальной способности к насыщению. Дополнительное количество железа, которое может связываться с трансферрином, составляет «насыщенную железосвязывающую способность» сыворотки крови (НЖСС). Максимальное количество железа, которое может присоединить трансферрин, обозначается как «Общая железосвязывающая способность» сыворотки крови (ОЖСС). Она складывается из связанной, насыщенной железом части (о которой дает представление показатель «сывороточное железо») и свободной, латентной, или ненасыщенной железосвязывающей способности сыворотки. Полная (общая) способность связывать железо является суммой показателей, отражающих содержание железа в сыворотке и НЖСС: концентрация железа в сыворотке + НЖСС= ОЖСС Показатель ОЖСС дает представление об уровне трансферрина в сыворотке (плазме) крови. Отношение связанного в трансферрине железа (сывороточное железо) к показателю общей железосвязывающей способности (ОЖСС) называется коэффициентом (процентом) насыщения трансферрина железом (К, или ПНЖТ). К (%) = сывороточное железо/ ОЖСС х 100 В норме: Концентрация ОЖСС (общая железосвязывающая способность) в сыворотке крови 45 – 72 мкмоль/л. Ненасыщенная железосвязывающая способность сыворотки крови (НЖСС) 26,9 – 41,2 мкмоль/л. Коэффициент насыщения железом трансферрина – около 30% (20 – 55%). Значение определения ферритина сыворотки крови. Запасы железа в организме сосредоточены в депонирующих органах, где оно накапливается в виде железосодержащего белка ферритина, а также в составе гемосидерина. Ферритин представляет собой универсальный депонирующий железо белок, присутствующий практически во всех клетках и тканях организма. Уровень ферритина сыворотки крови адекватно и достаточно полно отражает состояние запасного железа в организме человека, поскольку содержание сывороточного ферритина является отражением активной секреции ферритина из печеночных клеток. В норме концентрация ферритина в плазме (сыворотки) крови составляет: у мужчин – 15 – 200 мкг/л, у женщин – 12 – 150 мкг/л. Если обнаруживаемый в плазме (сыворотке) уровень ферритина меньше 12 мкг/л, это говорит о железодефицитном состоянии. Концентрация ферритина 1 мкг/л соответствует содержанию 8 мг резервного (запасного) железа в организме. Показатель сывороточного ферритина – важный диагностический тест при различных заболеваниях, связанных с нарушением метаболизма железа, железодефицитными состояниями. Вместе с тем при отдельных формах патологии ферритин выступает как белок острой фазы. Определение концентрации железа в сыворотке и плазме колориметрическим методом без депротеинизации. Принцип метода: В кислой среде белковые комплексы, связывающие железо диссоциируют и железо восстанавливается до Fe++. Ион двухвалентного железа связывается с хромогеном, образуя окрашенный комплекс, концентрация которого пропорциональна концентрации железа в пробе. Исследуемый материал: свежая сыворотка или плазма крови. Состав набора: 1. Монореагент 2. Стандарт -30 мкмоль/л Подготовка реагентов к процедуре анализа и их стабильность: все реагенты полностью готовы к употреблению и стабильны в течение 12 месяцев при комнатной температуре в плотно закрытой посуде в темноте. Процедура анализа. --- ----- 2,00 Калибр проба --- ---- 0,1 2,00 Конт --- 2,00 Перемешиавание ----- ФЭК Λ=590нм К-1 см 5' Против Контроля расч ет По формуле 0,1 20-23° ме опыт 0,1 Станд Моно арт реагент ши Н2О бидис ва S ние Ход работы норма Муж 9,5-30 мкмоль/л жен 8,8-27 мкмоль/л роль Формула расчета : Сса = Еоп/Ект. * Е ст Внимание! Тест очень чувствительный. Используйте только бидистиллированную воду. Недостаточное чистая посуда, тщательно мойте посуду хромовой смесью. Рекомендуется использовать одноразовую пластиковую посуду. Клинико-диагностическое значение содержания железа в сыворотке крови: Повышение концентрации железа в сыворотке – гиперсидеремия: Чрезмерная резорбция железа: избыточное внутривенное и внутримышечное введение препаратов железа, частые переливания крови, острое отравление препаратами железа; наследственные и приобретённые гематохроматозы (повышенное всасывание и накопление железа в организме); Гемолитические анемии; Гипопластические и апластические анемии; В12- и фолиеводефицитные анемии; Пернициозоподобные анемии; Усиленный гемолиз эритроцитов; Болезни печени (вирусные гепатиты, острый гепатит, острый некроз печени); Хронический холецистит; Полицитемия (заболевания, сопровождающееся повышенным содержанием эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, гемоглобина); Применение гормональных контрацептивов, эстрогенов. Понижение концентрации железа в сыворотке – гипосидеремия: Острые инфекционные заболевания; Рак печени; Периоды активного эритропоэза (начальная фаза ремиссии при злокачественной анемии); Гемосидероз внутренних органов; Миома матки; Дефицит витамина С и В2; Железодефицитные анемии; Болезни почек (хроническая почечная недостаточность); Недостаточность содержания железа в пище. Железо в моче появляется при лечении препаратами железа. Клинико-диагностическое значение ОЖСС в сыворотке крови: ОЖСС является показателем концентрации в сыворотке крови трансферрина, транспортного белка, переносящего железо. В обычных условиях около 35% трансферрина связано с железом. Физиологические изменения ОЖСС: Нормально протекающая беременность (ОЖСС увеличивается до 450 мкг/дл (80,55 мкмоль/л), одновременно снижается содержание железа); Здоровые дети (сразу после рождения ОЖСС снижается, затем постепенно повышается до 400 мкг/дл (71,6 мкмоль/л) на второй год жизни). Повышение концентрации ОЖСС в сыворотке: Повышенная концентрация железа в сыворотке: - повреждение печени (острый гепатит, цирроз) - чрезмерное получение железа - слишком долгое лечение препаратами железа - частые переливания крови - гематохроматоз Пониженная концентрация железа в сыворотке: - нормально протекающая беременность - острая и хроническая потеря крови - иногда при железодефецитных анемиях Понижение концентрации ОЖСС в сыворотке: Острые и хронические инфекции; В12- и фолиеводефицитная анемия (состояния обострения), гемолитическая анемия; Уремия; Болезни, связанные с новообразованиями; Нефротический синдром; Ревматическое воспаление суставов Клинико-диагностическое значение железосвязывающих белков в сыворотке крови: Повышение показателя насыщения трансферрина отмечается при избытке железа (отравление железом, гемолитические заболевания, талассемия, гемохроматоз, дефицит пиридоксина, нефроз, гепатит). Снижение показателя насыщения трансферрина характерно для дефицита железа, хронических инфекций, злокачественных новообразований, поздних сроков беременности. Клинико-диагностическое значение ферритина: Снижение содержания ферринита сыворотки отмечается при: Железодефицитных состояниях и заболеваниях, связанных с нарушением метаболизма железа; Анемиях, сопровождающих беременность. Повышение содержания ферритина сыворотки наблюдается: Вследствие перераспределения фондов железа при: заболеваниях, связанных с нарушением кровообращения (инсультах, инфаркте миокарда); острых и хронических заболеваниях, связанных с поражением печеночных клеток (гепатитах, циррозах различной этиологии, алкогольных поражениях печени); системной красной волчанке, ревматоидном полиартрите; онкологических заболеваниях (рак молочной железы, лимфогранулематоз, острый миелобластный и лимфобластный лейкозы). Вследствие воспалительных и некробиотических процессов: уровень ферритина как белка острой фазы увеличивается при легочных инфекциях, хронических инфекциях мочевых путей, остеомиелите, ожогах. Примечание: Для получения надёжных результатов исследования следует иметь в виду, что приём препаратов, содержащих железо, влияет на его концентрацию в течение 2-4 недель после применения. Больной не должен принимать препараты железа, по крайней мере, в течение 5 суток перед взятием крови на анализ. В противном случае могут быть получены завышенные результаты. Уровень железа в сыворотке имеет выраженные суточные колебания: в послеобеденный период ниже, чем утром, приблизительно на 7 мкмоль/л. Определение должно выполняться в свежей, свободной от гемолиза сыворотке крови. Сыворотку следует отделять немедленно после образования сгустка: во избежание перехода в неё гемоглобина. Посуда для анализа железа должна быть совершенно чистой. После обычного мытья рекомендуется поместить стеклянную посуду на ночь в 20г/л раствор ЭДТА; затем посуда тщательно споласкивается бидистиллированной или деионизованной водой и высушивается. Посуду для определения рекомендуется также промывать в 5 моль/л раствором НCl, хранить в 1моль/л растворе соляной кислоты и перед использованием тщательно прополаскивать дистиллированной водой. Фосфор неорганический Фосфор (Р) – главный анион внутриклеточный жидкости. Соединения фосфора присутствуют в каждой клетке и участвуют практически во всех физиологических химических реакциях. Фосфор поступает вместе с пищей и находится в организме в виде неорганических фосфатов, в комплексе с липидами и нуклеотидами. В цельной крови большая часть фосфора находится в эритроцитах в виде органического фосфата, в плазме крови присутствует липидный фосфор, следы эфиров фосфорной кислоты и неорганический фосфат, 50% общего фосфора находится в костях, до 20 % - во внеклеточной жидкости. Фосфаты играют важную роль в обменных процессах. Неорганический фосфор сыворотки представляет собой один из компонентов кислоторастворимой фракции фосфора, включающий в себя также пирофосфаты (АТФ, АДФ и др.), гексозо -, глицерофосфаты и т.д. Кислоторастворимый фосфор вместе с кислотонерастворимым (фосфор нуклепротеинов и липидов) образует так называемый общий фосфор сыворотки крови. При определении содержания липидного и нуклеопротеинового фосфора органический фосфор путём минерализации переводят в неорганический. Функции фосфора: участвует в образование важнейших органических соединений (нуклеотидов, нуклеиновых кислот (РНК, ДНК), фосфолипидов, коферментных форм витаминов и др.); принимает участие в углеводном, липидном, белковом, вводно-солевом обменах; участвует в регуляции активности биомолекул путём фосфорилирования; образование фосфатной буферной системы крови; участвует в процессе костеобразования (формирование скелета); влияет на возбудимость нервной системы. Ежедневно с пищей должно поступать до 1,5 г фосфатов. Фосфор содержится в следующих продуктах питания: в рыбе, мясе, птице, неочищенных зернах, яйцах, орехах, семечках. Для правильного функционирования фосфора важно достаточное количество кальция и витамина D в организме. Соотношение Са (кальция) и фосфора (Р) должно быть два к одному. Переизбыток железа, алюминия и магния делает влияние фосфора неэффективным. Концентрация неорганического фосфора в крови зависит от всасывания его в кишечнике (витамин Д зависимый процесс), обмена в костях и почечного выделения, а также от функции паращитовидных желёз, щитовидных желёз. Метаболизм фосфата контролируется паратгормоном, кальцитонином (оказывают гипофосфатемический эффект) и кальцитриолом (гиперфосфатемическое действие): 1.Витамин Д3 способствует всасыванию фосфатов в кишечнике и препятствует выделению с мочой. 2. Паратгормон (гормон-полипептид паращитовидной железы) стимулирует мобилизацию фосфатов из костей, на уровне почек уменьшает реабсорбцию фосфатов, и они выводятся из организма (уменьшается уровень фосфатов в крови). 3.Кальцитриол (производное ХС) действует аналогично паратгормону: вызывает деминерализацию кости, увеличивает содержание фосфатов в крови. 4. Кальцитонин (пептид, вырабатывается клетками щитовидной и паращитовидной железы) - антагонист паратгормона, способствует минерализации кости, увеличивает экскрецию фосфатов с мочой, уменьшает содержание фосфатов в крови. Материал для исследования: Для диагностики нарушений обмена неорганического фосфора в организме одновременно определяют его содержание в сыворотке крови и моче. Сыворотка: после взятия крови сразу отделить сыворотку, чтобы предупредить освобождение фосфата из эритроцитов. Не допускать гемолиза. Неорганический фосфор стабилен в сыворотке крови в течение 1 недели при температуре 2-8ºС, 3 недели – в замороженном состоянии. Определение может быть выполнено в суточной моче. Нельзя применять плазму, так как большинство антикоагулянтов может привести к ложному завышению результатов. Суточная моча: предварительно в посуду для сбора мочи следует поместить 15 г борной кислоты (в качестве консерванта). После окончания сбора мочу перемешивают и измеряют её объём. При рН 6,0 пробу подкисляют соляной кислотой (10 мл, 6 ммоль/л HCl на суточную порцию мочи) с тем, чтобы предотвратить выпадение фосфата кальция. Перед определением мочу разбавляют дистиллированной водой в 10 раз. Примечание: Для получения более правильных результатов при мытье стеклянной посуды не следует употреблять фосфатсодержащие моющие средства. в летний период содержание неорганического фосфора в крови несколько выше, чем зимой Методы определения фосфора : прямы УФ-методы без депротеинизации. Неорганический фосфор в кислой среде взаимодействует с молибдатом аммония образованием фосфомолибденового комплекса.измерения проводят по конечной точке, концентрацию фосфора рассчитывают по калибратору. Колориметричекий метод с восстановителем и депротеинизацией Концентрацию фосфора определяют в супернатанте после осаждения белков. В кислой среде неорганический фосфор образует с молибденовой кислотой фосфорномолибденовую кислоту, которая восстанавливается эйконогеном (или аскорбиновой кислотой) до синего фосфорномолибденового комплекса («фосфорномолибденовая синь»). Измерения проводят по конечной точке, концентрацию фосфора рассчитывают по калибратору. Определение концентрации неорганического фосфора в сыворотке крови молибдатным методом. Принцип метода: неорганический фосфор при взаимодействии с молибдатом аммония образует в растворе серной кислоты фосфомолибдатный комплекс. Концентрация фосфора в пробе пропорциональна оптической плотности, измеряемой при 340нм. Исследуемый материал: негемолизированная, нелипемичная сыворотка крови. Состав набора: реагент1. Серная кислота -380ммоль/л; натрий хлористый -150ммоль/л; молибдат аммония -1,9ммошль/л. Реагент2. Детергент. Реагент3. (калибратор). Фосфат-1,615ммоль/л (5мг/100мл) Приготовление рабочего реагента: смешать необходимые количества реагента 1 и реагента 2 в соотношении 50+1. Рабочий реагент стабилен 14 дней при температуре хранения 18-25С в плотно закрытой посуде в темноте. Проведение исследования: Фотометрирование проводят при длине волны 340нм в кювете с длиной оптического пути 10мм против контрольной пробы. Температура инкубации 18-25С. Опытная проба,мл Калибровочная Контрольная проба проба (холостая),мл (стандарт),мл Рабочий реагент 2,0 2,0 2,0 образец 0,02 -- -- калибратор -- 0,02 -- Дистиллированная вода --- --- 0,02 Пробы тщательно перемешать и инкубировать 5 мин при 18-25С. Оптическая плотность стабильна в течение суток. Расчеты. Расчет концентрации фосфора (С): С=Аоп./Аст*1,615(Ммоль/л) Аоп - адсорбция опытной пробы; Аст - адсорбция стандартной (калибровочной) пробы; 1,615 ммоль/л – концентрация фосфора в калибраторе. Примечания: 1. Основным источником ошибок является загрязнение посуды и кювет. Рекомендуется использование одноразовой пластиковой посуды; 2. Стеклянную посуду необходимо мыть любой кислотой, кроме фосфорной, и тщательно ополаскивать бидистиллированной водой или деионизированной водой . Клинико-диагностическое значение: Повышение уровня неорганического в крови – гиперфосфатемия встречается при: -Гипопаратиреоз, -Акромегалии, -Гипервитаминозе Д, -Сахарном диабете, диабетическом кетозе, -Болезни Ищенко-Кушинга, -Болезнь Педжета, -Токсикозы беременных -Костных заболеваниях (остеолизисе (метастазы в кости), заживление переломов), -Заболеваниях почек (нефрит, пиелонефрит, почечная недостаточность). Понижение уровня неорганического в крови – гипофосфатемия встречается при: -Гиперпаратириозе, гиперинсулинизме, -Остеомаляции, -Остром алкоголизме, -Рахите, дефиците витамина Д, -Гипокалиемии, -Неполноценном питании. У практически здоровых людей (в норме) выделяются фосфаты с мочой 2,5 г/сутки, из них фосфора – 0,7 – 1,6 г/сутки. При рахите количество экскретируемого с мочой неорганического фосфата увеличивается в 2-10 раз по сравнению с нормой. -Повышение уровня неорганического в суточной моче – гиперфосфатурия встречается при: при распаде клеток у больных лейкозами, гипертиреозом, диабетом, менингитом и некоторыми другими заболеваниями. -Понижение уровня неорганического в суточной моче – гипофосфатурия встречается при: туберкулезе, лихорадочных состояниях, острой желтой атрофии печени, недостаточной функции почек, акромегалии. Внимание! Определение концентрации фосфора в крови проводят параллельно с определением кальция, так как их обмен в организме тесно связан.