Методика определения витамина D в сыворотке крови человека

Реагенты и стандарты:
Ацетонитрил (Sigma-Aldrich)
Метанол (Sigma-Aldrich)
Стандартный лиофилизированный препарат витамина D (98% и более чистоты) (Sigma-Aldrich,
ДИА-М)
ПЭГ
Приборы и компоненты:
Хроматографическая колонка с размером частиц 5мкм (напр. Hector-M C18 4,6x150 mm)
Хроматограф с UV-датчиком
Метод:
Подвижная фаза состоит из Ацетонитрила (100%). Процедура проводится в режиме
изократического элюирования со скоростью 1 мл/мин. Считывание результатов проводится на
длине волны 264 нм.
Необходимо перед началом работы подготовить из стандартного препарата калибровочные
растворы известных концентраций не менее чем в 3 точках ( 3, 40, 90 нг/мл) (чем больше точек
тем лучше)
Подготовка проб:
400 мкл опытной сыворотки смешиваются с 400 мкл преципитатора в эппендорфе 1500 мкл, затем
в вортекс на 10 сек и следом в центрифугу на 5 минут при 10’000 RCF
(RCF=11,18*r*((RPM/1000)^2)) – если объем проб слишком велик, или мал, можно изменять
пропорционально.
Анализ результатов:
В оригинальной статье для нахождения искомой величины рассчитывали пропорцию исходя из
отношений высоты пиков стандарта и искомой опытной пробы, это быстрее, но более точным
будет рассчет отношений площадей пиков
Важно:
Результаты будут тем точнее, чем уже будут пики. При ширине пиков, превышающей их высоты
результаты считать достоверными нельзя.
Ссылка на оригинальную статью: