В дальнейшем удалось установить, что растворение бактерий вызывается пожирателем бактерий — бактериофагом . Например, бактериофаг дизентерии вызывает полный лизис этих бактерий через 4—6 ч после внесения его в культуру. Действие бактериофага специфично. После проникновения в клетку фаги размножаются очень быстро. Уже через 10 мин после инфицирования в каждой клетке культуры бакте1 й можно найти 2—3 фага, а через 20 мин — уже 100. После лизиса бактериальной клетки фаги выделяются из нее и переходят в зрелую форму. Клеточные фаги могут находиться и в форме профагов. В этом случае они, находясь в скрытом состоянии, не уничтожают клетку, а при помощи своей ДНК, связанной с ДНК клетки, синхронно репродуцируются вместе с клеткой. Если клетки бактерий, содержащие профаги, попадают в неблагоприятные условия (воздействие ультрафиолетовых лучей или ядовитых соединений), профаги могут перейти в вегетативную форму, размножиться и лизировать клетку. Такие культуры бактерий, содержащие профаги, называют лизогенными. обычно применяют мягкие методы их разрушения, включающие использование детергентов и лизоцима, хотя для разрушения некоторых микроорганизмов с прочными клеточными стенками может понадобиться пресс, стеклянные бусы или растирание клеток с абразивами. В некоторых случаях для ослабления клеточных стенок в растущие культуры (например, грамположительных бактерий) добавляют глицин, лизин или треонин. Иногда для тех же целей клетки грамположительных бактерий в растущих культурах обрабатывают антибиотиками, такими как пенициллин С или ме-тициллин, которые подавляют биосинтез пептидогликана клеточной стенки. Чувствительность к лизоциму микобактерий, содержащих высокий процент липидов и полисахаридов в клеточной стенке, может быть усилена их обработкой изопропанолом. При лизисе микроорганизмов, имеющих особенно прочные клеточные стенки, применяют поли(этиленгликоль) с последующим удалением из лизата, так как его присутствие мешает проведению дальнейшей очистки ДН. Методы дезинтеграции микробов 1. Разрушение микробных клеток в механическом дезинтеграторе. В специальные нейлоновые стаканы помещают взвесь клеток (1 млрд/мл), на каждый миллилитр которой добавляют 1 г бус диаметром 0.15 мм, изготовленных из пирекс-стекла. Стакан вращается приводом электродвигателя со скоростью 3000 об/мин. Разрушение клеточных стенок бактерий наступает через 10—20 мин. Разница в экспозиции зависит от вида бактерий. 2. Разрушение клеток в прессах высокого давления. Продавливают замороженную при 30-70°С микробную массу через узкую щель под давлением в 2000 атм. При переходе бактерий из зоны высокого давления пресс-аппарата в зону атмосферного давления их клеточная стенка разрушается. Процедуру повторяют 3—4 раза. Метод является более щадящим, чем встряхивание с бусами. 3. Ультразвуковой метод дезинтеграции. Применяют генераторы, излучающие волны частотой не более 10—20 кГц и мощностью 60—100 вт. Экспозиция озвучивания зависит от вида и формы микробной клетки и колеблется от 10 до 60 минут. 4. Разрушить бактериальную клетку можно и детергентами (лаурилсульфат натрия, дезоксихолат натрия). На 1 мл взвеси бактерий добавляют 1—1,5% детергента. Экспозиция зависит от вида бактерий и подбирается опытным путем. После дезинтеграции бактериальных клеток одним из методов из взвеси выделяют жгутики, капсульное вещество, клеточные стенки, мембраны, цитоплазматические компоненты.
