1-Понятие об инфекции. Условия возникновения инфекционного процесса. Термин инфекция -совокупность физиологических и патологических восстановительно-приспособительных реакций, возникающих в восприимчивом макроорганизме при определенных условиях окружающей внешней среды в результате его взаимодействия с проникшими и размножающимися в нем патогенными или условно-патогенными бактериями, грибами и вирусами и направленных на поддержание постоянства внутренней среды макроорганизма (гомеостаза). Сходный процесс, но вызванный простейшими, гельминтами и насекомыми — представителями царства Animalia, носит название инвазия. В основе инфекционного процесса лежит феномен паразитизма, т. е. такой формы взаимоотношений между двумя организмами разных видов, при которой один из них, называемый паразитом, использует другого, называемого хозяином, в качестве источника питания и как место постоянного или временного обитания, причем оба организма находятся между собой в антагонистических отношениях. В отличие от сапрофитического образа существования паразитизм — это жизнь в живой среде. Неотъемлемым критерием паразитизма является патогенное воздействие паразита на организм хозяина и ответная, защитная реакция со стороны организма хозяина. Паразитизм — свойство, закрепленное за видом и передающееся по наследству. Все возбудители инфекционных и инвазионных болезней человека, животных и растений относятся к паразитам, т. е. способны к паразитической форме существования в живой системе. Возникновение, течение и исход инфекционного процесса определяются тремя группами факторов: 1) количественные и качественные характеристики микроба — возбудителя инфекционного процесса; 2) состояние макроорганизма, степень его восприимчивости к микробу; 3)Экологический фактор- действие физических, химических и биологических факторов окружающей микроб и макроорганизм внешней среды, общность территории обитания разных видов, пищевые связи, плотность и численность популяций, особенности передачи генетической информации, особенности миграции и т. д.Первые 2 фактора непосредственно влияют на развитие инфекционного процесса, т.к имеется прямая зависимость со степенью напряжённости гуморального и клеточного иммунного ответа. Третий, экологический, фактор оказывает на инфекционный процесс опосредованное воздействие, снижая или повышая восприимчивость макроорганизма, либо снижая и повышая инфицирующую дозу и вирулентность возбудителя, активируя механизмы заражения и соответствующие им пути передачи инфекции. 156 2-Особенности инфекционных болезней. Наиболее выраженная форма инфекционного процесса называется инфекционной болезнью, для которой характерно наличие определенного возбудителя, инкубационного периода, специфичных для данной болезни симптомов и иммунного ответа. Возбудителями инфекционных болезней являются вирусы, прионы, бактерии, грибы, простейшие, гельминты. Патогенность —т. е. это генотипический признак, отражающий потенциальную возможность микроорганизма проникать в макроорганизм (инфективность) и размножаться в нем (инвазионность), вызывать комплекс патологических процессов, возникающих при заболевании. Вирулентность-фенотипический признак патогенности-признак штамма. Инкубационный период - время, которое проходит с момента заражения до начала клинических проявлений болезни. Продромальный период - время появления первых клинических симптомов общего характера, неспецифических для данного заболевания, например слабость, быстрая утомляемость, отсутствие аппетита. Период острых проявлений заболевания — разгар болезни. В это время проявляются типичные для данного заболевания симптомы. Период реконвалесценции — период угасания и исчезновения типичных симптомов и клинического выздоровления. Заразность инфекционной болезни — свойство передавать возбудителя от инфицированного к здоровому восприимчивому организму. 5групп: 1-имеющие наибольшую распространенность (более 1000 случаев на 100 000 населения) — грипп, ОРВИ. 2-широко распространенные (более 100 случаев на 100 000 населения) — вирусный гепатит А, шигеллезы, скарлатина, краснуха, ветряная оспа, эпидемический паротит. 3- часто встречающиеся (10—100 случаев на 100 000 населения) — сальмонеллезы без брюшного тифа, гастроэнтероколиты установленной этиологии, вирусный гепатит В, коклюш, корь. 4- сравнительно малораспространенные (1—10 случаев на 100 000 населения) — брюшной тиф, паратифы, иерсиниозы, бруцеллез, менингококковая инфекция, клещевой энцефалит, геморрагические лихорадки 5- редко встречающиеся (менее 1 случая на 100 000 населения) — полиомиелит, лептоспироз, дифтерия, туляремия, риккетсио- зы, малярия, сибирская язва, столбняк, бешенство. Формирование приобретённого специфического естественого непостоянного различной напряжённости иммунитета. 156 3- Условия возникновения инфекционного процесса. Зависит от многих факторов: патогенности и вирулентности микроорганизма, его дозы, способа и пути проникновения, состояния макроорганизма. Факторы вирулентности определяют способность микроорганизмов прикрепляться (адсорбироваться) на клетках (адгезия), размножаться на их поверхности (колонизация), проникать в клетки (пенетрация), противостоять факторам неспецифической резистентности и иммунной защиты организма (агрессия).Начальная стадия-проникновение микроорганизмов во внутреннюю среду организма путем преодоления ими механических барьеров (кожа, слизистые оболочки, бактерицидные и бактериостатические вещества кожи, пищеварительного тракта — ферменты, соляная кислота желудка. Далее-адгезия и колонизация - связанные с прикреплением микроорганизмов на чувствительные клетки с последующим размножением возбудителя на поверхности этих клеток. Уникальность адгезинов – обеспечивает тропность, т.е избирательность связывания микроорганизмов с теми или иными клетками организма, например сродство к эпителию респираторного тракта, кишечному эпителию, нервным клеткам. Далее-пенетрация-проникновение возб. в клетку- некоторые серовары эшерихий, где они, размножаясь, разрушают клетки с образованием эрозий слизистой оболочки кишечника. Агрессия- с помощью клеточных структуркапсулы, клеточной стенки, липополисахаридов грамотрицательных бактерий, которые подавляют миграцию лейкоцитов, препятствуют фагоцитозу. Для подавления иммунитета патогенные микроорганизмы продуцируют ферменты: протеазы, разрушающие иммуноглобулины; коагулазу, свертывающую плазму крови; фибринолизин, растворяющий сгустки фибрина; лецитиназу, растворяющую лецитин в оболочках клеток человека. Выделение экзотоксинов и наличие определённых эндотоксинов возбудителя. 4- Формы инфекции. Стадии развития инфекционной болезни. Формы инфекционного процесса:1- Сепсис — генерализованная форма инфекции. Характеризуется размножением возбудителя в крови вследствие снижения иммунных механизмов. При возникновении вторичных гнойных очагов во внутренних органах развивается септикопиемия, а при массированном поступлении в кровь бактерий и их токсинов может развиваться бактериемический или токсико-септический шок. 2бактериемия и вирусемия- возбудители не размножаются в крови, а кровь выполняет транспортную функцию для микроорганизма (протозойных инфекциях- малярия, трипаносомоз). 3- вызванное одним видом микроорганизмов, называют моноинфекцией.4- двумя или более видами (многие 156 респираторные инфекции, внутрибольничные инфекции) — смешанной (микст-)инфекцией. 5- вторичная инфекция- когда к первоначальной, основной, уже развившейся инфекционной болезни присоединяется другая, вызываемая новым возбудителем (на фоне брюшного тифа может возникнуть пневмония, бактериальная или вирусная). 6- Ре инфекция — повторное заражение тем же возбудителем (после некоторых заболеваний стойкий иммунитет не образуется). 7-Суперинфекция- Если инфицирование тем же возбудителем происходит до выздоровления.8-Рецидив болезни- клинические симптомы болезни появляются вновь без повторного инфицирования — за счет активации оставшихся в макроорганизме возбудителей (возвратный тиф, остеомиелит, сыпной тиф, болезнь Бриля). 9-Манифестная форма- может сопровождаться полным набором характерных для него симптомов. 10инаппарантная- симптомы заболевания могут быть слабо выражены. 11Абортивная- течение с неполным набором симптомов. Стадии: 1инкубационный период — время, которое проходит с момента заражения до начала клинических проявлений болезни. 2- продромальный период — время появления первых клинических симптомов общего характера, неспецифических для данного заболевания. 3- период острых проявлений заболевания — разгар болезни. В это время проявляются типичные для данного заболевания симптомы. 4- период реконвалесценции — период угасания и исчезновения типичных симптомов и клинического выздоровления. 5-Источники инфекционных заболеваний. Механизмы заражения. Пути и факторы передачи инфекции. Источники: биологический или абиологический объект, являющийся естественной средой обитания, размножения патогенных микробов- человек (больной или носитель), животные (больные или носители) и некоторые объекты внешней среды, где при благоприятных условиях (температура, влажность, питательная среда) возможно размножение возбудителей болезни. Человек-антропонозы, животные-зоонозы, сапронозы-патогенный микроорганизм размножается в среде. Механизмы по Л. В. Громашевскому: группа I — болезни с фекально-оральным механизмом передачи (дизентерия, холера и т. д.); группа II — болезни с аэрогенным (респираторным) механизмом передачи (дифтерия, корь и т. д.); группа III — болезни с трансмиссивным механизмом передачи (сыпной тиф, малярия и т. д.);группа IV — болезни с контактным механизмом передачи (сифилис, гонорея и т. д.). Пути передачи инфекции : алиментарный- инфицированной пищей, водой, через грязные руки, предметы обихода.(кишечные инфекции), контактнобытовой(вич,сифилис, гонорея), вертикальный-от матери к плоду, воздушнокапельный и воздушно-пылевой, водный, контактный, половой. Факторы передачи инфекции: Паротит- слюна, слизистые выделения, моча игрушки инфицированного ребенка. Герпес-инфекция- с везикулярной жидкостью, со слюной, половых контактах, через предметы обихода, через плаценту. Натуральная оспа- при соприкосновении с вещами больного, загрязненными слизью, гноем, калом и 156 мочой, содержащими вирус. Гепатиты B C D-контакты с кровью. 6- Свойства возбудителей и их характеристика. 1-ВИЧ-инфекция-свойства и характеристика: ВИЧ-инфекция - инфекционная болезнь, развивающаяся в результате многолетнего персистирования в лимфоцитах, макрофагах и клетках нервной ткани вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) и характеризующаяся медленно прогрессирующим дефектом иммунной системы, который приводит к гибели больного от вторичных поражений (спид или от подострого энцефалита). ВИЧ-инфекция в естественных условиях передается от человека к человеку при половых контактах и от матери ее ребенку(вертикальный) во время беременности, родов и кормления грудью, при переливании крови, при парентеральных манипуляциях. Механизм:контактный. Факторы: Семенная жидкость, кровь, выделения женских половых путей, грудное молоко,ткани, органы инфецированного. Высокий уровень вирусной нагрузки: инкубационный период, период первичной кинической манифестации.Профилатка: АРВ препараты, курс АРТ. 2-Туляремия-свойства и характеристика: острая зоонозная бактериальная природно-очаговая инфекционная болезнь с разнообразными механизмами передачи возбудителя. Характеризуется лихорадкой, интоксикацией, воспалительными изменениями в области входных ворот инфекции, регионарным лимфаденитом. Возбудитель- грамотрицательная коккобактерия Francisella tularensis. На территории россии голарктический подвид F. tularensis subsp. holarctica Ols. Источник:мелкие грызуны( мыши, крысы), зайцы, белки, волки, лисы. Механизмы: 1-Трансмиссивный-комарами, слепнями, клещами), путь передачи - инокуляционный. 2-Контактный механизм. 3- Аспирационный механизм (воздушно-пылевой путь). Путь-Алиментарный( зерно, свёкла). Факторы: Мясо животных(нахождение на нём клещей), инфицированные продукты, овощи, зерно. Экстренная профилактика: рифампицин, доксициклин, тетрациклин. Вакцинация: Живая туяремийная вакцина. 7- Характеристика факторов патогенности. Факторы патогенности определяют способность микроорганизмов прикрепляться (адсорбироваться) на клетках (адгезия), размножаться на их поверхности (колонизация), проникать в клетки (пенетрация), противостоять факторам неспецифической резистентности и иммунной защиты организма (агрессия). Механизм адгезии основан или на физико-химическом взаимодействии между клетками возбудителя и макроорганизма, или на специфическом взаимодействии с адгезинами — химическими группировками, расположенными на поверхности микробных клеток, соответствующих рецепторам клеток хозяина. Все вирусы, а также некоторые виды патогенных бактерий могут пенетрировать (проникать) внутрь клеток макроорганизма. В эпителиальные клетки проникают шигеллы, некоторые серовары эшерихий, где они, размножаясь, разрушают клетки с образованием эрозий слизистой оболочки кишечника. Агрессия осуществляется за счет структур бактериальной клетки: капсулы, клеточной стенки, липополисахаридов грамотрицательных бактерий, которые подавляют миграцию лейкоцитов, препятствуют фагоцитозу. Многие факторы вирулентности бактерий (адгезия, колонизация, пенетрация, инвазия, подавление неспецифической и иммунной защиты макроорганизма) контролируются хромосомными и плазмидными генами. R-плазмиды детерминируют не только множественную резистентность к разным антибиотикам, но и их токсигенность. Токсинообразование 156 детерминируется хромосомными генами или различными плазмидами (F, R, Col и др.), содержащими tox-транспозоны или умеренные фаги. 8- Факторы адгезии и колонизации. Их характеристика. Адгезины многих бактерий отдела Gracillicutes связаны с фимбриями, у бактерий отдела Firmicutes адгезины в основном представляют собой белки и липотейхоевые кислоты клеточной стенки. У грамотрицательных бактерий функцию распознавания и прикрепления бактерий чаще осуществляют пили или фимбрии. Они короче и тоньше жгутиков. Их длина может достигать 10 нм (иногда до 2 мкм). Большинство типов фимбрий, кодируется хромосомными генами, реже плазмидами. Пили - белковые структуры, состоящие из белка пилина, к которому могут присоединятся углеводный и белковый компоненты. За необратимую адгезию отвечают высокоспецифичные структуры, гликопротеины и гликолипиды. Фимбриальные адгезины обеспечивают более эффективную адгезию, чем афимбриальные. Они оказываются локализованными на длинной тонкой ножке, что облегчает их контакт с рецептором. Формирование биоплёнок- Существование бактерий в виде биопленок усиливает свою защиту от фагоцитоза, ультрафиолетового излучения, вирусов и дегидратации, а также от антибиотиков. Основные для стафилококков с характеристикой: Стафилококковый протеин А (SpA)- Связывание с IgG, препятствие опсонизации и фагоцитозу, Фибронектинсвязывающие белки (FnbpA и FnbpB)- Связывание бактерий с фибронектином, Коллаген-связывающий белок- Связывание микробных клеток с коллагеном, Белковые клампинг-факторы (ClfA и ClfB), хлопьеобразующие факторыФактор слипания, участвующий в формировании “псевдокапсулы”, Эластинсвязывающий белок- Связывание с эластином, Тейхоевые кислоты- Адгезия к эпителиальным клеткам, Полисахаридная капсула- Препятствие фагоцитозу, колонизация и персистенция на слизистой оболочке, Стафилоксантин (каротиноидный пигмент)- Резистентность к фагоцитозу, обеспечение колонизации. У грамположительных бактерий – Тейхоевые и липотейхоевые кислоты. Фибронектин связывающие белки ( стафилококки, стрептококки). М-протеин у стрептококков группы А. ЦПМ. 9-Факторы вирулентности. Их характеристика. Адгезины и факторы колонизации. Функцию адгезии выполняют пили, белки наружной мембраны, ЛПС, тейхоевые кислоты, гемагглютинины вирусов. Адгезияпусковой механизм реализации патогенных свойств возбудителей. Факторы инвазии, проникновения в клетки и ткани хозяина. Ферменты агрессии: различные литические ферменты- гиалуронидаза, коллагеназа, лецитиназа, нейраминидаза, коагулаза, иммуноглобулиновые протеазы. Антифагоцитарные факторы (капсулы; ферменты и токсины, нарушающие функции фагоцитов). Одним из мощных 156 факторов агрессии являются токсины: Бактериальные токсины могут быть секретируемыми (экзотоксин) и несекретируемыми (эндотоксин). 4 типа экзотоксинов: Цитотоксины блокируют синтез белка на субклеточном уровне. Например, дифтерийный гистотоксин полностью угнетает действие фермента трансферазы II, ответственной за элонгацию (удлинение) полипептидной цепи на рибосоме. Мембранотоксины повышают проницаемость поверхностной мембраны эритроцитов (гемолизин) и лейкоцитов (лейкоцидины), разрушая их. Функциональные блокаторы — токсины, блокирующие функции определенных тканевых систем. Энтеротоксины (холероген и др.) активируют аденилатциклазу, что приводит к повышению проницаемости стенки тонкой кишки и повышению выхода жидкости в ее просвет, т.е. диарее. Нейротоксины (тетаноспазмин столбнячной палочки и др.) блокируют передачу нервных импульсов в клетках спинного мозга. Эксофолиатины и эритрогенины образуются некоторыми штаммами золотистого стафилококка и скарлатинозного стрептококка. Эндотоксины отличаются от экзотоксинов меньшей специфичностью действия, меньшей токсичностью, большей термостабильностью. Эндотоксины угнетают фагоцитоз, вызывают одышку, диарею, падение сердечной деятельности, понижение температуры тела. Малые дозы эндотоксина могут вызывать обратный эффект. Эндотоксины активируют комплемент по альтернативному пути. Инвазия – распространения микроорганизмов в межклеточных пространствах тканей организма хозяина и проникновения их внутрь его клеток. Инвазивные энтеробактерии используют-интегрины эукариотических клеток, листериикадхерин. Биопленки – тонкий слой микроорганизмов с секретированными ими полимерами, который адгезирован к органической или неорганической поверхности. Гиалуронидаза – деполимеризует гиалуроновую кислоту, высокополимерное соединение, состоящий из остатков N - ацетилглюкозамина и Д – глюкуроновой кислоты. Нейраминидаза – разрушает муциновый барьер, снижается активность фагоцитоза. ДНКаза – гидролиз молекул ДНК, разрыв фосфодиэфирных связей распад ДНК и РНК. Плазмокоагулаза – переводит растворимый фибриноген в фибрин, вызывает свертывание плазмы крови.Факторы агрессии и инвазии используются бактериями сочетанно. 10-Факторы персистенции. Их характеристика. Персистенция возбудителя – форма взаимодействия, способствующая длительному 156 переживанию микроорганизмов в инфицированном организме хозяина. Персистенция базовая основа формирования носительства (бактерионосительства, вирусоносительства). Носительство – одна из форм инфекционного процесса, при которой наступает динамическое равновесие между микро-и макроорганизмом на фоне отсутствия клинических проявлений, но с развитием иммунного ответа на возбудитель. Биопленки – тонкий слой микроорганизмов с секретированными ими полимерами, который адгезирован к органической или неорганической поверхности. Экспериментально-клинические материалы позво- лили отнести антилизоцимный тест (АЛА фактор) к маркерам персистенции бактерий (Бухарин, 1999).Ген АЛА Kl. pneumoniae оказался конъюгатив- ной плазмидой, которую бактерии передавали в E. coli, Shigella, Yersinia, Salmonella, Enterobacter, Pro- teus и др. виды энтеробактерий. Передача АЛА плазмиды сообщала штаммам устойчивость к перевариванию в макрофагах. “Антиинтерфероновый” признак — автономное свойство микроорганизмов, предназначенное для целенаправленного, специфического инактивирования бактерицидной фракции человеческого лейкоцитарного интерферона. Обнаружена антигистоновая активность бактерий — их способность инактивировать гистоны(регуляторы иммунитета). Стафилоксантин (каротиноидный пигмент)- резистентность к фагоцитозу. Полисахаридная капсула- Препятствие фагоцитозу, колонизация и персистенция на слизистой оболочке. Лецитиназа-позволяет персистировать. 11- Ферменты агрессии и защиты. Их свойства. Одним из мощных факторов агрессии являются токсины.Экзотоксины: Цитотоксины блокируют синтез белка на субклеточном уровне. Например, дифтерийный гистотоксин полностью угнетает действие фермента трансферазы II, ответственной за элонгацию (удлинение) полипептидной цепи на рибосоме. Мембранотоксины повышают проницаемость поверхностной мембраны эритроцитов (гемолизин) и лейкоцитов (лейкоцидины), разрушая их. Функциональные блокаторы — токсины, блокирующие функции определенных тканевых систем. Энтеротоксины (холероген и др.) активируют аденилатциклазу, что приводит к повышению проницаемости стенки тонкой кишки и повышению выхода жидкости в ее просвет, т.е. диарее. Нейротоксины (тетаноспазмин столбнячной палочки и др.) блокируют передачу нервных импульсов в клетках спинного мозга. Эксофолиатины и эритрогенины образуются некоторыми штаммами золотистого стафилококка и скарлатинозного стрептококка. Характеристика: Химическая природа- Белки (9—19 аминокислот), Происхождение- Выделяются в процессе жизнедеятельности. Чаще грамположительные бактерии, Отношение к температуре- термолабильны, Степень ядовитости- очень токсичны, Скорость действия- После интубации 18-72 ч, Специфичность действия- выражена, Отношение к химическим веществам- Чувствительны к спирту, кислотам, щелочам, пищеварительным ферментам, при действии формалина переходят в анатоксин, Антигенные свойства- активные антигены. Эндотоксины: Липополисахариды - структурные компоненты мембран грамотрицательных бактерий, поддерживающие стабильность мембраны. Капсула – слизистое образование, сохраняющее связь с клеточной стенкой и имеющее аморфную структуру. - защищает бактерии от бактериофагов, фагоцитов, гуморальных факторов иммунитета; определяет антигенную специфичность микроорганизмов; обеспечивает адгезивные свойства бактерий. Инсектицидный дельта-токсинграм+ бактерий, образует кристаллы в бактериальной споре кишечника личинки насекомых, безвреден для человека, т.к нет специфической активации лизиса. Основное 156 отличие эндо- токсинов от экзотоксинов в том, что эндотоксины взаи- модействуют с белками крови, в том числе и с цитокинами, и оказывают иммуномодулирующее воздействие. После проникновения в клетку они связываются с липопо лисахаридом, связывающим протеин (ЛСП), и переносятся на белок кластера (CD14). Этот новый комплекс активирует рецептор (TLR4), что инициирует развитие врожденного иммунного ответа. Защита и инвазия: Стафилокиназафактор тканевой инвазии, Коагулаза- (стафилотромбин)-формирует фибриновую псевдокапсулу.Каталаза- защищает бактерии от кислородных радикалов. 12- Экзотоксины. Их характеристика По механизму действия экзотоксины делятся на четыре типа. Цитотоксины блокируют синтез белка на субклеточном уровне. Например, дифтерийный гистотоксин полностью угнетает действие фермента трансферазы II, ответственной за элонгацию (удлинение) полипептидной цепи на рибосоме. Ауреолизин модифицирует поверхностные белки, что способствует отделению микробных клеток от колонизируемой ткани и распространению инфекции. Мембранотоксины повышают проницаемость поверхностной мембраны эритроцитов (гемолизин) и лейкоцитов (лейкоцидины), разрушая их. Ауреолизин модифицирует поверхностные белки, что способствует отделению микробных клеток от колонизируемой ткани и распространению инфекции. Гиалуронидаза вызывает деполимеризацию гиалуроновой и хондроитинсерной кислот, благодаря чему разрушается межклеточный матрикс и облегчается проникновение стафилококка в глубокие слои. Функциональные блокаторы — токсины, блокирующие функции определенных тканевых систем. Энтеротоксины (холероген и др.) активируют аденилатциклазу, что приводит к повышению проницаемости стенки тонкой кишки и повышению выхода жидкости в ее просвет, т.е. диарее. Нейротоксины (тетаноспазмин столбнячной палочки и др.) блокируют передачу нервных импульсов в клетках спинного мозга. Токсин синдрома токсического шока (TSST-1) вызывает развитие нейротропных и вазотропных эффектов за счет резкой стимуляции выделения фактора некроза опухоли (ФНО-α) и 156 интерлейкина 1. Эксофолиатины и эритрогенины образуются некоторыми штаммами золотистого стафилококка и скарлатинозного стрептококка. Эксфолиативные токсины А и Ввызывают разрушение межклеточных контактов между кератиноцитами в гранулярном слое эпидермиса и его отслойку или эксфолиацию. Характеристика: Химическая природа- Белки (9—19 аминокислот), ПроисхождениеВыделяются в процессе жизнедеятельности. Чаще грамположительные бактерии, Отношение к температуре- термолабильны, Степень ядовитости- очень токсичны, Скорость действия- После интубации 1872 ч, Специфичность действиявыражена, Отношение к химическим веществам- Чувствительны к спирту, кислотам, щелочам, пищеварительным ферментам, при действии формалина переходят в анатоксин, Антигенные свойства- активные антигены. 13- Эндотоксины. Их характеристика. Эндотоксины: Липополисахариды - структурные компоненты мембран грамотрицательных бактерий, поддерживающие стабильность мембраны. Капсула – слизистое образование, сохраняющее связь с клеточной стенкой и имеющее аморфную структуру. - защищает бактерии от бактериофагов, фагоцитов, гуморальных факторов иммунитета; определяет антигенную специфичность микроорганизмов; обеспечивает адгезивные свойства бактерий. Инсектицидный дельта-токсинграм+ бактерий, образует кристаллы в бактериальной споре кишечника личинки насекомых, безвреден для человека, т.к нет специфической активации лизиса. Основное отличие эндо- токсинов от экзотоксинов в том, что эндотоксины взаи- модействуют с белками крови, в том числе и с цитокинами, и оказывают иммуномодулирующее воздействие. После проникновения в клетку они связываются с липопо лисахаридом, связывающим протеин (ЛСП), и переносятся на белок кластера (CD14). Этот новый комплекс активирует рецептор (TLR4), что инициирует развитие врожденного иммунного ответа. 156 Характеристика: Химическая природа-ЛПС с белком, Происхождение Связаны со структурами бактерий; выделяются при разрушении клетки. Чаще грамотрицательные бактерии. , Отношение к температуре-термостабильны, Степень ядовитости-мало ядовиты, Скорость действия-очень быстро, Специфичность действия- лишена тропизма, Отношение к химическим веществам- Мало чувствительны к химическим веществам, не переходят в анатоксины, Антигенные свойстваслабые антигены. Эндотоксины состоят из гидрофильного полисахаридного остатка, который соединен ковалентной связью с гидрофобным липидным остатком (липид А). Липосахариды большинства видов бактерий состоят из трех основных блоков: - блок О-антигена , - олигосахарид сердцевины, - липид А-биологическая токсичность 14- Понятие об иммунитете. Виды иммунитета. Иммунитет- комплекс реакций организма, направленных на сохранение его структурной и функциональной целостности при воздействии на организм генетически чужеродных веществ, как поступающих извне, так и образующихся внутри организма. Виды: 1-Наследственный иммунитет (врожденный, видовой) обусловлен выработанной в процессе филогенеза генетически закрепленной невосприимчивостью вида к данному антигену или микроорганизму; он связан с биологическими особенностями макро- и микроорганизма и характером их взаимодействия. Видовой иммунитет неспецифичен и может быть абсолютным (например, невосприимчивость животных к возбудителю ВИЧ-инфекции человека, к вирусам бактерий) и относительным (например, появление чувствительности к столбнячному токсину у нечувствительных к нему лягушек при повышении температуры тела).2- Приобретенный иммунитет специфичен и не передается по наследству. Он формируется естественно и создается искусственно. Естественный приобретенный иммунитет появляется после перенесенного инфекционного заболевания (оспа, корь и др.) или при бытовых скрытых контактах с небольшими дозами микробных антигенов (так называемая бытовая иммунизация). Искусственный приобретенный иммунитет возникает при вакцинации. 3Активный иммунитет вырабатывается организмом в результате воздействия 156 антигена на иммунную систему (например, при вакцинации). Может быть гуморальным (обусловлен антителами), клеточным (обусловлен иммунокомпетентными клетками) и клеточно-гуморальным ( антителами, и иммунокомпетентными клетками). антитоксический иммунитет к ботулизму и столбняку является гуморальным, так как он обусловлен антителами, циркулирующими в крови, иммунитет к лепре или туберкулезу — клеточный, а к оспе — клеточно-гуморальный.. 4- Пассивный иммунитет обусловлен антителами, передаваемыми от иммунной матери ребенку при рождении или путем введения иммунных сывороток, а также при пересадке иммунных клеток. 5- стерильныйсохраняющийся в отсутствие микроорганизма, 6-нестерильный, который существует только при наличии возбудителя в организме- при туберкулёзе. 7местный иммунитет- за счёт секреторного иммуноглобулина A- активный фагоцитоз. 15- Неспецифические факторы защиты организма (функциональные, клеточные, гуморальные). Механические факторы. Кожа и слизистые оболочки механически препятствуют проникновению микроорганизмов и других антигенов в организм, реснитчатый эпителий верхних дыхательных путей, так как движение ресничек постоянно удаляет слизь вместе с попавшими в дыхательные пути инородными частицами и микроорганизмами. Физико-химические факторы: Антимикробными свойствами обладают уксусная, молочная, муравьиная и другие кислоты, выделяемые потовыми и сальными железами кожи; соляная кислота желудочного сока. Лизоцим- (мурамидаза)- разрушает клеточную стенку бактерий и других клеток, вызывая их гибель и способствуя фагоцитозу. Лизоцим вырабатывают макрофаги и нейтрофилы. Иммунобиологические факторы. Гуморальные факторы. -белки системы комплемента, интерферон, трансферрин, р-лизины, белок пропердин, фибронектин, Белки системы комплемента обычно неактивны, но приобретают активность в результате последовательной активации и взаимодействия компонентов комплемента. Интерферон оказывает иммуномодулирующий, пролиферативный эффект и вызывает в клетке, инфицированной вирусом, состояние противовирусной резистентности. р-Лизины вырабатываются тромбоцитами и обладают бактерицидным действием. Трансферрин-блокирует доступ к микроэлементам, необходимым возбудителям. Белок пропердин участвует в активации комплемента . Клеточные факторы: NK-клетки представляют собой особую популяцию лимфоцитоподобных клеток (большие гранулосодержащие лимфоциты), обладающих цитотоксическим действием против чужеродных клеток (раковых, клеток простейших и клеток, пораженных вирусом).NK-клетки осуществляют в156 организме противоопухолевый надзор. В поддержании резистентности организма имеет большое значение и нормальная микрофлора организма -механические (кожа и слизистые оболочки); -физико-химические (ферменты, реакция среды и др.); -иммунобиологическую защиту, осуществляемую нормальными неиммунными клетками (фагоциты, естественные киллеры) и гуморальными компонентами (комплемент, интерферон, некоторые белки крови). 16- Иммунная система организма человека. Клетки иммунной системы: Т-, В-лимфоциты, макрофаги и их функции. Иммунная система представлена лимфоидной тканью. К лимфоидной ткани относятся вилочковая, или зобная, железа, костный мозг, селезенка, лимфатические узлы (групповые лимфатические фолликулы, или пейеровы бляшки, миндалины, подмышечные, паховые лимфоузлы, а также циркулирующие в крови лимфоциты. Основные клетки лимфоциты, подразделяющиеся на Ти В-лимфоциты и их субпопуляции. К центральным относят вилочковую железу и костный мозг, так как клетки этих лимфоидных образований осуществляют инструктивные функции, обеспечивая иммунологическую компетентность клеток-предшественников. Переферические органы- относят селезенку, лимфатические узлы и скопления лимфоидных тканей по всему организму. Клетки периферических органов непосредственно осуществляют реакции клеточного и гуморального иммунитета (образование антител, цитотоксическая, киллерная функция-иммуноциты. Лимфоцит- является функциональным элементом в реакциях клеточного иммунитета, предшественником плазматической клетки, продуцирующей иммуноглобулины, носителем иммунологической памяти, индуктором иммунологической толерантности (неотвечаемости на антиген). Тлимфоциты обеспечивают клеточные формы иммунного ответа (гиперчувствительность замедленного типа, трайсплантаци- онный иммунитет, противоопухолевый иммунитет. В-лимфоциты отвечают за гуморальный иммунитет (все виды антител ©образования). Т- и В-системы лимфоцитов 156 взаимодействуют между собой и макрофагальной системой, при этом Т-система по отношению к В-системе является регулирующей. К мононуклеарным фагоцитам (макрофагам) относятся фагоциты, циркулирующие в периферической крови, а также тканевые макрофаги. Они образуются в костном мозге из полипо- тентной стволовой клетки, после нескольких стадий развития попадают в кровоток в виде моноцитов. Тканевые макрофаги формируются частично из моноцитов, а частично — в процессе пролиферации макрофагов- фагоцитоз, выработка ферментов( лизоцим, пероксидазу, эстеразу), белки комплемента, иммуномодуляторы типа интерлейкинов. После антигенной стимуляции В-лимфоциты переходят в плазматические клетки, которые резко усиливают синтез иммуноглобулинов определенной специфичности. Т-хелперы с помощью иммуноцитокинов (ИЛ-2) передают сигнал, усиливающий пролиферацию Т- и В-лимфоцитов нужных клонов, превращая их в активированные Т-эффекторы или плазматические антителопродуцирующие клетки. Т-супрессоры тоже относятся к регуляторам иммунного ответа. Эти клетки являются антагонистами Т-хелперов и блокируют развитие гуморального и клеточного иммунитета. Т-эффекторы (или Т-киллеры) ответственны за клеточный иммунитет в различных его проявлениях: разрушают опухолевые клетки, трансплантированные клетки, мутировавшие клетки собственного организма, участвуют в гиперчувствительности замедленного типа. В- и Т-клетки памяти: сохраняющие после первичного контакта с антигеном информацию до нескольких лет. Т-амплифайеры — клетки, усиливающие действие тех или иных субпопуляций Т-лимфоцитов. 17- Антигены, их свойства. Антигены бактерий и вирусов. Антигены — это любые генетически чужеродные для данного организма вещества (обычно биополимеры), которые, попав во внутреннюю среду организма или образуясь в организме, вызывают ответную специфическую иммунологическую реакцию: синтез антител, появление сенсибилизированных лимфоцитов или возникновение толерантности к этому веществу, гиперчувствительности немедленного и замедленного типов иммунологической памяти. Антигенность определяется структурными особенностями биополимеров, 156 являющихся генетически чужеродными для организма. Антигенностью обладают биополимеры с молекулярной массой не менее 5—10 кД. Антигенные свойства желатина, гемоглобина и других слабых антигенов можно усилить, адсорбируя их на различных носителях (каолин, активированный уголь, химические полимеры, гидроокись алюминия и др.). Эти вещества повышают иммуногенность антигена. Они называются адъювантами-повышают антигенные свойства. Чем больше антигена, тем выше иммунный ответ. При слишком большой дозе антигена может наступить иммунологическая толерантность, т.е. отсутствие ответа организма на антигенное раздражение- Стимуляция супрессорных Т- лимфоцитов. Условие антигенности-растворимость антигена. Гаптены-не полные антигены из-за небольшой молекулярной массы не фиксируются иммунокомпетентными клетками макроорганизма и не могут вызвать ответную иммунологическую реакцию. Полугаптены — неорганические радикалы (йод, бром, нитрогруппа, азот)присоединившиеся к белковой молекуле, могут менять иммунологическую специфичность белка- вызывают появление антител к детерминантам(йоду) находящимся на полном антигене. Проантигены — гаптены, которые могут соединяться с собственными белками организма и сенсибилизировать его как аутоантигены. Гетероантигены- общие антигены, встречающиеся у разных видов животных. Гетероантигенывозбудитель чумы и эритроциты человека с 0 группой крови имеют общие антигены- не развитие иммунологических реакций-летальный исход. Аллоантигены (изоантигены) — различные антигены внутри одного вида. Антигены бактерий, вирусов, грибов, простейших являются полными антигенами. Антигены микроорганизмов используют для получения вакцин и диагностических препаратов, а также идентификации и индикации микроорганизмов. Свойство: антигены, как генетически чужеродные вещества, осуществляют запуск иммунной системы, приведение ее в функционально активное состояние, выражающееся в проявлении тех или иных иммунологических реакций, направленных на устранение неблагоприятного воздействия антигена. 18- Иммуноглобулины (антитела), структура и свойства. Классы иммуноглобулинов, их характеристика. • Антитела — белки, способные специфически соединяться с антигеном, вызвавшим их образование, и таким образом участвовать в иммунологических реакциях. В организме у-гло- булины вырабатываются особыми клетками — плазмоцитами. Первичная функция антител состоит во взаимодействии их активных центров с комплементарными им детерминантами антигенов. Вторичная функция: • связывать антиген с целью его нейтрализации и элиминации из организма, т. е. принимать участие в формировании защиты от антигена; • участвовать в распознавании «чужого» антигена; • обеспечивать кооперацию иммунокомпетентных клеток (макрофагов, Т- и Влимфоцитов); • участвовать в различных формах иммунного ответа (фагоцитоз, киллерная функция, ГНТ, ГЗТ, иммунологическая толерантность, иммунологическая память). 156 Структура: состоят из полипептидных цепей: двух одинаковых тяжелых цепей Н и двух одинаковых легких цепей — L, соединенных между собой дисульфидными мостиками. В H и L цепях есть- V область, в которой последовательность аминокислот непостоянна, и константная — С область с постоянным набором аминокислот. В легких и тяжелых цепях различают NH2и СООН-концевые группы. Область, в которой соединяются (Faв)и (Fc) – фрагменты молекул Ig, называется шарнирной. Различают в С фрагменте Cl, СН1, СН2, СНЗ домены, в V-фрагменте - VH и VL домены.Вариабельные домены тяжелой (VH) и легкой (VL) цепей Ig формируют активныйцентр молекулы Ig (антитела). Та часть активного центра Ig, которая непосредственно соединяется с детерминантой антигена (эпитопом) называется паратопом. относятся к гликопротеидам, так как состоят из протеина и сахаров; построены из 18 аминокислот. имеют константу седиментации 7S; устойчивы к слабым кислотам, щелочам, нагреванию до 60 °C. Применение: антитела используют для диагностики инфекционных и неинфекционных заболеваний, определения иммунного статуса организма, профилактики и терапии ряда инфекционных и неинфекционных болезней. Классы иммуноглобулинов: 1IgG — мономерный белок, единственный из иммуноглобулинов, проникающий через плаценту в организм плода и обеспечивающий защиту от инфекции во внутриутробном периоде и в первые недели жизни; участвует в антибактериальном лизисе, в противовирусной защите, в опсонизации, в агглютинации, содержится в сыворотке крови и молозиве. Основное антитело вторичного иммунного ответа. 2IgM- синтезируется в организме при первичном иммунном ответе. Участвует в активации комплемента (классический путь), в антибактериальном лизисе, в опсонизации, агглютинации, обладает антивирусной активностью. Важным свойсвом IgM являются привлечение им фагоцитирующих клеток в очаг инфекции и активация фагоцитоза. 3Сывороточный IgA- может активировать комплемент по альтернативному пути, способен обезвреживать микробы и токсины, однако его действие слабее, чем секреторного IgA. Секреторный компонент (S)- обеспечивает защиту IgA от расщепления протеолитическими ферментами секретов. Играет особую роль в обеспечении местной защиты от бактериальной и вируснойинфекции слизистой бронхов, особенно кишечника, носа, содержится в слюне,молозиве. 4IgEсвязывается Fc-фрагментом с рецепторами мембраны тучных клеток и базофильных гранулоцитов и при последующем соединении с антигеном вызывает их дегрануляцию с высвобождением гистамина. IgE выполняет важную функцию защиты от кишечных паразитов (нематодов) .5IgD- Служит рецепторами созревающих В-лимфоцитов, может выполнять роль антигенраспознающего рецептора В-лимфоцитов и играет важную роль в процессе их дифференцировки. Контролирует активацию и супрессию B-лимфоцитов. 19- Формы иммунного ответа. Гуморальный иммунный ответ. Основой гуморального иммунного ответа является активация В -лимфоцитов и их дифференцировка в антителообразующие плазматические клеткиплазмоциты (ПК). Гуморальный иммунный ответ- есть функция Влимфоцитов, трансформирующихся в активные продуценты антител- плазмоциты (плазмотические нейтрализуют антиген, выступают в качестве опсонинов, активируют белки системы комплемента. Т- лимфоциты – основной участник клеточной формы иммунного реагирования. В отличие от В- лимфоцитов, функция 156 которых реализуется через гуморальные продукты- антитела, Т- лимфоциты разрушают чужеродные клетки (трансплантаты, опухолевые клетки, вирустрансформированные) при непосредственном контакте с данными клеточными формами. Иммуноглобулиновый рецептор В-лимфоцитов (BСR) распознает антиген и клетка поглощает его. После процессинга (расщепления поглощенного антигена до низкомолекулярных пептидов и встраивания их в МНСII класса) В-лимфоциты представляют образовавшийся комплекс Тh2-хелперам, которые взаимодействуют с ним рецептором TСR и корецептором CD4. Th2хелперы экспрессируют CD40- лиганд (CD40L или CD154). Последний связывается с CD40 на В-лимфоците и клетки активируются комплексом CD40+ CD40L. Происходит пролиферация В-лимфоцитов. Под влиянием интерлейкинов (IL4,5,6,10,13), образуемых Th2 происходит переключение иммуноглобулиновых генов В-лимфоцитов, которые синтезируют иммуноглобулины различных классов.. Другая популяция В-лимфоцитов, обозначаемая В-1 (CD5+), находится в лимфоидных образованиях слизистых оболочек, которые секретирует преимущественно IgМ, участвуя в антибактериальном иммунитете. CD8+ лимфоциты дифференцированы для выполнения функций цитотоксических лимфоцитов (ЦТЛ). ЦТЛ сами непосредственно, своим «клеточным телом», убивают клетки, на мембране которых они распознали антиген. CD4+ Т-лимфоциты дифференцированы в продуцентов цитокинов, секретируемых для взаимодействия и вовлечения в процесс других клеток – партнеров по иммунному ответу. При клеточном иммунном ответе участвуют популяции Thlхелперов CD4+ цитотоксических Т-лимфоцитов CD8+ (ЦТЛ). 20- Формы иммунного ответа. Клеточный иммунный ответ. При клеточном иммунном ответе участвуют популяции Thl- хелперов CD4+ и цитотоксических Т-лимфоцитов CD8+ (ЦТЛ). Антигенпрезентирующие клетки, обычно дендритные, после процессинга поглощенного микробного антигена (АГ) представляют ЦТЛ микробные пептиды в комплексе с МНС I класса. ЦТЛ с помощью антигенраспознающего рецептора (TСR) и корецептора CD8 распознают соответственно микробный пептид и МНС I класса (двойное распознавание). Это 156 взаимодействие стабилизируется СD28-молекулой Т-лимфоцита и CD80молекулой дендритной клетки. Под действием IL-2 происходит пролиферация ЦТЛ. ЦТЛ узнают клетки-мишени, инфицированные внутриклеточными микробами, например вирусами: на клетках-мишенях экспрессируются микробные пептиды в комплексе с МНС I класса, распознаваемые соответственно TСR и корецептором CD8 цитотоксического Т-лимфоцита. Далее ЦТЛ выбрасывают из гранул цитотоксические белки-перфорины и гранзимы (сериновые протеазы). Перфорины, встраиваясь в мембрану клетки-мишени, образуют поры, которые способствуют проникновению гранзимов. Гранзимы запускают процесс апоптоза клетки-мишени. Разновидностью клеточного иммунного ответа является гиперчувствительность замедленного типа с участием Thl- хелперов CD4+ и активированных макрофагов. Наибольшую роль в активации макрофагов и NK-клеток выполняет гамма-интерферон (IFN), выделяемый Thl-хелперами. Активированные клетки более эффективно уничтожают внутриклеточных микробов. 21- Формы иммунного ответа. Иммунологическая память. Иммунологическая толерантность. 1Иммунологической памятью называют способность организма при повторной встрече с одним и тем же антигеном реагировать более активным и более быстрым формированием иммунитета, т. е. реагировать по типу вторичного иммунного ответа. Повышенная чувствительность, или иммунореактивность, к антигену сохраняется при этом годами и даже десятилетиями. Иммунологическая память распространяется как на гуморальный (выработка антител), так и клеточный иммунитет. ГЗТ, трансплантационный иммунитет и другие формы иммунитета, связанные в основном с функцией лимфоцитов. Ведущая роль в сохранении иммунологической памяти используется в практике вакцинации людейОсуществляют это 2—3-кратными прививками при первичной вакцинации и периодическими повторными прививками — ревакцинациями. прививки проводят с интервалами в 5—7 лет. Ревакцинацию применяют также по противоэпидемическим показаниям, когда необходимо быстро создать коллективный иммунитет среди ранее прививавшихся людей (например, при дифтерии, брюшном тифе, чуме и других инфекциях). 2Иммунологическая толерантность — явление противоположное иммунологической памяти. В этом случае в ответ на повторное введение антигена организм вместо энергичной быстрой выработки иммунитета проявляет ареактивность, не отвечает иммунной реакцией, т. е. толерантен к антигену.Специфична. Примером врожденной толерантности является отсутствие реакции иммунной системы на свои собственные антигены. Приобретенную толерантность можно создать, вводя в организм вещества, подавляющие иммунитет, т. е. иммунодепрессанты, а также если вводить аллогенный антиген во время эмбрионального периода или в первые дни после рождения животного или человека. Механизм возникновения: функциональными изменениями Т- и В-лимфоцитов, например активацией Тсупрессоров, подавляющих иммунитет, или блокадой рецепторов Т- и Влимфоцитов, воспринимающих антиген; 156 • быстрым связыванием антигена антителами и выведением его из организма; • в случае толерантности к собственным антигенам может играть роль элиминация из организма клонов лимфоцитов, реагирующих на собственные антигены. • 22-Динамика антителообразования. Первичный и вторичный иммунный ответ. В латентной фазе происходят переработка и представление антигена иммунокомпетентным клеткам, размножение клона клеток, специализированного на выработку антител к данному антигену, начинается синтез антител. Во время логарифмической фазы синтезированные антитела высвобождаются из плазмоцитов и поступают в лимфу и кровь. В стационарной фазе количество антител достигает максимума и стабилизируется, затем наступает фаза снижения уровня антител. При первичном введении антигена (первичный иммунный ответ) латентная фаза составляет 3—5 сут, логарифмическая — 7— 15 сут, стационарная — 15—30 сут и фаза снижения — 1—6 мес и более. Особенностью первичного иммунного ответа является то, что первоначально синтезируется IgM, а затем IgG. при вторичном введении антигена (вторичный иммунный ответ) латентный период укорочен до нескольких часов или 1—2 сут, логарифмическая фаза характеризуется быстрым нарастанием и значительно более высоким уровнем антител, который в последующих фазах длительно удерживается и медленно, иногда в течение нескольких лет, снижается. При вторичном иммунном ответе в отличие от первичного синтезируются главным образом IgG. После первичного введения антигена в иммунной системе формируется клон лимфоцитов, несущих иммунологическую память о данном антигене. После повторной встречи с этим же антигеном клон лимфоцитов с иммунологической памятью быстро размножается и интенсивно включает процесс антителогенеза. 156 23- Понятие об иммунном статусе. Показателями, характеризующими состояние специфического звена иммунной системы: уровень иммуноглобулинов всех классов в крови; количество и функциональная активность Т- и В- лимфоцитов и их субпопуляций; выраженность клеточного и гу- морального иммунитета на введение антигенов и митогенов, а также реакции ГЗТ и кожных реакций; состояние системы иммуноцитокинов; активность иммунного фагоцитоза. Состояние факторов, определяющих естественную резистентность, учитывают путем: определения содержания макрофагов и их фагоцитарной способности, функционирования нормальных киллеров, содержания в крови комплемента, интерферона, некоторых ферментов (лизоцим) и ингибиторов. Иммунное состояние нарушается-из за инфекции, излучения, химических веществ, лекарственных препаратов, образования аутоантигенов и аутоантител, нарушения белкового синтеза. Примером врожденной недостаточности В-системы является агаммаглобулинемия (неспособность вырабатывать у-глобулины), а недостаточности Т-системы — гипоплазия вилочковой железы (синдром Ди Джорджи). Вторичные иммунодефициты развиваются при многих бактериальных и вирусных инфекциях, опухолях, воздействии на организм веществ, обладающих супрессивным действием (некоторые лекарственные вещества, антибиотики), влиянии профессиональных вредностей. 156 169 24-Вакцины. Определение. Требования, препаратам. Побочные действия вакцин. • предъявляемые к вакцинным Вакцинами называют иммунобиологические препараты, предназначенные для создания активного специфического иммунитета. Применяют их главным образом для профилактики, но иногда используют для лечения инфекционных болезней. Действующим началом вакцины является специфический антиген. В качестве антигена используют: 1живые или инактивированные микроорганизмы (бактерии, вирусы); 2выделенные из микроорганизмов специфические, так называемые протективные, антигены; 3образуемые микроорганизмами антигенные вещества (вторичные метаболиты), играющие роль в патогенезе болезни (токсины); 4химически синтезированные антигены, аналогичные природным; 5антигены, полученные с помощью метода генетической инженерии. Живые вакцины -аттенуированные; дивергентные; векторные рекомбинантные. Неживые вакцины: молекулярные: полученные путем биосинтеза; полученные путем химического синтеза; полученные методом генетической инженерии; корпускулярные: цельноклеточные, цельновирионные; субклеточные, субвирионные; синтетические, полусинтетические. Ассоциированные вакцины. Требования к вакцинным препаратам Требования к составу: В качестве стабилизаторов используют исключительно вещества, на которые имеются фармакопейные статьи: сахарозу, лактозу, альбумин человека, натрия глутамат. Консерванты- сохранение и стерильность инактивированных вакцин. Использование консервантов прежде всего для сорбированных вакцин. Мертиолата в препаратах АКДС-вакцины, анатоксинов содержится не более 50 мкг. В качестве адъювантов чаще используют алюминия гидроксид или алюминия фосфат. По требованиям ВОЗ, содержание гетерологичного белка в парентерально вводимых вакцинах не должно превышать 0,5 мкг в 1 прививочной дозе, а содержание антибиотиков (канамицина или мономицина ) в коревой, паротитной и краснушной вакцинах не превышает 10 ЕД в прививочной дозе. При производстве вирусных вакцин запрещено использовать антибиотики с выраженными сенсибилизирующими или токсическими свойствами (пенициллин и его производные, стрептомицин, тетрациклины). При производстве бактериальных вакцин антибиотики вообще не используют. 1) высокая иммуногенность: должна индуцировать иммунитет напряженный, длительный (лучше пожизненный), без бустерных вакцинаций; 2) 170 содержание только протективных антигенов. Термин «протективный антиген» применяют по отношению к молекулярным структурам возбудителя, которые при введении в организм способны индуцировать протективный эффект — невосприимчивость организма к заражению. Протективные антигены не всегда бывают иммуногенны, чаще — наоборот; 3) полная безопасность: не способна вызвать заболевание и поствакцинальные осложнения; 4) ареактогенность: отсутствие сильных поствакцинальных реакций; 5) хорошая стандартизуемость и удобство применения: введение раннее, пероральное, без разведения; 6) стабильность при хранении; 7) хорошая ассоциируемость: одна инъекция препарата должна индуцировать иммунитет против всех инфекций. С точки зрения молекулярной и клеточной иммунологии вакцина должна удовлетворять следующим требованиям: а) активировать вспомогательные клетки (макрофаги, дендритные клетки, клетки Лангерганса), участвующие в процессинге и представлении антигена, формировать микроокружение и поляризацию, необходимые для протективного ответа, т. е. содержать структуры, распознаваемые АПК; б) содержать протективные эпитопы для Т- и В-лимфоцитов; в) эффективно презентироваться: легко подвергаться процессированию, эпитопы должны взаимодействовать с антигенами ГКГС; г) индуцировать образование регуляторных, эффекторных клеток и клеток иммунологической памяти. Побочные действия вакцин: ●местные неблагоприятные явления (абсцесс в месте введения, гной ный лимфаденит, тяжелая местная реакция); ●неблагоприятные явления со стороны центральной нервной системы (острый паралич, энцефалопатия, энцефалит, менингит, судороги); ●прочие неблагоприятные события (аллергические реакции, анафилактический шок, артралгии, генерализованная БЦЖ-инфекция, остит/остеомиелит, гипотензивногипореспонсивное (коллаптоидное) состояние, пронзительный крик, сепсис, синдром токсического шока). 25- Живые вакцины. Получение, применение. Достоинства и недостатки. 171 Живые аттенуированные вакцины конструируются на основе ослабленных штаммов микроорганизмов, потерявших вирулентность, но сохранивших антигенные свойства. Такие штаммы получают методами селекции или генетической инженерии. Бактериальные живые вакцины: туберкулезная (из штамма БЦЖ, чумная (из штамма EV), туляремийная (из штамма №15 ), сибиреязвенная (из штамма СТИ-1), бруцеллезная (из штамма 19-ВА), против Ку-лихорадки (из штамма М-44)-Здродовский. Вирусные живые вакцины: оспенная (на основе вируса оспы коров); коревая (из штамма Л-16 и штамма Эдмонстон, полученных А. А. Смородинцевым и М. П. Чумаковым); полиомиелитная (из штаммов А. Сэбина типов 1, 2, 3); против желтой лихорадки (из штамма 17D); гриппозная (из лабораторных штаммов), против венесуэльского энцефаломиелита лошадей (из штамма 230), паротитная (из штаммов, полученных А. А Смородинцевым и Н. С. Клячко). Векторные вакцинные штаммы конструируют, встраивая в геном (ДНК) вакцинного штамма вируса или бактерий ген чужеродного антигена. Ассоциированные:поливалентную ассоциированную полиомиелитную вакцину входят живые вакцинные штаммы вируса полиомиелита I, II, III типов. Получение: Получают живые вакцины путем выращивания аттенуированных штаммов на питательных средах, оптимальных для данного микроорганизма. Бактериальные штаммы культивируют или в ферментерах на жидких питательных средах, или на твердых питательных средах; вирусные штаммы культивируют в куриных эмбрионах, первично-трипсинизированных, перевиваемых культурах клеток. Применение: Для перевода хронической стадии болезни в острую. Достоинства: Живые вакцины при введении в организм приживляются, размножаются, вызывают генерализованный вакцинальный процесс и формирование специфического иммунного ответа для патогенного штамма. Векторный вакцинный штамм после иммунизации вызывает иммунитет не только к вакцинному штамму-реципиенту, но и к новому чужеродному антигену. Живые вакцины создают прочный и длительный иммунитет, по напряженности приближающийся к постинфекционному. Живые вакцины не содержат консерванта. Стойкий иммунитет после первого введения. Недостатки: Детям с тяжелыми аллергическими реакциями на антибиотики в анамнезе могут быть противопоказаны живые вакцины, содержащие антибиотики в качестве стабилизатора. Содержат антибиотик в небольших пропорциях. Живые вакцины против гриппа беременным противопоказаны. 1сложно комбинируются и плохо дозируются/ 2категорически противопоказаны людям, страдающим иммунодифицитом 3вызывают вакциноассоциированные заболевания /относительно нестабильны в процессе производства, транспортировки, хранения при использовании необходимо строго соблюдать меры, предохраняющие микроорганизмы от отмирания и гарантирующие сохранение активности препаратов 26- Убитые вакцины. Получение, применение. Достоинства и недостатки. 172 К таким вакцинам относятся корпускулярные бактериальные и вирусные вакцины, корпускулярные субклеточные и субъединичные вакцины, а также молекулярные вакцины. Корпускулярные вакцины представляют собой инактивированные физическими (температура, УФ-лучи, ионизирующее излучение) или химическими (формалин, фенол, р-пропио- лактон) способами культуры патогенных или вакцинных штаммов бактерий и вирусов. Инактивацию проводят в оптимальном режиме (инактивирующая доза, температура, концентрация мик роорганизмов), чтобы сохранить антигенные свойства микроорганизмов, но лишить их жизнеспособности. Получение: Инактивированные вакцины готовят в асептических условиях на основе чистых культур микроорганизмов. К готовым, дозированным (по концентрации микроорганизмов) вакцинам добавляют консервант-мертиолат. Применение: вводя препарат подкожно, внутримышечно, аэрозольно, иногда перорально.Создание специфического приобретённого активного искусственного иммунитета. Корпускулярные вакцины применяют для профилактики коклюша, гриппа, гепатита А, герпеса, клещевого энцефалита. К корпускулярным вакцинам относят также субклеточные и субвирионные вакцины, в которых в качестве действующего начала используют антигенные комплексы, выделенные из бактерий или вирусов после их разрушения. Субклеточные инактивированные вакцины против брюшного тифа (на основе О-, Н- и Vi- антигенов), дизентерии, гриппа (на основе нейраминидазы и гемагглютинина), сибирской язвы (на основе капсульного антигена)- с добавлением адьюванта( гидроксид аллюминия, фосфат аллюминия). Молекулярные вакцины. К ним относят специфические антигены в молекулярной форме, полученные методами биологического, химического синтеза, генетической инженерии. Принцип метода биосинтеза состоит в выделении из микроорганизмов или культуральной жидкости протективного антигена в молекулярной форме. Молекулы токсина при обезвреживании формалином превращаются в молекулы анатоксинов, сохраняющие специфические антигенные свойства, но теряющие токсичность.- Анатоксины – типичные представители молекулярных вакцин. Анатоксины (столбнячный, дифтерийный, ботулиновый, стафилококковый, против газовой гангрены) получают путем выращивания глубинным способом в ферментаторах возбудителей столбняка, дифтерии, ботулизма и других микроорганизмов, в результате чего в культуральной жидкости накапливаются токсины. После отделения микробных клеток сепарированием культуральную жидкость (токсин) обезвреживают формалином в концентрации 0,3—0,4 % при 37 °C в течение 3—4 нед. Способ применения Применяют анатоксины подкожно, внутримышечно; схема иммунизации состоит из 2—3 прививок с последующими ревакцинациями. Синтетические и полусинтетические вакцины: антиген или его детерминанта в молекулярном виде, полимерный высокомолекулярный носитель для придания макромолекулярности антигену и адъювант, неспецифически повышающий активность антигена. Ассоциированные вакцины: Они могут включать как однородные антигены (например, анатоксины), так и антигены различной природы (корпускулярные и молекулярные, живые и убитые). Секстаанатоксин против столбняка, газовой гангрены и ботулизма, второго типа — 173 АКДС-вакцина, в которую входят столбнячный, дифтерийный анатоксины и коклюшная корпускулярная вакцина. Достоинства: 1Возможность постановки детям с первичным иммунодефицитом. 2Возможность постановки после истечения 6 месяцев после прохождения курса лучевой терапии и 3 месяцев после иммуносупрессивной терапии детей. 3-Возможность введения после I триместра беременности. Низкая реактогенность. Недостатки: 1Инактивированные вакцины обычно вводят троекратно с интервалом 1–2 мес и с ревакцинацией через 1 год после последней вакцинации. При этом формируется базовый иммунитет (грунд-иммунитет)-необходимость многократного введения для включения в процесс клеток памяти.2- вызывают менее напряженный иммунный ответ. 27- Химические вакцины. Анатоксины. Приготовление. Применение. Достоинства и недостатки. Роль адъювантов. Химические вакцины представляют собой извлеченные из микробной клетки антигенные компоненты, обеспечивающие развитие надежного иммунитета. Приготовление: Анатоксины (столбнячный, дифтерийный, ботулиновый, стафилококковый, против газовой гангрены) получают путем выращивания глубинным способом в ферментаторах возбудителей столбняка, дифтерии, ботулизма и других микроорганизмов, в результате чего в культуральной жидкости накапливаются токсины. После отделения микробных клеток сепарированием культуральную жидкость (токсин) обезвреживают формалином в концентрации 0,3—0,4 % при 37 °C в течение 3—4 нед. Обезвреженный токсин — анатоксин, потерявший токсичность, но сохранивший антигенность, подвергают очистке и концентрированию, стандартизации и фасовке. К очищенным анатоксинам добавляют консервант и адъювант. Такие анатоксины называют очищенными сорбированными. Дозируют анатоксин в антигенных единицах (ЕС — единица связывания, ЛФ — флокку- ляционная единица). Применение: Применяют анатоксины подкожно, внутримышечно. Для создания специфического приобретённого активного искусственного иммунитета против патогенных штаммов. Достоинства: 1Возможность постановки детям с первичным иммунодефицитом. 2Возможность постановки после истечения 6 месяцев после прохождения курса лучевой терапии и 3 месяцев после иммуносупрессивной терапии детей. 3-Возможность введения после I триместра беременности. 4-обеспечивают сохранение в организме привитого стойкой иммунной памяти, при их повторном введении людям, полноценно привитым 10 лет назад и более, происходит быстрое образование специфических антител в высоких титрах.5 имеют относительно низкую реактогенность, что позволяет свести к минимуму перечень противопоказаний. Недостатки: 1Менее напряжённый иммунный ответ, 2-необходимость многократных циклов ревакцинаций, формирование базового иммунного ответа. Роль адьюванта: Для повышения эффекта действия антигена к вакцине иногда добавляют неспецифический стимулятор-адъювант, активирующий иммунную 174 систему. В качестве адъювантов используют минеральные коллоиды (А1(ОН)3, А1РО4), полимерные вещества (липополисахариды, полисахариды, синтетические полимеры). Они изменяют физико- химическое состояние антигена, создают депо антигена на месте введения. Вакцины с адъювантами называют адъювантными, сорбированными, адсорбированными или депонированными вакцинами. Использование адъювантов позволяет снизить антигенную нагрузку в вакцине и тем самым уменьшить ее реактогенность.К числу других стимуляторов антителообразования-можно отнести иммуноадъювант азоксимера бромид (полиоксидоний♠), который входит в состав отечественной инактивированной тривалентной гриппозной полимер-субъединичной вакцины гриппол♠. Введение в вакцину гриппол иммуномодулятора полиоксидония♠ позволяет в 3 раза снизить количество основного антигена гемагглютинина в вакцинирующей дозе. Вследствие наличия в грипполе♠ полиоксидония♠ вакцина не только защищает привитых от гриппозной инфекции, но и существенно снижает заболеваемость ОРЗ. Перспективныые адъюванты при энтеральной иммунизации — холерный токсин и лабильный токсин E. coli, стимулирующие образование секреторных IgA-антител. 28- Вакцинотерапия. Лечебные вакцины. Приготовление. Применение. Механизм действия. Вакцинотерапия метод лечения некоторых инфекционных болезней введением вакцин. В. основана на учении И. И. Мечникова о Фагоцитозе. Под влиянием повторных введений вакцины (через определённые промежутки времени, в определённых дозах, определённое число раз).Механизм: снижается чувствительность организма к специфическому антигену (возбудителю), происходит так называемая десенсибилизация, увеличивается фагоцитоз специфического возбудителя, активизируются обменные процессы; в первичном очаге усиливается гиперемия и повышается проницаемость кровеносных сосудов. убитых официнальных вакцин для лечения хронических инфекций(бруцеллёза, хронической дизентерии, хронической гонореи, стафилококковых, герпетических инфекций). Убитые: Гонококковая Дизентерийная Стафилококковый антифагин Бруцеллезная лечебная Герпетическая лечебная Протейная Стафилококковая сухая Комплексная (из антигенов УПМ) Химические (субклеточные): Протейная; Стафилококковые антифагин; Стафилококковая сухая; Поликомпонентная из антигенов условно патогенных микроорганизмов. Применение: Применяются для перевода хронической стадии болезни в острую при неэффективности антибиотикотерапии вследствие лекарственной устойчивости микроорганизма. Действие данных вакцин основано на стимуляции защитных сил макроорганизма. Приготовление на примере вакцины бруцеллезной инактивированной лечебной: Вакцина бруцеллезная инактивированная лечебная (суспензия для внутрикожного введения) представляет собой смесь инактивированных нагреванием клеток вирулентных штаммов Brucella melitensis №21, 145 и Brucella abortus №544 в соотношении 1:1:1, разбавитель - натрия хлорид (0,018 г в ампуле), консервант - фенол (5 мг в ампуле). Гомогенная суспензия серовато-белого цвета, при хранении образуется осадок, легко 175 разбивающийся при встряхивании. 29- Иммунные сыворотки. Классификация. Получение, очистка, применение. Осложнения при использовании сывороток и их предупреждение. К иммунным препаратам на основе антител относятся иммунные сыворотки, иммуноглобулины (цельномолекулярные и доменные), моноклональные антитела, абзимы (антитела-ферменты). Иммунные сыворотки получают путем гипериммунизации, т.е. многократной интенсивной иммунизации животных (лошадей, ослов, иногда кроликов) специфическим антигеном с последующим, в период максимального антителообразования, кровопусканием и выделением из крови иммунной сыворотки. Иммунные сыворотки, полученные от животных, называют гетерогенными, так как они содержат чужеродные для человека сывороточные белки. Для получения гомологичных не чужеродных иммунных сывороток используют сыворотки переболевших людей или специально иммунизированных людей–доноров либо сыворотки из плацентарной, а также абортной крови, содержащие антитела к ряду возбудителей инфекционных болезней вследствие вакцинации или перенесенного заболевания. По направленности действия среди них выделяют: антитоксические (против различных бактериальных токсинов, например, противостолбнячная, противодифтерийная, противоботулиническая, противогангренозная); антибактериальные (противотифозная, противочумная); • противовирусные (против клещевого энцефалита, против бешенства) сыворотки. Получение:Нативные иммунные сыворотки содержат в своем составе ненужные балластные белки, например, альбумин из них выделяют специфические белки-иммуноглобулины, которые подвергают очистке и концентрированию различными физико-химические методами (осаждение спиртом или ацетоном на холоде, обработка ферментами, аффинная хроматография, ультрафильтрация). Для повышения специфичности и активности антител, из молекул иммуноглобулина выделяют только антигенсвязывающие участки (Fab-фрагменты), такие иммуноглобулины получили название доменных антител. На примере сывороток противоботулинических лошадинных очищенных концентрированных жидких типов А, В и Е: Препараты представляют собой белковые фракции сыворотки крови лошадей, иммунизированных ботулиническими анатоксинами типов А, В или Е. Сыворотки содержат специфические 176 иммуноглобулины (антитоксины), нейтрализующие ботулинические токсины соответственно типов А, В или Е. Одна лечебная доза содержит не менее 10000 ME. Консервант – хлороформ. Поколения внутривенных иммуноглобулинов по степени очистки: I поколение (расщепленные ферментами): молекулы иммуноглобулинов химически или ферментативно повреждены, не имеют функционального Fc-фрагмента. • II поколение (химически модифицированные): сохранена функция Fc-фрагмента, но не в полном объеме; низкая степень очистки. • III поколение («мягкое фракционирование»): функция Fc-фрагмента полностью сохранена; высокоочищеннные. • IV поколение (обработка при кислом значении рН): функция Fc-фрагмента полностью сохранена; высокоочищенные, в виде готового раствора для инфузии; четыре метода инактивации вирусов. Применение: при лечении первичных и вторичных иммунодефицитов в качестве заместительной терапии, в комплексном лечении тяжелых инфекций; при терапии аутоиммунных (аутоиммунные цитопении) заболеваниях - с иммуномодулирующей целью и при неврологических (синдром Гийена–Барре) заболеваниях. Осложнения и предупреждения: Может сопровождаться развитием аллергических реакций немедленного типа, включая анафилактический шок, а также сывороточной болезни. До введения сыворотки у больного следует взять кровь в объеме 10 мл, мочу, промывные воды желудка (рвотные массы) для исследования на наличие токсина с лечебной целью. С профилактической целью сыворотку вводят людям, употреблявшим одновременно с больным продукты, которые вызвали заболевание ботулизмом. Вводят половину лечебной дозы (половину содержимого ампулы) сыворотки того же типа, что и тип токсина, вызвавшего заболевание. Если тип токсина не установлен, вводят по половине лечебной дозы всех типов моновалентных сывороток. Препарат вводят внутримышечно. 177 Реакция агглютинации: Реакция агглютинации (РА) — простая по постановке реакция, при которой происходит склеивание корпускулярных антигенов (микроорганизмы, эритроциты, другие клетки, а также индифферентные корпускулярные частицы с адсорбированными на них антигенами) под действием антител, что проявляется образованием осадка или хлопьев. Реакцию агглютинации используют для определения антител в сыворотке крови больных, например при брюшном тифе и паратифах (реакция Видаля), бруцеллезе (реакции Райта, Хедцлсона), туляремии, а также для определения возбудителя, выделенного от больного. Эта же реакция применяется для определения групп крови. Развернутую реакцию агглютинации проводят в пробирках. К разведениям сыворотки больного добавляют взвесь убитых микроорганизмов (диагностикум) и через определенное время при 37 °C отмечают наибольшее разведение (титр) сыворотки, при котором произошла агглютинация. Ориентировочную реакцию агглютинации ставят на предметном стекле для определения возбудителя, выделенного от больного. К капле диагностической иммунной сыворотки в разведении 1:10, 1:20 добавляют чистую культуру возбудителя. Если появляется хлопьевидный осадок, ставят развернутую реакцию агглютинации с культурой, выделенной от больного, и с разведениями диагностической сыворотки. Реакцию считают положительной, если агглютинация отмечается в разведении, близком к титру диагностической сыворотки. В контролях (сыворотка, разведенная изотоническим раствором хлорида натрия, или взвесь микроорганизмов в том же растворе) осадок в виде хлопьев должен отсутствовать. Ингридиенты- АГ – исследуемый (неизвестный) материал, содержащий возбудитель болезни, т.е. сам микроб (при идентификации микробов) или бактериальный диагностикум (при серодиагностике) •АТ – известная агглютинирующая сыворотка (при идентификации микробов) или исследуемая сыворотка, содержащая неизвестные антитела (при серодиагностике) •Физиологический раствор NaCl с pH=7,0-7,4 178 Реакция пассивной гемагглютинации: Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА) основана на использовании эритроцитов с адсорбированными на их поверхности антигенами или антителами (эритроцитарный диагностикум), взаимодействие которых с соответствующими антителами или антигенами сыворотки крови больных вызывает выпадение эритроцитов на дно пробирки в виде фестончатого осадка. Реакцию применяют для диагностики инфекционных болезней, определения гонадотропного гормона в моче при установлении беременности, выявления повышенной чувствительности больного к лекарственным препаратам и гормонам. Положительный-зонтик, отрицательный-пуговка. ИнгридиентыАНТИТЕЛА- иммунная сыворотка, АГ- эритроцитарный диагностикум. 179 180 Реакция преципитации: Реакция преципитации (РП) — осаждение комплекса антиген — антитело, образующегося в результате соединения растворимого антигена со специфическими антителами. Осадок комплекса антиген — антитело называется преципитатом. Реакцию ставят в пробирках нанесением (наслоением) раствора антигена на иммунную сыворотку. При оптимальном соотношении антигена и антител на границе этих растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата (реакция кольцепреципитации). Реакции преципитации в полужидком геле агара или агарозы — двойная иммунодиффузия по Оухтерлони, радиальная иммунодиффузия, иммуноэлектрофорез. Для постановки реакции двойной иммунодиффузии по Оухтерлони растопленный агаровый гель выливают тонким слоем на стеклянную пластинку и после затвердевания вырезают в нем лунки размером 2—3 мм. В лунки раздельно помещают антигены и иммунные сыворотки, которые, диффундируя в агар, образуют в месте встречи преципитат в виде белой полосы- кольца преципитации.АТ- иммунная сыворотка, АГ-прокипяченные и профильтрованные экстракты тканей- реакция Асколи. 181 182 183 Реакция связывания комплемента: Реакцию связывания комплемента (РСК) проводят в две фазы: 1-я фаза — инкубация смеси искомого антигена (или антитела) с диагностической сывороткой (или антигеном-диаг- ностикумом) и комплементом; 2-я фаза — индикаторная — определение наличия в смеси свободного комплемента добавлением гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, содержащей антитела к эритроцитам барана. В 1й фазе реакции при образовании комплекса антиген — антитело происходит связывание им комплемента, во 2-й фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов отсутствует (реакция положительная). При отрицательной реакции, если антиген и антитело не соответствуют друг другу, комплемент остается свободным и во 2-й фазе реакции он присоединяется к комплексу эритроцит — антиэритроцитарное антитело гемолитической сыворотки, вызывая гемолиз. РСК применяют для диагностики многих инфекционных болезней, в частности сифилиса (реакция Вассермана). ИНГРИДИЕНТЫ: 1) испытуемая сыворотка (предварительно инактивируют нагреванием при 56 °С в течение 30 минут); 2) антиген (изготавливается из взвесей убитых микробов, лизатов микробов, полных АГ, гаптенов, экстрактов тканевых липидов); 3) комплемент-сыворотка крови морской свинки; 4) гемолитическая сыворотка; 27 5) 3 % взвесь эритроцитов барана; 6) физиологический раствор; 7) контрольная сыворотка. 1-положительная реакция- отсутствие гемолиза, 2-отрицательная реакциягемолиз 184 Реакция иммунофлюоресценции: Реакция иммунофлюоресценции — РИФ (метод Кунса) основана на том, что антигены тканей или микроорганизмы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа (прямой метод). Бактерии в мазке, обработанные такой специфической сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета. Различают три основные разновидности метода: прямой, непрямой, непрямой с комплементом. Применяются для определения возбудителя бешенства. Ингридиенты прямой РИФ: 1) исследуемый материал (испражнение, отделяемое носоглотки и др.); 2) меченая специфическая иммунная сыворотка, содержащая АТ к искомому антигену; 3) изотонический раствор хлорида натрия. 1-прямая РИФ, 2-непрямая РИФ 185 186 Реакция иммуноферментный анализ: Иммуноферментный анализ — ИФА (иммунофермен- тный метод) — выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом (пероксидазой хрена, р-галактозой или щелочной фосфатазой). После соединения антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат, который расщепляется ферментом с окрашиванием раствора в желто-коричневый (пероксидаза) или желто-зеленый (фосфатаза) цвет. Твердофазный иммуноферментный методнапример в лунках микропанелей из полистирола, сорбируют антиген. В лунки с адсорбированным антигеном добавляют сыворотку крови больного и затем антиглобулиновую (противочеловеческую) сыворотку, меченную ферментом, и субстрат для фермента. При положительном результате изменяется цвет раствора. Иммуноферментный метод применяется для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных заболеваний, в частности диагностики ВИЧ-инфекций, гепатитаB. ИНГРИДИЕНТЫ РЕАКЦИИ КОНКУРЕНТНОГО ТИПА: 1) исследуемый материал – сыворотка или плазма крови; 2) антитела к HBs Ag, адсорбированные на поверхности лунки полистиролого микропланшета; 3) конъюгат – мышиные моноклониальные антитела к HBs Ag, меченые пероксидазой; 4) ортофенилендиамин (ОФД) – субстрат; 5) фосфатно – солевой буфер; 6) контрольные сыворотки: положительная (сыворотка с HBs Ag); - отрицательная (сыворотка без HBs Ag). 1-антиген, 2- антитело 187