Практическая работа №1. «Формирование перечня методик для реализации НИР (сравнение альтернативных методик)» Таблица 1 – Формирование перечня методик для реализации НИР (сравнение альтернативных методик) Определяемый параметр Выбранный метод анализа Ссылка на лит.источник Содержание Метод Брэдфорда 1. Bisswanger H. Practical белка enzymology. – John Wiley & Sons, 2019. 2. Бержец В. М. и др. Сравнительная характеристика методов определения концентрации белка в клещевых аллергенах //Иммунопатология, аллергология, инфектология. – 2004. – №. 4. – С. 99-103. Содержание Глюкозооксидазн глюкозы ый метод определения глюкозы на анализаторе глюкозы «Энзискан Ультра» 1. Анализатор глюкозы автоматический «Энзискан Ультра» Методика поверки МП 254-10-2008 2. Герасименко, В. А. Современные методы определения глюкозы / В. А. Герасименко, О. А. Куриляк // Погрешность методики Достоинства методики Недостатки методики ±5%2 Простота исполнения, сравнительно малочувствителен к присутствию мешающих агентов1 Окрашивание кювет в синий цвет, чувствителен к детергентам типа Тритона Х-100 и додецилсульфата натрия1 ±3 % при Р=0,951 Высокая специфичность2 и простота исполнения Образующаяся перекись водорода и супероксид анион-радикал могут окислять не только хромоген, но и другие вещества, присутствующие Альтернативные методики для определения параметра и их недостатки Метод Лоури1 Недостатки: 1. Правильному определению мешают даже очень низкие концентрации многих веществ 2. Ограниченный линейный диапазон зависимости поглощения от концентрации белка Определение концентрации белка по поглощению раствора1 Недостатки: 1. Чувствительность определения невысокая 2. Определению мешает присутствие всех веществ, поглощающих в ультрафиолетовом диапазоне Биуретовый метод1 Недостатки: 1. Низкая чувствительность (0,1–0,8 мг) 2. Требует больших затрат белка Метод с реактивом Триндера3 Недостатки: Низкая специфичность Метод GOD-POD4 Недостатки: 1. Длителен по времени 2. Требует большого количества реагентов, в т.ч. специальный Определение активности Гидролиз с лактозой в качестве модельного вещества Эндокринология [Электронный ресурс]. — 2009. — № 146. — Режим доступа http://www/eurolab/ua/arti cles/6826/9672/item/146. — Дата доступа 08.02.2012. 3. Burin L., del Pilar Buera M. β-Galactosidase activity as affected by apparent pH and physical properties of reduced moisture systems //Enzyme and Microbial Technology. – 2002. – Т. 30. – №. 3. – С. 367-373. 4. Dwevedi A., Kayastha A. M. Optimal immobilization of βgalactosidase from Pea (PsBGAL) onto Sephadex and chitosan beads using response surface methodology and its applications //Bioresource Technology. – 2009. – Т. 100. – №. 10. – С. 26672675. 1. Vieira D. C. et al. Неприменимо Hydrolysis of lactose in whole milk catalyzed by β-galactosidase from Kluyveromyces fragilis immobilized on chitosanbased matrix //Biochemical engineering journal. – 2013. – Т. 81. – С. 54-64. 2. Ansari S. A., Husain Q. Lactose hydrolysis from milk/whey in batch and continuous processes by concanavalin A-Celite 545 immobilized Aspergillus oryzae β galactosidase //Food and Bioproducts processing. – 2012. – Т. 90. – №. 2. – С. 351-359. 3. Ansari S. A. et al. Cost в биологической коммерческий набор жидкости: Гексокиназный метод2 аскорбиновую Недостатки: кислоту, 1. Работа только на мочевую анализаторах или кислоту, фотометрах с УФбилирубин. При диапазоном (340 нм) этом, кинетическим методом соответственно, 2. Необходимость доля перекиси, предварительной принимающая депротеинизации и участие в центрифугирования окислении хромогена, снижается, что приводит к занижению результата 2по глюкозе. Доступность лактозы Минимальные трудозатраты на подготовку опыта Требуются Метод с ONPF2 дополнительные Недостатки: действия для 1. Необходимость получения импортного реактива физико2. Определение охимических нитрофенола затратнее по параметров времени в сравнении с молока в случае определением глюкозы необходимости Гидролиз молочной лактозы βгалактозидазой3 Недостатки: 1. Необходимо предварительно отделять жир на сепараторе 2. Короткий срок годности субстрата Иммобилизация фермента Влияние рН effective surface functionalization of silver nanoparticles for high yield immobilization of Aspergillus oryzae βgalactosidase and its application in lactose hydrolysis //Process Biochemistry. – 2012. – Т. 47. – №. 12. – С. 24272433. Адсорбционный И.В. Шкутина, О.Ф. метод Стоянова, В.В. Лунина, Сорбционные и хроматографические процессы, 9, 2, 247-253 (2009). pH-метр Бейтс Р. Определение pH. Теория и практика / пер. с англ. под ред. акад. Б. П. Никольского и проф. М. М. Шульца. — 2 изд. — Л. : Химия, 1972. ±5% Не требует нагрева, специфического оборудования и реактивов Не подходит для многих немодифицирова нных полисахаридов, т.к. тогда десорбция белка превысит 5% Метод синтеза адсорбентов, «настроенных» на целевой объект Недостатки: Не подходит для полисахаридов растительного происхождения Метод сшивки глутаральдегидом Недостатки: Сложнее адсорбционного метода, дольше. Но вероятно будет применено для нативной целлюлозы 0.04 – 0.03 рН 1. Позволяет измерять pH Обслуживание Кислотно-основное в более широком прибора титрование диапазоне и более точно длительнее по Недостатки: (до 0,01 единицы pH) времени в 1. Трудоемкий 2. Позволяет измерять pH сравнении с 2. Субъектиный непрозрачных и цветных индикаторными 3. Необходимо расчёты, растворов полосками выше вероятность ошибки Кислотно-основные индикаторы Недостатки: 1. Одноразовые 2. Оценка цвета субъективна 3. Низкая точность Универсальный индикатор Недостатки аналогичны кислотно-основным индикаторам