Определение группы крови. Пробы на индивидуальную совместимость.

Определение группы крови.
Постановка проб на индивидуальную
совместимость. Rh – совместимость,
проведение биологической пробы
Рядинских Дмитрий
Лечебный факультет
411 группа.
К настоящему времени известно около 500 антигенов форменных элементов и плазмы крови,
из них более 250 - антигены эритроцитов. Антигены связаны в антигенные системы. Их более
40, причём половину составляют системы эритроцитов. В трансфузиологии играют роль
клеточные системы.
В эритроцитах человека содержатся такие системы, как АВ0, Rh-фактор, Келл, Кидд, Лютеран
и др. В трансфузиологии основную роль играют системы АВ0 и Rh-фактора.
В систему АВ0 входят агглютиногены (антигены) А и В и агглютинины (антитела) α и β.
Агглютиногены содержатся в эритроцитах, агглютинины - в сыворотке крови. Одновременное
нахождение в крови одноимённых компонентов (А и α, В и β) невозможно, так как их встреча
приводит к реакции изогемагглютинации.
Соотношение агглютиногенов А и В и агглютининов и определяет четыре группы крови:
• Группа I - (0): в эритроцитах нет агглютиногена, а имеются агглютинины α и β.
• Группа II - (А): в эритроцитах содержится агглютиноген А, в сыворотке - агглютинин β.
• Группа III - (В): в эритроцитах - агглютиноген В, в сыворотке - агглютинин α.
• Группа IV - IV(АВ): в эритроцитах содержатся агглютиногены А и В, в сыворотке
агглютининов не содержится.
Определение групп крови по стандартным
изогемагглютинирующим сывороткам
Оснащение:
 два комплекта стандартных гемагглютинирующих сывороток I(0), II(А), III
(В) групп двух различных серий и одна ампула сыворотки IV(АВ) (каждая
ампула стандартной сыворотки должна иметь паспорт-этикетку с
указанием группы крови, номера серии, титра, срока годности, места
изготовления)
 флакон с изотоническим раствором хлорида натрия с пипеткой
 чисто вымытая сухая тарелка
 предметные стекла
 стерильные копьевидные иглы для прокола кожи пальца
 стерильные марлевые шарики
 спирт
Определение проводят в помещении с хорошим освещением, при температуре
от 15 до 25 ° С.
Метод определения
Тарелку делят цветным карандашом на четыре квадрата и в направлении по часовой
стрелке обозначают квадраты I(0), II (А), III (В). В соответствующий квадрат тарелки
пипеткой наносят крупную каплю сыворотки двух серий I(0), II (А), III (В) групп.
Подушечку пальца обрабатывают спиртом и делают прокол кожи иглой-копьём.
Первую каплю крови снимают марлевым шариком, последующие капли разными
уголками предметного стекла вносят последовательно в капли сыворотки и тщательно
размешивают. Капля вносимой крови должна быть в 5-10 раз меньше капли сыворотки.
Затем путём покачивания тарелки тщательно перемешивают кровь с сывороткой.
Предварительные результаты оценивают через 3 мин, после чего добавляют каплю
изотонического раствора хлорида натрия, вновь смешивают путём покачивания тарелки
и через 5 мин проводят окончательную оценку реакции агглютинации
При положительной реакции изогемагглютинации хлопья и зёрнышки из склеившихся
эритроцитов не расходятся при добавлении изотонического раствора хлорида натрия и
перемешивании. При отрицательной реакции капли сыворотки на тарелке прозрачные,
равномерно розового цвета, не содержат хлопьев и зёрен.
Возможны следующие четыре комбинации реакций агглютинации со стандартными
сыворотками I(0), II(А), III(В) групп:
1. Все три сыворотки в обеих сериях не дают агглютинации. Исследуемая кровь - I(0)
группы.
2. Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой II(А) группы обеих серий
и положительная с сыворотками I(0) и III(В) групп. Исследуемая кровь - II(А)
группы.
3. Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой III(В) группы в обеих
сериях и положительная с сывороткой I(0) и III(А) групп. Исследуемая кровь - III(В)
группы.
4. Сыворотки I(0), II(А), III(В) групп дают положительную реакцию в обеих сериях.
Кровь принадлежит к IV(АВ) группе. Но прежде чем дать такое заключение,
необходимо провести реакцию изогемагглютинации со стандартной сывороткой
IV(АВ) группы по той же методике. Отрицательная реакция изогемагглютинации
позволяет окончательно отнести исследуемую кровь к IV(АВ) группе.
Реакция изогемагглютинации
Определение группы крови по системе АВ0 с
помощью моноклональных антител анти-А и
анти-В (цоликлоны анти-А и анти-В )
Цоликлоны анти-А и анти-В применяют для определения группы крови человека по
системе АВ0 вместо стандартных изогемагглютинирующих сывороток путём выявления
антигенов А и В в эритроцитах стандартными антителами, содержащимися в
цоликлонах.
Определяют группу крови при температуре от 15 до 25 °С. На фарфоровую пластину или
маркированную тарелку наносят по одной большой капле цоликлонов анти-А и антиВ,
рядом наносят каплю исследуемой крови в 10 раз меньшего размера и смешивают
отдельными палочками или уголками предметных стекол. Пластинку слегка покачивают
и наблюдают за реакцией в течение 2,5 мин. Реакция обычно наступает в первые 3-5 с и
проявляется образованием мелких красных агрегатов, а затем хлопьев.
Возможны следующие варианты реакции агглютинации:
1. Агглютинация отсутствует с цоликлонами анти-А и анти-В, кровь не содержит
агглютиногенов А и В - исследуемая кровь группы I (0).
2. Агглютинация наблюдается с цоликлонами анти-А, эритроциты исследуемой крови
содержат агглютиноген А - исследуемая кровь группы II(А).
3. Агглютинация наблюдается с цоликлоном анти-В, эритроциты исследуемой крови
содержат агглютиноген В - исследуемая кровь группы III (В).
4. Агглютинация наблюдается с цоликлонами анти-А и анти-В, эритроциты содержат
агглютиногены А и В - исследуемая кровь группы IV(АВ)
Определение Rh-фактора
Исследование крови на резус-принадлежность методом конглютинации проводят с
помощью специальных сывороток анти-Rh в лабораторных условиях. Предварительно
определяют групповую принадлежность (по системе АВ0).
Оснащение:
• две различные серии стандартных сывороток анти-Rh, соответствующих групповой
принадлежности определяемой крови, или совместимые в групповом отношении
стандартные отмытые одногрупповые резус-положительные и резусотрицательные
эритроциты
• чашка Петри
• водяная баня
• пипетки для сывороток
• предметные стёкла или стеклянные палочки.
Метод определения
На чашку Петри наносят подряд три большие капли сыворотки анти- Rh одной серии и
параллельно - три капли сыворотки другой серии, получая два горизонтальных ряда
сывороток.
Затем в первый вертикальный ряд сывороток обеих серий вносят по небольшой капле
исследуемой крови (соотношение сыворотки и крови 10:1 или 5:1), в средний ряд - по
такой же капле стандартных резус-положительных эритроцитов (контроль активности), в
третий ряд - резус-отрицательные стандартные эритроциты (контроль специфичности).
Отдельной для каждой капли стеклянной палочкой или углом предметного стекла
тщательно перемешивают сыворотку и эритроциты, чашки закрывают крышкой и
помещают на водяную баню при температуре 46-48 °С.
Спустя 10 мин учитывают результат, просматривая чашку в проходящем свете.
В капле со стандартными резус-положительными эритроцитами должна быть
агглютинация, с резусотрицательными она отсутствует.
Проба на индивидуальную совместимость с
применением 33% раствора полиглюкина
(проба на резус - совместимость).
Пробу проводят в течение 5 минут в пробирке без подогревания. Для пробы применяется 33% раствор
полиглюкина, приготовленный в аптеке специально для лабораторных целей.
На пробирке надписывают фамилию, инициалы, группу крови больного и фамилию, инициалы, группу
крови донора, также номер контейнера с кровью. На дно пробирки пастеровской пипеткой помещают 2
капли (0,1 мл) сыворотки реципиента, туда вносят одну каплю (0,05 мл) эритроцитов (крови) донора и
добавляют 1 каплю (0,1 мл) 33% раствора полиглюкина. Пробирки наклоняют до горизонтального
положения, слегка потряхивая, затем медленно вращают таким образом, чтобы содержимое пробирки
растеклось тонким слоем по её стенкам.
Такое растекание содержимого пробирки по стенкам делает реакцию более выраженной. Вращение
пробирки следует продолжать не менее 3 минут. Через 3 – 5 минут в пробирку доливают 2 – 3 мл
изотонического раствора натрия хлорида и перемешивают содержимое путём 2 – 3 кратного острожного
переворачивания (перевёртывания) пробирки, не взбалтывая.
Результат учитывают, просматривая пробирку на свет невооружённым глазом или через лупу:
• Если в пробирке наблюдается агглютинация эритроцитов (в виде взвеси мелких или крупных
комочков, иногда в виде хлопьев, на фоне просветлённой или обесцвеченной жидкости), то кровь
(эритроциты) донора несовместима с кровью (плазмой) больного и не должна быть ему перелита.
•
Если содержимое пробирки осталось равномерно окрашенным и в нем нет признаков агглютинации
эритроцитов, то кровь (эритроциты) донора совместима с (кровью) плазмой больного.
Проба на индивидуальную совместимость на
плоскости при комнатной температуре
Пробу проводят в течение 5 минут. Для исследования используют пластинку (чашку Петри), на которой необходимо
написать фамилию, инициалы и группу крови больного, фамилию, инициалы и группу крови донора и номер
контейнера с кровью.
На чистую сухую пластинку (чашку Петри) наносят 2 – 3 капли сыворотки (0,1 мл) реципиента из пробирки и туда
же добавляют маленькую каплю (0,01 мл) крови донора из контейнера, чтобы соотношение сыворотки больного и
крови донора было 10 : 1 (для удобства рекомендуется сначала поместить несколько капель крови донора из трубки
контейнера в отдельное углубление, а затем оттуда концом сухой стеклянной палочки перенести маленькую каплю
донорской крови в сыворотку больного для перемешивания).
Эритроциты (кровь) донора перемешивают с сывороткой реципиента стеклянной палочкой. Периодически
пластинку слегка покачивают в течение 5 минут, одновременно наблюдая за ходом реакции (по истечении
указанного времени в реагирующую смесь можно добавить 1 – 2 капли физиологического раствора для снятия
возможной неспецифической агрегации эритроцитов).
Результат оценивают через 5 минут:
• Если в смеси сыворотки больного и эритроцитов донора наступила агглютинация эритроцитов (агглютинаты
видны сначала в виде мелких, затем крупных комочков на фоне почти обесцвеченной жидкости), то эритроциты
крови донора несовместимы с плазмой крови больного, поэтому кровь донора не может быть ему перелита.
•
Если же смесь эритроцитов донора и сыворотки больного по истечении 5 минут остаётся однотонно
окрашенной, без признаков агглютинации, то эритроциты (кровь) донора совместимы с плазмой (кровью)
реципиента по групповым антигенам (системы АВ0).
Биологическая проба.
Пробу проводят перед началом переливания трансфузионной среды. Существует
большое количество антигенов донорской крови и антител сыворотки реципиента,
которые могут не проявить себя в предыдущих двух пробах на индивидуальную
совместимость и могут стать причиной развития осложнений при переливании.
Для исключения индивидуальной несовместимости, которая не могла быть выявлена
предыдущими пробами, проводят ещё одну пробу на совместимость – биологическую
пробу.
Метод проведения
Струйно переливают 10 мл гемотрансфузионной среды, после чего трансфузию почти полностью
прекращают. В течение 3х минут наблюдают за реципиентом. Состояние больного во время пробы
оценивают на основании субъективных симптомов (при выяснении жалоб, очень мнительным больным
не задают наводящих вопросов) и результатов объективного исследования (оценка общего состояния
больного, его внешнего вида, цвета кожи, контроль пульса, дыхания, артериального давления,
измерение температуры тела).
При отсутствии признаков несовместимости вновь (во второй раз) струйно переливают 10 мл
компонента крови и опять наблюдают за больным 3 минуты.
При отсутствии явлений несовместимости и на этот раз, вновь (в третий раз) струйно вливают 10 мл
донорской среды а наблюдают ещё 3 минуты.
Отсутствие признаков несовместимости и на этот раз даёт врачу право продолжать гемотрансфузию
(обычно со скоростью около 50 капель в минуту). Чаще кровь, её компоненты переливают капельно, а
струйно, при необходимости, лучше переливать кровезаменители.
При проведении трёхкратной биологической пробы в трёхминутные перерывы возможно
тромбирование иглы в вене. Во избежание этого во время этих трёхминутных перерывов можно
проводить медленное капельное (около 20 капель в минуту) введение донорской среды или введение с
необходимой скоростью изотонического раствора.