pavlov
реклама
На правах рукописи ПАВЛОВ МАКСИМ НИКОЛАЕВИЧ БИОХИМИЧЕСКИЙ СТАТУС НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ ПРИ СОЧЕТАННОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ЭНТЕРОСОРБЕНТА, БИОЦИДНОГО ПРЕПАРАТА И РЕОЛОГИЧЕСКИХ СРЕДСТВ 03.01.04 – биохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук . Курск – 2012 2 Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова» Научный руководитель: доктор ветеринарных наук Наумов Михаил Михайлович Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Шапошников Андрей Александрович кандидат биологических наук, доцент Чепелев Николай Александрович Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия имени В.Я. Горина» Защита состоится «_21_» ___февраля________ 2012 г. в _11__ часов на заседании диссертационного совета Д 220.040.03 при ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия им. проф. И.И. Иванова» по адресу: 305021, г. Курск, ул. К. Маркса, 70. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия им. проф. И.И. Иванова». Автореферат разослан «_18__» __января___ 2012 г. Ученый секретарь Г.Ф. Рыжкова 3 1. Общая характеристика работы Актуальность темы. Изучением клинической биохимии новорожденных телят при различных патологиях занимались многие ученые (В.Т. Самохин, 1982; А.А. Шапошников, 2003; М.И. Рецкий, 2004), что позволило им предложить и обосновать применение большого количества лечебно-профилактических средств. В настоящее же время одной из наиболее острых проблем современного животноводства остаются диспепсии телят. Так, например, летальность при диспепсиях достигает 20 – 80 % (В.Г. Данилов, 2001). Причиной высокого падежа больных диспепсией животных, в частности, является однобокий подход в лечении, при котором воздействия осуществляются, главным образом, на отдельные этиологические или патогенетические аспекты болезни. В связи с чем весьма перспективна разработка комплексных способов лечения заболевших диспепсией животных, при которых воздействуют на ряд основных причин и патогенетических сдвигов болезни. Кроме того, эффективность терапии больных диспепсией новорожденных телят во многом зависит от наших познаний в патогенезе болезни. Вопросам же агрегации и внутрисосудистой активации тромбоцитов новорожденных телят в доступной научной литературе уделено недостаточно внимания. Надо указать, что морфофункциональное состояние тромбоцитов может изменяться при различных патологиях, усугубляя при этом течение основного заболевания, а в ряде случаев выступая и в качестве главного нарушения (А.С. Шитикова, 1997; Д.Г. Чинчаладзе, 2006). Поэтому изучение агрегационной функции и внутрисосудистой активности тромбоцитов новорожденных телят в норме и при диспепсии является актуальной и заслуживающей пристального внимания проблемой. Исходя из вышесказанного, нами было предложено сочетанное использовании энтеросорбента ПолисорбВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) в качестве нового комплексного способа лечения заболевших диспепсией телят с коррекцией возникающих нарушений агрегации тромбоцитов (АТ) и их внутрисосудистой активации (ВАТ). Испытания указанного способа были проведены в рамках данной работы. Цель работы. Определить биохимический статус новорожденных телят при сочетанном использовании энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида), применяемых для лечения диспепсии и коррекции патологической активации тромбоцитов. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи исследований: 1. Изучить изменения агрегации и внутрисосудистой активации тромбоцитов у новорожденных телят, больных диспепсией, по сравнению со здоровыми новорожденными телятами. 2. Установить влияние сочетанного использования энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) 4 на биохимический статус новорожденных телят, их клиникофизиологическое состояние, морфологические свойства крови. 3. Апробировать в промышленных условиях сочетанное использование энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) в качестве способа лечения больных диспепсией телят с учетом необходимости коррекции нарушений АТ и ВАТ. Научная новизна. Впервые изучено влияние сочетанного использования Полисорба-ВП, Биопага-Д, реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида на биохимический статус новорожденных телят, их клинико-физиологическое состояние, морфологические свойства крови. Установлено, что при сочетанном использовании больным диспепсией новорожденным телятам указанных средств не наблюдается отрицательного влияния на белковый обмен, активность ферментов переаминирования, содержание общего билирубина и средних молекул, происходит снижение интенсивности пероксидного окисления липидов плазмы крови и тромбоцитов. Впервые изучены показатели АТ и ВАТ у новорожденных телят, больных простой и токсической диспепсией, в разные стадии болезни. Теоретическая и практическая значимость работы. Дано биохимическое обоснование сочетанного использования энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) в качестве способа лечения больных диспепсией новорожденных телят с коррекцией патологической активации тромбоцитов (патент РФ на изобретение № 2377995). Показан высокий терапевтический эффект и дана экономическая оценка использования предложенного способа для лечения больных телят. На основе полученных данных по агрегации и внутрисосудистой активации тромбоцитов предложен новый способ прогнозирования развития токсической формы диспепсии у новорожденных телят с начальными признаками диспепсии (патент РФ на изобретение № 2419093). На защиту выносятся следующие основные положения: 1. Индуцированная агрегация и внутрисосудистая активация тромбоцитов больных диспепсией новорожденных телят в разные стадии болезни. 2. Биохимический статус новорожденных телят, их клиникофизиологическое состояние, морфологические свойства крови при сочетанном использовании энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида). 3. Сочетанное использование энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) в качестве способа лечения больных диспепсией новорожденных телят с коррекцией патологической активации тромбоцитов. Апробация работы и публикации. Материалы диссертационной работы доложены и одобрены на: Международной научной конференции по 5 патофизиологии животных, г. Санкт- Петербург, 10 – 12 мая 2006 г.; Международной научно-производственной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных», посвященной 100летию со дня рождения профессора А.А. Авророва, г. Воронеж, 22 – 23 июня 2006 г.; Международном научно-практическом конгрессе «Актуальные проблемы ветеринарной медицины», г. Санкт-Петербург, 28 – 29 августа 2006 г.; Всероссийской научно-практической конференции «Региональные проблемы повышения эффективности агропромышленного комплекса», г. Курск, 20 – 22 мая 2007 г.; Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины», посвященной 125-летию ветеринарии Курской области, г. Курск, 23 мая 2008 г. По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК, и 1 монография. Получено 2 патента РФ на изобретения. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 150 страницах компьютерного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, предложения для производства, список литературы, приложения. Список литературы состоит из 246 источников, в том числе 68 иностранных. Работа иллюстрирована 24 таблицами и 3 рисунками. 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Основным объектом исследования являлись новорожденные телята черно-пестрой породы до 10-дневного возраста при нормальном состоянии и с диспепсией. Работа проводилась в два этапа. На первом этапе на базе ФГУП «Учебно-опытное хозяйство «Знаменское» КГСХА имени профессора И.И. Иванова» были изучены основные клинико-биохимические показатели, АТ и ВАТ новорожденных телят в норме и при диспепсии. Для этого по принципу аналогов с учетом происхождения, возраста и живой массы при рождении были сформированы 2 группы телят (рис.1). Условия содержания, кормления и ухода Исследования АТ, ВАТ, перекисного окисления липидов, антиокислительной активности, эндогенной интоксикации, клиникифизиологических показателей, морфологических свойств крови Клинически здоровые (n=22) Новорожденные телята чернопестрой породы до 10-дневного возраста В простой форме (n=10) Больные диспепсией (n=17) В токсической форме (n=7) Рис.1. Схема опыта № 1 6 за животными были одинаковыми. Агрегационную функцию тромбоцитов (АТ) определяли визуальным микрометодом Шитиковой А.С. (1984). Внутрисосудистую активацию тромбоцитов оценивали визуально с использованием фазовоконтрасного микроскопа (А.С. Шитикова, 1997). При этом определяли процентное соотношение различных в зависимости от активации форм тромбоцитов: дискоцитов, дискоэхиноцитов, сфероцитов, сфероэхиноцитов и биполярных форм тромбоцитов, а также производили подсчет суммы активных форм тромбоцитов, определяли число малых, средних и больших агрегатов на 100 свободных кровяных пластинок. На втором этапе исследований на базе СХПК «Имени Черняховского» Курского района Курской области были проведены испытания сочетанного использования энтеросорбента, биоцидного препарата и реологических средств. Схема опыта второго этапа работы представлена в таблице 1. Таблица 1 – Схема опыта второго этапа исследований Группа Количество Получаемое лечение Дозировка препаратов голов в группе I 10 Препарат «Биопаг-Д» II 10 Препарат «Биопаг-Д» III 10 IV 10 V 10 Реополиглюкин с глюкозой Изотонический раствор натрия хлорида Энтеросорбент «Полисорб-ВП» Энтеросорбент «Полисорб-ВП» Реополиглюкин с глюкозой Изотонический раствор натрия хлорида Препарат «Биопаг-Д» Энтеросорбент «Полисорб-ВП» VI 10 0,1 мл 0,1%-ного раствора массы теленка 2 раза в молозивом-молоком 0,1 мл 0,1%-ного раствора массы теленка 2 раза в молозивом-молоком на 1 кг живой сутки внутрь с на 1 кг живой сутки внутрь с 5 – 10 мл на 1 кг живой массы в сутки внутривенно 50 – 400 мл на животное внутривенно 0,2 г/кг массы тела животного внутрь в виде водной взвеси за 1 час перед дачей молозивамолока или через 2 часа после кормления 0,2 г/кг массы тела животного внутрь в виде водной взвеси за 1 час перед дачей молозивамолока или через 2 часа после кормления 5 – 10 мл на 1 кг живой массы в сутки внутривенно 50 – 400 мл на животное внутривенно 0,1 мл 0,1%-ного раствора на 1 кг живой массы теленка 2 раза в сутки внутрь с молозивом-молоком 0,2 г/кг массы тела животного внутрь в виде водной взвеси за 1 час перед дачей молозивамолока или через 2 часа после кормления Реополиглюкин с глюкозой Изотонический раствор натрия хлорида 5 – 10 мл на 1 кг живой массы в сутки внутривенно 50 – 400 мл на животное внутривенно Тилан-50 (тилозин-50) 0,2 мл/кг внутримышечно 1 раз в сутки до выздоровления Внутрь утром и вечером по 0,5 л Отвар конского щавеля на изотоническом растворе натрия хлорида 7 Биохимический статус новорожденных телят, их клиникофизиологическое состояние, морфологические свойства крови при сочетанном применении энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д, реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида, а также терапевтическая эффективность с учетом эффективности коррекции нарушений АТ и ВАТ предложенного способа была определена в сравнении с результатами от отдельного использования Полисорба-ВП, Полисорба-ВП + реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида; Биопага-Д; Биопага-Д + реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида и от лечения, применяемого в хозяйстве. Экспериментальные группы второго этапа исследований формировались из телят с начальными признаками диспепсии по принципу аналогов (с учетом возраста, массы тела и клинического состояния телят). Условия содержания, кормления и ухода для всех животных были одинаковыми. Клинические исследования проводили общепринятыми методами с определением габитуса, температуры тела, исследования слизистых оболочек, кожи, лимфатических узлов и систем организма: кровообращения, дыхания, пищеварения, мочевой и нервной. Морфо-биохимический анализ крови включал определение следующих компонентов: эритроцитов и лейкоцитов путем подсчета их в счетной камере Горяева; гематокритной величины – по Й. Тодорову (1963); количество общего белка – рефрактометрическим методом; белковых фракций – унифицированным методом электрофоретического разделения белков сыворотки крови в агаровом геле. Содержание средних молекул в плазме крови определяли спектрофотометрически по методу Габриэляна Н.И., Липатовой Л.И. (1984). Интенсивность течения процессов пероксидного окисления липидов (ПОЛ) в плазме крови и отмытых и ресуспензированных тромбоцитах оценивали по концентрации малонового диальдегида (МДА) (А.А. Чиркин, 2002). Билирубин в сыворотке крови определяли по диазореакции (метод Ендрассика–Клеггорна–Грофа); активность ферментов аспартатаминотрансферазы (АсАТ) и аланинаминотрансферазы (АлАТ) в сыворотке крови устанавливали динитрофенилгидрозоновым методом (И.П. Кондрахин, 2004). Антиокислительную активность (АОА) плазмы крови и тромбоцитов определяли путем установления способности биологического материала тормозить окислительно-восстановительную реакцию в системе Fe2+ – 2,6-дихлорфенолиндофенол (2,6-ДХФИФ) (И.П. Кондрахин, 2004). Тромбоциты для исследования выделяли из богатой тромбоцитами плазмы дифференциальным центрифугированием. Статистическую обработку данных производили на ПК с помощью программы Exсel из пакета прикладных программ MS Office 2003. Результаты представлены в виде среднего арифметического и стандартной ошибки. Достоверность различий между показателями устанавливали с помощью критерия Крамера-Уэлча (Д.А. Новиков, 2005) при заданном уровне значимости 0,05. 8 3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 3.1. Индуцированная агрегация и внутрисосудистая активация тромбоцитов клинически здоровых и больных диспепсией новорожденных телят Средний показатель агрегации тромбоцитов клинически здоровых новорожденных телят с 1 по 10 сутки жизни составил: 29,92±1,16с для коллагена; 38,97±1,61с для АДФ; 41,02±1,61с для ристомицина и 97,05±4,01с для адреналина. Средние показатели внутрисосудистой активации тромбоцитов здоровых новорожденных телят оказались равными следующим величинам: 82,02±0,72 % – доля дискоцитов; 17,98±0,72 % – сумма активных форм тромбоцитов. Среднее содержание дискоэхиноцитов, сфероцитов, сфероэхиноцитов и биполярных форм тромбоцитов в крови здоровых новорожденных телят с 1 по 10 сутки жизни составило 10,27±0,42; 4,64±0,20; 2,57±0,08; 0,51±0,03 процентов соответственно. Среднее число малых агрегатов равнялось 3,59±0,14; а средних и больших агрегатов на 100 свободных тромбоцитов – 0,14±0,03. В начале простой диспепсии установленные параметры агрегации тромбоцитов хотя и опережали средние показатели, но находились в пределах границ, свойственных здоровым новорожденным телятам. В разгар же болезни отмечалось более существенное усиление индуцированной агрегации со всеми используемыми агонистами. Так феномен снежной бури у больных диспепсией телят в простой форме в разгар болезни наступал быстрее, чем в среднем у здоровых новорожденных особей на 4,62с при использовании коллагена; на 6,03с – с АДФ; на 4,85с – с ристомицином и на 21,52с быстрее при использовании адреналина. Ускорение составило 15,44; 15,47; 11,82 и 22,17 процента для коллагена, АДФ, ристомицина и адреналина соответственно (р≤0,05). В стадию выздоровления параметры агрегации тромбоцитов телят, больных простой диспепсией, возвратились в границы, характерные для здоровых новорожденных особей, и составили 29,29±0,07с при применении коллагена; 37,06±0,07с при применении АДФ; 39,49±0,08с при применении ристомицина и 94,07±0,06с при применении адреналина. При токсической диспепсии в начале болезни результаты агрегации тромбоцитов укладывались в рамки естественных колебаний, свойственных здоровым новорожденным телятам. Однако уже на данном этапе болезни проявлялось заметное усиление агрегации тромбоцитов. Так ускорение в сравнении с показателями АТ в начале простой диспепсией составило 0,66с при использовании коллагена; 0,83с – с АДФ; 0,77с – с ристомицином и 2,22с при применении адреналина или 2,33; 2,27; 1,99 и 2,43 процента соответственно (р≤0,05). Но наиболее ярко нарушения агрегации тромбоцитов проявились в разгар токсической диспепсии, когда феномен снежной бури обнаруживался значительно раньше, чем у здоровых новорожденных телят. Так при использовании индуктора коллагена ускорение АТ происходило на 12,33с или 41,21%; с АДФ – на 15,94с или 40,90%; с ристомицином – на 16,91с или 41,22%; и при применении адреналина агрегация ускорялась на 39,98с или 41,19%. АТ в разгар токсической диспепсии наступала также быстрее (на 30,47; 9 30,08; 33,34 и 24,44 процента для коллагена, АДФ, ристомицина и адреналина соответственно), чем и в аналогичный период у телят с простой диспепсией, что свидетельствует о более глубоких изменениях функционирования тромбоцитов при данной форме болезни. Об этом говорит и тот факт, что в стадию выздоровления от токсической диспепсии установленные параметры агрегации тромбоцитов, равные 25,47±0,11с для коллагена; 34,13±0,14с для АДФ; 36,33±0,18с для ристомицина и 87,67±0,48с для адреналина, не возвращались к значениям начала болезни и соответственно отличались от данных здоровых новорожденных телят. У телят с простой диспепсией отмеченные в начале болезни и в стадию выздоровления параметры ВАТ укладывались в пределы естественных колебаний здоровых новорожденных телят, тогда как показатели в разгар простой диспепсии выходили за эти пределы. При сопоставлении со средними значениями здоровых телят в разгар простой диспепсии количество дискоцитов снижалось, а сумма активированных форм тромбоцитов увеличивалась на 3,22 %. При этом доля тромбоцитов с начальными признаками активации – дискоэхиноцитов возрастала на 1,83%; а более активированных сфероцитов и сфероэхиноциов – на 0,86 и 0,53 процента соответственно (р≤0,05). Одновременно увеличивалось число малых агрегатов на 0,71 % и средних и больших агрегатов – на 0,26 % при р≤0,05. Выявить зависящее от стадии заболевания изменение числа биполярных форм тромбоцитов при простой диспепсии не удалось. Их содержание составило 0,50 % и недостоверно отличалось от рассчитанного среднего показателя здоровых новорожденных телят. При токсической диспепсии были обнаружены существенные сдвиги во внутрисосудистой активации тромбоцитов. По сравнению со здоровыми новорожденными телятами уже в начале токсической диспепсии отмечалось достоверное снижение на 2,45% числа интактных кровяных пластинок при одновременном увеличении на тот же процент суммы активных форм тромбоцитов, происходящем как за счет дискоэхиноцитов, так и за счет более активированных форм – сфероцитов и сфероэхиноцитов, а также биполярных тромбоцитов. Кроме того, в начале токсической диспепсии в 1,39 раза увеличилось число малых и в 5,07 раза – число средних и больших агрегатов на 100 свободных кровяных пластинок. Описанные тенденции повышения внутрисосудистой активации тромбоцитов при токсической диспепсии усилились в разгар болезни, когда содержание дискоцитов снизилось, а сумма активированных форм тромбоцитов увеличилась на 15,02% в сопоставлении со средними данными здоровых новорожденных телят. При этом доля дискоэхиноцитов возросла на 6,31%; сфероцитов – на 5,07% и сфероэхиноцитов – на 3,43% при р≤0,05. Биполярных форм в разгар болезни насчитывалось 0,71±0,18%, что соответствовало уровню в начале диспепсии. Число малых агрегатов составило 12,14±0,26; а средних и больших агрегатов насчитывалось 4,43±0,37 на 100 свободных тромбоцитов, что превышало средние показатели здоровых телят в 3,38 и 31,64 раза соответственно (р≤0,05). В стадию выздоровления количество неактивированных дискоцитов 10 повышалось до 78,33±0,42%, но еще оставалось существенно (на 3,69 %) ниже значений, свойственных здоровым новорожденным телятам. Сумма активных форм тромбоцитов в стадию выздоровления от токсической диспепсии снижалась до 21,67±0,42%, но была на 3,69 % больше средних значений здоровых телят. В этот период болезни происходило также снижение числа малых агрегатов на 57,41 % и числа средних и больших агрегатов на 84,88 % от данных в разгар болезни (р≤0,05). Из представленного выше материала видно, что при диспепсии (преимущественно в разгар болезни) происходит патологическая активация тромбоцитов: усиливается агрегационная функция с одновременными снижением в кровотоке доли дискоцитов и увеличением суммы активных форм тромбоцитов. У больных телят в кровотоке увеличивается число малых, средних и больших агрегатов на 100 свободных кровяных пластинок. Описываемые тенденции более отчетливо проявляются при токсической диспепсии. Кроме того, в стадию выздоровления от токсической диспепсии параметры агрегационной функции и внутрисосудистой активации тромбоцитов достоверно отличаются от таковых у здоровых новорожденных телят, т.е. при выздоровлении от токсической диспепсии сохраняется повышенная функциональная активность тромбоцитов. В связи с чем возникает необходимость применять такое лечение заболевших диспепсией телят, которое кроме купирования диспепсии корректировало бы возникающую гиперактивность тромбоцитов. Апробирование такого лечения мы произвели в рамках второго этапа исследований. 3.2. Апробация в промышленных условиях сочетанного использования энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) Больным диспепсией новорожденным телятам применяли энтеросорбент Полисорб-ВП, биоцидный препарата Биопаг-Д, реополиглюкин с глюкозой и изотонический раствор натрия хлорида. Полисорб ВП – полифункциональный энтеросорбент на основе высокодисперсного кремнезема. Он обладает выраженными сорбционными и детоксикационными свойствами. В просвете желудочно-кишечного тракта препарат связывает и выводит из организма эндогенные и экзогенные токсические вещества различной природы. «БиопагД» – антимикробный препарат, изготовленный на основе полигексаметиленгуанидин хлорида, имеет широкий спектр биоцидного действия: он эффективен против грамположительных и грамотрицательных бактерий, различного рода грибов. Реополиглюкин с глюкозой уменьшает вязкость крови, восстанавливает кровоток в мелких капиллярах, нормализует артериальное и венозное кровообращение, предотвращает и снижает агрегацию форменных элементов крови, оказывает дезинтоксикационное действие. Входящая в состав препарата глюкоза усиливает реологическое действие препарата и служит дополнительным источником энергии. Раствор натрия хлорида изотонический применяется при обезвоживании различного 11 происхождения, в качестве дезинтоксикационного средства, при состояниях приводящих к дефициту ионов натрия, хлора. Хорошо совместим и рекомендуется для совместного использования с реополиглюкином. В результате сочетанного применения указанных средств планировалось купировать основные признаки диспепсии (диарею, обезвоживание, интоксикацию), восполнить возникающий дефицит в организме ионов натрия, снизить повышенную интенсивность процессов пероксидного окисления липидов, скорректировать нарушения со стороны агрегации тромбоцитов и их внутрисосудистой активации. Биохимический статус новорожденных телят, их клиникофизиологическое состояние, морфологические свойства крови при сочетанном применении указанных препаратов, а также терапевтическая эффективность с учетом эффективности коррекции нарушений АТ и ВАТ предложенного способа была определена в сравнении с результатами в группах животных при отдельном использовании Полисорба-ВП (I группа), Полисорба-ВП + реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида (II группа); Биопага-Д (III группа); Биопага-Д + реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида (IV группа) и от лечения, применяемого в хозяйстве (VI группа). 3.2.1. Биохимический статус больных диспепсией новорожденных телят при сочетанном использовании энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) В начале диспепсии содержание общего белка по группам подопытных телят колебалось от 57,35±0,53 до 59,98±0,47 г/л. При этом альбуминов насчитывалось от 25,77±0,87 до 26,57±0,88; альфа-глобулинов – от 10,29±0,85 до 11,14±0,53; бета-глобулинов – от 11,55±0,93 до 12,92±0,82 и гаммаглобулинов – от 9,19±0,66 до 9,65±0,81 г/л. В разгар диспепсии во всех группах больных телят происходило увеличение содержания общего белка и его фракций (табл. 2). В I группе уровень общего белка относительно начала диспепсии повысился на 6,99%, альбуминов – на 7,44%; альфа-глобулинов – на 7,01%; бета-глобулинов – на 4,54% и гамма-глобулинов – на 8,71%. Во II группе повышение составило 5,25% для общего белка и 5,90; 4,96; 3,33 и 7,25 процентов для альбуминов, альфа-глобулинов, бета-глобулинов и гаммаглобулинов соответственно. В III группе общий белок составил 63,12 г/л, что на 5,24% выше показателя в начале диспепсии. Содержание альбуминов в III группе увеличилось на 5,31%, альфа-глобулинов – на 6,81%; бета-глобулинов – на 2,25%; гамма-глобулинов – на 7,07%. В IV группе уровень общего белка повысился на 5,20%; альбуминов – на 5,37%; альфа-глобулинов – на 6,07%; бета-глобулинов – на 5,31% и гамма-глобулинов – на 4,56%. В V группе в разгар диспепсии содержание общего белка превысило значения начала болезни на 4,15%; альбуминов – на 4,06%; альфа-глобулинов – на 4,22%; бетаглобулинов – на 3,98% и гамма-глобулинов – на 4,57%. В VI группе подъем 12 содержания общего белка составил 7,20%; а по отдельным белковым фракциям повышение в сравнении с началом диспепсии составило 6,34; 11,08; 5,37 и 7,71 процентов для альбуминов, альфа-глобулинов, бета-глобулинов и гаммаглобулинов соответственно. Отмечаемая в разгар диспепсии гиперпротеинемия у телят всех групп обусловлена, по нашему мнению, развивающимся эксикозом. При этом чем выше гематокритная величина у телят, тем более выражено было повышение содержания общего белка и его фракций в крови. Таблица 2. Содержание общего белка и белковых фракций в крови больных диспепсией телят исследуемых групп в разгар диспепсии Группы животных I (n=10) Биопаг II (n=10) Биопаг + Реополиглюкин с глюкозой + Физраствор III (n=10) Полисорб IV (n=10) Полисорб + Реополиглюкин с глюкозой + Физраствор V (n=10) Биопаг + Полисорб + Реополиглюкин с глюкозой + Физраствор VI (n=10) контрольная Показатели альфаглобулины, г/л бетаглобулины, г/л гаммаглобулины, г/л общий белок, г/л альбумины, г/л 61,67±0,63 27,73±0,93 11,61±0,76 12,21±0,88 10,11±0,84 61,12±0,58 27,29±0,93 11,43±0,66 12,41±0,95 10,06±0,81 63,12±0,61* 27,98±0,90 11,77±0,64 13,21±0,92 10,15±0,79 62,33±0,55 27,68±0,92 11,53±0,71 13,10±0,86 10,09±0,79 61,43±0,71 27,41±0,93 11,61±0,64 12,81±0,52 9,61±0,73 61,48±0,65 27,83±0,91 11,43±0,90 12,17±0,97 10,06±0,85 * - р≤0,05 по сравнению с результатами в VI группе животных, находящихся на принятом в хозяйстве лечении В стадию выздоровления уровень общего белка и его фракций (г/л) у всех телят снижался до следующих величин: 58,62±0,58 – 59,99±0,56 – общий белок; 26,08±0,83 – 26,83±0,89 – альбумины; 10,76±0,92 – 11,33±0,55 – альфаглобулины; 11,88±0,79 – 12,86±0,85 – бета-глобулины; 9,37±0,67 – 9,64±0,78 – гамма-глобулины. 13 Белковый коэффициент (отношение альбуминов к глобулинам) во всех группах животных во все периоды диспепсии находился в пределах физиологических границ и колебался от 0,80 до 0,84. Активность аспартатаминотрансферазы (нмоль/с·л) в начале диспепсии у телят всех групп находилась в пределах 92,74±0,67 – 93,71±0,73 и по группам животных существенно не различалась. В разгар диспепсии активность АсАТ относительно начала болезни повышалась на 4,46% в I группе; 4,48% во II группе; 3,34% в III группе; 3,24% в IV группе; 2,26% в V группе и на 4,44% в VI группе. В стадию выздоровления происходило снижение активности АсАТ до 96,11±0,71 в I группе; 96,07±0,67 во II группе; 94,15±0,53 в III группе; 94,48±0,49 в IV группе; 93,21±0,57 в V группе и до 96,12±0,68 нмоль/с·л в VI группе (табл. 3). Таблица 3. Активность АсАТ у больных диспепсией телят исследуемых групп в разные стадии болезни Группы животных I (n=10) Биопаг II (n=10) Биопаг + Реополиглюкин с глюкозой + Физраствор III (n=10) Полисорб IV (n=10) Полисорб + Реополиглюкин с глюкозой + Физраствор V (n=10) Биопаг + Полисорб + Реополиглюкин с глюкозой + Физраствор VI (n=10) контрольная АсАТ, нмоль/с·л начало диспепсии разгар диспепсии 93,71±0,73 97,89±0,76 93,56±0,77 97,75±0,77 92,74±0,67 95,84±0,71* 93,01±0,66 96,02±0,69* 92,77±0,69 94,87±0,63* 93,68±0,74 97,84±0,72 стадия выздоровления 96,11±0,71 96,07±0,67 94,15±0,53* 94,48±0,49* 93,21±0,57* 96,12±0,68 * - р≤0,05 по сравнению с результатами в VI группе животных, находящихся на принятом в хозяйстве лечении Активность аланинаминотрансферазы (нмоль/с·л) от начала диспепсии к стадии выздоровления снижалась: в I группе от 83,40±0,61 до 83,03±0,55; во II группе от 83,11±0,75 до 83,01±0,68; в III группе от 82,02±0,63 до 81,12±0,59; в 14 IV группе от 82,56±0,71 до 82,04±0,69; в V группе от 82,15±0,58 до 81,82±0,60 и в VI группе от 83,11±0,64 до 82,93±0,61. Содержание в крови телят общего билирубина (мкмоль/л) в начале диспепсии колебалось от 4,59±0,33 до 4,71±0,22. В разгар болезни концентрация общего билирубина в сравнении с началом диспепсии повышалась на 3,83% у телят I группы; на 3,65% во II группе; на 3,05% в III группе; на 3,47% в IV группе; на 1,30% в V группе и на 2,97% в VI группе. В стадию выздоровления уровень общего билирубина в крови снижался до 4,82±0,23 в I группе; 4,81±0,26 во II группе; 4,67±0,32 в III группе; 4,69±0,21 в IV группе; 4,61±0,26 в V группе и до 4,80±0,23 в VI группе (табл. 4). Таблица 4. Содержание общего билирубина в крови больных диспепсией телят исследуемых групп в разные стадии болезни Группы животных I (n=10) Биопаг II (n=10) Биопаг + Реополиглюкин с глюкозой + Физраствор III (n=10) Полисорб IV (n=10) Полисорб + Реополиглюкин с глюкозой + Физраствор V (n=10) Биопаг + Полисорб + Реополиглюкин с глюкозой + Физраствор VI (n=10) контрольная Билирубин общий, мкмоль/л начало диспепсии разгар диспепсии 4,70±0,20 4,88±0,27 4,66±0,21 4,83±0,19 4,59±0,33 4,73±0,28 4,61±0,27 4,77±0,22 4,62±0,29 4,68±0,19 4,71±0,22 4,85±0,25 стадия выздоровления 4,82±0,23 4,81±0,26 4,67±0,32* 4,69±0,21* 4,61±0,26* 4,80±0,23 * - р≤0,05 по сравнению с результатами в VI группе животных, находящихся на принятом в хозяйстве лечении Описываемое повышение в разгар диспепсии активности АсАТ в крови телят всех групп является, на наш взгляд, малосущественным, поскольку не превышает верхних физиологических границ. А установленное снижение активности АлАТ от начала болезни к стадии выздоровления полностью вписывается в характерные для новорожденных телят особенности функционирования ферментной системы печени (снижение активности АлАТ с 15 увеличением возраста). При этом важно, что и уровень общего билирубина в крови телят, хотя и повышался в разгар диспепсии, но оставался в пределах физиологических норм. Все это указывает на отсутствие выраженных нарушений в функциональной активности печени. В начале диспепсии, установленная по концентрации малонового диальдегида, интенсивность пероксидного окисления липидов плазмы и тромбоцитов по группам телят достоверно не различалась. Аналогично и антиокислительная активность (ч·мин-1· ·10-3) плазмы и тромбоцитов в начале диспепсии по группам телят существенно не различалась и колебалась от 1,63±0,08 до 1,65±0,09 в плазме крови и от 1,79±0,07 до 1,82±0,11 в тромбоцитах. В разгар болезни происходило увеличение концентрации малонового диальдегида как в плазме крови, так и в тромбоцитах при одновременном снижении в исследуемых образцах антиокислительной активности. Наиболее выраженной эта тенденция была в I и II группах больных телят, у которых концентрация МДА в плазме превысила значения начала диспепсии на 50,59% (в I группе) и 51,72% (во II группе). В тромбоцитах увеличение содержания МДА составило 43,04 и 40,00 процентов для I и II группы соответственно. При этом АОА плазмы крови в I группе уменьшилась на 21,95%; а во II группе – на 22,70%. АОА тромбоцитов сократилась на 20,44% у животных I группы и на 18,99% – у животных II группы. Самым низким рост интенсивности пероксидного окисления липидов был в V группе. У животных данной группы в разгар диспепсии концентрация МДА превысила значения начала болезни в плазме крови на 35,71%; а в тромбоцитах – на 29,49%. Антиокислительная активность плазмы крови у животных V группы в сравнении с началом диспепсии была снижена на 12,43%; а АОА тромбоцитов – на 10,99%. В III группе концентрация МДА в плазме крови в разгар болезни была на 40,70% выше значений начала болезни, а концентрация МДА в тромбоцитах – на 37,18% выше. АОА плазмы крови и тромбоцитов животных данной группы была снижена на 17,58 и 15,39 процентов соответственно. В IV группе МДА в плазме крови в разгар диспепсии накопилось на 43,02% больше, чем в начале болезни; а в тромбоцитах – на 36,71% больше. При этом АОА плазмы крови была уменьшена на 18,29%; а АОА тромбоцитов – на 15,00%. У животных VI группы концентрация МДА в плазме крови в разгар диспепсии превысила значения начала болезни на 48,24%; а в тромбоцитах аналогичное превышение составило 38,75%. АОА плазмы крови и тромбоцитов у животных VI группы в разгар диспепсии была ниже начала болезни на 20,73 и 18,33 процента соответственно. В стадию выздоровления показатель интенсивности ПОЛ (концентрация МДА) в плазме крови и тромбоцитах всех телят, участвующих во втором этапе исследований, снижался до значений, сопоставимых с началом диспепсии (0,81±0,08 – 0,89±0,12 мкмоль/мл – содержание МДА в плазме; 0,74±0,05 – 0,79±0,07 мкмоль/мл – концентрация МДА в тромбоцитах). А антиокислительная активность (ч · мин-1·10-3) плазмы и тромбоцитов в стадию выздоровления была существенно ниже, чем в начале болезни, и колебалась в 16 следующих пределах: 1,50±0,08 –1,57±0,11 – АОА плазмы; 1,60±0,11 – 1,70±0,16 – АОА тромбоцитов. Уровень средних молекул с максимумом поглощения при 254 нм в крови телят в начале диспепсии по группам животных существенно не различался и составлял 0,39±0,03 – 0,41±0,04 усл.ед. В разгар диспепсии эндогенная интоксикация у телят всех групп относительно начала болезни достоверно усиливалась. Концентрация СМ254 составила 0,43±0,03 – в I и II группах; 0,41±0,02 – в III, IV и V группах и 0,42±0,03 усл.ед. – в VI группе, что превышало значения начала болезни на 7,50; 4,89; 5,13; 2,50; 2,50 и 5,00 процентов для I, II, III, IV, V и VI группы соответственно. В стадию выздоровления уровень СМ254 в крови телят всех групп снижался до 0,38±0,04 – в I группе; 0,36±0,03 – во II группе; 0,35±0,03 – в III группе; 0,33±0,02 – в IV группе; 0,32±0,02 – в V группе и 0,35±0,03 – в VI группе. 3.2.2. Влияние сочетанного использования энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) на клинический статус и морфологические свойства крови больных диспепсией новорожденных телят Исходные клиническое состояние и морфологические параметры крови по группам телят, участвующих во втором этапе исследований, существенно не различались. Температура тела больных диспепсией новорожденных телят в начале болезни колебалась от 39,20±0,04 до 39,31±0,08 ºС; частота сердечных сокращений в 1 минуту – от 124,70±0,94 до 125,80±0,81; а частота дыхания в 1 минуту – от 33,30±0,48 до 34,52±0,53. Эритроцитов в крови насчитывалось от 5,58±0,27 до 6,00±0,31 · 1012/л; лейкоцитов – от 8,44±0,30 до 8,70±0,33 · 109/л. Гематокритная величина находилась в пределах 39,43±0,29 – 39,68±0,35 об.%. В разгар диспепсии происходило снижение температуры тела телят, участвующих в эксперименте, при одновременном увеличении частоты сердечных сокращений и дыхательных движений в 1 минуту. Наиболее выраженной эта тенденция была у телят первой, третьей и шестой групп, а менее выраженной – во второй, четвертой и пятой группах. С увеличением гематокритной величины повышалось содержание эритроцитов и лейкоцитов в крови больных телят. Эритроцитов в разгар диспепсии насчитывалось в I группе 6,83±0,31; во II группе – 6,81±0,28; в III группе – 6,92±0,30; в IV группе – 6,91±0,27; в V группе – 6,89±0,23 и в VI группе – 6,77±0,41 · 1012/л. Лейкоцитов содержалось 9,31±0,45 в I группе; 9,29±0,44 во II группе; 9,07±0,46 в III группе; 8,97±0,37 в IV группе; 8,72±0,27 в V группе и 9,02±0,39 · 109/л в VI группе. Гематокритная величина (об.%) наиболее высокой была в I группе животных (43,38±1,40); во II группе – равнялась 42,51±1,47; в III группе – 41,86±1,54; в IV группе – 41,43±0,93; в V группе – 40,18±0,32 и в VI группе – 41,79±1,66. В стадию выздоровления во всех группах телят в сравнении с разгаром диспепсии повышалась температура тела, сокращались частота сердечных сокращений и дыхательных движений в 1 минуту. На фоне снижения 17 гематокритной величины уменьшалось содержание эритроцитов и лейкоцитов. При этом температура тела располагалась на уровне 39,12±0,05 – 39,32±0,06 ºС. Частота сердечных сокращений в 1 минуту колебалась от 104,11±1,31 до 109,67±4,07; а частота дыхания в 1 минуту – от 30,00±0,67 до 31,83±1,05. Эритроцитов насчитывалось от 6,20±0,26 до 6,78±0,14 · 1012/л; лейкоцитов – от 7,91±0,17 до 8,29±0,27 · 109/л. 3.2.3. Влияние сочетанного использования энтеросорбента ПолисорбВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) на агрегацию и внутрисосудистую активацию тромбоцитов больных диспепсией новорожденных телят В начале болезни показатели индуцированной агрегации во всех группах животных существенно не различались между собой и находились в границах, свойственных здоровым новорожденным телятам. В разгар болезни самой низкой и наиболее приближенной к значениям здоровых новорожденных телят была агрегационная функция тромбоцитов животных V группы, которым комплексно применяли энтеросорбент Полисорб-ВП, биоцидный препарат Биопаг-Д, реополиглюкин с глюкозой и изотонический раствор натрия хлорида. У них индуцированная агрегация равнялась с коллагеном 26,55±1,16; с АДФ – 33,17±1,61; с ристомицином – 36,26±1,61 и с адреналином – 75,63±3,24с. Замедление в сравнении с показателями VI контрольной группы составило 15,53% для коллагена; 10,75% для АДФ; 11,47% для ристомицина и 8,09% для адреналина (р≤0,05). Агрегация тромбоцитов в стадию выздоровления по всем группам животных находилась в пределах, свойственных здоровым новорожденным телятам. При определении исходного состояния внутрисосудистой активации тромбоцитов было установлено, что доля интактных дискоцитов, сумма активных форм тромбоцитов и число агрегатов кровяных пластинок различного размера различались несущественно. В разгар болезни максимальная доля интактных тромбоцитов отмечалась у телят V группы, комплексно получавших Полисорб-ВП, Биопаг-Д, реополиглюкин с глюкозой и изотонический раствор натрия хлорида . В их кровотоке содержалось 80,10±0,85% дискоцитов, а сумма активных форм кровяных пластинок составила 19,90±0,85%. Дискоэхиноцитов насчитывалось 11,30±0,54%, сфероцитов – 5,20±0,31% и сфероэхиноцитов – 2,90±0,23%, что на 2,20; 1,70 и 1,10 процента соответственно ниже, чем у животных VI контрольной группы. Число малых агрегатов по сравнению с контролем было уменьшено в 1,68 раза, а средних и больших – в 6,96 раза. Содержание биполярных форм кровяных пластинок в разгар диспепсии по группам животных достоверно не различалось. В стадию выздоровления во всех группах животных происходила коррекция внутрисосудистой активации тромбоцитов по количеству дискоцитов и сумме активных форм тромбоцитов, однако наиболее приближенными к оптимальным значениям здоровых телят были параметры, полученные в V группе, где животных лечили сочетанным 18 применением энтеросорбента, биоцидного препарата и гемореологических средств. 4. ВЫВОДЫ 1. У больных диспепсией новорожденных телят в сравнении с клинически здоровыми телятами происходит патологическая активация тромбоцитов: АТ в разгар простой диспепсии усиливается на 15,44% при применении коллагена; на 15,47% при применении АДФ; на 11,82% при использовании ристомицина и на 22,17% при использовании адреналина; в разгар токсической диспепсии аналогичное усиление составляет 41,21%; 40,90%; 41,21% и 41,19% для коллагена, АДФ, ристомицина и адреналина соответственно. 2. В кровотоке больных диспепсией новорожденных телят в сравнении со здоровыми телятами увеличивается сумма активированных тромбоцитов на 3,22% при простой диспепсии и на 15,02% при токсической диспепсии. Число малых агрегатов тромбоцитов возрастает на 0,71% при простой и в 3,38 раза при токсической диспепсии, а число средних и больших агрегатов – на 0,26% и в 31,64 раза при простой и токсической диспепсии соответственно. 3. Сочетанное использование энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) не влияет отрицательно на клинический статус, морфологические свойства крови, белковый обмен, активность ферментов переаминирования (АсАТ, АлАТ) и содержание общего билирубина в крови больных диспепсией новорожденных телят. 4. При сочетанном использовании энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) происходит снижение в сравнении с контролем интенсивности пероксидного окисления липидов (содержания МДА) плазмы крови и тромбоцитов на 9,52% и 9,01% соответственно. 5. При сочетанном использовании энтеросорбента Полисорб-ВП, биоцидного препарата Биопаг-Д и реологических средств (реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида) наблюдаются 90%-ный терапевтический эффект и максимальная в сравнении с контролем коррекция нарушений со стороны агрегации тромбоцитов и их внутрисосудистой активации: АТ снижается на 15,53% при использовании коллагена; 10,75% при применении АДФ; 11,47% при добавлении ристомицина и на 8,09% при использовании адреналина. Сумма активированных тромбоцитов уменьшается на 5,00%; число малых агрегатов сокращается в 1,68 раза, а средних и больших – в 6,96 раза. Однако полного устранения функциональной гиперактивности кровяных пластинок не наступает. 5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 1. Сочетанное применение энтеросорбента «Полисорб-ВП», антимикробного препарата «Биопаг-Д», реополиглюкина с глюкозой и 19 изотонического раствора натрия хлорида может применяться в качестве эффективного способа лечения больных диспепсией новорожденных телят с коррекцией возникающих нарушений агрегации и внутрисосудистой активации тромбоцитов (патент РФ на изобретение № 2377995). 2. Предложен способ прогнозирования развития токсической формы диспепсии у новорожденных телят с начальными признаками диспепсии (патент РФ на изобретение № 2419093). При выявлении у новорожденных телят с начальными признаками диспепсии ускорения агрегации тромбоцитов свыше 7% от контроля можно прогнозировать развитие токсической диспепсии. 3. Разработаны и опубликованы Практические рекомендации по применению гуанидинсодержащих препаратов в ветеринарии. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ * – работы, опубликованные в рекомендованных ВАК РФ изданиях 1. Наумов, М.М. Способ ранней диагностики, своевременного лечения и профилактики нарушения пищеварения и задержки развития у новорожденных телят при диспепсии / М.М. Наумов, С.М. Сулейманов, И.Н. Медведев, Е.В. Баскаков, М.Н. Павлов // Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных: мат-лы междунар. научн.производ. конф., г. Воронеж, 22 – 23 июня 2006 г. – Воронеж, 2006. – С. 739 – 742. 2. Медведев, И.Н. Перспективы применения энтеросорбентов при желудочнокишечной патологии у новорожденных телят / И.Н. Медведев, М.М. Наумов, М.Н. Павлов // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: мат-лы междунар. научн.-практ. конгресса., г. Санкт-Петербург, 28 – 29 августа 2006 г. – СПб, 2006. – С. 156 – 159. 3. *Медведев, И.Н. Агрегационная активность тромбоцитов у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, М.М. Наумов, М.Н. Павлов // Известия Тимирязевской сельскохозяйственной академии. – 2006. – № 4. – С. 172 – 176. 4. Практические рекомендации по применению гуанидинсодержащих препаратов в ветеринарии / Сост. А.Ю. Айдиев, М.М. Наумов, И.Н. Медведев ... М.Н. Павлов. – Курск: Изд-во ЦР Лоцман, 2007. – 28 с. 5. Наумов, М.М. Функциональная гиперактивность тромбоцитов новорожденных телят как патогенетический аспект диспепсии / М.М. Наумов, М.Н. Павлов // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: мат-лы междунар. научн.-практ. конф., г. Курск, 22 – 23 мая 2008 г. – Курск, 2008. – С. 274 – 278. 6. Полимерные биоциды-полигуанидины в ветеринарии / М.М. Наумов, Л.А. Жукова, З.Д. Ихласова, М.Н. Павлов и др. – Курск: Изд-во Курск. гос. с/х. ак., 2010. – 84 с. 7. *Наумов, М.М. Уровень эндогенной интоксикации и функционирование системы антиоксидантной защиты у больных диспепсией новорожденных телят при комплексной терапии / М.М. Наумов, М.М. Павлов // Вестник 20 Курской государственной сельскохозяйственной академии. – 2010. – № 4. – С. 70 – 72. 8. *Наумов, М.М. Активность ферментов переаминирования и содержание общего билирубина в крови новорожденных телят при комплексной терапии / М.М. Наумов, М.М. Павлов // Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии. – 2011. – № 6. – С. 71 – 72. ПАТЕНТЫ РФ 9. Способ лечения больных диспепсией новорожденных телят с коррекцией патологической активации тромбоцитов / М.М. Наумов, М.Н Павлов // Патент РФ на изобретение № 2377995. Приоритет от 16.06.2008. Опубл.10.01.2010. Бюл. № 1. 10.Способ прогнозирования развития токсической формы диспепсии у новорожденных телят с начальными признаками диспепсии / М.М. Наумов, М.Н Павлов // Патент РФ на изобретение № 2419093. Приоритет от 18.11.2009. Опубл.20.05.2011. Бюл. № 14.