Тема 1. Основы микроскопирования Занятие 1. Устройство микроскопа и правила работы с ним Цель занятия: освоить правила работы со световым микроскопом, методику изготовления временных препаратов и срезов растительных тканей и органов. Вопросы для обсуждения: 1. Определение микроскопа. Основные части светового микроскопа. 2. Разрешающая способность микроскопа и способы ее увеличения. 3. Элементы механической и осветительной части микроскопа. 4. Элементы оптической части микроскопа. Характеристика объективов. Материалы: биологический микроскоп; марлевые салфетки для протирания оптики. Работа 1. Правила работы с микроскопом 1. Пользуясь настоящим методическим руководством, изучить правила работы с микроскопом. Записать их в альбом. Студенты ЯГПУ, изучающие ботанику, на лабораторных занятиях могут работать использовать микроскопы двух моделей: МБС-1 (не имеет встроенного осветителя, объективы 8х, 20х, 40х) и Биомед-2 (имеет встроенный осветитель, объективы 4х, 10х, 20х, 40х). Правила работы с ними несколько различаются. Правила работы с микроскопом Биомед-2 1. Перед работой внешние линзы окуляра, объективов и зеркало протереть салфеткой. 2. Поставить микроскоп у края стола ручкой штатива к себе так, чтобы окуляр находился против левого глаза. Во время работы микроскоп не передвигать! Альбом и необходимые для работы предметы расположить справа от микроскопа. 3. Полностью открыть диафрагму, поднять конденсор в крайнее верхнее положение. 4. Вращением револьверной головки направить объектив самого малого увеличения (4х с красной полосой) на предметный столик. 5. Поместить препарат на предметный столик и закрепить его в препаратодержателе. 6. Установить изучаемый объект под объективом, передвигая предметный столик с микропрепаратом при помощи винтов, расположенных слева под предметным столиком. Нижний винт перемещает микропрепарат по горизонтали (слева направо). Верхний винт перемещает микропрепарат по вертикали (сверху вниз). 7. Включить осветитель. 8. Вращая макровинт на себя, осторожно, не применяя силу, поднять предметный столик до упора. 9. Глядя левым глазом в окуляр, медленно опускать предметный столик, вращая макровинт от себя, до получения четкого изображения объекта. 10. С помощью винтов предметного столика добиться расположения нужного места объекта в центре поля зрения. 11. При необходимости детального изучения препарата, перевести микроскоп на большее увеличение (объективы 10х, 20х, 40х). Для этого осторожно повернуть револьверную головку так, чтобы направить выбранный объектив на объект. 12. При работе с объективами 10х и 20х фокусировку изображения допустимо проводить с помощью макровинтов. Для фокусировки изображения, получаемого с помощью объектива 40х, следует использовать только микровинты. Поворот микровинта разрешается делать в ту или другую сторону не более чем на 180°. 13. После работы с большим увеличением необходимо вновь установить малое увеличение, выключить осветитель, опустить предметный столик до упора вниз и снять с него препарат. Нельзя вынимать препарат из-под объектива с увеличением 40х, т. к. легко поцарапать фронтальную линзу объектива. Правила работы с микроскопом МБС-1 1-3 пункты как выше. 4. Вращением револьверной головки поставить объектив 8х. Вращая макровинт, установить объектив в рабочее положение в 1 см от предметного столика. 5. Глядя левым глазом в окуляр, свет от лампы (или другого источника света) направить в окуляр так, чтобы поле зрения было равномерно освещено, а интенсивность света была максимально возможной. 6. Положить препарат на предметный столик и, глядя сбоку, опустить объектив с помощью макровинта так, чтобы расстояние между фронтальной линзой объектива и препаратом было 4-5 мм. 7. Глядя левым глазом в окуляр, плавно вращать макровинт на себя до тех пор, пока резко не появится изображение объекта. Передвигая препарат рукой, найти нужное место объекта, расположить его в центре поля зрения и закрепить на столике держателями. Если изображение не появилось (проскочило), то повторить все операции пунктов 6 и 7. Нельзя смотреть в окуляр и опускать объектив, вращая винт грубой наводки от себя, т. к. при этом фронтальная линза может раздавить покровное стекло и на нём появятся царапины. 8. Далее как в пунктах 11-13, изложенных выше. Методика изготовления временных препаратов Временным называется препарат, которым можно пользоваться в течение непродолжительного времени. В качестве среды в таких препаратах чаще всего применяют воду. Можно также использовать глицерин или смесь глицерина с водой (1:1). Препараты с глицерином можно хранить от нескольких дней до нескольких недель. 1. Перед началом работы предметное и покровное стекла тщательно протереть марлевой салфеткой. 2. В центр предметного стекла нанести каплю воды, глицерина или какого-либо реактива. 3. Поместить в каплю объект и расправить его препаровальной иглой. 4. Накрыть объект покровным стеклом. Для этого взять покровное стекло за «ребра» большим и указательным пальцами и поставить его на предметное стекло к краю капли среды под углом 45°. При этом между стеклами должен образоваться валик жидкости. Затем медленно опустить покровное стекло на объект. Жидкость должна равномерно растечься под покровным стеклом. Если под стеклом окажутся пузырьки воздуха, надо осторожно постучать препаровальной иглой по стеклу или слегка приподнять стекло иглой и вновь его опустить. Покровное стекло должно плотно прилегать к объекту. 5. Лишнюю жидкость, если она выступает за края покровного стекла, следует удалить фильтровальной бумагой. Если объект необходимо окрасить, краситель следует нанести на препарат, выдержать определенное время, затем оттянуть краситель фильтровальной бумагой, капнуть на объект воду и покрыть покровным стеклом. Можно окрасить сделанный временный препарат, не снимая покровного стекла. Для этого с одной стороны покровного стекла надо поместить каплю красителя, а с противоположной приложить полоску фильтровальной бумаги, которая начинает оттягивать воду из-под стекла и протягивать краситель. Как только объект окрасится, краситель таким же образом нужно заменить водой. 6. Временный препарат поместить на предметный столик и рассмотреть под микроскопом. Методика изготовления срезов Для изготовления срезов пользуются острыми, желательно новыми бритвенными лезвиями. Если объект достаточно плотный, его режут без всякого приспособления. 1. Объект следует взять большим и указательным пальцами левой руки и держать строго вертикально. Правой рукой взять лезвие и подвести строго перпендикулярно к объекту. 2. Сделать лезвием плавное быстрое движение по объекту к себе и направо. С помощью первых 2-3 срезов необходимо выровнять поверхность объекта, а затем сделать несколько тонких срезов. Лезвие надо держать строго горизонтально, иначе срез получится косым. 3. Поместить наиболее удачные срезы в воду на предварительно подготовленное предметное стекло. Это можно сделать двумя способами: аккуратно обмакивая в воду лезвие со срезом или поддеть срез (ни в коем случае не протыкая) препаровальной иглой. Если объект очень тонкий или мягкий, то его срез изготавливают с помощью с сердцевины бузины. Для этого отрезок сердцевины (не менее 4 см) надо расщепить вдоль на 1 – 1,5 см. В него вставить кусочек материала и сделать срезы так, как было описано выше. В этом случае объект надо резать вместе с сердцевиной бузины. 4. Рассмотреть изготовленные препараты под микроскопом. Задание для самостоятельной работы. Используя сведения, полученные на лекции по теме 1 «Роль растений в жизни планеты. Ботаника как наука», а также другие источники информации (учебную литературу, интернет-ресурсы и т.д.), заполнить таблицу 1 «История развития ботаники». Таблица размещена в электронной образовательной среде ЯГПУ LMS MOODLe в теме 1, разделе «Самостоятельная работа».
