Список вопросов к зачету (Бачурина К) 1. Основные правила техники безопасности при работе в микробиологической лаборатории и основные задачи бактериологической лаборатории. Работа с заразным материалом требует особой тщательности и соблюдения правил личной и общественной безопасности при ее выполнении В помещении лаборатории необходимо строго соблюдать чистоту и порядок. На рабочем столе не должно быть никаких посторонних предметов. Запрещается прием пищи, излишние разговоры, суета Работа обязательно проводится в халате, шапочке, сменной обуви Каждый студент имеет в лаборатории свое постоянное рабочее место Материал для работы принимает дежурный по бригаде у лаборанта и раздает студентам в присутствии преподавателя В начале занятия необходимо записать в альбом дату, номер, тему занятия, план выполняемой работы. В процессе работы делаются записи и зарисовки в дневник Все предметы, использованные при работе с живой культурой, обезвреживаются В конце занятия студенты сдают весь материал дежурному по бригаде, а он лаборанту или преподавателю В конце занятия студент должен: - привести в порядок свое рабочее место - сдать микроскоп, материал дежурному Основными задачами лаборатории являются: Проведение микробиологических исследований биологического материала пациентов с целью выявления возбудителей заболеваний, их идентификация, определение чувствительности к антибактериальным препаратам, контроль проводимого лечения и оценка его эффективности; санитарно-бактериологический контроль за соблюдением санитарных правил и выполнением санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий; бактериологический и производственный контроль на всех этапах заготовки донорской крови, её компонентов, а также при производстве препаратов крови. 2. Устройство светового микроскопа. Имеет оптическую и механическую часть. Оптическая: окуляр, объективы, осветительный аппарат(конденсор аббэ с ирисдиафрагмой) и осветительная часть- лампа. Механическая: основание, штатив, макто- и микро- винты, предметный столик с зажимами и винты для его движения, револьвер, тубус. 3. Системы объективов, назначение фронтальной линзы. Разрешающая способность микроскопа. Объектив- система корреляционны линз, заключ. в металлический корпус. Бывают суховоздушные(х20,40,10) и иммерсионные(х90,100,120) Фронтальная линза- окуляр- является основной при построении изображения соответствующего качества, определяет рабочее расстояние и числовую апертуру объектива. Обеспечивает требуемое увеличение, фокусное расстояние и качество изображения. Разрешающая способность микроскопа дает раздельное изображение двух близких друг другу точек. 4. Окуляр и другие оптические части микроскопа, определение степени увеличения микроскопа. Окуляр- плосковыпуклая линза, заключ.в металлический корпус. К глазуглазная, к объекту- собирательная. Объектив- система корреляционны линз, заключ. в металлический корпус. Бывают суховоздушные(х20,40,10) и иммерсионные(х90,100,120) Определение степени увеличения микроскопа(общее увеличение)произведение показателя увеличения на окуляре и объективе. 5. Группы шаровидных бактерий. Диплококки- кокки делящиеся в 1 плоскости и образующие попарно соединенные кокки. Сарцины- кокки, делящиеся в 3 взаимно перпендикулярных плоскостях и образующие правильные пакеты по 8-16 клеток. Стафилококки – кокки, делящиеся в разных плоскостях и образующие несимметричные грозди. Стрептококки- кокки, которые делятся в 1 плоскости и располагаются в виде цепочки. Тетракокки- кокки, которые делятся в 2 взаимно перпендикулярных плоскостях и располагаются по 4. 6. На чем основано деление бактерий на собственно бактерии, бациллы, клостридии? На возможности образовывать споры, на расположении этих спор. 1)Бактерии – неспоровые палочки 2)Бациллы – палочки которые образуют споры. 3)Клостридии – палочки, у которых диаметр споры превышает ширину вегетативной клетки. 7. Морфологические группы извитых форм. Спириллы- бактерии, имеющие форму спиральноизвитых палочек с 4-5 витками. Спирахеты- прокариоты сильно извитой формы. Имеют изгибы 2 видов: 1-изгибы протоплазматического цента, 2-изгибы всего тела. Вибрионы- подвижные бактерие имеющие палочковидную или извитую форму. 8. Особенности строения прокариотов. Прокариоты- доядерные организмы, которые не имеют оформленного ядра. Функцию всех недостающих органоидов выполняют мезосомы. Их кольцевая хромосома лежит в цитоплазме и никак от нее не отделена. 9. Морфологические формы бактерий. Кокковидные (диплококки, стрептококки, стафиллококки) Палочковидные (бациллы) Извитые (вибрионы, спириллы и спирохеты) Ветвящиеся 10. Особенности риккетсий, микоплазм и актиномицетов. Риккетсии- внутриклеточные паразиты, Гр-, неподвижные, палочно-/кокковидные. Микоплазмы- 1клеточные, не имеют клет.стенки, 3слойная мембрана, содержат ДНК и РНК,. Актиномицеты- бактерии, которые могут формировать разветвленный мицелий, Гр+. 11. Методика приготовления препарата-мазка. 12. Сущность метода окрашивания по Грамму и его практическое значение. Гр+ м\о имеют толстую клеточную стенку(много пептидогликана), поэтому образовавшийся генциан-виолет не вымывается спиртом и они сохраняют синий цвет. Гр- имеют тонкую клеточную стенку, поэтому генциан-виолет вымывается спиртом, а их повторно окрашивают в красный. 13. Сущность окрашивания кислотоустойчивых бактерий. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в красный, остальные м\о - синие. Хим.строение клеточной стенки и цитоплазмы кислотоустойчивых бактерий отличается содержанием жировосковых веществ(стеариновые к-ты), что затрудняет проникновение красителя. 14. Сущность окрашивания капсул. Клетку окрашивают, промывают спиртом. Клетка окрашивается в 1 цвет, капсула- в другой.(Явление метахромозии) 15. Чем обусловлена большая устойчивость спор к воздействию физических и химических факторов по сравнению с вегетативными клетками? Споры– особый тип покоящихся репродуктивных клеток, характеризующихся резко сниженным уровнем метаболизма и высокой устойчивостью. От вегетативных клеток споры отличаются полным отсутствием обмена веществ, малым количеством свободной воды в цитоплазме, повышенной в ней концентрацией катионов Ca. 16. Сущность метода окрашивания спор. Метод по Ожежко основан на проникновении красителя через оболочку споры, поэтому применяют кислоту для разрыхления оболочки, а подогревание делает ее еще более проницаемой. После охлаждения оболочка споры вновь становится плотной, е пропуская кислоту и доп. краситель. 17. Методы определения подвижности бактерий. Чем обусловлено самостоятельное движение микроорганизмов? Типы жгутикования микроорганизмов. 1)Метод Пешкова(укола). Бактериологической петлей производят посев исследуемой культуры уколом до дна пробирки с полужидкой питательной средой. Подвижная культура растет по всей питательной среде, образуя равномерное помутнение, а неподвижная только по уколу в виде стержня, сохраняя прозрачность незасеянного участка среды. 2)Метод Шукевича. Точкообразный посев материала в конденсациооную воду скошенного агара(у основания скоса). При размножении, подвижные м/о, из воды распределяются из воды по всех поверхности агара. 3)Висячая капля. Каплю бактерий наносят на середину покровного стекла, накладывают на него специальное предметное стекло с углублением, смазанным вокруг вазелином так, чтобы капля находилась в центре лунки, затем препарат осторожно переворачивают и микроскопируют. 4)Раздавленная капля. На середину предметного стекла наносят каплю культуры бактерий и осторожно накрывают ее предметным стеклом так, чтобы жидкость не растеклась за его края и в нее не попадали пузырьки воздух. Движение м\о обусловлено: В состав жгутиков входит белок флагеллин, который существует в α и β конфигурации, которые способны переходить одна в другую. Этот переход обеспечивает функционирование жгутиков как двигательного аппарата. Типы жгутикования м\о: Монотрихи – бактерии с одним полярнорасположенным жгутиком. Амфитрихии – бактерии с двумя полярно расположенными жгутиками или имеющие пучки жгутиков на обеих концах. Лофотрихи – бактерии, имеющие пучок жгутиков на одном конце. Перитрихи – бактерии со множеством жгутиков, располагающихся по бокам клетки или на всей ее поверхности. Атрихии – бактерии, не имеющие жгутиков. 18. Методы стерилизации. 1)Сухожаровая – сушильный шкаф – колбы пробирки, посуда. 2)Паром в автоклаве 3)Пастеризация – одноразовое нагревание продуктов или веществ до 60 °C в течение 60 минут или при температуре 70—80 °C в течение 30 минТермические: 1)Прокаливание -петля, игла, стекло 2)Кипячение – шприцы иглы. 19. Основные условия и методы культивирования. 1. Глубинный- в жидких пит. средах, где м\о развиваются по всей толще среды. Для роста аэробных м\о нужно постоянное подведение О2 вглубь среды(аэрирование). Проводят в ферментаторах. а) Периодический- весь V пит.среды засевают чистой культурой, выращивают в оптимальных условиях, до накопления нужного кол-ва целевого продукта. Сначала они имеют в избытке пит.в-ва, затем из становится недостаточно. - лаг-фаза(задержки роста) - логарифмического (экспоненциального)роста - стационарная(зрелости) -отмирания б) Непрерывное культивирование – в аппарат постоянно притекает свежая пит.среда и отводится культуральная жидкость. М\о взращиваются до 2 стадии и вносятся в пит.среду. Гомогенно-непрерывное- постоянное перемешивание(параметры в любой точке одинаковы) Гетерогенно- непрерывное- малое перемешивание, его отсутствие. 2. Поверхностный(стационарный)- м\о выращивают на пов-ти плотной или в тонком слое жидкой среды.О2 поступает из воздуха. Аэробы растут в жидких средах образуя пленку 20. Классификация питательных сред 1.По составу Естественные– мясо, молоко, фрукты. МПА,МПБ. Искусственные- готовят по спец. рецепту 2.Консинстенция: -жидкие -плотная -полужидкая -сыпучие 3.По происхождению: Животного(МПБ,МПА,МПЖ) Растительного(пивное сусло) Синтетические среды постоянного состава 4.Назначение: Обычные(простые) Специальные- для выращивания определенного вида м\о Дифференциально-диагностические- для определения родовой\видовой принадлежности м\о Селективные- для выделения м\о 1 рода\вида из многокомпонентного материала. 21. Основные характеристики колоний. Колония- популяция микробных клеток 1 вида, сформировавшаяся в результате деления 1 сикробной клетки в условиях культивирования на плотной питательной среде при оптимальной температуре. Величина колонии определяется ее диаметром(точечные, мелкие, средние, крупные) Форма колонии бывает правильная — круглая, неправильная — амебовидная, ризоидная — корневидная, напоминающая переплетающиеся корни деревьев. Характер контура края определяют при рассмотрении колонии под лупой или микроскопом с малым увеличением. Различают ровные края в виде четко выраженной линии и неровные Последние делят на: 1. фестончатый край, состоящий из крупных, слегка округлых или уплощенных зубцов правильной формы; 2. волнистый край, который несколько отличается от фестончатого тем, что крупные зубцы его выражены нечетко; 3. эрозированный, или зазубренный, край, состоящий из острых зубцов различной величины и формы; 4. бахромчатый край, имеющий нежные ворсинки. В некоторых случаях четко выраженная линия, отграничивающая колонию от поверхности среды, отсутствует. Такой край колонии называется расплывчатым. Рельеф колонии характеризуется приподнятостью ее над поверхностью питательной среды и контуром формы в вертикальном разрезе. Определяется рельеф колонии невооруженным глазом или с лупой при рассматривании сверху и сбоку. Различают: 1) каплеобразные и куполообразные колонии правильной круглой формы с различно выраженной степенью выпуклости, которые в вертикальном разрезе представляют собой сегмент шара и отличаются только длиной радиуса. Колонии слабовыпуклые имеют большую длину радиуса; куполообразные — меньшую; 2) колонии плосковыпуклые с плоским верхом, пологими или круто обрывающимися краями; имеют в вертикальном разрезе форму трапеции; 3) колонии конусообразные, имеющие в вертикальном разрезе форму треугольника: 4) колонии с приподнятой в виде соска серединой и валиком по периферии; 5) колонии с вдавленным центром; 6) колонии плоские, стелющиеся по поверхности среды. Цвет колонии определяется пигментом, который продуцирует культура микробов. Преобладающее большинство патогенных бактерий пигмента не образует, вследствие чего колонии их бесцветны или молочно-мутного цвета, похожи на опал. В проходящем свете такие колонии в большей или меньшей степени прозрачны. Пигментообразующие виды микробов дают колонии различных цветов: кремовые, желтые, золотисто-оранжевые, синие, красные, сиреневые, черные и др. Структура колоний определяется в проходящем свете при слабом увеличении микроскопа, суженной диафрагме или при несколько опущенном конденсоре. У пигментированных колоний и колоний, не пропускающих света, она не определяется. По характеру структуры различают следующие виды колоний: 1) гиалиновые — бесцветные, прозрачные, без видимой определенной структуры; 2) зернистые, которые в зависимости от величины зерен разделяются на мелко и грубозернистые; 3) нитевидные или волокнистые, характеризующиеся наличием длинных, густо переплетающихся нитей в толще колонии. Консистенцию колонии, определяющую ее физическое состояние, исследуют посредством прикосновения или взятия из нее части материала бактериальной петлей. По характеру консистенции колонии бывают: 1) пастообразные, легко снимающиеся и размывающиеся по поверхности питательной среды наподобие сливочного масла; 2) вязкие или слизистые, прилипающие и тянущиеся за петлей; 3)волокнистые или кожистые, плотные, снимающиеся с поверхности питательной среды в виде упругой пленки, соответствующей величине и форме колонии; 4) хрупкие, сухие, рассыпающиеся при прикосновении петли. 22. Рост культуры, выращенной на жидких питательных средах. 1. Поверхностный- появление на поверхности питательной среды плёнки или скопления под поверхностью м\о. 2. Придонный- образование осадка на дне пробирки. 3. Пристеночный- образование рыхлых хлопьев, прикрепляющихся к внутренней поверхности стенок сосуда. 4. С равномерным помутнением среды. 23. Методы получения чистой культуры по Коха, Дригальскому Коха: Исследуемый мат-л вносят в пробирку с расплавленным и охлаждённым до 45-50о МПА. Перемешивают, затем каплю пит.среды с разведенным мат-лом переносят во 2 пробирку с расплавленным МПА. Кол-во разведений зависит от числа м\о в материале. Приготовленные разведения выливают из пробирок в стерильные чашки Петри до застудевания среды. Затем переносят в термостат. Получение чистой культуры методом рассева в глубине среды. Дригальского: Берут 3 чашки Петри с пит.средой. На 1 петлёй\пипеткой наносят каплю исследуемого материала, растирают шпателем по всей поверхности агара. Шпатель переносят во 2 чашку и втирают оставшуюся на шпателе культуру в поверхность питательной среды. Шпатель переносят в 3 чашку и аналогично производят посев. В зависимости от числа микробных клеток в исслед.материале на 1 из чашек вырастают отдельные колонии, пригодняе для выделения чистой культуры м\о. 24. Характер роста бактерий на плотных питательных средах. 25. Методы определения сахаролитических свойств. Выделяют при посеве бактерий на дифференциально-диагностические среды с разными углеводами и индикатором. Выявляются в способности ферментировать углеводы с образованием различных кислых продуктов и газообразных веществ. 1) Короткий ряд- среды Гисса с моно-дисахаридами и с шестиатомным спиртом- маннитом. 2) Длинный ряд- вводят доп. среды с моно- и поли- сахаридами и спиртами. Индикатор- реактив Андреде. Чистую культуру м\о засевают на среды длинного ряда бак.петлёй\пипеткой. После инкубирования в термостате учитывают результат ферментации углеводов: -изменение цвета среды означает расщепление углевода и образование в среде кислых продуктов распада. -при расщеплении углевода до кислоты и газообразных продуктов наряду с изменением цвета появляются пузырьки газа. При отсутствии ферментации цвет среды не изменяется. 26. Какие углеводы используют для набора сред «пестрого ряда»? Используют короткий и длинный "пестрый ряд". К первому относятся среды Гисса с глюкозой, лактозой, сахарозой, мальтозой и спиртом маннитом. В длинный "пестрый ряд" наряду с перечисленными углеводами вводят среды с моносахаридами (арабинозой, ксилозой, рамнозой, галактозой и т.д.), полисахаридами (инулином, крахмалом, гликогеном и т.д.) и спиртами (глицерином, дульцитом, инозитом). 27. Методы определения протеолитических свойств бактерий. Для выявления протеолитических ферментов исследуемую культуру микроба засевают в питательную среду, содержащую тот или иной белок. Чаще всего для этой цели применяют желатин, реже — свернутую лошадиную сыворотку, коагулированный яичный белок, молоко или кусочки вареного мяса. Появляется выделением во внешнюю среду ферментов- протеаз, которые расщепляют белки до промежуточных продуктов(пептоны, полипептиды, аминокислоты) или до продуктов конечного распада(индол, сероводород, аммиак..) Степень протеолиза определяется по образованию конечных продуктов распада. Тест на желатиназу. Культуру микроорганизмов засевают уколом в столбик питательного бульона, содержащего 12% желатины. Посевы выдерживают при комнатной температуре (20-22°С) в течение нескольких (5-7) дней, при этом регистрируют не только наличие разжижения, но и его характер. Разжижение может быть послойным, что свойственно бактериям сине-зеленого гноя; холерный вибрион разжижает желатину в виде гвоздя; стафилококки – в виде чулка. Рост сибиреязвенных бацилл напоминает елочку, перевернутую вершиной вниз (характер разжижения послойный). Тест на растворение свертка казеина. Культуру засевают на обезжиренное молоко. Культура расщепляет молочный сахар (лактозу) и за счет закисления среды наблюдается свертывание молочного белка (казеина). При выделении протеолитических ферментов казеин постепенно растворяется – пептонизируется, в результате чего молоко просветляется и приобретает легкий кремовый оттенок, а на дне пробирки формируется осадок. Тест на свернутой кровяной сыворотке. Культуру исследуемых аэробных микробов засевают на чашки, анаэробных — уколом в столбик свернутой лошадиной сыворотки, инкубируют в термостате при 37 °С. Штаммы, продуцирующие протеолитические ферменты, разжижая питательную среду, образуют углубления вокруг колоний или на поверхности столбика среды. Некоторые виды патогенных микробов с выраженной протеолитической активностью обладают способностью расщеплять белок и пептон до продуктов глубокого распада: индола, сероводорода, мочевины и аммиака. При определении видов и дифференциации разновидностей патогенных микробов наибольшее значение имеет выявление двух первых продуктов: индола и сероводорода. Определение индола. Для обнаружения индола по способу Мореля узкие полоски фильтровальной бумаги смачивают горячим насыщенным раствором щавелевой кислоты и высушивают. Индикаторную бумажку помещают между стенкой пробирки с МПА и пробкой, предварительно произведя посев исследуемой культуры. При выделении индола на 2-3-й день нижняя часть полоски бумаги приобретает розовый цвет. Индол образуется при наличии у бактерий фермента триптофаназы при расщеплении сложной гетероциклической кислоты - триптофана. Определение сероводорода. Сероводород является конечным продуктом расщепления аминокислот: цистина, цистеина и метионина, содержащих серу. Петлю исследуемой культуры микробов засевают в пробирку с мясопептонным бульоном. Сероводород обнаруживают с помощью полоски фильтровальной бумаги, пропитанной раствором ацетата свинца, которую закрепляют между стенкой засеянной пробирки и пробкой. При взаимодействии сероводорода и ацетата свинца бумага чернеет в результате образования сульфида свинца. Тест на аммиак. Аммиак определяют при помощи увлажненной розовой лакмусовой бумажки, помещенной между стенкой и пробкой засеянной пробирки. Посевы инкубируют в термостате 1-5 суток. Посинение лакмусовой бумажки свидетельствует о выделении аммиака. 28. Определение редуцирующих свойств микроорганизмов Редуцирующие – способность восстанавливать некоторые химические вещества (краски и др.). Для определения более точного вида бактерии Редукцией или восстановлением того или иного вещества называется химический процесс, состоящий в отнятии кислорода от данного вещества или замене его водородом. Имеются вещества, которые при редукции легко обесцвечиваются. Для выявления редуцирующих свойств бактерий к обычным питательным средам (мясопептонному бульону, мясопептонному агару, молоку) добавляют соответствующие индикаторы (метиленовую синь, лакмус и др.). Приводим несколько методов определения редуцирующих свойств. 1. 5 мл молока с метиленовой синью засевают петлей исследуемой культуры, снятой с плотной питательной среды, или 1,0 мл 18-часовой бульонной культуры. После 24-часовой инкубации в термостате при 27° С отмечают результаты. При положительной реакции среда из голубой становится кремового цвета, а при слабой редукции приобретает зеленоватую окраску. Молоко с метиленовой синью готовится следующим образом: свежее молоко доводят до кипения, оставляют в прохладном месте на сутки, освобождают его от сливок, затем вторично кипятят и через сутки вновь снимают верхний слой. Обезжиренное таким образом молоко фильтруют через толстый слой ваты, подщелачивают 10%-ным раствором углекислого натрия до pH 7,2. К 100 мл молока добавляют 2 мл 1%-ного водного раствора метиленовой сини. Приготовленную среду разливают по 5 мл в стерильные пробирки и стерилизуют текучим паром три дня подряд по 30 мин. После остывания среда имеет темно-голубой цвет. При наличии у бактерий редуцирующей способности метиленовая синь обесцвечивается и среда приобретает кремовый цвет. 2. Пробирки со средой Минкевича засевают суточной культурой бактерий, снятой с плотной среды, и помещают в термостат на десять дней. Наблюдения за изменением цвета среды проводятся ежедневно. О наличии редукции свидетельствует полное обесцвечивание молока, имеющего розоватосиреневый цвет до посева. Среда Минкевича позволяет также выявить кислото- или щелочеобразование, выражающееся соответственно в покраснении или посинении молочной среды. Образование кислоты обозначается буквой К, а щелочи – буквой Щ. Лакмусовое молоко готовится по прописи Минкевича. 100 мл свежего молока подщелачивают 10%-ным раствором питьевой соды до слабощелочной реакции (по лакмусу), кипятят и добавляют 100 мл дистиллированной воды и 6 мл лакмусовой настойки. Приготовленную среду сливают в бутылки, прибавляя 10 мл хлороформа на 1 л среды, закрывают плотно резиновой или корковой пробкой, хорошо встряхивают и ставят на два- три дня в темное место. Хлороформ оседает на дно, увлекая за собой растворившиеся в нем сливки. Обезжиренную таким образом среду осторожно сливают, разливая ее потом в пробирки по 5 мл, и стерилизуют 20 мин при 115° С. После стерилизации среда имеет желтый цвет, но через несколько часов она приобретает характерный для нее слабо-фиолетовый оттенок. 3. Определение редуцирующей способности бактерий на среде Омелянского производится следующим образом: к 100 мл щелочного мясопептонного агара добавляют десять капель стерильного свежеприготовленного 1%-ного водного раствора метиленовой сини. При посеве бактерий, обладающих редуцирующей способностью, среда обесцвечивается. 29. Определение гемолитических свойств микроорганизмов. Проявляются выделением в процессе жизнедеятельности бактерий веществ белковой природы- гематоксилинов, которые вызывают лизис эритроцитов. 1. Посев м\о на пит.среду(содержит 5% дефибринированной крови) 2. При росте м\о, обладающими гемолитическими свойствами, вокруг колонии образуется прозрачная зона(бесцветная\окрашенная) В жидких средах среда становится прозрачной(красная лаковая кровь). 30. Классификация антибиотиков по происхождению, механизму и спектру. Классификация по происхождению 1. Антибиотики, полученные из грибов, например рода Penicillium(пенициллин), родаCephalosporium(цефалоспорины). 2. Антибиотики, полученные из актиномицетов; группа включает около 80% всех антибиотиков. Среди актиномицетов основное значение имеют представители рода Streptomyces, являющиеся продуцентами стрептомицина, эритромицина, левомицетина. 3. Антибиотики, продуцентами которых являются собственно бактерии. Чаще всего с этой целью используют представителей рода BacillusиPseudomonas. Примерами антибиотиков данной являются полимиксины, бацитрацины, грамицидин. 4. Антибиотики животного происхождения; из рыбьего жира получают эктерицид, из молок рыб – экмолин, из эритроцитов – эритрин. 5. Антибиотики растительного происхождения. К ним можно отнести фитонциды, которые выделяют лук, чеснок, сосна, ель, сирень, другие растения. В чистом виде они не получены, так как являются чрезвычайно нестойкими соединениями. Антимикробным действием обладают многие растения, например, ромашка, шалфей, календула. По спектру действия: 1) влияющие преимущественно на грамположительные микроорганизмы (бензилпенициллин, эритромицин); 2) влияющие преимущественно на грамотрицательные микроорганизмы (уреидопенициллины, монобактамы); 3) широкого спектра действия (тетрациклины, аминогликозиды) 4) противотуберкулёзные антибиотики (стрептомицин, рифампицин); 5) противогрибковые антибиотики (нистатин, грамицидин); 6) антибиотики, влияющие на простейших (трихомицин,метронидазол,тетрациклины); 7) противоопухолевые антибиотики (адриамицин, оливомицин). По механизму действия: 1. Игнибиторы синтеза клеточной стенки м\о(пенициллины, ванкомицин..) 2. Нарушающие молекулярную организацию, функции клеточных мембран(леворин, нистамин…) 3. Подавляющие синтез белка и НК, в частности, ингибиторы синтеза белка на уровне рибосом(тетрациклин, маклолиды) и ингибиторы РНК-полимеразы. 31. Основные свойства и механизм действия антибиотиков на бактериальную клетку. Свойства: - высокая избирательность антимикробного эффекта в дозах, нетоксичных для организма; - отсутствие или медленное развитие резистентности возбудителей к препарату в процессе его применения; - сохранение антимикробного эффекта в жидкостях организма и тканях, отсутствие или низкий уровень инактивации белками сыворотки крови, тканевыми энзимами; - хорошая всасываемость и распределение препарата, обеспечивающие терапевтические концентрации в крови, тканях и жидкостях организма ; - удобная лекарственная форма для различных возрастных групп и локализации патологического процесса, обеспечивающая максимальный эффект и стабильность в обычных условиях хранения Антибиотики, ингибирующие синтез клеточной стенки. Пептидогликан — основа клеточной стенки бактерий — уника­лен и жизненно необходим для прокариот, он есть у большинства бактерий, за исключе­нием не имеющих клеточной стенки. Синтез предшественников пептидогликана начинает­ся в цитоплазме. Затем они транспортируются через ЦПМ, где происходит их объединение в гликопептидные цепи (эту стадию ингибируют гликопептиды). Образование полноценного пептидогликана происходит на внешней поверхности ЦПМ. Этот этап совершается при участии белков-ферментов, которые называют пенициллинсвязывающими белками, так как именно они служат мишенью для пенициллина и других бета-лактамных антибиотиков. Ингибирование пенициллинсвязывающих белков приводит к накоплению предшественников пептидогликана в бакте­риальной клетке. В результате ненормально большое количество этих предшественников запускает в бактериальной клетке систему их уничтожения — аутентические ферменты, которые в норме расщепляют пептидогликан при делении бактериальных клеток. В результате действия аутолитических ферментов и происходит лизис бактериальной клетки. Поскольку пептидогликана нет в стенках животных клеток, то эти антибиотики обладают очень низкой токсичностью для макроорганизма, и их можно применять в высоких дозах (мегатерапия). Антибиотики, вызывающие повреждение цитоплазматической мембраны (блокирование фосфолипидных или белковых компонентов, нарушение проницаемости клеточных мембран, изменение мембранного потенциала и т. д.). ЦПМ есть у всех живых клеток, но у прокариот (бактерий) и эукариот ее структура различна. У грибов больше общего с клетками макроорганизма, хотя есть и различия. Поэтому противогрибковые препараты — антимикотики — более токсичны для организма человека, так что лишь немногие препа­раты из этой группы допустимо принимать внутрь. Число антибиотиков, специфически действующих на мембраны бактерий, невелико. Наиболее известны полимиксины (полипептиды), к которым чувствительны только грамотрицательные бактерии. Они лизируют клетки, повреждая фосфолипиды клеточных мембран. Из-за токсичности они применялись лишь для лечения местных процессов и не вводились парентерально. В настоящее время на практике не используются. Противогрибковые препараты (антимикотики) повреждают эргостеролы (полиеновые антибиотики) и ингибируют один из ключевых ферментов биосинтеза эргостеролов (имидазолы). Антибиотики, подавляющие белковый синтез. По ряду признаков белоксинтезирующий аппарат прокариот отличается от рибосом эукариотических клеток, что может быть использовано для достижения селективной токсичности действующих на них препаратов. Синтез белка — многоступенчатый процесс, в котором задействовано множество ферментов и структурных субъединиц. Известно несколько точек приложения действия различных препаратов: присоединение тРНК с образованием инициального комплекса на 70S рибосоме (аминогликозиды), перемещение тРНК с акцепторного сайта на донорский сайт, присоединение нового аминоацила тРНК к акцепторному сайту (тетрациклины), формирование пептида, катализируемого пептидил-трансферазой (хлорамфеникол, линкозамиды), транслокация пептидил тРНК (эритромицин), удлинение пептидной цепи (фузидиевая кислота), терминация и высвобождение пептидной цепи. Таким образом, аминогликозиды и тетрациклины связываются с 30S-субъединицей, блокируя процесс еще до начала синтеза белка. Аминогликозиды необратимо ингибируют процесс присоединения транспортной РНК, а тетрациклины обратимо блокируют следующую стадию присоединения к рибосомам транспортной РНК. Макролиды, хлорамфеникол, линкозамиды соединяются с 50S-субъединицей. Это обрывает удлинение пептидных цепей. После удаления этих антибиотиков процесс возобновляется, т. е. эффект бактериостатичен. Антибиотики, ингибирующие синтез нуклеиновых кислот. Нарушение синтеза и функций нуклеиновых кислот достигается тремя способами: 1) ингибирование синтеза предшественников пурин-пиримидиновых оснований (сульфаниламиды, триметоприм) 2)подавление репликации и функций ДНК (хинолоны/фторхинолоны.нитроимидазолы, нитрофураны) 3) ингибирование РНК-полимеразы (рифамицины). В большинстве своем в эту группу входят синтетические препараты, из антибиотиков подобным механизмом действия обладают только рифамицины, которые присоединяются к РНК-полимеразе и блокируют синтез м-РНК. Действие фторхинолонов связано, в основном, с инактивацией ДНК-гиразы - фермента, обеспечивающего супер спирализацию бактериальной хромосомы. Сульфаниламиды - структурные аналоги парааминобензойной кислоты - могут конкурентно связываться и ингибировать фермент, который нужен для перевода парааминобензойной кислоты в фолиевую кислоту - предшественник пуриновых и пиримидиновых оснований. Эти основания необходимы для синтеза нуклеиновых кислот. 32. Методы определения чувствительности микробов к антибиотикам. 1. Метод бумажных дисков на питательном агаре. В чашку Петри на питательный агар делают посев микробной взвеси. Избыток жидкости удаляют пипеткой. После впитывания взвеси в агар на засеянную поверхность пинцетом наносят 5-6 разных бумажных дисков с антибиотиками, диски отличаются по цвету. Чашки с дисками ставят в термостат при 37о на 1820 часов. Антибиотики из дисков диффундируют в агар. По диаметру зон задержки роста исследуемой культуры судят о ее чувствительности к антибиотикам. Этот метод нельзя применять, если антибиотики плохо диффундируют в агар. Преимущество метода – можно определить чувствительность исследуемой бактериальной культуры сразу к нескольким антибиотикам. 2. Метод серийных разведений в МПБ. Готовят основной раствор антибиотика в соответствующем растворителе. Из основного раствора готовят последующие 2-хкратные разведения в бульоне. Обычно берут 12 пробирок по 1 мл МПБ в пробирке. После последовательных разведений антибиотика в МПБ, в каждую пробирку добавляют 0,1 мл взвеси клеток испытуемой бактериальной культуры, содержащей 106-107 клеток. Посевы инкубируют в термостате 18-24 ч. Результаты отмечают по наличию роста. Если есть рост бактерий – среда мутная. Если нет роста бактерий – среда прозрачная. Если среда в пробирке мутная, то в данной концентрации антибиотик не действует, если прозрачная– антибиотик действует. По последней пробирке с прозрачной средой определяют минимальную ингибирующую дозу антибиотика. Одновременно ставят контрольные пробы: 1-ый контроль (контроль бактериальной культуры) - 1 мл МПБ + взвесь бактерий без антибиотика, 2-ой контроль (контроль антибиотика) - 1 мл МПБ + антибиотик, но без взвеси бактерий. В контрольных пробирках должны быть следующие результаты: 1-ый контроль – помутнение среды (есть рост); 2-ой контроль – среда прозрачная (нет роста). Для того, чтобы узнать какое действие оказал антибиотик (бактерицидное или бактериостатическое), петлей делают посевы из пробирок на сектора ПА. Роста нет – бактерицидное действие, рост есть – бактериостатическое действие. Преимущество метода – определение минимальной концентрации антибиотика, которая ингибирует (подавляет) рост бактериальной культуры. 3. Метод «канавки» (предложен А. Флемингом). Берут чашку Петри с питательным агаром. В центре по диаметру вырезают полоску агара шириной 1 см. Затем канавку заполняют агаром, смешанным с антибиотиком. После застывания канавки перпендикулярно делают посев исследуемых культур (4-5). После инкубации в термостате чувствительность определяют по длине зоны задержки роста, чем она больше, тем культура чувствительнее и наоборот. Преимущество метода – можно определить чувствительность сразу нескольких культур к данному антибиотику. 33. Микрофлора почвы и воздуха. Почва: В почве живут и развиваются самые разнообразные микроорганизмы: амебы, инфузориии, грибы, водоросли, актиномицеты и бактерии. Из структурных частей почвы для микробиологии особый интерес представляет ее органическое вещество – гумус, состоящий из остатков животных и растительных организмов и обитающих в почве микробов. Поверхностный слой почвы беднее микробами, так как на них вредно воздействуют факторы внешней среды: высушивание, ультрафиолетовое излучение, солнечный свет, повышенная температура и др. Наиболее многочисленны микроорганизмы в верхнем 5-15 сантиметровом слое, меньше их на глубине 20-30 и минимальное – на глубине 30-40 см. Почвы, богатые бактериями, биологически более активны. Между плодородием почвы и содержанием в ней микроорганизмов имеется определенная зависимость. Подсчеты показали, что на каждый гектар малоплодородной почвы приходится 2,5–3 т микробной массы, высокоплодородной — до 16 т. Число микроорганизмов в 1 г почвы может колебаться от 1–3× 10⁶ до 20–25× 10⁹ Наиболее богаты микрофлорой возделываемые (культурные) почвы; бедны — песчаные, горные, а также почвы, лишенные растительности; содержание микробов в почве увеличивается с севера на юг. Цвет и запах почвы зависят также от состава микроорганизмов. Запах почве придают определенные виды актиномицетов. К типичным почвенным бактериям относятся Вас. subtilis,Bac. mycoides, Bac. mesentericus, Bac. megatherium, а также термофильные, пигментные, непигментные и другие микроорганизмы, составляющие иногда 80–90% всей микрофлоры почвы. В ряде случаев почва представляет собой резервуар для некоторых патогенных микробов, попадающих в нее с выделениями больных животных или трупами. Длительность выживаемости в почве патогенных бактерий зависит от их биологических свойств и условий среды обитания. «Долгожителями» являются спорообразующие микробы —возбудители столбняка, злокачественного отека, ботулизма; споры бацилл сибирской язвы могут сохраняться десятилетиями. Воздух: Микрофлора воздуха зависит от микрофлоры почвы и воды, откуда микробы вместе с пылью и капельками влаги увлекаются в атмосферу. Воздух – неблагоприятная среда для размножения микроорганизмов. Отсутствие питательных веществ, солнечные лучи и высушивание обусловливают быструю гибель микроорганизмов. Вследствие этого микрофлора воздуха менее обильна, чем микрофлора почвы и воды. Состав микробов воздуха весьма разнообразен — это пигментные сапрофитные бактерии (микрококки, сарцины), споровые (сенная, картофельная палочки и др.), актиномицеты, плесневые, дрожжевые грибы и др. Наряду с сапрофитами в воздухе встречаются условно-патогенные микроорганизмы, споры грибов из родов Aspergillus, Mucor, Penicillum. В животноводческих помещениях воздушная среда загрязняется микробами во время раздачи кормов,особенно грубых; при чихании, кашле животных, разговоре обслуживающего персонала. Попадают микробы в воздух и с частицами высохших фекалий животных, доказано, что в 1 м³ воздуха животноводческих помещений содержится до двух и более миллионов микробных тел, в том числе патогенных. Степень загрязнения воздуха микроорганизмами зависит от вентиляции, скученности животных, конструкции помещений, способа содержания животных и других факторов. В плохо вентилируемых помещениях число микробов в 1 м³ воздуха в 5–6 раз больше, чем в хорошо вентилируемых, Наибольшее количество микроорганизмов содержит воздух крупных промышленных городов. Воздух же полей, лесов, лугов, а также над водными пространствами, в удалении от населенных пунктов отличается сравнительной чистотой. Значительные изменения претерпевает микрофлора воздуха в зависимости от времени года. Максимальное количество микробов обнаруживают в летнее, а минимальное — в зимнее время. 34. Оценка воды по санитарно-бактериологическим показателям. 1)Общее микробное число (ОМЧ) - это количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, образующих колонии на мясопептонном агаре при посеве 1 см3 воды с последующей инкубацией посевов при температуре 37±0,5 °С в течение 48 ч. ОМЧ должно быть не более 50 КОЕ/см3.В зависимости от степени предполагаемого загрязнения производят посев не менее двух различных объемов воды, выбранных с таким расчетом, чтобы на чашках вырастало от 30 до 300 колоний. Водопроводную и артезианскую воду засевают в неразведенном виде по 1 см3. При бактериологическом исследовании загрязненных вод делают посевы разведенной воды. 2) Определение коли-титра и коли-индекса воды. Минимальное количество воды в мл, в котором обнаруживают бактерии группы кишечных палочек (БГКП), называют коли-титром воды, количество БГКП, содержащихся в 1л исследуемой воды, называют коли-индексом воды. Коли-титр и коли-индекс воды определяют титрационным (бродильным) методом или методом мембранных фильтров. 1.Титрационный метод. В глюкозо-пептонную среду (1%-я пептонная вода, 0,5%-й раствор хлорида натрия, 0,5%-й раствор глюкозы, индикатор Андреде и поплавок) проводят посевы различных объемов воды. Воду открытых водоемов исследуют в объемах 100; 10; 1 и 0,1 мл. Для анализа водопроводной воды делают посевы трех объемов по 100 мл, трех объемов по 10 мл и трех объемов по 1 мл. Посевы инкубируют при 37 °С в течение суток. О брожении судят по образованию пузырьков газа в поплавке. Из забродивших или помутневших проб делают посевы на среду Эндо. Из выросших колоний готовят мазки, окрашивают по Граму и ставят оксидазный тест, с помощью которого дифференцируют бактерии родов Escherichia, Citrobacter и Enterobacter от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadaceae и других оксидазоположительных бактерий, обитающих в воде. С этой целью 2...3 изолированные колонии наносят «штрихом» на фильтровальную бумагу, смоченную диметил-n-фенилендиамином. При отрицательном оксидазном тесте цвет бумаги не изменяется, при положительном она окрашивается в синий цвет в течение 1 мин. Грамотрицательные палочки, не образующие оксидазу, вновь исследуют в бродильном тесте — вносят в полужидкий питательный агар с 0,5 % глюкозы и инкубируют при 37 °С в течение суток. При положительном результате определяют коли-титр и коли-индекс по статистической таблице. 2.Метод мембранных фильтров. Определенный объем воды пропускают под давлением через мембранный фильтр № 3, предварительно стерилизованный кипячением в дистиллированной воде. Водопроводную воду и воду артезианских скважин фильтруют в объеме 333 мл. Чистую воду открытых водоемов фильтруют в объеме 100, 10, 1 и 0,1 мл, более загрязненную воду перед фильтрованием разводят стерильной водой. Фильтры накладывают на агар Эндо в чашки Петри и после инкубации при 37 °С в течение суток подсчитывают количество выросших красных колоний. Из двух-трех колоний делают мазки, окрашивают их по Граму и ставят оксидазный тест. Грамотрицательные палочки, не образующие оксидазу, принадлежат к БГКП. По существующим нормативам (ГОСТ 2874—82) питьевую воду считают качественной, если ее коли-индекс не более 3, а микробное число — не более 100. 35. Микрофлора молока. Фазы развития микрофлоры в молоке. Микрофлора сырого молока. Микрофлора свежевыдоенного молока определяется состоянием здоровья животного и условиями получения молока. В 1 мл парного молока может быть около 103 клеток микроорганизмов. В молоке, полученном при строгом соблюдении санитарных норм, преобладают кокки, в загрязненном – БГКП (Бактерии группы кишечной палочки), маслянокислые и гнилостные бактерии, микроскопические грибы. В процессе хранения молока изменяется количественное и качественное содержание микроорганизмов. Характер изменений зависит от температуры, продолжительности хранения и состава микрофлоры в свежем молоке. Можно выделить отдельные фазы. 1.Бактерицидная фаза. Наличие фазы установлено Фокером в 1890 г. В течение некоторого времени после выдаивания молока микроорганизмы в нем не развиваются и даже частично отмирают. Это происходит в связи с наличием в молоке естественных защитных субстратов – лизоцимов, антител, лейкоцитов. Лизоцим М (молока) – фермент класса гидролаз, действующий на некоторые составные части клеточной стенки и вызывающий лизис микроорганизмов. В парном молоке наблюдается также явление фагоцитоза. Продолжительность бактерицидной фазы зависит от температуры, от количества бактерий (чем меньше бактерий, тем фаза более длительная), от индивидуальных особенностей животного. Температура парного молока благоприятна для развития микроорганизмов. Поэтому, чтобы продлить бактерицидную фазу, молоко необходимо охлаждать после получения. При нагревании до температуры пастеризации свежее молоко теряет свои бактерицидные свойства, так как при этом разрушаются вещества, задерживающие развитие микроорганизмов. 2. Фаза смешанной микрофлоры. Начинают развиваться независимо друг от друга разнообразные микроорганизмы, которые не вступают между собой в ассоциативные или антагонистические отношения. Переход к этой фазе постепенен, так как разные микроорганизмы не одновременно преодолевают бактерицидное влияние молока. Продолжительность фазы примерно 12 ч. За это время благодаря деятельности кислотообразователей реакция молока меняется в кислую сторону. Реакция меняется более интенсивно при температуре выше 100С, которая благоприятна для развития молочнокислых кокков. 3. Фаза развития МКБ. Идет относительно быстрое нарастание кислотности, угнетающей жизнедеятельность микроорганизмов, не относящихся к МКБ. В начале фазы преобладают молочнокислые кокки. Затем под влиянием высокой кислотности они начинают отмирать, уступая место молочнокислым палочкам. БГКП (относительно устойчивые к кислотности) отмирают постепенно. 4. Фаза грибковой микрофлоры. В результате повышения кислотности подавляется развитие большинства бактерий. Высокая кислотность не является помехой для развития дрожжей и плесневых грибов, которые усваивают молочную кислоту. В результате развития микрофлоры происходит снижение кислотности, что позволяет развиваться маслянокислым бациллам и протеолитическим бактериям, вызывающим распад казеина. 36. Пороки молока микробного происхождения. Пороки молока. При несоблюдении санитарных режимов в молоке развиваются различные пороки. Горький вкус - возникает в результате развития протеолитических микроорганизмов (спорообразующих бацилл, психрофильных бактерий, микрококков и др.). Порок обнаруживается в сыром молоке или в пастеризованном молоке при длительном хранении на холоде, т.е. в условиях, подавляющих развитие МКБ, способных угнетать развитие протеолитических бактерий. Иногда горький вкус может передаваться молоку от некоторых кормов (например, полыни). Прогорклый вкус - возникает в результате разложения жира и образования масляной кислоты, альдегидов, кетонов, эфиров и других веществ. Вызывается микроорганизмами, продуцирующими липазу (Pseudomonas fluorescens, плесневые грибы). Порок чаще всего образуется при длительном хранении молока на холоде. Сильное газообразование ("бродящее молоко") развивается при наличии в сыром молоке БГКП и дрожжей-сахаромицетов, а в пастеризованном – маслянокислых бактерий. Преждевременное свертывание молока с нормальной или слегка повышенной кислотностью при кипячении. Наблюдается при сильном обсеменении энтерококками, микрококками, спорообразующими бактериями. Тягучее молоко. Когда возбудителем является неподвижная палочка Lactobacillum viscosum, (палочка тягучего молока), то порок возникает без повышения кислотности и без образования сгустка. Порок может возникать с повышением кислотности и образованием тягучего сгустка, Он вызывается некоторыми МКБ, обладающими способностью образовывать слизь при сквашивании молока. Красный цвет может возникнуть при воспалении вымени вследствие попадания крови в молоко. Порок может возникнуть и в результате развития Serratia marcescens ("чудесной палочки"). Если красные пятна возникают на поверхности – то они бактериального происхождения, если выпадение осадка – наличие в молоке крови. Порок встречается редко, при пониженной температуре хранении имедленном нарастании кислотности. Синий цвет поверхностного слоя молока возникает в результате развития аэробной аспорогенной палочки Bacterium cyanogens, не образующей кислоты. Посторонний запах и вкус (хлебный, репный, травяной) появляется при сильном загрязнении молока БГКП и флюоресцирующими бактериями. Порок обычно появляется при поедании животными загрязненного корма и при несоблюдении чистоты на скотных дворах. 37. Действие биологических факторов на микроорганизмы (антибиотики, УФЛ, температура). Антибиотики По характеру действия антибиотики делятся на бактерицидные и бактериостатические. Бактерицидное действие характеризуется тем, что под влиянием антибиотика наступает гибель микроорганизмов. Достижение бактерицидного эффекта особенно важно при лечении ослабленных пациентов, а также в случаях заболевания такими тяжелыми инфекционными болезнями, как общее заражение крови (сепсис), эндокардит и др., когда организм не в состоянии самостоятельно бороться с инфекцией. Бактерицидным действием обладают такие антибиотики, как различные пенициллины, стрептомицин, неомицин, канамицин, ванкомицин, полимиксин. При бактериостатическом действии гибель микроорганизмов не наступает, наблюдается лишь прекращение их роста и размножения. При устранении антибиотика из окружающей среды микроорганизмы вновь могут развиваться. В большинстве случаев при лечении инфекционных болезней бактериостатическое действие антибиотиков в совокупности с защитными механизмами организма обеспечивает выздоровление пациента. Ультрафиолет Главная особенность ультрафиолетового излучения с точки зрения бактерицидной эффективности состоит в том, что под его воздействием в одноклеточных организмах, а также вирусах происходят необратимые последствия, а именно нарушается структура молекул ДНК и РНК. В следствии этого микробы теряют способность как к размножению, так и к продолжению жизнедеятельности, что позволяет применять специальные UV лампы (кварцевые и бактерицидные) для: -обеззараживания помещений и поверхностей; -стерилизации медицинских инструментов; -лечения и профилактики кожных заболеваний. При этом не весь УФ спектр способен приводить к гибели микроорганизмов. Наибольшей бактериологической эффективностью отличается ультрафиолет с длиной волны 185 и 254 нм, который и привод к разрушению связей в ДНК микробов. УФ излучение с длиной волны от 315 нм практически безопасно для грибков и бактерий, хотя и позволяет выявлять их колонии. Это позволяет проводить диагностику лишая, псориаза, некоторых видов дерматитов и прочих кожных болезней. Такая диагностика выполняются посредством облучения пораженных участков кожного покрова длинноволновым ультрафиолетом. При этом особенности флуоресценции колоний микробов обеспечивают возможность постановки точного диагноза и степени серьезности проблемы. Температура Жизнедеятельность каждого микроорганизма ограничена определенными температурными границами. Эту температурную зависимость обычно выражают тремя основными точками: минимум - температура, ниже которой размножение микробных клеток прекращается; оптимум - наилучшая температура для роста и развития микроорганизмов; максимум - температура, выше которой жизнедеятельность клеток ослабляется или прекращается. Оптимальная температура обычно соответствует температурным условиям естественной среды обитания. Все микроорганизмы по отношению к температуре подразделяются на психрофилы, мезофилы и термофилы. Психрофилы или холодолюбивые микроорганизмы, растут при относительно низких температурах: минимальная температура - 0° С, оптимальная - 10-20° С, максимальная - 30° С. Эта группа включаетмикроорганизмы, обитающие в северных морях и океанах, почве, сточных водах. Сюда же относятсясветящиеся и железобактерии, а также микробы, вызывающие порчу продуктов на холоде (ниже 0° С). Мезофилы - наиболее обширная группа, включающая большинство сапрофитов и все патогенные микроорганизмы. Оптимальная температура для них 28-37° С, минимальная - 10° С, максимальная - 45° С. Термофилы или теплолюбивые микроорганизмы, развиваются при температуре выше 55° С, температурный минимум для них 30° С, оптимум 50-60° С, а максимум - 70-75° С. Они встречаютсяв горячих минеральных источниках, поверхностном слое почвы, самонагревающихся субстратах (навозе, сене, зерне), кишечнике человека и животных. Среди термофилов много споровых форм. Высокие и низкие температуры оказывают различное влияние на микроорганизмы. Одни более чувствительны к высоким температурам. Причем, чем выше температура за пределами максимума, тем быстрее наступает гибель микробных клеток, что обусловлено денатурацией (свертыванием) белков клетки. Вегетативные формы бактерий мезофилов погибают при температуре 60° С в течение 30-60 мин, а при 80-100° С - через 1-2 мин. Споры бактерий гораздо устойчивее к высоким температурам. Например, споры бацилл сибирской язвы выдерживают кипячение в течение 10-20 мин, а споры клостридий ботулизма 6 ч. Все микроорганизмы, включая споры, погибают при температуре 165-170° С в течение часа (в сухожаровом шкафу) или при действии пара под давлением 1 атм (в автоклаве) в течение 30 мин. Действие высоких температур на микроорганизмы положено в основу стерилизации - полного освобождения разнообразных объектов от микроорганизмов и их спор. К действию низких температур многие микроорганизмы чрезвычайно устойчивы. Сальмонеллы тифа и холерный вибрион длительно выживают во льду. Некоторые микроорганизмы остаются жизнеспособными при температуре жидкого воздуха (-190° С), а споры бактерий выдерживают температуру до -250° С. Только отдельные виды патогенных бактерий чувствительны к низким температурам (например, бордетеллы коклюша и паракоклюша, нейссерии менингококка и др.). Эти свойства микроорганизмов учитывают в лабораторной диагностике и при транспортировке исследуемого материала его доставляют в лабораторию защищенным от охлаждения. Действие низких температур приостанавливает гнилостные и бродильные процессы, Что широко применяется для сохранения пищевых продуктов в холодильных установках, погребах, ледниках. При температуре ниже 0° С микробы впадают в состояние анабиоза наступает замедление процессов обмена веществ и прекращается размножение. Однако при наличии соответствующих температурных условий и питательной среды жизненные функции микробных клеток восстанавливаются. Это свойство микроорганизмов используется в лабораторной практике для сохранения культур микробов при низких температурах. Губительное действие на микроорганизмы оказывает также быстрая смена высоких и низких температур (замораживание и оттаивание) это приводит к разрыву клеточных оболочек. 38.Типы взаимоотношений организмов. 39. Отличия S- и R-форм бактерий представьте в виде таблицы. 40. Представить в форме таблицы отличия прокариотов от эукариотов.