ОБЩИЙ КЛИНИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ КРОВИ МЕТОДЫ АНАЛИЗА 1. Ручной метод: • • • Гемометр Сали Камера Горяева Микроскопия мазка • • • Подсчет показателей красной крови Лейкоформула Ретиколоциты, ядерные эритроциты, юные клетки 2. Проточная цитометрия: ЭТАПЫ ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА • Взятие крови в пробирку с антикоагулянтом (гепарин, цитрат, ЭТДА) • Автоматический подсчет форменных элементов крови • Приготовление и окраска мазков из периферической крови ЭТАПЫ ПРИГОТОВЛЕНИЯ МАЗКА КРОВИ ОСНОВНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ СКОРОСТЬ ОСЕДАНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ (СОЭ) • Не служит специфическим признаком какоголибо заболевания. • Зависит от вязкости плазмы, размеров и формы форменных элементов. • На СОЭ влияет: • Увеличение глобулина и фибриногена – повышают, • Увеличение альбуминов – снижают, • Снижение эритроцитов и гемоглобина – понижают. Ускорение СОЭ Замедление СОЭ Инфекционные заболевания Сердечно-сосудистые патологии (повышение концентрации СО2) Воспалительные процессы и возрастание белков Гипогидратация Злокачественные опухоли Гиперальбуминемия Почечные заболевания ДВС-синдром, поражение паренхимы печени Интоксикации Усиление антикоагуляции Обменные заболевания Желтуха (увеличение содержания желчных кислот и желчных пигментов в плазме) Гепатопатии Прием салицилатов, хлорида кальция Анемии Травмы, шок, некроз тканей ГЕМАТОКРИТ (HCT) • Гематокрит – общий объем эритроцитов, дающий представление о процентном соотношении между плазмой и форменными элементами (объемная фракция эритроцитов крови). ГЕМАТОКРИТ •Повышение •Понижение •Дегидратация – уменьшение обема циркулирующей крови •Полицитемия •Врожденные пороки сердца •Гиперадронокортиц изм, сахарный диабет •Породы (грейхаунд, уиппет, борзая) •Гипергидратация •Микроцитоз •Лактация •Анемии ПОГРЕШНОСТИ ИЗМЕРЕНИЯ ГЕМАТОКРИТА •Повышение •Гигантские тромбоциты •Высокий лейкоцитоз •Гипергликемия •Диабетический кетоацидоз •Гипернатрийемия •Долгое хранение •Понижение •Аггютинация эритроцитов •Выраженный микроцитоз •Гемолиз эритроцитов, появление фрагментов • • ГЕМОГЛОБИН (HGB) Сложный белок, состоящий из гема и глобина, содержит ион железа Fe2+ Осуществляет рад важнейших функций: 1. Транспорт кислорода к тканям 2. Транспорт CO2 к легким 3. Буферная система крови. Существует физиологический гемоглобин и фетальный гемоглобин. Патологический гемоглобин – очень много! Понижение гемоглобина Увеличение уровня гемоглобина Анемии различного генеза Кровопотери Гипоксии Онкологические процессы Патологии костного мозга Заболевания почек Гемодилюция – замещение крови растворами Физические нагрузки и стресс Полицитемии Внутрисосудистый гемолиз Эритроцитоз ЭРИТРОЦИТЫ (RBC) • Эритроциты – наиболее многочисленные форменные элементы крови, содержащие до 95% гемоглобина. • На поверхности эритроцитов присутствуют антигенные факторы (агглютиногены) обуславливающие различные иммунологические процессы • Продолжительность жизни эритроцитов: собак – 107 дней, у кошек – 68 дней. • Единицы измерения: - 1012 клеток/л. • Коэффициент вариации для данного параметра составляет 1-2 %. • Иногда лейкоциты включаются в посчет вместе с эритроцитами, но их влияние незначительно. • Эритропоэз – процесс образования и дифференцировки клеток эритроцитарного ростка – происходит в клетках ретикулоэндотелиальной системы (ККМ и селезенка). • Разрушаются в селезенке и печени. Эритроцитоз Эритропения Физиологический (относительный) Патологический (абсолютный) Физические нагрузки Сердечная недостаточность, пороки сердца Анемия Высокогорная местность Гипофункция селезенки Хронические воспалительные процессы Рестрикция селезенки – породная предрасположенно сть (борзые) Болезнь Кушинга (гиперадренокортиц изм) Беременность Уменьшение ОЦК при сохранении количества эритроцитов Отравления ФОС Гипергидратация Острая дистрофия печени ПОГРЕШНОСТИ ИЗМЕРЕНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ • Ложное повышение: • Высокий лейкоцитоз • Гигантские тромбоциты • Ложное понижение: • Аггютинация • Микроцитоз • In vitro гемолиз MEAN CELL VOLUME (MCV) • Показатель среднего объема эритроцита (fl) в популяции эритроцитов; • Используется для характеристики анемий. • Непосредственно измеряется анализатором или рассчитывается по формуле: RBC * 10 = MCV HCT АНИЗОЦИТОЗ Макроциты RBC HGB Определение MCV Нормациты Микроциты MCH, МСНС • МСН - среднее содержание гемоглобина в эритроците. • МСНС – средняя концентрация гемоглобина в эритроцитарной массе (этот параметр используется как индикатор ошибки прибора или ошибки, допущенной при подготовке пробы к исследованию). Гемоглобин Гемоглобин (г/л) *10 = MCН RBC *100 = MCHC Гематогрит (%) • MCH и MCHC помогают дифференцировать анемии на гипохромные, нормохромные и гиперхромные (очень редко) РЕТИКУЛОЦИТЫ • Незрелые безъядерные эритроциты, с концентрацией гемоглобина на 17% ниже чем в эритроцитах. • Отражают активность эритропоэза • Нормальное содержание ретикулоцитов в периферической крови 1-2 %. • В периферической крови они дозревают за 24-30 ч. • Ретикулоцитарный ответ на кровопотерю отмечается спустя 4 дня и более ПОЙКИЛОЦИТОЗ ЯДЕРНЫЕ ЭРИТРОЦИТЫ • Могут быть в норме у кошек и собак (редко) • Повышенное количество может быть при регенеративной анемии • Септицемия с повреждением КМ, эндотоксический шок, введение лекарств • Небольшое количество при тепловом ударе, травмах, гиперадронокортицизме, воспалительных состояних, заболевания сердечнососудистой системы • Миелодисплазия, неоплазии в КМ, дисэритропоэз • Рубрибласты – миелоидный лейкоз • Ответ на химиотерапию (винкристин) МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ •Тельца Хауэлла-Жолли и кольца Кебота – формируются в КМ путем фрагментации ядерной мембраны •Тельца Хейнца – преципитированный гемоглобин • Тельца Жолли - это остатки ядерного вещества (мелкие темно-фиолетовые включения), наблюдающиеся при мегалобластных анемиях, гемолизе, состоянии после спленэктомии. • Кольца Кебота - это остатки ядерной мембраны кольца, эллипсы, или восьмерки бледно-розового цвета в эритроцитах. Кольца Кебота встречаются при тяжелых формах анемии с нарушением дифференцировки клеток эритроидного ряда. • Тельца Хайнца (также известные как тельца Гейнца или Гейнца-Эрлиха) - это преципитаты окисленного гемоглобина в эритроците, при окрасках по Романовскому выглядящие как эозинофильные сферические включения, часто выступающие за границы эритроцита. Это достаточно распространенный маркер окислительного повреждения гемоглобина. МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ • Гипохромазия • Эхиноциты - сферические клетки, на поверхности которых располагается 30-50 спикул. • Акантоциты - клетки на поверхности имеют зубчатую форму, сфероидальны, имеют 3..12 спикул с булавовидными расширениями на концах. • Стоматоциты (гидроциты) - клетки с увеличенной на 20-30% объемом и площадью поверхности, имеют щелевидную форму центрального просвета. • Сфероциты - эритроциты, утратившие свою двояковогнутую форму. Имеют шаровидную форму, большую толщину, у них отсутствует центральное просветление. • Шистоциты - клетки похожи на каски, треуголки, осколки. Наблюдаются при микроангиопатии, гемолитической анемии под действием физических факторов, злокачественной гипертонии, уремии, а также в случае осложнений при протезировании сосудов и клапанов, ДВС (сепсис, опухоль), при приеме некоторых лекарств, воздействии токсинов. • Кодоциты - Мишеневидные клетки - имеют повышенное содержание холестерина, как следствие - увеличенную площадь поверхности. У них окрашенная периферия, и на фоне светлой центральной части небольшой более темный сферический участок. ТРОМБОЦИТЫ • Тромбоциты (кровяные пластинки, platelets, PLT) – самые маленькие клеточные элементы крови (диаметр их составляет 2-4 мкм). Тромбоциты участвуют в процессе свертывания крови. Они являются конечным этапом дифференцировки клеток мегакариоцитарного ряда. • Единицы измерения: х109 клеток/л • Количество тромбоцитов изменяется в зависимости от времени суток, в течение года. Физиологическое снижение уровня тромбоцитов отмечается во время течки, беременности, повышение – после физической нагрузки. ТРОМБОЦИТОЗ Повышение числа тромбоцитов наблюдается при: • • • • • • • • • Травмах и асфиксии В послеоперационный период Злокачественных оухолях Миелопролиферативных процессах (эритемия, миелофиброз) Хронических воспалительных заболеваниях Геморрагиях Гемолитических анемиях После применения кортикостероидов После спленэктомии ТРОМБОЦИТОПЕНИЯ Снижение числа тромбоцитов наблюдается при: • • • • • • • Отравления Инфекционные заболевания Наследование тромбоцитопении Ионизирующее воздействие Гиперспленизм Патологии костного мозга Применение некоторых лекарственных средств (антигистаминные препараты, диуретики, антибиотики, противосудорожные средства и т.д) Группа Причины Снижение синтеза тромбоцитов в КМ Гипоплазия и аплазия КМ, лейкозы, метастазы, FeLV, применение тромбопоэтина Снижение времени жизни (разрушение) IMT первичная (редко) и вторичная (системная красная волчанка, ревматоидный артрит, аутоиммуная гемолитическая анемия, лекарства, инвазионные заболевания; несовместимость крови, гемафагоцитоарная гистиоцитарная саркома Снижение времени Тромбоэмболия, ДВС, васкулиты жизни (потребление) Секвестрация •Селезенка (спленомегалия, заворот, опухоли) •Печень (гемангиома, гемангиосаркома) Кровотечения, инфекционные агенты Эрлихиоз, чума, парвовирус, FIV и FeLV ТРОМБОЦИТЫ ПОГРЕШНОСТИ В АНАЛИЗЕ КРОВИ Повышение Понижение •Фрагментация эритроцитов •Липемия •Микроцитоз •Особенности работы анализатора Агрегация тромбоцитов (реакция на ЭДТА) Макротромбоциты WBC – WHITE BLOOD CELLS ЛЕЙКОЦИТЫ Гранулоциты Агранулоциты •Нейтрофилы •Эозинофилы •Базофилы •Лимфоциты •Моноциты ЛЕЙКОЦИТЫ Лейкоцитоз Лейкопения Острые инфекции Хронические интоксикации Гнойно-септические процессы Эндокринные заболевания (тиреотоксикоз, болезнь Аддисона, акромегалия) Интоксикации Аплазия и гипоплазия костного мозга, метастазы и новообразования костного мозга Злокачественнные новообразования Гиперспленизм Заболевания системы кроветворения Аутоиммунные заболевания Лимфогрануломатоз и лейкоз Сульфаниламиды, антитиреоидные, противосудорожные Обильные кровопотери Глюкокортикоиды, адреналин, инсулин Аллергии НЕЙТРОФИЛЫ • Нейтрофилы – гранулоциты представленные несколькими видами клеток в циркулирующей крови: • Юные нейтрофилы представляют собой переходную форму от миелоцита костного мозга к более зрелым формам нейтрофила. Количество их в циркулирующей крови здоровых животных незначительно. • Палочкоядерные нейтрофилы имеют компактное темнофиолетовое ядро, прямое или загнутое в виде цифры 6, встречаются формы, напоминающие подкову. Протоплазма равномерно окружает ядро. • Сегментоядерные нейтрофилы – это зрелые нейтрофильные клетки, их количество колеблется в широких пределах в зависимости от вида и состояния здоровья животного. НЕЙТРОФИЛЫ • Нейтрофилы – высокоспециализированные клетки с выраженной защитной функцией. Обладают фагоцитарной и двигательной активностью, способностью вырабатывать бактерицидные (лизоцим), антитоксические, пирогенные и лизирующие факторы (гидролитические ферменты). НЕЙТРОФИЛЫ • Наиболее многочисленная популяция лейкоцитов у собак • В кровотоке присутствует от 5-10 часов • В цитоплазме содержат гранулы ферментов • Фагоцитируют бактерии • Основные участники воспалительного ответа организма НЕЙТРОФИЛЫ • Нейтрофилы покидают кровяное русло • В тканях осуществляют фагоцитоз бактерий (нейтрофильный бронхит, септические/асептические выпотные жидкости, воспалительные процессы) НЕЙТРОФИЛЫ Повышение Понижение •Повышенная продукция •Задержка миграции в тканях •Сниженная продукция •Переход в краевой пул •Воспалительные процессы •Абсцессы •Пневмонии •Миелоидный лейкоз •Стресс •Паранеопластический синдром •FeLV, FIV •Химиотерапия •Эрлихиоз •Лимфолейкоз, дисгранулопоэз, гипоплазия НЕЙТРОФИЛЫ • Сдвиг влево воспаление, иммуноопосредованные заболевания, инфильтрация КМ • Гиперсегментация МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ НЕЙТРОФИЛОВ • Вауколизация цитоплазмы • Тельца Деле • Токсическая зернистость • Гиперсегментация • Гигантские нейтрофилы ЭОЗИНОФИЛЫ • В кровотоке присутствуют примерно 18 часов, резиденты ЖКТ • Обладают меньшей фагоцитарной активностью • В гранулах оксидазы и медиаторы воспаления • Могут представлять АГ Тлимфоцитами • Фагоцитируют комплекс антигенантитело, образованные преимущественно IgE, участие в реакции гиперчувствительности 1 типа ЭОЗИНОФИЛЫ Повышение •Повышенный синтез IL5; 2 •Гельминты •Реакция гиперчувствительности с IgE (бронхиальная астма) •Злокачественные опухоли (мастоцитома, лимфома) •Эозинофильный лейкоз и эозинофильный синдром Понижение •Сниженный выход из КМ •Глюкокортикостероиды, стресс •Синдром Кушинга •Острые воспалительные состояния БАЗОФИЛЫ • Содержат гранулы гистамина • Повышают выход гистамина, участвуя в IgE-зависимых реакциях • Участвуют в развитии реакции гиперчувствительности • АГ-презентирующие клетки в лимфоузлах • В норме могут отсутствовать • Базофилия часто связана с эозинофилией и реакциями гиперчувствительности МОНОЦИТЫ Фагоцитоз АГ-презентирующие клетки Участвуют в регуляции воспаления и гемопоэза Мигрируют в ткани (макрофаги и дендритные клетки) • Обладают более низкой антибактериальной активностью, и более высокой против вирусной, грибковой, гельминтной и протозойной • «Клетки-мусорщики» • Участвуют в обмене гема • • • • МОНОЦИТЫ Повышение •Острое и хроническое воспаление •Эндогенные и экзогенные глюкокортикостероиды •Иногда при гистиоцитарной саркоме собак •Миеломоноцитарный лейкоз Понижение •Моноцитов может быть немного или они вообще не встречаются •Термин моноцитопения редко используется •Абсолютное число моноцитов может снижаться при панцитопении, пиогенных инфекциях, поражении КМ ЛИМФОЦИТЫ • Резиденты лимфоидных органов • 2-5% лимфоцитов циркулируют в кровотоке • Различают Т-лимфоциты (тимусзависимые), Влимфоциты (образуются в стволовых клетках) и NK-киллеры • Активная пролиферация лимфоцитов в ответ на АГ происходит в лимфоузлах, однако может отражаться в периферической крови ЛИМФОЦИТЫ Повышение •Инъекция интерлейкинов •Вакцинация, хроническая АГ стимуляция •Хроническая лейкемия, лимфома •На исходе вирусного заболевания •Ядерные эритроциты •Агрегация тромбоцитов Понижение •Острые и тяжелые воспаления •Парвовирусная инфекция •Эндогенные и экзогенные глюкокортикоиды и стресс •FeLV, FIV, панлейкопения •Начало острой вирусной инфекции •Лимфангиоэктазия и нарушение рециркуляции лимфы РЕФЕРЕСНЫЕ ИНТЕРВАЛЫ ДЛЯ ОЦЕНКИ ЛЕЙКОГРАММ Популяция Собака Кошка Юные - - 0-3 0-3 60-70 35-75 2-6 2-12 Базофилы редко редко Моноциты 3-10 1-4 Лимфоциты 12-30 20-55 Нейтрофил ы Палочкояде рные Сегментояд ерные Эозинофилы ТИПЫ ЛЕЙКОГРАММ Типы лейкограмм Состав Норма Сегментированные нейтрофилы Стресс лейкограмм Повышение зрелых нейтрофилов, лимфопения. Незначительный сдвиг влево Острое воспаление Сдвиг влево, токсичность нейтрофилов «Лейкомоидная реакция» Сегментоядерные, палочкоядерные, юные, миелоциты Хроническое воспаление Гнойный синтез нейтрофилов КМ МАСТОЦИТЫ • Тучные клетки • Грануля заполнены вазоактивными веществами • В крови могут проявляться при воспалительных заболеваниях, гиперчувствительн ости • Мастоцитома, мастоцитемия «БЛАСТЫ» • Термин из медицины человека, обозначающий юные клетки • Анализ на бласты в ветеринарной клинике подразумевает подтверждение лимфоидной лейкемии или пятой стадии лимфомы • При различных лейкозах так же появляются бластные клетки • Бластные клетки не возможно дифференцировать визуально • Наличие единичных «бластных» клеток не подтверждает онкологию
