Уважаемые коллеги, ООО «БиоВитрум» предлагает Вашему вниманию каталог основных методов гистологической окраски препаратов. Общение с широким кругом специалистов, использующих в своей профессиональной деятельности различные методики, показывает, что назрела необходимость в издании современного справочника, включающего описание и демонстрирующего результаты применения как классических методов окраски гистолических и цитологических препаратов(окраски по Ван-Гизону, Маллори, Массону и др.), так и недавно разработанных, но снискавших заслуженную популярность методик (AgNOR и др.) Мы надеемся, что данное издание будет полезно не только в практической работе лаборантов-гистологов (т.к. в каталоге пошагово представлены протоколы окрасок), но и для врачей-гистологов, а также для сотрудников медицинских и научно-исследовательских институтов, занимающихся гистотехникой. При составлении каталога были использованы технические спецификации к готовым наборам красителей, предоставленные нашим итальянским партнером, компанией Bio-Optica Milano S.P.A. Данное издание каталога является вторым переработанным с учётом уточнений и изменений. Обращаем Ваше внимание, что все представленные в данном каталоге наименования красителей и сопутствующие товары Вы можете заказать, обратившись в один из офисов ООО «БиоВитрум». С надеждой на сотрудничество, Руководитель отдела по работе с клиентами Михайлова В.С. Содержание по алфавиту AgNOR..................................................................................................................................................... 4 Альциановый синий pH 2,5.................................................................................................................... 5 Альциановый синий pH 2,5-pH 1,0........................................................................................................ 6 Альциановый синий pH 2,5 Шифф реакция......................................................................................... 7 Амилаза из Bacillus subtilis..................................................................................................................... 8 Ван-Гизон-Фуше...................................................................................................................................... 9 Ван-Гизон............................................................................................................................................... 10 Вартин-Старри (набор для демонстрации спирохет).........................................................................11 Набор для окраски по Вейгерту(для окраски эластических волокон).............................................. 12 Набор для окраски по Вейгерту (экспресс –метод)............................................................................ 13 Вейгерт - Ван-Гизон (экспресс-метод)................................................................................................. 14 Вейгерт - Ван-Гизон.............................................................................................................................. 15 Набор для диагностики болезни Вильсона (выявление скоплений меди)....................................... 16 Окраска по Граму (для срезов)............................................................................................................ 17 Окраска по Граму (для мазков)........................................................................................................... 18 Гимза для определения Helicobacter Pylori......................................................................................... 19 Гиалуронидаза из бычьего семенника................................................................................................ 20 Гримелиус.............................................................................................................................................. 21 Грокотт набор для визуализации мицелия......................................................................................... 22 Набор для окраски «азаном» по Гейденгайну.................................................................................... 23 Импрегнация серебром........................................................................................................................ 24 Набор по Косса (демонстрация кальциевых депозитов в гистологических препаратах)............... 25 Коллоидное железо по Моури (набор для выявления реактивного железа)................................... 26 Конго красный....................................................................................................................................... 27 Люксолевый прочный синий по Клюверу-Баррера............................................................................ 28 Май-Грюнвальд Гимза.......................................................................................................................... 29 Набор для окраски по Маллори.......................................................................................................... 30 Пикро Маллори..................................................................................................................................... 31 Набор для окраски по Массону с анилиновым синим....................................................................... 32 Набор для окраски по Массону-Голднеру........................................................................................... 33 Набор для окраски по Массону-Фонтана............................................................................................ 34 Метиловый зеленый пиронин.............................................................................................................. 35 P. A. S. M. Метенамин-серебро............................................................................................................ 36 Муцикармин.......................................................................................................................................... 37 Орсеин................................................................................................................................................... 38 Окраска по Перльсу.............................................................................................................................. 39 Набор для окраски по Папаниколау.................................................................................................... 40 Перльс Ван-Гизон................................................................................................................................. 41 Сириус красный.................................................................................................................................... 42 Толуидиновый синий-Альциановый желтый для Helicobacter pylori................................................. 43 Реакция Фельгена................................................................................................................................. 44 P. T. A. H. Фосфовольфрамовый кислый гематоксилин..................................................................... 45 Фуксин кислый / Оранжевый G............................................................................................................ 46 Циль-Нильсен (для срезов)................................................................................................................. 47 Циль-Нильсен....................................................................................................................................... 48 ШИК-реакция......................................................................................................................................... 49 ШИК-реакция Пикро индигокармин..................................................................................................... 50 Экспресс-краситель MGG (набор для дифференциальной окраски форменных элементов крови).... 51 Таблица растворов красителей........................................................................................................... 52 Таблица взаимозаменяемости гематоксилинов.................................................................................56 Вспомогательные принадлежности на этапе окраски....................................................................... 57 Емкости для окраски препаратов из стекла....................................................................................... 58 Наборы для окраски препаратов из пластика.................................................................................... 59 Иммуногистохимический карандаш Pap-Pen..................................................................................... 61 04-045801 AgNOR Срок годности: 1 год Хранить при температуре 15-25°С в темном месте Реактивы А. Желатина водный раствор, 12х8 мл В. Нитрат серебра концентрированный раствор, 12х10 мл С. Фиксатор, 1х30 мл Молочная железа: карцинома Применение Предназначен для выявления белков афинных к серебру в области ядрышкового организатора (NOR) Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Приготовить рабочий раствор: смешать раствор из флакона А и раствор из флакона В, перемешать стеклянной палочкой, промытой в дистиллированной воде. Поместить исследуемый препарат в раствор и инкубировать в темноте в течение 30 минут при комнатной температуре. Осторожно промыть в 3 порциях дистиллированной воды. Нанести на срез 10 капель реагента С, оставить на 1 минуту. Промыть в дистиллированной воде. Дегидратировать срезы в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты AgNOR, гранулы афинные к серебру черный 04-160802 Альциановый синий pH 2,5 Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы А. Альциановый синий рН 2.5 по Мoури, 30 мл В. Раствор натрия тетрабората, 30 мл C. Кармалаун Майера, 30 мл Тонкая кишка Применение Используется для выявления кислых мукополисахаридов. Альциановый синий по химической структуре относится к группе купрофталоцианинов; способен образовывать ионные связи с полианионами кислых мукополисахаридов. В данном методе происходит трансформация красителя в синий пигмент Монастраля под воздействием натрия тетрабората. Данный пигмент является нерастворимым, что облегчает дальнейшую работу с образцом без нежелательного распространения красителя по препарату. Селективность окрашивания обеспечивается избирательным взаимодействием Альцианового синего с карбоксильными и сульфорадикалами полианионов (не происходит взаимодействия красителя с фосфатными радикалами нуклеиновых кислот). Характерно, что Альциановый синий рН 1 образует связи с мукополисахаридами с большим содержанием сульфо-групп, а Альциновый синий рН 2.5 выявляет большинство кислых мукополисахаридов. Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 30 мин. Подсушить образцы (не промывать), нанести на срез 10 капель реактива В, оставить на 10 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Кислые мукополисахариды Ядра бирюзово-голубые красные 04-161802 Альциановый синий pH 2,5-pH 1,0 Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы А. Раствор Альцианового синего рН 2.5, 30 мл В. Раствор натрия тетрабората, 30 мл C. Раствор Альцианового синего рН 1,0, 30 мл D. Дифференцирующий раствор, 30 мл Применение Используется с целью выявления и дифференциации кислых мукополисаКишечник харидов в тканевых образцах. Для дифференциации высокосульфатированных кислых мукополисахаридов от слабосульфатированных, от гиалуроновой кислоты и сиаломуцинов проводится окрашивание из серии соседних срезов. Первый срез обрабатывается раствором Альцианового синего рН 2,5, второй – раствором Альцианового синего рН 1,0. Сравнение двух срезов позволяет дифференцировать слабосульфатированных мукополисахариды, гиалуроновую кислоту и сиаломуцины на первой срезе и мукополисахариды с большим содержанием сульфидных групп – на втором. Характерно, что Альциановый синий рН 1 образует связи с мукополисахаридами с большим содержанием сульфо-групп, а Альциановый синий рН 2.5 способен к окрашиванию всех кислых мукополисахаридов. Описание метода Альциановый синий рН 2,5 Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 30 мин. Слить избыток реагента, нанести на срез 10 капель реактива В, оставить на 10 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Альциановый синий рН 1,0 Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 10 мин. Подсушить образцы (не промывать), нанести на срез 15 капель реактива D, оставить на 10 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Кислые мукополисахариды бирюзово-голубые 04-163802 Альциановый синий pH 2,5 ШИК реакция(PAS) Срок годности: 1год Хранить при температуре: 4°С Реактивы А. Альциановый синий рН 2.5 по Моури, 30 мл В. Раствор натрия тетрабората, 30 мл C. Раствор йодной кислоты, 30 мл D. Реактив Шиффа по Хочкиссу и Мак Манусу, 30 мл E. Раствор метабисульфита калия, 30 мл F. Раствор фиксатора, 30 мл G. Гематоксилин Майера, 30 мл Крипты толстой кишки Применение Интегрированный метод выявления кислых и нейтральных мукополисахаридов и углеводов в тканевых образцах. В первой части процедуры окрашивания срезы обрабатываются Альциановым синим, что приводит к окрашиванию кислых мукополисахаридов с формированием нерастворимого синего пигмента Монастраля, стабильного при дальнейшей обработке во второй половине процесса. Затем проводится ШИК-реакция с окрашиванием нейтральных мукополисахаридов и гликогена (окрашивание гликогена произойдет только при отсутствии предварительной ферментной обработки препарата). Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 30 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде, нанести на срез 15 капель реактива B оставить на 10 мин. Промыть срезы под проточной водой - 5 мин, затем - в дистиллированной воде в течение 2 мин. Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 10 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 20 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива Е, оставить на 2 мин. Слить избыток реагента, нанести на срез 10 капель реактива F, оставить на 3 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива G, оставить на 2 мин. Подсинить образцы под проточной водой в течение 5 мин. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты ШИК-положительные вещества Кислые мукополисахариды Некоторые эпителиальные мукополисахариды, хрящ ярко-красные бирюзово-голубые от пурпурного до темно-синего 04-140808 Амилаза из Bacillus subtilis Срок годности: 6 месяцев Хранить при температуре 4°С Реактивы Альфа-амилаза из Bacillus subtilis A в буферном растворе рН 7,3, 1х30 мл Применение Применяется для удаления гликогена из тканевых срезов. Печень, парафиновые срезы: удаление гликогена рекомендуется для обнаружения только эпителиальных нейтральных муцинов. Мышцы, замороженные срезы тканей. Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез раствор амилазы: инкубировать 10 минут при комнатной температуре Промыть препарат дистиллированной водой несколько раз. Окрасить методом ШИК-реакции (реактивом Шиффа). Результаты После обработки амилазой ШИК-реакции нет. 04-121872 Ван-Гизон-Фуше Срок годности реактива: 2 года Температура хранения: 15-25°С Реактивы А. Раствор трихлоруксусной кислоты, 30 мл В. Раствор хлорида железа, 30 мл С. Пикрофуксин Ван-Гизона, 30 мл Мышечная оболочка тонкой кишки Применение Для визуализации билирубина и коллагеновых волокон в тканевых образцах. Описание метода Поместить срез в дистиллированную воду. На образец нанести 5 капель реактива А и 5 капель реактива В, оставить на 5 минут. Промыть образцы в дистиллированной воде. На образец нанести 10 капель реактива С, оставить на 7 минут. Просушить образцы на воздухе в течение 5 минут (не промывать). Дегидратировать образцы в абсолютном спирте, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Билирубин Коллагеновые волокна Цитоплазма, миоциты, ороговевший эпителий и волокна нейроглии зеленый красные желтые 04-030802 Ван-Гизон Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы А. Железный гематоксилин по Вейгерту, раствор В, 18 мл В. Железный гематоксилин по Вейгерту, раствор А, 18 мл C. Пикрофуксин по Ван-Гизону, 30 мл Мышечная оболочка тонкой кишки Применение Рекомендуется для окраски соединительной ткани, особенно с целью выделения коллагеновых волокон. В состав препарата входят три различных красителя: железистый гематоксилин по Вейгерту для окрашивания ядер, пикриновая кислота для цитоплазмы, кислый фуксин для коллагена. Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 5 капель реактива А и 5 капель реактива В, оставить на 10 мин. Промыть образцы в проточной воде в течение 10 мин. Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 10 мин. Быстро промыть срезы (2-3 сек) в дистиллированной воде. Быстро дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, оставив на 1 мин в последнем (абсолютный этанол), просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Ядра Коллагеновые волокна Цитоплазма, гладкая и поперечно-полосатая мышечная ткань, ороговевающий эпителий, нейроглия и эритроциты 10 черные пурпурно-красные желтые 04-040903 Вартин-Старри (набор для выявления спирохет) Срок годности: 1 год Хранить при температуре 15-25°С, в темном месте Реактивы А. Концентрированный буферный раствор 1х50 мл B. Концентрированный раствор нитрата серебра 1х12 мл C. Проявляющий раствор: компонент 1°, 10х6 мл D. Проявляющий раствор: компонент 2°, 10х6 мл E. Проявляющий раствор: компонент 3°, 10х5 мл Применение Используется с целью выявления спирохет. Аргирофильная реакция основана на способности клеточной стенки бактерий связывать ионы серебра и, восстанавливая до металлического состояния, обеспечивать их визуализацию. Внимание: Необходимо использование бидистиллированной воды Не использовать покрытые полилизином предметные стекла Избегать использования металлических инструментов Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Приготовить импрегнирующий раствор: поместить контейнер для стекол в полистироловый штатив. Заполнить контейнер 13 мл дистиллированной воды, добавить 4.5 мл реактива А и 20 капель реактива В. Осторожно перемешать стеклянной палочкой, предварительно вымытой в дистиллированной воде. Поместить образцы в контейнер и инкубировать при 50°С 40 мин Параллельно приготовить «проявляющий раствор» (желательно приготовить раствор за 12 мин до окончания инкубации). Подогреть бутылочки с реагентами С и D в течение 10 мин при 50°С. Содержимое обеих бутылочек перелить во второй контейнер для стекол (обращайте внимание на температуру бутылочек – используйте защитные перчатки), осторожно перемешать стеклянной палочкой, предварительно вымытой в дистиллированной воде, добавить содержимое бутылочки с реагентом Е и вновь перемешать. Поместить образцы в «проявляющий раствор» и инкубировать при 50°С 3-4 мин. Промыть срезы в теплой проточной воде в течение 2 мин. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Спирохеты и другие микроорганизмы Фон черные золотисто-коричневый 11 04-050802 Набор для окраски по Вейгерту (для окраски эластических волокон) Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы Кровеносный сосуд А. Раствор перманганата калия, 18 мл В. Активирующий кислотный буфер, 18 мл C. Раствор щавелевой кислоты, 30 мл D. Раствор резорцин-фуксина по Вейгерту, 80 мл E. Дифференцирующий кислотный буфер, 30 мл Применение Выявление эластических волокон в тканях. Метод основан на афинности комплекса резорцинфуксин к эластическим волокнам и реакции преципитации между резорцином, основным фуксином и хлоридом железа. В виду относительной специфичности метода возможно окрашивание и других структур: коллагена, базальных мембран. С целью селективного окрашивания эластических волокон необходимо проводить тщательное дифференцирование. Данная методика отличается от экспресс-метода как набором реактивов, так и спецификой процесса; она более селективна, так как используется менее концентрированная смесь красителей и более продолжительная инкубация. Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 5 капель реактива А и 5 капель реактива В, оставить на 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива С., оставить на 10 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Поместить срезы в реактив D, закрыть контейнер (предотвращение испарения этанола) и инкубировать ночь. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива Е, оставить на 10 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Эластические волокна от темно-синих до черных 12 04-052812 Набор для окраски по Вейгерту (экспресс-метод) Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы А. Раствор йодной кислоты, 30 мл В. Спиртовой раствор для влажной камеры, 80 мл C. Фуксин-резорцин Вейгерта, 30 мл D. Дифференцирующий кислотный буфер, 30 мл E. Кармалаун Майера, 30 мл Артерия Применение Выявление эластических волокон в тканях; рекомендовано при исследовании патологии сосудов. Метод основан на афинности эластических волокон к красителю, являющейся следствием реакции между резорцином и основным фуксином в присутствии хлорида железа. В виду относительной специфичности метода возможно окрашивание и других структур: коллагена, базальных мембран. С целью селективного окрашивания эластических волокон необходимо проводить тщательное дифференцирование. Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Приготовить влажную камеру: на дно контейнера налить 0.75 мл реактива В; поместить препарат во влажную камеру, предварительно нанеся на срез по 10 капель реактива С. Инкубировать 30 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 2 мин. Промыть срезы под проточной водой в течение 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива Е, оставить на 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Эластические волокна Ядра красно-коричневые красные 13 04-053812 Вейгерт - Ван-Гизон (экспресс-метод) Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы Соединительная ткань и эластические волокна Применение А. Раствор йодной кислоты, 30 мл В. Спиртовой раствор для инкубационного контейнера, 80 мл C. Резорцин-фуксин Вейгерта, 30 мл D. Дифференцирующий кислотный буфер, 30 мл E. Железный гематоксилин Вейгерта, раствор В, 18 мл F. Железный гематоксилин Вейгерта, раствор А, 18 мл G. Пикрофуксин Ван-Гизона, 30 мл Выявление эластических волокон, соединительной ткани и клеточных ядер. Рекомендовано при исследовании патологии сосудов. Метод основан на афинности эластических волокон к красителю, являющейся следствием реакции между резорцином и основным фуксином в присутствии хлорида железа. В виду относительной специфичности метода возможно окрашивание и других структур: коллагена, базальных мембран. С целью селективного окрашивания эластических волокон необходимо проводить тщательное дифференцирование. Подкрашивание по Ван-Гизону позволяет одновременно дифференцировать коллаген от матрикса и окрашивать ядра. Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Приготовить инкубационный контейнер: на дно контейнера налить 0.75 мл реактива В; поместить образцы в контейнер, предварительно нанеся на срез по 10 капель реактива С. Закрыть контейнер и инкубировать в течение 30 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 2 мин. Промыть срезы в проточной воде в течение 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 5 капель реактива Е и 5 капель реактива F, оставить на 10 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива G, оставить на 10 мин. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Эластические волокна Ядра Коллаген Матрикс, эритроциты от пурпурно-красных до коричневых черные различные оттенки красного желтые 14 04-051802 Вейгерт - Ван-Гизон Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы Реактивы: А. Раствор йодной кислоты 30 мл B. Раствор Вейгерта 80 мл C. Дифференцирующий кислотный буфер, 30 мл D. Железный гематоксилин Вейгерта, раствор В, 18мл E. Железный гематоксилин Вейгерта, раствор A, 18 мл F. Пикрофуксин по Ван-Гизону, 30 мл Соединительная ткань и эластические волокна Применение Интегрированный метод выявления эластических волокон, соединительной ткани, коллагена и клеточных ядер. Окрашивание по Ван-Гизону наиболее часто ассоциировано с окрашиванием по Вейгерту. Метод основан на афинности эластических волокон к красителю, являющейся следствием реакции между резорцином и основным фуксином в присутствии хлорида железа. В виду относительной специфичности метода возможно окрашивание и других структур-коллагена, базальных мембран. С целью селективного окрашивания эластических волокон необходимо проводить тщательное дифференцирование. Данная методика отличается от экспресс-метода как набором реактивов, так и спецификой процесса; она более селективна, так как используется менее концентрированная смесь красителей и более продолжительная инкубация. Подкрашивание по Ван-Гизону позволяет одновременно дифференцировать коллаген от матрикса и окрашивать ядра. Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Поместить срезы в реактив D, закрыть контейнер (предотвращение испарения этанола) и инкубировать ночь. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 10 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива B и добавить 5 капель реактива Е, оставить на 10 мин. Подсинить образцы в проточной воде в течение 10 мин. Нанести на срез 10 капель реактива F, оставить на 7 мин. Быстро (2-3 сек) промыть срезы в дистиллированной воде. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации с одноминутной задержкой в последнем – абсолютном этаноле, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Эластические волокна Ядра Коллаген Матрикс, эритроциты от темно-синих до черных черные различные оттенки красного желтые 15 04-182807 Набор для диагностики болезни Вильсона (выявление скоплений меди) Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы А. Раствор натрия ацетата, 30 мл В. Раствор формалина (v/v), 30 мл С. Концентрированный спиртовой раствор роданина, 30 мл D. Раствор гематоксилина Майера, 30 мл Печень Применение Для визуализации скоплений меди в препаратах ткани печени. Принцип метода Ряд заболеваний печени связан с избыточным накоплением меди в печеночной ткани, присутствующей в ней и в физиологичном состоянии. При болезни Вильсона уменьшение экскреции меди с желчью приводит к ее накоплению в гепатоцитах. Метод окрашивания основан на предположительном связывании роданина с некоторым количеством ионов меди, находящихся в лизосомах. Поместить срезы в дистиллированную воду Приготовить буферный раствор: В мензурку объемом 50 мл налить 40 мл дистиллированной воды, добавить 10 капель реактива А и 10 капель реактива В. Перемешать стеклянной палочкой. В дальнейшем полученный раствор использовать для промывки. Приготовить раствор роданина: В колбу объемом 50 мл налить 40 мл дистиллированной воды, добавить 20 капель реактива С. Поместить образцы в полученный раствор и инкубировать при 37°С в течение 20 часов. Промыть образцы в полученном буферном растворе (см. выше) трижды, каждый раз меняя раствор. На образец нанести 10 капель реактива D, оставить на 5 минут. Промыть образцы в полученном буферном растворе (см. выше) трижды, каждый раз меняя раствор. Дегидратировать образцы в спиртах восходящей концентрации; просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Скопления меди Ядра клеток оранжево-красные синие 16 04-100802 Окраска по Граму (для срезов) Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы А. Раствор флоксина В, 100 мл В. Раствор кристаллического фиолетового, 30 мл C. Раствор Люголя, 30 мл D. Ацетон-Лимонен, 100 мл Е. Ацетон-Лимонен, 100 мл Бедренная артерия Применение Дифференциация грамположительных и грамотрицательных бактерий в тканевых образцах и мазках. Окрашивание по Граму представляет собой один из важнейших методов дифференцировки различных видов бактерий. В данном случае последовательно используются два красителя: кристаллический фиолетовый и фуксин. Кристаллический фиолетовый преципитирует при взаимодействии с раствором йода (реакция восстановления). Полученный комплекс взаимодействует с бактериальной стенкой с образованием связей. Под воздействием дифференцирующего раствора происходит разрушение этих связей у одних (грамположительные) и сохранение у других (грамотрицательные). Последние, впоследствии окрашиваются в красный цвет. Способность грамположительных бактерий удерживать краситель объясняется наличием в их стенке молекулы рибонуклеата магния, образующей связь с кристаллическим фиолетовым Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Вылить в колбу реактив А, поместить туда препарат и инкубировать при 56-58°С на 15 мин; использованный реактив перелить в исходную упаковку через фильтровальную бумагу Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива В, оставить на 3 мин. Слить избыток реагента и нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 3 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде и просушить фильтровальной бумагой, затем просушить на воздухе в течение 10 мин. Слить избыток реагента, вылить в сосуд Коплина реактив D, поместить туда препарат на 1 мин, периодически перемешивая, перелить раствор обратно в сосуд, предварительно профильтровав. Повторить предыдущий шаг с реактивом Е. Просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Грамположительные бактерии Грамотрицательные бактерии Ядра синий красный красный 17 04-100803 Окраска по Граму (для мазков) Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы А. Раствор кристаллического фиолетового по Хакеру 500 мл В. Раствор Люголя 500 мл C. Обесцвечивающий раствор 2х500 мл D. Раствор сафранина 500 мл Применение Дифференциация грамположительных и грамотрицательных бактерий в фиксированных мазках. Метод основан на способности грамположительных бактерий и дрожжевых клеток удерживать кристаллический фиолетовый и окрашиваться в синий цвет. Грамотрицательные бактерии теряют окрашивание при обесцвечивании и окрашиваются в розовый цвет сафранином. Описание метода Фиксировать просушенные на воздухе мазки с использованием следующих методов: - 2 -3 раза провести предметное стекло через слабое пламя, затем остудить при комнатной температуре, - погрузить образцы в абсолютный метанол на 1-2 мин, затем промыть дистиллированной водой. Нанести на мазки реактив А., оставить на 1 мин. Просушить мазки и быстро провести через реактив В. Поместить мазки в реактив В, оставить на 1 мин. Промыть в дистиллированной воде. Поместить мазки в реактив С, оставить на 1 мин. Промыть в дистиллированной воде. Поместить мазки в реактив D, оставить на 1 мин. Промыть в дистиллированной воде. Просушить препараты на воздухе. Результаты Грамположительные бактерии и дрожжевые клетки Грамотрицательные бактерии 18 сине-фиолетовый красно-оранжевый 04-090803 Гимза для определения Helicobacter Pylori Срок годности: 2 года Хранить при температуре 20-25°С Реактивы А. Модифицированный раствор Гимза, 150 мл В. Ацетатный буфер, 150 мл С. Дифференцирующий реактив, 150 мл D. Дегидратирующий реактив, 150 мл E. Дегидратирующий реактив, 150 мл Слизистая оболочка желудка Применение Выявление Helicobacter Pylori в образцах биопсии слизистой желудка. Для идентификации бактерий необходимы доскональное соблюдение методики окрашивания и тщательная дифференциация Описание метода Депарафинизировать срезы и поместить в дистиллированную воду. Приготовление буферного раствора: Растворить реактив В в дистиллированной воде 1:10; Использовать полученный раствор для приготовления рабочего раствора Гимза. Приготовление рабочего раствора Гимза: Смешать 10 мл реактива А и 30 мл приготовленного ранее буферного раствора. Поместить препараты в рабочий раствор на 30 мин Просушить мазки (не промывать) и поместить на 15 сек в реактив С. Повторить предыдущий пункт, используя реактивы D и Е. Просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Helicobacter Pylori Ядра Цитоплазма синие в форме крыльев чайки синие розовая 19 04-150805 Гиалуронидаза из бычьего семенника Срок годности: 3 месяца Хранить при температуре 4°С Реактивы А. Фосфатный буфер, 100мл В. Гиалуронидаза, 0,05 мг С. Фосфатный буфер, 100 мл Применение Применяется для удаления из тканевых срезов гиалуроновой кислоты и хондроитин сульфата А и В Описание метода Поместить 2 серийных среза в дистиллированную воду ( исследуемый и контрольный). Приготовить раствор гиалуронидазы: пересыпать содержимое из флакона В во флакон А (мы советуем оставить часть фосфатного буфера из флакона A, чтобы промыть флакон B и соб рать остатки его содержимого). Перелить раствор в колбу и поместить исследуемый образец. Перелить раствор из флакона C в колбу и поместить туда контрольный срез. Инкубировать оба препарата в течение 1 часа при температуре 37°С. Промыть оба препарата в проточной воде в течение 5 минут. Окрасить Альциановым синим. Результаты В случае присутствия гиалуроновой кислоты или хондроитин сульфата окраска альциановым синим отсутствует. 20 04-044822 Гримелиус Срок годности: 1 год Хранить при температуре 4°С Реактивы А. Раствор нитрата серебра, 30 мл В. Концентрированный ацетатный буферный раствор рН 5.6, 30 мл C. Раствор гидрохинона, 30 мл D. Раствор натрия сульфита, 30 мл E. Буферизированный раствор нитрата серебра, 30 мл F. Раствор фиксатора, 30 мл Тонкая кишка Применение Используется с целью выявления аргирофильных элементов в тканевых образцах. Метод основан на способности некоторых тканевых компонентов связывать соли серебра. В дальнейшем серебро переводится в восстановленную форму путем фотографического процесса. Селективность метода обусловлена низкой концентрацией солей серебра в рабочем растворе. Повторная непродолжительная импрегнация используется с целью преципитации дополнительных количеств на объекте окрашивания для его более четкой визуализации. Внимание: При всех реакциях с солями серебра необходимо использовать особо чистую стеклянную посуду и не допускать соприкосновения содержащих серебро реактивов с металлическими объектами (пинцетами и т.п.); Использовать только дистиллированную или деионизированную воду; Не использовать фиксаторы с содержанием солей тяжелых металлов. Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Смешать 40 мл дистиллированной воды, 10 капель реактива А и 10 капель реактива В и инкубировать при 60°С 3 ч. После инкубации оставить для охлаждения на 5 мин. Не смывая, нанести на срез 10 капель реактива С и 10 капель реактива D, оставить на 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива G, оставить на 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива Е, оставить на 10 мин. Не смывая подсушить срез и нанести на срез 10 капель реактива F, оставить на 5 мин. Промыть в дистиллированной воде и нанести на срез 10 капель реактива G, оставить на 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Аргирофильные гранулы от темно-коричневого до черного 21 04-043823 Грокотт набор для визуализации мицелия Срок годности: 1 год Хранить при температуре 4°С Реактивы Легкое А. В. C. D. E. F. G. H. Раствор хромовой кислоты, 30 мл Раствор натрия бисульфита, 30 мл Раствор гексаметилентетрамина, 30 мл Раствор нитрата серебра, 30 мл Раствор бората натрия, 30 мл Раствор хлорида золота, 30 мл Раствор тиосульфата натрия, 30 мл Раствор светового зеленого, 30 мл Применение Выявление мицелия в тканевых образцах. У большинства грибов клеточная стенка состоит из хитина - полимера N-ацетилглюкозамина, полимеров D-глюкозы и D-маннозы, белков и липидов. Хромовая кислота реагирует с гликолевыми и гликоаминными группами полисахаридной цепи, окисляя их до альдегидных групп с последующим разрывом цепи. Вновь образованные альдегиды восстанавливают серебро из хлорида серебра, являющегося частью комплекса серебро-метенамин, до металлического серебра, обеспечивая тем самым его визуализацию. Внимание: Избегайте загрязнения образцов непатогенными грибами (работайте в перчатках, не допускать контакта с воздухом); Используйте только свежую дистиллированную воду; Используйте только чистую стеклянную посуду; Избегайте попадания пыли на образец; Избегайте контакта реактивов с металлическими объектами (пинцетами и т.п.). Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 20 мин. Промыть срезы под проточной водой в течение нескольких секунд. Нанести на срез 10 капель реактива В, оставить на 1 мин. Промыть срезы в проточной воде в течение 5 мин. Промыть срезы в четырех порциях дистиллированной воды. В закрытый контейнер для препаратов налить 17 мл дистиллированной воды и добавить 20 капель реактива С, 10 капель реактива D и 20 капель реактива Е, перемешать стеклянной палочкой, предварительно вымытой в дистиллированной воде. Поместить образцы в контейнер и инкубировать при 60°С на 1 час. Дать остыть в течение 10 мин. Промыть срезы в шести порциях дистиллированной воды Нанести на срез 10 капель реактива F, оставить на 3 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива G, оставить на 5 мин. Промыть срезы под проточной водой. Нанести на срез 10 капель реактива Н, оставить на 30 сек. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Мицелий Скопления крахмала Фон четко выражен, черный темно-серые зеленый 22 04-001802 Набор для окраски «азаном» Гейденгайна Срок годности: 2 год Хранить при температуре 15-25°С Реактивы А. В. C. D. Азокармин по Гейденгайну, 100 мл Спиртовой раствор анилина, 30 мл Спиртовой раствор кислоты, 30 мл Спиртовой раствор фосфорновольфрамовой кислоты, 100 мл E. Полихромный раствор по Маллори, 100 мл. с подкрашиванием анилиновым синим Яичник Применение Рекомендован для окрашивания соединительной ткани, особенно для выявления мышечных волокон, глиальных волокон, коллагена, ретикулярных волокон, стромы почечных клубочков, эритроцитов и ядерного хроматина в тканевых образцах. Метод основан на использовании двух кислотных красителей: азокармина и анилинового синего. Окраска азокармином комбинируется с подкрашиванием анилиновым синим после протравливания препаратов фосфорновольфрамовой кислотой. Для получения хорошего результата необходимо передержать препараты в азокармине, а потом медленно дифференцировать в анилиновом спирте для предупреждения перекрашивания мышц, коллагена и т. д. Инструкция по использованию Поместить срезы в дистиллированную воду. 0 0 Реактив А налить в колбу и инкубировать при t = 56 C 45 мин. Затем дать остыть при комнатной температуре и перелить обратно. Не фильтровать. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива В, оставить на 1 мин. Слить избыток реагента и нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 1 мин. Поместить препараты в реактив D, перелитый в колбу, на 1 час. После использования вылить реактив D в исходную емкость, профильтровав через фильтровальную бумагу. Повторить предыдущий шаг с реактивом Е. Промыть срезы в этиловом спирте 95°. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Коллаген, ретикулярные волокна, базофильные гранулы клеток гипофиза, юкстагломерулярные гранулы, строма почечных клубочков Нейроглия Мышечная ткань Хроматин, эритроциты, ацидофильные гранулы клеток гипофиза Цитоплазматические гранулы дельта клеток гипофиза 23 темно-синий темно-красный оранжевый красный голубой 04-040801 Импрегнация серебром Срок годности: 1 год Хранить при температуре 4°С Реактивы А. В. C. D. E. F. G. Миокард Раствор перманганата калия, 18 мл Активирующий кислотный буфер, 18 мл Раствор щавелевой кислоты, 30 мл Раствор ферроаммоний сульфата, 30 мл Раствор аммиачного серебра, 30 мл Нейтральный раствор формалина, 30 мл Фиксирующий раствор гипосульфита натрия, 30 мл Применение Рекомендован для выявления аргирофильных ретикулярных волокон в соединительной ткани. Четкая импрегнация в данном методе происходит по двум причинам: предварительная импрегнация с солями железа и использование в качестве источника серебра нестабильного диаминного комплекса (аммонийный раствор), который более реактивен, чем нитрат серебра. Обработка трехвалентным железом: после предварительного окисления с перманганатом калия образец обрабатывается трехвалентным железом (ферроаммоний сульфат). Ионы железа, более реактивные, чем ионы серебра, быстро связываются с аффинными функциональными группами аргирофильных веществ. Обработка аммонийным раствором: серебро в данном растворе присутствует в виде комплексного растворимого в воде оксида - [Ag(NH3)2]2 O. Катионы серебра из данного комплекса заменяют ионы железа в образцах. Затем муравьиный альдегид путем восстановления приводит к образованию металлического серебра, обеспечивая его отложение на аргирофильных структурах и визуализацию. [Ag(NH3)2]2 O + HCHO = 2 Ag + 4 NH3 + HCOOH Невосстановленный комплексный катион удаляется при помощи тиосульфата натрия (Na2S2O3) путем формирования растворимого комплекса, не подлежащего окислению. Внимание: Используйте только деионизированную, полностью очищенную от хлора воду; Используйте особо чистую стеклянную посуду; Избегайте попадания пыли на образцы; Не допускайте контакта реактивов с металлическими объектами (пинцетами и т.п.). Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 5 капель реактива А и 5 капель реактива В, оставить на 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 3 мин. Нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 3 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Дважды промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива Е, оставить на 3 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива F, оставить на 5 мин. Дважды промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива G, оставить на 5 мин. Промыть срезы в проточной воде в течение 5 мин. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Ретикулярные и нервные волокна Соединительная ткань Коллаген черные коричневая золотисто-желтый 24 04-170801 Набор по Косса (демонстрация кальциевых депозитов в гистологических препаратах) Срок годности: 1 год Хранить при температуре 4°С Реактивы А. Насыщенный раствор карбоната лития, 30 мл В. Раствор нитрата серебра, 30 мл C. Восстанавливающий раствор, 30 мл D. Раствор натрия сульфата, 30 мл E. Кармалаун Майера, 30 мл Головной мозг Применение Демонстрация депозитов кальция в тканевых образцах. Метод основан на реакции замещения. Ткань обрабатывается раствором нитрата серебра; катионы серебра замещают кальций в депозитах с формированием солей серебра. Впоследствии производится восстановление серебра до металла с его визуализацией CaCO3 + AgNO3 = Ag2CO3 + Ca(NO3)2 Ag2CO3 + 2H+ = 2Ag + H2O + CO2 С ионами серебра реагируют следующие кальциевые соли: карбонаты, фосфаты, оксалаты, сульфаты, ураты, хлориды, сульфоцианиды. Кальций в норме присутствует в тканях млекопитающих в форме карбонатов и фосфатов, поэтому данный метод может быть использован для их выявления. Чтобы избежать ошибочных результатов при нахождении в ткани мочевой кислоты и уратов, данные соли перед началом окрашивания переводятся в растворимую форму под воздействием насыщенного раствора карбоната лития. Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 10 капель реактива А., оставить на 10 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива В, оставить на 1 час в темном помещении. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель дистиллированной воды и добавить 10 капель реактива С, оставить на 5 мин (до момента почернения солей серебра). Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива Е, оставить на 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Кальциевые депозиты Ядра черные красные 25 04-180809 Коллоидное железо по Моури (набор для выявления кислых мукополисахаридов) Срок годности: 1 год Хранить при температуре 15-25°С Реактивы Аппендикс А. В. C. D. E. F. G. H. Раствор уксусной кислоты, 30 мл Кислотный буфер, 18 мл Раствор коллоидного железа, 18 мл Раствор уксусной кислоты, 30 мл Раствор уксусной кислоты, 30 мл Раствор ферроцианида калия, 12х10 мл Соляная кислота 5М, 50 мл Раствор ядерного прочного красного, 30 мл. Применение Выявление кислых мукополисахаридов в тканях. Метод основан на взаимодействии коллоидного железа с кислотными группами мукополисахаридов при низких значениях рН с образованием хелатных соединений. Наглядно это демонстрируется реакцией с образованием берлинской лазури: ферроцианид калия взаимодействует с трехвалентным железом в кислой среде с образованием окрашенной соли. 4 Fe3+ + 3K4Fe(CN)6 = Fe4(Fe(CN)6)3 + 12 K+ берлинская лазурь Внимание: Избегайте попадания раствора ферроцианида калия на металлические предметы. Описание метода Поместить препараты в дистиллированную воду. Нанести на препарат 10 капель реактива А, оставить на 2 мин. Приготовить инкубационный контейнер: на дно налить 1 мл дистиллированной воды, нанести на препарат по 5 капель реагентов В и С, поместить образцы в контейнер, закрыть и инкубировать 1 час. Слить избыток реагента и нанести на препарат 10 капель реактива D, оставить на 1 мин. Слить избыток реагента и повторно нанести на препарат 10 капель реактива D, оставить на 1 мин. Слить избыток реагента и нанести на срез 10 капель реактива Е, оставить на 1мин. Слить избыток реагента и повторно нанести на срез 10 капель реактива Е, оставить на 1 мин. Просушить препараты. В колбу вылить весь реагент F, добавить 30 мл дистиллированной воды и 4 мл реактива G, осторожно перемешать и поместить туда препараты на 10 мин. Нанести на срезы 10 капель реактива H, оставить на 5 минут Промыть препараты в дистиллированной воде. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Промыть препараты в дистиллированной воде Результаты Кислые мукополисахариды Ядра синие красные 26 04-210822 Конго красный Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-20°С Реактивы А. Буферный раствор с Конго красным, 30 мл В. Основной фиксирующий буфер 30 мл C. Спиртовой дифференцирующий буфер 30 мл D. Гематоксилин Майера, 30 мл Сосуд с амилоидным депозитом Применение Представляет собой эмпирический метод. Неизвестно образуется ли связь амилоида и красителя за счет взаимодействия с белковой или углеводородной частью амилоида или с обоими. Окрашенный Конго красным амилоид демонстрирует способность к двойному лучепреломлению в поляризованном свете. Из наблюдаемой анизотропии можно сделать вывод об упорядоченности молекулярной структуры амилоида. Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 30 мин. Просушить образцы (не промывать), нанести на срез 10 капель реактива В, оставить на 15 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 5 мин. Промыть срезы в проточной воде в течение 5 мин. Нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Подсинить срезы в проточной воде в течение 10 мин. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Амилоид Ядра кирпично-красный, дает двойное лучепреломление в поляризованном свете синие 27 04-200812 Люксолевый прочный синий по Клюверу-Баррера Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы А. Спиртовой раствор Люксолевого прочного, 30 мл В. Дифференцирующий основной буфер, 30 мл C. Водный раствор крезил-виолета, 30 мл D. Активирущий кислотный буфер, 30 мл Нервная ткань: мозжечок Применение Выявление миелина и фосфолипидов в гистологических срезах. Люксол быстрый синий является производным тетрабензотетразо-порфирина. Согласно Клюверу, порфирины демонстрируют селективную аффинность к миелину. Аффинность Люксолевого прочного синего к структурам центральной нервной системы можно объяснить его способностью к образованию связей с фосфолипидами – лецитином и сфингомиелином. Описание метода Депарафинизировать срезы и поместить в этиловый спирт 95°. Поместить препараты во влажную камеру (на дно чашки Петри кладется фильтровальная бумага и капается несколько капель дистиллированной воды), нанести на срез 10 капель реактива А, закрыть контейнер и инкубировать при 56°С ночь. Промыть препараты в 95° этиловом спирте: кристаллики непрореагировавшего реактива А должны раствориться. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива В, оставить на 30 сек. Дифференцировать в этиловом спирте 70°, пока миелиновые волокна не станут голубыми на бесцветном фоне (иногда дифференциация затруднена; в этом случае повторить но нанести на срез 10 капель реактива B на 30 сек и снова поместить срезы в этиловый спирт 70°). Промыть срезы в дистиллированной воде как минимум дважды. Поместить препараты во влажную камеру, нанести на срез 10 капель реактива С и 5 капель реактива D и инкубировать 20 мин в термостате 56°С. Дифференцировать в этиловом спирте 95° пока тельца Ниссля не станут бледно-розовыми. Дегидрировать в абсолютном этаноле, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Миелин Нейроны и клетки глии Субстанция Ниссля бирюзово-синий от розового до фиолетового бледно-розовая 28 04-080802 Май-Грюнвальд Гимза Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы А. Раствор красителя Май-Грюнвальд, 500 мл В. Фосфатный буферный раствор, 500 мл C. Раствор красителя Гимза, 500 мл Мазок крови Применение Рекомендуется для дифференциации клеток крови, выявления паразитов в мазках крови, морфологических особенностей ткани селезенки, лимфатических узлов и костного мозга, выявления бактерий, риккетсий и гранул тучных клеток в мокроте и аспиратах органов. Может быть рекомендован для выявления Trichomonas в вагинальных мазках. В процессе окрашивания последовательно используются два красителя: - раствор Май-Грюнвальд, состоящий из эозин-метиленового синего, окрашивающий ядра в синий и цитоплазму базофилов в розово-красный цвет; - раствор Гимза, в состав которого входят метиленовый синий хлорид, эозин-метиленовый синий и азур II-эозинат, улучшающий интенсивность окрашивания ядер и селективность окрашивания клеточных структур. Для оценки результатов следует учитывать два фактора: рН воды, используемой для промывки препаратов, и концентрация буферного раствора сильно влияют на окончательную картину окрашивания. Интенсивность окрашивания зависит также от времени дифференциации. Описание метода В колбу объемом 1000 мл налить 100 мл реактива В (концентрированный буферный раствор) и разбавить водой до объема колбы (рабочий буферный раствор). Хранить при температуре 4-6°С. Нанести на образец 10 капель реактива А, оставить на 5 мин. N.B. Окрашивание препарата можно проводить и в стаканчике без изменения времени окрашивания. В таком случае реагент можно сохранить для последующего использования. Промыть под проточной водой в течение 1 мин. В колбе смещать 10 мл реактива С и 90 мл рабочего буферного раствора В; в полученный раствор поместить образцы на 15 мин. Промыть срезы в проточной воде в течение 1-2 мин. Просушить образцы фильтровальной бумагой, затем в течение 5 мин на воздухе. Результаты Ядра Цитоплазма базофилов Цитоплазма эозинофилов Полихроматофильная цитоплазма Ацидофильные гранулы Нейтрофильные гранулы Базофильные гранулы Азурофильные гранулы красно-фиолетовые/розовые от голубой до темно-синей от бледно-красной до розовой от серой до фиолетовой оранжевые темно-коричневые/розовые темно-фиолетовые от пурпурных до пурпурно-фиолетовых 29 04-020802 Набор для окраски по Маллори Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы Предстательная железа А. Карболфуксин по Цилю, 30 мл В. Кислотный буфер, 30 мл C. Раствор фосфорномолибденовой кислоты, 30 мл D. Раствор фосфомолибденовой кислоты, 30 мл E. Полихромный раствор по Маллори, 30 мл Применение Стандартное окрашивание соединительной ткани: выявление коллагена, ретикулярных волокон, хряща, кости, амилоида. В этом методе применяются 3 различных красителя: карболфуксин для окрашивания ядер, оранж G для цитоплазмы и анилиновый синий для избирательного окрашивания коллагена. Центральную роль играет фосфомолибденовая кислота, действие которой связано с тканевыми структурами(коллагеном, клеточной мембраной) и анилином голубым (амфотерный краситель). Оранж G, который является вторым компонентом полихромного раствора по Маллори, который не имеет сродства с фосфомолибденовой кислотой и таким образом применяется для окраски всех оставшихся структур, несвязанных с фосфорномолибденовой кислотой. Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срезы 10 капель реагента А: оставить на 10 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива В, оставить на 10 сек. Быстро промыть в воде и нанести на срезы 10 капель реагента С, оставить на 5 мин.Не про мывая нанести 10 капель реактива, оставить на 1 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, оставить на 1 мин. В абсолютном этаноле, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Коллагеновые волокна Хрящи, кости, слизь, амилоид Ядра, миофибриллы, нейроглия, аксоны, фибрин Эритроциты, миелин Эластические волокна 30 темно-синий от бледно-голубого до темно-синего бледно-розовые насыщенно-желтый желтый или не окрашивается 04-021822 Пикро Маллори Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы А. Железный гематоксилин Вейгерта, раствор В, 18 мл В. Железный гематоксилин Вейгерта, раствор А, 18 мл C. Спиртовой раствор пикриновой кислоты, 30 мл D. Полихромный раствор пунцового фуксина , 30 мл E. Раствор фосфорномолибденовой кислоты, 30 мл F Раствор анилинового синего, 30 мл Соединительная ткань Применение Трихромный краситель для соединительнотканных срезов. Селективность действия красителя объясняется различной степенью аффинности между ним и соединительнотканными макромолекулами. В частности, соединительная ткань заметно ацидофильна ввиду наличия большего числа основных групп и потому обладает высокой аффинностью к кислым красителям (пикриновая кислота и оранж G) и низкой по отношению к слабым основным и амфотерным красителям (кислый фуксин и ксилидин Понсо). Центральную роль в данном методе играет фосфомолибденовая кислота, являющаяся связующим звеном между тканевыми структурами, с которыми она связывается (волокна коллагена, клеточные мембраны), и анилиновым синим (основной краситель с частичными амфотерными свойствами). Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 5 капель реактива А и. 5 капель реактива В, оставить на 10 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Подсинить образцы в проточной воде в течение 10 мин. Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 2 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 1 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива Е, оставить на 15 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива F, оставить на 1 мин. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Ядра Коллагеновые волокна Основные составляющие хряща, кости, мукополисахариды, базофильные гранулы клеток гипофиза, амилоид Фиброглия, нейроглия, фибрин, осевые цилиндры Ацидофильные гранулы клеток гипофиза Миелин, эритроциты Эластические волокна 31 темно-коричневый темно-синий различные оттенки синего красный оранжевый желтый от бледно розового до желтого 04-010802 Набор для окраски по Массону с анилиновым синим Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы Миокард Применение А. Железный гематоксилин Вейгерта, раствор В, 18 мл В. Железный гематоксилин Вейгерта, раствор А, 18 мл C. Спиртовой раствор пикриновой кислоты, 30 мл D. Кислый фуксин Понсо, 30 мл E. Раствор фосфомолибденовой кислоты, 30 мл F. Анилиновый синий по Массону, 30 мл Рекомендован для окрашивания соединительной ткани. Выявляет ядра, нейрофибриллы, нейроглию, коллаген, кератин, интрацеллюлярные волокна, гаметы. Метод основан на использовании четырех различных красителей: железного гематоксилина Вейгарта для окраски ядер, пикриновой кислоты для эритроцитов, смеси кислых красителей для цитоплазмы и анилинового синего для соединительной ткани. Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 6 капель реактива А и добавить 6 капель реактива В, оставить на 10 мин. Слить избыток реагента и нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 4 мин. Быстро промыть срезы в дистиллированной воде (3-4 сек) и нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 4 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде и нанести на срез 10 капель реактива Е, оставить на 10 мин. Слить избыток реагента и нанести на срез 10 капель реактива F, оставить на 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации с одноминутной задержкой в последнем – абсолютном этаноле, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Ядра и гаметы Цитоплазма, кератин, мышечные волокна, ацидофильные гранулы Коллаген, мукополисахариды, базофильные гранулы клеток Гранулы клеток Эритроциты 32 черный красный синий синий желтый 04-011802 Набор для окраски по Массону-Голднеру Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы А. Железный гематоксилин Вейгерта – раствор В, 18 мл В. Железный гематоксилин Вейгерта – раствор А, 18 мл C. Стабилизированный спиртовой раствор пикриновой кислоты, 30 мл D. Раствор кислого фуксина , 30 мл E. Раствор фосфорномолибденовой кислоты, 30 мл F. Раствор светового зеленого по Голднеру, 30 мл Кожа Применение Выявляет ядра, нейрофибриллы, нейроглию, коллаген, кератин, интрацеллюлярные волокна, гаметы. Подходит для черно-белых микрофотографий. Метод основан на использовании четырех различных красителей: железного гематоксилина Вейгарта для окраски ядрер, пикриновой кислоты для эритроцитов, смеси кислых красителей для цитоплазмы и светового зеленого – для коллагена. Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 6 капель реактива А и добавить 6 капель реактива В, оставить на 10 мин. Слить избыток реагента, и нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 4 мин. Быстро промыть срезы в дистиллированной воде (3-4 сек) и нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 4 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде и нанести на срез 10 капель реактива Е, оставить на 10 мин. Слить избыток реагента и нанести на срез 10 капель реактива F, оставить на 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации с одноминутной задержкой в последнем – абсолютном этаноле, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Ядра и гаметы Цитоплазма, кератин, мышечные волокна, ацидофильные гранулы Коллаген, мукополисахариды, базофильные гранулы клеток Гранулы клеток Эритроциты 33 черный красный зеленый зеленый желтый 04-041822 Набор для окраски по Массону-Фонтана Срок годности: 1 год Хранить при температуре 4°С Реактивы А. Раствор аммиака, 30 мл В. Раствор перманганата калия, 18 мл C. Активирующий кислотный буфер, 18 мл D. Раствор щавелевой кислоты, 30 мл E. Раствор тиосульфата натрия, 30 мл F. Кармалаун Майера, 30 мл Применение Эпидермис(базальный слой) Рекомендован для выявления меланина в тканях. В основе метода лежит аргентаффинная реакция – ряд тканевых компонентов обладает способностью восстанавливать серебро из аммиачного раствора до металлического серебра. С целью исключения ложно положительных результатов в набор включены реактивы для депигментации меланина (отбеливатель Маллори). Депигментация должна быть осуществлена на контрольном образце до начала импрегнации серебром. Внимание: фиксаторы, содержащие в своем составе соли тяжелых металлов (хлорид ртути, бихромат калия), которые могут провоцировать ложно положительные результаты; для промывки образцов использовать только дистиллированную воду; использовать особо чистую стеклянную посуду. Описание метода Поместить 2 среза одного препарата в дистиллированную воду. Выбрать контрольный срез Только для контрольного среза Нанести на контрольный срез 10 капель реактива В и 10 капель реактива С, оставить на 20 мин, затем промыть дистиллированной водой. Нанести на контрольный срез 10 капель реактива D, оставить на 5 мин, затем промыть дистиллирован ной водой. Приготовить инкубационный контейнер и поместить в него 2 препарата (исследуемый и контрольный), нанести на каждый 10 капель реактива А и закрыть, инкубировать ночь. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на контрольный и на опытный срез 10 капель реактива F, оставить на 10 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде и нанести на срез 10 капель реактива Е, оставить на 5 мин. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Скопления меланина Ядра черные в опытном образце, в контроле отсутствуют (наличие в образцах черных преципитатов – ложно положительный результат) красные 34 04-121812 Метиловый зеленый-пиронин Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы А. Спиртовой кислотный буфер, 30 мл В. Спиртовой раствор Альцианового синего, 30 мл C. Дифференцирующий спиртовой кислотный буфер, 30 мл D. Буферный раствор Метилового зеленого пиронина, 30 мл Кора мозжечка Применение Одновременная демонстрация ДНК и РНК в тканях. Рекомендован для выявления плазматических клеток и РНК в гистологических и цитологических препаратах. В данном методе окрашивание достигается за счет смеси двух основных красителей: очищенного метилового зеленого и пиронина Y. С целью дифференциального окрашивания к раствору красителя добавляют буфер до достижения рН 4.8. При значениях рН меньше 4.8 в конечном образце превалирует красный цвет (пиронин); при более высоких значениях рН превалирует сине-зеленый цвет (метиловый зеленый). Селективность взаимодействия красителя с нуклеиновыми кислотами определяется значением рН раствора. Внимание: Не использовать фиксаторы с концентрацией формальдегида выше 10% в виду опасности блокирования аминных групп ДНК; Не использовать фиксаторы с высоким содержанием кислот: возможна остановка реакции с последующим гидролизом; Избегайте использования высоких температур при заливке в парафин, особенно в водяной бане: существует опасность увеличения расстояния между фосфатными группами ДНК и невозможности их взаимодействия с Метиловым зеленым (пиронинофилия ДНК). Описание метода Депарафинизировать срезы и поместить в этиловый спирт 70°. Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 10 мин. Просушить образцы и нанести на срез 10 капель реактива В, оставить на 15 мин. Просушить образцы и нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 3 мин. Промыть срезы в проточной воде в течение 10 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 7 мин. Быстро промыть в дистиллированной воде, просушить срезы фильтровальной бумагой, затем просушить 10 мин на воздухе. Дважды просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты ДНК РНК Гранулы тучных клеток Фон бледно-зеленый от красного до розового синие бирюзовый 35 04-043822 P. A. S. M. Метенамин-серебро Срок годности: 1 год Хранить при температуре 4°С Реактивы А. Раствор йодной кислоты, 30 мл В. Раствор нитрата серебра, 30 мл C. Раствор гекскаметилентетрамина, 30мл D. Раствор тетрабората натрия, 30 мл E. Раствор хлорида золота, 30 мл F. Фиксирующий раствор, 30 мл Желудок Почка Применение Используется с целью выявления аргирофильных элементов и мукополисахаридов (базальные мембраны, грибы, бактерии и т.п.) в тканях. Рекомендован для оценки базальной мембраны в материалах биопсии почек. Окрашивание происходит за счет воздействия йодной кислоты на гликолевые и гликоаминные группы мукополисахаридов и их окисления до альдегидных остатков, что приводит к разрыву молекулы. Под воздействием образовавшихся альдегидов происходит восстановление хлорида серебра, являющегося частью комплекса серебро-метенамин, до металлического серебра, определяемого визуально. Внимание: при всех реакциях с солями серебра необходимо использовать особо чистую стеклянную посуду и не допускать соприкосновения содержащих серебро реактивов с металлическими объектами (пинцетами и т.п.) Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 30 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Приготовить инкубационный контейнер и поместить туда срезы; в отдельной емкости смешать по 10 капель реактивов B, C, D; полученный раствор вылить на срезы, закрыть контейнер и инкубировать при 60°С на 60 мин. Извлечь контейнер из термостата и проверить интенсивность импрегнации. При удовлетворительных результатах промыть срезы в дистиллированной воде (через 5 мин после открытия контейнера). При недостаточной импрегнации реинкубировать контейнер с проверками через каждые 5 мин. Нанести на срез 10 капель реактива Е, оставить на 1 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива F, оставить на 1 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Базальные мембраны, гликоген, мицеты, капсула бактерий 36 черные 04-190812 Муцикармин Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы А. Гематоксилин Майера, 30 мл В. Муцикармин Майера, 30 мл C. Раствор Метанилового желтого, 30 мл Кишечник Применение Выявление мукополисахаридов эпителиального происхождения (муцинов) на гистологических срезах. Муцикармин обладает относительной специфичностью – муцины фибробластов окрашиваются в очень небольшой степени. Гистохимическая основа метода неизвестна. Существует мнение, что краситель реагирует с глюцидной частью мукополисахаридов. Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Подсинить образцы в проточной воде в течение 5 мин. Смешать 0,5 мл дистиллированной воды и 10 капель реагента В, полученную смесь нанести на образец, оставить на 30 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 1 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Быстро дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации с задержкой в последнем – абсолютном этаноле, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Мукополисахариды Ядра Остальные структуры от темно-розового до красного сине-фиолетовый бледно-желтый 37 04-055802 Орсеин Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы А. Раствор перманганата калия, 18 мл В. Активирующий кислотный буфер, 18 мл C. Раствор щавелевой кислоты, 30 мл D. Спиртовой реактив для влажной камеры, 80 мл E. Раствор орсеина , 30 мл F. Дифференцирующий раствор, 30 мл Эластические волокна Применение Выявление эластических волокон в тканях; рекомендован для изучения васкулярной патологии. Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 5 капель реактива А и 5 капель реактива В, оставить на 4 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 1 мин (до обесцвечивания образца). Дважды промыть срезы в дистиллированной воде. На дно влажной камеры налить 0,75 мл реактива D, поместить туда препараты и нанести на срез 10 капель реактива Е; инкубировать в течение 20 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива F, оставить на 2 мин. Промыть срезы в проточной воде. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Эластические волокна Фон коричневый/темно-красный практически бесцветный 38 04-180807 Окраска по Перльсу Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы А. Раствор ферроцианида калия, 12х10 мл В. Активирующий кислотный буфер, 50 мл C. Кармалаун Майера, 30 мл Печень: депозиты Применение Используется для выявления трехвалентного железа в тканях. Метод основан на реакции ферроцианида калия с ионами железа в составе гемосидерина в кислой среде с формированием окрашенной соли - берлинской лазури 4 Fe3+ + 3K4Fe(CN)6 = Fe4(Fe(CN)6)3 + 12 K+ берлинская лазурь Внимание: ложно позитивная реакция возможна в трех случаях Длительное хранение рабочего раствора (раствор ферроцианида и соляной кислоты должен быть приготовлен непосредственно перед использованием). Контаминация стеклянной посуды, а также воды флотационной ванны ионами железа; этого можно избежать, не допуская соприкосновения раствора с металлическими предметами. Асбестоз патологически измененных тканей. Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Смешать 10 мл реактива А, 30 мл дистиллированной воды и 4 мл реактива В; поместить срезы в полученную смесь на 20 мин. Тщательно промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Реактивные ионы трехвалентного железа Ядра синий красный 39 Набор для окраски по Папаниколау Срок годности: 2 года Гематоксилин Гарриса по Папаниколау, 500 мл 05-12011 Папаниколау OG6, 500 мл 05-12019 Папаниколау ЕА 50, 500 мл 05-12013 Мазок из цервикального канала Применение цитологическое исследования клеток цервикального канала, метод применим при изучении мокроты, вагинального секрета, выделений бронхов, пищевода, желудка,биопсии костного мозга. Описание метода Поместить мазки в этанол 95° на 2 мин. Промыть мазки дистиллированной водой в течение 2 мин. Обработать мазки гематоксилином Гарриса в течение 1 мин (реактив № 1). Промыть мазки под проточной водой 5 мин. Поместить мазки в этанол 95° на 15 сек. Обработать OG 6 в течение 2 мин (реактив № 2). Обработать этанолом 95° в течение 15 сек (дважды). Обработать ЕА 50 в течение 5 мин (реактив № 3). Поместить мазки в этанол 95° на 15 сек. Обработать абсолютным этанолом в течение 30 сек (дважды). Просветлить в ксилоле или Био Клире (заменитель ксилола) в течение 2 мин (дважды) и заключить под покровное стекло. Результаты Ядра Цианофильная цитоплазма Эозинофильная цитоплазма Кератинизированная цитоплазма синий/пурпурный сине-зеленый розовый от розового до оранжевого 40 04-181807 Перльс Ван-Гизон Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы А. Раствор калия ферроцианида, 12х10 мл В. Активирующий буферный раствор, 50 мл C. Пикрофуксин по Ван-Гизону, 30 мл Печень Применение Используется с целью выявления ионов трехвалентного железа, коллагена и других компонентов соединительной ткани в тканях. Метод основан на реакции калия ферроцианида с ионами трехвалентного железа в составе гемосидерина в кислой среде с формированием окрашенной соли – берлинской лазури. 4 Fe3+ + 3K4Fe(CN)6 = Fe4(Fe(CN)6)3 + 12 K+ берлинская лазурь Подкрашивание пикрофуксином по Ван-Гизону позволяет дифференцировать коллаген от других компонентов соединительной ткани. Внимание: Ложно положительные результаты возможны при следующих факторах: Большой срок хранения рабочего раствора (раствор калия ферроцианида должен быть приготовлен непосредственно перед использованием); Загрязнение стеклянной посуды и воды в водяной бане ионами трехвалентного железа; с целью предотвращения данного фактора избегать контакта реактивов с металлическими объектами; Асбестоз: наличие асбестоза в патологически измененных тканях может вызвать осаждение солей трехвалентного железа. Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Смешать содержимое бутылочки с реактивом А, 30 мл дистиллированной воды и 4 мл реактива В, погрузить срезы в полученный раствор на 20 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 10 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Быстро дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации с одноминутной задержкой в последнем – абсолютном этаноле, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Реактивные ионы трехвалентного железа Коллаген Цитоплазма, мышечная ткань, роговой слой эпителия, Нейроглия, эритроциты 41 синий пурпурно-красный желтый 04-210923 Сириус красный Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы А. Гематоксилин Майера, 30 мл В. Спиртовой реактив для инкубационного контейнера, 2х80 мл C. Раствор щелочи 80% в этаноле, 30 мл D. Раствор сириуса красного F3B, 30 мл E. Щелочной буферный раствор, 30 мл Применение Выявление амилоида в фиксированных формалином и заключенных в парафин препаратах. Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 1 мин. Подсинить в проточной воде в течение 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Приготовить инкубационный контейнер: на дно налить 1,5 мл реактива В, поместить в контейнер образцы и нанести на срез 10 капель реактива С и 10 капель реактива D. Инкубировать при 60°С на 60 мин. Слить избыток реагента и нанести на срез 10 капель реактива Е, оставить на 20 сек. Промыть срезы в дистиллированной воде. Дегидрировать в абсолютном этаноле, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Амилоид Ядра Фон кирпично-красный, в поляризованном свете дает двойное лучепреломление (зеленый) синий не окрашен 42 04-169812 Толуидиновый синий-Альциановый желтый для Helicobacter pylori Срок годности: 1 год Хранить при температуре 15-25°С Реактивы А. В. C. D. Раствор йодной кислоты, 30 мл Раствор метабисульфита натрия, 30 мл Раствор альцианового желтого, 30 мл Раствор толуидинового синего, 30 мл Желудок Применение Интегрированный метод выявления Нelicobacter pylori и кислых мукополисахаридов в образцах тканей желудка (толщина срезов 5 мкм). Поверхностные желудочные эпителиальные мукополисахариды, обычно не реагирующие на альциановые красители, после окисления йодной кислотой способны к данному окрашиванию с образованием нерастворимого соединения. Во второй части процедуры окрашивания бактерии приобретают синюю окраску под воздействием толуидинового синего. Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 10 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива В, оставить на 5 мин. Промыть срезы в проточной воде в течение 2 мин. Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 3 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Просушить при помощи фильтровальной бумаги, затем просушить на воздухе. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Нelicobacter pylori Мукополисахариды Фон синий желтый голубой 43 04-120802 Реакция Фельгена Срок годности: 1 год Хранить при температуре 4°С Реактивы А. В. C. D. Раствор соляной кислоты 5N, 30 мл Реактив Шиффа, 30 мл Раствор тиосульфата натрия, 30 мл Раствор фиксатора, 30 мл Печень эмбриона крысы Применение Выявление ДНК в тканях. Метод состоит из двух частей: - Кислотный гидролиз (5N HCl, комнатная температура, 40 мин), предназначенный для селективного разделения двух пуриновых оснований – аденина и гуанина – в молекуле ДНК; Реакция Фельгена высоко специфична для ДНК. РНК не способна к данной реакции. Об успешном протекании реакции можно говорить на основе двух фактов: - обработка срезов реактивом Шиффа после кислотного гидролиза привела к окрашиванию среза; - обработка реактивом Шиффа контрольного образца, не прошедшего кислотный гидролиз, не привела к окрашиванию Внимание: реактив А отличается коррозионной активностью – обращаться с осторожностью в хорошо вентилируемых помещениях, избегать контакта с кожей и глазами. Работать в перчатках и защитных очках. Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 40 мин. Дважды промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива В, оставить на 10 мин. Слить избыток реагента и нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 2 мин. Слить избыток реагента и нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 3 мин. Промыть срезы под проточной водой в течение 5 мин. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты ДНК ярко-красный 44 04-060802 P. T. A. H. Фосфорновольфрамовый гематоксилин Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы А. В. C. D. Раствор перманганата калия, 18 мл Кислотный буфер, 18 мл Раствор щавелевой кислоты, 30 мл P.T.A.H. по Маллори, 80 мл Применение Изначально метод был предложен для окраски нейроглии, но в настоящем используется в основном с целью дифференциации гладкой и поперечно-полосатой мышечной ткани, благодаря способности окрашивать изотропные пучки миофибрилл скелетных мышц, Метод также рекомендуется для выявления фибрина. Фосфовольфрамовая кислота, являясь транспортером красителя, образует как химические, так и физические связи с фибрином и тканевыми элементами, обеспечивая окрашивание данных элементов. Мозжечок Поперечно-полосатая мускулатура Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 5 капель реактива А, добавить 5 капель реактива В, оставить на 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Поместить срезы в реактив D, закрыть контейнер и инкубировать в течение ночи Быстро промыть срезы в дистиллированной воде (3-4 сек). Быстро дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации с одноминутной задержкой в последнем – абсолютном этаноле. Просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Ядра, фибрин (подавляющее количество) Миофибриллы, астроциты, некоторые эластические волокна, нейроглия, миелиновые волокна Коллаген, костный матрикс, хрящ 45 темно-голубые различные оттенки кирпично-красного 04-021002 Фуксин кислый / Оранжевый G Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы А. Железный гематоксилин Вейгерта, раствор А, 18 мл В. Железный гематоксилин Вейгерта, раствор В, 18 мл C. Раствор фосфорномолибденовой кислоты, 30 мл D. Раствор фуксина кислого/оранжевого G, 30 мл Почка Применение Рутинный метод для выявления белковых депозитов в почечных клубочках при взятии биопсии. Селективность метода обусловлена различной степенью аффинности полихромного раствора фуксина кислого/оранжевого G к тканевым макромолекулам. Центральная роль в процессе окрашивания отводится молекуле фосфорномолибденовой кислоты, служащей связующим звеном между тканевыми структурами (волокна коллагена, мембраны клеток) и Артерия анилиновым синим (амфотерный краситель). Оранжевый G, не проявляющий аффинности к фосфорномолибденовой кислоте, окрашивает остальные тканевые структуры, не связанные с кислотой. Кислый фуксин визуализирует белковые депозиты. Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 5 капель реактива А, затем 5 капель реактива В, оставить на 10 мин. Промыть срезы в проточной воде в течение 5 мин. Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 5 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации с одноминутной задержкой в последнем – абсолютном этаноле, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Коллагеновые волокна Ядра Эритроциты, цитоплазма Эластические волокне синий черный розово-оранжевый бледный розовый или без окрашивания ярко-красный Белковые депозиты в клубочке 46 04-110802 Циль-Нильсен (для срезов) Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы А. Раствор йодной кислоты, 30 мл В. Раствор карбол-фуксина, 30 мл C. Дифференцирующий кислотный буфер, 30 мл D. Гематоксилин Майера, 30 мл Легкое Применение Выявление патогенных бактерий ( особенно палочек Коха) в гистологических срезах, мазках мокроты и культуральных мазках. Отличительным свойством микобактерий является кислотоустойчивость. Будучи один раз окрашены карбол-фуксином, они сохраняют красный цвет даже под воздействием сильных обесцвечивающих агентов. Подобное свойство микобактерий может быть объяснено особым составом клеточной стенки, содержащей большое количество липидов. Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Погрузить срезы в реактив А, оставить на 10 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Погрузить срезы в реактив В., оставить на 30 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде и просушить при помощи фильтровальной бумаги. Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 1 мин. Промыть срезы в проточной воде в течение 3 мин. Нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 2 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде и подсинить в проточной воде в течение 5 мин. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Палочки Коха и другие кислотоустойчивые элементы Ядра 47 синий красный 04-111802 Циль-Нильсен Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы А. Раствор йодной кислоты, 30 мл В. Раствор карбол-фуксина, 30 мл C. Дифференцирующий кислотный буфер, 30 мл D. Раствор метиленового синего, 30 мл E. Активирующий основной буфер, 30 мл Легкое Применение Используется с целью выявления патогенных микобактерий (особенно палочек Коха и палочек Ганзена) в гистологических срезах мазках мокроты культуральных мазках. Отличительной особенностью микобактерий является кислотоустойчивость; будучи один раз окрашены карбол-фуксином, они сохраняют красную окраску даже после воздействия сильных обесцвечивающих реактивов. Подобное свойство микобактерий объясняется особым строением клеточной стенки, содержащей большое количество липидов. Описание метода Поместить мазки в дистиллированную воду. Нанести на мазок 10 капель реактива А, оставить на 10 мин. Промыть в дистиллированной воде. Нанести на мазок 10 капель реактива В, оставить на 30 мин. Промыть в дистиллированной воде и осушить образцы при помощи фильтровальной бумаги. Нанести на мазок 10 капель реактива С, оставить на 1 мин. Промыть в проточной воде в течение 3 мин. Нанести на мазок 10 капель реактива D и 5 капель реактива Е, оставить на 30 сек. Промыть в проточной воде. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты Палочки Коха, бациллы Ганзена и другие кислотоустойчивые структуры Фон 48 красный синий 04-130802 ШИК-реакция Срок годности: 1 год Хранить при температуре 4°С Реактивы А. Раствор йодной кислоты, 30 мл В. Реактив Шиффа по Хочкису-Мак-Манусу, 30 мл C. Раствор метабисульфита калия, 30 мл D. Раствор фиксатора, 30 мл E. Гематоксилин Майера, 30 мл Применение Выявление нормальных и патологически измененных тканевых компонентов, соКишечник держащих в своем составе близкорасположенные гликолевые или амино-гидроксильные группы. Йодная кислота селективно окисляет следующие группы: 1,2-гликолевые, первичные аминные (1-гидрокси-2-амино), вторичные аминные (1-гидрокси-2-алкиламино), 1-гидрокси-2-кетонные. Впоследствии серосодержащий фуксин из реактива Шиффа образует со смежными альдегидными группами нерастворимое окрашенное соединение, сходное с осПочка новным фуксином. Внимание: - использовать для промывки только дистиллированную воду Не использовать покрытые полилизином предметные стекла; Избегать использования металлических инструментов (пинцетов и т.п.); Хранить готовые препараты в темном помещении; Если хранение реактива А происходило при температуре ниже рекомендуемой и произошло образование геля, необходимо поместить бутылочку с реактивом в теплую воду – произойдет переход в исходное агрегатное состояние. Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 10 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива В, оставить на 20 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 2 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Слить избыток реагента и нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 2 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива Е, оставить на 3 мин. Подсинить срезы в проточной воде в течение 5 мин. Дегидрировать в этаноле, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты ШИК-положительные субстанции Ядра ярко-красный синий 49 04-131802 ШИК-реакция Пикро-индигокармин Срок годности: 1 год Хранить при температуре 4°С Реактивы А. Раствор йодной кислоты, 30 мл В. Реактив Шиффа в модификации Хочкисса-Мак-Мануса, 30 мл C. Раствор метабисульфита калия, 30 мл D. Раствор фиксатора, 30 мл E. Раствор пикро-индигокармина, 30 мл Желудок Применение Выявление компонентов соединительной ткани, содержащих в своем составе близкорасположенные гликолевые или аминогидроксильные группы. Описание метода Поместить срезы в дистиллированную воду. Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 10 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива В, оставить на 15 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде. Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 2 мин. Слить избыток реагента и нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 3 мин. Промыть срезы в дистиллированной воде, затем промыть в проточной в течение 5 мин. Нанести на срез 10 капель реактива Е, оставить на 5 мин. Быстро дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло. Результаты ШИК-положительные субстанции Соединительная ткань Мышечная ткань, роговой слой эпителия, волокна нейроглии, эритроциты 50 ярко красный сине-зеленый желто-зеленый 04-090805 Экспресс-краситель MGG (набор для дифференциальной окраски форменных элементов крови) Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С Реактивы А. Фиксатор, 150 мл В. Раствор эозина, 150 мл C. Красящий раствор тиазина, 150 мл Мазок крови Применение Экспресс-метод для дифференциального окрашивания форменных элементов крови. Может быть использован для окрашивания других типов высушенных на воздухе мазков (игольных аспиратов, седиментационных мазков). Результаты окрашивания аналогичны получаемым в методе Май-Грюнвальд-Гимза. Состав набора для окрашивания аналогичен таковому для метода Май-Грюнвальд-Гимза. Благодаря высокой степени диссоциации реактивов, активные молекулы красителей (эозин и тиазин) очень быстро абсорбируются на клеточных структурах. Внимание: Необходимо строгое соблюдение приведенной ниже техники окрашивания; Превышение времени обработки мазков тем или иным реактивом исключает гарантию получения хороших результатов окрашивания; Если в конечном результате получен дисбаланс между эозинофильными и базофильными компонентами, необходимо уточнить рН воды, используемой при промывке; Если рН отлично от нейтрального значения, рекомендуется использовать в дальнейшем для промывания буфер (исключая фосфатный буфер рН 7). Описание метода Просушить мазки на воздухе. 5 раз погрузить мазок в реактив А на 1 сек. После каждого погружения удалить с мазка излишки жидкости. 5 раз погрузить мазок в реактив В на 1 сек. После каждого погружения удалить с мазка излишки жидкости. 3-5 раз погрузить мазок в реактив С на 1 сек. После каждого погружения удалить с мазка излишки жидкости. Промыть мазки в проточной воде. Просушить мазки на воздухе (не использовать источники высоких температур). Результаты Результаты окрашивания аналогичны получаемым в методе Май-Грюнвальд-Гимза. 51 Таблица растворов красителей 52 53 54 55 Таблица взаимозаменяемости гематоксилинов 56 Вспомогательные принадлежности на этапе окраски Емкости из стекла для окраски препаратов Сосуд Шиффердекера с крышкой для окраски 10-1610 Предназначен для окраски предметных стекол в горизонтальном положении. Вместимость-10 стекол толщиной от 1 мм до 3 мм Сосуд Хеллендахеля с крышкой для окраски 10-1410 Предназначен для окраски предметных стекол в вертикальном положении. Вместимость-8 стекол толщиной от 1 мм до 3 мм. 57 Сосуд Коплина с крышкой для окраски 10-1710 Предназначен для окраски предметных стекол в вертикальном положении. Вместимость - 5 стекол толщиной от 1 мм до 3 мм Набор для окраски препаратов из стекла на 20 предметных стекол 10-2000 Набор для окраски препаратов, состоит из: стеклянной ванночки (8,1 х 10,1 х 7 см) с крышкой и держателя. 58 Наборы из пластика для окраски препаратов Эргономичные наборы для окрашивания гематологических, цитологических и гистологических препаратов. Металлический штатив объединяет емкости в единый модуль. Сосуды для окрашивания выполнены из химически стойкого пластика. Сосуды снабжены специальными крышками во избежание испарения реагентов. Объем сосуда составляет 250 мл. Набор из 12 сосудов и держателя на 2 предметных стекол для окраски препаратов 10-10 Набор из сосудов и держателя на 2 предметных стекол для окраски препаратов 10-20 Дополнительные принадлежности к наборам для окраски из пластика Номер по каталогу Наименование Примечание 10-30 Сосуд для окраски стекол с крышкой светло-зеленого цвета (12 шт/уп.) Емкости выдерживают нагрев до 160°С, устойчивы к реагентам 10-30 Сосуд для окраски стекол с крышкой прозрачный (12 шт/уп.) Емкости выдерживают нагрев до 100°С, рекомендованы к использованию в микроволновой печи, устойчивы к реагентам 10-40 Держатель на 25 предметных стекол из пластика с нержавеющей ручкой для окраски (6 шт/уп) Универсальны, но не рекомендованы к использованию в микроволновой печи 10-42 Держатель на 25 предметных стекол из пластика для окраски стекол с пластиковой ручкой, (6 шт/уп) Могут быть использованы в микроволновой печи 60 11-100 Иммуногистохимический карандаш Pap-Pen Экономное использование дорогостоящих красителей и растворов антител Иммуногистохимический карандаш Pap-Pen предназначен для блокирования жидкостей (растворов красителей и антител) на предметных стеклах. Благодаря гидрофобным свойствам карандаша Pap-Pen нанесенный на препарат реагент не растекается по стеклу. Техника работы: Обвести рабочую зону препарата. Нанести несколько капель красителя или раствора антител на выделенную зону. 1 Содержание по применению: Наборы для окраски нервной ткани Люксолевый прочный синий по Клюверу-Баррера............................................................................ 28 P. T. A. H. Фосфовольфрамовый гематоксилин.................................................................................. 45 Наборы для окраски соединительной ткани Ван-Гизон............................................................................................................................................... 10 Окраска по Вейгерту (для окраски эластических волокон)............................................................... 12 Окраска по Вейгерту (экспресс-метод).............................................................................................. 13 Вейгерт - Ван-Гизон (экспресс-метод)................................................................................................. 14 Вейгерт - Ван-Гизон.............................................................................................................................. 15 Набор для окраски азаном по Гейденгайну........................................................................................ 23 Импрегнация серебром........................................................................................................................ 24 Набор для окраски по Маллори.......................................................................................................... 30 Пикро Маллори..................................................................................................................................... 31 Набор для окраски по Массону с анилиновым синим....................................................................... 32 Набор для окраски по Массону-Голднеру........................................................................................... 33 P. A. S. M. Метенамин-серебро............................................................................................................ 36 Наборы для окраски углеводов (мукополисахаридов,гликогена,амилоида) Альциановый синий pH 2,5.................................................................................................................... 5 Альциановый синий pH 2,5-pH 1,0........................................................................................................ 6 Альциановый синий pH 2,5 ШИК реакция............................................................................................. 7 Конго красный....................................................................................................................................... 27 Муцикармин.......................................................................................................................................... 37 Набор для ШИК-реакции (PAS)............................................................................................................ 49 Наборы для выявления пигментов и включений солей Гримелиус.............................................................................................................................................. 21 Набор по Косcа (демонстрация кальциевых депозитов в гистологических препаратах)............... 25 Набор для окраски по Массону-Фонтана............................................................................................ 34 Окраска по Перльсу.............................................................................................................................. 39 Наборы для окраски бактерий и грибов Окраска по Граму (для срезов)............................................................................................................ 17 Грокотт набор для визуализации мицелия......................................................................................... 22 Май-Грюнвальд Гимза.......................................................................................................................... 29 Циль-Нильсен (для срезов)................................................................................................................. 47 Наборы для выявления ДНК и РНК Метиловый зеленый-пиронин.............................................................................................................. 35 Реакция Фельгена окраска................................................................................................................... 44 Наборы для цитологии Май-Грюнвальд Гимза.......................................................................................................................... 29 Набор для окраски по Папаниколау.................................................................................................... 40 Экспресс-краситель MGG (набор для дифференциальной окраски форменных элементов крови)..... 51 62 63 64 65 66
