™ 1.ASP

1.ASP™
Для промывки фолликулов и поиска ооцитов.
ASP™
представляет
собой
питательную
среду
HEPES/бикарбонат; содержит гепарин и гентамицин.
с
буферной
системой
Предназначен для проведения вспомогательных репродуктивных мероприятий и
клинически протестирован.
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
ASP™ устойчив и сохраняет свои
годности, указанного на упаковке.
свойства
вплоть
до
истечения
срока
Перед применением необходимо эквилибрировать при + 37˚С и в атмосфере,
содержащей 5% СО2.
Указания к применению
Предварительно эквилибрируйте ASP™ при температуре + 37˚С и в атмосфере,
содержащей 5% СО2. В течение всего процесса пункции рекомендуется
хранить раствор ASP™ при температуре + 37˚С (в термоблоках) и в закрытом
контейнере, чтобы сохранить pH.
Промойте полость аспирационной иглы и трубчатый переходник питательным
раствором ASP™ и слейте промывочную жидкость.
Фолликулярную жидкость необходимо собирать в стерильные нетоксичные
одноразовые пробирки и сразу же просматривать на предмет наличия
ооцитов. При невозможности провести исследования немедленно, пробирки
следует плотно закрыть и хранить при температуре + 37˚С.
2.EmbryoGlue®
Питательная среда для переноса эмбрионов.
EmbryoGlue® представляет собой среду с бикарбонатной буферной системой;
содержащит гиалуронан и Рекомбинантный Человеческий Альбумин.
Препарат предназначен для проведения
мероприятий и клинически протестирован.
вспомогательных
репродуктивных
Содержит фармацевтический Пенициллин G.
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
Препарат EmbryoGlue® устойчив и сохраняет свои
истечения срока годности, указанного на упаковке.
свойства
вплоть
до
Перед применением эквилибрировать при температуре + 37˚С и 6% СО2.НЕ
ТРЕБУЕТ ДОБАВЛЕНИЯ АЛЬБУМИНА.
Указания к применению
Перенос эмбрионов
1
Добавьте примерно 1 мл препарата EmbryoGlue® в центральную лунку
однолуночной чашки и 1 мл в ободок. Предварительно эквилибрируйте при
температуре + 37˚С и 6% СО2 в течение 4-18 часов. Перед переносом
необходимо выдерживать отобранные для переноса эмбрионы в среде
EmbryoGlue® минимум в течение 10 минут в атмосфере, содержащей 6% СО2.
Прочно присоедините катетер для переноса к нетоксичному шприцу емкостью
1 мл. Промойте катетер неоднократно набирая и выпуская среду, взятую из
ободка
чашки. После промывки наберите около 0.1 мл препарата
EmbryoGlue® из центральной лунки и выпустите в ободок, пока в шприце не
останется приблизительно 20 μл среды. Под контролем микроскопа аккуратно
наберите эмбрионы в катетер в примерно 30 μл EmbryoGlue®, после чего
добавьте небольшое количество воздуха. Для осуществления переноса
эмбрионов введите наконечник катетера в матку приблизительно на 1 см от
верхней части полости и выпустите эмбрионы вместе с 25-30 μл питательной
среды. Медленно извлеките катетер, сохраняя постоянное давление на
поршень шприца. Проведите окончательное микроскопическое исследование
катетера.
3.FREEZE-KIT 1™ (Набор для заморозки 1)
Содержание:
CRYO-PBS
Раствор для замораживания эмбриона 1 (РЗЭ 1)
Раствор для замораживания эмбриона 2 (РЗЭ 2)
Для замораживания эмбрионов на стадии дробления.
FREEZE-KIT 1™ включает три физиологических солевых буфера, содержащих
человеческий сывороточный альбумин.
FREEZE-KIT
1™
содержит
1,2-Пропандиол
в
качестве
проникающего
криопротектора, а также сахарозу как криопротектор, не обладающий
проникающей способностью.
РЗЭ 1 содержит
1.5 М 1,2–Пропандиол
РЗЭ 2 содержит
1.5 М 1,2-Пропандиол и 0.1 М Сахарозы
Препарат FREEZE-KIT 1™ содержит фармацевтический пенициллин G.
Препарат предназначен для проведения
мероприятий и клинически протестирован.
вспомогательных
репродуктивных
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
Препарат FREEZE-KIT 1™ устойчив и сохраняет свои свойства вплоть до
истечения срока годности, указанного на упаковке.
Перед применением необходимо нагреть до + 20 ± 5ºС.
Указания к применению
При открывании пузырька
требования.
соблюдайте
все
необходимые
антисептические
2
Перед началом процедуры проверьте личность пациента и подготовьте всю
необходимую документацию. Промаркируйте соломинки данными пациента.
Подготовьте и промаркируйте стерильные 4-луночные
чашки, налейте
необходимое количество Cryo-PBS, Раствора для замораживания эмбрионов
1(РЗЭ
1)
и
Раствора
для
замораживания
эмбрионов
2(РЗЭ
2)
в
соответствующие лунки. Необходимо предварительно выдерживать чашки при
температуре + 20 ± 5ºС.
Поместите предназначенные для замораживания эмбрионы в раствор Cryo-PBS,
при этом необходимо вести наблюдение и подробно фиксировать морфологию
(2-5 минут). Для криоконсервации необходимо использовать только эмбрионы
хорошего качества.
Аккуратно поместите эмбрионы в раствор РЗЭ 1 как минимум на 10 минут, но
не более чем на 20 минут. Сначала эмбрионы сморщатся, а затем примут
первоначальную форму.
Аккуратно перенесите эмбрионы в раствор РЗЭ 2. Затем наберите эмбрионы в
соломинки, присоединив их к шприцу емкостью 1 мл. Затем удалите
соломинки и герметически закройте.
Поместите
соломинки
в
замораживающее
устройство
при
температуре
окружающей среды и запустите программу замораживания. Проведите сидинг
вручную при температуре - 7ºС. НЕ проводите сидинг близко к эмбрионам.
НЕ РОНЯЙТЕ и НЕ ВСТРЯХИВАЙТЕ солминки. Воздушные пузырьки, которые могут
образоваться при этом в соломинках, могут привести к снижению
жизнеспособности эмбрионов.
Продолжайте программу замораживания. Процесс замораживания занимает
примерно 2 часа. После его окончания погрузите соломинки в жидкий азот и
храните при температуре - 196ºС.
10.
G-FreezeKit Blast™
Питательная среда для замораживания бластоцист.
G-FreezeKit Blast™ содержит три питательных среды для криоконсервации
эмбрионов на стадии бластоцисты. Среда содержит MOPS в качестве
буферного вещества, а также глицерол как проникающий криопротектор.
Среда для инкубации бластоцист (BIM) не содержит сахарозу или глицерол.
Раствор для замораживания бластоцист 1 (BFS 1) содержит 100 мМ сахарозы
и 5% глицерола.
Раствор для замораживания бластоцист 2 (BFS 2) содержит 200 мМ сахарозы
и 10% глицерола.
Препарат предназначен для проведения
мероприятий и клинически протестирован.
вспомогательных
репродуктивных
Препарат G-FreezeKit Blast™ содержит фармацевтический пенициллин G.
3
Перед использованием к препарату должны быть добавлены раствор G-ММ™ или
HSA-solution™.
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
Препарат G-FreezeKit Blast™ устойчив и сохраняет свои свойства вплоть до
истечения срока годности, указанного на упаковке.
Перед применением необходимо нагреть до + 20 ± 5˚С. Препарат G-FreezeKit
Blast™ не разрешается помещать в СО2-инкубатор. Если среда покрывается
маслом, оно также не должно эквилибрироваться в СО2-инкубаторе.
Пузырек со средой не может храниться открытым. По окончании процедуры
следует утилизировать все остатки питательного раствора.
Указания к применению
Добавить 50 мг/мл препарата G-MM™ либо 100 мг/мл HSA-solution™.
BIM = 9.0 мл BIM + 1.0 мл G-MM™ либо 1.0 мл HSA- solution ™.
BFS 1 = 9.0 мл BFS 1 + 1.0 мл G-MM™ либо 1.0 мл HSA- solution ™.
BFS 2 = 9.0 мл BFS 2 + 1.0 мл G-MM™ либо 1.0 мл HSA- solution ™.
Промаркируйте чашки надписями BIM, BFS 1 и BFS 2. Добавьте по 800 μл
BIM, BFS 1 и BFS 2 в соответствующие чашки.
Эквилибрируйте при температуре + 20 ± 5˚С.
Оцените морфологию эмбрионов. Промойте предназначенные для замораживания
бластоцисты в растворе BIM.
Аккуратно поместите эмбрионы в раствор BFS 1 на 10 минут.
Перенесите эмбрионы в раствор BFS 2 на 7 минут.
При перемещении эмбрионов старайтесь сократить количество переносимого
раствора до минимума.
В течение указанных 7 минут промойте соломинку для замораживания в
растворе BFS 2, налитом в отдельную чашку/лунку.
По прошествии 7 минут перенесите бластоцисты в новую лунку с BFS 2 и
наберите в соломинки, присоединеные к 1 мл-вому шприцу. Герметично
закройте соломинки, чтобы жидкий азот не проник внутрь.
Время нахождения в растворе BFS 2 не должно превышать 15 минут.
Немедленно
поместите
соломинки
в
замораживающее
устройство
при
температуре - 7˚С.
Подождите 2 минуты.
Вручную проведите сидинг при температуре - 7˚С. НЕ проводите сидинг
близко к эмбрионам. Не роняйте и не встряхивайте соломинки. Присутствие
в них пузырьков воздуха может снизить жизнеспособность клеток.
Удерживайте эту температуру еще в течение 10 минут, а затем включите
программу замораживания.
Процесс замораживания занимает примерно 50 минут.
Погрузите соломинки в жидкий азот и храните при температуре - 196˚С.
11.
G-MOPS™
Питательная среда для осуществления манипуляций с ооцитами и эмбрионами
при естественных условиях окружающей среды.
4
G-MOPS™ представляет собой питательную среду, содержащую MОPS в качестве
буферного вещества.
Содержит фармацевтический пенициллин.
Препарат предназначен для проведения
мероприятий и клинически протестирован.
вспомогательных
репродуктивных
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
Препарат G-MOPS™ устойчив и сохраняет свои свойства вплоть до истечения
срока годности, указанного на упаковке.
Для сбора ооцитов: предварительно эквилибрировать при температуре + 37˚С
и естественной атмосфере.
Для осуществления манипуляций с гаметами и эмбрионами: добавить раствор
G-MM™ или HSA-solution™, эквилибрировать при температуре + 37˚С и
естественной атмосфере.
Указания к применению
Использование препарата G-MOPS™ для манипуляций с гаметами и эмбрионами
В ламинаре с помощью пипетки разлить препарат G-MOPS™ по нетоксичным
стерильным пробиркам и добавить необходимое количество раствора G-MM™
или HSA-solution™. Пробирка должна быть наполнена и плотно закрыта
пробкой для предотвращения изменений осмолярности. Поместите пробирку в
термостат или в калиброванный термоблок. Постарайтесь использовать GMOPS™ как можно быстрее после его приготовления (максимум в течение 60
минут).
Необходимо каждый день готовить свежий раствор G-MOPS™ с альбумином.
Аспирация фолликулов и идентификация ооцитов:
Аспирация фолликулов может производиться как по отдельности, так и
совокупно. Питательный раствор G-MOPS™ следует дополнить прошедшим
проверку качества фармацевтическим гепарином (2.5-10 единиц/мл), чтобы
снизить свертывание крови, содержащейся в фолликулярном аспирате.
Фолликулярную жидкость необходимо собирать в стерильные нетоксичные
одноразовые пробирки и немедленно проверять на предмет наличия ооцитов.
Если непосредственная проверка невозможна, пробирки должны быть плотно
закрыты и храниться при температуре + 37˚С. При необходимости промыть
фолликул, следует использовать предварительно нагретый раствор G-MOPS™.
Переместите фолликулярный аспират в пустую чашку. Полученные ооциты
удалите из фолликулярной жидкости, промойте в нагретом растворе G-MOPS™
(с добавлением альбумина), а затем в эквилибрированном растворе G-FERT™
(с добавлением альбумина). Перенесите ооциты в чашки с эквилибрированным
раствором G-FERT™ (с добавлением альбумина), и сразу же верните чашки в
инкубатор.
Оценка оплодотворения:
Используя стерильную пипетку перенесите денудированные ооциты в среду GMOPS™ с добавлением альбумина. Оцените количество
пронуклеусов,
полярных тел,
а также возможное присутствие зародышевых пузырьков.
Неоплодотворенные или дегенерировавшие ооциты, а также ооциты с более
чем 2 PN должны быть удалены из культуры. После анализа оплодотворенные
ооциты должны выращиваться в среде G-1™ с добавлением альбумина,
желательно под слоем масла.
Манипуляции с эмбрионами: Перенос эмбрионов из раствора G-1™ в раствор
G-2™ на 3 день. Для каждого пациента подготовьте по одной чашке с
5
предварительно нагретым G-MOPS™ на каждые 10 эмбрионов. Поместите 1 мл
предварительно нагретого раствора G-MOPS™ (с добавлением альбумина) в
центральную лунку однолуночной чашки. Поместите 2 мл раствора G-MOPS™ в
ободок чашки. Поместите чашку на нагревательный столик. Промывочная
чашка и сортировочная чашка не должны помещаться в СО2-инкубатор; их
предпочтительнее греть на нагревательном столике. На 3 день утром
производится оценка качества эмбрионов, и днем производится их перенос в
среду G-2™ (с добавлением альбумина). Эмбрионы остаются в среде G-2™ до
5 дня, когда осуществляется их перенос в полость матки. Промойте
эмбрионы в промывочной чашке (этот этап важен, чтобы удалить ЭДТА из
раствора G-1™). После этого перенесите эмбрионы в сортировочную чашку и
сгруппируйте морфологически схожие эмбрионы. Промойте в капле среды G2™, находящиеся в культуральной чашке, и вновь поместите до пяти
эмбрионов в каждую каплю G-2™ (с альбумином). Если у пациента имеются
более 10 эмбрионов, используйте две отдельные чашки для культивирования.
Сразу же верните чашку обратно в СО2-инкубатор.
Микроманипуляции:
Денудация ооцитов перед ICSI. Для каждой лунки, содержащей разведенный
раствор
HYASE™,
подготовьте
три
промывочных
лунки,
содержащих
приблизительно 1 мл или 6 капель (50-100 μл) G-MOPS™ под маслом.
Выдерживайте при температуре + 37˚С (вне инкубатора) примерно 15 минут.
Одновременно подготовьте чашки для ИКСИ. Используйте пипетку большого
диаметра, чтобы перенести 3-5 ооцитов в разведенный раствор HYASE™.
Аккуратно пипетируйте. Клетки кумулюса начнут рассеиваться. Важно не
передерживать ооциты в растворе гиалуронидазы дольше 30 секунд.
Перенесите частично денудированные ооциты в первую промывочную лунку,
обращая
внимание
на
то,
чтобы
захваченное
количество
раствора
гиалуронидазы было минимальным. Используя пипетку для денудации малого
диаметра удалите клетки corona radiata. Промойте ооциты в теплом G-MOPS™
с альбумином. Повторите эту операцию со всеми остальными чашками, пока
не будет произведена денудация всех ооцитов. Определите степень зрелости
ооцитов по присутствию (М2) или отсутствию (М1) полярных тел, либо
присутствию зародышевых пузырьков (GV). Поместите все зрелые ооциты (М2)
в подготовленные капли ИКСИ. Незрелые ооциты (М1 и GV) могут быть
помещены в питательную среду для дальнейшей инкубации и созревания.
ИКСИ: Предварительно согревайте G-MOPS™ (с альбумином) и OVOIL™/G-OIL™
при температуре + 37˚С в течение примерно 15 минут. Нагрейте ICSI™
(вязкий раствор для иммобилизации сперматозоидов) до температуры + 20 ±
5ºС. Чашки для ИКСИ следует готовить быстро и сразу же покрыть OVOIL™/GOIL™. НЕ следует готовить более одной чашки за один раз, чтобы избежать
испарения капель. Необходимо работать быстро и расположить все объекты
работы так, чтобы они были под рукой. Подготовьте по две чашки на
каждого пациента. Нагревайте чашки при температуре + 37˚С в течение
примерно 15 минут. Поместите денудированные ооциты в капли G-MOPS™ (с
альбумином), по одному ооциту на каждую каплю, из расчета максимум 4
ооцита на одну чашку. Все ооциты должны быть инъецированы, а затем
помещены в подготовленные чашки со средой G-1™ для инкубирования в
течение ночи.
6
12.
G-MOPS™ PLUS
ДОПОЛНЕНО ПРЕПАРАТОМ HSA
Питательная среда для манипуляций
с
естественных условиях окружающей среды.
гаметами
и
эмбрионами
при
G-MOPS™ PLUS представляет собой питательную среду, содержащую MОPS в
качестве буферного вещества,фармацевтический пенициллин G и человеческий
сывороточный альбумин.
Препарат предназначен для проведения
мероприятий и клинически протестирован.
вспомогательных
репродуктивных
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
Препарат G-MOPS™ PLUS устойчив и сохраняет свои
истечения срока годности, указанного на упаковке.
Предварительно
атмосфере.
эквилибрировать
при
температуре
+
свойства
37˚С
и
вплоть
до
естественной
Указания к применению
Использование препарата G-MOPS™ для манипуляций с гаметами и эмбрионами
В ламинаре с помощью пипетки разлить препарат G-MOPS™ PLUS по
нетоксичным стерильным пробиркам. Пробирка должна быть плотно закрыта
пробкой для предотвращения изменений осмолярности. Поместите пробирку в
термостат или в калиброванный термоблок. Постарайтесь использовать GMOPS™ PLUS как можно быстрее после его приготовления (максимум в течение
60 минут).
Аспирация фолликулов и идентификация ооцитов:
Аспирация фолликулов может производиться как по отдельности, так и
совокупно. Питательный раствор G-MOPS™ PLUS следует дополнить прошедшим
проверку качества фармацевтическим гепарином (2.5-10 единиц/мл), чтобы
снизить свертывание крови, содержащейся в фолликулярном аспирате.
Фолликулярную жидкость необходимо собирать в стерильные нетоксичные
одноразовые пробирки и немедленно проверять на предмет наличия ооцитов.
Если непосредственная проверка невозможна, пробирки должны быть плотно
закрыты и храниться при температуре + 37˚С. При необходимости промыть
фолликул, следует использовать предварительно нагретый раствор G-MOPS™
PLUS. Переместите фолликулярный аспират в пустую чашку. Полученные
ооциты удалите из фолликулярной жидкости, промойте в нагретом растворе
G-MOPS™ PLUS, а затем в эквилибрированном растворе G-FERT™ (с
добавлением альбумина). Перенесите ооциты в чашки с эквилибрированным
раствором G-FERT™ (с добавлением альбумина), и сразу же верните чашки в
инкубатор.
Оценка оплодотворения:
Используя стерильную пипетку перенесите денудированные ооциты в среду GMOPS™ PLUS. Оцените количество
пронуклеусов, полярных тел,
а также
возможное присутствие зародышевых пузырьков. Неоплодотворенные или
дегенерировавшие ооциты, а также ооциты с более чем 2 PN должны быть
удалены из культуры. После анализа оплодотворенные ооциты должны
7
выращиваться в среде G-1™ с добавлением альбумина, желательно под слоем
масла.
Манипуляции с эмбрионами: Перенос эмбрионов из раствора G-1™ в раствор
G-2™ на 3 день. Для каждого пациента подготовьте по одной чашке с
предварительно нагретым G-MOPS™ PLUS на каждые 10 эмбрионов. Поместите
1 мл предварительно нагретого раствора G-MOPS™ PLUS в центральную лунку
однолуночной чашки. Поместите 2 мл раствора G-MOPS™ PLUS в ободок чашки.
Поместите
чашку
на
нагревательный
столик.
Промывочная
чашка
и
сортировочная
чашка
не
должны
помещаться
в
СО2-инкубатор;
их
предпочтительнее греть на нагревательном столике. На 3 день утром
производится оценка качества эмбрионов, и днем производится их перенос в
среду G-2™ (с добавлением альбумина). Эмбрионы остаются в среде G-2™ до
5 дня, когда осуществляется их перенос в полость матки. Промойте
эмбрионы в промывочной чашке (этот этап важен, чтобы удалить ЭДТА из
раствора G-1™). После этого перенесите эмбрионы в сортировочную чашку и
сгруппируйте морфологически схожие эмбрионы. Промойте в капле среды G2™, находящиеся в культуральной чашке, и вновь поместите до пяти
эмбрионов в каждую каплю G-2™ (с альбумином). Если у пациента имеются
более 10 эмбрионов, используйте две отдельные чашки для культивирования.
Сразу же верните чашку обратно в СО2-инкубатор.
Микроманипуляции:
Денудация ооцитов перед ICSI. Для каждой лунки, содержащей разведенный
раствор
HYASE™,
подготовьте
три
промывочных
лунки,
содержащих
приблизительно 1 мл или 6 капель (50-100 μл) G-MOPS™ PLUS под маслом.
Выдерживайте при температуре + 37˚С (вне инкубатора) примерно 15 минут.
Одновременно подготовьте чашки для ИКСИ. Используйте пипетку большого
диаметра, чтобы перенести 3-5 ооцитов в разведенный раствор HYASE™.
Аккуратно пипетируйте. Клетки кумулюса начнут рассеиваться. Важно не
передерживать ооциты в растворе гиалуронидазы дольше 30 секунд.
Перенесите частично денудированные ооциты в первую промывочную лунку,
обращая
внимание
на
то,
чтобы
захваченное
количество
раствора
гиалуронидазы было минимальным. Используя пипетку для денудации малого
диаметра удалите клетки corona radiata. Промойте ооциты в теплом G-MOPS™
PLUS. Повторите эту операцию со всеми остальными чашками, пока не будет
произведена денудация всех ооцитов. Определите степень зрелости ооцитов
по присутствию (М2) или отсутствию (М1) полярных тел, либо присутствию
зародышевых пузырьков (GV). Поместите все зрелые ооциты (М2) в
подготовленные капли ИКСИ. Незрелые ооциты (М1 и GV) могут быть помещены
в питательную среду для дальнейшей инкубации и созревания.
14.
G-PGD™
Питательная среда для биопсии эмбрионов.
Препарат G-PGD™ представляет собой питательную среду, содержащую MОPS в
качестве буферного вещества и не содержащую кальций и магний.
Препарат предназначен для проведения
мероприятий и клинически протестирован.
вспомогательных
репродуктивных
Препарат G-PGD™ содержит фармацевтический пенициллин G.
Перед использованием к препарату должны быть добавлены раствор G-ММ™ или
HSA-solution™.
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
8
Препарат G-PGD™ устойчив и сохраняет свои свойства вплоть до истечения
срока годности, указанного на упаковке.
Перед применением добавить раствора G-ММ™ или HSA-solution™ и нагреть до
+ 37˚С. Препарат G-PGD™ не разрешается помещать в СО2-инкубатор;
предпочтительнее согревание в термостате, либо в нагревательном блоке.
Если среда покрывается маслом, оно также не должно эквилибрироваться в
присутствии СО2.
Пузырек со средой не может храниться открытым. По окончании процедуры
следует утилизировать все остатки питательного раствора.
Указания к применению
Биопсия эмбриона обычно производится утром 3-го дня до того, как
начнется компактизация бластомеров.
Подготовьте
чашки
с
каплями
предварительно
нагретого
G-PGD™
с
добавлением альбумина, покрытые OVOIL™/G-OIL™.
Поместите эмбрион в раствор G-PGD™ (питательную среду, содержащую MОPS в
качестве буферного вещества и не содержащую кальций и магний) при
температуре + 37˚С.
Зафиксируйте эмбрион с помощью удерживающей пипетки.
Проделайте отверстие в зоне (отверстие в зоне проделывается либо с
помощью кислого раствора Тирода, либо с помощью лазера). Введите чистую
пипетку для биопсии в отверстие и аккуратно произведите аспирацию одного
или двух бластомеров для анализа.
Прошедший биопсию эмбрион помещается в эквилибрированный раствор G-2™ с
добавлением альбумина, для выращивания вплоть до момента подтверждения
результатов биопсии. Здоровые эмбрионы могут быть отобраны для переноса
или оставлены для криоконсервации. Перенос эмбриона обычно производится
на 5 день после завершения генетической диагностики.
Предупреждение: Необходимо затратить некоторое время на то, чтобы
скорректировать положение эмбриона на удерживающей пипетке таким,
образом, чтобы бластомер ядром был отчетливо виден, и его можно было
извлечь. Если компактизация уже началась, бластомер будет сложнее
извлечь. Наберитесь терпения, с помощью движений пипетки в различных
направлениях постарайтесь разъединить бластомеры.
15.
G-RINSE™
Серия G5™.
Раствор для промывания контактирующих материалов, а также для промывания
шейки матки. НЕ предназначен для выращивания культур.
G-RINSE™ представляет собой бикарбонатный буферный солевой
содержащий гентамицин в качестве антибактерицидного реагента.
раствор,
Пригоден для использования после предварительного эквилибрирования при
температуре + 37˚С и 6% СО2.
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
Препарат G-RINSE™ устойчив и сохраняет свои свойства вплоть до истечения
срока годности, указанного на упаковке.
9
Пузырек со средой не следует хранить после открытия. Необходимо
утилизировать оставшийся лишним препарат после завершения процедуры.
Указания к применению
Промывание медицинских принадлежностей и шейки матки: Эквилибрировать GRINSE™ при температуре + 37˚С и 6% СО2. Промыть наконечник иглы для
аспирации ооцитов и трубчатый переходник с помощью препарата G-RINSE™ и
слить промывочную жидкость. Промыть шейку матки пациентки препаратом GRINSE™ перед проведением аспирации ооцитов.
18.
G-ThawKit Blast™
Среда для размораживания бластоцист
G-ThawKit Blast™ содержит четыре питательных среды для размораживания
эмбрионов на стадии бластоцисты. Среда содержит MOPS в качестве
буферного вещества, а также глицерол как проникающий криопротектор.
Раствор для размораживания бластоцист 1 (BТS 1) содержит 200 мМ сахарозы
и 10% глицерола.
Раствор для размораживания бластоцист 2 (BТS 2) содержит 100 мМ сахарозы
и 5% глицерола.
Раствор для
сахарозы.
размораживания
Раствор для
глицерина.
инкубации
бластоцист
бластоцист
3
(BIM)
(BТS
не
3)
содержит
содержит
100
сахарозы
мМ
или
G-ThawKit Blast™ содержит фармацевтический пенициллин G.
Препарат предназначен для проведения
мероприятий и клинически протестирован.
вспомогательных
репродуктивных
Перед использованием к препарату должны быть добавлены раствор G-ММ™ или
HSA-solution™.
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
Препарат G-ThawKit Blast™ устойчив и сохраняет свои свойства вплоть до
истечения срока годности, указанного на упаковке.
Перед использованием к препарату должны быть добавлены раствор G-ММ™ или
HSA-solution™. Эквилибрировать при + 37 ± 5˚С. G-ThawKit Blast™ не
разрешается помещать в СО2-инкубатор.
Пузырек со средой не может храниться открытым. По окончании процедуры
следует утилизировать все остатки питательного раствора.
Указания к применению
Добавить 50 мг/мл препарата G-MM™ либо 100 мг/мл HSA-solution™.
BТS 1 = 9.0 мл BТS 1 + 1.0 мл G-MM™ либо 1.0 мл HSA- solution ™.
BТS 2 = 9.0 мл BТS 2 + 1.0 мл G-MM™ либо 1.0 мл HSA- solution ™.
BТS 3 = 9.0 мл BТS 3 + 1.0 мл G-MM™ либо 1.0 мл HSA- solution ™.
10
BIM = 9.0 мл BIM + 1.0 мл G-MM™ либо 1.0 мл HSA- solution ™.
Все процедуры производятся при комнатной температуре.
Промаркируйте чашки надписями BIM, BTS 1, BTS 2 и BTS 3. С помощью
пипетки налейте 800 μл BIM, BTS 1, BTS 2 и BTS 3 в соответствующие
чашки. Эквилибируйте при температуре + 20 ± 5˚С.
Заполните
размораживатель
жидким
азотом
LN2
и
быстро
извлеките
контейнеры из крио-резервуара и поместите их в размораживатель с LN2.
Извлеките соломинки из контейнеров с помощью щипцов и оттаивать их на
воздухе в течение 10 секунд.
Поместите соломинки в водяную баню с температурой 30˚С на 30 секунд.
Выньте соломинки из водяной бани и тщательно обсушите. Срежьте ватный
конец соломинки и вставьте отрезанный конец в 1 мл-вый шприц. Отрежьте
другой конец соломинки и поместите в раствор BTS 1. Выпустите эмбрионы в
раствор BTS 1 с помощью шприца, контролируя процесс под бинокуляром.
Время, проходящее с момента удаления соломинок из водяной бани до
попадания эмбрионов в раствор BTS 1, должно быть минимальным (менее 1
минуты). За один раз следует размораживать только одну соломинку.
Используя пипетку с диаметром отверстия немного больше размера эмбриона,
сразу же перенесите эмбрионы в раствор BTS 2 на 5 минут. Старайтесь при
переносе захватывать минимальное количество среды.
Перенесите эмбрионы в раствор BTS 3 на 5 минут.
Перенесите эмбрионы в раствор BIM на 5 минут.
Перенесите эмбрионы во вторую чашку с раствором BIM, подогретым на
нагревательном столике при температуре + 37˚С на 5 минут.
Промойте эмбрионы в предварительно эквилибрированном растворе G-2™ с
добавлением альбумина в лунке однолуночной чашки и перенесите эмбрионы в
культуральную среду.
Эмбрионы необходимо перенести в матку в эквилибрированном растворе
EmbryoGlue™ или в G-2™ с добавлением альбумина.
19.
G-GAMETE™
ДОПОЛНЕНО ПРЕПАРАТОМ HSA
Среда для манипуляций с ооцитами и эмбрионами в естественной атмосфере.
G-GAMETE™ представляет собой MOPS-бикарбонатный буферный питательный
раствор, содержащий Гентамицин в качестве бактерицидного средства,
а
также человеческий сывороточный альбумин (HSA).
Препарат предназначен
мероприятий.
для
проведения
вспомогательных
репродуктивных
Перед применением эквилибрировать при температуре + 37˚С и в атмосфере,
содержащей 6% СО2.
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
Препарат G-GAMETE™ устойчив и сохраняет свои
истечения срока годности, указанного на упаковке.
свойства
вплоть
до
Пузырек со средой не может храниться открытым. По окончании процедуры
следует утилизировать все остатки питательного раствора.
11
Для сохранения требуемого уровня pH препарат G-GAMETE™ не
использовать в естественной атмосфере в течение более 7 минут.
следует
Указания к применению
Использование G-GAMETE™ для работы с ооцитами и эмбрионами:
Эквилибрируйте питательную среду в стерильной нетоксичной чашке при
температуре + 37˚С и в атмосфере, содержащей 6% СО2 в течение 4-18
часов.
Идентификация ооцитов:
Перенесите фолликулярный аспират в пустую чашку. Идентифицируйте ооциты
и
с
помощью
стерильной
пипетки
перенесите
и
промойте
их
в
эквилибрировванном растворе G-GAMETE™, а затем в эквилибрированном
раствор G-FERT™ PLUS/G-FERT™ с добавлением альбумина. Перенесите ооциты
в чашки с G-FERT™ PLUS/G-FERT™ с добавлением альбумина и сразу же
верните чашки в инкубатор.
Оценка оплодотворения:
Поренесите денудированные ооциты в раствор G-FERT™ с помощью стерильной
пипетки. Определите количество пронуклеусов, полярных тел, а также
возможное присутствие зародышевых пузырьков. Неоплодотворенные или
дегенеративные ооциты, а также ооциты с более чем 2 PN, должны быть
удалены из культуры. Оплодотворенные ооциты должны культивироваться в
растворе G-1™ PLUS/G-1™ с добавлением альбумина предпочтительно под
маслом OVOIL™.
Денудация ооцитов перед выполнением ICSI.
Подготовьте 4-луночные чашки, заполнив три лунки раствором G-GAMETE™ и
одну HYASE™. Используйте пипетку большого диаметра чтобы перенести 3-5
ооцитов в раствор HYASE™. Аккуратно пипетируйте. Клетки кумулюса начнут
рассеиваться. Важно не передерживать ооциты в растворе гиалуронидазы
дольше 30 секунд. Перенесите частично денудированные ооциты в первую
лунку с G-GAMETE™. Используя пипетку для денудации малого диаметра
удалите клетки corona radiata. Используйте 2 оставшиеся лунки с GGAMETE™ для промывки ооцитов. Перенесите ооциты в капли G-GAMETE™ для
инъекций или, если необходимо, в G-1TMPLUS/G-1TM с добавлением альбумина
для дальнейшей инкубации и созревания.
ICSI
Подготовьте чашки, поместив каплю раствора ICSI™ объемом 1-10 μл в центр
каждой чашки и соответствующее количество капель раствора G-GAMETE™
объемом 10 μл по периферии, и покройте маслом OVOIL™. НЕ следует
готовить более одной чашки за один раз до покрытия OVOIL™, чтобы
избежать испарения капель.
Эквилибрируйте чашки при температуре + 37˚С и в атмосфере, содержащей 6%
СО2, как минимум, в течение 4 часов.
Поместите
небольшое
количество
(1-2μл)
подготовленной
суспензии
сперматозоидов в центр капли ICSI™. Поместите денудированные ооциты в
капли G-GAMETE™, по одному ооциту в каплю, максимум четыре ооцита в одну
чашку. Проведите инъекцию яйцеклеток.
После инъекции всех ооцитов промойте их в растворе G-1™ PLUS/G-1™ с
добавлением альбумина, а затем поместите их в питательный раствор G-1™
PLUS/ G-1™ с добавлением альбумина для дальнейшего культивирования.
20.
HSA-solution™
Препарат
HSA-solution™
содержит
раствор
человеческий
сывороточный
альбумин (HSA) (100 мг/мл) и предназначен для использования при
проведении
вспомогательных
репродуктивных
мероприятий,
включающих
выполнение манипуляций с гаметами и эмбрионами. В указанных процедурах
HSA-solution™ используется в качестве добавки к культуральным средам.
12
HSA-solution™ представляет собой фармацевтический альбумин медицинского
назначения, не содержит HBV, HCV и HIV.
Препарат предназначен для проведения
мероприятий и клинически протестирован.
вспомогательных
репродуктивных
Не содержит антибиотиков.
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
Препарат HSA-solution™ устойчив и сохраняет свои
истечения срока годности, указанного на упаковке.
свойства
вплоть
до
Для добавления в среду для выращивания гамет и эмбрионов.
Указания к применению
Все среды Витролайф, за исключением препарата EmbryoGlue™, не содержат
альбумин. Поэтому эти препараты требуют добавления раствора G-MM™ или
HSA-solution™ в соответствующей концентрации (см. таблицу ниже). Для
всех культуральных сред соотношение составляет 0.5 мл раствора G-MM™ или
HSA- solution ™ на 9.5 мл исходного препарата. Конечная концентрация ЧСА
в растворе должна составлять 5 мг/мл. Перед добавлением альбумина среды
необходимо разаликвотить в стерильные нетоксичные пробирки или сосуды
для выращивания культур. В идеальном варианте такая емкость должна быть
предварительно промыта раствором G-RINSE™ с тем, чтобы гарантировать
отсутствие какого-либо осадка.
Среда (мл)
HSA- solution ™ (мл)
Конечный объем (мл)
9.5
0.5
10.0
19.0
1.0
20.0
28.5
1.5
30.0
38.0
2.0
40.0
47.5
2.5
50.0
57.0
3.0
60.0
66.5
3.5
70.0
76.0
4.0
80.0
85.5
4.5
90.0
95.0
5.0
100.0
21.
HYASE™ - 10X
Для удаления кумулюсных клеток.
Физиологический солевой буферный раствор,
человеческий сывороточный альбумин.
содержащий
гиалуронидазу
и
Препарат HYASE™ содержит фармацевтический пенициллин G.
Предназначен для проведения вспомогательных репродуктивных мероприятий и
клинически протестирован.
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре
температуре - 20ºС.
от
+
2
до
+
8˚С,
либо
при
13
Препарат HYASE™ устойчив и сохраняет свои свойства вплоть до истечения
срока годности, указанного на упаковке.
Для применения после
следующих средств:
разведения
в
соотношении
1:10
одним
из
двух
1)
G-OOCYTE
или
G-MOPS,
с
добавлением
G-MM
или
HSA-solution;
предварительно
эквилибрировать
при
температуре
+
37˚С
и
естественной атмосфере.
2) GAMETE™, предварительно эквилибрировать при температуре + 37˚С и
в атмосфере, содержащей 5% СО2.
Концентрация гиалуронидазы в препарате HYASE™ составляет 800 IU/мл до
разведения.
Указания к применению
Разведите препарат HYASE™ одним из следующих средств: G-OOCYTE™/GMOPS™/GAMETE™ в соотношении 1:10, тщательно перемешайте.
Подготовьте и промаркируйте стерильные нетоксичные 4-луночные чашки; для
каждой лунки с препаратом HYASE™ подготовьте по три лунки с одним из
указанных растворов: G-OOCYTE™/G-MOPS™/GAMETE™.
Предварительно
нагрейте
чашки
с
разведенным
раствором
HYASE™
и
растворами G-OOCYTE™/G-MOPS™ в течение 15 минут. В случае использования
в качестве средства для разведения препарата GAMETE™, необходимо
предварительно выдерживать чашки при температуре + 37˚С и в атмосфере,
содержащей 5% СО2, в течение 3 часов.
Используя стерильную пипетку большого диаметра поместите 3-5 ооцитов в
раствор
HYASE™.
Аккуратно
пипетируйте.
Кумулюсные
клетки
начнут
рассеиваться. НЕ передерживайте ооциты в растворе HYASE™ более 30
секунд.
С помощью стерильной пипетки перенесите ооциты из раствора HYASE™ в
первую промывочную лунку. Используя пипетку малого диаметра для
денудации удалите клетки corona radiata. Диаметр пипетки должен слегка
превышать диаметр ооцита. Использование пипетки со слишком узким
отверстием или неровным краем может привести к повреждению ооцита.
Используйте две оставшихся промывочных лунки для промывания ооцитов.
Перенесете ооциты в новый раствор G-OOCYTE™/G-MOPS™/GAMETE™ или, при
необходимости,
в
питательную
среду
для
дальнейшей
инкубации
и
созревания.
22.
ICSI™
Для иммобилизации сперматозоидов перед проведением ICSI.
ICSI™
представляет
собой
вязкий
раствор,
замедляющий
движение
сперматозоидов, содержащий поливинилпирролидон (ПВП) и рекомбинантный
Альбумин Человека (рАЧ (rHA)).
Препарат ICSI™ не содержит антибиотиков.
Препарат предназначен
мероприятий.
для
проведения
вспомогательных
репродуктивных
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
14
Препарат ICSI™ устойчив и сохраняет свои свойства вплоть до истечения
срока годности, указанного на упаковке.
Перед применением эквилибрировать
естественной атмосфере.
при
температуре
+20
±
5ºС
и
в
Для одноразового использования. После завершения процедуры оставшийся
неиспользованным раствор утилизируется.
Указания к применению
Подготовьте нагретые и эквилибрированные чашки с каплями культуральной
среды и каплей ICSI™ в центре.
Покройте маслом OVOIL™.
Поместите ооциты в капли питательной среды из расчета один ооцит на одну
каплю.
Поместите небольшое количество (1-2 µл) подготовленной суспензии
сперматозоидов в центр капли ICSI™. Поставьте чашки на несколько минут в
инкубатор с тем, чтобы позволить сперматозоидам переместиться к внешнему
краю капли.
Заполните пипетку для инъекций препаратом ICSI™.
Обездвижьте отдельные сперматозоиды, используя инъекционную пипетку для
разрушения мембраны хвостика сперматозоида. Аспирируйте обездвиженный
сперматозоид.
Переместите каплю с ооцитами в поле зрения. Используя удерживающую
пипетку
сориентируйте
ооцит,
введите
сперматозоид
с
минимальным
количеством ICSI™.
Поместите ооциты в питательную среду.
23.
IVF™
Для оплодотворения in vitro, культивирования и переноса зародышей.
Для использования до стадии 6-8 клеток.
IVF™ представляет собой бикарбонатный буферный
содержащий человеческий сывороточный альбумин.
Препарат предназначен для проведения
мероприятий и клинически протестирован.
питательный
вспомогательных
раствор,
репродуктивных
IVF™ содержит фармацевтический пенициллин G.
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
Препарат IVF™ устойчив и сохраняет свои свойства вплоть до истечения
срока годности, указанного на упаковке.
Перед применением эквилибрировать при температуре + 37˚С и 5% СО2.
Указания к применению
Оплодотворение
С помощью стерильной нетоксичной пипетки добавьте среду в сосуд,
промаркированный данными пациента. Для выращивания культур большого
объема следует добавить 0.5-1.0 мл в стерильную пробирку или лунку. При
небольших объемах поместите 0.01-0.1 мл капли в стерильную чашку для
выращивания культур. Покройте маслом OVOIL™.
15
В одной лунке можно инсеминировать несколько ооцитов. При использовании
капель рекомендуется распределять по одному ооциту на одну каплю.
Оценку оплодотворения следует проводить примерно через 15-20 часов после
добавления сперматозоидов. Необходимо удалить клетки кумулюса с помощью
пипетки для денудации, а также промыть ооциты препаратом IVF™ до
проведения микроскопического анализа.
Выращивание эмбрионов
В 0 день(день пункции и оплодотворения ооцитов) подготовьте чашки с
IVF™. С помощью стерильной нетоксичной пипетки поместите четыре капли
объемом 50 μл для культивирования и две капли по 50 μл для промывки в
стерильную чашку и покройте маслом OVOIL™. Промаркируйте чашку данными
пациента, а также надписями «IVF» на дне и крышке чашки. Эквилибрируйте
чашку в течение ночи + 37˚С и окружающей атмосфере, содержащей 5% СО2.
На день 1 промойте оплодотворенные ооциты в двух промывочных каплях в
чашке с IVF™ и поместите их в капли для культивирования. В каждую каплю
можно помещать не более четырех оплодотворенных ооцитов.
На 2 или 3 день необходимо оценить качество эмбрионов и определить день
переноса. Для выращивания эмбрионов до стадии бластоцисты их необходимо
перенести в раствор ССМ™ во второй половине 3-го дня.
24.
OVOIL™
Для покрытия питательной среды при осуществлении процедур оплодотворения
in vitro и микроманипуляций.
Препарат OVOIL™ представляет
парафиновое масло.
собой
Препарат предназначен для проведения
мероприятий и клинически протестирован.
стерильное
фильтрованное
вспомогательных
легкое
репродуктивных
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
Препарат OVOIL™ устойчив и сохраняет свои свойства вплоть до истечения
срока годности, указанного на упаковке.
Перед применением эквилибрировать при температуре 37˚С и 5% СО2, 6% СО2
либо в естественной атмосфере, в зависимости от целей использования.
Указания к применению
С помощью стерильной нетоксичной пипетки добавить питательный раствор
для выращивания культур в сосуд, маркированный инициалами или иными
данными пациента. В случае с культурами большого объема добавляется от
0.5 до 1.0 мл в стерильную пробирку или лунку планшета таким образом,
чтобы
культура
оказалась
полностью
покрыта
OVOIL™.
Для
культур
небольшого объема, поместить несколько капель (от 0.01 до 0.1 мл) в
стерильную чашку так, чтобы культура оказалась полностью покрыта OVOIL™.
25.
SpermGrad™
Для обработки спермы методом градиента плотностей
SpermGrad™ представляет собой физиологический солевой буферный раствор,
содержащий покрытые силаном коллоидные частицы двуокиси кремния (SiO2)
высокой плотности, что позволяет обеспечить эффективное разделение
сперматозоидов в процессе центрифугирования.
16
SpermGrad™ не содержит антибиотиков, в то время как питательные растворы
для
разведения
G-SPERM™
и
SpermRinse™
включают
фармацевтический
Гентамицин.
Препарат предназначен для проведения
мероприятий и клинически протестирован.
вспомогательных
репродуктивных
Для приготовления градиента SpermGrad™ необходимо разводить раствором
SpermRinse™.
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
Препарат SpermGrad™ устойчив и сохраняет свои
истечения срока годности, указанного на упаковке.
свойства
вплоть
до
Для применения после разведения препаратом SpermRinse™.
Указания к применению
Смешайте SpermGrad™ со средой SpermRinse™ для получения 90% и 45%
растворов. Тщательно перемешайте растворы и поместите в стерильные
нетоксичные пробирки. До использования храните в холодильнике. Перед
применением необходимо нагреть до комнатной температуры.
С помощью пипетки поместите сначала 1.5 мл 90%-ного раствора в
стерильную
центрифужную
пробирку,
промаркированную
инициалами
или
другими данными пациента, а затем медленно, поверх наслоите 1.5 мл 45%ного раствора. После чего, аккуратно добавьте поверх указанных растворов
семенную жидкость.
Центрифугируйте пробирку в течение 20 минут при 150-1000 g.
Удалите два верхних слоя. Перенесите осадок с минимально возможным
количеством
90%-ного
раствора
в
стерильную
коническую
пробирку,
содержащую 5 мл эквилибрированного раствора SpermRinse™.
Центрифугируйте в течение 10 минут при 150-1000 g.
Удалите супернатант и повторите промывку.
Ресуспендируйте осадок в 1 мл эквилибрированного раствора G-FERT™ (с
добавлением альбумина) или питательного раствора IVF™. Произведите
проверку образца на подвижность и концентрацию.
Инсеминируйте в соответствии с обычным лабораторным планом.
26.
SpermRinse™
Для обработки спермы
SpermRinse™ представляет собой питательную среду с буферной
HEPES/бикарбонат; содержит человеческий сывороточный альбумин.
системой
SpermRinse™ в качестве антибиотика содержит фармацевтический Гентамицин.
Предназначен для проведения вспомогательных репродуктивных мероприятий и
клинически протестирован.
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
SpermRinse™ устойчив и сохраняет свои свойства вплоть до истечения срока
годности, указанного на упаковке.
17
Перед применением эквилибрировать при температуре + 37˚С и в атмосфере,
содержащей 5% СО2.
Указания к применению
Метод ”Swim up”
Используя стерильную нетоксичную пипетку добавьте 1.0 мл семенной
жидкости в пробирку, промаркированную инициалами или другими данными
пациента. Сверху наслоить 2.0 мл SpermRinse™. Поместите пробирку в
инкубатор при + 37˚С и 5% СО2 на 30-60 минут.
Перенесите расположенный сверху слой среды в чистую пробирку. Добавьте
5.0 мл SpermRinse™, перемешайте и центрифугируйте в течение 10 минут при
150-1000 g.
Удалите супернатант и ресуспендируйте осадок в 5.0 мл эквилибрированного
раствора
IVF™
(чтобы
удалить
Гентамицин),
после
чего
снова
центрифугируйте.
Удалите супернатант и ресуспендируйте осадок в 1.0 мл предварительно
эквилибрированного раствора IVF™.
Метод градиента плотностей
Смешайте препарат SpermRinse™ и препарат SpermGrad™ для получения 90% и
45%
растворов
градиента,
соответственно.
С
помощью
стерильной
нетоксичной пипетки поместите сначала 1.5 мл 90%-ного раствора в
коническую пробирку для центрифугирования, а затем аккуратно добавьте
поверх 1.5 мл 45%-ного раствора. Наверх градиента необходимо аккуратно
наслоить семенную жидкость.
Центрифугируйте пробирку в течение 20 минут при 150-1000 g. Удалите
семенную жидкость и два верхних слоя. Перенесите осадок с минимально
возможным количеством 90%-ного раствора в стерильную центрифужную
пробирку с 5 мл SpermRinse™. Центрифугируйте в течение 10 минут при 1501000 g. Удалите супернатант и еще один раз промойте, используя
SpermRinse™. После повторной промывки ресуспендируйте осадок в 1.0 мл
предварительно эквилибрированного раствора IVF™.
27.
THAW-KIT 1™
Содержание:
CRYO-PBS
Раствор для размораживания эмбриона 1 (РРЭ 1)
Раствор для размораживания эмбриона 2 (РРЭ 2)
Раствор для размораживания эмбриона 3 (РРЭ 3)
Для размораживания эмбрионов на стадии дробления.
THAW-KIT 1™ включает четыре физиологических солевых буфера, содержащих
человеческий сывороточный альбумин.
THAW-KIT 1™ содержит 1,2-Пропандиол и сахарозу.
РРЭ 1 содержит
1.0 М 1,2–Пропандиола и 0.2 М Сахарозы
РРЭ 2 содержит
0.5 М 1,2-Пропандиола и 0.2 М Сахарозы
РРЭ 3 содержит
0.2 М Сахарозы
Препарат THAW-KIT 1™ содержит фармацевтический пенициллин G.
18
Препарат предназначен для проведения
мероприятий и клинически протестирован.
вспомогательных
репродуктивных
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
Препарат THAW-KIT 1™ устойчив и сохраняет свои
истечения срока годности, указанного на упаковке.
свойства
вплоть
до
Перед применением эквилибрировать при температуре + 20 ± 5ºС.
Указания к применению
Проверьте личность пациента и уточните местонахождение соломинок,
содержащих эмбрионы пациента. Держите соломинки покрытыми жидким азотом
(LN2) в небольшом сосуде Дьюара до момента оттаивания. Размораживать
соломинки необходимо по одной.
Подготовьте и промаркируйте стерильные 4-луночные
чашки, налейте
необходимое количество Cryo-PBS, РРЭ 1, РРЭ 2 и РРЭ 3 в соответствующие
лунки. Необходимо предварительно эквилибрировать чашки при температуре +
20 ± 5ºС.
Достаньте соломинку и размораживайте на воздухе в течение 30 секунд.
Осторожно держа соломинку, убедитесь в отсутствии пузырьков воздуха,
трещин или протечек.
Поместите соломинку в водяную баню с температурой + 30ºС на 30 секунд.
Затем выньте ее и аккуратно вытрите. Отрежьте один конец соломинки
стерильными ножницами и присоедините к 1 мл-вому шприцу. Осторожно
отрежьте другой конец соломинки. Старайтесь не встряхивать соломинку,
чтобы избежать образования воздушных пузырьков.
Аккуратно перенесите эмбрионы в раствор РРЭ 1. Если не удается сразу
извлечь все эмбрионы, наберите некоторое количество раствора РРЭ в
соломинку и аккуратно промойте.
Оставьте эмбрионы в растворе РРЭ 1 на 5 минут.
Аккуратно перенесите эмбрионы в раствор РРЭ 2 на 5 минут.
Аккуратно перенесите эмбрионы в раствор РРЭ 3 на 5-10 минут.
Поместите эмбрионы в раствор Cryo-PBS при комнатной температуре на 5-10
минут.
НЕ ПОМЕЩАЙТЕ ЭМБРИОНЫ В CO2-ИНКУБАТОР ПРИ РАЗМОРАЖИВАНИИ.
Перенесите размороженные эмбрионы в питательную среду. До осуществления
дальнейшего
культивирования
необходимо
провести
оценку
и
зарегистрировать морфологию.
19
28.
CCM™
Для культивирования и переноса эмбрионов.
Для использования начиная со стадии 6-8 клеток на третий день (после
первоначального культивирования в среде IVF™) до стадии бластоцисты на 5
день.
ССМ™ представляет собой бикарбонатный буферный
содержащий человеческий сывороточный альбумин.
Препарат предназначен для проведения
мероприятий и клинически протестирован.
питательный
вспомогательных
раствор,
репродуктивных
ССМ™ содержит фармацевтический пенициллин G.
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
Препарат ССМ™ устойчив и сохраняет свои свойства вплоть до истечения
срока годности, указанного на упаковкеимаются.
Перед применением эквилибрировать при температуре + 37˚С и в атмосфере,
содержащей 5% СО2.
Указания к применению
Пункцию ооцитов и культивирование эмбрионов до 3 дня проводите в
растворе IVF™.
Культивирование до стадии бластоцисты
Утром 3-го дня подготовьте чашки с раствором ССМ™. Используя стерильную
нетоксичную пипетку, поместите четыре капли по 50 μл для культивирования
и две промывочные капли по 50 μл в стерильную нетоксичную чашку для
выращивания культур и покройте маслом OVOIL™. Промаркируйте чашку
инициалами или другими данными пациента, а также надписью «ССМ» на дне и
на крышке. Предварительно эквилибрируйте чашку при температуре + 37˚С и в
атмосфере, содержащей 5% СО2, минимум в течение четырех часов.
На 3 день необходимо провести оценку качества эмбриона. Промойте
эмбрионы в двух промывочных каплях в чашке с раствором ССМ™ и поместите
в капли для культивирования. В каждой капле должны выращиваться максимум
четыре эмбриона.
На 4 день подготовьте две чашки с каплями ССМ™ как указано выше.
Промаркируйте их инициалами пациента, а также надписями «Перенос» и
«Заморозка», соответственно. Эквилибрируйте чашки при + 37˚С и 5% СО2 в
течение ночи.
На 5 день проведите оценку эмбрионов для переноса и замораживания в
соответствии с обычными критериями, применяемыми для определения
качества бластоцист. Поместите эмбрионы в чашки с надписями «Перенос» и
«Заморозка». При отсутствии экспандированных бластоцист на 5 день
20
следует выращивать эмбрионы в чашке «Заморозка» в течение еще одного дня
и произвести повторную оценку на 6 день.
Перенос бластоцисты осуществляется в соответствии с обычным лабораторным
порядком.
Замораживание
эмбрионов
лабораторным порядком.
29.
выполняется
в
соответствии
с
обычным
G-MM™
Препарат G-MM™ содержит раствор Рекомбинантного Человеческого Альбумина
(50
мг/мл)
и
предназначен
для
использования
при
проведении
вспомогательных
репродуктивных
мероприятий,
включая
выполнение
манипуляций с гаметами и эмбрионами. В указанных процедурах препарат GMM™ добавляется к культуральной среде.
Препарат G-MM™ состоит из Рекомбумина® (Авентис-Беринг).
Препарат G-MM™ не содержит антибиотиков.
Препарат
G-MM™
предназначен
для
проведения
репродуктивных мероприятий и клинически протестирован.
вспомогательных
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
Препарат G-MM™ устойчив и сохраняет свои свойства вплоть до истечения
срока годности, указанного на упаковке.
Для добавления в культуральную среду для выращивания гамет и эмбрионов.
Указания к применению
Все среды Витролайф не содержат альбумин, за исключением препарата
EmbryoGlue™. Поэтому эти препараты требуют добавления G-MM™ или HSAsolution™ в соответствующей концентрации (см. таблицу ниже). Для всех
сред соотношение составляет 0.5 мл G-MM™ или HSA-solution™ на 9.5 мл
исходного раствора. Конечная концентрация G-MM™ должна составлять 2.5
мг/мл, а конечная концентрация ЧСА - 5 мг/мл. Необходимо разаликвотить
среды в стерильные нетоксичные пробирки перед тем, как добавить к ним
альбумин. В идеальном варианте пробирки должны быть предварительно
промыты раствором G-RINSE™ с тем, чтобы гарантировать отсутствие какоголибо осадка.
Питательный
раствор G-MM ™ или HSA-раствор™ Конечный объем (мл)
(мл)
(мл)
9.5
0.5
10.0
19.0
1.0
20.0
28.5
1.5
30.0
38.0
2.0
40.0
47.5
2.5
50.0
57.0
3.0
60.0
66.5
3.5
70.0
76.0
4.0
80.0
85.5
4.5
90.0
95.0
5.0
100.0
21
30.
G-1™ v5
Серия G5™.
Среда для культивирования эмбрионов со стадии пронуклеусов до 2 или 3
дня.
G-1™ v5 представляет среду с бикарбонатной буферной системой; содержит
гиалуронан и гентамицин в качестве антибактерицидного реагента.
Перед
применением
добавить
раствор
G-MM™
эквилибрировать при температуре + 37˚С и 6% СО2.
или
HSA-solution™
и
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
Препарат G-1™ v5 устойчив и сохраняет свои свойства вплоть до истечения
срока годности, указанного на упаковке.
Пузырьки с препаратом не следует хранить
утилизировать оставшийся неиспользованным
процедуры.
после открытия.
препарат после
Необходимо
завершения
Указания к применению
Культивирование эмбрионов стадии дробления
После удаления кумулюсных клеток и оценки на предмет оплодотворения
эмбрионы с пронуклеусами должны быть перенесены в однолуночную чашку и
промыты предварительно нагретым раствором G-MOPS™
PLUS/G-MOPS™ с
добавлением
альбумина.
Затем
эмбрионы
необходимо
последовательно
промывать
в
двух
центральных
каплях,
находящихся
в
чашке
для
культивирования, и перенести в 50 μл капли G-1™ v5 с альбумином не более
чем по 5 эмбрионов в каплю.
Пять является максимальным числом помещаемых в одну каплю эмбрионов, и
определяется количеством питательных веществ, необходимых для
их
выращивания. Размещение в одной капле более пяти эмбрионов может
привести к существенному сокращению объема питания эмбрионов. В качестве
меры предосторожности можно приготовить две чашки для культивирования в
том случае, если пациент имеет более 10 эмбрионов.
Сразу же возвратите чашку в инкубатор. Рекомендуется культивировать
эмбрионами группами минимум по два. Например, если пациент имеет 6
эмбрионов, наилучшим вариантом является размещение эмбрионов двумя
группами по 3, а не
группами 4 и 2 или 5 и 1. На 2 или на 3 день
эмбрионы можно перенести в матку, используя для этого эквилибрированный
EmbryoGlue™
или эквилибрированый
раствор G-2™ v5 PLUS/ G-2™ v5 с
добавлением альбумина. В противном случае на 3 день эмбрионы могут быть
перенесены в раствор G-2™ v5 PLUS/ G-2™ v5 с добавлением альбумина для
дальнейшего культивирования до стадии бластоцисты.
31.
G-IVF™
Серия G5™.
Среда для подготовки гамет и для оплодотворения in vitro.
G-IVF™ представляет собой бикарбонатный буферный
гентамицин в качестве антибактерицидного реагента.
раствор,
содержащий
22
Пригоден для использования после добавления G-MM™ или HSA-solution™, а
также после предварительной выдержки при температуре + 37˚С и 6% СО2.
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
Препарат G-IVF™ устойчив и сохраняет свои свойства вплоть до истечения
срока годности, указанного на упаковке.
Пузырьки с препаратом не следует хранить
утилизировать оставшийся неиспользованным
процедуры.
после открытия.
препарат после
Необходимо
завершения
Указания к применению
Добавление:
Добавьте 1.0 мл раствора G-MM™ или HSA-solution™ к 9.0 мл раствора GIVF™.
Обработка спермы:
Для образцов спермы с достаточным количеством сперматозоидов и высокой
их подвижностью используется метод Swim-up.
С помощью пипетки поместите 1.0 мл спермы в пробирку. Поверх наслоите
2.0 мл эквилибрированного раствора G-IVF™. Поместите пробирку в
наклонном положении в инкубатор при температуре + 37˚С и 6% СО2 на 30-60
минут. Соберите верхний слой питательной среды, не касаясь находящегося
ниже слоя семенной жидкости, и перенесите в чистую пробирку. Добавьте
5.0 мл раствора G-IVF™, перемешайте и центрифугируйте в течение 10 минут
при 300-600 g. Удалите супернатант и ресуспендируйте осадок в 5.0 мл
эквилибрированного
G-IVF™
с
добавлением
альбумина
и
повторите
центрифугирование. Слейте супернатант и ресуспендируйте осадок в 0.5-1.0
мл (в зависимости от качества образца) эквилибрированного раствора GIVF™ с добавлением альбумина. Определите подвижность и концентрацию
сперматозоидов в промытом образце.
Метод центрифугирования в градиенте плотностей.
Этот метод может применяться для любых образцов спермы независимо от их
качества.
В 2 отдельных пробирках смешайте раствор SpermGrad™ и раствор G-IVF™ с
добавлением альбумина для получения стоковых растворов с концентрацией
90% и 45%. Для получения раствора с концентрацией 90% необходимо смешать
9.0 мл SpermGrad™ и 1.0 мл G-IVF™ с добавлением альбумина. В случае с
раствором концентрацией 45% смешиваются 4.5 мл SpermGrad™ и 5.5 мл
раствора G-IVF™ с добавлением альбумина. Тщательно перемешайте растворы
и храните в стерильных нетоксичных пробирках. Промаркируйте пробирки и
храните в холодильнике до использования. Перед тем, как использовать
растворы, их необходимо эквилибрировать при температуре + 37˚С и 6% СО2.
С помощью пипетки добавьте в стерильную центрифужную пробирку 1.5 мл
90%-ного раствора, а затем медленно наслоите 1.5 мл 45%-ного раствора.
Сверху поместите 1 мл спермы. Если образец семенной жидкости невысокого
качества, следует поместить поверх градиента до 3 мл семенной жидкости.
Если добавить слишком много семенной жидкости, то это негативно
отразится на качестве разделения. Центрифугируйте в течение 10-20 минут
при 300-600 g. Удалите два верхних слоя. Перенесите осадок с минимальным
количеством 90%-ного раствора в стерильную коническую пробирку, в
которой находится 5 мл эквилибрированного раствора G-IVF™ с добавлением
альбумина. Центрифугируйте в течение 10 минут при 300-600 g. Удалите
супернатант и повторите отмывку. После второй отмывки осадок необходимо
ресуспендировать в 1 мл эквилибрированного раствора G-IVF™ с добавлением
альбумина. Затем производится анализ промытого образца на предмет
подвижности и концентрации сперматозоидов. Разведите промытый образец
23
эквилибрированным
G-IVF™
с
добавлением
альбумина
до
получения
окончательной концентрации 75 000-200 000 подвижных сперматозоидов/мл.
Подготовьте чашки для инсеминации, содержащие 0.5-1.0 мл суспензии
сперматозоидов, и эквилибрируйте их при температуре + 37˚С и 6% СО2
минимум в течение 2 часов.
Идентификация ооцитов:
Сначала промойте ооциты в предварительно нагретом растворе G-MOPS™ PLUS/
G-MOPS™ с добавлением альбумина, а затем в эквилибрированном растворе GIVF™ с добавлением альбумина. Процедура промывания должна состоять из
двух этапов, во время каждого из которых ооциты промываются в 1.0 мл
раствора
G-IVF™
с
альбумином.
Перенесите
ооциты
в
чашки
с
эквилибрированным раствором G-IVF™ с добавлением альбумина и сразу же
возвратите чашки в инкубатор.
Инсеминация:
Перенесите ооциты в чашки для инсеминации и оставьте на ночь при
температуре + 37˚С и 6% СО2.
Альтернативный
метод:
Добавьте
эквилибрированную
суспензию
сперматозоидов в эквилибрированные чашки с уже готовыми ооцитами.
Рекомендуется производить инсеминацию в растворе объемом 0.5-1 мл без
масляного покрытия. При использовании покрытия следует использовать
капли объемом минимум 100 μл.
32.
G-1™ v5 PLUS
ДОПОЛНЕНО ПРЕПАРАТОМ HSA
Серия G5™.
Среда для культивирования эмбрионов со стадии пронуклеусов до 2 или 3
дня.
Препарат G-1™ v5 PLUS представляет среду
системой;
содержит
ЧСА,
гиалуронан
и
антибактерицидного реагента.
с бикарбонатной
гентамицин
в
буферной
качестве
Перед применением эквилибрировать при температуре + 37˚С и 6% СО2.
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
Препарат G-1™ v5 PLUS устойчив и сохраняет свои
истечения срока годности, указанного на упаковке.
Пузырьки с препаратом не следует хранить
утилизировать оставшийся неиспользованным
процедуры.
свойства
после открытия.
препарат после
вплоть
до
Необходимо
завершения
Указания к применению
Культивирование эмбрионов стадии дробления
После удаления кумулюсных клеток и оценки на предмет оплодотворения
эмбрионы с пронуклеусами должны быть перенесены в однолуночную чашку и
промыты предварительно нагретым раствором G-MOPS™
PLUS/G-MOPS™ с
добавлением
альбумина.
Затем
эмбрионы
необходимо
последовательно
промывать
в
двух
центральных
каплях,
находящихся
в
чашке
для
культивирования, и перенести в 50 μл капли G-1™ v5 PLUS не более чем по
5 эмбрионов в каплю.
24
Размещение в одной капле более пяти эмбрионов может привести к
существенному сокращению объема питания эмбрионов. В качестве меры
предосторожности можно приготовить две чашки для культивирования в том
случае, если пациент имеет более 10 эмбрионов.
Сразу же возвратите чашку в инкубатор. Рекомендуется культивировать
эмбрионами группами минимум по два. Например, если пациент имеет 6
эмбрионов, наилучшим вариантом является размещение эмбрионов двумя
группами по 3, а не
группами 4 и 2 или 5 и 1. На 2 или на 3 день
эмбрионы можно перенести в матку, используя для этого эквилибрированный
EmbryoGlue™
или эквилибрированый
раствор G-2™ v5 PLUS/ G-2™ v5 с
добавлением альбумина. В противном случае на 3 день эмбрионы могут быть
перенесены в раствор G-2™ v5 PLUS/ G-2™ v5 с добавлением альбумина для
дальнейшего культивирования до стадии бластоцисты.
33.
G-IVF™ PLUS
ДОПОЛНЕНО ПРЕПАРАТОМ HSA
Серия G5™.
Среда для подготовки гамет и для оплодотворения in vitro.
G-IVF™
PLUS
представляет
собой
бикарбонатный
буферный
раствор,
содержащий человеческий сывороточный альбумин и гентамицин в качестве
антибактерицидного реагента.
Перед применением эквилибрировать при температуре + 37˚С и 6% СО2.
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
Препарат G-IVF™ PLUS устойчив и сохраняет свои
истечения срока годности, указанного на упаковке.
Пузырьки с препаратом не следует хранить
утилизировать оставшийся неиспользованным
процедуры.
свойства
после открытия.
препарат после
вплоть
до
Необходимо
завершения
Указания к применению
Обработка спермы:
Для образцов спермы с достаточным количеством сперматозоидов и высокой
их подвижностью используется метод Swim-up.
С помощью пипетки поместите 1.0 мл спермы в пробирку. Поверх наслоите
2.0 мл эквилибрированного раствора G-IVF™ PLUS. Поместите пробирку в
наклонном положении в инкубатор при температуре + 37˚С и 6% СО2 на 30-60
минут. Соберите верхний слой питательной среды, не касаясь находящегося
ниже слоя семенной жидкости, и перенесите в чистую пробирку. Добавьте
5.0 мл раствора G-IVF™ PLUS, перемешайте и центрифугируйте в течение 10
минут при 300-600 g. Удалите супернатант и ресуспендируйте осадок в 5.0
мл эквилибрированного G-IVF™ PLUS и повторите центрифугирование. Слейте
супернатант и ресуспендируйте осадок в 0.5-1.0 мл (в зависимости от
качества образца) эквилибрированного раствора G-IVF™ PLUS. Определите
подвижность и концентрацию сперматозоидов в промытом образце.
Метод центрифугирования в градиенте плотностей.
Этот метод может применяться для любых образцов спермы независимо от их
качества.
25
В 2 отдельных пробирках смешайте раствор SpermGrad™ и раствор G-IVF™
PLUS для получения стоковых растворов с концентрацией 90% и 45%. Для
получения раствора с концентрацией 90% необходимо смешать 9.0 мл
SpermGrad™ и 1.0 мл G-IVF™ PLUS. В случае с раствором концентрацией 45%
смешиваются 4.5 мл SpermGrad™ и 5.5 мл раствора G-IVF™ PLUS. Тщательно
перемешайте растворы и храните в стерильных нетоксичных пробирках или
стерильных сосудах для выращивания тканей. Промаркируйте пробирки и
храните в холодильнике до использования. Перед тем, как использовать
растворы, их необходимо эквилибрировать при температуре + 37˚С и 6% СО2.
С помощью пипетки добавьте в пробирку 1.5 мл 90%-ного раствора, а затем
медленно наслоите 1.5 мл 45%-ного раствора. Сверху поместите 1 мл
спермы. Если образец семенной жидкости невысокого качества, следует
поместить поверх градиента до 3 мл семенной жидкости. Если добавить
слишком много семенной жидкости, то это негативно отразится на качестве
разделения. Центрифугируйте в течение 10-20 минут при 300-600 g. Удалите
два верхних слоя. Перенесите осадок с минимальным количеством 90%-ного
раствора в стерильную коническую пробирку, в которой находится 5 мл
эквилибрированного раствора G-IVF™ PLUS. Центрифугируйте в течение 10
минут при 300-600 g. Удалите супернатант и повторите отмывку. После
второй
отмывки
осадок
необходимо
ресуспендировать
в
1
мл
эквилибрированного раствора G-IVF™ PLUS. Затем производится анализ
промытого образца на предмет подвижности и концентрации сперматозоидов.
Разведите промытый образец эквилибрированным G-IVF™ PLUS до получения
окончательной концентрации 75 000-200 000 подвижных сперматозоидов/мл.
Подготовьте промытые чашки для инсеминации, содержащие 0.5-1.0 мл
суспензии сперматозоидов, и эквилибрируйте их при температуре + 37˚С и
6% СО2 минимум в течение 2 часов.
Идентификация ооцитов:
Сначала промойте ооциты в предварительно нагретом растворе G-MOPS™ PLUS/
G-MOPS™ с добавлением альбумина, а затем в эквилибрированном растворе GIVF™ PLUS. Процедура промывания должна состоять из двух этапов, во время
каждого из которых ооциты промываются в 1.0 мл раствора G-IVF™ PLUS.
Перенесите ооциты в чашки с эквилибрированным раствором G-IVF™ PLUS и
сразу же возвратите чашки в инкубатор.
Инсеминация:
Перенесите ооциты в чашки для инсеминации и оставьте на ночь при
температуре + 37˚С и 6% СО2.
Альтернативный
метод:
Добавьте
эквилибрированную
суспензию
сперматозоидов в эквилибрированные чашки с уже готовыми ооцитами.
Рекомендуется производить инсеминацию в растворе объемом 0.5-1 мл без
масляного покрытия. При использовании покрытия следует использовать
капли объемом минимум 100 μл.
34.
G-2™ v5
Серия G5™.
Питательная среда для
стадии бластоцисты.
культивирования
эмбрионов
со
стадии
3
дня
до
G-2™ v5 представляет собой бикарбонатный буферный питательный раствор,
содержащий Гиалуронан, а также гентамицин в качестве антибактерицидного
реагента.
Пригоден для использования после добавления раствора G-MM™ или HSAsolution™, а также после предварительной выдержки при температуре + 37˚С
и 6% СО2.
26
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
Препарат G-2™ v5 устойчив и сохраняет свои свойства вплоть до истечения
срока годности, указанного на упаковке.
Пузырьки с препаратом не следует хранить после открытия. Необходимо
утилизировать оставшийся неиспользованным препарат после завершения
процедуры.
Указания к применению
Культивирование Эмбрионов до стадии бластоцисты.
1. Утром 3 дня промаркируйте 60 мм-вые чашки инициалами пациента.
Используйте стерильный наконечник; сначала промойте наконечник,
затем поместите 6 х 25 μл капель раствора G-2™ v5 в чашку. Сразу
же покройте маслом OVOIL™. Не следует готовить более 2 чашек
одновременно. Используя новый предварительно промытый наконечник
для каждой капли, добавьте еще 25 μл питательного раствора в
каждую исходную каплю. Сразу же поместите чашку в инкубатор при 6%
СО2. Аккуратно снимите крышку и поместите сбоку от чашки для
эквилибрирования.
2. Для каждого отдельного пациента подготовьте одну промывочную чашку
с раствором G-MOPS™ PLUS/ G-MOPS™ с добавлением альбумина на
каждые 10 эмбрионов. Поместите 1 мл предварительно нагретого
раствора
G-MOPS™
PLUS/
G-MOPS™
с
добавлением
альбумина
в
центральную
лунку
однолуночной
чашки.
Поместите
2
мл
предварительно
нагретого
раствора
G-MOPS™
PLUS/
G-MOPS™
с
добавлением альбумина в ободок чашки. Поместите на нагревательный
столик при температуре + 37˚С на 15 минут.
3. Для каждого пациента подготовьте одну сортировочную чашку.
Поместите 1 мл предварительно нагретого раствора G-MOPS™ PLUS/ GMOPS™ с добавлением альбумина в центральную лунку однолуночной
чашки. Поместите 2 мл предварительно нагретого раствора G-MOPS™
PLUS/ G-MOPS™ с добавлением альбумина в ободок чашки. Поместите на
нагревательный столик при температуре + 37˚С.
Чашки с G-MOPS™ не следует помещать в СО2-инкубатор. Вместо этого
поместите чашки на нагревательный столик или в термостат.
4. На 3 день утром необходимо провести оценку качества эмбрионов, а
днем перенести их в раствор G-2™ с добавлением альбумина. Эмбрионы
должны оставаться в растворе G-2™ с добавлением альбумина до
переноса на 5 день.
5. Промойте эмбрионы в промывочной чашке (этот этап необходим для
удаления ЭДТА из раствора G-1™ v5 PLUS/ G-1™ v5 с добавлением
альбумина). После промывания перенесите эмбрионы в сортировочную
чашку и сгруппируйте вместе схожие эмбрионы. Промойте их в
промывочных каплях раствора G-2™ v5 с добавлением альбумина, а
затем поместите примерно по 5 эмбрионов в каждую каплю раствора G2™ v5 с добавлением альбумина для культивирования. Если пациент
имеет более 10 эмбрионов, следует подготовить две чашки для
выращивания культур. Сразу же возвратите чашку в СО2-инкубатор.
6. Во второй половине 4 дня подготовьте три чашки раствора G-2™ v5 с
добавлением альбумина. Промаркируйте чашки надписями «Перенос»,
«Заморозка» и «Сохранение» (для культивирования до 6 дня). Чашки
следует эквилибрировать в течение ночи при температуре + 37˚С и 6%
СО2. Чашки следует эквилибрировать не менее 6 и не более 18 часов
перед использованием.
7. Перенос должен осуществляться либо с помощью EmbyoGlue™, либо с
помощью раствора G-2™ v5 с добавлением альбумина. Чашки для
27
переноса следует эквилибрировать при температуре + 37˚С и 6% СО2
не менее 6 (и не более 18 часов) перед использованием.
8. Утром 5 дня необходимо оценить качество эмбрионов и отобрать 1-2
лучшие бластоцисты для переноса. Бластоцисты хорошего качества,
которые не были перенесены, могут быть заморожены. Если к 5 дню
бластоциста не сформировалась, эмбрион необходимо выращивать в
свежей капле раствора G-2™ v5 с добавлением альбумина в течение 24
часов и провести повторную оценку на 6 день.
35.
G-2™ v5 PLUS
ДОПОЛНЕНО ПРЕПАРАТОМ HSA
Серия G5™.
Питательная среда для
стадии бластоцисты.
культивирования
эмбрионов
со
стадии
3
дня
до
G-2™ v5 PLUS представляет собой бикарбонатный буферный питательный
раствор, содержащий человеческий сывороточный альбумин, Гиалуронан,
а
также гентамицин в качестве антибактерицидного реагента.
Перед применением эквилибрировать при температуре + 37˚С и 6% СО2.
Условия хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
Препарат G-2™ v5 PLUS устойчив и сохраняет свои
истечения срока годности, указанного на упаковке.
свойства
вплоть
до
Пузырьки с препаратом не следует хранить после открытия. Необходимо
утилизировать оставшийся неиспользованным препарат после завершения
процедуры.
Указания к применению
Культивирование Эмбрионов до стадии бластоцисты.
1. Утром 3 дня промаркируйте 60 мм-вые чашки инициалами пациента.
Используйте стерильный наконечник; сначала промойте наконечник,
затем поместите 6 х 25 μл капель раствора G-2™ v5 PLUS в чашку.
Сразу же покройте маслом OVOIL™. Не следует готовить более 2 чашек
одновременно. Используя новый предварительно промытый наконечник
для каждой капли, добавьте еще 25 μл питательного раствора в
каждую исходную каплю. Сразу же поместите чашку в инкубатор при 6%
СО2. Аккуратно снимите крышку и поместите сбоку от чашки для
эквилибрирования.
2. Для каждого отдельного пациента подготовьте одну промывочную чашку
с раствором G-MOPS™ PLUS/ G-MOPS™ с добавлением альбумина на
каждые 10 эмбрионов. Поместите 1 мл предварительно нагретого
раствора
G-MOPS™
PLUS/
G-MOPS™
с
добавлением
альбумина
в
центральную
лунку
однолуночной
чашки.
Поместите
2
мл
предварительно
нагретого
раствора
G-MOPS™
PLUS/
G-MOPS™
с
добавлением альбумина в ободок чашки. Поместите на нагревательный
столик при температуре + 37˚С на 15 минут.
3. Для каждого пациента подготовьте одну сортировочную чашку.
Поместите 1 мл предварительно нагретого раствора G-MOPS™ PLUS/ GMOPS™ с добавлением альбумина в центральную лунку однолуночной
чашки. Поместите 2 мл предварительно нагретого раствора G-MOPS™
PLUS/ G-MOPS™ с добавлением альбумина в ободок чашки. Поместите на
нагревательный столик при температуре + 37˚С.
28
4.
5.
6.
7.
8.
Чашки с G-MOPS™ не следует помещать в СО2-инкубатор. Вместо этого
поместите чашки на нагревательный столик или в термостат.
На 3 день утром необходимо провести оценку качества эмбрионов, а
днем перенести их в раствор G-2™ PLUS. Эмбрионы должны оставаться
в растворе G-2™ PLUS до переноса на 5 день.
Промойте эмбрионы в промывочной чашке (этот этап необходим для
удаления ЭДТА из раствора G-1™ v5 PLUS/ G-1™ v5 с добавлением
альбумина). После промывания перенесите эмбрионы в сортировочную
чашку и сгруппируйте вместе схожие эмбрионы. Промойте их в
промывочных каплях раствора G-2™ v5 PLUS, а затем поместите
примерно по 5 эмбрионов в каждую каплю раствора G-2™ v5 PLUS для
культивирования. Если пациент имеет более 10 эмбрионов, следует
подготовить две чашки для культивирования. Сразу же возвратите
чашку в СО2-инкубатор.
Во второй половине 4 дня подготовьте три чашки раствора G-2™ v5
PLUS. Промаркируйте чашки надписями «Перенос», «Заморозка» и
«Сохранение» (для культивирования до 6 дня). Чашки следует
эквилибрировать в течение ночи при температуре + 37˚С и 6% СО2.
Чашки следует эквилибрировать не менее 6 и не более 18 часов перед
использованием.
Перенос должен осуществляться либо с помощью EmbryoGlue™, либо с
помощью раствора G-2™ v5 PLUS. Чашки для переноса следует
эквилибрировать при температуре + 37˚С и 6% СО2 не менее 6 (и не
более 18 часов) перед использованием.
Утром 5 дня необходимо оценить качество эмбрионов и отобрать 1-2
лучшие бластоцисты для переноса. Бластоцисты хорошего качества,
которые не были перенесены, могут быть заморожены. Если к 5 дню
бластоциста не сформировалась, эмбрион необходимо выращивать в
свежей капле раствора G-2™ v5 PLUS в течение 24 часов и провести
повторную оценку на 6 день.
28 RapidVit™ Blast
ДОПОЛНЕНО ПРЕПАРАТОМ HAS (ЧСА)
Питательная
бластоцисты.
среда
для
гиалинизации
эмбрионов
на
стадии
Препарат RapidVit™ Blast представляет собой тройную питательную
среду для гиалинизации (застекловывания) эмбриона на стадии
бластоцисты.
Препарат
состоит
из
питательного
раствора,
содержащего в качестве буферной среды MOPS, а также включающего
гентамицин как антибактериальный реагент и альбумин человеческой
сыворотки (ЧСА).
Препарат Vitri 1 Blast не содержит криопротекторов.
Препарат Vitri 2 Blast содержит сахарозу,
пропанедиол в качестве криопротекторов.
этилен
Препарат Vitri 3 Blast включает сахарозу, этилен
пропанедиол и Ficoll® в качестве криопротекторов.
Препарат пригоден для использования
согревания до температуры + 37˚С.
после
гликоль
и
гликоль,
предварительного
29
Указания относительно хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
Препарат RapidVit™ Blast устойчив и сохраняет свои свойства
вплоть до истечения срока годности, указанного на ампулах и
Сертификате о проведенном специальном LOT-анализе.
Открытые ампулы с препаратом не подлежат хранению. По завершении
процедуры оставшийся избыточный раствор подлежит утилизации.
Указания к применению
Далее представлено описание
препарата RapidVit™ Blast.
общей
процедуры
использования
Процедура гиалинизации (застекловывания) должна производиться
исключительно
персоналом,
прошедшим
специализированную
подготовку в этой области. Обращаем ваше внимание на то, что
необходимо обеспечить точность хронометрирования.
Гиалинизация (застекловывание)
Поместите 0.5-1 мл каждого из указанных далее препаратов
отдельные чашки 4-чашечного планшета и согрейте до 37˚С:
•
•
•
в
Vitri 1 Blast
Vitri 2 Blast
Vitri 3 Blast
Все манипуляции с бластоцистами
37˚С (на стадии нагретости).
производятся
при
температуре
Осуществить нокаут бластоцист путем введения иглы с ICSI либо с
помощью лазерного луча.
Перенести бластоцисты из культуры в раствор Vitri 1 Blast и
оставить их там минимум на 5 минут, но не более чем на 20 минут.
Переместить надлежащее количество бластоцист в раствор Vitri 2
Blast. Оставить бластоцисты в этом растворе на 2 минуты.
Бластоцисты могут всплывать на поверхность, и в этом случае их
следует собрать и вновь поместить их на дно чашки.
Подготовить подходящую криоаппаратуру.
Пока не истекли 2 минуты, подготовить каплю препарата Vitri 3
Blast объемом 20 μл на нетоксичной поверхности, предпочтительно
в чашке для культивирования. Подготовка небольшой капли Vitri 3
Blast облегчает загрузку в криоаппарат.
Примечание: Капля объемом 20 μл может использоваться только один
раз.
30
Когда до конца срока остаются 10 сек., необходимо начать
собирать бластоцисты. Переносите бластоцисты в минимально
возможном объеме раствора Vitri 2 Blast, чтобы избежать
разжижения капли.
Перенести бластоцисты в каплю Vitri 3 Blast объемом 20 μл и
оставить их в этом растворе на 45 секунд. Перемешать бластоцисты
в растворе Vitri 3 Blast, используя пипетку. Когда до истечения
срока остаются 5-10 сек., необходимо собрать бластоцисты и
поместить их в криоаппарат.
Примечание: Общее время от момента перенесения бластоцист в
каплю до полного застекловывания не должно превышать 45 секунд.
Провести немедленную гиалинизацию бластоцист в соответствии с
инструкцией к криоаппарату.
Продолжить хранение бластоцист
принятой в лаборатории.
в
соответствии
с
процедурой,
29 RapidVit™ Cleave
ДОПОЛНЕНО ПРЕПАРАТОМ HAS (ЧСА)
Питательная среда для гиалинизации эмбрионов на стадии дробления.
Препарат RapidVit™ Cleave представляет собой тройную питательную среду для гиалинизации
(застекловывания) эмбрионов на стадии дробления. Препарат состоит из питательного раствора,
содержащего MOPS в качестве буферной среды, а также включающего гентамицин как
антибактериальный реагент и альбумин человеческой сыворотки (ЧСА).
Препарат Vitri 2™ Cleave содержит этилен гликоль в качестве криопротектора.
Препарат Vitri 3™ Cleave содержит этилен гликоль и пропанедиол в качестве криопротекторов.
Препарат пригоден для использования после предварительного согревания до температуры + 37˚С в
окружающей атмосфере.
Указания относительно хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
31
Препарат RapidVit™ Cleave устойчив и сохраняет свои свойства вплоть до истечения срока годности,
указанного на ампулах и Сертификате о проведенном специальном LOT-анализе.
Открытые ампулы с препаратом не подлежат хранению. По завершении процедуры оставшийся
избыточный раствор подлежит утилизации.
Указания к применению
Далее представлено описание общей процедуры использования препарата RapidVit™ Cleave.
Процедура гиалинизации (застекловывания) должна производиться
персоналом, прошедшим специализированную подготовку в этой области.
исключительно
Примечание: При проведении процедуры гиалинизации особую важность имеют
хронометраж и соблюдение временных рамок, поэтому необходимо обеспечить точное
выполнение протокола.
Гиалинизация (застекловывание)
Поместите 0.5-1 мл каждого из указанных далее растворов в отдельные чашки и согрейте до
37˚С:
•
•
•
Vitri 1™ Cleave
Vitri 2™ Cleave
Vitri 3™ Cleave
Все манипуляции с эмбрионами производятся при температуре 37˚С (на стадии нагретости).
Перенести эмбрионы из культуры в раствор Vitri 1™ Cleave и оставить их там минимум на 5
минут, но не более чем на 10 минут.
Переместить надлежащее количество эмбрионов в раствор Vitri 2™ Cleave. Оставить
эмбрионы в этом растворе на 2 минуты. Эмбрионы могут всплывать на поверхность, и в этом
случае их следует собрать и вновь поместить их на дно чашки.
Подготовить криоаппаратуру марки «Витролайф».
Когда до конца указанного срока остаются 30 секунд, следует подготовить каплю препарата
Vitri 3™ Cleave объемом 20 μл на нетоксичной поверхности, предпочтительно в чашке для
культивирования. Подготовка небольшой капли Vitri 3 Blast облегчает загрузку в криоаппарат
«Витролайф».
Примечание: Капля объемом 20 μл может использоваться только один раз по причине
испарения.
32
Когда до конца срока остаются 10 сек., необходимо начать собирать эмбрионы. Переносите
эмбрионы в минимально возможном объеме раствора Vitri 2™ Cleave, чтобы избежать
разжижения капли раствора Vitri 3™ Cleave.
Перенести эмбрионы в каплю Vitri 3™ Cleave объемом 20 μл и оставить их в этом растворе на
30 секунд. Чтобы обеспечить максимальный контакт эмбрионов с раствором Vitri 3™ Cleave,
2-3 раза переверните эмбрионы внутри капли. Когда до истечения срока остаются 5-10 сек.,
необходимо собрать эмбрионы с предельно минимальным объемом раствора и поместить
их в криоаппарат «Витролайф». Немедленно провести процедуру гиалинизации эмбрионов.
Примечание: Общее время от момента перенесения эмбрионов в каплю до полного
застекловывания не должно превышать 30 секунд.
Продолжить хранение эмбрионов в соответствии с процедурой, принятой в лаборатории.
30 RapidWarm™ Blast
ДОПОЛНЕНО ПРЕПАРАТОМ HAS (ЧСА)
Питательная среда для подогрева прошедших процедуру гиалинизации эмбрионов на стадии
бластоцисты.
Препарат RapidWarm™ Blast представляет собой тройную питательную среду для отогревания
эмбрионов на стадии бластоцисты, прошедших процедуру гиалинизации (застекловывания).
Препарат состоит из питательного раствора, содержащего в качестве буферной среды MOPS, а также
включающего гентамицин как антибактериальный реагент и альбумин человеческой сыворотки
(ЧСА).
Препарат Warm 1 Blast содержит сахарозу в качестве криопротектора.
Препарат Warm 2 Blast содержит сахарозу в качестве криопротектора.
Препарат Warm 3 Blast не содержит криопротекторов.
Препарат пригоден для использования после предварительного согревания до температуры + 37˚С.
Указания относительно хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
33
Препарат RapidWarm™ Blast устойчив и сохраняет свои свойства вплоть до истечения срока годности,
указанного на ампулах и Сертификате о проведенном специальном LOT-анализе.
Открытые ампулы с препаратом не подлежат хранению. По завершении процедуры оставшийся
избыточный раствор подлежит утилизации.
Указания к применению
Далее представлено описание общей процедуры использования препарата RapidWarm™
Blast.
Процедура подогрева должна производиться исключительно персоналом, прошедшим
специализированную подготовку в этой области. Обращаем ваше внимание на то, что
необходимо обеспечить точность хронометрирования.
Процедура подогрева:
Поместите 0.5-1 мл каждого из указанных далее препаратов в отдельные чашки 4-чашечного
планшета и согрейте до 37˚С:
•
•
•
Warm 1 Blast
Warm 2 Blast
Warm 3 Blast
Все манипуляции с бластоцистами производятся при температуре 37˚С (на стадии
нагретости).
Извлечь криоаппарат, содержащий прошедшие процедуру гиалинизации бластоцисты, из
контейнера для криогенного хранения.
Быстро поместить криоаппарат в раствор Warm 1 Blast.
Позволить бластоцистам выпасть из криоаппарата и погрузиться на дно. Оставить их в таком
состоянии на 2 минуты.
Перенести бластоцисты в раствор Warm 2 Blast и оставить их там на 3 минуты.
Перенести бластоцисты в раствор Warm 3 Blast и оставить их там на 5-10 минут.
Промыть бластоцисты в питательном растворе несколько раз и продолжить
культивирование в соответствии с процедурой, принятой в лаборатории. Компания
«Витролайф» рекомендует использовать для этой процедуры растворы G-2™ или
EmbryoGlue®.
31 RapidWarm™ Cleave
ДОПОЛНЕНО ПРЕПАРАТОМ HAS (ЧСА)
34
Питательная среда для подогрева эмбрионов на стадии дробления.
Препарат RapidWarm™ Cleave представляет собой питательную среду из четырех растворов для
отогревания эмбрионов на стадии дробления. Препарат состоит из питательного раствора,
содержащего MOPS в качестве буферной среды, а также включающего гентамицин как
антибактериальный реагент и альбумин человеческой сыворотки (ЧСА).
Препарат пригоден для использования после предварительного согревания до температуры + 37˚С в
окружающей атмосфере.
Указания относительно хранения и устойчивость препарата
Хранить в темном месте при температуре от + 2 до + 8˚С.
Препарат RapidWarm™ Cleave устойчив и сохраняет свои свойства вплоть до истечения срока
годности, указанного на ампулах и Сертификате о проведенном специальном LOT-анализе.
Открытые ампулы с препаратом не подлежат хранению. По завершении процедуры оставшийся
избыточный раствор подлежит утилизации.
Указания к применению
Далее представлено описание общей процедуры использования препарата RapidWarm™
Cleave.
Процедура отогревания должна производиться исключительно персоналом, прошедшим
специализированную подготовку в этой области.
Примечание: При проведении процедуры гиалинизации особую важность имеют
хронометраж и соблюдение временных рамок, поэтому необходимо обеспечить точное
выполнение протокола.
Процедура подогрева:
Поместите 0.5-1 мл каждого из указанных далее препаратов в отдельные чашки и согрейте
до 37˚С:
•
•
Warm 1™ Blast
Warm 2™ Blast
35
•
•
Warm 3™ Blast
Warm 4™ Blast
Все манипуляции с бластоцистами производятся при температуре 37˚С (на стадии
нагретости).
Поместить находящийся в криостате криоаппарат марки «Витролайф», содержащий
прошедшие процедуру гиалинизации эмбрионы, ближе к подготовленным чашкам.
Быстро переместить прошедшие процедуру гиалинизации эмбрионы в раствор Warm 1™
Blast.
Позволить эмбрионам выпасть из криоаппарата и погрузиться на дно. Оставить их в таком
состоянии на 10-30 секунд.
Перенести эмбрионы в раствор Warm 2™ Blast и оставить их там на 60 секунд.
Перенести эмбрионы в раствор Warm 3™ Blast и оставить их там на 120 секунд.
Перенести эмбрионы в раствор Warm 4™ Blast и оставить их там на 5 минут.
Промыть эмбрионы в питательном растворе несколько раз и продолжить культивирование в
соответствии с процедурой, принятой в лаборатории.
36